JPH1121291A - クロマノール配糖体およびその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 優れた抗酸化活性及び放射線防護作用を有す
るクロマノール配糖体およびその製造方法を提供する。 【構成】 一般式（１） 【化１】 （ただし、式中、Ｒ¹ ，Ｒ² ，Ｒ³ およびＲ⁴ は同一ま
たは異なる水素原子または低級アルキル基を表わし、Ｒ
⁵ は水素原子、低級アルキル基または低級アシル基を表
わし、Ｘはβ−グルコース、フルクトース、マンノース
及びガラクトースからなる群より選ばれた単糖残基また
はオリゴ糖残基を表わし、該糖残基の水酸基の水素原子
は低級アルキル基または低級アシル基で置換されていて
もよく、ｎは０〜４の整数であり、およびｍは１〜６の
整数である）で表わされるクロマノール配糖体。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、クロマノール配糖
体およびその製造方法に関するものである。詳しくは、
本発明は、抗酸化活性及び放射線防護作用に優れたクロ
マノール配糖体および糖転移作用を触媒する酵素の存在
下で２−置換アルコールに糖を結合させることによる上
記クロマノール配糖体の製造方法に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】下記一般式で表わされるクロマノール配
糖体は、特開平０７−１１８，２８７号において、優れ
た抗酸化活性、熱やｐＨ安定性及び水溶性を有する下記
一般式で表わされるクロマン環から誘導される化合物で
あることが報告されている。

【０００３】

【化４】

【０００４】（ただし、式中、Ｒ¹ ，Ｒ² ，Ｒ³ および
Ｒ⁴ は同一または異なる水素原子または低級アルキル基
を表わし、Ｒ⁵ は水素原子、低級アルキル基または低級
アシル基を表わし、Ｘは単糖残基またはオリゴ糖残基を
表わし、該糖残基の水酸基の水素原子は低級アルキル基
または低級アシル基で置換されていてもよく、ｎは０〜
４の整数であり、およびｍは１〜６の整数である） しかしながら、上記公報では、上記一般式で表わされる
クロマノール配糖体は確かに抗酸化活性、熱やｐＨ安定
性及び水溶性を有することが記載されているものの、実
際には、一部のクロマノール配糖体［２−（α−Ｄ−グ
ルコピラノシル）メチル−２，５，７，８−テトラメチ
ルクロマン−６−オール、２−（α−Ｄ−グルコピラノ
シル）エチル−２，５，７，８−テトラメチルクロマン
−６−オール、２−（α−Ｄ−マルトピラノシル）メチ
ル−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−６−オー
ル及び２−（α−Ｄ−マルトピラノシル）エチル−２，
５，７，８−テトラメチルクロマン−６−オール］、す
なわち、クロマン環にメチルあるいはエチル基を介して
糖残基としてα−グルコース残基が結合した物質（以
下、「α−グルコピラノシル型クロマノール配糖体」と
称する）についてのみ上記したような特性が報告されて
いるのみである。

【０００５】したがって、クロマン環に糖残基としてα
−グルコース以外の糖残基が結合した物質については特
開平０７−１１８，２８７号において十分開示されてい
るとはいえない。

【０００６】また、特開平０７−１１８，２８７号にお
いては、リノール酸メチル、リポソームといったモデル
系におけるα−グルコピラノシル型クロマノール配糖体
の抗酸化活性が記載されているのみである。

【０００７】クロマノール配糖体の生体への応用を考え
た場合、クロマノール配糖体の糖の種類が変わることに
より、例えば、その吸収、分布及び代謝などの、いわゆ
る薬物動態が大きく変わる可能性は非常に高い。したが
って、細胞若しくは動物を用いた系により抗酸化活性を
評価する場合には、特開平０７−１１８，２８７号にに
記載されたモデル系では明らかにできないような活性の
違いが現れる可能性が高く、その違いは非常に重要な意
味を持つものであるといえる。

【０００８】一方、原子力発電における作業者、Ｘ線に
よるレントゲン検査技師または放射線を用いた癌などの
診断若しくは治療に携わる技術者や医学者は、作業時に
は放射線の被爆をある程度防止している。しかしなが
ら、この方法による放射線防護は完全とはいえず、上記
したような作業に長期間従事していると全体としてはか
なりの量の放射線を被爆する場合もある。また、原子力
発電所の事故などの最悪の場合では、放射線を全身に一
度に被爆してしまうため、被爆した人が死亡したりある
いは死亡しないまでも一定の潜伏期間後に生殖機能、骨
髄機能障害や皮膚障害等の臓器・組織レベル及び細胞レ
ベルでの放射線障害が発現する。

【０００９】このような諸問題を考慮して、現在、放射
線管理（防護）を実施するにあたっては、法令や放射線
の事業所内における障害予防規定などによって個人の被
爆を規制している。しかしながら、このような放射線防
護基準をもってしても放射線被爆による障害を完全に防
止できるわけではない。また、放射線を被爆しても人体
は痛みなどを知覚せず、また上記したような症状が現れ
るまでには一定の潜伏期間があるため、症状が現れて初
めて被爆したことを知るが、現在の医療ではこのような
症状を根治することはかなり困難である。

【００１０】また、放射線治療を受ける癌患者に関して
も、一度にかなりの量の放射線が治療すべき悪性腫瘍部
分に照射されるが、悪性腫瘍部周辺の正常な組織にも放
射線が照射される。被爆した正常組織は、放射線によっ
て生体内に発生したフリーラジカルにより細胞膜や染色
体などの細胞内分子の酸化的な化学反応が起こって、細
胞増殖の停止（細胞死）や突然変異の誘発等の重大な障
害が引き起こされる。

【００１１】このような化学反応の発生を防止する薬剤
として、従来、水素ラジカル供与性を有するβ−メルカ
プトエチルアミンなどの数多くの各種アミノチオール類
が知られている（菅原努ほか、「放射線と医学」、共立
出版社、１９８６年）が、その強い副作用のため、有効
な防護効果が発現するために必要とされる量を投与でき
ず、いまだ実用化には至っていない。

【００１２】また、代表的なビタミンＥとして知られて
いるα−トコフェロールは、クロマン環の６位の水酸基
から水素原子を供与してフリーラジカルを消去する機能
を有する化合物であるが、ビタミンＥは、その分子内に
長鎖の炭化水素基（フィチル基）を有するために、水に
溶けない粘稠性の油状物である。このため、生体のフリ
ーラジカルによる損傷を防ぐ目的でビタミンＥを投与す
る場合には、内服液や注射剤などの溶液の形態での使用
はできないという致命的な欠点がある。このような欠点
を克服するために、２位のフィチル基をカルボキシル基
で置換することにより水溶性が付与された６−ヒドロキ
シ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カル
ボン酸が開発され、トロロックス（Ｔｒｏｌｏｘ）とい
う名称で水溶性の抗酸化剤として市販されているが、そ
の水溶性は極めて低く（１６ｍｇ／１００ｍｌ）、いま
だ満足できるものではない。また、同様にして、２位の
フィチル基をアルコールで置換した６−ヒドロキシ−
２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−メタノー
ル（以下、「メタノール型２−置換アルコール」と称す
る）も開発された。このメタノール型２−置換アルコー
ルは、１０１ｍｇ／１００ｍｌの水溶性を有し、トロロ
ックスの約６．３倍の水溶性を示すが、このような比較
的高い水溶性をもってしても、例えば、患者に１ｇを投
与するためには、１リットルという多量の水に溶解して
用いなければならず、水溶性がなお不十分であるという
問題があった。

【００１３】したがって、現代および将来を通じて人類
は様々な分野で放射線を被爆する可能性が大きく、この
ため放射線被爆から人類を守る機能を有しかつ水溶性で
ある放射線防護剤の開発が切望されているが、いまだ満
足できる放射線防護剤が開発されていないのが現状であ
る。

【００１４】

【発明が解決しようとする課題】したがって、本発明の
目的は、優れた抗酸化活性及び放射線防護作用を有する
クロマノール配糖体およびその製造方法を提供すること
にある。

【００１５】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記諸事
情を鑑みて、様々な糖残基がクロマン環に結合した各種
クロマノール配糖体について抗酸化活性及び放射線防護
作用等の特性を検討した結果、β−グルコース、フルク
トース、マンノース及びガラクトースからなる群より選
ばれた単糖残基またはオリゴ糖残基がクロマン環に結合
したクロマノール配糖体はα−グルコース残基またはそ
のオリゴ糖残基がクロマン環に結合したクロマノール配
糖体に比べて上記特性に優れていることを発見し、本発
明を完成させるに至った。

【００１６】すなわち、上記目的は、下記一般式
（１）：

【００１７】

【化５】

【００１８】（ただし、式中、Ｒ¹ ，Ｒ² ，Ｒ³ および
Ｒ⁴ は同一または異なる水素原子または低級アルキル基
を表わし、Ｒ⁵ は水素原子、低級アルキル基または低級
アシル基を表わし、Ｘはβ−グルコース、フルクトー
ス、マンノース及びガラクトースからなる群より選ばれ
た単糖残基またはオリゴ糖残基を表わし、該糖残基の水
酸基の水素原子は低級アルキル基または低級アシル基で
置換されていてもよく、ｎは０〜４の整数であり、およ
びｍは１〜６の整数である）で表わされるクロマノール
配糖体により達成される。

【００１９】上記目的は、一般式（２）：

【００２０】

【化６】

【００２１】（ただし、式中、Ｒ¹ ，Ｒ² ，Ｒ³ および
Ｒ⁴ は同一または異なる水素原子または低級アルキル基
を表わし、Ｒ⁵ は水素原子、低級アルキル基または低級
アシル基を表わし、およびｎは０〜４の整数である）で
表わされる２−置換アルコールと、セロビオース、カー
ドラン、ラミナラン、メリビオース、ラフィノース、ラ
クトース、アラビノガラクタン、ショ糖、イヌリン及び
メチルマンノピラノシドからなる群より選ばれた糖と
を、相当する糖転移作用を触媒する酵素の存在下に反応
させることを特徴とする一般式（１）：

【００２２】

【化７】

【００２３】（但し、Ｒ¹ ，Ｒ² ，Ｒ³ ，Ｒ⁴ ，Ｒ⁵ 及
びｎは前記定義のとおりであり、Ｘはβ−グルコース、
フルクトース、マンノース及びガラクトースからなる群
より選ばれた単糖残基またはオリゴ糖残基を表わし、該
糖残基の水酸基の水素原子は低級アルキル基または低級
アシル基で置換されていてもよく、およびｍは１〜６の
整数である）で表わされるクロマノール配糖体の製造方
法によっても達成される。

【００２４】本発明はまた、該糖がセロビオース、ラク
トース、ショ糖またはメチルマンノピラノシドである、
前記クロマノール配糖体の製造方法である。

【００２５】本発明はまた、該酵素がβ−グルコシダー
ゼ、β−ガラクトシダーゼ、α−マンノシダーゼまたは
β−フルクトフラノシダーゼである、前記クロマノール
配糖体の製造方法である。

【００２６】

【発明の実施の形態】以下、本発明を詳細に説明する。

【００２７】本発明のクロマノール配糖体は下記一般式
（１）で表わされる化合物である。

【００２８】

【化８】

【００２９】（ただし、式中、Ｒ¹ ，Ｒ² ，Ｒ³ および
Ｒ⁴ は同一または異なる水素原子または低級アルキル基
を表わし、Ｒ⁵ は水素原子、低級アルキル基または低級
アシル基を表わし、Ｘはβ−グルコース、フルクトー
ス、マンノース及びガラクトースからなる群より選ばれ
た単糖残基またはオリゴ糖残基を表わし、該糖残基の水
酸基の水素原子は低級アルキル基または低級アシル基で
置換されていてもよく、ｎは０〜４の整数であり、およ
びｍは１〜６の整数である） 上記一般式（１）において、Ｒ¹ 、Ｒ² 、Ｒ³ 及びＲ⁴
は、同一または異なる水素原子または低級アルキル基で
あるが、低級アルキル基を表わす際には、炭素原子数が
好ましくは１〜８、より好ましくは１〜６の低級アルキ
ル基であり、例えば、メチル基、エチル基、プロピル
基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ペンチ
ル基、イソペンチル基、ヘキシル基、ヘプチル基、及び
オクチル基等が挙げられ、これらのうち、メチル基及び
エチル基が好ましい。また、Ｘはβ−グルコース、フル
クトース、マンノース及びガラクトースからなる群より
選ばれた単糖残基またはオリゴ糖残基を表わすが、この
際、糖残基中の水酸基の水素原子は低級アルキル基、好
ましくは炭素原子数が１〜８の低級アルキル基または低
級アシル基、好ましくは炭素原子数が１〜１０の低級ア
シル基で置換されていてもよい。さらに、ｎは、０〜
６、好ましくは１〜４の整数であり、ｍは、１〜６、好
ましくは１〜３の整数である。

【００３０】本発明のクロマノール配糖体は、上記一般
式（１）で表わされる化合物であれば特に制限されない
が、具体的には、下記のクロマノール配糖体が挙げられ
る：２−（β−Ｄ−グルコピラノシル）メチル−２，
５，７，８−テトラメチルクロマン−６−オール；２−
（β−Ｄ−グルコピラノシル）エチル−２，５，７，８
−テトラメチルクロマン−６−オール；２−（β−Ｄ−
グルコピラノシル）プロピル−２，５，７，８−テトラ
メチルクロマン−６−オール；２−（β−Ｄ−グルコピ
ラノシル）イソプロピル−２，５，７，８−テトラメチ
ルクロマン−６−オール；２−（β−Ｄ−グルコピラノ
シル）ブチル−２，５，７，８−テトラメチルクロマン
−６−オール；２−（β−Ｄ−グルコピラノシル）イソ
ブチル−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−６−
オール；２−（β−Ｄ−グルコピラノシル）ペンチル−
２，５，７，８−テトラメチルクロマン−６−オール；
２−（β−Ｄ−グルコピラノシル）イソペンチル−２，
５，７，８−テトラメチルクロマン−６−オール；２−
（β−Ｄ−グルコピラノシル）ヘキシル−２，５，７，
８−テトラメチルクロマン−６−オール；２−（β−Ｄ
−グルコピラノシル）ヘプチル−２，５，７，８−テト
ラメチルクロマン−６−オール；２−（β−Ｄ−グルコ
ピラノシル）オクチル−２，５，７，８−テトラメチル
クロマン−６−オール；２−（（αまたはβ）−Ｄ−ガ
ラクトピラノシル）メチル−２，５，７，８−テトラメ
チルクロマン−６−オール；２−（（αまたはβ）−Ｄ
−ガラクトピラノシル）エチル−２，５，７，８−テト
ラメチルクロマン−６−オール；２−（（αまたはβ）
−Ｄ−ガラクトピラノシル）プロピル−２，５，７，８
−テトラメチルクロマン−６−オール；２−（（αまた
はβ）−Ｄ−ガラクトピラノシル）イソプロピル−２，
５，７，８−テトラメチルクロマン−６−オール；２−
（（αまたはβ）−Ｄ−ガラクトピラノシル）ブチル−
２，５，７，８−テトラメチルクロマン−６−オール；
２−（（αまたはβ）−Ｄ−ガラクトピラノシル）イソ
ブチル−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−６−
オール；２−（（αまたはβ）−Ｄ−ガラクトピラノシ
ル）ペンチル−２，５，７，８−テトラメチルクロマン
−６−オール；２−（（αまたはβ）−Ｄ−ガラクトピ
ラノシル）イソペンチル−２，５，７，８−テトラメチ
ルクロマン−６−オール；２−（（αまたはβ）−Ｄ−
ガラクトピラノシル）ヘキシル−２，５，７，８−テト
ラメチルクロマン−６−オール；２−（（αまたはβ）
−Ｄ−ガラクトピラノシル）ヘプチル−２，５，７，８
−テトラメチルクロマン−６−オール；２−（（αまた
はβ）−Ｄ−ガラクトピラノシル）オクチル−２，５，
７，８−テトラメチルクロマン−６−オール；２−
（（αまたはβ）−Ｄ−マンノピラノシル）メチル−
２，５，７，８−テトラメチルクロマン−６−オール；
２−（（αまたはβ）−Ｄ−マンノピラノシル）エチル
−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−６−オー
ル；２−（（αまたはβ）−Ｄ−マンノピラノシル）プ
ロピル−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−６−
オール；２−（（αまたはβ）−Ｄ−マンノピラノシ
ル）イソプロピル−２，５，７，８−テトラメチルクロ
マン−６−オール；２−（（αまたはβ）−Ｄ−マンノ
ピラノシル）ブチル−２，５，７，８−テトラメチルク
ロマン−６−オール；２−（（αまたはβ）−Ｄ−マン
ノピラノシル）イソブチル−２，５，７，８−テトラメ
チルクロマン−６−オール；２−（（αまたはβ）−Ｄ
−マンノピラノシル）ペンチル−２，５，７，８−テト
ラメチルクロマン−６−オール；２−（（αまたはβ）
−Ｄ−マンノピラノシル）イソペンチル−２，５，７，
８−テトラメチルクロマン−６−オール；２−（（αま
たはβ）−Ｄ−マンノピラノシル）ヘキシル−２，５，
７，８−テトラメチルクロマン−６−オール；２−
（（αまたはβ）−Ｄ−マンノピラノシル）ヘプチル−
２，５，７，８−テトラメチルクロマン−６−オール；
２−（（αまたはβ）−Ｄ−マンノピラノシル）オクチ
ル−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−６−オー
ル；２−（（αまたはβ）−Ｄ−フルクトフラノシル）
メチル−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−６−
オール；２−（（αまたはβ）−Ｄ−フルクトフラノシ
ル）エチル−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−
６−オール；２−（（αまたはβ）−Ｄ−フルクトフラ
ノシル）プロピル−２，５，７，８−テトラメチルクロ
マン−６−オール；２−（（αまたはβ）−Ｄ−フルク
トフラノシル）イソプロピル−２，５，７，８−テトラ
メチルクロマン−６−オール；２−（（αまたはβ）−
Ｄ−フルクトフラノシル）ブチル−２，５，７，８−テ
トラメチルクロマン−６−オール；２−（（αまたは
β）−Ｄ−フルクトフラノシル）イソブチル−２，５，
７，８−テトラメチルクロマン−６−オール；２−
（（αまたはβ）−Ｄ−フルクトフラノシル）ペンチル
−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−６−オー
ル；２−（（αまたはβ）−Ｄ−フルクトフラノシル）
イソペンチル−２，５，７，８−テトラメチルクロマン
−６−オール；２−（（αまたはβ）−Ｄ−フルクトフ
ラノシル）ヘキシル−２，５，７，８−テトラメチルク
ロマン−６−オール；２−（（αまたはβ）−Ｄ−フル
クトフラノシル）ヘプチル−２，５，７，８−テトラメ
チルクロマン−６−オール；および２−（（αまたは
β）−Ｄ−フルクトフラノシル）オクチル−２，５，
７，８−テトラメチルクロマン−６−オール。

【００３１】本発明のクロマノール配糖体は、下記一般
式（２）：

【００３２】

【化９】

【００３３】（ただし、式中、Ｒ¹ ，Ｒ² ，Ｒ³ ，
Ｒ⁴ ，Ｒ⁵ 及びｎは式（１）と同様である）で表わされ
る２−置換アルコール及びセロビオース、カードラン、
ラミナラン、メリビオース、ラフィノース、ラクトー
ス、アラビノガラクタン、ショ糖、イヌリン及びメチル
マンノピラノシドからなる群より選ばれた糖を相当する
糖転移作用を触媒する酵素の存在下に反応させ、２−置
換アルコールの２位の水酸基に特異的に糖の特定の水酸
基を結合させることからなる酵素反応によって製造され
る（特開平７−１１８，２８７号公報参照）。

【００３４】上記反応において原料として用いられる一
般式（２）で表わされる２−置換アルコール（以下、単
に「２−置換アルコール」と称する）は公知の物質であ
り、例えば、特公平１−４３７５５号公報や特公平１−
４９１３５号公報等に開示された方法により得ることが
できる。また、例えば、一般式（２）中、Ｒ¹ 、Ｒ²、
Ｒ³ 及びＲ⁴ がＣＨ₃ であり、ｎが１である２−置換ア
ルコールはトロロックスを水素化リチウムアルミニウム
の存在下においてジエチルエーテル中で加熱還流処理す
ることなどにより容易に得ることができる。

【００３５】本発明において使用される糖は、当然、目
的とするクロマノール配糖体の種類によって決まり、セ
ロビオース、カードラン、ラミナラン、メリビオース、
ラフィノース、ラクトース、アラビノガラクタン、ショ
糖、イヌリン及びメチルマンノピラノシドからなる群よ
り選ばれるが、好ましくは、セロビオース、ラクトー
ス、ショ糖及びメチルマンノピラノシドが挙げられる。

【００３６】本発明において、２−置換アルコールの濃
度は、反応液中において飽和濃度若しくはそれに近い濃
度にすることが望ましい。また、糖の濃度は、全原料に
対して、５〜７５（ｗ／ｖ）％、好ましくは１０〜６５
（ｗ／ｖ）％である。

【００３７】本発明において使用される糖転移作用を触
媒する酵素（以下、単に「酵素」とも称する）は、反応
に用いる糖の種類によって使い分けることが好ましく、
その代表例を以下に挙げる。

【００３８】（１）２−置換アルコールにβ結合でグル
コース残基を結合させる場合 （ａ）セロビオース、カードラン、ラミナランなどのβ
結合よりなるオリゴ糖に対してはβ−グルコシダーゼ
（β−ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ，ＥＣ ３．２．１．２
１）、例えば、オリエンタル酵母工業株式会社製のアー
モンド由来のβ−グルコシダーゼを作用させることが望
ましい。

【００３９】（ｂ）リン酸存在下のセロビオースに対し
てはセロビオース ホスホリラーゼ（ｃｅｌｌｏｂｉｏ
ｓｅ ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｓｅ，ＥＣ ２．４．
１．２０）を作用させることが望ましい。

【００４０】（２）２−置換アルコールにα結合でガラ
クトース残基を結合させる場合 （ａ）メリビオース、ラフィノースなどに対してはα−
ガラクトシダーゼ（α−ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ，
ＥＣ ３．２．１．２２）を作用させることが望まし
い。

【００４１】（３）２−置換アルコールにβ結合でガラ
クトース残基を結合させる場合 （ａ）ラクトースなどに対してはβ−ガラクトシダーゼ
（β−ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ，ＥＣ ３．２．
１．２３）、例えば、東洋紡績株式会社製のエシェリキ
ア コリ(Escherichia coli)由来のβ−ガラクトシダー
ゼを作用させることが望ましい。

【００４２】（ｂ）アラビノガラクタンなどに対しては
エンド−１，４−β−ガラクタナーゼ（Ｅｎｄｏ−１，
４−β−ｇａｌａｃｔａｎａｓｅ，ＥＣ ３．２．１．
８９）を作用させることが望ましい。

【００４３】（４）２−置換アルコールにβ結合でフル
クトース残基を結合させる場合 （ａ）ショ糖、ラフィノース、メリビオースなどに対し
てはレバンシュークラーゼ（ｌｅｖａｎｓｕｃｒａｓ
ｅ，ＥＣ ２．４．１．１０）を作用させることが望ま
しい。

【００４４】（ｂ）ショ糖に対してはβ−フルクトフラ
ノシダーゼ（β−ｆｒｕｃｔｏｆｕｒａｎｏｓｉｄａｓ
ｅ，ＥＣ ３．２．１．２６）、例えば、和光純薬工業
株式会社製のベーカーズ イースト由来のインベルター
ゼを作用させることが望ましい。

【００４５】（ｃ）イヌリンなどに対してはイヌリンフ
ルクトトランスフェラーゼ（ｉｎｕｌｉｎ ｆｒｕｃｔ
ｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，ＥＣ ２．４．１．９３）
を作用させることが望ましい。

【００４６】（５）２−置換アルコールにα結合でマン
ノース残基を結合させる場合 （ａ）メチルマンノピラノシドなどに対してはα−マン
ノシダーゼ（α−ｍａｎｎｏｓｉｄａｓｅ，ＥＣ ３．
２．１．２４）、例えば、シグマ（ＳＩＧＭＡ）社製の
ジャック ビーンズ（Ｊａｃｋ Ｂｅａｎｓ）由来のα
−マンノシダーゼを作用させることが望ましい。

【００４７】上記酵素のうち、β−グルコシダーゼ、β
−ガラクトシダーゼ、α−マンノシダーゼ及びβ−フル
クトフラノシダーゼが本発明において好ましく使用され
る。

【００４８】本発明において、糖転移作用を触媒する酵
素の添加量は、使用する酵素、糖及び有機溶媒の種類お
よび反応液の量によって異なる。

【００４９】本発明によるクロマノール配糖体の製造に
おいて、２−置換アルコールを糖溶液に溶解させること
が望ましいが、その際、有機溶媒を添加することが好ま
しい。本発明において使用できる有機溶媒としては、例
えば、ジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルム
アミド、メタノール、エタノール、アセトン、及びアセ
トニトリルなどが挙げられ、酵素の糖転移活性を高める
点を考慮すると、ジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ−ジメ
チルホルムアミドやエタノールが好ましく使用される。
有機溶媒の添加濃度は、１〜５０（ｖ／ｖ）％であり、
反応効率を考えると５〜４０（ｖ／ｖ）％であることが
好ましい。

【００５０】本発明のクロマノール配糖体の製造におけ
る反応条件に関しては、ｐＨが５．０〜７．５、好まし
くは５．５〜７．０であり、反応温度が２０〜６０℃、
好ましくは３０〜５０℃であり、および反応時間が２〜
４０時間、好ましくは１０〜３０時間である。但し、こ
れらの条件は使用する酵素量等により影響をうけること
はいうまでもない。反応終了後、反応液をＸＡＤ（オル
ガノ株式会社）を担体として用いたカラムクロマトグラ
フィーで処理することにより、目的とするクロマノール
配糖体が高純度で得られる。また、一般式（１）におけ
るｍが３以上であるクロマノール配糖体が製造される場
合には、製造されたｍが１から８位の混合物の形態を有
するクロマノール配糖体を、ＨＰＬＣを用いた分取クロ
マトグラフィーなどで処理することにより、高純度のク
ロマノール配糖体が各ｍ毎に得ることができる。

【００５１】このようにして得られたクロマノール配糖
体は、一般的に、高い水溶性を有しかつ油溶性にも富む
ので、細胞膜近傍に局在化したり、また、細胞膜を透過
し、さらに細胞内にも入ることができ、放射線照射によ
って細胞膜内や細胞内に生じたフリーラジカルを捕捉し
て、細胞膜の損傷及びＤＮＡの突然変異等を防ぐことが
できる。

【００５２】

【実施例】次に実施例により本発明を説明するが、これ
らにより本発明の範囲がなんら制限されるものでないこ
とは言うまでもない。

【００５３】参考例１：β−グルコシダーゼの活性測定 １００ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ５．０）１ｍｌに２０ｍＭ
ｐ−ニトロフェニル−β−Ｄ−グルコピラノシド水溶
液０．５ｍｌを加え３７℃で５分間予備加温した後、酵
素溶液０．５ｍｌを加え、同温度条件下において１５分
間反応させた後、０．２Ｍ Ｎａ₂ ＣＯ₃ 溶液２．０ｍ
ｌを加え反応を停止させ、４００ｎｍの吸光度を測定し
た。なお、１Ｕは、上記条件において１分間に１μｍｏ
ｌのｐ−ニトロフェノールを生成する酵素量とした。

【００５４】参考例２：β−ガラクトシダーゼの活性測
定 １００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．３）２．５ｍｌ、
３．３６Ｍメルカプトエタノール溶液０．１ｍｌ、３０
ｍＭ ＭｇＣｌ₂ 溶液（ｐＨ７．３）０．１ｍｌ、３４
ｍＭ ｏ−ニトロフェニル−β−Ｄ−ガラクトピラノシ
ド溶液０．２ｍｌをキュベット（ｄ＝１．０ｃｍ）に入
れ、３７℃に制御された分光光度計にセットした。５分
間インキュベートした後、酵素溶液０．５ｍｌを加え、
４１０ｎｍの吸光度変化を求めた。なお，１Ｕは、上記
条件において１分間に１μｍｏｌのｏ−ニトロフェノー
ルを生成する酵素量とした。

【００５５】参考例３：β−フルクトフラノシダーゼの
活性測定 ８０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ４．５）で調製した５．０％
ショ糖溶液１．０ｍｌを２０℃で５分間予備加温した
後、酵素溶液１．０ｍｌを加え、同温度条件下において
３分間反応させた後、生成した還元糖量をＦｅｈｌｉｎ
ｇ−Ｌｅｈｒｍａｎ−Ｓｃｈｏｏｒｌ変法で測定した。
なお、１Ｕは、上記条件において３分間に１．０ｍｇの
グルコース相当還元糖を生成する酵素量とした。

【００５６】参考例４：α−マンノシダーゼの活性測定 １００ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ４．５）１ｍｌに２０ｍＭ
ｐ−ニトロフェニル−α−Ｄ−マンノピラノシド水溶
液０．５ｍｌを加え２５℃で５分間予備加温した後、酵
素溶液０．５ｍｌを加え、同温度条件下において１５分
間反応させた後、０．２Ｍ Ｎａ₂ ＣＯ₃ 溶液２．０ｍ
ｌを加え反応を停止させ、４００ｎｍの吸光度を測定し
た。なお、１Ｕは、上記条件において１分間に１μｍｏ
ｌのｐ−ニトロフェノールを生成する酵素量とした。

【００５７】参考例５：α−グルコシダーゼ（α-gluco
sidase, EC 3.2.1.20)の活性測定 ４（ｗ／ｖ）％マルトース水溶液１００μｌに１００ｍ
Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．５）３００μｌを加え、３７
℃で５分間インキュベートした後、酵素液４０μｌを加
え、同温度条件下において２０分間反応させた後５分間
の煮沸処理により反応を停止させた。次に、上記反応に
よるグルコースの生成量をグルコース測定キット（和光
純薬工業株式会社製）を用いて測定した。なお、１Ｕは
上記条件において１分間に１μｍｏｌのマルトースの加
水分解を触媒する酵素量とした。

【００５８】実施例１ ５０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ５．５）で調製した３０（ｗ
／ｖ）％セロビオース１１００ｍｌに対し、ジメチルス
ルホキシドで調製した５％（ｗ／ｖ）の下記一般式
（３）で示される２−置換アルコール（メタノール型：
上記一般式（２）においてＲ¹ 、Ｒ² 、Ｒ³ 及びＲ⁴ が
ＣＨ₃ であり、Ｒ⁵ がＨであり、ｎが１である）（以
下、単に「メタノール型２−置換アルコール」と称す
る）溶液２２０ｍｌおよび５５００Ｕのオリエンタル酵
母株式会社製のアーモンド由来のβ−グルコシダーゼを
加え、５０℃において２０時間反応させた。このときの
２−置換アルコールのクロマノール配糖体への転移率は
約５％であった。なお、この際、転移率は、２−置換ア
ルコールの減少の割合として記載した（以下の実施例に
おいても同様とする）。この反応液を３０％メタノール
溶液で平衡化したＸＡＤ−４（オルガノ株式会社製）カ
ラムにアプライし、非吸着物を３０％メタノールで溶出
後、８０％メタノールでクロマノール配糖体を溶出させ
た。次に得られたクロマノール配糖体画分をシリガゲル
カラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：メタノール，
６：１（ｖ／ｖ））処理することで高純度のクロマノー
ル配糖体である式（４）で示される２−（β−Ｄ−グル
コピラノシル）メチル−２，５，７，８−テトラメチル
クロマン−６−オール[2-(β-D-glucopyranosyl)methyl
-2,5,7,8-tetramethylchroman-6-ol)]を約５００ｍｇ得
た。

【００５９】

【化１０】

【００６０】

【化１１】

【００６１】このようにして得られた２−（β−Ｄ−グ
ルコピラノシル）メチル−２，５，７，８−テトラメチ
ルクロマン−６−オールの赤外線吸収スペクトルを図１
に示す。

【００６２】また、上記化合物の ¹Ｈ−ＮＭＲ、¹³Ｃ−
ＮＭＲ、質量分析及び比旋光度の結果は以下のとおりで
ある。

【００６３】¹Ｈ−ＮＭＲ δ（３００ＭＨｚ， ＤＭ
ＳＯ−ｄ₆ ）： １．２０および１．２３（ｓ，３Ｈ） １．６３から１．７５（ｍ，１Ｈ） １．８６から１．９２（ｍ，１Ｈ） １．９７（ｓ，３Ｈ） ２．０１（ｓ，３Ｈ） ２．０４（ｓ，３Ｈ） ２．５０（ｂｒｏａｄ ｔ，２Ｈ） ２．９７から４．３９（ｍ，１３Ｈ） ７．３９（ｓ，１Ｈ）¹³ Ｃ−ＮＭＲ δ（７５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ₆ 、プロ
トンデカップリングスペクトル）： １１．８ １１．９ １２．７ １９．７および１９．９ ２２．１および２２．４ ２８．０および２８．１ ６１．０ ７０．０ ７３．３ ７３．４ ７３．９および７４．１ ７６．７ ７６．８ １０３．５および１０３．６ １１６．８ １２０．３ １２０．８ １２２．６ １４４．２ １４５．２ 質量スペクトル （ＦＡＢ）： ｍ／ｚ ３９８ （分子イオンピーク） 比施光度：

【００６４】

【外１】

【００６５】実施例２ ５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６．５）で調製した４０
（ｗ／ｖ）％ラクトース８００ｍｌに対し、ジメチルス
ルホキシドで調製した２．７５％（ｗ／ｖ）の上記一般
式（２）においてＲ¹ 、Ｒ² 、Ｒ³ 及びＲ⁴ がＣＨ₃ で
あり、Ｒ⁵ がＨであり、ｎが２である２−置換アルコー
ル（エタノール型）溶液１６０ｍｌおよび４０００Ｕの
東洋紡績株式会社製のエシェリキア コリ由来のβ−ガ
ラクトシダーゼを加え、４０℃において２０時間反応さ
せた。このときの２−置換アルコールのクロマノール配
糖体への転移率は約３０％であった。この反応液を３０
％メタノール溶液で平衡化したＸＡＤ−４（オルガノ株
式会社製）カラムにアプライし、非吸着物を３０％メタ
ノールで溶出後、８０％メタノールでクロマノール配糖
体を溶出させた。次に得られたクロマノール配糖体画分
をシリガゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホル
ム：メタノール，６：１（ｖ／ｖ））で処理後、メタノ
ール及び酢酸エチルを用い結晶化することで高純度のク
ロマノール配糖体である式（５）で示される２−（β−
Ｄ−ガラクトピラノシル）エチル−２，５，７，８−テ
トラメチルクロマン−６−オール[2-(β-D-galactopyra
nosyl)ethyl-2,5,7,8-tetramethylchroman-6-ol)] を約
１７００ｍｇ得た。

【００６６】

【化１２】

【００６７】このようにして得られた２−（β−Ｄ−ガ
ラクトピラノシル）エチル−２，５，７，８−テトラメ
チルクロマン−６−オールの赤外線吸収スペクトルを図
２に示す。

【００６８】また、上記化合物の ¹Ｈ−ＮＭＲ、¹³Ｃ−
ＮＭＲ、質量分析及び比旋光度の結果は以下のとおりで
ある。

【００６９】¹Ｈ−ＮＭＲ δ（３００ＭＨｚ， ＤＭ
ＳＯ−ｄ₆ ）： １．２０（ｓ，３Ｈ） １．７０から１．８６（ｍ，４Ｈ） １．９８（ｓ，３Ｈ） ２．０１（ｓ，３Ｈ） ２．０５（ｓ，３Ｈ） ２．５０（ｂｒｏａｄ ｔ，２Ｈ） ３．２４から４．７３（ｍ，１３Ｈ） ７．３７（ｓ，１Ｈ）¹³ Ｃ−ＮＭＲ δ（７５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ₆ 、プロ
トンデカップリングスペクトル）： １１．７ １１．７ １２．７ ２０．１ ２４．０および２４．１ ３１．６ ３８．０および３８．２ ６０．３および６０．４ ６４．４ ６８．１ ７０．５ ７３．０ ７３．４ ７５．０ １０３．４および１０３．５ １１６．６ １２０．３ １２０．９ １２２．６ １４４．２ １４５．２ 質量スペクトル （ＦＡＢ）： ｍ／ｚ ４１２ （分子イオンピーク） 比施光度：

【００７０】

【外２】

【００７１】実施例３ ５０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ５．０）で調製した７０（ｗ
／ｖ）％ショ糖１６００ｍｌに対し、エタノールで調製
した５％（ｗ／ｖ）のメタノール型２−置換アルコール
溶液３２０ｍｌおよび１００Ｕの和光純薬工業株式会社
製のベーカーズイースト由来のインベルターゼを加え、
５０℃において２０時間反応させた。このときの２−置
換アルコールのクロマノール配糖体への転移率は約４％
であった。この反応液を３０％メタノール溶液で平衡化
したＸＡＤ−４（オルガノ株式会社製）カラムにアプラ
イし、非吸着物を３０％メタノールで溶出後、８０％メ
タノールでクロマノール配糖体を溶出させた。次に得ら
れたクロマノール配糖体画分をシリガゲルカラムクロマ
トグラフィー（酢酸エチル：メタノール，６：１（ｖ／
ｖ））処理することで高純度のクロマノール配糖体であ
る式（６）で示される２−（β−Ｄ−フルクトフラノシ
ル）メチル−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−
６−オール[2-(β-D-fuructofuranosyl)methyl-2,5,7,8
-tetramethylchroman-6-ol)]を約３００ｍｇ得た。

【００７２】

【化１３】

【００７３】このようにして得られた２−（β−Ｄ−フ
ルクトフラノシル）メチル−２，５，７，８−テトラメ
チルクロマン−６−オールの赤外線吸収スペクトルを図
３に示す。

【００７４】また、上記化合物の ¹Ｈ−ＮＭＲ、¹³Ｃ−
ＮＭＲ、質量分析及び比旋光度の結果は以下のとおりで
ある。

【００７５】¹Ｈ−ＮＭＲ δ（３００ＭＨｚ， ＤＭ
ＳＯ−ｄ₆ ）： １．１７（ｓ，３Ｈ） １．６４から１．７０（ｍ，１Ｈ） １．８５から１．９０（ｍ，１Ｈ） １．９７（ｓ，３Ｈ） ２．００（ｓ，３Ｈ） ２．０４（ｓ，３Ｈ） ２．５０（ｂｒｏａｄ ｔ，２Ｈ） ３．１５から５．１３（ｍ，１３Ｈ） ７．３６（ｓ，１Ｈ）¹³ Ｃ−ＮＭＲ δ（７５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ₆ 、プロ
トンデカップリングスペクトル）： １１．８ １１．８ １２．７ １９．８ ２２．４および２２．５ ２８．２ ６０．９ ６２．７および６２．９ ６５．８および６５．９ ７４．０ ７５．０および７５．２ ７６．４および７６．５ ８１．９および８２．１ １０３．７ １１７．０ １２０．３ １２０．７ １２２．５ １４４．４ １４５．１ 質量スペクトル （ＦＡＢ）： ｍ／ｚ ３９８ （分子イオンピーク） 比施光度：

【００７６】

【外３】

【００７７】実施例４ ５０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ５．０）で調製した３０（ｗ
／ｖ）％メチルマンノピラノシド４００ｍｌに対し、ジ
メチルスルホキシドで調製した５％（ｗ／ｖ）のメタノ
ール型２−置換アルコール溶液８０ｍｌおよび４００Ｕ
のシグマ社製のＪａｃｋ Ｂｅａｎｓ由来のα−マンノ
シダーゼを加え、４０℃において２０時間反応させた。
このときの２−置換アルコールのクロマノール配糖体へ
の転移率は約１２％であった。この反応液を３０％メタ
ノール溶液で平衡化したＸＡＤ−４（オルガノ株式会社
製）カラムにアプライし、非吸着物を３０％メタノール
で溶出後、８０％メタノールでクロマノール配糖体を溶
出させた。次に得られたクロマノール配糖体画分をシリ
ガゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：メタノ
ール，６：１（ｖ／ｖ））処理することで高純度のクロ
マノール配糖体である式（７）で示される２−（α−Ｄ
−マンノピラノシル）メチル−２，５，７，８−テトラ
メチルクロマン−６−オール[2-(α-D-mannopyranosyl)
methyl-2,5,7,8-tetramethylchroman-6-ol)]を約５００
ｍｇ得た。

【００７８】

【化１４】

【００７９】このようにして得られた２−（α−Ｄ−マ
ンノピラノシル）メチル−２，５，７，８−テトラメチ
ルクロマン−６−オールの赤外線吸収スペクトルを図４
に示す。

【００８０】また、上記化合物の ¹Ｈ−ＮＭＲ、¹³Ｃ−
ＮＭＲ、質量分析及び比旋光度の結果は以下のとおりで
ある。

【００８１】¹Ｈ−ＮＭＲ δ（３００ＭＨｚ， ＤＭ
ＳＯ−ｄ₆ ）： １．１７および１．２１（ｓ，３Ｈ） １．６５から１．７４（ｍ，１Ｈ） １．７７から１．９１（ｍ，１Ｈ） １．９７（ｓ，３Ｈ） ２．０１（ｓ，３Ｈ） ２．０４（ｓ，３Ｈ） ２．５０（ｂｒｏａｄ ｔ，２Ｈ） ３．１６から４．６９（ｍ，１３Ｈ） ７．３９（ｓ，１Ｈ）¹³ Ｃ−ＮＭＲ δ（７５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ₆ 、プロ
トンデカップリングスペクトル）： １１．７ １１．８ １２．７ １９．７および１９．８ ２１．９および２２．１ ２８．２および２８．５ ６１．０および６１．２ ６６．７および６６．９ ７０．２および７０．３ ７１．０ ７３．８ ７３．９ ７４．１ １００．１および１００．２ １１６．７ １２０．２および１２０．３ １２０．９ １２２．６ １４４．１および１４４．２ １４５．２ 質量スペクトル （ＦＡＢ）： ｍ／ｚ ３９８ （分子イオンピーク） 比施光度：

【００８２】

【外４】

【００８３】比較例１ ５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６．０）で調製した６０
（ｗ／ｖ）％マルトース溶液８０ｍｌに対し、ジメチル
スルホキシドで調製した５（ｗ／ｖ）％のメタノール型
２−置換アルコール溶液１６ｍｌおよび４００Ｕの東洋
紡株式会社製のサッカロマイセス属(Saccharomyces s
p.)由来のα−グルコシダーゼを加え、４０℃において
２０時間反応させた。このときの２−置換アルコールの
クロマノール配糖体への転移率は約４５％であった。こ
の反応液を３０％メタノール溶液で平衡化したＸＡＤ−
４（オルガノ株式会社製）カラムにアプライし、非吸着
物を３０％メタノール溶液で溶出後、８０％メタノール
溶液でクロマノール配糖体を溶出させた。次に得られた
クロマノール配糖体画分をシリカゲルカラムクロマトグ
ラフィー（酢酸エチル：メタノール，５：１，ｖ／ｖ）
処理することで高純度のクロマノール配糖体：式（８）
で示される２−（α−Ｄ−グルコピラノシル）メチル−
２，５，７，８−テトラメチルクロマン−６−オール[2
-(α-D-glucopyranosyl)methyl-2,5,7,8-tetramethylch
roman-6-ol] を約３００ｍｇ得た。

【００８４】

【化１５】

【００８５】このようにして得られた２−（α−Ｄ−グ
ルコピラノシル）メチル−２，５，７，８−テトラメチ
ルクロマン−６−オールの赤外線吸収スペクトルを図５
に示す。

【００８６】また、上記化合物の ¹Ｈ−ＮＭＲ，¹³Ｃ−
ＮＭＲ，質量分析及び比旋光度の結果を示す。

【００８７】¹Ｈ−ＮＭＲ δ（２７０ＭＨｚ， ＤＭ
ＳＯ−ｄ₆ ）： １．２３および１．２５（ｓ，３Ｈ） １．６９から１．７６（ｍ，１Ｈ） １．８７から１．９２（ｍ，１Ｈ） １．９７（ｓ，３Ｈ） ２．０２（ｓ，３Ｈ） ２．０４（ｓ，３Ｈ） ２．５１（ｂｒｏａｄ ｔ，２Ｈ） ３．０５から４．８８（ｍ，１３Ｈ） ７．３９（ｓ，１Ｈ）¹³ Ｃ−ＮＭＲ δ（６７．８ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ₆ 、
プロトンデカップリングスペクトル）： １１．７ １１．７ １２．６ １９．７および１９．８ ２２．２および２２．４ ２８．２ ６０．６および６０．８ ７０．０および７０．１ ７１．２および７１．５ ７１．９ ７２．６および７２．９ ７３．１ ７３．８および７３．９ ９８．７および９８．８ １１６．６および１１６．７ １２０．１および１２０．２ １２０．７および１２０．８ １２２．５ １４４．２ １４５．１ 質量スペクトル（ＦＡＢ）： ｍ／ｚ ３９８ （分子イオンピーク） 比旋光度：

【００８８】

【外５】

【００８９】実施例５：細胞膜酸化障害抑止効果の評価 実施例１から４及び比較例１で得られたクロマノール配
糖体を０．４％Ｌ−グルタミンを含むＤＭＥＭ培地（以
下、「ＤＭＥＭ培地」と略称する）中に最終濃度が０．
５ｍＭになるように溶解し、クロマノール配糖体溶液を
調製した。

【００９０】ヒト肝芽腫細胞（以下、「ＨｅｐＧ２」と
略称する）を６ウェルの細胞培養用マルチプレート（住
友ベークライト製）で１０％ウシ胎児血清を含んだＤＭ
ＥＭ培地中で３７℃、５％ＣＯ₂ 雰囲気下で継代培養
し、コンフルエント(confluent) な状態になるまで増殖
させた。このようにして培養されたＨｅｐＧ２の上清を
除去し、１ウェル当たりＣａ及びＭｇを含まないリン酸
緩衝塩類溶液（以下、「ＣＭＦ−ＰＢＳ」と略称する）
１ｍｌで細胞を２回洗浄した。次に、上記クロマノール
配糖体溶液を１ウェル当たり１．５ｍｌ添加し、３７
℃、５％ＣＯ₂ 雰囲気下で１８時間インキュベートし
た。さらに、上清を除去した後、ＣＭＦ−ＰＢＳ １ｍ
ｌで１ウェル当たり細胞を２回洗浄し、ＤＭＥＭ培地を
１．５ｍｌ加えた。さらに、ＣＭＦ−ＰＢＳに溶かした
１００ｍＭの２’，２−アゾビス（２−アミジノプロパ
ン）二塩酸塩（以下、「ＡＡＰＨ」と略称する）を０．
５ｍｌ添加し、３７℃、５％ＣＯ₂ 雰囲気下で４時間イ
ンキュベートした。そして、１ウェル当たりＣＭＦ−Ｐ
ＢＳ １ｍｌで細胞を２回洗浄後、８．１％ドデシル硫
酸ナトリウム処理により細胞膜を可溶化し、遠心分離処
理により、上清を分離した。上清中のタンパク質量はマ
ックウェル法により測定し、脂質過酸化物質量はチオバ
ルビツール酸（以下、「ＴＢＡ」と略称する）反応によ
り求めた。また、タンパク質１ｍｇ当たりのＴＢＡ反応
物（以下、「ＴＢＡＲＳ」と略称する）の量（ｎｍｏｌ
／ｍｇ・タンパク質）を求めた。この際、上記クロマノ
ール配糖体の濃度を０ｍＭとした以外は上記反応を同様
に繰り返して得られた比較対照のＴＢＡＲＳの量（ｎｍ
ｏｌ／ｍｇ・タンパク質）を基準として下記式より細胞
膜酸化障害抑制率を計算した。結果を表１に示す。本実
施例において、上記細胞は１群４〜５連で実験を行い、
結果はこれらの平均値として表わした。

【００９１】

【数１】

【００９２】

【表１】

【００９３】表１から、実施例１から４で得られた式
（４）から（７）で示されるクロマノール配糖体、特
に、実施例３及び４で得られた式（６）及び（７）で示
されるクロマノール配糖体は、比較例１で得られた式
（８）で示されるクロマノール配糖体に比べて、同等ま
たはそれ以下の細胞膜酸化障害抑制率を示すことが分か
る。これより、本発明によるクロマノール配糖体は、式
（８）で示されるクロマノール配糖体に比べて、有意に
優れた抗酸化活性を有することが示される。

【００９４】実施例６：放射線防護作用の評価 実施例１から４及び比較例１で得られたクロマノール配
糖体をＲＰＭＩ−１６４０＋１０％牛胎仔血清＋ＨＥＤ
ＥＳ緩衝液（２５ｍＭ）系培養液（以下、「完全培養
液」と略称する）中に最終濃度が１ｍＭになるように溶
解し、クロマノール配糖体溶液を予め調製した。

【００９５】次に、マウスのＴリンパ腫株ＥＬ−４細胞
を完全培養液中で３７℃、５％ＣＯ₂ 雰囲気下で継代培
養し、細胞密度が２×１０⁵ 個／ｍｌになるように調整
した。このようにして培養されたＥＬ−４細胞培養液の
上清を除去し、上記クロマノール配糖体溶液をそれぞれ
等量加え、Ｘ線を照射するまでの３０分間、上記と同様
の条件下で細胞培養を行った。クロマノール配糖体を含
む培養液中で所定時間培養した後、３Ｇｙの放射線を
０．９２Ｇｙ／分の線量率で照射した。放射線照射終了
直後、細胞を遠心沈降（４００ｇ×５分）させ、ＲＰＭ
Ｉ−１６４０で２回洗浄し、完全培養液で再浮遊させて
培養した。これに、サイトカラシンＢのＤＭＳＯ溶液
（２ｍｇ／ｍｌ濃度）を最終濃度が３μｇ／ｍｌになる
ように添加し、２０時間培養後に２核細胞中の小核保有
細胞の頻度（小核誘発頻度）を測定し、細胞の放射線損
傷の頻度を表わす尺度とした。また、各放射線照射細胞
について、上記クロマノール配糖体溶液の濃度を０ｍＭ
とした以外は上記操作を同様に繰り返して得られた比較
対照の小核誘発頻度を基準として下記式より小核誘発抑
制率を計算した。この際、上記細胞は１群４〜５連で放
射線照射実験を行い、結果はこれらの平均値として表わ
した。結果を表２に示す。

【００９６】

【数２】

【００９７】

【表２】

【００９８】表２より、小核誘発頻度は、実施例１から
４で得られた本発明によるクロマノール配糖体は、比較
例１で得られた値に比べて有意に小さく、これより、本
発明によるクロマノール配糖体は放射線被爆による細胞
の損傷を有効に抑制することが示された。

【００９９】

【発明の効果】上述したように、本発明の一般式（１）
で表わされるクロマノール配糖体は、抗酸化活性及び放
射線防護作用等の様々な特性に優れている。

【０１００】したがって、本発明のクロマノール配糖体
は、抗酸化剤として有用であり、化粧品、衣料品、食品
及び化成品など様々な分野における原料として有効に利
用できる。

【０１０１】また、上記利点に加えて、本発明のクロマ
ノール配糖体は、その高い放射線防護効果により、放射
線被爆による障害を有効に防止する放射線防護剤におい
て使用でき、さらにこのような用途に使用する際には、
その高い水溶性により、錠剤や散剤等の固形製剤の形態
のみならず、注射用等の液状の製剤の形態でも使用でき
る。

【図面の簡単な説明】

【図１】は、本発明によるクロマノール配糖体の実施例
１における赤外線吸収スペクトルである。

【図２】は、本発明によるクロマノール配糖体の実施例
２における赤外線吸収スペクトルである。

【図３】は、本発明によるクロマノール配糖体の実施例
３における赤外線吸収スペクトルである。

【図４】は、本発明によるクロマノール配糖体の実施例
４における赤外線吸収スペクトルである。

【図５】は、本発明によるクロマノール配糖体の比較例
１における赤外線吸収スペクトルである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ Ａ６１Ｋ 31/715 ＡＥＤ Ａ６１Ｋ 31/715 ＡＥＤ

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 一般式（１）： 【化１】 （ただし、式中、Ｒ¹ ，Ｒ² ，Ｒ³ およびＲ⁴ は同一ま
   たは異なる水素原子または低級アルキル基を表わし、Ｒ
   ⁵ は水素原子、低級アルキル基または低級アシル基を表
   わし、Ｘはβ−グルコース、フルクトース、マンノース
   及びガラクトースからなる群より選ばれた単糖残基また
   はオリゴ糖残基を表わし、該糖残基の水酸基の水素原子
   は低級アルキル基または低級アシル基で置換されていて
   もよく、ｎは０〜４の整数であり、およびｍは１〜６の
   整数である）で表わされるクロマノール配糖体。
2. 【請求項２】 一般式（２）： 【化２】 （ただし、式中、Ｒ¹ ，Ｒ² ，Ｒ³ およびＲ⁴ は同一ま
   たは異なる水素原子または低級アルキル基を表わし、Ｒ
   ⁵ は水素原子、低級アルキル基または低級アシル基を表
   わし、およびｎは０〜４の整数である）で表わされる２
   −置換アルコールと、セロビオース、カードラン、ラミ
   ナラン、メリビオース、ラフィノース、ラクトース、ア
   ラビノガラクタン、ショ糖、イヌリン及びメチルマンノ
   ピラノシドからなる群より選ばれた糖とを、相当する糖
   転移作用を触媒する酵素の存在下に反応させることを特
   徴とする一般式（１）： 【化３】 （但し、Ｒ¹ ，Ｒ² ，Ｒ³ ，Ｒ⁴ ，Ｒ⁵ 及びｎは前記定
   義のとおりであり、Ｘはβ−グルコース、フルクトー
   ス、マンノース及びガラクトースからなる群より選ばれ
   た単糖残基またはオリゴ糖残基を表わし、該糖残基の水
   酸基の水素原子は低級アルキル基または低級アシル基で
   置換されていてもよく、およびｍは１〜６の整数であ
   る）で表わされるクロマノール配糖体の製造方法。