JPH11153600A - 免疫測定用試験片及び該試験片を用いる測定法 - Google Patents
免疫測定用試験片及び該試験片を用いる測定法Info
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- JPH11153600A JPH11153600A JP33659497A JP33659497A JPH11153600A JP H11153600 A JPH11153600 A JP H11153600A JP 33659497 A JP33659497 A JP 33659497A JP 33659497 A JP33659497 A JP 33659497A JP H11153600 A JPH11153600 A JP H11153600A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 従来の免疫測定用試験片に比べて保存安定性
が高く、高感度な免疫測定を行うことができる試験片、
及びそれを用いる免疫測定法の提供。 【解決手段】 展開器材１に、糖及び／又は尿素と抗原
又は抗体との混合物を点着した検出ゾーン５を設け、更
に展開液供給ゾーン２と、標識試薬ゾーン４と、検体点
着ゾーン３と、展開液吸収ゾーン６とを付設した免疫測
定用試験片を作成する。
が高く、高感度な免疫測定を行うことができる試験片、
及びそれを用いる免疫測定法の提供。 【解決手段】 展開器材１に、糖及び／又は尿素と抗原
又は抗体との混合物を点着した検出ゾーン５を設け、更
に展開液供給ゾーン２と、標識試薬ゾーン４と、検体点
着ゾーン３と、展開液吸収ゾーン６とを付設した免疫測
定用試験片を作成する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、展開器材に、糖及
び／又は尿素と抗原又は抗体との混合物を点着した検出
ゾーンを設けた免疫測定用試験片、及びこの試験片を用
いる測定法に関する。
び／又は尿素と抗原又は抗体との混合物を点着した検出
ゾーンを設けた免疫測定用試験片、及びこの試験片を用
いる測定法に関する。
【０００２】
【従来の技術】検体中の抗原、抗体等の免疫活性物質を
測定する方法として、検体を免疫測定用試験片の展開器
材に設けた検体点着ゾーンに点着後、展開液を展開器材
に展開し、検出ゾーンに結合した標識試薬のシグナルを
検出する免疫測定用の試験片が知られている（例えば特
開平９−１３３６８２号参照）。この試験片は、特別な
測定機器を使用せずに、簡便で迅速な測定が行えること
から、一般の検査室での検査の他、緊急検査、ベッドサ
イドでの検査など近年臨床検査の分野で広く使用される
ようになった。
測定する方法として、検体を免疫測定用試験片の展開器
材に設けた検体点着ゾーンに点着後、展開液を展開器材
に展開し、検出ゾーンに結合した標識試薬のシグナルを
検出する免疫測定用の試験片が知られている（例えば特
開平９−１３３６８２号参照）。この試験片は、特別な
測定機器を使用せずに、簡便で迅速な測定が行えること
から、一般の検査室での検査の他、緊急検査、ベッドサ
イドでの検査など近年臨床検査の分野で広く使用される
ようになった。
【０００３】この試験片では、測定対象物に対応して展
開器材上に抗原又は抗体を点着し、検出ゾーンが形成さ
れている。測定時には、展開器材上の検出ゾーンに免疫
複合体を形成して結合した標識物質を測定することによ
り、測定対象物の免疫測定が行われる。この検出ゾーン
では点着した抗原又は抗体が長時間保存すると時間の経
過とともに変性し、その結果、測定の感度の低下や非特
異反応の上昇などが観察された。そこで、この検出ゾー
ンでは、展開液中を移動する測定対象物及び標識試薬と
常に所定の反応が起こるように、通常試験片は乾燥状態
を保ち、低温（４℃付近）で保存することが行われてい
た。
開器材上に抗原又は抗体を点着し、検出ゾーンが形成さ
れている。測定時には、展開器材上の検出ゾーンに免疫
複合体を形成して結合した標識物質を測定することによ
り、測定対象物の免疫測定が行われる。この検出ゾーン
では点着した抗原又は抗体が長時間保存すると時間の経
過とともに変性し、その結果、測定の感度の低下や非特
異反応の上昇などが観察された。そこで、この検出ゾー
ンでは、展開液中を移動する測定対象物及び標識試薬と
常に所定の反応が起こるように、通常試験片は乾燥状態
を保ち、低温（４℃付近）で保存することが行われてい
た。
【０００４】一方、従来の固相を用いる免疫測定用試薬
では、抗原又は抗体を結合したポリスチレンビーズ、マ
イクロプレートのウエル等の固相をさらに、ウシ血清ア
ルブミン（ＢＳＡ）、正常家兎血清（ＮＲＳ）、ショ糖
等のコーティング物質でコートすると非特異反応が抑制
され、この抗原又は抗体が安定化することが知られてい
る（例えば特開昭５４−１２８３９６号、特開昭６０−
３５３６３号等参照）。これらの方法では、まず固相に
抗原又は抗体を結合させたのちに、さらにこの固相を前
記コーティング物質でコートすることは行われたが、抗
原又は抗体とコーティング物質との混合物を用いて固相
と反応させることはなかった。
では、抗原又は抗体を結合したポリスチレンビーズ、マ
イクロプレートのウエル等の固相をさらに、ウシ血清ア
ルブミン（ＢＳＡ）、正常家兎血清（ＮＲＳ）、ショ糖
等のコーティング物質でコートすると非特異反応が抑制
され、この抗原又は抗体が安定化することが知られてい
る（例えば特開昭５４−１２８３９６号、特開昭６０−
３５３６３号等参照）。これらの方法では、まず固相に
抗原又は抗体を結合させたのちに、さらにこの固相を前
記コーティング物質でコートすることは行われたが、抗
原又は抗体とコーティング物質との混合物を用いて固相
と反応させることはなかった。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】従来、免疫測定用の試
験片は低温で保存されていたが、長期間保存した試験片
では測定感度が低下することがあった。その主たる原因
は試験片に含まれる検出ゾーンに結合した抗原又は抗体
が徐々に変成するためと考えられる。さらに、抗原又は
抗体を結合した試験片は使用状態の室温付近で保存をす
ると、その低下速度が加速された。
験片は低温で保存されていたが、長期間保存した試験片
では測定感度が低下することがあった。その主たる原因
は試験片に含まれる検出ゾーンに結合した抗原又は抗体
が徐々に変成するためと考えられる。さらに、抗原又は
抗体を結合した試験片は使用状態の室温付近で保存をす
ると、その低下速度が加速された。
【０００６】一方、試験片による測定では、試験片上の
検出ゾーンに乾燥して固定された抗原又は抗体は、展開
液の接触とともに溶液状態に復元され、展開液の展開と
ともに移動して到達する試薬と反応する。よって、検出
ゾーンの抗原又は抗体は、展開液によって速やかに溶液
状態に復元され、次いで展開液中に含まれる抗原又は抗
体と反応して免疫複合体を形成することが高感度測定に
は求められていた。しかしながら、検体中の微量成分の
測定を行うには従来の方法では充分な効果を示すもので
はなかった。
検出ゾーンに乾燥して固定された抗原又は抗体は、展開
液の接触とともに溶液状態に復元され、展開液の展開と
ともに移動して到達する試薬と反応する。よって、検出
ゾーンの抗原又は抗体は、展開液によって速やかに溶液
状態に復元され、次いで展開液中に含まれる抗原又は抗
体と反応して免疫複合体を形成することが高感度測定に
は求められていた。しかしながら、検体中の微量成分の
測定を行うには従来の方法では充分な効果を示すもので
はなかった。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明者らは鋭意研究し
た結果、免疫測定用試験片の展開器材に、糖及び／又は
尿素と抗原又は抗体との混合物を点着した後、乾燥して
検出ゾーンを設けた試験片は、測定対象物を感度良く測
定できることを見出し本発明を完成した。
た結果、免疫測定用試験片の展開器材に、糖及び／又は
尿素と抗原又は抗体との混合物を点着した後、乾燥して
検出ゾーンを設けた試験片は、測定対象物を感度良く測
定できることを見出し本発明を完成した。
【０００８】本発明は、免疫測定用試験片の展開器材
に、糖及び／又は尿素と抗原又は抗体との混合物を点着
し、乾燥して検出ゾーンを設けた試験片、前記試験片の
展開器材に展開液供給ゾーンと、標識試薬ゾーンと、検
体点着ゾーンと、展開液吸収ゾーンとを設けた試験片、
及び前記試験片を用いる免疫測定法を提供する。
に、糖及び／又は尿素と抗原又は抗体との混合物を点着
し、乾燥して検出ゾーンを設けた試験片、前記試験片の
展開器材に展開液供給ゾーンと、標識試薬ゾーンと、検
体点着ゾーンと、展開液吸収ゾーンとを設けた試験片、
及び前記試験片を用いる免疫測定法を提供する。
【０００９】
【発明の実施の形態】本発明の免疫測定を実施するため
の免疫測定用試験片の好ましい態様を図１に模式的に示
す。図１に示すように本発明の試験片は、展開器材１か
ら構成されている。展開器材１は毛細管現象によって輸
液可能な吸水性の材料で構成される。この好ましい材料
としては、例えばセルロース、ニトロセルロース等のセ
ルロース又はセルロース誘導体、ガラス繊維等により構
成されたろ紙、多孔質膜等である。この展開器材の大き
さには制限はないが、例えば幅３ｍｍ〜１０ｍｍ、長さ
３０ｍｍ〜１００ｍｍ程度のストリップ状であり、厚さ
が１００μｍ〜１ｍｍ程度のものが取扱いが容易であり
好ましい。
の免疫測定用試験片の好ましい態様を図１に模式的に示
す。図１に示すように本発明の試験片は、展開器材１か
ら構成されている。展開器材１は毛細管現象によって輸
液可能な吸水性の材料で構成される。この好ましい材料
としては、例えばセルロース、ニトロセルロース等のセ
ルロース又はセルロース誘導体、ガラス繊維等により構
成されたろ紙、多孔質膜等である。この展開器材の大き
さには制限はないが、例えば幅３ｍｍ〜１０ｍｍ、長さ
３０ｍｍ〜１００ｍｍ程度のストリップ状であり、厚さ
が１００μｍ〜１ｍｍ程度のものが取扱いが容易であり
好ましい。
【００１０】展開器材１の両端には、展開液供給ゾーン
の展開液供給パット２と展開液吸収ゾーンの吸水パット
６とが設けられている。これらは、吸水性の前記展開器
材と同じ材料の他、例えばスポンジ、吸水性の不織布等
を挙げることができる。これらの展開液供給パット２と
吸水パット６は通常前記展開器材１よりも厚く形成され
るが、このことは必須ではない。また展開液供給パット
２と吸水パット６は前記展開器材の形状を変形させて製
造することもできる。
の展開液供給パット２と展開液吸収ゾーンの吸水パット
６とが設けられている。これらは、吸水性の前記展開器
材と同じ材料の他、例えばスポンジ、吸水性の不織布等
を挙げることができる。これらの展開液供給パット２と
吸水パット６は通常前記展開器材１よりも厚く形成され
るが、このことは必須ではない。また展開液供給パット
２と吸水パット６は前記展開器材の形状を変形させて製
造することもできる。
【００１１】展開器材１には検出ゾーン５が設けられて
いる。検出ゾーン５には、糖及び／又は尿素と抗原又は
抗体との混合物を溶解した水溶液を展開器材に点着し、
乾燥して形成される。この検出ゾーンに使用される糖と
しては、例えばショ糖、グルコース、ガラクトース、ラ
クトース、トレハロース、マンノース、マンニトール等
の単糖類、少糖類等を挙げることができる。糖や尿素は
通常市販され容易に入手可能な化合物を用いることがで
きる。糖や尿素は、抗原又は抗体と複合体を作って検出
ゾーンを形成し、抗原又は抗体が展開液に対して高い親
和性を保つことができる化合物である。
いる。検出ゾーン５には、糖及び／又は尿素と抗原又は
抗体との混合物を溶解した水溶液を展開器材に点着し、
乾燥して形成される。この検出ゾーンに使用される糖と
しては、例えばショ糖、グルコース、ガラクトース、ラ
クトース、トレハロース、マンノース、マンニトール等
の単糖類、少糖類等を挙げることができる。糖や尿素は
通常市販され容易に入手可能な化合物を用いることがで
きる。糖や尿素は、抗原又は抗体と複合体を作って検出
ゾーンを形成し、抗原又は抗体が展開液に対して高い親
和性を保つことができる化合物である。
【００１２】また検出ゾーンに点着される抗原又は抗体
としては、免疫測定の対象物に対応した物質が用いら
れ、例えばＡ型、Ｂ型、Ｃ型等の肝炎ウイルス類、後天
性免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、成人Ｔ細胞白血病ウイ
ルス（ＨＴＬＶ）等のレトロウイルス類、カルシトニ
ン、サイロキシン、エストロゲン、エラストラジオール
等の低分子抗原、ＡＦＰ、ＣＥＡ，フェリチン、ＣＡ１
９−９、ＣＡ１２５等の腫瘍関連抗原、ＴＳＨ、インス
リン等の高分子ホルモン、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−
６等のサイトカイン、ＥＧＦ、ＰＤＧＦ等のグロースフ
ァクター、便中ヘモグロビン（ＦＯＢＴ）等の他、前記
測定対象物に対する抗体、ウイルスのＤＮＡ、ＲＮＡに
対する抗体等である。これらの抗原は、例えば培養液か
ら取得される天然型の抗原、遺伝子組換え法により製造
した組換え抗原、ペプチド合成法による合成抗原等であ
ってもよく、さらに抗体としては、モノクローナル抗
体、ポリクローナル抗体であってもよい。
としては、免疫測定の対象物に対応した物質が用いら
れ、例えばＡ型、Ｂ型、Ｃ型等の肝炎ウイルス類、後天
性免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、成人Ｔ細胞白血病ウイ
ルス（ＨＴＬＶ）等のレトロウイルス類、カルシトニ
ン、サイロキシン、エストロゲン、エラストラジオール
等の低分子抗原、ＡＦＰ、ＣＥＡ，フェリチン、ＣＡ１
９−９、ＣＡ１２５等の腫瘍関連抗原、ＴＳＨ、インス
リン等の高分子ホルモン、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−
６等のサイトカイン、ＥＧＦ、ＰＤＧＦ等のグロースフ
ァクター、便中ヘモグロビン（ＦＯＢＴ）等の他、前記
測定対象物に対する抗体、ウイルスのＤＮＡ、ＲＮＡに
対する抗体等である。これらの抗原は、例えば培養液か
ら取得される天然型の抗原、遺伝子組換え法により製造
した組換え抗原、ペプチド合成法による合成抗原等であ
ってもよく、さらに抗体としては、モノクローナル抗
体、ポリクローナル抗体であってもよい。
【００１３】検出ゾーン５に糖を単独で添加する場合に
は、固相緩衝液０．１重量％〜１０重量％、好ましくは
１．０重量％〜５．０重量％、尿素を単独で添加する場
合には、固相緩衝液０．６重量％〜３６重量％、好まし
くは１２重量％〜３０重量％、さらに糖及び尿素を混合
して添加する場合には、前記の量を混合して用いるとが
できる。糖及び尿素は検出ゾーンに添加する検出ゾーン
には糖や尿素に加えて、さらに周知の非特異吸着防止
剤、安定化剤、溶解剤、塩類等を添加することもでき
る。糖及び／又は尿素と抗原又は抗体との混合物は、通
常水、緩衝液等に溶解した水溶液を試験片に点着して乾
燥し、検出ゾーンを形成するとができる。この検出ゾー
ンの乾燥には、点着した水溶液を低温で乾燥させる方
法、凍結乾燥する方法等により製造することができる。
この検出ゾーンは従来と同様に線状に形成されることが
好ましいが、必ずしも線状である必要はなく、円形等の
他の形状であってもよい。
は、固相緩衝液０．１重量％〜１０重量％、好ましくは
１．０重量％〜５．０重量％、尿素を単独で添加する場
合には、固相緩衝液０．６重量％〜３６重量％、好まし
くは１２重量％〜３０重量％、さらに糖及び尿素を混合
して添加する場合には、前記の量を混合して用いるとが
できる。糖及び尿素は検出ゾーンに添加する検出ゾーン
には糖や尿素に加えて、さらに周知の非特異吸着防止
剤、安定化剤、溶解剤、塩類等を添加することもでき
る。糖及び／又は尿素と抗原又は抗体との混合物は、通
常水、緩衝液等に溶解した水溶液を試験片に点着して乾
燥し、検出ゾーンを形成するとができる。この検出ゾー
ンの乾燥には、点着した水溶液を低温で乾燥させる方
法、凍結乾燥する方法等により製造することができる。
この検出ゾーンは従来と同様に線状に形成されることが
好ましいが、必ずしも線状である必要はなく、円形等の
他の形状であってもよい。
【００１４】展開器材１には検体点着ゾーン３と標識試
薬ゾーン４とが設けられている。標識試薬ゾーン４に
は、検出すべき抗原又は抗体が反応する抗体又は抗原の
標識された標識試薬が点着され、乾燥状態で含有されて
いる。標識物質としては、酵素、着色粒子、蛍光粒子、
化学発光粒子、金属（金）コロイド粒子、放射性同位元
素、化学発光物質、蛍光物質等の標識免疫測定法に使用
する物質を挙げることができる。標識物質の酵素として
は、酵素免疫測定法で使用される例えば、アルカリ性ホ
スファターゼ、ペルオキシダーゼ、β−ガラクトシダー
ゼ等を用いることができる。
薬ゾーン４とが設けられている。標識試薬ゾーン４に
は、検出すべき抗原又は抗体が反応する抗体又は抗原の
標識された標識試薬が点着され、乾燥状態で含有されて
いる。標識物質としては、酵素、着色粒子、蛍光粒子、
化学発光粒子、金属（金）コロイド粒子、放射性同位元
素、化学発光物質、蛍光物質等の標識免疫測定法に使用
する物質を挙げることができる。標識物質の酵素として
は、酵素免疫測定法で使用される例えば、アルカリ性ホ
スファターゼ、ペルオキシダーゼ、β−ガラクトシダー
ゼ等を用いることができる。
【００１５】図１の試験片では、検体点着ゾーン３が標
識試薬ゾーン４の上に設けられている。標識試薬ゾーン
４は試験片１上に前記標識試薬を乾燥状態で含有するも
のであってもよいが、吸水性の材料に標識試薬を含有さ
せた標識試薬パットで標識試薬ゾーン４とし、その上に
検体点着ゾーン３をを設けることが好ましい。標識体パ
ットで検体点着ゾーン３を構成する場合には、このパッ
トに多量の標識試薬を含有させることができ、さらに多
量の検体液を添加することが可能になり、その結果測定
感度が向上する。
識試薬ゾーン４の上に設けられている。標識試薬ゾーン
４は試験片１上に前記標識試薬を乾燥状態で含有するも
のであってもよいが、吸水性の材料に標識試薬を含有さ
せた標識試薬パットで標識試薬ゾーン４とし、その上に
検体点着ゾーン３をを設けることが好ましい。標識体パ
ットで検体点着ゾーン３を構成する場合には、このパッ
トに多量の標識試薬を含有させることができ、さらに多
量の検体液を添加することが可能になり、その結果測定
感度が向上する。
【００１６】標識試薬パットの材質は、吸水性のあるも
のであれば特に限定されず、スポンジ、吸水性不織布、
ろ紙等を挙げることができる。標識試薬パットの大きさ
は、特に限定されないが、通常縦と横が３ｍｍ〜１０ｍ
ｍ程度で厚さが０．５ｍｍ〜４ｍｍ程度である。標識試
薬パットに含有される標識試薬の量は、試験片に直接点
着する場合より多くすることができ、特に限定されず、
また測定対象物により異なるが、通常０．０１μｇ〜５
μｇ程度である。
のであれば特に限定されず、スポンジ、吸水性不織布、
ろ紙等を挙げることができる。標識試薬パットの大きさ
は、特に限定されないが、通常縦と横が３ｍｍ〜１０ｍ
ｍ程度で厚さが０．５ｍｍ〜４ｍｍ程度である。標識試
薬パットに含有される標識試薬の量は、試験片に直接点
着する場合より多くすることができ、特に限定されず、
また測定対象物により異なるが、通常０．０１μｇ〜５
μｇ程度である。
【００１７】検体点着ゾーン３は、上記の通り標識試薬
ゾーン４上に設けることもできるが、試験片１上の検出
ゾーン５より添加液の展開方向の上流側で、展開液供給
パット２の下流側のいずれの位置に設けるともできる。
検体点着ゾーンを試薬パットを持つ標識試薬ゾーン上に
設けた場合には、検体を試験片上に設ける試験片に比べ
点着する検体量を多くすることができ、検体中の微量物
質の測定には好ましい。
ゾーン４上に設けることもできるが、試験片１上の検出
ゾーン５より添加液の展開方向の上流側で、展開液供給
パット２の下流側のいずれの位置に設けるともできる。
検体点着ゾーンを試薬パットを持つ標識試薬ゾーン上に
設けた場合には、検体を試験片上に設ける試験片に比べ
点着する検体量を多くすることができ、検体中の微量物
質の測定には好ましい。
【００１８】また、展開液供給パット２の上部又は下部
に展開液槽７を付設し、該液槽と展開液供給パット２と
を金属箔又は高分子フィルムのような指の力で破断可能
な破断性膜で隔て、該液槽内に展開液を収容しておく
と、使用時に該破断性膜を容易に破断することにより展
開液を展開液供給パットに供給することができ、取扱い
が簡便である。
に展開液槽７を付設し、該液槽と展開液供給パット２と
を金属箔又は高分子フィルムのような指の力で破断可能
な破断性膜で隔て、該液槽内に展開液を収容しておく
と、使用時に該破断性膜を容易に破断することにより展
開液を展開液供給パットに供給することができ、取扱い
が簡便である。
【００１９】展開液槽７に含有される展開液は、例えば
Ｎ−シクロヘキシル−２−アミノエタンスルホン酸（Ｃ
ＨＥＳ）、Ｎ−シクロヘキシル−２−ヒドロキシ−３−
アミノプロパンスルホン酸（ＣＡＰＳＯ）等の緩衝液を
含有することができる。また、本発明の試験片で標識物
質として酵素を使用する場合には、この展開液と、展開
液供給パット２とのいづれか一方又は両方に酵素に対応
する基質を含有することができる。展開液供給パット２
に基質を含有させるには、基質溶液をパットに点着後、
乾燥させることにより製造することができる。基質とし
ては、上記酵素に対応した周知の酵素免疫測定法に使用
される発色基質、蛍光基質、発光基質等を用いることが
できる。発色基質を使用する場合には、検出ゾーンの発
色を色差計等の測定機器の他、目視で測定を行うことも
できるため、簡便な測定を行うことができる。
Ｎ−シクロヘキシル−２−アミノエタンスルホン酸（Ｃ
ＨＥＳ）、Ｎ−シクロヘキシル−２−ヒドロキシ−３−
アミノプロパンスルホン酸（ＣＡＰＳＯ）等の緩衝液を
含有することができる。また、本発明の試験片で標識物
質として酵素を使用する場合には、この展開液と、展開
液供給パット２とのいづれか一方又は両方に酵素に対応
する基質を含有することができる。展開液供給パット２
に基質を含有させるには、基質溶液をパットに点着後、
乾燥させることにより製造することができる。基質とし
ては、上記酵素に対応した周知の酵素免疫測定法に使用
される発色基質、蛍光基質、発光基質等を用いることが
できる。発色基質を使用する場合には、検出ゾーンの発
色を色差計等の測定機器の他、目視で測定を行うことも
できるため、簡便な測定を行うことができる。
【００２０】以下に本発明の試験片を用いた測定法を説
明する。本発明の免疫測定用試験片を用いて測定を行う
には、まず検体液を検体点着ゾーン３に加えると共に展
開液パット２に展開液槽７から展開液を供給する。試験
片１を展開する展開液には、標識物質が酵素の場合には
各種基質を含む。検体点着ゾーン３に加えられた検体
は、標識試薬ゾーン４に移動し、検体中の抗原又は抗体
が標識試薬と反応し、試験片を流れてくる展開液に流さ
れる。これらが展開液により流されるて検出ゾーンに到
達すると、検体中の抗原又は抗体が検出ゾーン５に固定
化されている抗体又は抗原にトラップされ、そこに留ま
る。この場合、検体中の抗原又は抗体は、標識試薬と結
合しているから標識試薬も検出ラインに留まる。従っ
て、検体液中に検出すべき抗原又は抗体が含まれている
場合には検出ゾーン４で標識物質が検出される。酵素を
標識物質とし、発色基質を用いる場合には、検出ゾーン
で発色が観察される。尚、展開液及びトラップされなか
った他の物質は吸水パット６に吸収される。
明する。本発明の免疫測定用試験片を用いて測定を行う
には、まず検体液を検体点着ゾーン３に加えると共に展
開液パット２に展開液槽７から展開液を供給する。試験
片１を展開する展開液には、標識物質が酵素の場合には
各種基質を含む。検体点着ゾーン３に加えられた検体
は、標識試薬ゾーン４に移動し、検体中の抗原又は抗体
が標識試薬と反応し、試験片を流れてくる展開液に流さ
れる。これらが展開液により流されるて検出ゾーンに到
達すると、検体中の抗原又は抗体が検出ゾーン５に固定
化されている抗体又は抗原にトラップされ、そこに留ま
る。この場合、検体中の抗原又は抗体は、標識試薬と結
合しているから標識試薬も検出ラインに留まる。従っ
て、検体液中に検出すべき抗原又は抗体が含まれている
場合には検出ゾーン４で標識物質が検出される。酵素を
標識物質とし、発色基質を用いる場合には、検出ゾーン
で発色が観察される。尚、展開液及びトラップされなか
った他の物質は吸水パット６に吸収される。
【００２１】一方、検体液中に検出すべき抗原又は抗体
が含まれていない場合には、標識試薬は検出ゾーン５に
トラップされないので、そのまま吸収パッドに吸収され
てしまい、検出ゾーン５には標識物質は観察されない。
従って、検出ゾーンの標識物質を観察することにより検
体中の抗原又は抗体が含まれているか否かを知ることが
できる。尚、標識物質の酵素と、基質との一部は検出ゾ
ーンに到達する前に反応しつつ移動しても構わないが、
検出ゾーンでは展開液中に測定を行うために十分な基質
量を含有している。この場合、反応した基質のうち、検
出ゾーンにトラップされなかったものは、吸水パット６
に吸収される。
が含まれていない場合には、標識試薬は検出ゾーン５に
トラップされないので、そのまま吸収パッドに吸収され
てしまい、検出ゾーン５には標識物質は観察されない。
従って、検出ゾーンの標識物質を観察することにより検
体中の抗原又は抗体が含まれているか否かを知ることが
できる。尚、標識物質の酵素と、基質との一部は検出ゾ
ーンに到達する前に反応しつつ移動しても構わないが、
検出ゾーンでは展開液中に測定を行うために十分な基質
量を含有している。この場合、反応した基質のうち、検
出ゾーンにトラップされなかったものは、吸水パット６
に吸収される。
【００２２】なお、上記説明では、標識試薬ゾーンの標
識された抗原又は抗体、及び検出ゾーンに固定する物質
を抗原又は抗体としたが、本願明細書で言う抗体又は抗
原は、抗原抗体反応が可能な物質であればよく、例えば
抗体の断片（Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）2 フラ
グメント等）、ハプテン等も包含する。
識された抗原又は抗体、及び検出ゾーンに固定する物質
を抗原又は抗体としたが、本願明細書で言う抗体又は抗
原は、抗原抗体反応が可能な物質であればよく、例えば
抗体の断片（Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）2 フラ
グメント等）、ハプテン等も包含する。
【００２３】本発明の免疫測定法に使用する検体として
は、例えば全血、血清、血漿、尿、リンパ液等の体液、
便抽出液等を挙げることができる。
は、例えば全血、血清、血漿、尿、リンパ液等の体液、
便抽出液等を挙げることができる。
【００２４】
【実施例】以下、参考例、実施例及び比較例により本発
明を更に詳細に説明する。
明を更に詳細に説明する。
【００２５】参考例１ アルカリ性ホスファターゼ標識
ＨＢｓ抗原の作製 Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原（ＨＢｓ抗原，明治乳業社
製）を１ｍｇに１／２５重量のＮ−スクシニミジル−６
−マレイミドヘキサン酸（ＥＭＣＳ；同仁化学社製）を
加え３０℃、１時間放置し、マレイミド化ＨＢｓ抗原を
得た。次にアルカリ性ホスファターゼ１０ｍｇに１／
６．７重量の２−イミノチオラン塩酸塩（ナカライ社
製）を加え２５℃、１時間放置しチオール化アルカリ性
ホスファターゼ７．４ｍｇを得た。マレイミド化ＨＢｓ
抗原０．８ｍｇとチオール化アルカリ性ホスファターゼ
７．４ｍｇを混合し、４℃一夜反応し、ゲルろ過クロマ
トグラフィーによって未反応の抗原及び酵素を除いてア
ルカリ性ホスファターゼ標識ＨＢｓ抗原を得た。
ＨＢｓ抗原の作製 Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原（ＨＢｓ抗原，明治乳業社
製）を１ｍｇに１／２５重量のＮ−スクシニミジル−６
−マレイミドヘキサン酸（ＥＭＣＳ；同仁化学社製）を
加え３０℃、１時間放置し、マレイミド化ＨＢｓ抗原を
得た。次にアルカリ性ホスファターゼ１０ｍｇに１／
６．７重量の２−イミノチオラン塩酸塩（ナカライ社
製）を加え２５℃、１時間放置しチオール化アルカリ性
ホスファターゼ７．４ｍｇを得た。マレイミド化ＨＢｓ
抗原０．８ｍｇとチオール化アルカリ性ホスファターゼ
７．４ｍｇを混合し、４℃一夜反応し、ゲルろ過クロマ
トグラフィーによって未反応の抗原及び酵素を除いてア
ルカリ性ホスファターゼ標識ＨＢｓ抗原を得た。
【００２６】実施例１ ＨＢｓ抗体測定用試験片 幅５ｍｍ、長さ５０ｍｍのセルロース膜（ミリポア社
製）に上端から１５ｍｍの位置にＨＢｓ抗原（明治乳業
社製）を３６０ｎｇ（４％ショ糖）を塗布装置でライン
状に点着後、乾燥して検出ゾーンを作製した。参考例１
で作製したアルカリ性ホスファターゼ標識ＨＢｓ抗原溶
液２５ｎｇを幅５ｍｍ、長さ５ｍｍに切ったポリビニル
アルコール（ＰＶＡ）シートに点着し乾燥したパット
を、マトリックスの上端から２５ｍｍの位置に置き標識
試薬ゾーンと検体点着ゾーンとした。更に吸水パットと
してセルロース膜の上端１０ｍｍの位置に幅１０ｍｍ、
長さ２０ｍｍ、厚さ１ｍｍのろ紙を付設した。展開液供
給ゾーンの展開液槽には０．１Ｍ ＣＨＭＳ／ＮａＯＨ
（ｐＨ１０．０）、１ｍＭ ＭｇＣｌ2 を添加しアルミ
シールで分析開始まで密閉した。セルロース膜下端１０
ｍｍの位置に幅５ｍｍ、長さ２０ｍｍのろ紙（ミリポア
社製）の上端から３ｍｍの位置に発色基質として５−ブ
ロモ−４−クロロ−３−インドリルリン酸（ＢＣＩＰ）
１００μｇを添加し乾燥させたろ紙を展開液ゾーンに付
設し、展開液ゾーンろ紙としＨＢｓ抗体測定用試験片
（ショ糖（＋））を製造した。
製）に上端から１５ｍｍの位置にＨＢｓ抗原（明治乳業
社製）を３６０ｎｇ（４％ショ糖）を塗布装置でライン
状に点着後、乾燥して検出ゾーンを作製した。参考例１
で作製したアルカリ性ホスファターゼ標識ＨＢｓ抗原溶
液２５ｎｇを幅５ｍｍ、長さ５ｍｍに切ったポリビニル
アルコール（ＰＶＡ）シートに点着し乾燥したパット
を、マトリックスの上端から２５ｍｍの位置に置き標識
試薬ゾーンと検体点着ゾーンとした。更に吸水パットと
してセルロース膜の上端１０ｍｍの位置に幅１０ｍｍ、
長さ２０ｍｍ、厚さ１ｍｍのろ紙を付設した。展開液供
給ゾーンの展開液槽には０．１Ｍ ＣＨＭＳ／ＮａＯＨ
（ｐＨ１０．０）、１ｍＭ ＭｇＣｌ2 を添加しアルミ
シールで分析開始まで密閉した。セルロース膜下端１０
ｍｍの位置に幅５ｍｍ、長さ２０ｍｍのろ紙（ミリポア
社製）の上端から３ｍｍの位置に発色基質として５−ブ
ロモ−４−クロロ−３−インドリルリン酸（ＢＣＩＰ）
１００μｇを添加し乾燥させたろ紙を展開液ゾーンに付
設し、展開液ゾーンろ紙としＨＢｓ抗体測定用試験片
（ショ糖（＋））を製造した。
【００２７】比較例１ ＨＢｓ抗体測定用試験片（ショ
糖（−）） 幅５ｍｍ、長さ５０ｍｍのセルロース膜（ミリポア社
製）に上端から１５ｍｍの位置にＨＢｓ抗原（明治乳業
社製）を３６０ｎｇを塗布装置でライン状に点着後、乾
燥して検出ゾーンを作製した。以下実施例１と同様にし
てＨＢｓ抗体測定用試験片（ショ糖（−））を製造し
た。
糖（−）） 幅５ｍｍ、長さ５０ｍｍのセルロース膜（ミリポア社
製）に上端から１５ｍｍの位置にＨＢｓ抗原（明治乳業
社製）を３６０ｎｇを塗布装置でライン状に点着後、乾
燥して検出ゾーンを作製した。以下実施例１と同様にし
てＨＢｓ抗体測定用試験片（ショ糖（−））を製造し
た。
【００２８】実施例２ ＨＢｓ抗体の測定 実施例１で作製した試験片（ショ糖（＋））を用いてＨ
Ｂｓ抗体の測定を行った。まず、室温にてＨＢｓ抗体３
０．９ｍＩＵ／ｍｌ（陽性スタンダード）溶液２５μｌ
を検体点着ゾーンに添加後、展開液槽を破り展開液を展
開液供給ゾーンに供給し、測定を開始した。検出ゾーン
の呈色を目視判定するまでの時間を計測した。更に１５
分後の呈色をデジタルカメラＲＤ−１７５（ミノルタ社
製）にて撮影し、ＮＩＨ ＩＭＡＧＥ画像処理ソフトに
て検出ゾーンの呈色を測定した。また、比較例１で製造
したＨＢｓ抗体測定用試験片（ショ糖（−））を用いて
ＨＢｓ抗体３０．９ｍＩＵ／ｍｌ（陽性スタンダード）
の測定を行った。以上の結果を図２及び３に示す。
Ｂｓ抗体の測定を行った。まず、室温にてＨＢｓ抗体３
０．９ｍＩＵ／ｍｌ（陽性スタンダード）溶液２５μｌ
を検体点着ゾーンに添加後、展開液槽を破り展開液を展
開液供給ゾーンに供給し、測定を開始した。検出ゾーン
の呈色を目視判定するまでの時間を計測した。更に１５
分後の呈色をデジタルカメラＲＤ−１７５（ミノルタ社
製）にて撮影し、ＮＩＨ ＩＭＡＧＥ画像処理ソフトに
て検出ゾーンの呈色を測定した。また、比較例１で製造
したＨＢｓ抗体測定用試験片（ショ糖（−））を用いて
ＨＢｓ抗体３０．９ｍＩＵ／ｍｌ（陽性スタンダード）
の測定を行った。以上の結果を図２及び３に示す。
【００２９】実施例３ ＨＢｓ抗体測定用試験片の安定
性試験 実施例１及び比較例１で製造したＨＢｓ抗体測定用試験
片を用いて７日間の負荷試験を行った。それぞれの試験
片を４℃又は３７℃で７日間保存後、ＨＢｓ抗体３０．
９ｍＩＵ／ｍｌ（陽性スタンダード）２５μｌを検体点
着ゾーンに添加して、測定を行った。検出ゾーンの呈色
を目視判定するまでの時間を計測した。その結果を図４
及び５に示す。
性試験 実施例１及び比較例１で製造したＨＢｓ抗体測定用試験
片を用いて７日間の負荷試験を行った。それぞれの試験
片を４℃又は３７℃で７日間保存後、ＨＢｓ抗体３０．
９ｍＩＵ／ｍｌ（陽性スタンダード）２５μｌを検体点
着ゾーンに添加して、測定を行った。検出ゾーンの呈色
を目視判定するまでの時間を計測した。その結果を図４
及び５に示す。
【００３０】参考例２ アルカリ性ホスファターゼ標識
ＨＣＶ抗原の作製 Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）抗原１ｍｇに１／２５重量
のＥＭＣＳを加え３０℃、１時間放置し、マレイミド化
ＨＢｓ抗原を得た。次に、アルカリ性ホスファターゼ１
０ｍｇに１／６．７重量の２−イミノチオラン塩酸塩
（ナカライ社製）を加え２５℃、１時間放置しチオール
化アルカリ性ホスファターゼを得た。マレイミド化ＨＢ
ｓ抗原０．８ｍｇとチオール化アルカリ性ホスファター
ゼ７．４ｍｇを混合し、４℃で一夜反応し、ゲルろ過ク
ロマトグラフィーにて未反応の抗原及び酵素を除いてア
ルカリ性ホスファターゼ標識ＨＣＶ抗原を得た。
ＨＣＶ抗原の作製 Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）抗原１ｍｇに１／２５重量
のＥＭＣＳを加え３０℃、１時間放置し、マレイミド化
ＨＢｓ抗原を得た。次に、アルカリ性ホスファターゼ１
０ｍｇに１／６．７重量の２−イミノチオラン塩酸塩
（ナカライ社製）を加え２５℃、１時間放置しチオール
化アルカリ性ホスファターゼを得た。マレイミド化ＨＢ
ｓ抗原０．８ｍｇとチオール化アルカリ性ホスファター
ゼ７．４ｍｇを混合し、４℃で一夜反応し、ゲルろ過ク
ロマトグラフィーにて未反応の抗原及び酵素を除いてア
ルカリ性ホスファターゼ標識ＨＣＶ抗原を得た。
【００３１】実施例４ ＨＣＶ抗体検出用試験片の作製 幅５ｍｍ、長さ５０ｍｍのセルロース膜（ミリポア社
製）に上端から１５ｍｍの位置にＨＣＶ抗原７００ｎｇ
（２Ｍ尿素）を塗布装置でライン状に点着後、乾燥して
検出ゾーンを作製した。参考例２で作製したアルカリ性
ホスファターゼ標識ＨＣＶ抗原溶液１５ｎｇを幅５ｍ
ｍ、長さ５ｍｍに切ったポリビニルアルコール（ＰＶ
Ａ）シートに点着し乾燥したパットを、マトリックスの
上端から２５ｍｍの位置に置き標識試薬ゾーンと検体点
着ゾーンとした。更に吸水パットとしてセルロース膜の
上端１０ｍｍの位置に幅１０ｍｍ、長さ２０ｍｍ、厚さ
１ｍｍのろ紙を付設した。展開液供給ゾーンの展開液槽
には０．１Ｍ ＣＨＭＳ／ＮａＯＨ（ｐＨ１０．０）、
１ｍＭ ＭｇＣｌ2 を添加しアルミシールで分析開始ま
で密閉した。セルロース膜下端１０ｍｍの位置に幅５ｍ
ｍ、長さ２０ｍｍのろ紙（ミリポア社製）の上端に発色
基質としてＢＣＩＰ１００μｇを添加し乾燥させたろ紙
を展開液ゾーンに付設し、展開液ゾーンろ紙としＨＣＶ
抗体測定用試験片（尿素（＋））を製造した。
製）に上端から１５ｍｍの位置にＨＣＶ抗原７００ｎｇ
（２Ｍ尿素）を塗布装置でライン状に点着後、乾燥して
検出ゾーンを作製した。参考例２で作製したアルカリ性
ホスファターゼ標識ＨＣＶ抗原溶液１５ｎｇを幅５ｍ
ｍ、長さ５ｍｍに切ったポリビニルアルコール（ＰＶ
Ａ）シートに点着し乾燥したパットを、マトリックスの
上端から２５ｍｍの位置に置き標識試薬ゾーンと検体点
着ゾーンとした。更に吸水パットとしてセルロース膜の
上端１０ｍｍの位置に幅１０ｍｍ、長さ２０ｍｍ、厚さ
１ｍｍのろ紙を付設した。展開液供給ゾーンの展開液槽
には０．１Ｍ ＣＨＭＳ／ＮａＯＨ（ｐＨ１０．０）、
１ｍＭ ＭｇＣｌ2 を添加しアルミシールで分析開始ま
で密閉した。セルロース膜下端１０ｍｍの位置に幅５ｍ
ｍ、長さ２０ｍｍのろ紙（ミリポア社製）の上端に発色
基質としてＢＣＩＰ１００μｇを添加し乾燥させたろ紙
を展開液ゾーンに付設し、展開液ゾーンろ紙としＨＣＶ
抗体測定用試験片（尿素（＋））を製造した。
【００３２】比較例２ ＨＣＶ抗体検出用試験片の作製 幅５ｍｍ、長さ５０ｍｍのセルロース膜（ミリポア社
製）に上端から１５ｍｍの位置にＨＣＶ抗原７００ｎｇ
を塗布装置でライン状に点着後、乾燥して検出ゾーンを
作製した。以下実施例４と同様にしてＨＣＶ抗体測定用
試験片（尿素（−））を製造した。
製）に上端から１５ｍｍの位置にＨＣＶ抗原７００ｎｇ
を塗布装置でライン状に点着後、乾燥して検出ゾーンを
作製した。以下実施例４と同様にしてＨＣＶ抗体測定用
試験片（尿素（−））を製造した。
【００３３】実施例５ ＨＣＶ抗体の測定 実施例４で作製した試験片（尿素（＋））を用いてＨＣ
Ｖ抗体の分析を行った。まず、室温にてＨＣＶ陽性スタ
ンダード（陰性スタンダードで５倍希釈しＥＬＩＳＡ
３．０（オーソ社製）でカット・オフインデックス値が
１．２８）溶液２５μｌを検体点着ゾーンに添加後、展
開液槽を破り展開液を展開液供給ゾーンに供給し、測定
を開始した。検出ゾーンの呈色を目視判定するまでの時
間を計測した。また、比較例２で作製したＨＣＶ抗体測
定用試験片（尿素（−））を用い室温にてＨＣＶ陽性ス
タンダード溶液をＨＣＶ陰性スタンダードで１６倍に希
釈したものの測定を行った。以上の結果を図６に示す。
Ｖ抗体の分析を行った。まず、室温にてＨＣＶ陽性スタ
ンダード（陰性スタンダードで５倍希釈しＥＬＩＳＡ
３．０（オーソ社製）でカット・オフインデックス値が
１．２８）溶液２５μｌを検体点着ゾーンに添加後、展
開液槽を破り展開液を展開液供給ゾーンに供給し、測定
を開始した。検出ゾーンの呈色を目視判定するまでの時
間を計測した。また、比較例２で作製したＨＣＶ抗体測
定用試験片（尿素（−））を用い室温にてＨＣＶ陽性ス
タンダード溶液をＨＣＶ陰性スタンダードで１６倍に希
釈したものの測定を行った。以上の結果を図６に示す。
【００３４】参考例３ アルカリ性フォスファターゼ標
識ウサギ抗ヘモグロビンポリクローナル抗体の作製 濃度１ｍｇ／ｍｌのウサギ抗ヘモグロビンポリクローナ
ル抗体（２００ｍＭ酢酸ソーダ緩衝液（ｐＨ４．２））
２ｍｌにペプシン（ベーリンガーマンハイム社製）４０
μｇを加え３７℃１０時間インキュベートし０．１Ｍリ
ン酸ソーダ、１ｍＭＥＤＴＡ，Ｎａ緩衝液（ｐＨ７．
０）で平衡化したスーパーデックスＧ−２００ゲルろ過
カラム（ファルマシア１６／６０）で分子量１０万の画
分を６００μｇ得た。ここに２−エタノールアミンを加
え１０ｍＭとし３７℃２時間インキュベートし未反応の
２−エタノールアミンを除き分子量５万のＦａｂ’の画
分５００μｇを得た。次にアルカリ性ホスファターゼ
（オリエンタル酵母社製）２ｍｇに１／１２．５重量の
ＧＭＢＳ（Ｎ−スクシニミド−４−マレイミド酪酸）同
仁化学社製）を加え２５℃１時間放置し。マレイミド化
アルカリホスファターゼ１４８０μｇを得た。さらに、
Ｆａｂ’画分５００μｇとマレイミド化アルカリホスフ
ァターゼ１４００μｇを加え２５℃２時間放置し、ゲル
ろ過にて未反応のＦａｂ’及び酵素を除いて分子量１９
万のアルカリ性ホスファターゼ標識ウサギ抗ヘモグロビ
ンポリクローナル抗体４００μｇを得た。
識ウサギ抗ヘモグロビンポリクローナル抗体の作製 濃度１ｍｇ／ｍｌのウサギ抗ヘモグロビンポリクローナ
ル抗体（２００ｍＭ酢酸ソーダ緩衝液（ｐＨ４．２））
２ｍｌにペプシン（ベーリンガーマンハイム社製）４０
μｇを加え３７℃１０時間インキュベートし０．１Ｍリ
ン酸ソーダ、１ｍＭＥＤＴＡ，Ｎａ緩衝液（ｐＨ７．
０）で平衡化したスーパーデックスＧ−２００ゲルろ過
カラム（ファルマシア１６／６０）で分子量１０万の画
分を６００μｇ得た。ここに２−エタノールアミンを加
え１０ｍＭとし３７℃２時間インキュベートし未反応の
２−エタノールアミンを除き分子量５万のＦａｂ’の画
分５００μｇを得た。次にアルカリ性ホスファターゼ
（オリエンタル酵母社製）２ｍｇに１／１２．５重量の
ＧＭＢＳ（Ｎ−スクシニミド−４−マレイミド酪酸）同
仁化学社製）を加え２５℃１時間放置し。マレイミド化
アルカリホスファターゼ１４８０μｇを得た。さらに、
Ｆａｂ’画分５００μｇとマレイミド化アルカリホスフ
ァターゼ１４００μｇを加え２５℃２時間放置し、ゲル
ろ過にて未反応のＦａｂ’及び酵素を除いて分子量１９
万のアルカリ性ホスファターゼ標識ウサギ抗ヘモグロビ
ンポリクローナル抗体４００μｇを得た。
【００３５】実施例６ ＦＯＢＴ検出用試験片（ショ糖
（＋））の作製 幅５ｍｍ、長さ５０ｍｍのセルロース膜（ミリポア社
製）に上端から１５ｍｍの位置にウサギ抗ヘモグロビン
ポリクローナル抗体（３％ショ糖添加）１．３３μｇを
塗布装置でライン状に点着後、乾燥して検出ゾーンを作
製した。参考例３で作製したアルカリ性ホスファターゼ
標識ウサギ抗ヘモグロビンポリクローナル抗体３００ｎ
ｇを幅５ｍｍ、長さ５ｍｍに切ったポリビニルアルコー
ル（ＰＶＡ）シートに点着し乾燥したパットを、マトリ
ックスの上端から２５ｍｍの位置に置き標識試薬ゾーン
と検体点着ゾーンとした。更に吸水パットとしてセルロ
ース膜の上端１０ｍｍの位置に幅１０ｍｍ、長さ２０ｍ
ｍ、厚さ１ｍｍのろ紙を付設した。展開液供給ゾーンの
展開液槽には０．１Ｍ ＣＨＥＳ／ＮａＯＨ（ｐＨ９．
７）、４ｍＭリン酸ソーダを添加しアルミシールで分析
開始まで密閉した。セルロース膜下端１０ｍｍの位置に
幅５ｍｍ、長さ２０ｍｍのろ紙（ミリポア社製）の上端
に発色基質としてＢＣＩＰ１００μｇを添加し乾燥させ
たものをを展開液ゾーンに付設し、展開液ゾーンろ紙と
しＦＯＢＴ検出用試験片（ショ糖（＋））を作製した。
（＋））の作製 幅５ｍｍ、長さ５０ｍｍのセルロース膜（ミリポア社
製）に上端から１５ｍｍの位置にウサギ抗ヘモグロビン
ポリクローナル抗体（３％ショ糖添加）１．３３μｇを
塗布装置でライン状に点着後、乾燥して検出ゾーンを作
製した。参考例３で作製したアルカリ性ホスファターゼ
標識ウサギ抗ヘモグロビンポリクローナル抗体３００ｎ
ｇを幅５ｍｍ、長さ５ｍｍに切ったポリビニルアルコー
ル（ＰＶＡ）シートに点着し乾燥したパットを、マトリ
ックスの上端から２５ｍｍの位置に置き標識試薬ゾーン
と検体点着ゾーンとした。更に吸水パットとしてセルロ
ース膜の上端１０ｍｍの位置に幅１０ｍｍ、長さ２０ｍ
ｍ、厚さ１ｍｍのろ紙を付設した。展開液供給ゾーンの
展開液槽には０．１Ｍ ＣＨＥＳ／ＮａＯＨ（ｐＨ９．
７）、４ｍＭリン酸ソーダを添加しアルミシールで分析
開始まで密閉した。セルロース膜下端１０ｍｍの位置に
幅５ｍｍ、長さ２０ｍｍのろ紙（ミリポア社製）の上端
に発色基質としてＢＣＩＰ１００μｇを添加し乾燥させ
たものをを展開液ゾーンに付設し、展開液ゾーンろ紙と
しＦＯＢＴ検出用試験片（ショ糖（＋））を作製した。
【００３６】比較例３ ＦＯＢＴ用試験片の作製（ショ
糖（−）） 幅５ｍｍ、長さ５０ｍｍのセルロース膜に上端から１５
ｍｍの位置にウサギ抗ヘモグロビンポリクローナル抗体
１．３３μｇを塗布装置でライン状に点着後、乾燥して
検出ゾーンとした。他は実施例６と同様にして便潜血テ
スト（ＦＯＢＴ）用試験片（ショ糖（−））を作製し
た。
糖（−）） 幅５ｍｍ、長さ５０ｍｍのセルロース膜に上端から１５
ｍｍの位置にウサギ抗ヘモグロビンポリクローナル抗体
１．３３μｇを塗布装置でライン状に点着後、乾燥して
検出ゾーンとした。他は実施例６と同様にして便潜血テ
スト（ＦＯＢＴ）用試験片（ショ糖（−））を作製し
た。
【００３７】実施例７ 便中ヘモグロビンの測定 実施例６で作製した試験片（ショ糖（＋））を用いてＦ
ＯＢＴの分析を行った。まず、室温にてＦＯＢＴ陽性ス
タンダード（ヘモグロビン２０ｎｇ／ｍｌ）溶液２５μ
ｌを検体点着ゾーンに添加後、展開液槽を破り展開液を
展開液供給ゾーンに供給し、測定を開始した。８分、１
５分、３０分後の検出ゾーンの呈色をデジタルカメラＲ
Ｄ−１７５（ミノルタ社製）にて撮影し、ＮＩＨ ＩＭ
ＡＧＥ画像処理ソフトにて検出ゾーンの呈色を測定し
た。また、比較例３で製造したＦＯＢＴ用試験片（ショ
糖（−））を用いてＦＯＢＴ陽性スタンダード溶液の測
定を行った。以上の測定結果を図７に示す。
ＯＢＴの分析を行った。まず、室温にてＦＯＢＴ陽性ス
タンダード（ヘモグロビン２０ｎｇ／ｍｌ）溶液２５μ
ｌを検体点着ゾーンに添加後、展開液槽を破り展開液を
展開液供給ゾーンに供給し、測定を開始した。８分、１
５分、３０分後の検出ゾーンの呈色をデジタルカメラＲ
Ｄ−１７５（ミノルタ社製）にて撮影し、ＮＩＨ ＩＭ
ＡＧＥ画像処理ソフトにて検出ゾーンの呈色を測定し
た。また、比較例３で製造したＦＯＢＴ用試験片（ショ
糖（−））を用いてＦＯＢＴ陽性スタンダード溶液の測
定を行った。以上の測定結果を図７に示す。
【００３８】
【発明の効果】本発明の免疫測定用試験片では、検出ゾ
ーンに固定された抗原又は抗体は、長期間保存後であっ
ても安定性が保たれるために、常に所定の感度で測定を
行うことができる。更に、検出ゾーンの抗原又は抗体
は、展開液によって速やかに復元されて、展開液ととも
に移動する検体中の抗原又は抗体と反応するため、本発
明の試験片では低濃度の測定対象物を含む検体であって
も検出感度の優れた測定を行うことができる。
ーンに固定された抗原又は抗体は、長期間保存後であっ
ても安定性が保たれるために、常に所定の感度で測定を
行うことができる。更に、検出ゾーンの抗原又は抗体
は、展開液によって速やかに復元されて、展開液ととも
に移動する検体中の抗原又は抗体と反応するため、本発
明の試験片では低濃度の測定対象物を含む検体であって
も検出感度の優れた測定を行うことができる。
【図１】本発明を実施するための免疫測定用試験片の１
例を示す断面図である。
例を示す断面図である。
【図２】実施例２のＨＢｓ抗体測定用試験片を用いて陽
性スタンダードを測定した際の検出ゾーンでの呈色の検
出時間（陽性判定時間）を示す図である。
性スタンダードを測定した際の検出ゾーンでの呈色の検
出時間（陽性判定時間）を示す図である。
【図３】実施例２のＨＢｓ抗体測定用試験片を用いて陽
性スタンダードを測定した際の検出ゾーンでの呈色の発
色強度を示す図である。
性スタンダードを測定した際の検出ゾーンでの呈色の発
色強度を示す図である。
【図４】実施例２のＨＢｓ抗体測定用試験片の負荷１週
間品、陽性スタンダードを用いた際の検出ゾーンでの呈
色の検出時間（陽性判定時間）を示す図である。
間品、陽性スタンダードを用いた際の検出ゾーンでの呈
色の検出時間（陽性判定時間）を示す図である。
【図５】実施例２のＨＢｓ抗体測定用試験片の負荷１週
間品、陽性スタンダードを用いた際の検出ゾーンでの呈
色の発色強度を示す図である。
間品、陽性スタンダードを用いた際の検出ゾーンでの呈
色の発色強度を示す図である。
【図６】実施例５のＨＣＶ抗体測定用試験片の陽性スタ
ンダードを用いた際の検出ゾーンでの呈色の検出時間
（陽性判定時間）を示す図である。
ンダードを用いた際の検出ゾーンでの呈色の検出時間
（陽性判定時間）を示す図である。
【図７】実施例７のＦＯＢＴ用試験片を用いて陽性スタ
ンダード溶液を測定した際の８分、１５分、３０分後の
発色強度を測定した時の図である。
ンダード溶液を測定した際の８分、１５分、３０分後の
発色強度を測定した時の図である。
１ 展開器材 ２ 展開液供給パット ３ 検体点着ゾーン ４ 標識試薬ゾーン ５ 検出ゾーン ６ 吸水パット ７ 展開液槽
Claims (5)
- 【請求項１】 展開器材に、糖及び／又は尿素と抗原又
は抗体との混合物を点着した検出ゾーンを設けてなる免
疫測定用試験片。 - 【請求項２】 糖がショ糖である請求項１記載の試験
片。 - 【請求項３】 展開器材に展開液供給ゾーンと、標識試
薬ゾーンと、検体点着ゾーンと、展開液吸収ゾーンとを
設けた請求項１又は２記載の試験片。 - 【請求項４】 標識試薬が酵素標識抗体又は抗原である
請求項３記載の試験片。 - 【請求項５】 請求項１ないし４記載のいづれか１項に
記載の試験片を用いる測定法。
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