JPH1118760A - １，５−アンヒドログルシトール脱水素酵素を産生する細菌株及びその大量増殖方法 - Google Patents
１，５−アンヒドログルシトール脱水素酵素を産生する細菌株及びその大量増殖方法Info
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- JPH1118760A JPH1118760A JP17571197A JP17571197A JPH1118760A JP H1118760 A JPH1118760 A JP H1118760A JP 17571197 A JP17571197 A JP 17571197A JP 17571197 A JP17571197 A JP 17571197A JP H1118760 A JPH1118760 A JP H1118760A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 １，５−アンヒドログルシトールに特異的に
作用する１，５−アンヒドログルシトール脱水素酵素を
産生する新しい細菌株と、これら細菌株を効率よく、か
つ、安価に培養し、菌体内から１，５−アンヒドログル
シトール脱水素酵素を効率よく得ることのできる大量増
殖方法を提供する。 【解決手段】 １，５−アンヒドログルシトールに特異
的に作用する１，５−アンヒドログルシトール脱水素酵
素を産生するラフネラ・アクアティリス（Rahnella aqu
atitlis ）４７４（ＦＥＲＭ Ｐ−１６１５８）、エン
テロバクター・クロアカエ（Enterobacter cloacae）３
４０（ＦＥＲＭ Ｐ−１６１５７）、セラチア・マルセ
ッセンス（Serratia marcescens ）８２５（ＦＥＲＭ
Ｐ−１６１５９）、及び上記細菌株を、ペプトンを１〜
１０重量％含有する培地で培養することを特徴とする上
記細菌株の大量増殖方法。
作用する１，５−アンヒドログルシトール脱水素酵素を
産生する新しい細菌株と、これら細菌株を効率よく、か
つ、安価に培養し、菌体内から１，５−アンヒドログル
シトール脱水素酵素を効率よく得ることのできる大量増
殖方法を提供する。 【解決手段】 １，５−アンヒドログルシトールに特異
的に作用する１，５−アンヒドログルシトール脱水素酵
素を産生するラフネラ・アクアティリス（Rahnella aqu
atitlis ）４７４（ＦＥＲＭ Ｐ−１６１５８）、エン
テロバクター・クロアカエ（Enterobacter cloacae）３
４０（ＦＥＲＭ Ｐ−１６１５７）、セラチア・マルセ
ッセンス（Serratia marcescens ）８２５（ＦＥＲＭ
Ｐ−１６１５９）、及び上記細菌株を、ペプトンを１〜
１０重量％含有する培地で培養することを特徴とする上
記細菌株の大量増殖方法。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、１，５−アンヒド
ログルシトール（以下１，５−ＡＧと略記する）に特異
的に作用する１，５−アンヒドログルシトール脱水素酵
素（以下１，５−ＡＧＤＨと略記する）を産生する新規
な細菌株と、これら細菌株の大量増殖方法に関するもの
である。
ログルシトール（以下１，５−ＡＧと略記する）に特異
的に作用する１，５−アンヒドログルシトール脱水素酵
素（以下１，５−ＡＧＤＨと略記する）を産生する新規
な細菌株と、これら細菌株の大量増殖方法に関するもの
である。
【０００２】
【従来の技術】１，５−ＡＧはヒト髄液及び血漿中に存
在する化合物であるが、ある種の疾患、特に糖尿病の際
には血漿中の１，５−ＡＧレベルが低下することから、
糖尿病の診断マーカーとして有効であることが知られて
いる。従来、１，５−ＡＧは、ガスクロマトグラフィー
による分離方法やピラノースオキシダーゼまたはＬ−ソ
ルボースオキシダーゼを利用した酵素法により測定され
ていた（特公平５−４１２３８号公報）。その後、１，
５−ＡＧに作用する１，５−ＡＧ酸化酵素（以下、１，
５−ＡＧＯＤと略記する）や補酵素をＮＡＤ+に限定し
た１，５−ＡＧＤＨが見い出され、それぞれの酵素を利
用した酵素法による測定方法が開発された（特公平３−
２４２００号公報、特開平２−２６８６７９号公報）。
ピラノースオキシダーゼの生産菌としては、ポリポラス
・オブッサス（Polyporus obtusus ）、バシジオマイセ
タウス・フンギ（Basidiomycetous fungi ）等が挙げら
れる。Ｌ−ソルボースオキシダーゼの生産菌としては、
トラメテスサングイネア（Trametessanguinea ）ＩＦＯ
−４９２３が挙げられる。また、１，５−ＡＧＯＤの生
産菌としては、ピクノポラス・コクシネウム（Pycnopor
us coccineus）ＩＦＯ−４９２３、同ＩＦＯ−６４９
０、コリオラス・コンソルス（Coriolus consors）ＩＦ
Ｏ−９０７８、シュードモナス（Pseudomonas ）sp.NK
−85001 （ＦＥＲＭ Ｐ−８１００）が挙げられている
（特公平３−２４２００号公報）。さらに、１，５−Ａ
ＧＤＨの生産菌としては、オイペニシリウム・クルスタ
セウム（Eupenicillium crustaceum）ＩＦＯ−８９３
８、ハンセヌラ・カリホニア（Hansenura carifonia ）
ＨＵＴ−７３２１、ピチア・シュードポリモルファ（Pi
chia pseudopolymorha）ＨＵＴ−７３３０等の各種真菌
（特開平２−２６８６７９号公報）が挙げられる。ま
た、シュードモナス属に属する微生物を代表とする各種
１，５−ＡＧＯＤ生産菌を、１，５−ＡＧを含有する培
地で培養することにより、１，５−ＡＧＯＤ活性の高い
酵素を取得していたが、これらの酵素は菌体の膜画分に
存在しており、抽出操作が容易でなかった（特公平７−
１２３０６号公報）。さらに、従来の１，５−ＡＧＤＨ
生産菌からの１，５−ＡＧＤＨの生産性は、０．６Ｕ／
ｇ湿菌体程度と低かった（特開平２−２６８６７９号公
報）。
在する化合物であるが、ある種の疾患、特に糖尿病の際
には血漿中の１，５−ＡＧレベルが低下することから、
糖尿病の診断マーカーとして有効であることが知られて
いる。従来、１，５−ＡＧは、ガスクロマトグラフィー
による分離方法やピラノースオキシダーゼまたはＬ−ソ
ルボースオキシダーゼを利用した酵素法により測定され
ていた（特公平５−４１２３８号公報）。その後、１，
５−ＡＧに作用する１，５−ＡＧ酸化酵素（以下、１，
５−ＡＧＯＤと略記する）や補酵素をＮＡＤ+に限定し
た１，５−ＡＧＤＨが見い出され、それぞれの酵素を利
用した酵素法による測定方法が開発された（特公平３−
２４２００号公報、特開平２−２６８６７９号公報）。
ピラノースオキシダーゼの生産菌としては、ポリポラス
・オブッサス（Polyporus obtusus ）、バシジオマイセ
タウス・フンギ（Basidiomycetous fungi ）等が挙げら
れる。Ｌ−ソルボースオキシダーゼの生産菌としては、
トラメテスサングイネア（Trametessanguinea ）ＩＦＯ
−４９２３が挙げられる。また、１，５−ＡＧＯＤの生
産菌としては、ピクノポラス・コクシネウム（Pycnopor
us coccineus）ＩＦＯ−４９２３、同ＩＦＯ−６４９
０、コリオラス・コンソルス（Coriolus consors）ＩＦ
Ｏ−９０７８、シュードモナス（Pseudomonas ）sp.NK
−85001 （ＦＥＲＭ Ｐ−８１００）が挙げられている
（特公平３−２４２００号公報）。さらに、１，５−Ａ
ＧＤＨの生産菌としては、オイペニシリウム・クルスタ
セウム（Eupenicillium crustaceum）ＩＦＯ−８９３
８、ハンセヌラ・カリホニア（Hansenura carifonia ）
ＨＵＴ−７３２１、ピチア・シュードポリモルファ（Pi
chia pseudopolymorha）ＨＵＴ−７３３０等の各種真菌
（特開平２−２６８６７９号公報）が挙げられる。ま
た、シュードモナス属に属する微生物を代表とする各種
１，５−ＡＧＯＤ生産菌を、１，５−ＡＧを含有する培
地で培養することにより、１，５−ＡＧＯＤ活性の高い
酵素を取得していたが、これらの酵素は菌体の膜画分に
存在しており、抽出操作が容易でなかった（特公平７−
１２３０６号公報）。さらに、従来の１，５−ＡＧＤＨ
生産菌からの１，５−ＡＧＤＨの生産性は、０．６Ｕ／
ｇ湿菌体程度と低かった（特開平２−２６８６７９号公
報）。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、上述し
た従来のガスクロマトグラフィー法は、試料の前処理及
び分析機器の維持・管理に高度な技術が必要であったた
め、一般的に用いられる方法ではなかった。ピラノース
オキシダーゼまたはＬ−ソルボースオキシダーゼを利用
した酵素法では、１，５−ＡＧのみならずグルコースを
酸化するという性質を有することから、測定の際、血漿
中に正常で１，５−ＡＧの約４０倍、糖尿病時で更に多
量に存在するグルコースを除去する必要があった。ま
た、１，５−ＡＧＯＤ及び１，５−ＡＧＤＨを利用した
酵素法では、その基質特異性がそれ程厳密でなかった。
さらに、１，５−ＡＧＯＤの生産菌の培養には、炭素源
として高価な１，５−ＡＧを使用していたため、製造コ
ストが高くなるという欠点があった。また、上記酵素は
菌体の膜画分に存在していたため、可溶化等による酵素
の抽出操作が必要であった。さらに、従来の１，５−Ａ
ＧＤＨ生産菌の培地では、培地中に窒素源であるペプト
ンや酵母エキスを１重量％未満しか含有していなかった
ため、１，５−ＡＧＤＨ活性を有する菌体を十分に得る
ことができなかった。本発明は、１，５−ＡＧに特異的
に作用する１，５−ＡＧＤＨを産生する新しい細菌株
と、これら細菌株を効率よく、かつ、安価に培養し、菌
体内から１，５−ＡＧＤＨを効率よく得ることのできる
大量増殖方法を提供することを目的とするものである。
た従来のガスクロマトグラフィー法は、試料の前処理及
び分析機器の維持・管理に高度な技術が必要であったた
め、一般的に用いられる方法ではなかった。ピラノース
オキシダーゼまたはＬ−ソルボースオキシダーゼを利用
した酵素法では、１，５−ＡＧのみならずグルコースを
酸化するという性質を有することから、測定の際、血漿
中に正常で１，５−ＡＧの約４０倍、糖尿病時で更に多
量に存在するグルコースを除去する必要があった。ま
た、１，５−ＡＧＯＤ及び１，５−ＡＧＤＨを利用した
酵素法では、その基質特異性がそれ程厳密でなかった。
さらに、１，５−ＡＧＯＤの生産菌の培養には、炭素源
として高価な１，５−ＡＧを使用していたため、製造コ
ストが高くなるという欠点があった。また、上記酵素は
菌体の膜画分に存在していたため、可溶化等による酵素
の抽出操作が必要であった。さらに、従来の１，５−Ａ
ＧＤＨ生産菌の培地では、培地中に窒素源であるペプト
ンや酵母エキスを１重量％未満しか含有していなかった
ため、１，５−ＡＧＤＨ活性を有する菌体を十分に得る
ことができなかった。本発明は、１，５−ＡＧに特異的
に作用する１，５−ＡＧＤＨを産生する新しい細菌株
と、これら細菌株を効率よく、かつ、安価に培養し、菌
体内から１，５−ＡＧＤＨを効率よく得ることのできる
大量増殖方法を提供することを目的とするものである。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者等はこのような
課題を解決するために鋭意研究した結果、土壌より分離
したラフネラ属、エンテロバクター属、セラチア属に属
する微生物が、ＮＡＤ + の存在下、１，５−ＡＧを酸化
する酵素を産生すること、かつ、その酵素が血中に存在
するグルコース等の糖類と全く反応しない１，５−ＡＧ
ＤＨであること、及び上記微生物を培養する場合、培地
に１，５−ＡＧを含有させなくても、１，５−ＡＧＤＨ
を得ることができ、また、ペプトンを１〜１０重量％含
有する培地で培養することで効率よく１，５−ＡＧＤＨ
を生産でき、さらに、酵素が菌体内から得られることを
見い出し、本発明に到達した。
課題を解決するために鋭意研究した結果、土壌より分離
したラフネラ属、エンテロバクター属、セラチア属に属
する微生物が、ＮＡＤ + の存在下、１，５−ＡＧを酸化
する酵素を産生すること、かつ、その酵素が血中に存在
するグルコース等の糖類と全く反応しない１，５−ＡＧ
ＤＨであること、及び上記微生物を培養する場合、培地
に１，５−ＡＧを含有させなくても、１，５−ＡＧＤＨ
を得ることができ、また、ペプトンを１〜１０重量％含
有する培地で培養することで効率よく１，５−ＡＧＤＨ
を生産でき、さらに、酵素が菌体内から得られることを
見い出し、本発明に到達した。
【０００５】すなわち、本発明は、１，５−アンヒドロ
グルシトールに特異的に作用する１，５−アンヒドログ
ルシトール脱水素酵素を産生するラフネラ・アクアティ
リス（Rahnella aquatitlis ）４７４（ＦＥＲＭ Ｐ−
１６１５８）、エンテロバクター・クロアカエ（Entero
bacter cloacae）３４０（ＦＥＲＭ Ｐ−１６１５
７）、セラチア・マルセッセンス（Serratia marcescen
s ）８２５（ＦＥＲＭ Ｐ−１６１５９）、及び上記細
菌株を、ペプトンを１〜１０重量％含有する培地で培養
することを特徴とする上記細菌株の大量増殖方法を要旨
とするものである。
グルシトールに特異的に作用する１，５−アンヒドログ
ルシトール脱水素酵素を産生するラフネラ・アクアティ
リス（Rahnella aquatitlis ）４７４（ＦＥＲＭ Ｐ−
１６１５８）、エンテロバクター・クロアカエ（Entero
bacter cloacae）３４０（ＦＥＲＭ Ｐ−１６１５
７）、セラチア・マルセッセンス（Serratia marcescen
s ）８２５（ＦＥＲＭ Ｐ−１６１５９）、及び上記細
菌株を、ペプトンを１〜１０重量％含有する培地で培養
することを特徴とする上記細菌株の大量増殖方法を要旨
とするものである。
【０００６】
【発明の実施の形態】以下、本発明を詳細に説明する。
【０００７】本発明に用いる微生物は上記１，５−ＡＧ
ＤＨを産生し得るものであって、その種類には特に限定
はないが、例えば、ラフネラ属、エンテロバクター属、
セラチア属に属する微生物が挙げられる。これらの微生
物の中でも、好適な例として、ラフネラ・アクアティリ
ス４７４、エンテロバクター・クロアカエ３４０、セラ
チア・マルセッセンス８２５が挙げられる。以下に、ラ
フネラ・アクアティリス４７４、エンテロバクター・ク
ロアカエ３４０、セラチア・マルセッセンス８２５の菌
学的性質を以下に示す。
ＤＨを産生し得るものであって、その種類には特に限定
はないが、例えば、ラフネラ属、エンテロバクター属、
セラチア属に属する微生物が挙げられる。これらの微生
物の中でも、好適な例として、ラフネラ・アクアティリ
ス４７４、エンテロバクター・クロアカエ３４０、セラ
チア・マルセッセンス８２５が挙げられる。以下に、ラ
フネラ・アクアティリス４７４、エンテロバクター・ク
ロアカエ３４０、セラチア・マルセッセンス８２５の菌
学的性質を以下に示す。
【０００８】 試験項目 試験結果 菌 株 ４７４ ３４０ ８２５ 形態 桿菌 桿菌 桿菌 グラム染色性 − − − 胞子 − − − 運動性 ＋ ＋ ＋ 酸素に対する態度 通性嫌気性 通性嫌気性 通性嫌気性 オキシダーゼ − − − カタラーゼ ＋ ＋ ＋ ＯＦ Ｆ Ｆ Ｆ 乳糖からのガスの生成 ＋ ＋ − 集落の色調 ＮＰ ＮＰ ＮＰ （ＮＰ：特徴的集落色素を生成せず）
【０００９】上記性状試験の結果から、いずれの菌株も
腸内細菌であることが示唆されたので、自動細菌検査装
置ATB Expression（ビオメリュー）による同定試験を行
った。なお、試験には腸内細菌同定キットID 32E（ビオ
メリュー）を用いた。
腸内細菌であることが示唆されたので、自動細菌検査装
置ATB Expression（ビオメリュー）による同定試験を行
った。なお、試験には腸内細菌同定キットID 32E（ビオ
メリュー）を用いた。
【００１０】 試験項目 試験結果 菌 株 ４７４ ３４０ ８２５ オルニチンデカルボキシラーゼ − ＋ ＋ アルギニンジヒドラーゼ − ＋ − ウレアーゼ − − − 酸の生成 Ｌ−アラビトール − − − Ｄ−ガラクツロン酸 ＋ ＋ − ５−ケトグルコン酸カリウム ＋ − ＋ リパーゼ ？ − ＋ 酸の生成 ピルビン酸ナトリウム − − − β−グルコシダーゼ ＋ ＋ ＋ 酸の生成 Ｄ−マンニトール ＋ ＋ ＋ Ｄ−マルトール ＋ ＋ ＋ インドールの生成 − − − Ｎ−アセチル−β−グルコサミニダーゼ − − ＋ β−ガラクトシダーゼ ＋ ＋ ＋ 酸の生成 グルコース ＋ ＋ ＋ シュークロース ＋ ＋ − Ｌ−アラビノース ＋ ＋ − Ｄ−アラビトール − − − α−グルコシダーゼ − − − α−ガラクトシダーゼ ＋ ＋ − 酸の生成 トレハロース ＋ ＋ ＋ Ｌ−ラムノース ＋ ＋ − イノシトール − ＋ ＋ アドニトール − − ＋ パラチノース − ＋ − β−グルクロニダーゼ ＋ − − 酸の生成 Ｄ−セロビオース ＋ ＋ − Ｄ−ソルビトール ＋ ＋ ＋ α−マルトシダーゼ − ？ − マロン酸塩の利用 ＋ ＋ − Ｌ−アスパラギン酸アリルアミダーゼ − − ＋ （？：判定保留）
【００１１】菌学的性質から、バージィのマニュアル・
オブ・システマティック・バクテリオロジー（Bargey's
mannual of Systematic Bacteriology ）に基き検索し
た結果、４７４株、３４０株、８２５株は、それぞれラ
フネラ・アクアティリス、エンテロバクター・クロアカ
エ、セラチア・マルセッセンスに属する細菌と判明し、
それぞれラフネラ・アクアティリス４７４、エンテロバ
クター・クロアカエ３４０、セラチア・マルセッセンス
８２５と命名し、平成９年３月２６日に通産省工業技術
院生命工学工業技術研究所に寄託した。その寄託番号は
それぞれ、ＦＥＲＭ Ｐ−１６１５８、ＦＥＲＭ Ｐ−
１６１５７、ＦＥＲＭ Ｐ−１６１５９である。
オブ・システマティック・バクテリオロジー（Bargey's
mannual of Systematic Bacteriology ）に基き検索し
た結果、４７４株、３４０株、８２５株は、それぞれラ
フネラ・アクアティリス、エンテロバクター・クロアカ
エ、セラチア・マルセッセンスに属する細菌と判明し、
それぞれラフネラ・アクアティリス４７４、エンテロバ
クター・クロアカエ３４０、セラチア・マルセッセンス
８２５と命名し、平成９年３月２６日に通産省工業技術
院生命工学工業技術研究所に寄託した。その寄託番号は
それぞれ、ＦＥＲＭ Ｐ−１６１５８、ＦＥＲＭ Ｐ−
１６１５７、ＦＥＲＭ Ｐ−１６１５９である。
【００１２】本発明における微生物を培養する際に用い
られる栄養培地は、炭素源として、１，５−ＡＧ、グリ
セロール、コハク酸、グルコース、シュークロース、マ
ルトース、ラクトース等が使用できるので、高価な１，
５−ＡＧは必ずしも使用しなくてもよい。窒素源はペプ
トンに限定されるのではなく、その他、硫酸アンモニウ
ム、塩化アンモニウム等の無機窒素、肉エキス、酵母エ
キス、カザミノ酸、コーンスチープリカー等の有機窒素
が使用できる。さらに、無機塩類としては、カリウム、
ナトリウム、亜鉛、鉄、マグネシウム、マンガン等の各
塩類、必要に応じて微量金属塩、ビタミン類等を使用し
てもよい。
られる栄養培地は、炭素源として、１，５−ＡＧ、グリ
セロール、コハク酸、グルコース、シュークロース、マ
ルトース、ラクトース等が使用できるので、高価な１，
５−ＡＧは必ずしも使用しなくてもよい。窒素源はペプ
トンに限定されるのではなく、その他、硫酸アンモニウ
ム、塩化アンモニウム等の無機窒素、肉エキス、酵母エ
キス、カザミノ酸、コーンスチープリカー等の有機窒素
が使用できる。さらに、無機塩類としては、カリウム、
ナトリウム、亜鉛、鉄、マグネシウム、マンガン等の各
塩類、必要に応じて微量金属塩、ビタミン類等を使用し
てもよい。
【００１３】本発明では、微生物を培養する培地にペプ
トンを１〜１０重量％、好ましくは２〜８重量％、さら
に好ましくは４〜６重量％含有させることにより、上記
細菌株を効率よく、大量増殖することができる。培地中
のペプトンの量が１重量％未満では、細菌株が大量増殖
しないことがあり、また、１０重量％を越えるとペプト
ンが十分に培地中に溶解しないことがある。
トンを１〜１０重量％、好ましくは２〜８重量％、さら
に好ましくは４〜６重量％含有させることにより、上記
細菌株を効率よく、大量増殖することができる。培地中
のペプトンの量が１重量％未満では、細菌株が大量増殖
しないことがあり、また、１０重量％を越えるとペプト
ンが十分に培地中に溶解しないことがある。
【００１４】したがって、本発明の細菌株から１，５−
ＡＧＤＨを得る際、培地中に１，５−ＡＧを含有させ
ず、かつ、ペプトンを１〜１０重量％含有させて培養す
ることにより、１，５−ＡＧに特異的に作用する１，５
−ＡＧＤＨを、安価で効率よく得ることができる。
ＡＧＤＨを得る際、培地中に１，５−ＡＧを含有させ
ず、かつ、ペプトンを１〜１０重量％含有させて培養す
ることにより、１，５−ＡＧに特異的に作用する１，５
−ＡＧＤＨを、安価で効率よく得ることができる。
【００１５】培養は通常、微好気的な条件下で行う。培
養温度は２０〜４０℃、好ましくは２５〜３７℃、最適
には３０℃で行う。このような条件下で１０〜８０時
間、好ましくは２０〜７０時間培養することにより、菌
体内に１，５−ＡＧＤＨが生成、蓄積される。本発明で
は、１，５−ＡＧＤＨが菌体内に蓄積されるので、菌体
の膜画分から抽出するよりも、容易に、効率よく、１，
５−ＡＧＤＨを抽出することができる。
養温度は２０〜４０℃、好ましくは２５〜３７℃、最適
には３０℃で行う。このような条件下で１０〜８０時
間、好ましくは２０〜７０時間培養することにより、菌
体内に１，５−ＡＧＤＨが生成、蓄積される。本発明で
は、１，５−ＡＧＤＨが菌体内に蓄積されるので、菌体
の膜画分から抽出するよりも、容易に、効率よく、１，
５−ＡＧＤＨを抽出することができる。
【００１６】本発明の細菌株から１，５−ＡＧＤＨを得
るためには、まず、例えば、上記のごとく微生物を培養
し、培養終了後、遠心分離や濾過等の操作で培養液から
菌体を回収する。次に、菌体から粗酵素液を抽出し、精
製すればよい。具体的には、酵素の抽出法は、自己消
化、超音波破砕、フレンチプレス、界面活性剤処理、リ
ゾチーム処理等いずれの方法を用いてもよく、こうした
処理後、遠心分離により細胞片を除去し、粗酵素液が得
られる。粗酵素液は、イオン交換クロマトグラフィー、
アフィニティークロマトグラフィー、疎水クロマトグラ
フィー、ゲル濾過クロマトグラフィー等のクロマトグラ
フィーを組み合わせ、処理することにより、本発明の
１，５−ＡＧＤＨを精製することができる。
るためには、まず、例えば、上記のごとく微生物を培養
し、培養終了後、遠心分離や濾過等の操作で培養液から
菌体を回収する。次に、菌体から粗酵素液を抽出し、精
製すればよい。具体的には、酵素の抽出法は、自己消
化、超音波破砕、フレンチプレス、界面活性剤処理、リ
ゾチーム処理等いずれの方法を用いてもよく、こうした
処理後、遠心分離により細胞片を除去し、粗酵素液が得
られる。粗酵素液は、イオン交換クロマトグラフィー、
アフィニティークロマトグラフィー、疎水クロマトグラ
フィー、ゲル濾過クロマトグラフィー等のクロマトグラ
フィーを組み合わせ、処理することにより、本発明の
１，５−ＡＧＤＨを精製することができる。
【００１７】イオン交換樹脂としては、Ｑ−セファロー
スＦＦ（ファルマシア社製）、ＤＥＡＥ−セファロース
（ファルマシア社製）等が挙げられる。アフィニティー
クロマト用樹脂としては、ブルーセファロースＣＬ−６
Ｂ、レッドセファロースＣＬ−６Ｂ（ファルマシア社
製）等やプロシオンブルーＨ−ＥＲＤ（ＩＣＩ社製）ま
たはチバクロンイエローＨＥ−３Ｇ（チバガイギー社
製）等のトリアジン色素から作製した樹脂が用いられ
る。疎水クロマト用樹脂としては、オクチル−セファロ
ースＣＬ−４Ｂ（ファルマシア社製）等が挙げられる。
ゲル濾過用担体または樹脂としては、セファデックスＧ
−１００等が挙げられる。
スＦＦ（ファルマシア社製）、ＤＥＡＥ−セファロース
（ファルマシア社製）等が挙げられる。アフィニティー
クロマト用樹脂としては、ブルーセファロースＣＬ−６
Ｂ、レッドセファロースＣＬ−６Ｂ（ファルマシア社
製）等やプロシオンブルーＨ−ＥＲＤ（ＩＣＩ社製）ま
たはチバクロンイエローＨＥ−３Ｇ（チバガイギー社
製）等のトリアジン色素から作製した樹脂が用いられ
る。疎水クロマト用樹脂としては、オクチル−セファロ
ースＣＬ−４Ｂ（ファルマシア社製）等が挙げられる。
ゲル濾過用担体または樹脂としては、セファデックスＧ
−１００等が挙げられる。
【００１８】また、これらのカラムクロマトグラフィー
に加え、硫酸ストレプトマイシンや硫酸プロタミン処理
による除核酸、硫酸アンモニウム処理によるタンパク質
の塩析を行ってもよい。
に加え、硫酸ストレプトマイシンや硫酸プロタミン処理
による除核酸、硫酸アンモニウム処理によるタンパク質
の塩析を行ってもよい。
【００１９】このようにして得られた１，５−ＡＧＤＨ
の理化学的性質を以下に示す。 （１）作用：電子受容体の存在下、１，５−ＡＧを酸化
する。 本発明で用いられる電子受容体としては、１，５−ＡＧ
を脱水素による酸化反応に関与するものであれば特に制
限はなく、例えば、酸素、フェナンジンメトサルフェー
ト、ジクロルフェノールインドフェノール、フェリシア
ン化カリウム、フェリシアン化ナトリウム等のフェリシ
アン化化合物、チトクロムＣ、ＮＡＤ+、ＮＡＤＰ+ 、
ＦＭＮ等の補酵素が挙げられる。電子受容体としてＮＡ
Ｄ+ またはＮＡＤＰ+ を用いた場合には、生成したＮＡ
ＤＨまたはＮＡＤＰＨを基質としてニトロブルーテトラ
ゾリウム等のテトラゾリウム塩や２，６−ジクロロフェ
ノールインドフェノール等を還元発色させ、可視部で測
定することもできる。 （２）分子量：約６万５千〜７万（ゲルろ過クロマトグ
ラフィー法） （３）基質特異性：１，５−ＡＧに特異的に作用する。
Ｄ−グルコース、Ｄ−マンノース、Ｄ−ガラクトース、
Ｄ−アラビノース、Ｄ−キシロース、Ｄ−フルクトー
ス、Ｄ−ソルビトース、キシリトール、ミオイノシトー
ル、マルトース、ラクトースに全く作用しない。 （４）至適ｐＨ：８．５（温度３０℃） （５）安定ｐＨ：６．０〜７．５ （６）作用適温の範囲：２０〜４０℃（リン酸緩衝液ｐ
Ｈ６．０）
の理化学的性質を以下に示す。 （１）作用：電子受容体の存在下、１，５−ＡＧを酸化
する。 本発明で用いられる電子受容体としては、１，５−ＡＧ
を脱水素による酸化反応に関与するものであれば特に制
限はなく、例えば、酸素、フェナンジンメトサルフェー
ト、ジクロルフェノールインドフェノール、フェリシア
ン化カリウム、フェリシアン化ナトリウム等のフェリシ
アン化化合物、チトクロムＣ、ＮＡＤ+、ＮＡＤＰ+ 、
ＦＭＮ等の補酵素が挙げられる。電子受容体としてＮＡ
Ｄ+ またはＮＡＤＰ+ を用いた場合には、生成したＮＡ
ＤＨまたはＮＡＤＰＨを基質としてニトロブルーテトラ
ゾリウム等のテトラゾリウム塩や２，６−ジクロロフェ
ノールインドフェノール等を還元発色させ、可視部で測
定することもできる。 （２）分子量：約６万５千〜７万（ゲルろ過クロマトグ
ラフィー法） （３）基質特異性：１，５−ＡＧに特異的に作用する。
Ｄ−グルコース、Ｄ−マンノース、Ｄ−ガラクトース、
Ｄ−アラビノース、Ｄ−キシロース、Ｄ−フルクトー
ス、Ｄ−ソルビトース、キシリトール、ミオイノシトー
ル、マルトース、ラクトースに全く作用しない。 （４）至適ｐＨ：８．５（温度３０℃） （５）安定ｐＨ：６．０〜７．５ （６）作用適温の範囲：２０〜４０℃（リン酸緩衝液ｐ
Ｈ６．０）
【００２０】なお、活性の測定は、４００mMの１，５−
ＡＧ、１０ｍＭのＮＡＤ+ 、５０μＭのニトロテトラゾ
リウムブルー及び１０Ｕ／ｍｌのジアホラーゼ（Bacill
us stearothermophilus 由来、生化学工業社製）を含む
０．２Ｍのトリス塩酸緩衝液（ｐＨ８．５）に酵素溶液
を加え、緩やかに混和した後、分光光度計で５５０ｎｍ
における吸光度変化を測定した。測定は、３０℃で行っ
た。１分間に１マイクロモルのフォルマザンを生成する
酵素量を１単位（Ｕ）とした。
ＡＧ、１０ｍＭのＮＡＤ+ 、５０μＭのニトロテトラゾ
リウムブルー及び１０Ｕ／ｍｌのジアホラーゼ（Bacill
us stearothermophilus 由来、生化学工業社製）を含む
０．２Ｍのトリス塩酸緩衝液（ｐＨ８．５）に酵素溶液
を加え、緩やかに混和した後、分光光度計で５５０ｎｍ
における吸光度変化を測定した。測定は、３０℃で行っ
た。１分間に１マイクロモルのフォルマザンを生成する
酵素量を１単位（Ｕ）とした。
【００２１】本発明の１，５−ＡＧＤＨは、１，５−Ａ
Ｇに特異的に作用し、血液等の体液中に存在する他の糖
類、例えば、Ｄ−グルコース、Ｄ−マンノース、Ｄ−ガ
ラクトース、Ｄ−アラビノース、Ｄ−キシロース、Ｄ−
フルクトース、Ｄ−ソルビトース、キシリトール、ミオ
イノシトール、マルトース、ラクトース等には全く作用
しないので、体液を試料とした１，５−ＡＧの測定にお
いて、測定誤差が生じにくい。このため、体液を試料と
した１，５−ＡＧの測定用試薬に好適に利用できる。
Ｇに特異的に作用し、血液等の体液中に存在する他の糖
類、例えば、Ｄ−グルコース、Ｄ−マンノース、Ｄ−ガ
ラクトース、Ｄ−アラビノース、Ｄ−キシロース、Ｄ−
フルクトース、Ｄ−ソルビトース、キシリトール、ミオ
イノシトール、マルトース、ラクトース等には全く作用
しないので、体液を試料とした１，５−ＡＧの測定にお
いて、測定誤差が生じにくい。このため、体液を試料と
した１，５−ＡＧの測定用試薬に好適に利用できる。
【００２２】
【実施例】次に、本発明を実施例によって具体的に説明
する。なお、実施例中の％はいずれも重量％を示す。
する。なお、実施例中の％はいずれも重量％を示す。
【００２３】実施例１ グリセロール０．５％、ペプトン５．０％、酵母エキス
０．０５％、リン酸水素二カリウム０．１％、硫酸マグ
ネシウム・七水和物０．０２５％、ｐＨ７．０よりなる
培地１８リットルを３０リットル容のジャーファーメン
ターに仕込み、１２１℃で１５分間滅菌した後、ラフネ
ラ・アクアティリス４７４（ＦＥＲＭＰ−１６１５８）
を接種した。３０℃で６０時間、１００ｒｐｍで撹拌
し、通気しない条件下培養し、遠心分離により約１８０
ｇの湿菌体を得た。得られた菌体は凍結で保存した。次
に、凍結菌体約１００ｇをＥＤＴＡ及び２−メルカプト
エタノールを２ｍＭずつ含む２５ｍＭリン酸緩衝液（ｐ
Ｈ８．０）５００ｍｌに懸濁し、超音波処理により、菌
体を破砕後、遠心分離により細胞片を除去し、１，５−
ＡＧＤＨを含む粗酵素液を得、菌体中の１，５−ＡＧＤ
Ｈ含量を測定したところ、４３Ｕ／ｇ湿菌体の値を示し
た。この粗酵素液を２５ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．
０）で平衡化したＤＥＡＥ−セファロース−ＦＦカラム
（ファルマシア社製）に通じ、ＫＣｌの濃度勾配により
溶出せしめると、ＫＣｌ濃度０．１５〜０．２Ｍで１，
５−ＡＧＤＨ活性画分を得た。続いて、得られた画分を
２５ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）で平衡化したブル
ーセファロースＣＬ−６Ｂカラム（ファルマシア社製）
に通じ、ＫＣｌの濃度勾配により溶出せしめると、ＫＣ
ｌ濃度０．４〜０．５Ｍに１，５−ＡＧＤＨ活性画分を
得た。このようにして得られた１，５−ＡＧＤＨの収率
は約２０％で、酵素蛋白質１ｍｇ当たり約４０単位の比
活性を示し、その精製度は粗酵素液を１とすると約３０
０倍であった。得られた酵素は、上記の理化学的性質を
示した。
０．０５％、リン酸水素二カリウム０．１％、硫酸マグ
ネシウム・七水和物０．０２５％、ｐＨ７．０よりなる
培地１８リットルを３０リットル容のジャーファーメン
ターに仕込み、１２１℃で１５分間滅菌した後、ラフネ
ラ・アクアティリス４７４（ＦＥＲＭＰ−１６１５８）
を接種した。３０℃で６０時間、１００ｒｐｍで撹拌
し、通気しない条件下培養し、遠心分離により約１８０
ｇの湿菌体を得た。得られた菌体は凍結で保存した。次
に、凍結菌体約１００ｇをＥＤＴＡ及び２−メルカプト
エタノールを２ｍＭずつ含む２５ｍＭリン酸緩衝液（ｐ
Ｈ８．０）５００ｍｌに懸濁し、超音波処理により、菌
体を破砕後、遠心分離により細胞片を除去し、１，５−
ＡＧＤＨを含む粗酵素液を得、菌体中の１，５−ＡＧＤ
Ｈ含量を測定したところ、４３Ｕ／ｇ湿菌体の値を示し
た。この粗酵素液を２５ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．
０）で平衡化したＤＥＡＥ−セファロース−ＦＦカラム
（ファルマシア社製）に通じ、ＫＣｌの濃度勾配により
溶出せしめると、ＫＣｌ濃度０．１５〜０．２Ｍで１，
５−ＡＧＤＨ活性画分を得た。続いて、得られた画分を
２５ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）で平衡化したブル
ーセファロースＣＬ−６Ｂカラム（ファルマシア社製）
に通じ、ＫＣｌの濃度勾配により溶出せしめると、ＫＣ
ｌ濃度０．４〜０．５Ｍに１，５−ＡＧＤＨ活性画分を
得た。このようにして得られた１，５−ＡＧＤＨの収率
は約２０％で、酵素蛋白質１ｍｇ当たり約４０単位の比
活性を示し、その精製度は粗酵素液を１とすると約３０
０倍であった。得られた酵素は、上記の理化学的性質を
示した。
【００２４】実施例２ 実施例１と同様の培地、条件により、エンテロバクター
・クロアカエ３４０（ＦＥＲＭ Ｐ−１６１５７）を培
養し、約３９０ｇの湿菌体を得た。得られた菌体は、凍
結で保存した。次に、これらの菌体から実施例１と同様
の方法で粗抽出液を得、菌体中の１，５−ＡＧＤＨ含量
を測定したところ、２８Ｕ／ｇ湿菌体の値を示した。さ
らに、実施例と同様の方法で粗抽出液から精製酵素標品
を得た。このようにして得られた１，５−ＡＧＤＨの収
率は約３０％で、酵素蛋白質１ｍｇ当たり約２０単位の
比活性を示し、その精製度は粗酵素液を１とすると約２
００倍であった。
・クロアカエ３４０（ＦＥＲＭ Ｐ−１６１５７）を培
養し、約３９０ｇの湿菌体を得た。得られた菌体は、凍
結で保存した。次に、これらの菌体から実施例１と同様
の方法で粗抽出液を得、菌体中の１，５−ＡＧＤＨ含量
を測定したところ、２８Ｕ／ｇ湿菌体の値を示した。さ
らに、実施例と同様の方法で粗抽出液から精製酵素標品
を得た。このようにして得られた１，５−ＡＧＤＨの収
率は約３０％で、酵素蛋白質１ｍｇ当たり約２０単位の
比活性を示し、その精製度は粗酵素液を１とすると約２
００倍であった。
【００２５】実施例３ 実施例１と同様の培地、条件により、セラチア・マルセ
ッセンス８２５（ＦＥＲＭ Ｐ−１６１５９）を培養
し、約４１０ｇの湿菌体を得た。得られた菌体は、凍結
で保存した。次に、これらの菌体から実施例１と同様の
方法で粗抽出液を得、菌体中の１，５−ＡＧＤＨ含量を
測定したところ、５６Ｕ／ｇ湿菌体の値を示した。さら
に、実施例と同様の方法で粗抽出液から精製酵素標品を
得た。このようにして得られた１，５−ＡＧＤＨの収率
は約２５％で、酵素蛋白質１ｍｇ当たり約４５単位の比
活性を示し、その精製度は粗酵素液を１とすると約２５
０倍であった。得られた酵素は、上記の理化学的性質を
示した。
ッセンス８２５（ＦＥＲＭ Ｐ−１６１５９）を培養
し、約４１０ｇの湿菌体を得た。得られた菌体は、凍結
で保存した。次に、これらの菌体から実施例１と同様の
方法で粗抽出液を得、菌体中の１，５−ＡＧＤＨ含量を
測定したところ、５６Ｕ／ｇ湿菌体の値を示した。さら
に、実施例と同様の方法で粗抽出液から精製酵素標品を
得た。このようにして得られた１，５−ＡＧＤＨの収率
は約２５％で、酵素蛋白質１ｍｇ当たり約４５単位の比
活性を示し、その精製度は粗酵素液を１とすると約２５
０倍であった。得られた酵素は、上記の理化学的性質を
示した。
【００２６】実施例４ 本発明の増殖方法における１，５−ＡＧの影響について
試験した。ペプトン含量を０．１％、グリセロール含量
を０．１％とした以外は実施例１と同一の組成からなる
培地各々４ｍｌに、ラフネラ・アクアティリス４７４
（ＦＥＲＭ Ｐ−１６１５８）及びエンテロバクター・
クロアカエ３４０（ＦＥＲＭＰ−１６１５７）及びセラ
チア・マルセッセンス８２５（ＦＥＲＭ Ｐ−１６１５
９）を各々接種し、３０℃で２日間培養した。
試験した。ペプトン含量を０．１％、グリセロール含量
を０．１％とした以外は実施例１と同一の組成からなる
培地各々４ｍｌに、ラフネラ・アクアティリス４７４
（ＦＥＲＭ Ｐ−１６１５８）及びエンテロバクター・
クロアカエ３４０（ＦＥＲＭＰ−１６１５７）及びセラ
チア・マルセッセンス８２５（ＦＥＲＭ Ｐ−１６１５
９）を各々接種し、３０℃で２日間培養した。
【００２７】一方、実施例１で用いた培地組成におい
て、ペプトン含量を０．１％とし、さらに、グリセロー
ルの代わりに１，５−ＡＧ含量を０．１％とした培地
１、及び実施例１で用いた培地組成において、ペプトン
含量を０．１％、グリセロール含量を０．１％とした培
地２を各々４ｍｌ調製し、これらの培地に上記の条件で
培養したラフネラ・アクアティリス４７４、エンテロバ
クター・クロアカエ３４０、セラチア・マルセッセンス
８２５の培養液を０．５ｍｌずつ接種し、３０℃で２日
間、通気しない条件下で培養した後、遠心分離により湿
菌体を得た。また、回収した菌体から、実施例１と同様
の方法で粗抽出液を調製し、１，５−ＡＧＤＨ活性を測
定した。結果を表１に示す。
て、ペプトン含量を０．１％とし、さらに、グリセロー
ルの代わりに１，５−ＡＧ含量を０．１％とした培地
１、及び実施例１で用いた培地組成において、ペプトン
含量を０．１％、グリセロール含量を０．１％とした培
地２を各々４ｍｌ調製し、これらの培地に上記の条件で
培養したラフネラ・アクアティリス４７４、エンテロバ
クター・クロアカエ３４０、セラチア・マルセッセンス
８２５の培養液を０．５ｍｌずつ接種し、３０℃で２日
間、通気しない条件下で培養した後、遠心分離により湿
菌体を得た。また、回収した菌体から、実施例１と同様
の方法で粗抽出液を調製し、１，５−ＡＧＤＨ活性を測
定した。結果を表１に示す。
【００２８】
【表１】
【００２９】炭素源が１，５−ＡＧ、グリセロールのい
ずれの場合でも、培養菌体収量及びその湿菌体１ｇ当た
りの１，５−ＡＧＤＨ活性は同程度であった。このこと
から、１，５−ＡＧＤＨを得る際は、１，５−ＡＧに代
えてグリセロールを炭素源として使用できることが確認
された。
ずれの場合でも、培養菌体収量及びその湿菌体１ｇ当た
りの１，５−ＡＧＤＨ活性は同程度であった。このこと
から、１，５−ＡＧＤＨを得る際は、１，５−ＡＧに代
えてグリセロールを炭素源として使用できることが確認
された。
【００３０】実施例５ 本発明の大量増殖方法におけるペプトンの効果について
試験した。ペプトン含量を０．１％とした以外は実施例
１と同一の組成からなる培地各々４ｍｌに、ラフネラ・
アクアティリス４７４（ＦＥＲＭ Ｐ−１６１５８）及
びエンテロバクター・クロアカエ３４０（ＦＥＲＭ Ｐ
−１６１５７）及びセラチア・マルセッセンス８２５
（ＦＥＲＭ Ｐ−１６１５９）を各々接種し、３０℃で
２日間培養した。
試験した。ペプトン含量を０．１％とした以外は実施例
１と同一の組成からなる培地各々４ｍｌに、ラフネラ・
アクアティリス４７４（ＦＥＲＭ Ｐ−１６１５８）及
びエンテロバクター・クロアカエ３４０（ＦＥＲＭ Ｐ
−１６１５７）及びセラチア・マルセッセンス８２５
（ＦＥＲＭ Ｐ−１６１５９）を各々接種し、３０℃で
２日間培養した。
【００３１】一方、ペプトン含量を０．１％、１％また
は５％とした以外は実施例１と同一の組成からなる培地
３〜５を各々４ｍｌ調製し、これらの培地に上記の条件
で培養したラフネラ・アクアティリス４７４、エンテロ
バクター・クロアカエ３４０、セラチア・マルセッセン
ス８２５の培養液０．５ｍｌずつを接種し、３０℃で２
日間、通気しない条件下で培養した後、遠心分離により
湿菌体を得た。また、回収した菌体から、実施例１と同
様の方法で粗抽出液を調製し、１，５−ＡＧＤＨ活性を
測定した。結果を表２に示す。
は５％とした以外は実施例１と同一の組成からなる培地
３〜５を各々４ｍｌ調製し、これらの培地に上記の条件
で培養したラフネラ・アクアティリス４７４、エンテロ
バクター・クロアカエ３４０、セラチア・マルセッセン
ス８２５の培養液０．５ｍｌずつを接種し、３０℃で２
日間、通気しない条件下で培養した後、遠心分離により
湿菌体を得た。また、回収した菌体から、実施例１と同
様の方法で粗抽出液を調製し、１，５−ＡＧＤＨ活性を
測定した。結果を表２に示す。
【００３２】
【表２】
【００３３】表２から、いずれの培養菌体もその湿菌体
１ｇ当たりの１，５−ＡＧＤＨ活性は同程度であった
が、培地中のペプトン濃度の上昇に伴う菌体収量の増加
が認められた。このことから、１，５−ＡＧＤＨを大量
に得る場合、すなわち、細菌株を大量増殖させる場合に
は、ラフネラ・アクアティリス４７４、エンテロバクタ
ー・クロアカエ３４０、セラチア・マルセッセンス８２
５の培養培地中のペプトンを５％程度含量させるとよい
ことが確認された。
１ｇ当たりの１，５−ＡＧＤＨ活性は同程度であった
が、培地中のペプトン濃度の上昇に伴う菌体収量の増加
が認められた。このことから、１，５−ＡＧＤＨを大量
に得る場合、すなわち、細菌株を大量増殖させる場合に
は、ラフネラ・アクアティリス４７４、エンテロバクタ
ー・クロアカエ３４０、セラチア・マルセッセンス８２
５の培養培地中のペプトンを５％程度含量させるとよい
ことが確認された。
【００３４】
【発明の効果】本発明の新規な細菌株は、１，５−ＡＧ
に特異的に作用する１，５−ＡＧＤＨを産生することが
できる。得られた１，５−ＡＧＤＨは、１，５−ＡＧの
測定用試薬に利用可能である。また、本発明の大量増殖
方法は、効率よく本発明の新規な細菌株を大量増殖する
ことができ、さらに、１，５−ＡＧを使用せずに安価に
細菌株を培養することができる。さらにまた、１，５−
ＡＧＤＨを菌体内から効率よく得ることができる。その
結果、１，５−ＡＧの測定用試薬に利用可能な１，５−
ＡＧＤＨを、安価に、効率よく生産することができる。
に特異的に作用する１，５−ＡＧＤＨを産生することが
できる。得られた１，５−ＡＧＤＨは、１，５−ＡＧの
測定用試薬に利用可能である。また、本発明の大量増殖
方法は、効率よく本発明の新規な細菌株を大量増殖する
ことができ、さらに、１，５−ＡＧを使用せずに安価に
細菌株を培養することができる。さらにまた、１，５−
ＡＧＤＨを菌体内から効率よく得ることができる。その
結果、１，５−ＡＧの測定用試薬に利用可能な１，５−
ＡＧＤＨを、安価に、効率よく生産することができる。
Claims (6)
- 【請求項１】 １，５−アンヒドログルシトールに特異
的に作用する１，５−アンヒドログルシトール脱水素酵
素を産生するラフネラ・アクアティリス（Rahnella aqu
atitlis ）４７４（ＦＥＲＭ Ｐ−１６１５８）。 - 【請求項２】 請求項１記載のラフネラ・アクアティリ
ス４７４を、ペプトンを１〜１０重量％含有する培地で
培養することを特徴とする上記細菌株の大量増殖方法。 - 【請求項３】 １，５−アンヒドログルシトールに特異
的に作用する１，５−アンヒドログルシトール脱水素酵
素を産生するエンテロバクター・クロアカエ（Enteroba
cter cloacae）３４０（ＦＥＲＭ Ｐ−１６１５７）。 - 【請求項４】 請求項４記載のエンテロバクター・クロ
アカエ３４０を、ペプトンを１〜１０重量％含有する培
地で培養することを特徴とする上記細菌株の大量増殖方
法。 - 【請求項５】 １，５−アンヒドログルシトールに特異
的に作用する１，５−アンヒドログルシトール脱水素酵
素を産生するセラチア・マルセッセンス（Serratia mar
cescens ）８２５（ＦＥＲＭ Ｐ−１６１５９）。 - 【請求項６】 請求項５記載のセラチア・マルセッセン
ス８２５を、ペプトンを１〜１０重量％含有する培地で
培養することを特徴とする上記細菌株の大量増殖方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17571197A JPH1118760A (ja) | 1997-07-01 | 1997-07-01 | １，５−アンヒドログルシトール脱水素酵素を産生する細菌株及びその大量増殖方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17571197A JPH1118760A (ja) | 1997-07-01 | 1997-07-01 | １，５−アンヒドログルシトール脱水素酵素を産生する細菌株及びその大量増殖方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH1118760A true JPH1118760A (ja) | 1999-01-26 |
Family
ID=16000910
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP17571197A Pending JPH1118760A (ja) | 1997-07-01 | 1997-07-01 | １，５−アンヒドログルシトール脱水素酵素を産生する細菌株及びその大量増殖方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH1118760A (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2008072702A1 (ja) | 2006-12-14 | 2008-06-19 | Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha | 全血中の１，５－アンヒドログルシトールの測定方法、それに用いるセンサーチップ及び測定キット |
| WO2010024440A1 (ja) * | 2008-08-29 | 2010-03-04 | タムネットワーク株式会社 | 活性酸素耐性菌及びその利用方法 |
| US8753832B2 (en) | 2005-06-13 | 2014-06-17 | Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha | Method of assaying 1,5 anhydroglucitol by using whole blood and measurement kit |
| CN109576194A (zh) * | 2018-09-26 | 2019-04-05 | 湖北大学 | 一株多功能水拉恩氏菌mem40及其应用 |
| CN112961807A (zh) * | 2021-03-30 | 2021-06-15 | 中国科学院成都生物研究所 | 一种微生物组合物及在促进青稞种子发芽和生长上的应用 |
-
1997
- 1997-07-01 JP JP17571197A patent/JPH1118760A/ja active Pending
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8753832B2 (en) | 2005-06-13 | 2014-06-17 | Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha | Method of assaying 1,5 anhydroglucitol by using whole blood and measurement kit |
| WO2008072702A1 (ja) | 2006-12-14 | 2008-06-19 | Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha | 全血中の１，５－アンヒドログルシトールの測定方法、それに用いるセンサーチップ及び測定キット |
| US8465940B2 (en) | 2006-12-14 | 2013-06-18 | Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha | Method for electrochemically measuring 1,5-anhydroglucitol in whole blood |
| WO2010024440A1 (ja) * | 2008-08-29 | 2010-03-04 | タムネットワーク株式会社 | 活性酸素耐性菌及びその利用方法 |
| CN109576194A (zh) * | 2018-09-26 | 2019-04-05 | 湖北大学 | 一株多功能水拉恩氏菌mem40及其应用 |
| CN109576194B (zh) * | 2018-09-26 | 2021-11-05 | 湖北大学 | 一株多功能水拉恩氏菌mem40及其应用 |
| CN112961807A (zh) * | 2021-03-30 | 2021-06-15 | 中国科学院成都生物研究所 | 一种微生物组合物及在促进青稞种子发芽和生长上的应用 |
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