JPH11103862A - 抗原タンパク質及び該タンパク質をコードする核酸 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】カンジダ・アルビカンスを始めとする真菌によ
る疾患の治療及び診断に有用な新規な抗原タンパク質、
及び該抗原タンパク質をコードする核酸を提供するこ
と。 【解決手段】カンジダ・アルビカンス感染抵抗性哺乳類
由来の抗血清により認識されることを特徴とする、抗原
タンパク質、及びカンジダ・アルビカンス感染抵抗性哺
乳類由来の抗血清により認識される抗原タンパク質をコ
ードする核酸。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、真菌による感染症
やアレルギー疾患の予防、治療、診断に有用なカンジダ
・アルビカンス（Candida albicans）抗原タンパク質及
びそれをコードする核酸に関する。さらに本発明は、該
核酸を含有してなるベクター、及び該ベクターによって
形質転換されてなる形質転換体に関する。さらに本発明
は、かかる形質転換体を培養する本発明の抗原タンパク
質の生産方法に関する。さらに本発明は、本発明の抗原
タンパク質及び核酸を含有する医薬組成物及び診断用組
成物に関する。

【０００２】

【従来の技術】カンジダ・アルビカンスはヒトの常在菌
であるが、健常人は通常本菌の感染に対して抵抗性を示
し、全身的感染症を起こすことはほとんどない。しか
し、本菌は、健常人でも部分的な感染症を起こす場合が
あり、女性、特に妊婦においては膣カンジダ症を起こす
ことがある。一方、白血病等の癌のため制癌剤の投与を
受けた場合、臓器移植に伴う免疫抑制剤の投与を受けた
場合、ＡＩＤＳ感染を起こした場合等により免疫的易感
染状態になったヒトでは、内臓を始めとする全身的な感
染症を起こすことがある。更に本菌は、真菌の中では最
も頻度の高いアレルゲンであり、アレルギー疾患の原因
でもある。また殆どのヒトは常在菌であるカンジダ・ア
ルビカンスの免疫感作状態にあり、カンジダ・アルビカ
ンスの構成成分に対する抗体を有しており、また細胞性
免疫を獲得している。

【０００３】抗原となっているものの多くは、細胞表面
のマンナン（mannan）、グルカン（glucan）等の多糖を
中心とする細胞壁構成成分であり、特にマンナン及びそ
のタンパク質との結合物が多い。またカンジダ・アルビ
カンス感染患者又はアレルギー疾患患者の血清中には上
記細胞壁構成成分に対する抗体の他、細胞内成分である
エノラーゼ（enolase ）、HSP90 （heat shock protein
90）、ホスホグリセレートキナーゼ（phosphoglycerate
kinase）、アルコールデヒドロゲナーゼ（alcohol dehy
drogenase ）に対する抗体等が検出されている。

【０００４】カンジダ・アルビカンス以外のカンジダ属
真菌、例えばカンジダ・トロピカリス（C ．tropicali
s）、カンジダ・グラブラータ（C ．glabrata）等も主
として免疫的易感染宿主に感染症を起こす。カンジダ属
真菌以外の真菌、例えばアスペルギルス（Aspergillus
）属、ペニシリウム（Penicillium ）属、アルタナリ
ア（Alternaria）属真菌も環境中に広く存在しヒトを始
めとする哺乳類にとって非常に身近な存在である。これ
らの真菌の細胞増殖形態は酵母状もしくは菌糸状である
が、その細胞構造は基本的には類似しており、表層は全
て厚い細胞壁に囲まれている。細胞壁構成成分の化学構
造は真菌の種類によりある程度異なるが、マンナン、グ
ルカン、キチン（chitin）等の多糖を主成分としてい
る。また細胞壁に取り囲まれた細胞膜、細胞質内のタン
パク質を始めとする構成成分も基本的には類似してい
る。これらの真菌も多くのものが免疫的易感染宿主に感
染症を起こしたり、アレルギーの原因となっている。

【０００５】真菌が関与する疾患の病原因子やアレルゲ
ンとして、いくつかの真菌由来の抗原分子が単離同定さ
れている。これら抗原分子の単離同定には一般に真菌に
対し感作状態にある哺乳類の血清を利用しており、同定
されたこれらの抗原分子としては真菌の表層を取り巻く
細胞壁構成成分が最も一般的である。該成分以外にも単
離同定されている抗原分子は数多くあり、診断や治療を
目的として研究されている。しかし、真菌感作状態にお
いて保有されている抗体に反応する抗原が全て感染症や
アレルギー疾患において有効に働く抗原とは限らない。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的はカンジ
ダ・アルビカンスを始めとする真菌による疾患の治療及
び診断に有用な新規な抗原タンパク質を提供することに
ある。さらに本発明の目的は該抗原タンパク質をコード
する核酸を提供することにある。さらに本発明の目的
は、該核酸を含有してなるベクター、及び該ベクターに
よって形質転換されてなる形質転換体を提供することに
ある。さらに本発明の目的は、かかる形質転換体を培養
する本発明の抗原タンパク質の生産方法を提供すること
にある。さらに本発明の目的は、本発明の抗原タンパク
質及び核酸を含有する医薬組成物及び診断用組成物を提
供することにある。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、マウス、
ラット等のカンジダ・アルビカンス感染に感受性の哺乳
類に対してカンジダ・アルビカンス感染抵抗性を付与す
る方法について検討してきた。その結果、これらの哺乳
類に対して、抗原としてカンジダ・アルビカンス細胞を
用い、不完全フロイントアジュバントのアジュバントと
混ぜて免疫することにより強い感染抵抗性を獲得させる
ことができることを明らかにした。そして、この感染抵
抗性にＣＤ４陽性Ｔ細胞が重要な働きを果たしているこ
とを明らかにした。更に上記感染抵抗性を獲得した免疫
感作状態にある哺乳類より得られた抗血清は、例えば市
販の抗カンジダ血清である因子血清Ｎｏ．１（ヤトロン
製）に比べ、意外にも真菌細胞表層に存在する細胞壁由
来成分には低い抗体価を示し、細胞壁を除去した真菌の
プロトプラスト細胞由来の成分により高い抗体価を示し
た。

【０００８】本発明者らは上記感染抵抗性を示す免疫感
作状態にある哺乳類の血清中には真菌感染症に有効に働
く抗体をより多く含有すると考え該血清に含有される抗
体に着目し、該抗血清により認識される抗原タンパク質
を探索した。即ち、カンジダ・アルビカンスのｃＤＮＡ
を基に、発現ライブラリーを作製し、イムノスクリーニ
ングにより探索した。その結果、大腸菌の組み換えタン
パク質として９種類の抗原タンパク質を見い出し、その
ＤＮＡを単離し、塩基配列を決定すると共に、塩基配列
よりアミノ酸配列を決定し、本発明を完成させた。

【０００９】即ち、本発明の要旨は、〔１〕 カンジ
ダ・アルビカンス感染抵抗性哺乳類由来の抗血清により
認識されることを特徴とする、抗原タンパク質、〔２〕
抗原タンパク質が、 （Ａ−１） 配列番号：１〜配列番号：９に示されるア
ミノ酸配列のいずれかを有するポリぺプチド、 （Ａ−２） 配列番号：１〜配列番号：９に示されるア
ミノ酸配列のいずれかにおいて、１若しくは複数個のア
ミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列
を有するポリぺプチド、 （Ａ−３） 配列番号：１０〜配列番号：１８に示され
る塩基配列のいずれかを有する核酸にコードされるポリ
ぺプチド、又は （Ａ−４） 配列番号：１０〜配列番号：１８に示され
る塩基配列のいずれかにおいて、１若しくは複数個の塩
基が欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列を有する
核酸にコードされるポリぺプチドである、前記〔１〕記
載の抗原タンパク質、〔３〕 前記〔１〕又は〔２〕
記載の抗原タンパク質と免疫学的に同等な抗原タンパク
質、〔４〕 カンジダ・アルビカンス感染抵抗性哺乳
類由来の抗血清により認識される抗原タンパク質をコー
ドする核酸、

【００１０】〔５〕 核酸が、 （Ｂ−１） 配列番号：１〜配列番号：９に示されるア
ミノ酸配列のいずれかを有するポリぺプチドをコードす
る核酸、 （Ｂ−２） 配列番号：１〜配列番号：９に示されるア
ミノ酸配列のいずれかにおいて、１若しくは複数個のア
ミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列
を有するポリぺプチドをコードする核酸、 （Ｂ−３） 配列番号：１０〜配列番号：１８に示され
る塩基配列のいずれかを有する核酸、 （Ｂ−４） 配列番号：１０〜配列番号：１８に示され
る塩基配列のいずれかにおいて、１若しくは複数個の塩
基が欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列を有する
核酸、又は（Ｂ−５） （Ｂ−１）〜（Ｂ−４）いずれ
か記載の核酸に、ストリンジェントな条件下でハイブリ
ダイズする核酸である、前記〔４〕記載の核酸、〔６〕
前記〔４〕又は〔５〕記載の核酸を含有してなるベ
クター、〔７〕 前記〔６〕記載のベクターによって
形質転換されてなる形質転換体、〔８〕 前記〔７〕
記載の形質転換体を、前記〔４〕又は〔５〕記載の核酸
にコードされる抗原タンパク質の発現可能な条件下で培
養することを特徴とする、カンジダ・アルビカンス感染
抵抗性哺乳類由来の抗血清により認識される抗原タンパ
ク質の生産方法、

【００１１】

〔９〕 前記〔１〕〜〔３〕いずれか記
載の抗原タンパク質、又は前記〔８〕記載の生産方法に
より得られる抗原タンパク質を含有することを特徴とす
る医薬組成物、〔１０〕 前記〔１〕〜〔３〕いずれか
記載の抗原タンパク質、又は前記〔８〕記載の生産方法
により得られる抗原タンパク質を含有することを特徴と
する診断用組成物、〔１１〕 前記〔４〕又は〔５〕記
載の核酸を含有することを特徴とする医薬組成物、〔１
２〕 前記〔４〕又は〔５〕記載の核酸を含有すること
を特徴とする診断用組成物、〔１３〕 前記〔１〕〜
〔３〕いずれか記載の抗原タンパク質に特異的に結合す
る抗体又は抗体断片、〔１４〕 前記〔４〕又は〔５〕
記載の核酸に特異的に結合する核酸、に関するものであ
る。

【００１２】

【発明の実施の形態】

１．本発明の抗原タンパク質 本発明の抗原タンパク質は、カンジダ・アルビカンス感
染抵抗性哺乳類由来の抗血清により認識されるタンパク
質である。本明細書において「カンジダ・アルビカンス
感染抵抗性哺乳類」とは、カンジダ・アルビカンス由来
の抗原を免疫して感染抵抗性を獲得させた哺乳類であ
り、免疫前の致死量のカンジダ・アルビカンス細胞（静
脈内感染後１０日以内に死ぬ細胞数）を投与されても死
ななくなった状態の哺乳類である。

【００１３】かかる哺乳類は、例えば次のようにして得
ることができる。カンジダ・アルビカンス感染感受性の
動物、例えば、Ｃ５７ＢＬ／６、ＢＡＬＢ／ｃ等のマウ
ス、及びＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ、Ｗｉｓｔａｒ
等のラット等に対して、抗原としてカンジダ・アルビカ
ンス生細胞、アジュバントとして細胞性免疫を強く誘導
するために不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）を
用いた混合物を、皮下又は腹腔内に１〜２週間隔で少な
くとも２回投与し免疫する。このようにして免疫されて
感染抵抗性を獲得した動物をカンジダ・アルビカンス感
染抵抗性哺乳類とする。

【００１４】本明細書において「カンジダ・アルビカン
ス感染抵抗性哺乳類由来の抗血清」とは、カンジダ・ア
ルビカンス感染抵抗性哺乳類から得られる抗血清であ
る。かかる抗血清としては、例えば、カンジダ・アルビ
カンス感染抵抗性哺乳類において、最終免疫後１〜２週
後に採血したものを用いることができる。このような抗
血清は、好ましくは哺乳類としてマウス、更に好ましく
は５週令以上のＣ５７ＢＬ／６、ＢＡＬＢ／ｃ又はＤＢ
Ａ／２を用い、これに例えば１×１０⁵ 〜１×１０⁸ 個
の生きた細胞をＩＦＡと混ぜ、約１週間隔で２回以上免
疫し、その後１週〜１ヶ月経過以降に得られる抗血清で
ある。本発明において使用される抗血清は、真菌細胞の
細胞膜成分及び細胞内分子に対して高い抗体価を含有す
るものである。これに対し、一般的に使用される抗カン
ジダ抗血清は、感染抵抗性哺乳類由来のものではなく、
表層の細胞壁の構成成分、例えばマンナンやマンナンタ
ンパクに対して高い抗体価を有しており、本発明におけ
る抗血清とは異なる。

【００１５】なお本発明において使用できるカンジダ・
アルビカンス細胞としては特に限定されるものではな
く、カンジダ・アルビカンスＴＩＭＭ１７６８株、カン
ジダ・アルビカンスＡＴＣＣ１０２３１株等が挙げられ
る。

【００１６】本明細書において、「抗血清により認識さ
れる」とは、抗血清中に含まれる抗体成分と結合するこ
とを意味し、通常、この結合を測定するために使用され
るイムノブロッティングやＥＬＩＳＡ、免疫沈降法等の
免疫学的手法によりその抗原を検出及び／又は定量でき
る。抗原と抗体の結合は、通常、４℃〜室温で適当な溶
液中やゲル内又は抗原固定化プレート上で実施する。

【００１７】これらの抗原タンパク質は、哺乳類におい
て、カンジダ・アルビカンスを始めとするカンジダ菌に
よる感染や他の真菌感染に対する感染防御免疫を誘導す
るためのワクチン用の抗原として、また感染の有無や進
行状態を診断するための抗原として有用である。また、
カンジダ・アルビカンスを始めとする真菌を原因とする
アレルギー疾患の予防、治療や診断のための抗原として
有用である。また、カンジダ・アルビカンスはヒトの常
在菌であるため、殆どのヒトの免疫細胞（リンパ球、マ
クロファージ等）がカンジダ・アルビカンス由来の抗原
タンパク質に対して各種サイトカイン遊離、免疫細胞の
活性化等の免疫反応を起こす。

【００１８】即ち、本発明の抗原タンパク質はインター
フェロンγ、インターロイキン４等の有効な免疫調節物
質を遊離させたり、活性化させるための抗原として有用
である。また本発明の抗原タンパク質は生体内診断の目
的で、個体に対し、例えば、吸入誘発試験、皮膚テス
ト、鼻や眼の粘膜試験における抗原性成分として使用す
ることが出来る。更に実験室診断、例えば、抗原抗体反
応である凝集反応、沈降反応、中和反応、標識抗体法を
用いた診断法、ヒスタミン遊離試験、リンパ球幼若化試
験、白血球遊走阻止試験等における抗原性成分にも使用
することができる。

【００１９】本発明の抗原タンパク質としては、カンジ
ダ・アルビカンス感染抵抗性哺乳類由来の抗血清により
認識されるタンパク質又はポリペプチドであれば特に限
定されない。かかるタンパク質又はポリペプチドは、例
えば、カンジダ・アルビカンスｃＤＮＡのライブラリー
発現物に対する、カンジダ・アルビカンス感染抵抗性哺
乳類由来の抗血清を用いてのイムノスクリーニングによ
り得ることができる。

【００２０】なお本明細書におけるタンパク質とは生物
体の主要構成成分を意味し、ポリペプチド鎖から成るも
のを示す。また本明細書におけるポリペプチドとは複数
のアミノ酸がペプチド結合によって結合したものを意味
し、構成アミノ酸の数は特に限定されない。また本明細
書におけるポリペプチドは、アミノ酸のみから構成され
る単純ポリペプチド又はアミノ酸以外の構成成分を含む
複合ポリペプチドのいずれであってもよい。更に本明細
書で融合タンパク質なる語を使用するが、これは２つ以
上のタンパク質の一部又は全部が結合したタンパク質又
はポリペプチドを意味する。

【００２１】本発明の抗原タンパク質の具体例として
は、例えば、以下のポリぺプチドが挙げられる。 （Ａ−１） 配列番号：１〜配列番号：９に示されるア
ミノ酸配列のいずれかを有するポリぺプチド、 （Ａ−２） 配列番号：１〜配列番号：９に示されるア
ミノ酸配列のいずれかにおいて、１若しくは複数個のア
ミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列
を有するポリぺプチド、 （Ａ−３） 配列番号：１０〜配列番号：１８に示され
る塩基配列のいずれかを有する核酸にコードされるポリ
ぺプチド、 （Ａ−４） 配列番号：１０〜配列番号：１８に示され
る塩基配列のいずれかにおいて、１若しくは複数個の塩
基が欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列を有する
核酸にコードされるポリぺプチド。

【００２２】ここで、配列番号：１〜配列番号：９に示
されるアミノ酸配列からなるポリぺプチドはそれぞれ、
カンジダ・アルビカンス感染抵抗性哺乳類由来の抗血清
を用いてのイムノスクリーニングにより得られる、カン
ジダ・アルビカンスＴＩＭＭ１７６８株のｃＤＮＡライ
ブラリー由来のものである。また、イムノスクリーニン
グにおいては大腸菌を宿主とする発現ライブラリーを用
いたため、ポリペプチドは単純ポリペプチドとして発現
されている。従って、抗カンジダ血清中に多く含まれる
糖鎖に対する抗体の影響を除き、ポリペプチド部分に対
する抗体により抗原タンパク質をスクリーニングしたこ
とになる。

【００２３】配列表の配列番号：１に示されるアミノ酸
配列からなるポリペプチドは２４８アミノ酸よりなり、
サッカロミセス・セレビシエのトリオースホスフェート
イソメラーゼ（triosephosphate isomerase ）とホモロ
ジーを有する。カンジダ・アルビカンス培養菌体から単
離されたタンパク質のＮ末端アミノ酸配列解析結果によ
ると、Ｎ末のメチオニンは脱離していることから、抗原
タンパク質として利用しやすい部分は少なくとも２〜２
４８番目の中に存在すると思われる。更に、ホモロジー
解析の結果も合わせ考えると、配列表の配列番号：１に
示されるポリペプチドはカンジダ・アルビカンスのトリ
オースホスフェートイソメラーゼの全長構造であると判
断される。

【００２４】配列表の配列番号：２に示されるアミノ酸
配列からなるポリペプチドは１３２アミノ酸よりなり、
サッカロミセス・セレビシエのリシルｔＲＮＡシンター
ゼ（５９０アミノ酸よりなる。）のＮ末付近の１０〜１
３７番目とホモロジーを有する。

【００２５】配列表の配列番号：３に示されるアミノ酸
配列からなるポリペプチドは５４８アミノ酸よりなり、
このポリペプチドの２６０〜５４６番目がサッカロミセ
ス・セレビシエの第３染色体のＤＮＡ９８（８７０アミ
ノ酸よりなるタンパク質をコードする。）の５２３〜８
６８番目とホモロジーを有する。

【００２６】配列表の配列番号：４に示されるアミノ酸
配列からなるポリペプチドは１７５アミノ酸よりなり、
サッカロミセス・セレビシエのＥＧＤ２（１７４アミノ
酸よりなる。）とホモロジーを有する。

【００２７】配列表の配列番号：５に示されるアミノ酸
配列からなるポリペプチドは８８アミノ酸よりなり、サ
ッカロミセス・セレビシエのATP シンターゼ デルタ鎖
（２４４アミノ酸よりなる。）のＣ末付近の１５８〜２
４２番目とホモロジーを有する。

【００２８】配列表の配列番号：６に示されるアミノ酸
配列からなるポリペプチドは２６４アミノ酸よりなり、
サッカロミセス・セレビシエのＢＭＨ２（２７３アミノ
酸よりなる。）とホモロジーを有する。

【００２９】配列表の配列番号：７に示されるアミノ酸
配列からなるポリペプチドは２２４アミノ酸よりなり、
サッカロミセス・セレビシエのリボソームＬ７タンパク
（２４４アミノ酸よりなる）とホモロジーを有する。

【００３０】配列表の配列番号：８に示されるアミノ酸
配列からなるポリペプチドは１１５アミノ酸よりなり、
このタンパク質の３９番目〜Ｃ末部分がサッカロミセス
・セレビシエのＹＮＬ０８３ｗ（４９４アミノ酸よりな
る）の２８４〜３６０番目とホモロジーを有する。

【００３１】配列表の配列番号：９に示されるアミノ酸
配列からなるポリペプチドは公知のＨＳＰ７０ＳＳＢタ
イプであり、ウサギ抗カンジダ血清により認識される抗
原タンパク質として発見されたものである。全長は６１
３アミノ酸であり、２８０番目〜Ｃ末（３３３アミノ
酸）よりなるポリペプチドが抗原タンパク質として得ら
れている［V. Maneu et al., Yeast, Vol ．13, 677-68
1,（1997）］。

【００３２】一方、本発明においては、配列表の配列番
号：９に示されるアミノ酸配列に係るｃＤＮＡにおい
て、発現物のイムノスクリーニングの結果が陽性のｃＤ
ＮＡは４種類得られており、これらは配列表の配列番
号：９に示されるアミノ酸配列中、３２０番目〜Ｃ末
（２９４アミノ酸）、４５２番目〜Ｃ末（１６２アミノ
酸）、４９６番目〜Ｃ末（１１８アミノ酸）、５１３番
目〜Ｃ末（１０１アミノ酸）をコードするものである。
従って、Ｃ末側の少なくとも１００アミノ酸の長さのタ
ンパク質が抗原性の発現に重要であると考えられる。こ
のことから、前記４種のタンパク質を含めＣ末側の少な
くとも１００アミノ酸を含む約１００〜２９４アミノ酸
を有するタンパク質は本発明の抗原タンパク質に包含さ
れる。即ち本発明の配列表の配列番号：９に示されるア
ミノ酸配列において、Ｎ末から３１９〜５１２アミノ酸
の長さのアミノ酸が除かれたポリペプチドも本発明にお
ける抗原タンパク質に包含される。

【００３３】本発明においては、カンジダ・アルビカン
ス感染抵抗性哺乳類由来の抗血清により認識される限
り、配列表の配列番号：１〜配列番号：９に示されるア
ミノ酸配列からなるポリペプチドのそれぞれにおいて、
１若しくは複数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付
加されたアミノ酸配列を有するポリぺプチドをも本発明
の抗原タンパク質に包含される。ここで複数個とは、数
個乃至それ以上の個数を言う。例えば、配列番号：１及
び配列番号：２に示される抗原タンパク質はＮ末端には
Ｔ７タグを含むペプチドが付加された融合タンパク質と
して得られており、このような抗原性に無関係のペプチ
ドが付加されたタンパク質又はポリペプチドも本発明の
抗原タンパク質に包含されるが、Ｔ７タグ部分が欠失し
たものも本発明の抗原タンパク質に包含される。また、
前記のように配列番号：９に示されるアミノ酸配列にお
いて、Ｎ末から約３１９〜５１２アミノ酸を欠失させた
ポリペプチドも欠失させた例として挙げられるが、これ
も本発明における抗原タンパク質に包含される。

【００３４】また、本発明においては、カンジダ・アル
ビカンス感染抵抗性哺乳類由来の抗血清により認識され
る限り、配列表の配列番号：１〜配列番号：９に示され
るアミノ酸配列の一部からなるポリペプチドも本発明の
抗原タンパク質に包含される。さらに、カンジダ・アル
ビカンス感染抵抗性哺乳類由来の抗血清により認識され
る限り、その一部からなるアミノ酸配列において１若し
くは複数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加され
たアミノ酸配列を有するポリぺプチドをも本発明の抗原
タンパク質に包含される。また、さらに前述のようなこ
れらの本発明の抗原タンパク質に抗原性に無関係のペプ
チドが付加されたタンパク質又はポリペプチドも本発明
の抗原タンパク質に包含される。

【００３５】配列表の配列番号：１〜配列番号：９に示
されるアミノ酸配列の一部からなるポリペプチドは、例
えば、配列表の配列番号：１〜配列番号：９に示される
アミノ酸配列からなる抗原タンパク質を原料として、リ
シルエンドペプチドダーゼ、トリプシン等のプロテアー
ゼによる酵素消化による切断後、又は臭化シアン等によ
る化学的処理による切断後、目的の抗原性を有するぺプ
チド断片をタンパク質の精製における既知の方法により
単離精製すること等により得ることができる。更に、上
記の方法等により得られたポリペプチドの化学構造に関
する情報を基に、ペプチド合成技術を利用しての化学合
成による製造も可能である。また該ポリペプチドのアミ
ノ酸配列をコードする核酸を用いて遺伝子工学的に製造
することも可能である。

【００３６】アミノ酸配列において１若しくは複数個の
アミノ酸の欠失、置換、挿入又は付加を行う手法として
は、モレキュラー クローニング：ア ラボラトリー
マニュアル第２版（１９８９年、コールド スプリング
ハーバー ラボラトリー発行、Ｔ．マニアティスら編
集）等に記載されている、種々の遺伝子工学的手法を用
いれば困難なことではない。

【００３７】配列表の配列番号：１０〜配列番号：１８
に示される塩基配列はそれぞれ、配列番号：１〜配列番
号：９に示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドを
コードする核酸の配列の例である。従って、本発明にお
いては、カンジダ・アルビカンス感染抵抗性哺乳類由来
の抗血清により認識されるタンパク質又はポリペプチド
であって、配列表の配列番号：１０〜配列番号：１８に
示される塩基配列のそれぞれからなる核酸にコードされ
るポリぺプチドを本発明の抗原タンパク質に包含する。

【００３８】該核酸は発現ライブラリーのイムノスクリ
ーニングにより得られる抗原タンパクを発現するｃＤＮ
Ａであるが、該ｃＤＮＡは遺伝子全長若くは部分塩基配
列よりなる。例えば、配列番号：１０、配列番号：１５
に示される塩基配列は抗原タンパク質遺伝子の全長であ
り、配列番号：１１、配列番号：１２、配列番号：１
３、配列番号：１４、配列番号：１６、配列番号：１
７、配列番号：１８に示される塩基配列は抗原タンパク
質遺伝子の部分配列である。例えば、配列番号：１８記
載の核酸にコードされるＨＳＰ７０ＳＳＢタイプ由来の
抗原タンパク質は、上記の最も小さい抗原タンパク質、
即ち配列表の配列番号：９に示されるアミノ酸配列の５
１３番目〜Ｃ末１０１アミノ酸からなるポリペプチドの
場合、５８０〜８８２番目の塩基配列にコードされてい
る。従って、抗原性の高い部分をコードする組み換えＤ
ＮＡは５８０〜８８２番目のヌクレオチド配列を含有す
るように設計することが好ましい。

【００３９】また本発明においては、カンジダ・アルビ
カンス感染抵抗性哺乳類由来の抗血清により認識される
限り、配列表の配列番号：１０〜配列番号：１８に示さ
れる塩基配列のそれぞれにおいて、１若しくは複数個の
塩基が欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列を有す
る核酸にコードされるポリぺプチドも本発明の抗原タン
パク質に包含する。ここで複数個とは、数個乃至それ以
上の個数を言う。

【００４０】このように、塩基配列において１若しくは
複数個の塩基の欠失、置換、挿入又は付加を行うために
は、公知の種々の遺伝子工学的手法、例えば、ギャップ
ド・デュプレックス法［Wilfried,K. et al., Nucleic
Acids Research, Vol.12, 9441-9456(1984) ］、デレー
ション法［Celeste,Y.P. et al., Methods in Enzymolo
gy, Vol.154, 367-382(1987)］、ウラシルＤＮＡ法［Th
omas, A.K. et al., Gene, Vol.34, 315-323 (1987) ］
やカセット変異法［James,A.W., et al., Gene, Vol.3
4, 315-323(1985) ］等を利用すれば良い。

【００４１】また、カンジダ・アルビカンスの変異株、
近縁菌（例えばカンジダ・トロピカリス等のカンジダ属
真菌）、サッカロミセス・セレビシエ以外の他の真菌由
来のタンパク質であって、本発明の抗原タンパク質と免
疫学的に同等の性質を有するタンパク質又はポリペプチ
ドも本発明の抗原タンパク質に包含される。本明細書に
おける「免疫学的に同等の性質を有するタンパク質」と
はアミノ酸配列或いは糖鎖などの修飾は異なるが、配列
番号：１〜配列番号：９に示されるアミノ酸配列のいず
れかを有する本発明の抗原タンパク質により免疫された
哺乳類由来の抗血清に含有される抗体で認識されるタン
パク質又はポリペプチドを意味する。

【００４２】なお、抗原としての安定性の強化及び／又
は所望の反応性の強化、即ち治療目的からすれば、個体
防御免疫能の誘導強化や、アレルギー反応の減弱化又は
酵素活性の消失を目的に、また診断目的からすれば、抗
原と抗体との特異的結合の強化を目的に、本発明の抗原
タンパク質を改変して誘導体としてもよい。改変法とし
ては、例えば、ピリジルエチル化、還元、アルキル化、
アシル化、適当な単体への化学的カップリング、温和な
ホルマリン処理、又は塩酸グアニジン処理が挙げられ
る。誘導体の作製法としては、例えば、ポリエチレング
リコール（ＰＥＧ）法［Wie et al., Int. Arch. Aller
gy Appl. Immunol., Vol.64, 84 −99，(1981)］を用い
てＰＥＧと結合させてもよい。

【００４３】２．本発明の核酸 本発明の核酸は、カンジダ・アルビカンス感染抵抗性哺
乳類由来の抗血清により認識される抗原タンパク質をコ
ードする核酸である。

【００４４】かかる核酸は、例えば本発明の抗原タンパ
ク質と同様に、カンジダ・アルビカンスのｃＤＮＡ発現
ライブラリーを作製し、カンジダ・アルビカンス感染抵
抗性哺乳類由来の抗血清によるイムノスクリーニングを
行うことにより得ることができる。また、カンジダ・ア
ルビカンスのゲノムライブラリー又はｃＤＮＡライブラ
リーを作製し、本発明の抗原タンパク質のアミノ酸配列
の一部をコードすると推定されるオリゴヌクレオチドを
プローブとする該ライブラリーのスクリーニングによっ
て得ることもできる。

【００４５】本発明の核酸は、哺乳類において、カンジ
ダ・アルビカンスを始めとするカンジダ菌による感染や
他の真菌感染に対する感染防御免疫を誘導するためのワ
クチン用の抗原遺伝子として、また、カンジダ・アルビ
カンスを始めとする真菌を原因とするアレルギー疾患の
予防、治療や診断のための抗原遺伝子として有用であ
る。

【００４６】本発明の核酸の具体例としては、例えば、
以下のような核酸が挙げられる。 （Ｂ−１） 配列番号：１〜配列番号：９に示されるア
ミノ酸配列のいずれかを有するポリぺプチドをコードす
る核酸、 （Ｂ−２） 配列番号：１〜配列番号：９に示されるア
ミノ酸配列のいずれかにおいて、１若しくは複数個のア
ミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列
を有するポリぺプチドをコードする核酸、 （Ｂ−３） 配列番号：１０〜配列番号：１８に示され
る塩基配列のいずれかを有する核酸、 （Ｂ−４） 配列番号：１０〜配列番号：１８に示され
る塩基配列のいずれかにおいて、１若しくは複数個の塩
基が欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列を有する
核酸、 （Ｂ−５） （Ｂ−１）〜（Ｂ−４）いずれか記載の核
酸に、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする
核酸。ここで、核酸としてはＤＮＡ又はＲＮＡのいずれ
でも良い。

【００４７】配列表の配列番号：１０〜配列番号：１８
に示される塩基配列はそれぞれ、配列番号：１〜配列番
号：９に示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドを
コードする核酸の配列の例である。

【００４８】なお遺伝子上でアミノ酸を指定するコドン
（３つの塩基の組み合わせ）はアミノ酸の種類ごとに１
〜６種類ずつが存在することが知られている。したがっ
て、あるアミノ酸配列をコードする核酸には、そのアミ
ノ酸配列にもよるが、多数の種類が存在し得る。核酸は
自然界において決して安定に存在しているものではな
く、その塩基配列に変異が起こることはまれではない。
核酸上に起こった変異がそこにコードされるアミノ酸配
列には変化を与えない場合（サイレント変異と呼ばれ
る。）もあり、かかる変異を有する核酸は、変異前の核
酸と同じアミノ酸配列をコードする異なる核酸といえ
る。したがって、ある特定のアミノ酸配列をコードする
核酸が単離されても、それを含有する生物が継代されて
いくうちに同じアミノ酸配列をコードする多種類の核酸
ができていく可能性は否定できない。さらに同じアミノ
酸配列をコードする多種類の核酸を人為的に作製するこ
とは種々の遺伝子工学的手法を用いれば困難なことでは
ない。

【００４９】例えば、遺伝子工学的なタンパク質の生産
において、目的のタンパク質をコードする本来のＤＮＡ
上で使用されているコドンが宿主中では使用頻度の低い
ものである場合には、タンパク質の発現量が低いことが
ある。このような場合にはコードされているアミノ酸配
列に変化を与えることなく、コドンを宿主での使用頻度
の高いものに人為的に変換することにより、目的タンパ
ク質の高発現を図ることが行われている（たとえば特公
平７−１０２１４６号公報等）。このように特定のアミ
ノ酸配列をコードする多種類の核酸は人為的に作成可能
なことは言うまでもなく、自然界においても作成され得
るものである。

【００５０】このことから、本明細書における（Ｂ−
１）に示される、配列番号：１〜配列番号：９に示され
るアミノ酸配列のそれぞれからなるポリぺプチドをコー
ドする核酸は、（Ｂ−３）に示される配列番号：１０〜
配列番号：１８に示される塩基配列のそれぞれからなる
核酸に限定されるものではない。

【００５１】従って、本発明においては、その発現物が
カンジダ・アルビカンス感染抵抗性哺乳類由来の抗血清
により認識される限り、配列表の配列番号：１０〜配列
番号：１８に示される塩基配列のそれぞれにおいて、１
若しくは複数個の塩基が欠失、置換、挿入又は付加され
た塩基配列を有する核酸も本発明の核酸に包含される。
ここで複数個とは、数個乃至それ以上の個数を言う。

【００５２】例えば、配列表の配列番号：１〜配列番
号：９に示されるアミノ酸配列を有するそれぞれの抗原
タンパク質の抗原性を保持したまま、前記タンパク質の
一部を適当に脱離させたタンパク質、及びＮ末端、Ｃ末
端に例えばＴ７ファージ由来のタンパク質、ヒスチジン
ポリマー、マルトース結合タンパク質、グルタチオンＳ
トランスフェラーゼ、β−ガラクトシダーゼ等が付加さ
れた抗原タンパク質の融合タンパク質をコードする、配
列表の配列番号：１０〜配列番号：１８に示される核酸
の誘導体である核酸も本発明の核酸に含まれる。

【００５３】さらに、（Ｂ−１）〜（Ｂ−４）のいずれ
かに示される核酸に、ストリンジェントな条件下でハイ
ブリダイズする核酸であって、カンジダ・アルビカンス
感染抵抗性哺乳類由来の抗血清により認識される抗原タ
ンパク質をコードする核酸（即ち、（Ｂ−５）の核酸）
も本発明の核酸に包含される。かかる核酸は次のように
して検出することができる。

【００５４】即ち、対象となる核酸を固定したメンブレ
ンを０．５重量％ＳＤＳ、０．１重量％ウシ血清アルブ
ミン（ＢＳＡ）、０．１重量％ポリビニルピロリドン、
０．１重量％フィコール４００、０．０１重量％変性サ
ケ精子ＤＮＡを含む６×ＳＳＣ（１×ＳＳＣは０．１５
Ｍ ＮａＣｌ、０．０１５Ｍクエン酸ナトリウム、ｐＨ
７．０を示す。）中で、５０℃にて１２〜２０時間、プ
ローブとともにインキュベートする。インキュベーショ
ン終了後、０．５重量％ＳＤＳを含む２×ＳＳＣ中、３
７℃での洗浄から始めて、ＳＳＣ濃度は０．１倍までの
範囲で、また、温度は５０℃までの範囲で変化させ、固
定された核酸由来のシグナルがバックグラウンドと区別
できるようになるまでメンブレンを洗浄したうえ、プロ
ーブの検出を行う。このような条件で対象の核酸が検出
された場合、該核酸を「ストリンジェントな条件下でハ
イブリダイズする核酸」とする。ここで用いるプローブ
としては、（Ｂ−１）〜（Ｂ−４）に示される核酸の一
部である。

【００５５】このような核酸には、例えば、カンジダ・
アルビカンスの変異株や近縁菌（例えばカンジダ・トロ
ピカリス等のカンジダ属真菌）の有する、（Ｂ−１）〜
（Ｂ−４）に示される核酸とストリンジェントな条件下
でハイブリダイズ可能な核酸であって、免疫学的に同等
な抗原性を有するタンパク質をコードする核酸等が挙げ
られる。

【００５６】また、本発明の核酸は、配列番号：１〜配
列番号：９に示されるアミノ酸配列のいずれかを有する
ポリぺプチドをコードする核酸、あるいは配列番号：１
〜配列番号：９に示されるアミノ酸配列のいずれかにお
いて、１若しくは複数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入
又は付加されたアミノ酸配列を有するポリぺプチドをコ
ードする核酸において、その変異型、対立遺伝子、相同
遺伝子、コドンの縮重が伴う核酸も、その発現物がカン
ジダ・アルビカンス感染抵抗性哺乳類由来の抗血清によ
り認識される限り、本発明の核酸に包含される。

【００５７】また本発明の核酸としては、カンジダ・ア
ルビカンス感染抵抗性哺乳類由来の抗血清により認識さ
れる抗原タンパク質をコードする核酸、例えば、（Ｂ−
１）〜（Ｂ−５）に示される核酸に特異的に結合する核
酸も挙げられる。ここでの、本発明の核酸は公知の蛍光
物質や放射性物質によりラベルされていてもよい。該核
酸は、ハイブリダイゼーションによるカンジダ・アルビ
カンス抗原遺伝子の検出に用いるプローブやＤＮＡポリ
メラーゼを用いるＤＮＡ増幅方法におけるプライマーと
して利用可能である。

【００５８】３．本発明のベクター、形質転換体 本発明のベクターは、本発明の核酸を含有してなるベク
ターである。このようなベクターは、本発明の核酸を、
大腸菌等の宿主に安定に保持させることができる。かか
るベクターの構築に用いられるベクターとしては、例え
ばｐＵＣ１１８、ｐＷＨ５、ｐＴＶ１１８、ｐＳＣＲＥ
ＥＮ−１ｂ等が挙げられるが、本発明の核酸が挿入で
き、発現可能なベクターであれば特に限定されない。ま
た、適当な発現ベクターにつなぎ、発現用組み換えＤＮ
Ａとすることもできる。配列番号：１０〜配列番号：１
８に示される塩基配列を有する核酸は、ｐＳＣＲＥＥＮ
−１ｂにつなぎ、発現用組み換えＤＮＡとして大腸菌に
導入し、本発明に使用された。核酸をベクターに挿入す
る方法は特に限定されるものではなく、Ｔ４ＤＮＡリガ
ーゼを用いる方法等の公知の方法を用いることができ
る。

【００５９】本発明の形質転換体は、本発明のベクター
によって形質転換されてなるものである。このような形
質転換体は、本発明のベクターを宿主に導入することに
より得られる。宿主としては、大腸菌、バチルス属等の
細菌、サッカロミセス・セレビシエ等の酵母、アスペル
ギルス属、ピキア・パストリス等の真菌の他、昆虫細
胞、ＣＯＳ−７、Ｖｅｒｏ細胞等の動物細胞を用いるこ
とができる。ベクターを宿主に導入する方法としては、
例えば、リン酸カルシウム法、ＣａＣｌ₂ 法、ＤＥＡＥ
デキストラン法、エレクトロポーレーション法等の公知
の方法が挙げられる。かかる形質転換体は、例えば用い
たベクターの選択マーカーを指標とすることにより選択
することができ、また、例えば該形質転換体より抽出し
た核酸と本発明の核酸を特異的に検出可能なプローブを
用いたハイブリダイゼーションにより、所望の核酸が導
入されていることを確認することができる。

【００６０】このような形質転換体は本発明の核酸を調
製する際に、及び本発明の抗原タンパク質を調製する際
に利用することができる。

【００６１】４．本発明の抗原タンパク質の生産方法 本発明の、カンジダ・アルビカンス感染抵抗性哺乳類由
来の抗血清により認識される抗原タンパク質の生産方法
は、本発明の形質転換体を、本発明の核酸にコードされ
る抗原タンパク質の発現可能な条件下で培養することを
特徴とする。

【００６２】培養条件としては特に限定されるものでは
なく、例えばベクターとしてラムダファージベクターλ
ＳＣＲＥＥＮ−１とＰｈａｇｅ Ｍａｋｅｒ^TM Ｓｙｓ
ｔｅｍ Ｐｈａｇｅ Ｐａｃｋ Ｅｘｔｒａｃｔ〔共に
ノヴァジェン（Ｎｏｖａｇｅｎ）社製〕を用いて得られ
る形質転換体の場合、選択圧としてのアンピシリンを含
むＬＢ培地で培養し、適当な時期にＩＰＴＧ（イソプロ
ピル−チオ−β−Ｄ−ガラクトシド）による発現誘導を
かければよい。他のベクター及び宿主を用いて得られた
形質転換体においても、適当な選択圧をかけた培地中で
タンパク質の発現に適した条件で培養すればよい。この
ように培養して目的のタンパク質を発現させる。

【００６３】発現されたタンパク質又はポリペプチド
は、当該分野で知られる公知のタンパク質の精製方法に
より回収、精製することができる。また、得られたタン
パク質又はポリペプチドの抗原性の有無は、例えば、イ
ムノブロッティング法、ＥＬＩＳＡ又は免疫沈降法など
の免疫学的手法により確認することができる。

【００６４】また本発明の抗原タンパク質は、遺伝子工
学的手法を用いて得られる本発明の形質転換体から生産
してもよく、カンジダ・アルビカンス培養物から公知の
タンパク質精製方法によって得ても良い。

【００６５】５．本発明の医薬組成物及び診断用組成物 本発明の医薬組成物及び診断用組成物は、１）本発明の
抗原タンパク質、又は本発明の生産方法により得られる
抗原タンパク質を含有するもの、及び２）本発明の核酸
を含有するものである。

【００６６】１）本発明の抗原タンパク質、又は本発明
の生産方法により得られる抗原タンパク質を含有する医
薬組成物及び診断用組成物 本発明の医薬組成物及び診断用組成物には、哺乳類にお
いて、カンジダ・アルビカンスを始めとするカンジダ菌
による感染や他の真菌感染に対する感染防御免疫を誘導
するためのワクチン、また感染の有無や進行状態を判断
するための診断用組成物が包含される。更に、カンジダ
・アルビカンスを始めとする真菌を原因とするアレルギ
ー疾患の予防、治療や診断に用いられる組成物が包含さ
れる。また、カンジダ・アルビカンスはヒトの常在菌で
あるため、殆どのヒトの免疫細胞（リンパ球、マクロフ
ァージ等）がカンジダ・アルビカンス由来の抗原タンパ
ク質に対して各種サイトカイン遊離、免疫細胞の活性化
等の免疫反応を起こす。即ち、本発明の医薬組成物及び
診断用組成物にはインターフェロンγ、インターロイキ
ン４等の有効な免疫調節物質を遊離させたり、活性化さ
せるための組成物も包含される。

【００６７】感染防御免疫を誘導するための組成物は、
より強い体液性及び／又は細胞性免疫を得るために、本
発明の抗原タンパク質を下記のようなアジュバントを含
む懸濁液又は溶液とした製剤として用いられることが一
般的である。アジュバントは、普通、抗原性成分と共に
投与されるが、抗原性成分を投与する前または後に与え
てもよい。

【００６８】哺乳類のワクチン接種に適当なアジュバン
トとしては、フロイント（Ｆｒｅｕｎｄ’ｓ）の完全ま
たは不完全アジュバント；水酸化アルミニウム、みょう
ばん等の無機物ゲル；リゾレシチン、ジメチルオクタデ
シルアンモニウムブロミド等の界面活性剤；硫酸デキス
トラン、ポリＩＣ等のポリアニオン；ムラミルペプチ
ド、タフトシン等のペプチド；Ｒｉｂｉ社製のモノフォ
スフォリルリピドＡ（ＭＰＬ）；コレラトキシンのＢサ
ブユニットがあるが、これらには限定されない。抗原は
リポソームまたは他のマイクロキャリアーに取り込ませ
て投与することができる。当然、いくつかの異なる抗原
タンパク質を混合して用いることも可能である。

【００６９】アレルギー疾患の予防、治療や診断のため
の組成物は、本発明の抗原タンパク質を適当な塩溶液や
懸濁液の形にして用いれば良い。場合によりポリエチレ
ングリコールやフェノールが添加されていても良い。更
に上記のようなアジュバントを含む懸濁液又は溶液とし
てもよい。アジュバントは、普通、抗原と共に投与され
るが、抗原投与の前または後に与えてもよい。抗原はま
たリポソームまたは他のマイクロキャリアーに取り込ま
せて投与することができる。

【００７０】医薬組成物の投与方法としては、経口、経
粘膜（鼻、膣等）、経皮（皮下または皮内）的に、また
は静脈内に投与すればよい。代表的な投与量は、タンパ
ク質量として０．０１μｇ〜５．０ｍｇ／ｋｇ体重の範
囲が好ましく、１μg 〜１００μｇ／ｋｇ体重の範囲が
より好ましいが、必要に応じて、投与量を増加したり、
投与回数を増大させればよい。

【００７１】生体内診断の目的で、個体に対し、例え
ば、吸入誘発試験、皮膚テスト、鼻や眼の粘膜試験で使
用する診断用組成物は、本発明の抗原タンパク質を凍結
乾燥粉末、若くは適当な塩溶液や懸濁液の形にしたもの
が挙げられ、ポリエチレングリコールやフェノールが添
加されていてもよい。パッチテストには、白色ワセリン
を基剤としてラウリル硫酸ナトリウム等の界面活性剤を
添加したものに本発明の抗原タンパク質を混合すればよ
い。また、ＩｇＥ抗体価測定用の抗原として使用する際
には、ペーパーディスク、セルローススポンジ、マイク
ロプレート等の固相体に上記抗原タンパク質を固定化し
て使用することができる。

【００７２】２）本発明の核酸を含有する医薬組成物及
び診断用組成物 本発明の医薬組成物及び診断用組成物は、哺乳類におい
て、カンジダ・アルビカンスを始めとするカンジダ菌に
よる感染や他の真菌感染に対する感染防御免疫を誘導す
るためのワクチン、また、カンジダ・アルビカンスを始
めとする真菌を原因とするアレルギー疾患の予防、治療
や診断に用いることができる。感染防御やアレルギー疾
患の治療のために用いる場合、本発明の核酸を哺乳類細
胞内で発現可能となるように、適当なプロモーターの下
流に本発明の核酸を含んでいるプラスミドをそのまま、
又はレトロウイルスやアデノウイルスに入れ、適当な塩
溶液や懸濁液の形とする。また本発明の核酸をリポソー
ムまたは他のマイクロキャリアーに取り込ませたり、適
当なポリカチオン系脂質に混合してもよい。

【００７３】医薬組成物の投与方法としては、筋肉内、
皮下、または静脈内に投与すればよい。代表的な投与量
は、核酸量として０．０１μｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ体重の
範囲が好ましく、１μg 〜５ｍｇ／ｋｇ体重の範囲がよ
り好ましいが、必要に応じて、投与量を増加したり、投
与回数を増大させればよい。

【００７４】６．本発明の抗体又は抗体断片 本発明の抗体は、本発明の抗原タンパク質に特異的に結
合する抗体である。ここで、抗体としては、本発明の抗
原タンパク質に特異的に結合する限り、抗体断片をも包
含する。本発明の抗体は常法により得ることができ、ポ
リクローナル抗体でも、モノクローナル抗体のいずれで
もよい。該抗体又は抗体断片は、カンジダ・アルビカン
ス或いはその類縁菌による感染症における真菌の検出
や、カンジダ・アルビカンス或いはその類縁菌によるア
レルギー疾患におけるアレルゲン同定等に利用可能であ
る。また、本発明の抗原タンパク質の精製等に使用する
こともできる。

【００７５】７．本発明の抗原タンパク質をコードする
核酸に特異的に結合する核酸 本発明の抗原タンパク質をコードする核酸に特異的に結
合する核酸は、ハイブリダイゼーションによる本発明の
抗原タンパク質をコードする核酸の検出に用いるプロー
ブやＤＮＡポリメラーゼを用いたＤＮＡ増幅方法におけ
るプライマーとして利用可能である。該核酸は公知の蛍
光物質や放射性物質によりラベルされていてもよい。

【００７６】

【実施例】以下、実施例により本発明を具体的に説明す
るが、本発明はこれら実施例に限定されるものではな
い。

【００７７】実施例１．感染抵抗性の誘導及びＣＤ４陽
性Ｔ細胞の感染抵抗性への関与 １）感染抵抗性の誘導：カンジダ・アルビカンス（Ｃ．
アルビカンス）ＴＩＭＭ １７６８をサブロー・デキス
トロース培地で一晩振とう培養し、細胞を遠心で回収、
生理食塩水で洗浄した。得られた細胞を１×１０⁶ 、１
×１０⁷ 、１×１０⁸ 個／mlとなるように生理食塩水に
懸濁した。各々の懸濁液に等量のＩＦＡ（フロイントの
不完全アジュバント）を加えて混合し、この混合物をC5
7BL/6 マウスに一匹当たり0.1 mlずつ皮下接種して、カ
ンジダ生細胞でマウスを免疫した。一週間後、上記と同
様に調製したカンジダ生細胞を同量ずつ皮下接種し、マ
ウスをさらに免疫した。即ち、一匹のマウスに対して、
５×１０⁴ 個、５×１０⁵個、又は５×１０⁶ 個のカン
ジダ生細胞で二回免疫したことになる。対照として、カ
ンジダ生細胞の懸濁液の代わりに生理食塩水を用いて、
該生理食塩水と等量のＩＦＡを混合したものを一週間隔
で二回皮下接種により投与した。

【００７８】二回目の免疫の一週間後、全ての免疫マウ
ス及び対照マウスに、サブロー・デキストロース培地で
培養して得られたＣ．アルビカンス TIMM 1768細胞を
２．５×１０⁵ 個ずつ静脈内に投与して感染させた。感
染後、３０日間マウスの生死を観察した。結果を表１に
示す。

【００７９】

【表１】

【００８０】表１より、上記投与量で対照マウス（非免
疫マウス）は全例１０日以内に死亡したが、免疫マウス
は明らかに感染抵抗性を獲得していることが分かった。

【００８１】２）ＣＤ４陽性Ｔ細胞による感染抵抗性の
獲得：５×１０⁶ 個のカンジダ・アルビカンス生細胞を
用いて、上記１）と同様の方法で一週間の間隔で二回免
疫されたBALB/cマウスに対して、最終免疫後２３日目、
２６日目、及び２９日目の計３回、抗ＣＤ４抗体（ＡＴ
ＣＣ ＴＩＢ２０７より調製）又は抗ＣＤ８抗体（ＡＴ
ＣＣ ＴＩＢ１０５より調製）を一匹当り0.3 mgずつ腹
腔内に投与した。最終免疫後２９日目にサブロー・デキ
ストロース培地で培養して得られたＣ．アルビカンス T
IMM 0136細胞を１×１０⁵ 個ずつ静脈内に投与した。対
照として、非免疫マウス、及び免疫をするが抗体を投与
しないマウスを用意し、これらにも同様にＣ．アルビカ
ンス TIMM 0136細胞を１×１０⁵ 個ずつ静脈内に投与し
た。その投与後７日目に腎臓内の生残Ｃ．アルビカンス
細胞数を測定した。抗ＣＤ４抗体及び抗ＣＤ８抗体は常
法に従い、ハイブリドーマをｓｃｉｄマウス腹腔に注射
しハイブリドーマを増殖させた腹水より精製した。また
得られた抗体はＦｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｅｒにより各細
胞が除かれていることを確認した。

【００８２】その結果、抗ＣＤ４抗体の投与により腎臓
内の菌数の抑制が有意に阻害され、感染抵抗性にＣＤ４
陽性Ｔ細胞が重要な役割を果たしていることが明らかと
なった。

【００８３】実施例２．感染抵抗性哺乳類の血清の採取
とその性質、及び各種吸収血清の作製 １）感染抵抗性哺乳類の血清の採取：実施例１−２）と
同様の方法で、アジュバントにＣＦＡ（フロイントの完
全アジュバント）５×１０⁶ 個のＣ．アルビカンスTIMM
1768 生細胞で３回免疫されたBALB/cマウスより、最終
免疫後７日目に常法により血清を採取した。このものを
抗カンジダ血清とした。

【００８４】２）感染抵抗性哺乳類の血清の性質：実施
例２−１）で得られた抗カンジダ血清の性質を検討し
た。まず抗原成分としてＣ．アルビカンス細胞壁画分
（ＣＷ）、細胞質画分（ＨＳＳ）、細胞膜画分（ＬＳ
Ｐ）を調製した。Ｃ．アルビカンスTIMM 1768 のサブロ
ー寒天斜面培養物の一白金耳分を5 mlのYPD 培地（イー
ストエキストラクト１重量％、ポリペプトン２重量％、
グルコース２重量％）を入れた試験管に植菌した。30℃
で24時間振とう培養後、その培養液50μＬを、YPD 培地
500 mlを入れた2 L 容三角フラスコに植菌し、35℃で一
晩振とう培養した。この２Ｌ容三角フラスコを合計四つ
用いて培養した。

【００８５】得られた約2Lの培養液（約７×１０⁷ 細胞
／ｍＬ）から、2,000 ×１０g 、10分間の遠心により細
胞を集めた。細胞を500 mlの滅菌水で２回洗浄後、500
mlのSSB 溶液（0.8 M ソルビトール入り50 mM リン酸緩
衝液（pH 7.5））で１回洗浄した。細胞を約500 mlのSS
B 溶液に懸濁後、100 mM EDTA 入りSSB 溶液を70 ml、
そして2-メルカプトエタノールを１ml加え、緩やかに振
とうした。続いて、この懸濁液に、１ｍＬあたり３．３
ｍｇのザイモリエース２０Ｔ（生化学工業社製）を含有
するSSB 溶液を70 ml 加え、35℃で１時間緩やかに振と
うした。さらに、１ｍＬあたり１２ｍｇのトリコデルマ
・ライジングエンザイム（シグマ社製）を含有するSSB
溶液を70 ml 加え、35℃で１時間緩やかに振とうした。
得られた懸濁液を2,000 ×g 、10分間の遠心にかけ、プ
ロトプラスト細胞を集めると共に、上清を細胞壁画分
（ＣＷ）とした。

【００８６】上記の様にして得られたプロトプラスト細
胞に滅菌生理食塩水を140 ml加え（この懸濁液１ｍＬあ
たりプロトプラスト細胞は約１×１０⁹ 個）、充分攪拌
した後、氷上に10分間静置した。プロトプラスト細胞が
バーストしたことを確認後、10,000×g 、30分間遠心
し、得られた沈殿を不溶性画分（ＬＳＰという）とし
た。遠心上清をさらに100,000 ×g 、60分間遠心し、そ
の結果得られた遠心上清を可溶性画分（ＨＳＳという）
とした。ＬＳＰを１４０ｍＬの生理食塩水に懸濁後、超
音波処理し、さらに沸騰水浴下、５分間加熱処理して殺
菌し、膜タンパク質等を含有するＬＳＰ抗原液とした。
また、ＣＷについても同様に超音波処理、加熱処理を行
ってＣＷ抗原液を得た。なおＨＳＳについては、そのま
まの液をＨＳＳ抗原液とした。

【００８７】上記のようにして得られたLSP 抗原液のタ
ンパク質濃度は2.3 mg/ml 、HSS 抗原液のタンパク質濃
度は3.5 mg/ml 、ＣＷ抗原液のタンパク質濃度は２．１
ｍｇ／ｍＬであった（タンパク質量はBSA を標準として
ビシンコニン酸（BCA ）試薬により定量した）。

【００８８】抗原成分として得られたＣＷ抗原液、ＬＳ
Ｐ抗原液、ＨＳＳ抗原液を、各々のタンパク質濃度が10
μg/mlとなるようにPBS で希釈後、イムノ・モジュール
［ヌンク（Nunc）社製］に50μl ずつ加え、４℃に一晩
放置し、各イムノ・モジュールをそれぞれの抗原でコー
ティングした。１重量％牛血清アルブミンを入れたPBS
溶液で、コーティングされたイムノ・モジュールのブロ
ッキング処理を行った。次いで、60倍に希釈した抗カン
ジダ血清又はコントロール血清をイムノ・モジュールに
50μl 加え、37℃で１時間インキュベートした後、パー
オキシダーゼ標識抗マウスＩｇＧ抗体（2000倍希釈）と
37℃で１時間インキュベートした。インキュベート後、
PBS で洗浄し、次いで基質溶液を加えた。15分後、405n
m での吸光度を測定した。該吸光度が高いほど抗原を認
識する抗体量が多い、即ち抗原に対する抗体価が高い事
を示す。その結果を表２に示す。なお、上記コントロー
ル血清は生菌の代わりに生理食塩水を用いて該生理食塩
水と等量のＣＦＡを混合したものを１週間隔で３回皮下
接種により投与したマウスの血清より調製した。

【００８９】

【表２】

【００９０】表２より明らかなように、抗カンジダ血清
はＨＳＳに対する抗体価が最も高いが、ＬＳＰに対して
も抗体価を有していることが明らかとなった。ＣＷに対
する抗体価は低かった。

【００９１】実施例３．Ｃ．アルビカンスcDNA発現ライ
ブラリーによる抗原タンパク質のスクリーニング １）Ｃ．アルビカンスのcDNA発現ライブラリーの作製：
Ｃ．アルビカンスTIMM1768株のcDNA発現ライブラリーを
作製するため、菌体より全ＲＮＡを抽出、精製した。す
なわち、上記の菌を200 ml YPD培地で３5 ℃で培養後、
遠心（２０００rpm 、５分間）により菌体を回収し、一
度蒸留水で洗浄した。菌体を液体窒素により急速凍結
し、乳鉢により凍結菌体を粉末状に破砕した。この菌体
粉末より、RNA エクストラクションキット［ファルマシ
ア（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）社製）］を用いて全ＲＮＡを
回収、精製した。この全ＲＮＡからオリゴテックス−ｄ
Ｔ３０＜スーパー＞（宝酒造社製）を用いて、ポリ
（Ａ）⁺ ＲＮＡを調製した。cDNA合成キット（宝酒造社
製）を用いて、ポリ（Ａ）⁺ ＲＮＡ５μg からｃＤＮＡ
を合成した。合成されたｃＤＮＡをラムダファージベク
ターλSCREEN-1［ノヴァジェン（Novagen ）社製］と連
結した後、Phage Maker ^TM System PhagePack Extract
（ノヴァジェン社製）によりインビトロパッケージング
を行いｃＤＮＡライブラリーを構築した。

【００９２】２）Ｃ．アルビカンス生細胞免疫による抗
カンジダ血清と認識する抗原タンパク質のイムノスクリ
ーニング：Ｃ．アルビカンス生細胞免疫による抗血清と
反応するタンパク質を発現しているファージクローンを
イムノスクリーニングにより検出した。なお、ファージ
ベクターλSCREEN-1を用いて作成されたｃＤＮＡライブ
ラリーにおいて、そのｃＤＮＡはT ７タグ配列等を含む
ペプチドとの融合ポリペプチドまたはｃＤＮＡ内の翻訳
開始コドンから始まるポリペプチドとして発現した。

【００９３】すなわち、ｃＤＮＡライブラリーを宿主大
腸菌 BL21(DE3)pLysE 株に接種し、トップアガロース
（０．７重量％アガロースを含むＬＢ培地）と混合後、
２×YT（1.6 重量％バクトトリプトン、１重量％イース
トエキストラクト、0.5 重量％NaCl ）プレート上に重
層し、３７℃、６時間培養することにより、ファージプ
ラークを形成させた。生じたプラーク上にナイロンメン
ブレン［Ｈｙｂｏｎｄ−Ｎ、アマシャム（Ａｍｅｒｓｈ
ａｍ）社製］を重ね、４℃で一夜静置した後、３７℃で
４時間保温した。メンブレンをプレートから剥がし、Ｐ
ＢＳＴ（組成は１００ｍＭ ＮａＣｌ，１０ｍＭリン酸
バッファーｐＨ７．５，０．１％Ｔｗｅｅｎ ２０）で
１０分間洗浄した後、そのメンブレンを適当量のブロッ
クエース（大日本製薬社製）に浸すことによりブロッキ
ングした。一夜室温で放置後、このメンブレンを実施例
２−１）で調製した抗カンジダ血清（５００倍希釈液）
と３時間室温でインキュベートした。インキュベート後
洗浄し、次いでパーオキシダーゼ標識抗マウスＩｇＧ抗
体（１０００倍希釈）と１時間室温でインキュベートし
た。インキュベート後洗浄し、次いでSuperSignal Subs
trate Western Blotting［ピアス（Pierce）社製］によ
り発光させ、抗カンジダ血清と反応するファージプラー
クを検出した。

【００９４】５×１０⁴ 個のプラークをスクリーニング
した結果、抗血清と反応するファージプラークは１００
〜１５０個存在した。これらのうち、特に強く反応した
プラークに注目し、さらにクローニングを行った。クロ
ーニングされたファージを宿主大腸菌BM25.8株に接種す
ることにより、大腸菌内でオートマチックサブクローニ
ングがおこり、ファージDNA に存在するｃＤＮＡを含む
領域がプラスミドＤＮＡへ自動的にサブクローニングさ
れた。このプラスミドを含む大腸菌からプラスミドを精
製し、ｃＤＮＡの塩基配列を決定した。塩基配列の解析
の結果、２クローンはサッカロミセス・セレビシエ
（Ｓ．セレビシエ）のトリオースフォスフェートイソメ
ラーゼ（triosephosphate isomerase ）とホモロジーを
有する新規遺伝子であり、全長のｃＤＮＡを有してい
た。さらに、Ｓ．セレビシエのリシルｔＲＮＡシンテタ
ーゼ（lysyl-tRNA synthetase ）とＳ．セレビシエの第
３染色体のＤＮＡ９８とホモロジーを有する新規遺伝子
もそれぞれ１クローン存在した。これらのｃＤＮＡはそ
れぞれの遺伝子の一部分を含んでおり、この領域内に抗
血清と反応する抗原決定基が存在していることが明らか
となった。

【００９５】上記の新規遺伝子であるＳ．セレビシエの
トリオースフォスフェートイソメラーゼホモログ遺伝
子、Ｓ．セレビシエリシルｔＲＮＡシンテターゼホモロ
グ遺伝子及びＳ．セレビシエ第３染色体のＤＮＡ９８の
ホモログ遺伝子の塩基配列は各々配列表の配列番号：１
０、配列番号：１１、配列番号：１２に示す通りであ
り、この塩基配列よりこれらの核酸は各々配列表の配列
番号：１、配列番号：２、配列番号：３に示したアミノ
酸配列を有するポリペプチドをコードしている。

【００９６】３）吸収抗カンジダ血清によるＣ．アルビ
カンス抗原タンパク質のスクリーニング：Ｃ．アルビカ
ンス生細胞免疫血清由来の吸収抗血清を用いて、上記
１）記載のｃＤＮＡライブラリーよりＣ．アルビカンス
抗原タンパク質のイムノスクリーニングを行った。すな
わち、抗カンジダ血清とＨＳＳとＣＷを１：１：１（ｖ
／ｖ／ｖ）に混合した溶液を作製し、これを吸収抗血清
とした。

【００９７】この吸収抗血清を用いて、実施例３−２）
と同様の方法により抗原分子のスクリーニングを行っ
た。用いた抗血清は、吸収抗血清の５００倍希釈液であ
る。この抗血清と反応するファージプラークについて、
さらにクローニングを行った。クローニングされたｃＤ
ＮＡの塩基配列の解析の結果、１クローンはＳ．セレビ
シエのＥＧＤ２遺伝子とホモロジーを有する新規遺伝子
をほとんど全長含んでおり、１クローンはATP シンター
ゼ デルタ鎖（ATP synthase delta chain）とホモロジ
ーを有する新規遺伝子の一部分であることが明らかとな
った。得られた塩基配列情報を各々配列表の配列番号：
１３、配列番号：１４に示す。また、この塩基配列は各
々配列表の配列番号：４、配列番号：５に示したアミノ
酸配列を有するポリペプチドをコードしている。

【００９８】また、既知のＨＳＰ７０ ＳＳＢタイプの
ｃＤＮＡの一部分を含むクローンが４クローン得られ、
各々Ｃ末側の２９４アミノ酸、１６２アミノ酸、１１８
アミノ酸、１０１アミノ酸をコードしているｃＤＮＡで
あった。この結果、ＨＳＰ７０ ＳＳＢタイプ抗原は、
Ｃ末側の１１８アミノ酸の領域内に抗血清と反応する抗
原決定基が存在していることが明らかとなった。最も長
い２９４アミノ酸をコードするＨＳＰ７０ ＳＳＢタイ
プ遺伝子の塩基配列、及び該塩基配列から推定されるア
ミノ酸配列は各々配列番号：１８、配列番号：９に示す
通りである。

【００９９】次に、ＨＳＳを加えて得られた吸収抗血清
に対しては陽性であるが、ＨＳＳとＣＷを加えて得られ
た上記の吸収抗血清に対しては陰性のファージプラーク
が存在していたので、これらプラークのｃＤＮＡを上記
２）と同様の方法により解析した。２クローンがＳ．セ
レビシエのBMH ２遺伝子とホモロジーを有する新規遺伝
子を全長含んでおり、１クローンはＳ．セレビシエのリ
ボソームタンパクのL７遺伝子とホモロジーを有する新
規遺伝子をほとんど全長含んでいた。１クローンはＳ．
セレビシエのYNL ０８３W とホモロジーを有する新規遺
伝子の一部分（１１５アミノ酸）を含んでいた。

【０１００】これらの新規遺伝子であるＳ．セレビシエ
のBMH ２ホモログ遺伝子、Ｓ．セレビシエリのボソーム
L ７タンパクホモログ遺伝子、Ｓ．セレビシエのYNL ０
８３W ホモログ遺伝子の塩基配列は各々配列表の配列番
号：１５、配列番号：１６、配列番号：１７に示す通り
であり、この塩基配列よりこれらの遺伝子は各々配列表
の配列番号：６、配列番号：７、配列番号：８に示した
アミノ酸配列を有するポリペプチドをコードしている。

【０１０１】実施例４．Ｃ．アルビカンス感染抵抗性哺
乳類由来の抗血清に認識される抗原タンパク質の製造 実施例３−２）及び３−３）において得られたｃＤＮＡ
は、Ｓ．セレビシエのYNL ０８３W とホモロジーを有す
る遺伝子以外は全て、融合ポリペプチドとして発現して
いた。YNL ０８３W とホモロジーを有する遺伝子はｃＤ
ＮＡ内の開始コドン（ＡＴＧ）よりポリペプチドを発現
していた。融合ポリペプチドの発現を示す一例としてト
リオースフォスフェートイソメラーゼ（ＴＰＩ）とホモ
ロジーを有する遺伝子と、リシルｔＲＮＡシンテターゼ
とホモロジーを有する遺伝子より発現されるポリペプチ
ドを明らかにした。

【０１０２】すなわち、実施例３−２）において得られ
たTPI とホモロジーを有する遺伝子を含むプラスミド、
及びリシルｔＲＮＡシンテターゼとホモロジーを有する
遺伝子を含むプラスミドを、それぞれ大腸菌ＢＬ２１
（ＤＥ３）ｐＬｙｓＳへ形質転換し、形質転換体を得
た。これらの形質転換体をアンピシリンを含むＬＢ培地
に植菌し、３７℃で３．５時間培養した。ＩＰＴＧ（イ
ソプロピル−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトシド）を終濃
度１ｍＭとなるように添加し、さらに２．５時間培養を
続けた。培養液を遠心し菌体を回収、洗浄後、菌体を３
０μl の１×ＳＤＳサンプルバッファーに懸濁した。10
0 ℃で、５分間加熱処理した後、遠心し、その上清の一
部分をＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル（12.5％ゲル）
電気泳動にかけ、ポリペプチドの発現を確認した。

【０１０３】発現する融合ポリペプチドの予想分子量は
TPI ホモログが６３ｋＤａ（TPI ホモログ２７ｋＤａ＋
Ｔ７タグ領域３６ｋＤａ）で、リシルｔＲＮＡシンテタ
ーゼホモログは５０ｋＤａ（リシルｔＲＮＡシンテター
ゼホモログ１４ｋＤａ＋Ｔ７タグ領域３６ｋＤａ）であ
る。これらの融合ポリペプチドは予想された分子量のポ
リペプチドとして発現していることが図１より明らかと
なった。

【０１０４】図１のレーン１におけるサンプルはリシル
tRNAシンテターゼホモログ遺伝子を導入した形質転換体
の発現誘導前（IPTG添加前）、レーン２におけるサンプ
ルは誘導後（IPTG添加後）より得られたポリペプチドで
ある。レーン３におけるサンプルはTPI ホモログ遺伝子
を導入した形質転換体の発現誘導前、レーン４における
サンプルは誘導後より得られたポリペプチドである。

【０１０５】

【発明の効果】本発明の抗原タンパク質はカンジダ・ア
ルビカンス感染抵抗性哺乳類由来の抗血清に認識される
抗原であり、カンジダ・アルビカンス感染の治療及び診
断に有用である。また、本発明の核酸は本発明の抗原タ
ンパク質をコードするものであり、カンジダ・アルビカ
ンス感染の治療及び診断に有用である。

【０１０６】

【配列表】

配列番号：１ 配列の長さ：２４８ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列： Met Ala Arg Gln Phe Phe Val Gly Gly Asn Phe Lys Ala Asn Gly 1 5 10 15 Thr Lys Gln Gln Ile Thr Ser Ile Ile Asp Asn Leu Asn Lys Ala 20 25 30 Asp Leu Pro Lys Asp Val Glu Val Val Ile Cys Pro Pro Ala Leu 35 40 45 Tyr Leu Gly Leu Ala Val Glu Gln Asn Lys Gln Pro Thr Val Ala 50 55 60 Ile Gly Ala Gln Asn Val Phe Asp Lys Ser Cys Gly Ala Phe Thr 65 70 75 Gly Glu Thr Cys Ala Ser Gln Ile Leu Asp Val Gly Ala Ser Trp 80 85 90 Thr Leu Thr Gly His Ser Glu Arg Arg Thr Ile Ile Lys Glu Ser 95 100 105 Asp Glu Phe Ile Ala Glu Lys Thr Lys Phe Ala Leu Asp Thr Gly 110 115 120 Val Lys Val Ile Leu Cys Ile Gly Glu Thr Leu Glu Glu Arg Lys 125 130 135 Gly Gly Val Thr Leu Asp Val Cys Ala Arg Gln Leu Asp Ala Val 140 145 150 Ser Lys Ile Val Ser Asp Trp Ser Asn Ile Val Val Ala Tyr Glu 155 160 165 Pro Val Trp Ala Ile Gly Thr Gly Leu Ala Ala Thr Pro Glu Asp 170 175 180 Ala Glu Glu Thr His Lys Gly Ile Arg Ala His Leu Ala Lys Thr 185 190 195 Ile Gly Ala Glu Gln Ala Glu Lys Thr Arg Ile Leu Tyr Gly Gly 200 205 210 Ser Val Asn Gly Lys Asn Ala Lys Asp Phe Lys Asp Lys Ala Asn 215 220 225 Val Asp Gly Phe Leu Val Gly Gly Ala Ser Leu Lys Pro Glu Phe 230 235 240 Val Asp Ile Ile Lys Ser Arg Leu 245

【０１０７】配列番号：２ 配列の長さ：１３２ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列： Val Ala Glu Gln Val Gln Lys Thr Tyr Leu Asp Asp Val Thr Gly 1 5 10 15 Glu Gln Val Ser Lys Thr Glu Leu Lys Lys Arg Gln Lys Gln Arg 20 25 30 Ala Ile Glu Ala Lys Lys Ala Ala Lys Ala Ala Ala Thr Pro Ala 35 40 45 Lys Thr Thr Thr Lys Lys Lys Asp Glu Leu Ala Asp Leu Asn Pro 50 55 60 Asn Gln Phe Phe Glu Ile Arg Ser Arg Gln Ile Ser Glu Leu Arg 65 70 75 Glu Lys Asn Asn Ala Asp Pro Ser Ala Phe Asn Pro Tyr Pro His 80 85 90 Lys Phe Asn Val Thr Thr Lys Ile Pro Glu Phe Val Glu Lys Tyr 95 100 105 Ala His Leu Gln Arg Gly Glu Thr Leu Lys Asp Val Thr Val Ser 110 115 120 Val Ser Gly Arg Ile Met Thr Lys Arg Glu Ser Gly 125 130

【０１０８】配列番号：３ 配列の長さ：５４８ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列： Leu Lys Ser Lys Val Gly Ser Ile Phe Gly Arg Lys Lys Lys Lys 1 5 10 15 Glu Lys Phe Thr Gly Ala Asp Ser Ile Ala Glu Asp Glu Ser Leu 20 25 30 Ser Glu Val Ser Leu Pro Pro Thr Arg Thr Arg Asn Ser Ser Val 35 40 45 Leu Ser Arg Ser Asn Ser Thr Arg Arg Ser Phe Ile Asp Arg Phe 50 55 60 His Arg Asp Glu Ser Ser Thr Gly Ile Ser Arg Gln His Glu Gln 65 70 75 His Gln Gln Pro Leu Ser Asp Pro Leu Pro His Ala Glu Lys Pro 80 85 90 Gln Pro Glu Ile Pro Gln Ser Pro Glu Ala Pro Gln Ala Lys Ser 95 100 105 Leu Glu Pro Val Ser Glu Val Leu Lys Glu Leu Phe Pro Pro Met 110 115 120 Gln Asn Gly Ser Glu Arg Lys Gly Glu Asn Gln Gln Ser Arg Val 125 130 135 Asp Val Ser Ser Gln Thr Leu Ser Pro Val Thr Pro Thr His Asp 140 145 150 Gly Phe Gly Gly Ser Val Lys Pro Leu Pro Glu Pro Val Asp Ser 155 160 165 Pro Asn Val Ile Lys Tyr Asn Asp Ser Asp Asp Ser Ser Thr Glu 170 175 180 Glu Arg Arg Gly Ser Leu Leu Glu Lys His Asn Leu Glu Val Gln 185 190 195 Pro Val Ser Ser Pro Phe Thr Thr Gln Pro Pro Ala Pro Val Pro 200 205 210 Gln Glu Ser Arg Ser Arg Gln Ser Ser Asp Gly Ile Tyr Ser Phe 215 220 225 Glu Ala Gly Asp Asp Ser Asn Pro Ile Ser Ala Thr Pro Arg Ser 230 235 240 Glu Gln Asn Val Phe Gly Gln Met Pro Asp Pro Asn Leu Ser Pro 245 250 255 Glu Lys Thr Leu Ala Pro Pro Pro Pro Pro Ser Arg Lys Val Leu 260 265 270 His His Glu Glu Pro Thr Val Arg Asp Ser Ala Leu Phe His Asn 275 280 285 Leu Pro Ala Ala Ser His Ser Gly Arg Asp Ser Val Met Ala Pro 290 295 300 Leu Ala Ser Gln Asp Arg Gly His Ser Leu Leu Lys Asn Asp Phe 305 310 315 Lys His Glu Asn Leu Ala Ser Thr Leu Gly Leu Ser Ser Ser Ile 320 325 330 Ala Glu Val Ile Asn Ala Ser Phe Lys Asp Gly Gln Leu Ile Lys 335 340 345 Ser Gln Val Val Gly Glu Val Ala Phe Asn Tyr Asn Gly Asn Ala 350 355 360 Ser Asp Pro Leu Val Val Thr Ile Pro Asn Ser Phe Asp Lys Val 365 370 375 Leu Val Asn Lys Thr Phe Ile Glu Asp Leu Gly Gln Ser Lys Tyr 380 385 390 Lys Val Asn Pro Thr Ser Ile Thr Ser Lys Thr Leu Gly Gly Leu 395 400 405 Lys Tyr Leu Leu Lys Pro Thr Gln Val Pro Val Ile Ile Gln Gln 410 415 420 Ile Trp Lys Phe Glu Pro His Gln Ser Ser Leu Met Val Ser Ile 425 430 435 Arg Ser Thr Thr Pro Leu Val Leu Glu Asn Phe Val Val Ser Val 440 445 450 Ala Leu Asn Gln Asp Ile Glu Ala Thr Ser Ala Ser Ser Lys Pro 455 460 465 Gln Gly Ala Phe Asn Lys Glu Lys Asn Arg Ile Thr Trp Arg Tyr 470 475 480 Pro Gln Ser Leu Ala Leu Asn Gly Val Glu Arg Leu Ile Ala Arg 485 490 495 Phe Met Thr Asn Gly Leu Gly Ser Glu His Glu Ser Gly Val Gln 500 505 510 Ile Lys Phe Gln Val Lys Asp Pro Gln Val Lys Tyr Cys Ser Ile 515 520 525 Tyr Ser Glu Asn Gly Glu Glu Ile Pro Thr Phe Arg Asn Leu Val 530 535 540 Ser Gly Ser Tyr Ser Gly His Leu 545

【０１０９】配列番号：４ 配列の長さ：１７５ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列： Glu Glu Ile Pro Gln Gly Ala Asp Val Asn Val Ile Pro Lys Asn 1 5 10 15 Glu Lys Lys Ala Arg Glu Leu Ile Lys Lys Leu Asn Leu Lys Gln 20 25 30 Ile Lys Gly Ile Ser Arg Val Thr Phe Lys Gln Arg Gly Asn Leu 35 40 45 Ile Tyr Ala Ile Asp Ser Pro Asp Val Tyr Arg Ser Ala Ala Gly 50 55 60 Thr Tyr Val Val Phe Gly Glu Ala Lys Val Asp Asp Met Asn Gln 65 70 75 Arg Ile Ala Glu Ala Gln Ala Gln Gln Ala Gln Gln Glu Ala Leu 80 85 90 Gln Lys Ala Ala Ala Asp Ala Gly Lys Thr Glu Asp Lys Ser Pro 95 100 105 Glu Ala Ile Thr Ala Asp Leu Glu Lys Ala Ser Leu Gly Asp Lys 110 115 120 Lys Ala Glu Asp Glu Glu Glu Asp Glu Gly Glu Ile Asp Glu Thr 125 130 135 Gly Leu Asp Pro Lys Asp Ile Glu Ile Val Val Glu Gln Thr Gln 140 145 150 Val Ser Arg Ala Lys Ala Val Lys Ala Leu Arg Asn His Asp Gly 155 160 165 Asp Met Val Asn Ala Ile Met Asp Leu Ser 170 175

【０１１０】配列番号：５ 配列の長さ：８８ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列： Glu Asp Leu Phe Ala Leu Ser Lys Glu Thr Ala Gln Phe Glu Ala 1 5 10 15 Asp Ser Phe Glu Leu Lys Gln Lys Leu Ala Val Ser His Glu Ala 20 25 30 Lys Ser Val Leu Asp Ser Trp Val Arg Phe Glu Gln Gln Gln Arg 35 40 45 Gln Leu Glu Gln Glu Gln Leu Ala Lys Glu Val Ile Asp Lys Val 50 55 60 Asp Lys Glu Ile Ala Asn Pro Lys Phe Gln Asp Lys Val Leu Ala 65 70 75 Glu Ser Leu Asn Glu Ile Glu Lys Leu Phe Ala Lys Asn 80 85

【０１１１】配列番号：６ 配列の長さ：２６４ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列： Met Pro Ala Ser Arg Glu Asp Ser Val Tyr Leu Ala Lys Leu Ala 1 5 10 15 Glu Gln Ala Glu Arg Tyr Glu Glu Met Val Glu Asn Met Lys Ala 20 25 30 Val Ala Ser Ser Gly Gln Glu Leu Ser Val Glu Glu Arg Asn Leu 35 40 45 Leu Ser Val Ala Tyr Lys Asn Val Ile Gly Ala Arg Arg Ala Ser 50 55 60 Trp Arg Ile Val Ser Ser Ile Glu Gln Lys Glu Glu Ala Lys Gly 65 70 75 Asn Glu Ser Gln Val Ala Leu Ile Arg Asp Tyr Arg Ala Lys Ile 80 85 90 Glu Ala Glu Leu Ser Lys Ile Cys Glu Asp Ile Leu Ser Val Leu 95 100 105 Ser Asp His Leu Ile Thr Ser Ala Gln Thr Gly Glu Ser Lys Val 110 115 120 Phe Tyr Tyr Lys Met Lys Gly Asp Tyr His Arg Tyr Leu Ala Glu 125 130 135 Phe Ala Ile Ala Glu Lys Arg Lys Glu Ala Ala Asp Leu Ser Leu 140 145 150 Glu Ala Tyr Lys Ala Ala Ser Asp Val Ala Val Thr Glu Leu Pro 155 160 165 Pro Thr His Pro Ile Arg Leu Gly Leu Ala Leu Asn Phe Ser Val 170 175 180 Phe Tyr Tyr Glu Ile Leu Asn Ser Pro Asp Arg Ala Cys His Leu 185 190 195 Ala Lys Gln Ala Phe Asp Asp Ala Val Ala Asp Leu Glu Thr Leu 200 205 210 Ser Glu Asp Ser Tyr Lys Asp Ser Thr Leu Ile Met Gln Leu Leu 215 220 225 Arg Asp Asn Leu Thr Leu Trp Thr Asp Leu Ser Glu Ala Pro Ala 230 235 240 Ala Thr Glu Glu Gln Gln Gln Ser Ser Gln Ala Pro Ala Ala Gln 245 250 255 Pro Thr Glu Gly Lys Ala Asp Gln Glu 260

【０１１２】配列番号：７ 配列の長さ：２２４ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列： Gln Lys Thr Ala Glu Glu Arg Ala Ala Ala Lys Lys Val Arg Lys 1 5 10 15 Ala Ala Asn Lys Glu Lys Arg Lys Val Ile Phe Asp Arg Ala Ala 20 25 30 Ala Tyr Gln Lys Glu Tyr Thr Glu Ala Glu Arg Ser Val Ile Lys 35 40 45 Ala Lys Arg Asp Ala Lys Ala Ser Asn Ser Tyr Tyr Val Asp Ala 50 55 60 Gln Pro Lys Leu Val Phe Val Val Arg Ile Lys Gly Ile Asn Lys 65 70 75 Ile Pro Pro Lys Pro Arg Lys Val Leu Gln Leu Leu Arg Leu Thr 80 85 90 Gln Ile Asn Ala Gly Val Phe Val Arg Leu Thr Lys Ala Thr Ser 95 100 105 Glu Leu Ile Lys Leu Ala Glu Pro Tyr Val Ala Tyr Gly Tyr Pro 110 115 120 Ser Leu Ser Thr Ile Arg Gln Leu Val Tyr Lys Arg Gly Phe Gly 125 130 135 Lys Val Asn Lys Gln Arg Ile Ala Leu Ser Asp Asn Ala Ile Ile 140 145 150 Glu Ala Asn Leu Gly Lys Phe Asn Ile Leu Ser Ile Glu Asp Leu 155 160 165 Ile His Glu Ile Tyr Thr Val Gly Pro Asn Phe Lys Gln Val Ser 170 175 180 Asn Phe Leu Trp Pro Phe Lys Leu Ser Asn Pro Asn Gly Gly Phe 185 190 195 Arg Ala Arg Lys Phe Gln His Phe Ile Gln Gly Gly Asp Thr Gly 200 205 210 Asn Arg Glu Gln Phe Ile Asn Ala Leu Val Lys Gln Met Asn 215 220

【０１１３】配列番号：８ 配列の長さ：１１５ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列： Lys Lys Leu Ala His Ala Glu Met Glu Gln Ala Ala Glu Leu Leu 1 5 10 15 Ala Glu Glu Ala Lys Thr Thr Lys Ser Ala Ala Ala Ala Arg Thr 20 25 30 Ala Ala Ser Gly Val Thr Thr Ala Ser Ala Gln Asn Ala Lys Thr 35 40 45 Ile Arg Ser Pro Ile Val Gln Ala Val Arg Thr Leu Trp Lys Gln 50 55 60 Gly Gly Ile Lys Ala Phe Tyr Val Gly Asn Gly Leu Asn Val Met 65 70 75 Lys Val Phe Pro Glu Ser Ala Met Lys Phe Gly Ser Phe Glu Ala 80 85 90 Ala Lys Arg Phe Phe Ala Arg Ile Glu Gly Val Asn Asp Thr Thr 95 100 105 Lys Ile Ser Lys Ile Ser Thr Tyr Leu Ala 110 115

【０１１４】配列番号：９ 配列の長さ：６１３ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列： Met Ala Asp Gly Val Phe Gln Gly Ala Ile Gly Ile Asp Leu Gly 1 5 10 15 Thr Thr Tyr Ser Cys Val Ala Thr Tyr Asp Ser Ala Val Glu Ile 20 25 30 Ile Ala Asn Glu Gln Gly Asn Arg Val Thr Pro Ser Phe Val Ala 35 40 45 Phe Thr Ser Glu Glu Arg Leu Ile Gly Asp Ala Ala Lys Asn Gln 50 55 60 Ala Ala Leu Asn Pro Lys Asn Thr Val Phe Asp Ala Lys Arg Leu 65 70 75 Ile Gly Arg Ala Phe Asp Asp Glu Ser Val Gln Lys Asp Ile Lys 80 85 90 Ser Trp Pro Phe Lys Val Val Glu Ser Asn Gly Gln Pro Leu Ile 95 100 105 Glu Val Glu Tyr Leu Asp Glu Thr Lys Thr Phe Ser Pro Gln Glu 110 115 120 Ile Ser Ser Met Val Leu Thr Lys Met Lys Glu Ile Ala Glu Ala 125 130 135 Lys Ile Gly Lys Lys Val Glu Lys Ala Val Val Thr Val Pro Ala 140 145 150 Tyr Phe Asn Asp Ala Gln Arg Gln Ala Thr Lys Asp Ala Gly Ala 155 160 165 Ile Ala Gly Leu Asn Val Leu Arg Ile Ile Asn Glu Pro Thr Ala 170 175 180 Ala Ala Ile Ala Tyr Gly Leu Gly Ala Gly Lys Ser Glu Lys Glu 185 190 195 Arg His Val Leu Ile Phe Asp Leu Gly Gly Gly Thr Phe Asp Val 200 205 210 Ser Leu Leu Asn Ile Thr Gly Gly Val Phe Thr Val Lys Ala Thr 215 220 225 Ala Gly Asp Thr His Leu Gly Gly Gln Asp Phe Asp Thr Asn Leu 230 235 240 Leu Glu His Phe Lys Lys Glu Phe Gln Lys Lys Thr Gly Asn Asp 245 250 255 Ile Ser Ser Asp Ala Arg Ala Leu Arg Arg Leu Arg Thr Ala Cys 260 265 270 Glu Arg Ala Lys Arg Ser Leu Ser Ser Gly Thr Gln Thr Thr Val 275 280 285 Glu Ile Asp Ser Leu Phe Asp Gly Glu Asp Phe Ser Ala Asn Ile 290 295 300 Thr Arg Ala Arg Phe Glu Asp Ile Asn Ser Ala Leu Phe Lys Ser 305 310 315 Thr Leu Glu Pro Val Glu Gln Val Leu Lys Asp Ala Lys Ile Ser 320 325 330 Lys Ser Gln Val Asp Glu Val Val Leu Val Gly Gly Ser Thr Arg 335 340 345 Ile Pro Lys Val Gln Lys Leu Leu Ser Asp Phe Phe Asp Gly Lys 350 355 360 Gln Leu Glu Lys Ser Ile Asn Pro Asp Glu Ala Val Ala Tyr Gly 365 370 375 Ala Ala Val Gln Gly Ala Ile Leu Thr Gly Gln Ser Thr Asn Asp 380 385 390 Asp Thr Lys Asp Leu Leu Leu Leu Asp Val Ile Pro Leu Ser Leu 395 400 405 Gly Val Ala Met Gln Gly Asn Val Phe Ala Pro Val Val Pro Arg 410 415 420 Asn Thr Thr Val Pro Thr Ile Lys Arg Arg Thr Phe Thr Thr Val 425 430 435 Ala Asp His Gln Thr Thr Val Gln Phe Pro Val Tyr Gln Gly Glu 440 445 450 Arg Val Asn Cys Ser Glu Asn Thr Leu Leu Gly Glu Phe Asp Leu 455 460 465 Lys Asn Ile Pro Pro Met Gln Ala Gly Glu Pro Val Leu Glu Ala 470 475 480 Ile Phe Glu Val Asp Ala Asn Gly Ile Leu Lys Val Thr Ala Val 485 490 495 Glu Lys Ser Thr Gly Arg Ser Ala Asn Ile Thr Ile Ser Asn Ser 500 505 510 Ile Gly Arg Leu Ser Thr Glu Glu Ile Glu Lys Met Ile Ser Asp 515 520 525 Ala Glu Lys Phe Lys Ser Ser Asp Asp Ala Phe Ala Lys Arg His 530 535 540 Glu Gln Lys Gln Lys Leu Glu Ala Tyr Val Ala Ser Val Glu Ser 545 550 555 Thr Val Thr Asp Pro Val Leu Ser Ala Lys Leu Lys Lys Ser Ala 560 565 570 Lys Asp Lys Ile Glu Ala Ala Leu Ser Asp Ala Leu Gln Thr Leu 575 580 585 Glu Ile Glu Glu Ser Ser Ala Asp Asp Tyr Arg Lys Ala Glu Leu 590 595 600 Ala Leu Lys Arg Ala Val Thr Lys Gly Met Ala Thr Arg 605 610

【０１１５】配列番号：１０ 配列の長さ：８３７ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA to mRNA 配列： AGCACAATGG CTCGTCAATT TTTCGTAGGT GGTAACTTCA AAGCTAACGG TACCAAACAA 60 CAAATCACTT CAATCATCGA CAACTTGAAC AAGGCTGATT TACCAAAGGA TGTCGAAGTT 120 GTCATTTGTC CACCCGCCCT TTACCTTGGT TTAGCTGTTG AGCAAAACAA ACAACCAACT 180 GTTGCCATTG GTGCTCAAAA TGTTTTTGAC AAGTCATGTG GTGCTTTCAC TGGTGAAACC 240 TGTGCTTCTC AAATCTTGGA TGTTGGTGCC AGCTGGACTT TAACTGGTCA CAGTGAAAGA 300 AGAACCATTA TCAAAGAATC CGATGAATTC ATTGCTGAAA AAACCAAGTT TGCCTTGGAC 360 ACTGGTGTCA AAGTTATTTT ATGTATTGGT GAAACCTTAG AGGAAAGAAA AGGTGGTGTC 420 ACTTTGGATG TTTGTGCCAG ACAATTGGAT GCTGTTTCCA AGATTGTTTC TGATTGGTCA 480 AACATTGTTG TTGCTTACGA ACCTGTTTGG GCAATTGGTA CTGGTTTAGC CGCTACCCCA 540 GAAGATGCTG AAGAAACCCA CAAAGGTATT AGAGCTCATT TGGCCAAGAC CATTGGTGCC 600 GAACAAGCTG AAAAAACCAG AATCTTGTAC GGTGGTTCAG TTAACGGTAA GAACGCTAAG 660 GATTTCAAAG ACAAAGCAAA TGTTGATGGT TTCTTAGTCG GTGGTGCTTC ATTAAAACCA 720 GAATTTGTTG ATATCATCAA ATCTAGATTA TAAACAGTAT ATTAAAAACT ATATGCCTAT 780 AGAATTTAGC ATGTTGTTGT GAATTTGTAA TGAATCTATA AAAATGTGCT CATGAAA 837

【０１１６】配列番号：１１ 配列の長さ：３９６ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA to mRNA 配列： GTTGCCGAAC AAGTTCAAAA AACCTATTTG GACGATGTCA CCGGTGAACA AGTTTCCAAA 60 ACCGAATTGA AAAAAAGACA AAAACAAAGA GCAATTGAAG CTAAGAAAGC TGCTAAAGCT 120 GCTGCCACTC CAGCCAAAAC TACCACCAAA AAGAAAGATG AATTGGCTGA TTTGAATCCA 180 AATCAATTTT TCGAAATCAG ATCTCGTCAA ATTTCTGAAT TAAGAGAGAA AAACAATGCT 240 GATCCATCAG CTTTCAACCC ATACCCTCAC AAATTCAATG TTACCACCAA AATTCCCGAA 300 TTTGTTGAAA AATACGCCCA TTTGCAAAGA GGGGAAACTT TGAAAGATGT CACCGTTTCC 360 GTTAGTGGTA GAATAATGAC CAAAAGAGAA TCAGGA 396

【０１１７】配列番号：１２ 配列の長さ：１７００ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA to mRNA 配列： CTAAAGTCCA AAGTTGGTTC AATTTTTGGC AGAAAAAAGA AGAAGGAAAA ATTCACTGGA 60 GCTGATTCAA TTGCTGAAGA TGAATCATTA TCTGAGGTTT CTTTGCCACC TACAAGAACT 120 AGGAATTCAT CGGTGTTGTC TCGCAGTAAC TCAACTAGAA GATCTTTTAT TGACCGCTTC 180 CATAGAGATG AGTCTAGCAC TGGCATTAGC AGACAACATG AGCAGCACCA GCAGCCTTTG 240 AGTGATCCTT TGCCTCACGC AGAGAAGCCT CAACCGGAAA TTCCCCAATC ACCAGAAGCT 300 CCACAGGCCA AATCACTAGA GCCTGTATCA GAAGTACTAA AAGAACTGTT CCCACCTATG 360 CAAAACGGGT CCGAAAGGAA AGGTGAAAAT CAGCAGTCGA GAGTTGATGT ATCCTCTCAA 420 ACCTTGTCAC CAGTTACTCC TACTCACGAT GGATTTGGTG GTTCTGTTAA ACCATTACCA 480 GAACCTGTTG ATTCTCCAAA TGTGATTAAA TACAATGACT CGGACGACTC TTCTACAGAA 540 GAACGTAGAG GCTCGTTACT TGAAAAACAC AATTTAGAAG TACAACCTGT ATCTTCCCCA 600 TTCACTACTC AACCGCCAGC ACCTGTGCCA CAAGAATCCA GATCTAGACA AAGCAGTGAT 660 GGCATTTACT CGTTTGAAGC GGGTGATGAT TCCAACCCAA TCTCGGCTAC TCCAAGATCC 720 GAGCAAAATG TGTTTGGACA GATGCCAGAC CCAAATTTGT CTCCTGAAAA GACTCTTGCT 780 CCACCACCAC CACCTTCGAG AAAAGTTTTG CACCATGAAG AACCAACTGT AAGGGATTCA 840 GCTCTTTTCC ACAATTTACC TGCTGCCTCC CATTCTGGAA GAGATTCGGT AATGGCTCCA 900 TTAGCAAGTC AAGACAGGGG TCATTCGTTG TTGAAAAATG ATTTCAAACA CGAAAACTTG 960 GCATCCACCC TCGGATTGAG CTCTTCTATT GCTGAAGTCA TCAATGCCAG CTTTAAGGAT 1020 GGACAGTTGA TTAAATCACA AGTAGTTGGT GAAGTGGCCT TCAATTATAA TGGTAATGCT 1080 TCCGATCCAC TTGTGGTCAC TATTCCTAAT AGTTTCGATA AAGTACTCGT GAACAAGACT 1140 TTTATTGAGG ATTTAGGTCA AAGCAAGTAT AAAGTGAACC CAACTTCAAT TACGTCTAAA 1200 ACTCTTGGTG GGTTGAAATA TCTTTTGAAA CCAACACAGG TACCAGTGAT AATTCAACAA 1260 ATATGGAAAT TTGAACCTCA TCAGTCAAGT TTGATGGTTA GCATTCGTTC AACTACACCT 1320 TTGGTATTGG AAAATTTTGT TGTCTCTGTA GCTTTGAATC AAGACATTGA AGCAACATCT 1380 GCTTCCTCAA AGCCTCAAGG TGCGTTTAAT AAAGAGAAAA ACAGAATAAC ATGGAGATAT 1440 CCACAGTCCC TCGCATTGAA TGGTGTAGAG CGTTTGATAG CTAGATTTAT GACTAATGGA 1500 TTGGGTTCCG AACATGAGTC TGGTGTGCAG ATTAAATTTC AAGTTAAGGA TCCACAAGTC 1560 AAGTACTGTA GTATTTACAG TGAGAATGGC GAAGAGATTC CTACGTTTAG AAATTTGGTT 1620 AGCGGTAGTT ATAGTGGTCA TCTTTAAGTT ATCTGTTTTG AGATTAGTCT CTTGTTGAAT 1680 TGAAAAAAAA AAAAACGTGA 1700

【０１１８】配列番号：１３ 配列の長さ：５８５ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA to mRNA 配列： GAAGAAATCC CACAAGGTGC TGACGTTAAT GTCATTCCAA AAAACGAAAA GAAAGCTAGA 60 GAATTGATCA AGAAGTTAAA CTTGAAACAA ATCAAAGGTA TTTCCAGAGT CACTTTCAAA 120 CAAAGAGGAA ACTTGATTTA TGCCATTGAT TCCCCGGATG TCTACAGATC TGCTGCTGGT 180 ACTTATGTTG TCTTTGGTGA AGCTAAAGTT GATGACATGA ACCAAAGAAT TGCTGAAGCT 240 CAAGCTCAAC AAGCTCAACA AGAAGCTTTA CAAAAAGCTG CTGCTGATGC CGGTAAAACC 300 GAAGACAAAT CACCAGAAGC TATTACTGCT GATTTAGAAA AGGCTTCTTT GGGTGACAAG 360 AAAGCTGAAG ACGAAGAAGA AGACGAAGGT GAGATTGACG AAACTGGTTT GGATCCAAAA 420 GATATTGAAA TTGTTGTTGA ACAAACCCAA GTTTCTAGAG CCAAGGCTGT CAAGGCTTTA 480 AGAAATCACG ACGGTGACAT GGTCAACGCT ATTATGGATT TGTCTTAGAT AATACGTGTG 540 TATATTGACT AGCTAATATA ATATATGTAT ATATTTATCT GTAAA 585

【０１１９】配列番号：１４ 配列の長さ：３５２ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA to mRNA 配列： GAAGATTTGT TTGCTTTATC TAAAGAAACC GCTCAATTCG AAGCTGATTC ATTTGAATTA 60 AAACAAAAAT TGGCTGTTTC TCACGAAGCT AAATCTGTTT TGGACTCTTG GGTTAGATTT 120 GAACAACAAC AAAGACAATT GGAACAAGAA CAATTGGCCA AAGAAGTCAT TGATAAAGTT 180 GACAAAGAAA TTGCTAATCC AAAATTCCAA GACAAAGTAT TGGCTGAATC TCTTAACGAA 240 ATCGAAAAAT TGTTTGCTAA AAACTAGATA GATTTTTTAT ATATATAACG AACAAAAAGG 300 TTTGATGCCT AAAGGAGTGT CACTCAAATA TATATTTCAT ATATTATTTA AA 352

【０１２０】配列番号：１５ 配列の長さ：８８０ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA to mRNA 配列： AAAAGAACAA AAATTATAAT GCCAGCCTCC CGTGAAGATT CCGTTTACCT TGCTAAATTA 60 GCCGAACAAG CAGAACGTTA TGAAGAAATG GTTGAAAACA TGAAAGCCGT TGCTTCCTCT 120 GGCCAAGAAT TGTCTGTTGA AGAACGTAAT TTATTATCTG TTGCTTACAA GAATGTCATT 180 GGTGCTCGTC GTGCTTCTTG GAGAATTGTT TCATCAATTG AACAAAAAGA AGAAGCCAAA 240 GGAAATGAGA GCCAAGTTGC TTTGATCAGA GATTACCGTG CCAAGATTGA AGCTGAATTG 300 TCTAAAATTT GTGAAGATAT TCTCTCTGTG TTGAGCGACC ATTTAATTAC ATCTGCCCAA 360 ACTGGTGAAT CAAAAGTATT TTACTACAAG ATGAAAGGTG ATTACCACAG ATACTTGGCT 420 GAATTTGCTA TCGCTGAAAA ACGTAAGGAA GCTGCTGATT TATCATTAGA GGCTTATAAA 480 GCTGCTTCTG ACGTTGCTGT GACCGAGTTG CCACCAACCC ATCCAATCAG ATTAGGTTTA 540 GCATTGAACT TCTCTGTTTT CTACTATGAA ATTTTGAACT CCCCAGATAG AGCTTGTCAT 600 TTAGCTAAAC AAGCTTTCGA TGATGCTGTT GCTGATTTAG AAACCTTATC TGAAGATTCA 660 TACAAGGATT CAACTTTGAT TATGCAATTA TTGAGAGATA ACTTGACTTT ATGGACCGAT 720 TTATCTGAAG CCCCAGCTGC CACTGAAGAA CAACAACAAT CCAGTCAAGC TCCAGCTGCT 780 CAACCAACAG AAGGTAAGGC TGATCAAGAA TAGATTGTAT GTAAAGTTTT AGTTATATTT 840 CTTGTGTGAA TTTAATTTAG TTTATTGTAT TGTATTCAAA 880

【０１２１】配列番号：１６ 配列の長さ：７２１ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA to mRNA 配列： CAAAAAACTG CTGAAGAAAG AGCTGCTGCC AAGAAGGTCA GAAAAGCTGC CAACAAAGAA 60 AAGAGAAAGG TTATCTTTGA CAGAGCTGCT GCTTACCAAA AGGAATACAC TGAAGCTGAA 120 AGATCTGTCA TCAAAGCCAA GAGAGATGCT AAAGCTTCTA ACTCTTACTA CGTTGATGCT 180 CAACCAAAAT TGGTTTTCGT TGTCAGAATC AAGGGTATTA ACAAGATTCC ACCAAAGCCA 240 AGAAAGGTCT TGCAATTATT AAGATTGACC CAAATCAATG CTGGTGTTTT CGTCAGATTG 300 ACTAAAGCCA CCTCTGAATT GATCAAATTG GCTGAACCAT ACGTTGCTTA CGGTTACCCA 360 TCTTTGTCTA CCATCAGACA ATTAGTTTAC AAGAGAGGTT TCGGTAAGGT CAACAAGCAA 420 AGAATTGCTT TGTCCGACAA TGCCATCATT GAAGCCAACT TGGGTAAATT CAATATCTTG 480 TCTATTGAAG ATTTGATTCA CGAAATTTAC ACTGTTGGTC CAAACTTCAA ACAAGTCAGC 540 AACTTCTTGT GGCCATTCAA ATTATCCAAT CCAAACGGTG GTTTCAGAGC CAGAAAATTC 600 CAACACTTTA TCCAAGGTGG TGACACCGGT AACAGAGAAC AATTCATTAA CGCTTTGGTC 660 AAACAAATGA ACTAAGTTTA ATGTATCATT TCAAACTTAC CTTATCTACC TACTACACCT 720 C 721

【０１２２】配列番号：１７ 配列の長さ：３４５ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA to mRNA 配列： AAAAAATTAG CACATGCAGA AATGGAACAG GCAGCAGAAC TACTAGCAGA AGAAGCCAAA 60 ACCACCAAGA GCGCCGCTGC AGCAAGAACA GCAGCATCTG GTGTAACAAC TGCATCAGCT 120 CAAAATGCAA AGACCATTAG ATCACCCATA GTTCAAGCAG TAAGAACACT TTGGAAACAA 180 GGAGGAATTA AAGCATTTTA CGTTGGTAAT GGATTAAATG TAATGAAAGT GTTTCCTGAA 240 TCAGCAATGA AATTTGGCTC TTTTGAAGCT GCCAAACGAT TTTTTGCTCG AATTGAAGGT 300 GTTAATGACA CCACCAAAAT CTCCAAAATC TCTACATATT TAGCC 345

【０１２３】 配列番号：１８ 配列の長さ：１０２６ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA to mRNA 配列： GTTGAACAAG TTTTGAAAGA TGCTAAAATC AGCAAATCCC AAGTTGACGA AGTTGTCTTG 60 GTTGGTGGTT CCACCAGAAT TCCAAAAGTC CAAAAATTGT TGTCTGACTT CTTTGACGGT 120 AAACAATTGG AAAAATCTAT TAACCCAGAT GAAGCTGTTG CTTACGGTGC TGCTGTTCAA 180 GGTGCTATCT TGACCGGTCA ATCCACTAAC GATGACACCA AAGACTTGTT ATTGTTGGAT 240 GTCATTCCAT TGTCTCTCGG TGTTGCTATG CAAGGTAACG TTTTTGCCCC AGTTGTCCCA 300 AGAAACACCA CTGTTCCAAC CATCAAGAGA AGAACTTTCA CCACTGTTGC TGACCACCAA 360 ACCACTGTTC AATTCCCAGT TTACCAAGGT GAACGTGTCA ACTGTACTGA AAACACCTTG 420 TTGGGTGAAT TTGACTTGAA AAACATCCCA CCAATGCAAG CCGGTGAACC AGTTTTGGAA 480 GCCATTTTTG AAGTTGATGC TAACGGTATC TTGAAGGTCA CTGCTGTTGA AAAATCCACT 540 GGTAGATCTG CTAACATCAC CATCTCCAAC TCCATTGGTA GATTGTCAAC TGAAGAAATC 600 GAAAAAATGA TCTCTGATGC TGAAAAATTC AAATCATCCG ATGATGCTTT CGCCAAGAGA 660 CACGAACAAA AACAAAAATT AGAAGCTTAC GTTGCTTCCG TTGAATCTAC TGTCACTGAC 720 CCAGTCTTGT CTGCTAAATT GAAGAAATCT GCCAAGGACA AGATCGAAGC TGCTTTGTCT 780 GATGCTTTGC AAACTTTGGA AATTGAAGAA TCTTCTGCTG ACGACTACAG AAAAGCTGAA 840 TTAGCTTTGA AGAGAGCTGT CACCAAAGGT ATGGCTACCC GTTAAGTAAA CTAGATGTTG 900 AATGTCATTT GTTTTACGCC ATATTTTTTT TTTCCCTTTA ACATCATTCA CCCCTCCCCC 960 TTACTATGTG TGTATATTTA GTATAGTCAT CCACTAATAC AGAAAGTAAA AATAAATTTG 1020 ATTAAA 1026

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は、Ｃ．アルビカンスのリシルtRNAシンテ
ターゼホモログ遺伝子とTPI ホモログ遺伝子由来の組み
換えタンパク質を、ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電
気泳動に付して得られた結果を示す図である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ Ｃ０７Ｋ 16/14 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ｚ Ｃ１２Ｎ 5/10 Ｇ０１Ｎ 33/50 Ｔ Ｃ１２Ｑ 1/68 33/53 Ｑ Ｇ０１Ｎ 33/50 33/569 Ｆ 33/53 Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＣＶ 33/569 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ａ (72)発明者 小川 淳子 滋賀県大津市瀬田３丁目４番１号 寳酒造 株式会社中央研究所内 (72)発明者 大門 尚志 滋賀県大津市瀬田３丁目４番１号 寳酒造 株式会社中央研究所内 (72)発明者 加藤 郁之進 滋賀県大津市瀬田３丁目４番１号 寳酒造 株式会社中央研究所内

Claims (14)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 カンジダ・アルビカンス感染抵抗性哺乳
   類由来の抗血清により認識されることを特徴とする、抗
   原タンパク質。
2. 【請求項２】 抗原タンパク質が、 （Ａ−１） 配列番号：１〜配列番号：９に示されるア
   ミノ酸配列のいずれかを有するポリぺプチド、 （Ａ−２） 配列番号：１〜配列番号：９に示されるア
   ミノ酸配列のいずれかにおいて、１若しくは複数個のア
   ミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列
   を有するポリぺプチド、 （Ａ−３） 配列番号：１０〜配列番号：１８に示され
   る塩基配列のいずれかを有する核酸にコードされるポリ
   ぺプチド、又は （Ａ−４） 配列番号：１０〜配列番号：１８に示され
   る塩基配列のいずれかにおいて、１若しくは複数個の塩
   基が欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列を有する
   核酸にコードされるポリぺプチドである、請求項１記載
   の抗原タンパク質。
3. 【請求項３】 請求項１又は２記載の抗原タンパク質と
   免疫学的に同等な抗原タンパク質。
4. 【請求項４】 カンジダ・アルビカンス感染抵抗性哺乳
   類由来の抗血清により認識される抗原タンパク質をコー
   ドする核酸。
5. 【請求項５】 核酸が、 （Ｂ−１） 配列番号：１〜配列番号：９に示されるア
   ミノ酸配列のいずれかを有するポリぺプチドをコードす
   る核酸、 （Ｂ−２） 配列番号：１〜配列番号：９に示されるア
   ミノ酸配列のいずれかにおいて、１若しくは複数個のア
   ミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列
   を有するポリぺプチドをコードする核酸、 （Ｂ−３） 配列番号：１０〜配列番号：１８に示され
   る塩基配列のいずれかを有する核酸、 （Ｂ−４） 配列番号：１０〜配列番号：１８に示され
   る塩基配列のいずれかにおいて、１若しくは複数個の塩
   基が欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列を有する
   核酸、又は（Ｂ−５） （Ｂ−１）〜（Ｂ−４）いずれ
   か記載の核酸に、ストリンジェントな条件下でハイブリ
   ダイズする核酸である、請求項４記載の核酸。
6. 【請求項６】 請求項４又は５記載の核酸を含有してな
   るベクター。
7. 【請求項７】 請求項６記載のベクターによって形質転
   換されてなる形質転換体。
8. 【請求項８】 請求項７記載の形質転換体を、請求項４
   又は５記載の核酸にコードされる抗原タンパク質の発現
   可能な条件下で培養することを特徴とする、カンジダ・
   アルビカンス感染抵抗性哺乳類由来の抗血清により認識
   される抗原タンパク質の生産方法。
9. 【請求項９】 請求項１〜３いずれか記載の抗原タンパ
   ク質、又は請求項８記載の生産方法により得られる抗原
   タンパク質を含有することを特徴とする医薬組成物。
10. 【請求項１０】 請求項１〜３いずれか記載の抗原タン
    パク質、又は請求項８記載の生産方法により得られる抗
    原タンパク質を含有することを特徴とする診断用組成
    物。
11. 【請求項１１】 請求項４又は５記載の核酸を含有する
    ことを特徴とする医薬組成物。
12. 【請求項１２】 請求項４又は５記載の核酸を含有する
    ことを特徴とする診断用組成物。
13. 【請求項１３】 請求項１〜３いずれか記載の抗原タン
    パク質に特異的に結合する抗体又は抗体断片。
14. 【請求項１４】 請求項４又は５記載の核酸に特異的に
    結合する核酸。