JPH11171771A - 脂溶性抗腫瘍薬のリポソーム化製剤 - Google Patents
脂溶性抗腫瘍薬のリポソーム化製剤Info
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- JPH11171771A JPH11171771A JP9340999A JP34099997A JPH11171771A JP H11171771 A JPH11171771 A JP H11171771A JP 9340999 A JP9340999 A JP 9340999A JP 34099997 A JP34099997 A JP 34099997A JP H11171771 A JPH11171771 A JP H11171771A
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- liposome
- alkenoyl
- alkanoyl
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Abstract
(57)【要約】
【課題】本発明は、抗腫瘍薬である１−（２−Ｃ−シア
ノ−２−デオキシ−β−Ｄ−アラビノ−ペントフラノシ
ル）−Ｎ4−パルミトイルシトシンを含有するリポソー
ム化製剤を提供する。 【解決手段】リポソームを構成する脂質として、ジ（Ｃ
10-18アルカノイルまたはアルケノイル）ホスファチジ
ルコリン、コレステロール、ジ（Ｃ10-18アルカノイル
またはアルケノイル）ホスファチジルグリセロール及び
／またはポリエチレングリコール部分の平均分子量が１
０００乃至５０００のＮ−モノメトキシポリエチレング
リコールサクシニル−ジ（Ｃ10-18アルカノイルまたは
アルケノイル）ホスファチジルエタノールアミンを含有
するリポソーム化製剤。
ノ−２−デオキシ−β−Ｄ−アラビノ−ペントフラノシ
ル）−Ｎ4−パルミトイルシトシンを含有するリポソー
ム化製剤を提供する。 【解決手段】リポソームを構成する脂質として、ジ（Ｃ
10-18アルカノイルまたはアルケノイル）ホスファチジ
ルコリン、コレステロール、ジ（Ｃ10-18アルカノイル
またはアルケノイル）ホスファチジルグリセロール及び
／またはポリエチレングリコール部分の平均分子量が１
０００乃至５０００のＮ−モノメトキシポリエチレング
リコールサクシニル−ジ（Ｃ10-18アルカノイルまたは
アルケノイル）ホスファチジルエタノールアミンを含有
するリポソーム化製剤。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、１−（２−Ｃ−シ
アノ−２−デオキシ−β−Ｄ−アラビノ−ペントフラノ
シル）−Ｎ4−パルミトイルシトシンを効率的に腫瘍組
織に蓄積させることを可能とするリポソーム化製剤に関
する。
アノ−２−デオキシ−β−Ｄ−アラビノ−ペントフラノ
シル）−Ｎ4−パルミトイルシトシンを効率的に腫瘍組
織に蓄積させることを可能とするリポソーム化製剤に関
する。
【０００２】
【従来の技術】１−（２−Ｃ−シアノ−２−デオキシ−
β−Ｄ−アラビノ−ペントフラノシル）シトシン（1-(2
-C-cyano-2-deoxy-β-D-arabino-pentofuranosyl)cytos
ine。以下、ＣＮＤＡＣとする。）およびその幾つかの
誘導体は優れた抗腫瘍活性を有する（特開平４−２３５
１８２号および特開平５−１９４４９７号参照）。１−
（２−Ｃ−シアノ−２−デオキシ−β−Ｄ−アラビノ−
ペントフラノシル）−Ｎ4−パルミトイルシトシン（1-
(2-C-cyano-2-deoxy-β-D-arabino-pentofuranosyl)-N4
-palmitoylcytosine。以下、化合物Ａとする。）はＣＮ
ＤＡＣのＮ4位がパルミトイル化された脂溶性の誘導体
である（特開平５−１９４４９７号参照）。化合物Ａは
経口投与により抗腫瘍活性を示すものの、腫瘍組織への
薬物の蓄積効率を更に高めるべく、剤形および投与経路
の改良が求められていた。また、化合物Ａは水溶性が極
めて低いため、静脈内投与を可能とするためには、従
来、毒性が懸念される界面活性剤や有機溶媒等の添加剤
を大量に使用する必要があり、改善が求められていた。
β−Ｄ−アラビノ−ペントフラノシル）シトシン（1-(2
-C-cyano-2-deoxy-β-D-arabino-pentofuranosyl)cytos
ine。以下、ＣＮＤＡＣとする。）およびその幾つかの
誘導体は優れた抗腫瘍活性を有する（特開平４−２３５
１８２号および特開平５−１９４４９７号参照）。１−
（２−Ｃ−シアノ−２−デオキシ−β−Ｄ−アラビノ−
ペントフラノシル）−Ｎ4−パルミトイルシトシン（1-
(2-C-cyano-2-deoxy-β-D-arabino-pentofuranosyl)-N4
-palmitoylcytosine。以下、化合物Ａとする。）はＣＮ
ＤＡＣのＮ4位がパルミトイル化された脂溶性の誘導体
である（特開平５−１９４４９７号参照）。化合物Ａは
経口投与により抗腫瘍活性を示すものの、腫瘍組織への
薬物の蓄積効率を更に高めるべく、剤形および投与経路
の改良が求められていた。また、化合物Ａは水溶性が極
めて低いため、静脈内投与を可能とするためには、従
来、毒性が懸念される界面活性剤や有機溶媒等の添加剤
を大量に使用する必要があり、改善が求められていた。
【０００３】一般的に、腫瘍組織近傍の血管は正常組織
より物質透過性が高く、通常では血管外に漏出しない高
分子量の化合物やリポソーム等の微粒子が漏出する（Y.
Matsumuraら、Cancer Res. 46, 6387-6392（1986）／
D. D. Lasic とF. Martin（編）、「Stealth Liposome
s」、CRC Press、pp119-126（1995）参照。）。また、
リンパ組織が未発達であるため、漏出した物質は再度循
環系に移行しにくい。特にサイズの大きな物質は漏出後
拡散しにくいので、この傾向が顕著である（Y. Matsumu
raら、Cancer Res. 46, 6387-6392（1986）参照。）。
従って、水溶性の高分子や微粒子をキャリヤーとするこ
とにより脂溶性薬物の静脈内投与を可能とし、かつ、腫
瘍組織への薬物のターゲティングが可能であると考えら
れる。
より物質透過性が高く、通常では血管外に漏出しない高
分子量の化合物やリポソーム等の微粒子が漏出する（Y.
Matsumuraら、Cancer Res. 46, 6387-6392（1986）／
D. D. Lasic とF. Martin（編）、「Stealth Liposome
s」、CRC Press、pp119-126（1995）参照。）。また、
リンパ組織が未発達であるため、漏出した物質は再度循
環系に移行しにくい。特にサイズの大きな物質は漏出後
拡散しにくいので、この傾向が顕著である（Y. Matsumu
raら、Cancer Res. 46, 6387-6392（1986）参照。）。
従って、水溶性の高分子や微粒子をキャリヤーとするこ
とにより脂溶性薬物の静脈内投与を可能とし、かつ、腫
瘍組織への薬物のターゲティングが可能であると考えら
れる。
【０００４】リポソームは、生体適合性に優れ、表面物
性やサイズ等の制御が容易であり、物性の異なる種々の
化合物を包含しうる等の点から、薬物のターゲティング
に利用することができる（D.D.Lasic、「Liposomes: fr
om basic to applications」、Elsevier Science Publi
shers、pp.261-471（1993）参照）。しかしながら、実
際上リポソームを構成する単位脂質量当たりに包含され
る薬物量が少量に限られ実用的でないなどの問題点があ
り、これまで抗腫瘍剤としてはドキソルビシンのリポソ
ーム化製剤等のごく一部の成功例しかない（D. D. Lasi
c、Nature 380、561-562（1996））。特に、脂溶性の高
い薬物の場合、通常では包含可能な薬物は全脂質モル数
に対し３ｍｏｌ％程度が限界であり（Moriら、Pharm. R
es. 10、507-514（1993）参照。）、治療上必要な量が
投与できず実用化された例はない。
性やサイズ等の制御が容易であり、物性の異なる種々の
化合物を包含しうる等の点から、薬物のターゲティング
に利用することができる（D.D.Lasic、「Liposomes: fr
om basic to applications」、Elsevier Science Publi
shers、pp.261-471（1993）参照）。しかしながら、実
際上リポソームを構成する単位脂質量当たりに包含され
る薬物量が少量に限られ実用的でないなどの問題点があ
り、これまで抗腫瘍剤としてはドキソルビシンのリポソ
ーム化製剤等のごく一部の成功例しかない（D. D. Lasi
c、Nature 380、561-562（1996））。特に、脂溶性の高
い薬物の場合、通常では包含可能な薬物は全脂質モル数
に対し３ｍｏｌ％程度が限界であり（Moriら、Pharm. R
es. 10、507-514（1993）参照。）、治療上必要な量が
投与できず実用化された例はない。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】このように、化合物Ａ
を安全に静脈内投与できる製剤とし、かつ効率的に腫瘍
組織へ蓄積させることが可能な製剤が求められていた。
リポソーム化製剤とすることはこのための有効な手段と
考えられるが、化合物Ａのリポソーム化製剤について報
告例はなく、包含特性も未知であった。
を安全に静脈内投与できる製剤とし、かつ効率的に腫瘍
組織へ蓄積させることが可能な製剤が求められていた。
リポソーム化製剤とすることはこのための有効な手段と
考えられるが、化合物Ａのリポソーム化製剤について報
告例はなく、包含特性も未知であった。
【０００６】発明者等は、脂溶性の高い薬物に属する化
合物Ａのリポソーム化製剤について鋭意検討を行い、脂
溶性の高い薬物の包含量として従来報告のない高い割
合、すなわち、全脂質モル数に対し２３ｍｏｌ％の化合
物Ａが包含されたリポソーム化製剤を製造することに成
功した。これにより、毒性が強い界面活性剤および有機
溶媒を使用することなく治療上必要な量の化合物Ａを静
脈内投与することを可能とした。さらに、該リポソーム
化製剤を静脈内投与することにより、従来の懸濁製剤の
経口投与を陵駕する腫瘍中薬物濃度が得られることを見
出し、本発明を完成した。
合物Ａのリポソーム化製剤について鋭意検討を行い、脂
溶性の高い薬物の包含量として従来報告のない高い割
合、すなわち、全脂質モル数に対し２３ｍｏｌ％の化合
物Ａが包含されたリポソーム化製剤を製造することに成
功した。これにより、毒性が強い界面活性剤および有機
溶媒を使用することなく治療上必要な量の化合物Ａを静
脈内投与することを可能とした。さらに、該リポソーム
化製剤を静脈内投与することにより、従来の懸濁製剤の
経口投与を陵駕する腫瘍中薬物濃度が得られることを見
出し、本発明を完成した。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明は、（１）化合物
Ａを含有することを特徴とするリポソーム化製剤、
（２）リポソーム構成成分として水溶性高分子鎖を有す
る脂質を含有することを特徴とする（１）に記載のリポ
ソーム化製剤、（３）水溶性高分子鎖を有する脂質が、
ポリエチレングリコール部分の平均分子量が１０００乃
至５０００のＮ−モノメトキシポリエチレングリコール
サクシニル−ジ（Ｃ10-18アルカノイルまたはアルケノ
イル）ホスファチジルエタノールアミンである（２）に
記載のリポソーム化製剤、（４）リポソームを構成する
脂質が、ジ（Ｃ10-18アルカノイルまたはアルケノイ
ル）ホスファチジルコリン、コレステロール、ジ（Ｃ
10-18アルカノイルまたはアルケノイル）ホスファチジ
ルグリセロール及びポリエチレングリコール部分の平均
分子量が１０００乃至５０００のＮ−モノメトキシポリ
エチレングリコールサクシニル−ジ（Ｃ10-18アルカノ
イルまたはアルケノイル）ホスファチジルエタノールア
ミンからなる（１）に記載のリポソーム化製剤、（５）
リポソームを構成する脂質が、ジ（Ｃ10-18アルカノイ
ルまたはアルケノイル）ホスファチジルコリン（総脂質
に対して２０乃至８０モル％）、コレステロール（総脂
質に対して２０乃至６０モル％）、ジ（Ｃ10-18アルカ
ノイルまたはアルケノイル）ホスファチジルグリセロー
ル（総脂質に対して５乃至４０モル％）及びポリエチレ
ングリコール部分の平均分子量が１０００乃至５０００
のＮ−モノメトキシポリエチレングリコールサクシニル
−ジ（Ｃ10-18アルカノイルまたはアルケノイル）ホス
ファチジルエタノールアミン（総脂質に対して１乃至１
０モル％）からなる（１）に記載のリポソーム化製剤、
（６）リポソームを構成する脂質が、ジパルミトイルホ
スファチジルコリン（総脂質に対して３０モル％）、コ
レステロール（総脂質に対して４０モル％）、ジパルミ
トイルホスファチジルグリセロール（総脂質に対して２
５モル％）、ポリエチレングリコール部分の平均分子量
が２０００のＮ−モノメトキシポリエチレングリコール
サクシニル−ジステアロイルホスファチジルエタノール
アミン（総脂質に対して５モル％）からなる（１）に記
載のリポソーム化製剤、（７）リポソームを構成する脂
質が、ジ（Ｃ10-18アルカノイルまたはアルケノイル）
ホスファチジルコリン、ジ（Ｃ10-18アルカノイルまた
はアルケノイル）ホスファチジルグリセロール及びポリ
エチレングリコール部分の平均分子量が１０００乃至５
０００のＮ−モノメトキシポリエチレングリコールサク
シニル−ジ（Ｃ10-18アルカノイルまたはアルケノイ
ル）ホスファチジルエタノールアミンからなる（１）に
記載のリポソーム化製剤、（８）リポソームを構成する
脂質が、ジ（Ｃ10-18アルカノイルまたはアルケノイ
ル）ホスファチジルコリン（総脂質に対して６０乃至９
０モル％）、ジ（Ｃ10-18アルカノイルまたはアルケノ
イル）ホスファチジルグリセロール（総脂質に対して５
乃至４０モル％）及びポリエチレングリコール部分の平
均分子量が１０００乃至５０００のＮ−モノメトキシポ
リエチレングリコールサクシニル−ジ（Ｃ10-18アルカ
ノイルまたはアルケノイル）ホスファチジルエタノール
アミン（総脂質に対して１乃至１０モル％）からなる
（１）に記載のリポソーム化製剤、（９）リポソームを
構成する脂質が、ジミリストイルホスファチジルコリン
（総脂質に対して６５モル％）、ジミリストイルホスフ
ァチジルグリセロール（総脂質に対して３０モル％）、
ポリエチレングリコール部分の平均分子量が２０００の
Ｎ−モノメトキシポリエチレングリコールサクシニル−
ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（総脂
質に対して５モル％）からなる（１）に記載のリポソー
ム化製剤、（１０）リポソームの体積平均粒子径が５０
乃至４００ｎｍであることを特徴とする（１）乃至
（９）に記載のリポソーム化製剤、（１１）（１）ない
し（１０）に記載のリポソーム化製剤を介して化合物Ａ
を腫瘍組織に送達する方法、からなる。
Ａを含有することを特徴とするリポソーム化製剤、
（２）リポソーム構成成分として水溶性高分子鎖を有す
る脂質を含有することを特徴とする（１）に記載のリポ
ソーム化製剤、（３）水溶性高分子鎖を有する脂質が、
ポリエチレングリコール部分の平均分子量が１０００乃
至５０００のＮ−モノメトキシポリエチレングリコール
サクシニル−ジ（Ｃ10-18アルカノイルまたはアルケノ
イル）ホスファチジルエタノールアミンである（２）に
記載のリポソーム化製剤、（４）リポソームを構成する
脂質が、ジ（Ｃ10-18アルカノイルまたはアルケノイ
ル）ホスファチジルコリン、コレステロール、ジ（Ｃ
10-18アルカノイルまたはアルケノイル）ホスファチジ
ルグリセロール及びポリエチレングリコール部分の平均
分子量が１０００乃至５０００のＮ−モノメトキシポリ
エチレングリコールサクシニル−ジ（Ｃ10-18アルカノ
イルまたはアルケノイル）ホスファチジルエタノールア
ミンからなる（１）に記載のリポソーム化製剤、（５）
リポソームを構成する脂質が、ジ（Ｃ10-18アルカノイ
ルまたはアルケノイル）ホスファチジルコリン（総脂質
に対して２０乃至８０モル％）、コレステロール（総脂
質に対して２０乃至６０モル％）、ジ（Ｃ10-18アルカ
ノイルまたはアルケノイル）ホスファチジルグリセロー
ル（総脂質に対して５乃至４０モル％）及びポリエチレ
ングリコール部分の平均分子量が１０００乃至５０００
のＮ−モノメトキシポリエチレングリコールサクシニル
−ジ（Ｃ10-18アルカノイルまたはアルケノイル）ホス
ファチジルエタノールアミン（総脂質に対して１乃至１
０モル％）からなる（１）に記載のリポソーム化製剤、
（６）リポソームを構成する脂質が、ジパルミトイルホ
スファチジルコリン（総脂質に対して３０モル％）、コ
レステロール（総脂質に対して４０モル％）、ジパルミ
トイルホスファチジルグリセロール（総脂質に対して２
５モル％）、ポリエチレングリコール部分の平均分子量
が２０００のＮ−モノメトキシポリエチレングリコール
サクシニル−ジステアロイルホスファチジルエタノール
アミン（総脂質に対して５モル％）からなる（１）に記
載のリポソーム化製剤、（７）リポソームを構成する脂
質が、ジ（Ｃ10-18アルカノイルまたはアルケノイル）
ホスファチジルコリン、ジ（Ｃ10-18アルカノイルまた
はアルケノイル）ホスファチジルグリセロール及びポリ
エチレングリコール部分の平均分子量が１０００乃至５
０００のＮ−モノメトキシポリエチレングリコールサク
シニル−ジ（Ｃ10-18アルカノイルまたはアルケノイ
ル）ホスファチジルエタノールアミンからなる（１）に
記載のリポソーム化製剤、（８）リポソームを構成する
脂質が、ジ（Ｃ10-18アルカノイルまたはアルケノイ
ル）ホスファチジルコリン（総脂質に対して６０乃至９
０モル％）、ジ（Ｃ10-18アルカノイルまたはアルケノ
イル）ホスファチジルグリセロール（総脂質に対して５
乃至４０モル％）及びポリエチレングリコール部分の平
均分子量が１０００乃至５０００のＮ−モノメトキシポ
リエチレングリコールサクシニル−ジ（Ｃ10-18アルカ
ノイルまたはアルケノイル）ホスファチジルエタノール
アミン（総脂質に対して１乃至１０モル％）からなる
（１）に記載のリポソーム化製剤、（９）リポソームを
構成する脂質が、ジミリストイルホスファチジルコリン
（総脂質に対して６５モル％）、ジミリストイルホスフ
ァチジルグリセロール（総脂質に対して３０モル％）、
ポリエチレングリコール部分の平均分子量が２０００の
Ｎ−モノメトキシポリエチレングリコールサクシニル−
ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（総脂
質に対して５モル％）からなる（１）に記載のリポソー
ム化製剤、（１０）リポソームの体積平均粒子径が５０
乃至４００ｎｍであることを特徴とする（１）乃至
（９）に記載のリポソーム化製剤、（１１）（１）ない
し（１０）に記載のリポソーム化製剤を介して化合物Ａ
を腫瘍組織に送達する方法、からなる。
【０００８】上記の発明において、「リポソーム」と
は、当業者周知の通り（D.D.Lasic、「liposomes: from
basic to applications」、Elsevier Science Publish
ers、pp.1-171（1993）参照。）、膜状に集合した脂質
および内部の水相から構成される閉鎖小胞を意味する。
は、当業者周知の通り（D.D.Lasic、「liposomes: from
basic to applications」、Elsevier Science Publish
ers、pp.1-171（1993）参照。）、膜状に集合した脂質
および内部の水相から構成される閉鎖小胞を意味する。
【０００９】「リポソーム化製剤」とは、内部に薬物を
包含させたリポソームの水中分散型製剤を意味し、該薬
物はリポソームを構成する膜状に集合した脂質相に包含
されていてもよくリポソーム内部の水相に包含されてい
てもよい。
包含させたリポソームの水中分散型製剤を意味し、該薬
物はリポソームを構成する膜状に集合した脂質相に包含
されていてもよくリポソーム内部の水相に包含されてい
てもよい。
【００１０】本発明において使用するリポソームの直径
（「体積平均粒子径」）としては、静脈内投与後の血中
滞留性および／または腫瘍組織への集積性が高い５０乃
至４００ｎｍが望ましく、より好適には５０乃至２００
ｎｍである（A.L.Klibanovら、Biochim. Biophys. Acta
1062, 142-148（1991）及びD.D.Lasic、「liposomes:
from basic to applications」、Elsevier Science Pub
lishers、pp.261-471（1993）参照）。リポソームの
「体積平均粒子径」は、動的光散乱法等の原理に基づき
求めることができる（D.D.Lasic、「liposomes: from b
asic to applications」、Elsevier Science Publisher
s、pp.1-171（1993）参照）。
（「体積平均粒子径」）としては、静脈内投与後の血中
滞留性および／または腫瘍組織への集積性が高い５０乃
至４００ｎｍが望ましく、より好適には５０乃至２００
ｎｍである（A.L.Klibanovら、Biochim. Biophys. Acta
1062, 142-148（1991）及びD.D.Lasic、「liposomes:
from basic to applications」、Elsevier Science Pub
lishers、pp.261-471（1993）参照）。リポソームの
「体積平均粒子径」は、動的光散乱法等の原理に基づき
求めることができる（D.D.Lasic、「liposomes: from b
asic to applications」、Elsevier Science Publisher
s、pp.1-171（1993）参照）。
【００１１】上記「リポソーム」及び「リポソーム化製
剤」の定義において、脂質とは、グリセロリン脂質、グ
リセロ糖脂質、スフィンゴリン脂質、スフィンゴ糖脂
質、ステロール類、炭素数１０乃至２０のアルキル、ア
ルケニル、アルカノイルまたはアルケノイル鎖を有する
合成有機化合物等の群から選ばれる化合物を意味する。
グリセロリン脂質とは、ホスファチジルコリン、ホスフ
ァチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール、
ホスファチジルセリン、ホスファチジルエタノールアミ
ン、Ｎ−モノメトキシポリエチレングリコールサクシニ
ルホスファチジルエタノールアミン等を意味し、グリセ
ロ糖脂質とは、ジガラクトシルジグリセリド、ガラクト
シルジグリセリド等を意味し、スフィンゴリン脂質と
は、スフィンゴミエリン等を意味し、スフィンゴ糖脂質
とは、セレブロシド、ガングリオシド等を意味しステロ
ール類とは、コレステロール、コレステロールヘミサク
シネート、３β−［Ｎ−（Ｎ’、Ｎ’−ジメチルアミノ
エタン）−カルバモイル］−コレステロール、エルゴス
テロール、ラノステロール等を意味し、炭素数１０乃至
２０のアルキル、アルケニル、アルカノイルまたはアル
ケノイル鎖を有する合成有機化合物とは、ステアリン
酸、ステアリルアミン、ステアリン酸ヒドラジド、ステ
アリン酸エステル、Ｎ−［１−（２、３−ジオレイルオ
キシ）プロピル］−Ｎ、Ｎ、Ｎ−トリメチルアンモニウ
ムクロライド、Ｎ−α−トリメチルアンモニオアセチル
ドデシル−Ｄ−グルタメートクロライド、Ｏ−パルミト
イルプルラン等を意味する。
剤」の定義において、脂質とは、グリセロリン脂質、グ
リセロ糖脂質、スフィンゴリン脂質、スフィンゴ糖脂
質、ステロール類、炭素数１０乃至２０のアルキル、ア
ルケニル、アルカノイルまたはアルケノイル鎖を有する
合成有機化合物等の群から選ばれる化合物を意味する。
グリセロリン脂質とは、ホスファチジルコリン、ホスフ
ァチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール、
ホスファチジルセリン、ホスファチジルエタノールアミ
ン、Ｎ−モノメトキシポリエチレングリコールサクシニ
ルホスファチジルエタノールアミン等を意味し、グリセ
ロ糖脂質とは、ジガラクトシルジグリセリド、ガラクト
シルジグリセリド等を意味し、スフィンゴリン脂質と
は、スフィンゴミエリン等を意味し、スフィンゴ糖脂質
とは、セレブロシド、ガングリオシド等を意味しステロ
ール類とは、コレステロール、コレステロールヘミサク
シネート、３β−［Ｎ−（Ｎ’、Ｎ’−ジメチルアミノ
エタン）−カルバモイル］−コレステロール、エルゴス
テロール、ラノステロール等を意味し、炭素数１０乃至
２０のアルキル、アルケニル、アルカノイルまたはアル
ケノイル鎖を有する合成有機化合物とは、ステアリン
酸、ステアリルアミン、ステアリン酸ヒドラジド、ステ
アリン酸エステル、Ｎ−［１−（２、３−ジオレイルオ
キシ）プロピル］−Ｎ、Ｎ、Ｎ−トリメチルアンモニウ
ムクロライド、Ｎ−α−トリメチルアンモニオアセチル
ドデシル−Ｄ−グルタメートクロライド、Ｏ−パルミト
イルプルラン等を意味する。
【００１２】ここで、ホスファチジルコリン、ホスファ
チジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール、ホ
スファチジルセリン、ホスファチジルエタノールアミ
ン、スルホキシリボシルジグリセリド、ジガラクトシル
ジグリセリド、ガラクトシルジグリセリド、スフィンゴ
ミエリン、セレブロシド、ガングリオシド、Ｎ−モノメ
トキシポリエチレングリコールサクシニルホスファチジ
ルエタノールアミン等は各々二本ずつ飽和または不飽和
の脂肪酸エステル鎖を有するが、その脂肪酸（アルカノ
イルまたはアルケノイル基）部分の炭素数が１０乃至１
８である脂質をリポソーム構成成分として使用すること
ができる。「Ｃ10-18アルカノイルまたはアルケノイ
ル」基としては、デシリル、ウンデシリル、ラウロイ
ル、トリデシリル、ミリストイル、ペンタデシリル、パ
ルミトイル、ヘプタデシリル、ステアロイル、オレオイ
ル基等を挙げることができるが、これらのうち好適なも
のはラウロイル、ミリストイル、パルミトイル及びステ
アロイル基である。
チジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール、ホ
スファチジルセリン、ホスファチジルエタノールアミ
ン、スルホキシリボシルジグリセリド、ジガラクトシル
ジグリセリド、ガラクトシルジグリセリド、スフィンゴ
ミエリン、セレブロシド、ガングリオシド、Ｎ−モノメ
トキシポリエチレングリコールサクシニルホスファチジ
ルエタノールアミン等は各々二本ずつ飽和または不飽和
の脂肪酸エステル鎖を有するが、その脂肪酸（アルカノ
イルまたはアルケノイル基）部分の炭素数が１０乃至１
８である脂質をリポソーム構成成分として使用すること
ができる。「Ｃ10-18アルカノイルまたはアルケノイ
ル」基としては、デシリル、ウンデシリル、ラウロイ
ル、トリデシリル、ミリストイル、ペンタデシリル、パ
ルミトイル、ヘプタデシリル、ステアロイル、オレオイ
ル基等を挙げることができるが、これらのうち好適なも
のはラウロイル、ミリストイル、パルミトイル及びステ
アロイル基である。
【００１３】これらの試薬（脂質等）は、購入すること
ができる。また、卵黄レシチンおよび大豆レシチン等の
ように、通常種々の炭素数および／または不飽和度の脂
肪酸エステル鎖を有する脂質が混合した状態で入手でき
るものは、これらを単一成分に分離精製することなく使
用することができる。
ができる。また、卵黄レシチンおよび大豆レシチン等の
ように、通常種々の炭素数および／または不飽和度の脂
肪酸エステル鎖を有する脂質が混合した状態で入手でき
るものは、これらを単一成分に分離精製することなく使
用することができる。
【００１４】さらに、上記（３）に記載したように、
「水溶性高分子鎖を有する脂質」をリポソーム構成成分
として使用することにより、血中滞留性、腫瘍組織への
集積特性が特に優れた修飾リポソームを製造することが
できる（例えば、D.D.LasicとF.Martin（編）、「Steal
th liposomes」、CRC Press、pp.103-117（1995）参
照）。「水溶性高分子鎖」としてはポリエチレングリコ
ール（ＰＥＧ）、ポリアクリルアミド、プルランのよう
な多糖類等をあげることができる。「水溶性高分子鎖を
有する脂質」としては、例えばＮ−モノメトキシポリエ
チレングリコールサクシニルホスファチジルエタノール
アミン、Ｏ−（Ｃ10-18アルカノイルまたはアルケノイ
ル）プルラン、Ｎ−（Ｃ10-18アルカノイルまたはアル
ケノイル）ポリアクリルアミド等をあげることができる
が、好適にはＰＥＧ部分の平均分子量が１０００乃至５
０００のＮ−モノメトキシポリエチレングリコールサク
シニル−ジ（Ｃ10-18アルカノイルまたはアルケノイ
ル）ホスファチジルエタノールアミンまたはＯ−パルミ
トイルプルランであり、最も好適にはＰＥＧ部分の平均
分子量が２０００のＮ−モノメトキシポリエチレングリ
コールサクシニル−ジステアロイルホスファチジルエタ
ノールアミンである。
「水溶性高分子鎖を有する脂質」をリポソーム構成成分
として使用することにより、血中滞留性、腫瘍組織への
集積特性が特に優れた修飾リポソームを製造することが
できる（例えば、D.D.LasicとF.Martin（編）、「Steal
th liposomes」、CRC Press、pp.103-117（1995）参
照）。「水溶性高分子鎖」としてはポリエチレングリコ
ール（ＰＥＧ）、ポリアクリルアミド、プルランのよう
な多糖類等をあげることができる。「水溶性高分子鎖を
有する脂質」としては、例えばＮ−モノメトキシポリエ
チレングリコールサクシニルホスファチジルエタノール
アミン、Ｏ−（Ｃ10-18アルカノイルまたはアルケノイ
ル）プルラン、Ｎ−（Ｃ10-18アルカノイルまたはアル
ケノイル）ポリアクリルアミド等をあげることができる
が、好適にはＰＥＧ部分の平均分子量が１０００乃至５
０００のＮ−モノメトキシポリエチレングリコールサク
シニル−ジ（Ｃ10-18アルカノイルまたはアルケノイ
ル）ホスファチジルエタノールアミンまたはＯ−パルミ
トイルプルランであり、最も好適にはＰＥＧ部分の平均
分子量が２０００のＮ−モノメトキシポリエチレングリ
コールサクシニル−ジステアロイルホスファチジルエタ
ノールアミンである。
【００１５】また、必要に応じて抗酸化作用等を目的と
して、α−トコフェロール等の添加物を脂質構成成分と
して使用することができる。
して、α−トコフェロール等の添加物を脂質構成成分と
して使用することができる。
【００１６】リポソーム内部を構成する水相には、通
常、塩化ナトリウム水溶液、緩衝液（リン酸緩衝液、酢
酸緩衝液等）、単糖類若しくは二糖類の水溶液（グルコ
ース水溶液、トレハロース水溶液等）を使用することが
でき、好適にはグルコース水溶液またはトレハロース水
溶液である。
常、塩化ナトリウム水溶液、緩衝液（リン酸緩衝液、酢
酸緩衝液等）、単糖類若しくは二糖類の水溶液（グルコ
ース水溶液、トレハロース水溶液等）を使用することが
でき、好適にはグルコース水溶液またはトレハロース水
溶液である。
【００１７】上記に挙げた脂質の群の中で、保存時およ
び生体中でのリポソームの形態安定性、物質透過性、対
象とする薬物の包含特性、およびリポソームの体内動態
特性等を考慮し、種々の脂質の種類および混合比が選択
される。
び生体中でのリポソームの形態安定性、物質透過性、対
象とする薬物の包含特性、およびリポソームの体内動態
特性等を考慮し、種々の脂質の種類および混合比が選択
される。
【００１８】リポソームを構成する脂質の組成（脂質成
分および各脂質成分の総脂質に対するモル比）として
は、例えば、以下の（Ａ）乃至（Ｄ）の組成を挙げるこ
とができる。
分および各脂質成分の総脂質に対するモル比）として
は、例えば、以下の（Ａ）乃至（Ｄ）の組成を挙げるこ
とができる。
【００１９】 （Ａ） ＤＡＰＣ （２０乃至８０モル％、好適には３０モル％） コレステロール （２０乃至６０モル％、好適には４０モル％） ＤＡＰＧ （ ５乃至４０モル％、好適には２５モル％） ＰＥＧ−ＤＡＰＥ （ １乃至１０モル％、好適には ５モル％） （Ｂ） ＤＡＰＣ （６０乃至９０モル％、好適には６５モル％） ＤＡＰＧ （ ５乃至４０モル％、好適には３０モル％） ＰＥＧ−ＤＡＰＥ （ １乃至１０モル％、好適には ５モル％） （Ｃ） ＤＡＰＣ （２０乃至８０モル％、好適には３０モル％） コレステロール （２０乃至６０モル％、好適には４０モル％） ＤＡＰＧ （ ５乃至４０モル％、好適には３０モル％） （Ｄ） ＤＡＰＣ （６０乃至９５モル％、好適には７０モル％） ＤＡＰＧ （ ５乃至４０モル％、好適には３０モル％） 上記の組成において、ＤＡＰＣはジ（Ｃ10-18アルカノ
イルまたはアルケノイル）ホスファチジルコリンを示
し、ＤＡＰＧはジ（Ｃ10-18アルカノイルまたはアルケ
ノイル）ホスファチジルグリセロールを示し、ＰＥＧ−
ＤＡＰＥはポリエチレングリコール部分の平均分子量が
１０００乃至５０００のＮ−モノメトキシポリエチレン
グリコールサクシニル−ジ（Ｃ10-18アルカノイルまた
はアルケノイル）ホスファチジルエタノールアミンを示
す。
イルまたはアルケノイル）ホスファチジルコリンを示
し、ＤＡＰＧはジ（Ｃ10-18アルカノイルまたはアルケ
ノイル）ホスファチジルグリセロールを示し、ＰＥＧ−
ＤＡＰＥはポリエチレングリコール部分の平均分子量が
１０００乃至５０００のＮ−モノメトキシポリエチレン
グリコールサクシニル−ジ（Ｃ10-18アルカノイルまた
はアルケノイル）ホスファチジルエタノールアミンを示
す。
【００２０】これらのうち好適な組成は（Ａ）または
（Ｂ）の組成であり、更に好適な組成は以下に示す
（ａ）または（ｂ）の組成である。
（Ｂ）の組成であり、更に好適な組成は以下に示す
（ａ）または（ｂ）の組成である。
【００２１】 （ａ） ＤＰＰＣ （２０乃至８０モル％、好適には３０モル％） コレステロール （２０乃至６０モル％、好適には４０モル％） ＤＰＰＧ （ ５乃至４０モル％、好適には２５モル％） ＰＥＧ２０００−ＤＳＰＥ （ １乃至１０モル％、好適には ５モル％） （ｂ） ＤＭＰＣ （６０乃至９０モル％、好適には６５モル％） ＤＭＰＧ （ ５乃至４０モル％、好適には３０モル％） ＰＥＧ２０００−ＤＳＰＥ （ １乃至１０モル％、好適には ５モル％） なお、上記の組成において、ＤＰＰＣはジパルミトイル
ホスファチジルコリン（dipalmitoylphosphatidylcholi
ne）を示し、ＤＭＰＣはジミリストイルホスファチジル
コリン（dimirystoylphosphatidylcholine）を示し、Ｄ
ＰＰＧはジパルミトイルホスファチジルグリセロール
（dipalmitoylphosphatidylglycerol）を示し、ＤＭＰ
Ｇはジミリストイルホスファチジルグリセロール（dimi
rystoylphosphatidylglycerol）を示し、ＰＥＧ２００
０−ＤＳＰＥはポリエチレングリコール部分の平均分子
量が２０００のＮ−モノメトキシポリエチレングリコー
ルサクシニル−ジステアロイルホスファチジルエタノー
ルアミン（N-monomethoxypoly(ethyleneglycol) succin
yl-distearoylphosphatidylethanolamine）を示す。
ホスファチジルコリン（dipalmitoylphosphatidylcholi
ne）を示し、ＤＭＰＣはジミリストイルホスファチジル
コリン（dimirystoylphosphatidylcholine）を示し、Ｄ
ＰＰＧはジパルミトイルホスファチジルグリセロール
（dipalmitoylphosphatidylglycerol）を示し、ＤＭＰ
Ｇはジミリストイルホスファチジルグリセロール（dimi
rystoylphosphatidylglycerol）を示し、ＰＥＧ２００
０−ＤＳＰＥはポリエチレングリコール部分の平均分子
量が２０００のＮ−モノメトキシポリエチレングリコー
ルサクシニル−ジステアロイルホスファチジルエタノー
ルアミン（N-monomethoxypoly(ethyleneglycol) succin
yl-distearoylphosphatidylethanolamine）を示す。
【００２２】化合物Ａを含有するリポソーム化製剤とし
て好適なものは、以下の処方例ＡまたはＢを用いて［実
施例１］で述べる方法で製造されるものである。
て好適なものは、以下の処方例ＡまたはＢを用いて［実
施例１］で述べる方法で製造されるものである。
【００２３】処方例Ａ ＤＰＰＣ ３０（μｍｏｌ） コレステロール ４０（μｍｏｌ） ＤＰＰＧ ２５（μｍｏｌ） ＰＥＧ２０００−ＤＳＰＥ ５（μｍｏｌ） 化合物Ａ １乃至３０（ｍｇ） −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− ５重量％グルコース水溶液で２ｍＬとした。
【００２４】処方例Ｂ ＤＭＰＣ ６５（μｍｏｌ） ＤＭＰＧ ３０（μｍｏｌ） ＰＥＧ２０００−ＤＳＰＥ ５（μｍｏｌ） 化合物Ａ １乃至３０（ｍｇ） −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− ５重量％グルコース水溶液で２ｍＬとした。
【００２５】
【発明の実施の形態】リポソームは、当業者周知の方法
（D.D.Lasic、「liposomes: from basic toapplication
s」、Elsevier Science Publishers、pp.1-171（1993）
参照。）に従い製造し、サイズを調節することができ
る。すなわち、上記で選ばれた脂質および塩化ナトリウ
ム水溶液、緩衝液、グルコース水溶液等を用い、薄膜
法、逆相蒸発法、エタノール注入法、エーテル注入法、
脱水−再水和法等により製造でき、超音波照射法、凍結
融解後の超音波照射法、エクストルージョン法、フレン
チプレス法、ホモジナイゼーション法等の方法によりサ
イズが調節できる。本発明においても、これらの方法に
従いリポソームを製造し、必要に応じてリポソームのサ
イズを調節することができる。
（D.D.Lasic、「liposomes: from basic toapplication
s」、Elsevier Science Publishers、pp.1-171（1993）
参照。）に従い製造し、サイズを調節することができ
る。すなわち、上記で選ばれた脂質および塩化ナトリウ
ム水溶液、緩衝液、グルコース水溶液等を用い、薄膜
法、逆相蒸発法、エタノール注入法、エーテル注入法、
脱水−再水和法等により製造でき、超音波照射法、凍結
融解後の超音波照射法、エクストルージョン法、フレン
チプレス法、ホモジナイゼーション法等の方法によりサ
イズが調節できる。本発明においても、これらの方法に
従いリポソームを製造し、必要に応じてリポソームのサ
イズを調節することができる。
【００２６】また、リポソーム化製剤中の薬物濃度は製
造時における薬物の配合量のほか、製造後に超遠心分離
等の濃縮工程または塩化ナトリウム水溶液等による希釈
工程を挿入することにより適宜調節することができる。
本発明のリポソーム化製剤の場合、１乃至３０ｍｇ／ｍ
Ｌの化合物Ａを包含するように薬物濃度を調節すること
ができる。
造時における薬物の配合量のほか、製造後に超遠心分離
等の濃縮工程または塩化ナトリウム水溶液等による希釈
工程を挿入することにより適宜調節することができる。
本発明のリポソーム化製剤の場合、１乃至３０ｍｇ／ｍ
Ｌの化合物Ａを包含するように薬物濃度を調節すること
ができる。
【００２７】化合物Ａのように脂溶性が高い（試験例１
参照。）化合物は、該化合物を脂質の１成分とみなして
他の脂質と混合しリポソームを製造することにより、リ
ポソームに包含させることができる（D.D.Lasic、「lip
osomes: from basic to applications」、Elsevier Sci
ence Publishers、pp.261-471（1993）参照。）。脂溶
性化合物が期待通りリポソーム内に包含されているか、
あるいはリポソームから独立して凝集塊を形成し分散し
ているか、厳密に判断することは困難であるが、エクス
トルージョンの可否およびエクストルージョン後の化合
物の回収率から推定することができる。すなわち、エク
ストルージョン法によるサイズ調節時には、分散液が５
０乃至４００ｎｍ程度の細孔を通過するが、脂溶性薬物
の凝集塊はこの細孔を通過することができず目詰まりを
起こしエクストルージョンが不可能となる（Moriら、Ph
arm. Res. 10、507-514（1993）参照。）。
参照。）化合物は、該化合物を脂質の１成分とみなして
他の脂質と混合しリポソームを製造することにより、リ
ポソームに包含させることができる（D.D.Lasic、「lip
osomes: from basic to applications」、Elsevier Sci
ence Publishers、pp.261-471（1993）参照。）。脂溶
性化合物が期待通りリポソーム内に包含されているか、
あるいはリポソームから独立して凝集塊を形成し分散し
ているか、厳密に判断することは困難であるが、エクス
トルージョンの可否およびエクストルージョン後の化合
物の回収率から推定することができる。すなわち、エク
ストルージョン法によるサイズ調節時には、分散液が５
０乃至４００ｎｍ程度の細孔を通過するが、脂溶性薬物
の凝集塊はこの細孔を通過することができず目詰まりを
起こしエクストルージョンが不可能となる（Moriら、Ph
arm. Res. 10、507-514（1993）参照。）。
【００２８】本発明のリポソーム化製剤の投与量は、症
状、年齢、および、製剤中に含有される有効成分（化合
物Ａ）の量によって異なるが、例えば、成人に対して１
日あたり、化合物Ａとして０．１ｍｇ（好適には１ｍ
ｇ）乃至２０００ｍｇ（好適には５００ｍｇ）に相当す
る製剤を１回または数回にわけて静脈内または直接腫瘍
組織に投与することができる。また、治療に最適な化合
物Ａの有効量を維持するために、連続的に投与すること
もできる。
状、年齢、および、製剤中に含有される有効成分（化合
物Ａ）の量によって異なるが、例えば、成人に対して１
日あたり、化合物Ａとして０．１ｍｇ（好適には１ｍ
ｇ）乃至２０００ｍｇ（好適には５００ｍｇ）に相当す
る製剤を１回または数回にわけて静脈内または直接腫瘍
組織に投与することができる。また、治療に最適な化合
物Ａの有効量を維持するために、連続的に投与すること
もできる。
【００２９】
【実施例】以下、実施例および試験例により本発明をさ
らに詳細に説明する。ただし、これらは本発明を限定す
るものではない。なお、下記の例で使用した脂質は、コ
レステロールを除き全て川原油化（株）より購入した。
また、化合物Ａの分子量は４９０．６５、製造は特開平
５−１９４４９７記載の方法に従った。
らに詳細に説明する。ただし、これらは本発明を限定す
るものではない。なお、下記の例で使用した脂質は、コ
レステロールを除き全て川原油化（株）より購入した。
また、化合物Ａの分子量は４９０．６５、製造は特開平
５−１９４４９７記載の方法に従った。
【００３０】［実施例１］ 化合物Ａを包含したリポソ
ームの製造 ジパルミトイルホスファチジルコリン（dipalmitoylpho
sphatidylcholine、ＤＰＰＣ）、ジミリストイルホスフ
ァチジルコリン（dimirystoylphosphatidylcholine、Ｄ
ＭＰＣ）、コレステロール、ジパルミトイルホスファチ
ジルグリセロール（dipalmitoylphosphatidylglycero
l、ＤＰＰＧ）、ジミリストイルホスファチジルグリセ
ロール（dimirystoylphosphatidylglycerol、ＤＭＰ
Ｇ）、ポリエチレングリコール部分の平均分子量が２０
００のＮ−モノメトキシポリエチレングリコールサクシ
ニル−ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン
（N-monomethoxypoly(ethylene glycol) succinyl-dist
earoylphosphatidylethanolamine、ＰＥＧ２０００−Ｄ
ＳＰＥ）、化合物Ａ、および５重量％グルコース水溶液
を使用し、Banghamら（J. Mol. Biol. 8、660-668（196
4）参照。）の方法によりリポソームの粗分散液を得
た。処方例を表１に示す。また、これらの処方における
全脂質モル数に対する化合物Ａのモル比を表２に示す。
これらのリポソームを以下、化合物Ａリポソームとす
る。
ームの製造 ジパルミトイルホスファチジルコリン（dipalmitoylpho
sphatidylcholine、ＤＰＰＣ）、ジミリストイルホスフ
ァチジルコリン（dimirystoylphosphatidylcholine、Ｄ
ＭＰＣ）、コレステロール、ジパルミトイルホスファチ
ジルグリセロール（dipalmitoylphosphatidylglycero
l、ＤＰＰＧ）、ジミリストイルホスファチジルグリセ
ロール（dimirystoylphosphatidylglycerol、ＤＭＰ
Ｇ）、ポリエチレングリコール部分の平均分子量が２０
００のＮ−モノメトキシポリエチレングリコールサクシ
ニル−ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン
（N-monomethoxypoly(ethylene glycol) succinyl-dist
earoylphosphatidylethanolamine、ＰＥＧ２０００−Ｄ
ＳＰＥ）、化合物Ａ、および５重量％グルコース水溶液
を使用し、Banghamら（J. Mol. Biol. 8、660-668（196
4）参照。）の方法によりリポソームの粗分散液を得
た。処方例を表１に示す。また、これらの処方における
全脂質モル数に対する化合物Ａのモル比を表２に示す。
これらのリポソームを以下、化合物Ａリポソームとす
る。
【００３１】
【表１】・処方例１ ＤＰＰＣ ３０（μｍｏｌ） コレステロール ４０（μｍｏｌ） ＤＰＰＧ ２５（μｍｏｌ） ＰＥＧ２０００−ＤＳＰＥ ５（μｍｏｌ） 化合物Ａ ５（ｍｇ） −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− ５重量％グルコース水溶液で２ｍＬとした。
【００３２】・処方例２ ＤＰＰＣ ３０（μｍｏｌ） コレステロール ４０（μｍｏｌ） ＤＰＰＧ ２５（μｍｏｌ） ＰＥＧ２０００−ＤＳＰＥ ５（μｍｏｌ） 化合物Ａ １０（ｍｇ） −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− ５重量％グルコース水溶液で２ｍＬとした。
【００３３】・処方例３ ＤＰＰＣ ３０（μｍｏｌ） コレステロール ４０（μｍｏｌ） ＤＰＰＧ ２５（μｍｏｌ） ＰＥＧ２０００−ＤＳＰＥ ５（μｍｏｌ） 化合物Ａ １５（ｍｇ） −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− ５重量％グルコース水溶液で２ｍＬとした。
【００３４】・処方例４ ＤＰＰＣ ３０（μｍｏｌ） コレステロール ４０（μｍｏｌ） ＤＰＰＧ ２５（μｍｏｌ） ＰＥＧ２０００−ＤＳＰＥ ５（μｍｏｌ） 化合物Ａ ２０（ｍｇ） −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− ５重量％グルコース水溶液で２ｍＬとした。
【００３５】・処方例５ ＤＰＰＣ ３０（μｍｏｌ） コレステロール ４０（μｍｏｌ） ＤＰＰＧ ２５（μｍｏｌ） ＰＥＧ２０００−ＤＳＰＥ ５（μｍｏｌ） 化合物Ａ ３０（ｍｇ） −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− ５重量％グルコース水溶液で２ｍＬとした。
【００３６】・処方例６ ＤＭＰＣ ６５（μｍｏｌ） ＤＭＰＧ ３０（μｍｏｌ） ＰＥＧ２０００−ＤＳＰＥ ５（μｍｏｌ） 化合物Ａ １０（ｍｇ） −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− ５重量％グルコース水溶液で２ｍＬとした。
【００３７】
【表２】 −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− 処方例 全脂質モル数に対する化合物Ａのモル比（％） −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− １ ９ ２ １７ ３ ２３ ４ ２９ ５ ３８ ６ １７ −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− 孔径５０乃至２００ｎｍのポリカーボネート製メンブラ
ンフィルタ（野村マイクロサイエンス社）を装着したエ
クストルーダ（Liposofast-Basic、AVESTIN社製）を用
い、化合物Ａリポソームの粗分散液を該メンブランを通
過させ（以下、所定サイズの孔径のポリカーボネート製
メンブランフィルタを装着したエクストルーダを用いた
リポソームのメンブラン通過を、所定サイズのエクスト
ルージョンという。）、化合物Ａリポソームのエクスト
ージョンの可否を調べ、同時にそのサイズを調節した。
ンフィルタ（野村マイクロサイエンス社）を装着したエ
クストルーダ（Liposofast-Basic、AVESTIN社製）を用
い、化合物Ａリポソームの粗分散液を該メンブランを通
過させ（以下、所定サイズの孔径のポリカーボネート製
メンブランフィルタを装着したエクストルーダを用いた
リポソームのメンブラン通過を、所定サイズのエクスト
ルージョンという。）、化合物Ａリポソームのエクスト
ージョンの可否を調べ、同時にそのサイズを調節した。
【００３８】エクストルージョンの可否の検討結果を表
３に示す。この結果より、処方時の化合物Ａ濃度を７．
５ｍｇ／ｍＬ以下とすることにより、エクストルージョ
ンが可能であることが示された。このエクストルージョ
ンが可能な化合物Ａ濃度の上限は、使用する脂質の濃度
を高め分散液中の脂質量に対する化合物Ａの比率を低下
させること、およびエクストルージョン後に遠心分離等
で濃縮すること等により、さらに高められることが容易
に推定されるが、以後の検討では、脂質濃度が５０ｍ
Ｍ、化合物Ａ濃度が５．０ｍｇ／ｍＬのリポソームを使
用した。
３に示す。この結果より、処方時の化合物Ａ濃度を７．
５ｍｇ／ｍＬ以下とすることにより、エクストルージョ
ンが可能であることが示された。このエクストルージョ
ンが可能な化合物Ａ濃度の上限は、使用する脂質の濃度
を高め分散液中の脂質量に対する化合物Ａの比率を低下
させること、およびエクストルージョン後に遠心分離等
で濃縮すること等により、さらに高められることが容易
に推定されるが、以後の検討では、脂質濃度が５０ｍ
Ｍ、化合物Ａ濃度が５．０ｍｇ／ｍＬのリポソームを使
用した。
【００３９】エクストルージョンを行った後の化合物Ａ
リポソームの分散液を１５０ｍＭ塩化ナトリウム水溶液
で希釈することによって脂質濃度を約０．１ｍＭとし、
粒子径測定機（Nicomp Particle Sizer Model 370、Nic
omp Particle Sizing Systems社製）を使用して体積平
均粒子径（volume-weighted diameter。以下、Ｄvとす
る。）および数平均粒子径を測定し、（１）式を用いて
多分散指数（polydispersity。以下、ＰＤとする。）を
算出した。こうして求められたＤvおよびＰＤの値を表
３に示す。
リポソームの分散液を１５０ｍＭ塩化ナトリウム水溶液
で希釈することによって脂質濃度を約０．１ｍＭとし、
粒子径測定機（Nicomp Particle Sizer Model 370、Nic
omp Particle Sizing Systems社製）を使用して体積平
均粒子径（volume-weighted diameter。以下、Ｄvとす
る。）および数平均粒子径を測定し、（１）式を用いて
多分散指数（polydispersity。以下、ＰＤとする。）を
算出した。こうして求められたＤvおよびＰＤの値を表
３に示す。
【００４０】いずれのリポソームも粒子径分布が狭く平
均粒子径が５０乃至２００ｎｍの範囲にあり、血中滞留
性および／または腫瘍組織への集積の適したサイズに調
節できたことを確認した。
均粒子径が５０乃至２００ｎｍの範囲にあり、血中滞留
性および／または腫瘍組織への集積の適したサイズに調
節できたことを確認した。
【００４１】 多分散指数＝体積平均粒子径／数平均粒子径 （１）
【００４２】
【表３】 −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− 処方例 エクストルージョン 体積平均粒子径 多分散指数 番号 サイズ 可否 Ｄv（ｎｍ） ＰＤ −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− １ １００ｎｍ ○ （未測定） ２ ２００ｎｍ ○ １７９．１ １．２５ ２ １００ｎｍ ○ １３３．６ １．４１ ２ ５０ｎｍ ○ １１１．０ １．３６ ３ １００ｎｍ ○ （未測定） ４ １００ｎｍ × （未測定） ５ １００ｎｍ × （未測定） ６ ５０ｎｍ ○ ５３．０ １．７７ −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− ［比較例１］ 中性界面活性剤による化合物Ａの可溶化 医薬品添加物として静脈内投与可能な中性界面活性剤で
あるポリオキシエチレン硬化ヒマシ油６０により化合物
Ａの水溶液中への溶解性改善を試みたが、化合物Ａを１
ｍｇ／ｍＬ溶解するのに必要なポリオキシエチレン硬化
ヒマシ油の濃度は、５０ｍｇ／ｍＬ以上と極めて高く、
毒性が問題にならない界面活性剤の使用量で治療に適し
た濃度の化合物Ａを溶解することが不可能であることが
わかった。
あるポリオキシエチレン硬化ヒマシ油６０により化合物
Ａの水溶液中への溶解性改善を試みたが、化合物Ａを１
ｍｇ／ｍＬ溶解するのに必要なポリオキシエチレン硬化
ヒマシ油の濃度は、５０ｍｇ／ｍＬ以上と極めて高く、
毒性が問題にならない界面活性剤の使用量で治療に適し
た濃度の化合物Ａを溶解することが不可能であることが
わかった。
【００４３】［試験例１］ 化合物Ａの親水性／親油性
の評価 当業者周知の方法（A. Martinら、「Physical pharmacy
（3rd ed.）」、Lea &Febiger、pp.272-313（1983）参
照。）に従って求められたｎ−オクタノール／水溶液系
における化合物Ａの分配係数は、水溶液相のｐＨが３乃
至７である場合に９５乃至４３００と、化合物Ａはきわ
めて親油性が高いことがわかった。従って、化合物Ａは
脂質成分に混合しリポソームに包含させることが妥当で
あると判断された。
の評価 当業者周知の方法（A. Martinら、「Physical pharmacy
（3rd ed.）」、Lea &Febiger、pp.272-313（1983）参
照。）に従って求められたｎ−オクタノール／水溶液系
における化合物Ａの分配係数は、水溶液相のｐＨが３乃
至７である場合に９５乃至４３００と、化合物Ａはきわ
めて親油性が高いことがわかった。従って、化合物Ａは
脂質成分に混合しリポソームに包含させることが妥当で
あると判断された。
【００４４】［試験例２］ 化合物Ａの回収率の決定 リポソームの分散液を生理食塩水で希釈することによ
り、製造時の処方から計算される分散液中の総脂質濃度
を０．５ｍＭとした。このリポソームの分散液１００μ
Ｌに、ｐＨ４の酢酸緩衝液（０．８３Ｍの酢酸と０．１
７Ｍの酢酸ナトリウムからなるもの。）１００μＬおよ
びメタノール８００μＬを加え、ボルテックスミキサー
を使用して１０分間振とうし、遠心分離（１０００ｇ×
５ｍｉｎ．）後の上清を、表４に示す条件にて逆相高速
液体クロマトグラフィーにより分析し、７．２乃至８ｍ
ｉｎ．で溶出される化合物Ａの濃度を測定した。
り、製造時の処方から計算される分散液中の総脂質濃度
を０．５ｍＭとした。このリポソームの分散液１００μ
Ｌに、ｐＨ４の酢酸緩衝液（０．８３Ｍの酢酸と０．１
７Ｍの酢酸ナトリウムからなるもの。）１００μＬおよ
びメタノール８００μＬを加え、ボルテックスミキサー
を使用して１０分間振とうし、遠心分離（１０００ｇ×
５ｍｉｎ．）後の上清を、表４に示す条件にて逆相高速
液体クロマトグラフィーにより分析し、７．２乃至８ｍ
ｉｎ．で溶出される化合物Ａの濃度を測定した。
【００４５】
【表４】 −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− 測定機 ＬＣ−１０Ａ（島津製作所社製） カラム ＹＭＣ−Ａ３１２（ＹＭＣ社製） カラム温度 ４０℃ 検出波長 ２４７ｎｍ 移動相 アセトニトリルと蒸留水の混合液 （体積比：３／７） 流速 １ｍＬ／ｍｉｎ． インジェクション体積 ２０μＬ −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− 化合物Ａの回収率は、リポソーム製造時の処方から計算
される分散液中の化合物Ａ濃度に対する、分散液中の実
際の化合物Ａの濃度の割合として算出した。
される分散液中の化合物Ａ濃度に対する、分散液中の実
際の化合物Ａの濃度の割合として算出した。
【００４６】こうして求められた化合物Ａの回収率を表
５に示す。このように、処方に付した化合物Ａは高い割
合でリポソームの分散液中に回収されることがわかっ
た。
５に示す。このように、処方に付した化合物Ａは高い割
合でリポソームの分散液中に回収されることがわかっ
た。
【００４７】
【表５】 −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− 処方例 エクストルージョンのサイズ 回収率（％） −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− ２ ２００ｎｍ ７２．１ ２ １００ｎｍ ７７．６ ２ ５０ｎｍ ９９．５ ６ ５０ｎｍ ９７．５ −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− ［試験例３］ 各種の化合物Ａ製剤投与後の腫瘍中化合
物Ａ濃度の測定 ６週齢のＣＤＦ１マウスの皮下にマウス結腸ガンｃｏｌ
ｏｎ２６を移植し、１０乃至１４日後に表６に示す処方
で製造した化合物Ａ製剤を投与した。本発明の方法以外
に静脈内投与可能な製剤の製造は困難であったため、経
口投与用の懸濁製剤を対照とした。
物Ａ濃度の測定 ６週齢のＣＤＦ１マウスの皮下にマウス結腸ガンｃｏｌ
ｏｎ２６を移植し、１０乃至１４日後に表６に示す処方
で製造した化合物Ａ製剤を投与した。本発明の方法以外
に静脈内投与可能な製剤の製造は困難であったため、経
口投与用の懸濁製剤を対照とした。
【００４８】静脈内投与に使用したリポソーム化製剤の
薬物投与量は５０ｍｇ／ｋｇ、経口投与に使用した懸濁
製剤の薬物投与量は１００ｍｇ／ｋｇとした。各製剤を
投与して０．５乃至２４時間後、マウスを脱血死させ腫
瘍組織を摘出し、その重量を測定した。この腫瘍組織に
０．５乃至３ｍＬの１５０ｍＬ塩化ナトリウム水溶液を
加え、ホモジナイゼーションした。試験例２と同様にし
て測定した各ホモジネート中の化合物Ａ濃度、および腫
瘍組織と添加した塩化ナトリウム水溶液との重量比から
算出した希釈度から腫瘍組織中の化合物Ａ濃度を求め
た。
薬物投与量は５０ｍｇ／ｋｇ、経口投与に使用した懸濁
製剤の薬物投与量は１００ｍｇ／ｋｇとした。各製剤を
投与して０．５乃至２４時間後、マウスを脱血死させ腫
瘍組織を摘出し、その重量を測定した。この腫瘍組織に
０．５乃至３ｍＬの１５０ｍＬ塩化ナトリウム水溶液を
加え、ホモジナイゼーションした。試験例２と同様にし
て測定した各ホモジネート中の化合物Ａ濃度、および腫
瘍組織と添加した塩化ナトリウム水溶液との重量比から
算出した希釈度から腫瘍組織中の化合物Ａ濃度を求め
た。
【００４９】その結果、図１に示すように、リポソーム
化製剤を静脈内投与した場合、投与量が少ないにもかか
わらず懸濁製剤の経口投与の場合より腫瘍中の化合物Ａ
の濃度が著しく高く、また高い化合物Ａの濃度が長時間
維持されることがわかった。このように、リポソーム化
によって毒性の強い添加物を使用することなく化合物Ａ
の静脈内投与が可能となり、化合物Ａの腫瘍組織への蓄
積効率が高まることが示された。さらにこの結果は、上
記の試験例２で求められた化合物Ａの回収率が実用面で
の要求を満たすレベルであることを示す。
化製剤を静脈内投与した場合、投与量が少ないにもかか
わらず懸濁製剤の経口投与の場合より腫瘍中の化合物Ａ
の濃度が著しく高く、また高い化合物Ａの濃度が長時間
維持されることがわかった。このように、リポソーム化
によって毒性の強い添加物を使用することなく化合物Ａ
の静脈内投与が可能となり、化合物Ａの腫瘍組織への蓄
積効率が高まることが示された。さらにこの結果は、上
記の試験例２で求められた化合物Ａの回収率が実用面で
の要求を満たすレベルであることを示す。
【００５０】
【表６】 −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− 製剤 製造方法および物性値 −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− リポソーム 処方例２と同様に製造した。 Ｄｖ＝１８７．３ｎｍ、ＰＤ＝１．４７ 化合物Ａ濃度＝１１．２５ｍｇ／ｍＬ −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− 懸濁液 ２００ｍｇの化合物Ａを１ｍＬのジメチルアセトアミドに溶解し 、１０重量％の非イオン性界面活性剤（ＥＬ−６２０。ローヌプーラン・ジャパ ン（株））を含む１５０ｍＭ塩化ナトリウム水溶液で４０倍希釈し懸濁液とした 。化合物Ａ濃度＝５ｍｇ／ｍＬ。 −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
【００５１】
【発明の効果】従来、脂溶性の高い薬物を高濃度にリポ
ソームに包含させることは難しいと考えられていたが、
本発明において、脂溶性の高い薬物に属する化合物Ａを
従来にない高濃度に包含するリポソーム化製剤が得られ
た。本発明における化合物Ａのリポソーム化製剤は、化
合物Ａの静脈内投与を可能とし、更に、静脈内に投与す
ると化合物Ａの高い血中濃度を持続し、かつ、化合物Ａ
を効率的に腫瘍組織に送達し蓄積させることを可能とす
る製剤として有用性が高い。
ソームに包含させることは難しいと考えられていたが、
本発明において、脂溶性の高い薬物に属する化合物Ａを
従来にない高濃度に包含するリポソーム化製剤が得られ
た。本発明における化合物Ａのリポソーム化製剤は、化
合物Ａの静脈内投与を可能とし、更に、静脈内に投与す
ると化合物Ａの高い血中濃度を持続し、かつ、化合物Ａ
を効率的に腫瘍組織に送達し蓄積させることを可能とす
る製剤として有用性が高い。
【図１】腫瘍中の化合物Ａ濃度の経時変化図。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 蔵方 慎一 東京都品川区広町１丁目２番58号 三共株 式会社内 (72)発明者 松田 彰 北海道札幌市北区北24条西12丁目１−７− 501 (72)発明者 佐々木 琢磨 石川県金沢市泉野町４丁目12−５−401
Claims (11)
- 【請求項１】１−（２−Ｃ−シアノ−２−デオキシ−β
−Ｄ−アラビノ−ペントフラノシル）−Ｎ4−パルミト
イルシトシンを含有することを特徴とするリポソーム化
製剤。 - 【請求項２】リポソーム構成成分として水溶性高分子鎖
を有する脂質を含有することを特徴とする請求項１に記
載のリポソーム化製剤。 - 【請求項３】水溶性高分子鎖を有する脂質が、ポリエチ
レングリコール部分の平均分子量が１０００乃至５００
０のＮ−モノメトキシポリエチレングリコールサクシニ
ル−ジ（Ｃ10-18アルカノイルまたはアルケノイル）ホ
スファチジルエタノールアミンである請求項２に記載の
リポソーム化製剤。 - 【請求項４】リポソームを構成する脂質が、ジ（Ｃ
10-18アルカノイルまたはアルケノイル）ホスファチジ
ルコリン、コレステロール、ジ（Ｃ10-18アルカノイル
またはアルケノイル）ホスファチジルグリセロール及び
ポリエチレングリコール部分の平均分子量が１０００乃
至５０００のＮ−モノメトキシポリエチレングリコール
サクシニル−ジ（Ｃ10-18アルカノイルまたはアルケノ
イル）ホスファチジルエタノールアミンからなる請求項
１に記載のリポソーム化製剤。 - 【請求項５】リポソームを構成する脂質が、ジ（Ｃ
10-18アルカノイルまたはアルケノイル）ホスファチジ
ルコリン（総脂質に対して２０乃至８０モル％）、コレ
ステロール（総脂質に対して２０乃至６０モル％）、ジ
（Ｃ10-18アルカノイルまたはアルケノイル）ホスファ
チジルグリセロール（総脂質に対して５乃至４０モル
％）及びポリエチレングリコール部分の平均分子量が１
０００乃至５０００のＮ−モノメトキシポリエチレング
リコールサクシニル−ジ（Ｃ10-18アルカノイルまたは
アルケノイル）ホスファチジルエタノールアミン（総脂
質に対して１乃至１０モル％）からなる請求項１に記載
のリポソーム化製剤。 - 【請求項６】リポソームを構成する脂質が、ジパルミト
イルホスファチジルコリン（総脂質に対して３０モル
％）、コレステロール（総脂質に対して４０モル％）、
ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（総脂質に
対して２５モル％）、ポリエチレングリコール部分の平
均分子量が２０００のＮ−モノメトキシポリエチレング
リコールサクシニル−ジステアロイルホスファチジルエ
タノールアミン（総脂質に対して５モル％）からなる請
求項１に記載のリポソーム化製剤。 - 【請求項７】リポソームを構成する脂質が、ジ（Ｃ
10-18アルカノイルまたはアルケノイル）ホスファチジ
ルコリン、ジ（Ｃ10-18アルカノイルまたはアルケノイ
ル）ホスファチジルグリセロール及びポリエチレングリ
コール部分の平均分子量が１０００乃至５０００のＮ−
モノメトキシポリエチレングリコールサクシニル−ジ
（Ｃ10-18アルカノイルまたはアルケノイル）ホスファ
チジルエタノールアミンからなる請求項１に記載のリポ
ソーム化製剤。 - 【請求項８】リポソームを構成する脂質が、ジ（Ｃ
10-18アルカノイルまたはアルケノイル）ホスファチジ
ルコリン（総脂質に対して６０乃至９０モル％）、ジ
（Ｃ10-18アルカノイルまたはアルケノイル）ホスファ
チジルグリセロール（総脂質に対して５乃至４０モル
％）及びポリエチレングリコール部分の平均分子量が１
０００乃至５０００のＮ−モノメトキシポリエチレング
リコールサクシニル−ジ（Ｃ10-18アルカノイルまたは
アルケノイル）ホスファチジルエタノールアミン（総脂
質に対して１乃至１０モル％）からなる請求項１に記載
のリポソーム化製剤。 - 【請求項９】リポソームを構成する脂質が、ジミリスト
イルホスファチジルコリン（総脂質に対して６５モル
％）、ジミリストイルホスファチジルグリセロール（総
脂質に対して３０モル％）、ポリエチレングリコール部
分の平均分子量が２０００のＮ−モノメトキシポリエチ
レングリコールサクシニル−ジステアロイルホスファチ
ジルエタノールアミン（総脂質に対して５モル％）から
なる請求項１に記載のリポソーム化製剤。 - 【請求項１０】リポソームの体積平均粒子径が５０乃至
４００ｎｍであることを特徴とする請求項１乃至９のい
ずれかに記載のリポソーム化製剤。 - 【請求項１１】請求項１ないし１０に記載のリポソーム
化製剤を介して１−（２−Ｃ−シアノ−２−デオキシ−
β−Ｄ−アラビノ−ペントフラノシル）−Ｎ4−パルミ
トイルシトシンを腫瘍組織に送達する方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9340999A JPH11171771A (ja) | 1997-12-11 | 1997-12-11 | 脂溶性抗腫瘍薬のリポソーム化製剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9340999A JPH11171771A (ja) | 1997-12-11 | 1997-12-11 | 脂溶性抗腫瘍薬のリポソーム化製剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH11171771A true JPH11171771A (ja) | 1999-06-29 |
Family
ID=18342276
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9340999A Pending JPH11171771A (ja) | 1997-12-11 | 1997-12-11 | 脂溶性抗腫瘍薬のリポソーム化製剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH11171771A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1319520C (zh) * | 2005-02-03 | 2007-06-06 | 上海交通大学 | 核苷膦酸类化合物的脂质体和脂质复合物制剂 |
-
1997
- 1997-12-11 JP JP9340999A patent/JPH11171771A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1319520C (zh) * | 2005-02-03 | 2007-06-06 | 上海交通大学 | 核苷膦酸类化合物的脂质体和脂质复合物制剂 |
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|---|---|---|---|
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