JPH11187898A - 尿中の酵素反応の検出および定量方法 - Google Patents

尿中の酵素反応の検出および定量方法

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JPH11187898A
JPH11187898A JP10263824A JP26382498A JPH11187898A JP H11187898 A JPH11187898 A JP H11187898A JP 10263824 A JP10263824 A JP 10263824A JP 26382498 A JP26382498 A JP 26382498A JP H11187898 A JPH11187898 A JP H11187898A
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JP10263824A
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Ursula Schmitz-Treyer
ウルズラ・シユミツツ−トライア
Walter Dr Hofmann
ヴアルター・ホフマン
Walter Guder
ヴアルター・グーダー
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Siemens Healthcare Diagnostics GmbH Germany
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Dade Behring Marburg GmbH
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Abstract

(57)【要約】 【課題】 尿中の酵素の光学的測定が自動分析装置によ
り容易に実施できる可測能が改善された特定の酵素の湿
式化学的測定方法の提供。 【解決手段】 尿中の酵素反応の検出および定量方法に
おいて、検出する酵素を含有する尿サンプルを自動分析
器中で特異的な基質と混合し、酵素反応を光学的に追跡
して測定し、測定可能性を改善する物質を反応中に添加
する方法。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、尿中の酵素反応の
検出および定量方法において、酵素反応の光学的可測能
を改善するある種の物質を反応に添加する方法に関す
る。
【０００２】
【従来技術】腎臓および性尿器系疾患の診断には、体液
中、特に尿中の特定の酵素特に偽ペルオキシダーゼおよ
びエステラーゼの検出が極めて重要である。本来、たと
えば白血球の遠心分離および計数のような物理的方法が
尿の診断には特に重要である。これらの方法は現時点で
は、結果の点では満足できるものではあるが、高度の手
作業を要することから、実用向きとはいえない。尿の診
断に極めて広範に使用されているいわゆる「試験紙」で
もある程度の手操作が要求され、したがってサンプルの
採取から評価までの測定の自動化はほとんど不可能であ
る。一方、尿の診断の特に重要な部分は、尿分析の一部
を形成する基本的な試験としての顆粒球エステラーゼの
検出および偽ペルオキシダーゼの測定による尿中の血液
の検出である。試験紙を使用するこれらのパラメーター
の測定は、特に試験紙が支持材料のクロマトグラフィー
的性質によって測定をかなり単純化するので、その実用
性が維持されている。すなわち相当する方法および手段
はすでに記載されている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】したがって、本発明の
目的は、尿中の特定の酵素の湿式化学的測定方法を開発
することにある。驚くべきことに、特定の試薬添加物を
使用することによって、着色した尿においても、酵素の
光学的測定が自動分析装置により容易に実施できること
が見出された。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明は、尿中の酵素反
応の検出および定量方法において、検出する酵素を含有
する尿サンプルを自動分析器中で特異的な基質と混合
し、酵素反応を光学的に追跡して測定し、可測能を改善
する物質を反応中に添加する方法であって、この場合、
この物質は低級アルコール：メタノール、エタノールお
よびプロパノールからなる群より選択される方法を提供
する。
【０００５】
【発明の実施の形態】この関連で、アルコールは反応混
合物中に約１〜７０容量％、好ましくは約１０〜６０容
量％、特に好ましくは約４０〜６０容量％、特に極めて
好ましくは約４５〜５５容量％の濃度で使用するのが有
利である。検出する酵素は、ヘモグロビン偽ペルオキシ
ダーゼまたは白血球エステラーゼとすることが有利であ
る。
【０００６】ヘモグロビン偽ペルオキシダーゼの反応を
検出するためにはＴＭＢを使用し、反応混合物に以下の
群：６−メトキシキノリンおよびフェナントリジンから
の少なくとも１種の物質を添加し、６−メトキシキノリ
ンを０.１〜０.５容量％の濃度で、およびフェナントリ
ジンを１〜３mg／mlの濃度で添加するのが有利である。
【０００７】白血球エステラーゼを検出するためには、
使用する基質はそれ自体既知の３−ヒドロキシ−５−フ
ェニルピロールＮ−トシル−Ｌ−アラニンエステルと
し、ジアゾニウム塩ならびに以下の群：Ｂriji（登録商
標）、コール酸、エチレングリコールおよびＥＤＴＡか
らの少なくとも１種の物質を反応混合物に添加する。
【０００８】ジアゾニウム塩は、塩酸ジアゾニウム亜鉛
酸塩とするのが有利であり、０.０２〜０.１mg／mlの濃
度に添加し、Ｂriji（登録商標）を０.１〜０.５容量
％、コール酸を０.０２〜０.３容量％、エチレングリコ
ールを０.１〜０.５容量％およびＥＤＴＡを０.１〜０.
５mmol／リットルの濃度で加える。アスコルビン酸によ
る干渉を回避するためにアスコルビン酸オキシダーゼを
添加することもできる。
【０００９】一方の定量の場合にのみ基質を添加し、基
質を加えない場合と加えた場合との定量値の差を測定値
とみなす二重測定法を実施するのが有利である。
【００１０】使用された略号： ＥＤＴＡ エチレンジアミン四酢酸 ＰＢＳ リン酸緩衝食塩溶液 ＴＭＢ テトラメチルベンチジン
【００１１】
【実施例】以下の実施例は本発明を例示するものであ
る。
【００１２】実施例１ 尿中の白血球エステラーゼの湿式化学的測定 測定は Hitachi 911 アナライザー（Boehringer Mannhe
im, Germany）によって実施した。以下の試薬を用い
た。 Ｒ１：0.25mol／リットル PBS，pH 7.5 0.5％ Briji（登録商標） 1.0％エチレングリコール 0.25％コール酸 １mmol／リットル EDTA Ｒ２：9.8mlのエタノール(96％)＋0.2mlのデカノール中
2.5mgの３−ヒドロキシ−５−フェニルピロールＮ−ト
シル−Ｌ−アラニンエステル Ｒ３：蒸留水中 0.625mg／mlの塩酸ジアゾニウム亜鉛酸
塩 Ｒ４：70mlのエタノール(96％)＋30mlの蒸留水 測定は５４６nmにおける終点測定として行われる。 試薬の容量は：Ｒ１：40μl Ｒ２：20μl Ｒ３：20μl Ｒ４：160μl サンプル：非希釈尿 40μl
【００１３】実施例２ 尿中のヘモグロビン偽ペルオキシダーゼの湿式化学的測
定 測定は Hitachi 911 アナライザー（Boehringer Mannhe
im, Germany）により実施した。測定は６６０nmの終点
測定として行った。以下の試薬を用いた。 Ｒ１：0.1mol／リットル リン酸緩衝等張性ＮａＣｌ溶
液（PBS）中 0.1mg／mlのアスコルビン酸オキシダーゼ Ｒ２：1.0mol／リットル クエン酸緩衝液，pH 4.8 Ｒ３：45mgのＴＭＢ ＋４mlのＲ２ ＋６mlのエタノール（96％） ＋0.4mlの６−メトキシキノリン ＋280mgのフェナントリジン ＋200mgのジヒドロペルオキシダーゼ（Luperox：登録商
標） Ｒ４：70mlのエタノール(96％)＋30mlの蒸留水 試薬の容量は：Ｒ１：20μl Ｒ２：1μl Ｒ３：20μl Ｒ４：190μl サンプル：非希釈尿 50μl
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ヴアルター・グーダー ドイツ連邦共和国81673ミユンヒエン．ザ ンクトフアイト−シユトラーセ25アー

Claims (11)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 ａ) 検出する酵素を含む尿サンプルを自
    動分析器中で特異的基質と混合し、 ｂ) 酵素反応を光学的に追跡して測定し、 ｃ) 可測能を改善する物質を反応中に添加するものであ
    って、 上記物質は、低級アルコール：メタノール、エタノール
    およびプロパノールからなる群より選択される、尿中の
    酵素反応の検出および定量方法。
  2. 【請求項２】 アルコールは反応混合物中に約１〜７０
    容量％の濃度で用いられる請求項１記載の方法。
  3. 【請求項３】 検出する酵素はヘモグロビン偽ペルオキ
    シダーゼである請求項１および２のいずれかに記載の方
    法。
  4. 【請求項４】 尿中の血液を定量するための請求項３記
    載の方法。
  5. 【請求項５】 検出する酵素は白血球エステラーゼであ
    る請求項１および２のいずれかに記載の方法。
  6. 【請求項６】 反応を検出するためにＴＭＢを使用し、
    以下の群：６−メトキシキノリンおよびフェナントリジ
    ンからの少なくとも１種の物質を反応混合物に添加する
    請求項３記載の方法。
  7. 【請求項７】 ６−メトキシキノリンを０.１〜０.５容
    量％の濃度でおよびフェナントリジンを１〜３mg／mlの
    濃度で添加する請求項６記載の方法。
  8. 【請求項８】 ３−ヒドロキシ−５−フェニルピロール
    Ｎ−トシル−Ｌ−アラニンエステルを基質として使用
    し、ジアゾニウム塩および以下の群：Ｂriji（登録商
    標）、コール酸、エチレングリコールおよびＥＤＴＡか
    らの少なくとも１種の物質を反応混合物に添加する請求
    項５記載の方法。
  9. 【請求項９】 ジアゾニウム塩は塩酸ジアゾニウム亜鉛
    酸塩であり、０.０２〜０.１mg／mlの濃度に添加し、Ｂ
    riji（登録商標）を０.１〜０.５容量％、コール酸を
    ０.０２〜０.３容量％、エチレングリコールを０.１〜
    ０.５容量％およびＥＤＴＡを０.１〜０.５mmol／リッ
    トルの濃度で加える請求項８記載の方法。
  10. 【請求項１０】 アスコルビン酸による干渉を回避する
    ためにアスコルビン酸オキシダーゼを添加する請求項１
    〜９のいずれかに記載の方法。
  11. 【請求項１１】 二重測定を実施し、一方の定量の場合
    にのみ基質を添加し、基質を添加しない場合と添加した
    場合の定量値の差を測定値とみなす請求項１〜１０のい
    ずれかに記載の方法。
JP10263824A 1997-09-19 1998-09-18 尿中の酵素反応の検出および定量方法 Abandoned JPH11187898A (ja)

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