JPH1072486A - オリゴヌクレオチドの固相合成 - Google Patents
オリゴヌクレオチドの固相合成Info
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- JPH1072486A JPH1072486A JP9185142A JP18514297A JPH1072486A JP H1072486 A JPH1072486 A JP H1072486A JP 9185142 A JP9185142 A JP 9185142A JP 18514297 A JP18514297 A JP 18514297A JP H1072486 A JPH1072486 A JP H1072486A
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- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
- C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
- C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
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- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
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- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 固相合成によるオリゴヌクレオチドの製法に
おいて、固体支持体に結合しているオリゴヌクレオチド
から保護基を除去するための改良製法を提供することを
課題とする。 【解決手段】 ａ) 既知の方法に従って固体支持体上で
ヌクレオチドを連続的に合成し、核酸塩基上に存在する
環外アミノ基が環状ジアシル基で保護され、かつ非求核
性強塩基により存在しているいずれのホスフェート保護
基も除去することが可能であり、 ｂ) 固体支持体に結合しているオリゴヌクレオチドから
保護基を除去し、そして ｃ) 保護基を除去したオリゴヌクレオチドを固体支持体
から分離することによって固相合成でオリゴヌクレオチ
ドを製造する方法において、固体支持体に結合している
オリゴヌクレオチドから適当な有機溶媒中で非求核性強
塩基の存在下に保護基を除去することを特徴とするオリ
ゴヌクレオチドの製造方法。 【効果】 オリゴヌクレオチドの固相合成において、環
外アミノ基の環状ジアシル保護基が非求核性強塩基の使
用により好都合に除去される。
おいて、固体支持体に結合しているオリゴヌクレオチド
から保護基を除去するための改良製法を提供することを
課題とする。 【解決手段】 ａ) 既知の方法に従って固体支持体上で
ヌクレオチドを連続的に合成し、核酸塩基上に存在する
環外アミノ基が環状ジアシル基で保護され、かつ非求核
性強塩基により存在しているいずれのホスフェート保護
基も除去することが可能であり、 ｂ) 固体支持体に結合しているオリゴヌクレオチドから
保護基を除去し、そして ｃ) 保護基を除去したオリゴヌクレオチドを固体支持体
から分離することによって固相合成でオリゴヌクレオチ
ドを製造する方法において、固体支持体に結合している
オリゴヌクレオチドから適当な有機溶媒中で非求核性強
塩基の存在下に保護基を除去することを特徴とするオリ
ゴヌクレオチドの製造方法。 【効果】 オリゴヌクレオチドの固相合成において、環
外アミノ基の環状ジアシル保護基が非求核性強塩基の使
用により好都合に除去される。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は固相合成によるオリゴヌ
クレオチドの製法の改良に関する。
クレオチドの製法の改良に関する。
【０００２】
【従来の技術】モノヌクレオチドの化学的重縮合はデオ
キシリボ核酸（ＤＮＡ）またはリボ核酸（ＲＮＡ）を製
造するための重要な方法である。オリゴヌクレオチド
は、遺伝子発現の阻害剤として（J.F. Milligan, M.D.
MatteucciおよびJ.C. Martin, J.Med. Chem. 36 (1993)
1923; E.UhlmannおよびA.Peyman, Chemical Review, 9
0 (1990) 543)、またはリボザイムとして(例えば、D.Ca
stanotto, J.J. Rossi, J.O. Deshler, Critical Rev.
Eukar. Gene Expr.2 (1992) 331)、または診断において
ＤＮＡプローブとして(例えば、BeckおよびKoester. An
al. Chem. 62 (1990) 2258）使用の範囲が広がりつつあ
る。従って、このような化合物を合成するのに適した方
法が大いに必要とされている。
キシリボ核酸（ＤＮＡ）またはリボ核酸（ＲＮＡ）を製
造するための重要な方法である。オリゴヌクレオチド
は、遺伝子発現の阻害剤として（J.F. Milligan, M.D.
MatteucciおよびJ.C. Martin, J.Med. Chem. 36 (1993)
1923; E.UhlmannおよびA.Peyman, Chemical Review, 9
0 (1990) 543)、またはリボザイムとして(例えば、D.Ca
stanotto, J.J. Rossi, J.O. Deshler, Critical Rev.
Eukar. Gene Expr.2 (1992) 331)、または診断において
ＤＮＡプローブとして(例えば、BeckおよびKoester. An
al. Chem. 62 (1990) 2258）使用の範囲が広がりつつあ
る。従って、このような化合物を合成するのに適した方
法が大いに必要とされている。
【０００３】オリゴヌクレオチドに関する先行技術は、
E. Sonveaux, Bioorg. Chem. 14 (1986) 274；E. Uhlma
nnおよびA. Peyman, Chemical Reviews, 90 (1990) 54
3；BeaucageおよびIyer, Tetrahedron 49 (1993) 10441
-10488で検討されている。ＤＮＡもしくはＲＮＡの化学
的合成での基本的な問題は、ヌクレオシド塩基および糖
残基のアミノおよびヒドロキシル基に対する適当な保護
基を見い出す問題である。一方では、これらの保護基は
重縮合反応の条件下、すなわち反応過程で安定でなけれ
ばならないし、他方これらの保護基は、反応終了時にホ
スホジエステル結合を再切断することなく再び除去され
得るように十分に不安定でなければならない〔H.G. Kho
rana；Pura Appl. Chem. 17 (1968) 349〕。
E. Sonveaux, Bioorg. Chem. 14 (1986) 274；E. Uhlma
nnおよびA. Peyman, Chemical Reviews, 90 (1990) 54
3；BeaucageおよびIyer, Tetrahedron 49 (1993) 10441
-10488で検討されている。ＤＮＡもしくはＲＮＡの化学
的合成での基本的な問題は、ヌクレオシド塩基および糖
残基のアミノおよびヒドロキシル基に対する適当な保護
基を見い出す問題である。一方では、これらの保護基は
重縮合反応の条件下、すなわち反応過程で安定でなけれ
ばならないし、他方これらの保護基は、反応終了時にホ
スホジエステル結合を再切断することなく再び除去され
得るように十分に不安定でなければならない〔H.G. Kho
rana；Pura Appl. Chem. 17 (1968) 349〕。
【０００４】現在のＤＮＡ合成は実際には、本質的に次
の三つの工程を備えているものである：(ａ)固体支持体
での様々な保護基を有するヌクレオチドの連続合成；
(ｂ)合成されたオリゴヌクレオチドの支持体からの分
離；(ｃ)オリゴヌクレオチドの脱保護基（保護基の除
去）。固体支持体でのオリゴヌクレオチドの合成は極め
て迅速（２０量体（２０mer）について約１時間必要で
ある）に行われ、また支持体からの分離も１時間以内に
完了するが、オリゴヌクレオチドの最終の脱保護基に問
題が残されている。標準的なオリゴヌクレオチド合成
（例えば、M. Reddy, N.B. Hanna, F. Farooqui, WO 95
/24413）では、ｄＡおよびｄＣについて確立されたベン
ゾイルまたｄＧについてブチロイル保護基を使用すると
きは、濃ＮＨ3による５５℃での約６時間の処理を要す
る。普通に保護されたヌクレオシド誘導体よりもアンモ
ニア性アミノリシスに対して一層感受性を有する完全な
シリーズの保護基が、最近になってこの後者の工程の迅
速化のために提案されている（M. Reddy等、上記参照；
BeaucageおよびIyer、上記参照）。これらの保護基は、
例えば、フェノキシアセタール基(Schulhof等；Nucl. A
cids Res. 15 (1987) 397)；ジメチルホルムアミジン基
（Vu等、Tetrahedron Lett. 31 (1990) 7269；もしくは
ｔ−ブチルフェノキシアセチル基（Sinha等、Biochimie
75 (1993) 13）もしくはReddy等に記載のフェニルアセ
チル保護基（上記参照）を包含している。これらのアン
モニア不安定保護基を用いる場合、５５℃での脱保護基
の時間は１５〜６０分に減縮されるが、それらの使用に
は不利な点を伴っている：まず第一に、これらの基が不
安定であるために、ＤＮＡ合成条件に対する例えばキャ
ッピング工程中での不安定性がもたらされる（Beaucage
およびIyer、上記参照）。フェノキシアセチル保護基は
例えばヌクレオチド誘導体の溶解性を低下させ、そのた
めに溶媒混合物を使用しなければならない。
の三つの工程を備えているものである：(ａ)固体支持体
での様々な保護基を有するヌクレオチドの連続合成；
(ｂ)合成されたオリゴヌクレオチドの支持体からの分
離；(ｃ)オリゴヌクレオチドの脱保護基（保護基の除
去）。固体支持体でのオリゴヌクレオチドの合成は極め
て迅速（２０量体（２０mer）について約１時間必要で
ある）に行われ、また支持体からの分離も１時間以内に
完了するが、オリゴヌクレオチドの最終の脱保護基に問
題が残されている。標準的なオリゴヌクレオチド合成
（例えば、M. Reddy, N.B. Hanna, F. Farooqui, WO 95
/24413）では、ｄＡおよびｄＣについて確立されたベン
ゾイルまたｄＧについてブチロイル保護基を使用すると
きは、濃ＮＨ3による５５℃での約６時間の処理を要す
る。普通に保護されたヌクレオシド誘導体よりもアンモ
ニア性アミノリシスに対して一層感受性を有する完全な
シリーズの保護基が、最近になってこの後者の工程の迅
速化のために提案されている（M. Reddy等、上記参照；
BeaucageおよびIyer、上記参照）。これらの保護基は、
例えば、フェノキシアセタール基(Schulhof等；Nucl. A
cids Res. 15 (1987) 397)；ジメチルホルムアミジン基
（Vu等、Tetrahedron Lett. 31 (1990) 7269；もしくは
ｔ−ブチルフェノキシアセチル基（Sinha等、Biochimie
75 (1993) 13）もしくはReddy等に記載のフェニルアセ
チル保護基（上記参照）を包含している。これらのアン
モニア不安定保護基を用いる場合、５５℃での脱保護基
の時間は１５〜６０分に減縮されるが、それらの使用に
は不利な点を伴っている：まず第一に、これらの基が不
安定であるために、ＤＮＡ合成条件に対する例えばキャ
ッピング工程中での不安定性がもたらされる（Beaucage
およびIyer、上記参照）。フェノキシアセチル保護基は
例えばヌクレオチド誘導体の溶解性を低下させ、そのた
めに溶媒混合物を使用しなければならない。
【０００５】核酸塩基の環外アミノ官能基のために保護
基を使用するに当たってのその他の基準は生成する生成
物の純度である。アンモニアを使用し、かつ支持体から
の分離後もしくは分離中に実施される保護基除去操作の
場合、オリゴヌクレオチドと除去された保護基との混合
物が常に得られる。それで、オリゴヌクレオチドは追加
の精製工程で清澄化しなければならない。オリゴヌクレ
オチドが固体支持体上に存在している間に、オリゴヌク
レオチドを固体支持体から分離することなしに、除去す
ることができるような保護基がさらに有利なものであ
る。かかる保護基の一例が、オリゴヌクレオチドが支持
体上にある間にＤＢＵで除去することのできるｐ−ニト
ロフェニルエチルオキシカルボニル保護基である。次に
アンモニアで支持体からオリゴヌクレオチドを分離する
ことによって、すでに純粋なオリゴヌクレオチドが得ら
れる（F. Himmelsbach等、 Tetrahedron 40 (1984) 5
9）。
基を使用するに当たってのその他の基準は生成する生成
物の純度である。アンモニアを使用し、かつ支持体から
の分離後もしくは分離中に実施される保護基除去操作の
場合、オリゴヌクレオチドと除去された保護基との混合
物が常に得られる。それで、オリゴヌクレオチドは追加
の精製工程で清澄化しなければならない。オリゴヌクレ
オチドが固体支持体上に存在している間に、オリゴヌク
レオチドを固体支持体から分離することなしに、除去す
ることができるような保護基がさらに有利なものであ
る。かかる保護基の一例が、オリゴヌクレオチドが支持
体上にある間にＤＢＵで除去することのできるｐ−ニト
ロフェニルエチルオキシカルボニル保護基である。次に
アンモニアで支持体からオリゴヌクレオチドを分離する
ことによって、すでに純粋なオリゴヌクレオチドが得ら
れる（F. Himmelsbach等、 Tetrahedron 40 (1984) 5
9）。
【０００６】核酸塩基の環外アミノ官能基に対して保護
基を使用することについてのそれ以上の基準は、使用す
る酸条件、一般には、５′−ヒドロキシル保護基を除去
するための各反応サイクルにおいては例えばジクロロメ
タン中の２％ジクロロ酢酸に対する安定性である。これ
らの条件は、特にデオキシアデノシンの場合、実質的な
程度の脱プリンをもたらすものである。環外アミノ官能
基に対する保護基として使用する場合、例えばフタロイ
ル基もしくはスクシニル基のような環状ジアシル基が脱
プリン条件に対して特に安定であることが見い出された
（Kume等、Tetrahedron Lett. 23 (1982) 4365；Nuclei
c Acids Res. 12 (1984) 8525；NucleicAcids Res. Sym
p. Ser. 11 (1982) 26；Chemistry Letters 1983，159
7）。しかしながら、これらの基はまたアンモニアで脱
保護基される(Kume等、上記参照)。その他の環状ジアシ
ル基の例はナフタロイル基であり（Dikshit等、Can. J.
Chem. 66 (1988) 2989）、このものは同じく脱プリン
に対して安定であり、またアンモニアで除去された。
基を使用することについてのそれ以上の基準は、使用す
る酸条件、一般には、５′−ヒドロキシル保護基を除去
するための各反応サイクルにおいては例えばジクロロメ
タン中の２％ジクロロ酢酸に対する安定性である。これ
らの条件は、特にデオキシアデノシンの場合、実質的な
程度の脱プリンをもたらすものである。環外アミノ官能
基に対する保護基として使用する場合、例えばフタロイ
ル基もしくはスクシニル基のような環状ジアシル基が脱
プリン条件に対して特に安定であることが見い出された
（Kume等、Tetrahedron Lett. 23 (1982) 4365；Nuclei
c Acids Res. 12 (1984) 8525；NucleicAcids Res. Sym
p. Ser. 11 (1982) 26；Chemistry Letters 1983，159
7）。しかしながら、これらの基はまたアンモニアで脱
保護基される(Kume等、上記参照)。その他の環状ジアシ
ル基の例はナフタロイル基であり（Dikshit等、Can. J.
Chem. 66 (1988) 2989）、このものは同じく脱プリン
に対して安定であり、またアンモニアで除去された。
【０００７】
【問題解決のための手段】意外にも、これらの環状ジア
シル基は脱プリン条件に対して特に安定であるばかりで
なく、非求核性強塩基例えばＤＢＵで容易に除去し得る
ことが見い出された。これはなお一層驚くべきことであ
る。その理由は、若干のフタロイル基はＤＢＵを用いて
導入されたからである（これは比較的低いＤＢＵ濃度で
はあるが）（Kamaibe等、 Tetrahedron Lett. 36 (1995)
91）。環状ジアシル基で保護されている核酸塩基の脱
プリンに対する高度の安定性のために、また支持体から
オリゴヌクレオチドを分離する前にこれらの基を容易に
除去できる可能性のために、これらの環状ジアシル基
は、オリゴヌクレオチド製造のための保護基として使用
するのに申し分なく適合しているものである。
シル基は脱プリン条件に対して特に安定であるばかりで
なく、非求核性強塩基例えばＤＢＵで容易に除去し得る
ことが見い出された。これはなお一層驚くべきことであ
る。その理由は、若干のフタロイル基はＤＢＵを用いて
導入されたからである（これは比較的低いＤＢＵ濃度で
はあるが）（Kamaibe等、 Tetrahedron Lett. 36 (1995)
91）。環状ジアシル基で保護されている核酸塩基の脱
プリンに対する高度の安定性のために、また支持体から
オリゴヌクレオチドを分離する前にこれらの基を容易に
除去できる可能性のために、これらの環状ジアシル基
は、オリゴヌクレオチド製造のための保護基として使用
するのに申し分なく適合しているものである。
【０００８】従って、本発明は、 ａ) 既知の方法に従って固体支持体上で、核酸塩基上に
存在する環外アミノ基が環状ジアシル基で保護されてお
り、かつ非求核性強塩基により存在しているいずれのホ
スフェート保護基も除去することが可能であるヌクレオ
チドを連続的に合成し、 ｂ) 固体支持体に結合しているオリゴヌクレオチドから
保護基を除去し、そして ｃ) 保護基を除去したオリゴヌクレオチドを固体支持体
から分離することによって固相合成でオリゴヌクレオチ
ドを製造する方法において、固体支持体に結合している
オリゴヌクレオチドから適当な有機溶媒例えばアセトニ
トリル、ピリジンもしくはＮ−メチルイミダゾール中非
求核性強塩基の存在下に保護基を除去することを特徴と
する上記の製法に関する。
存在する環外アミノ基が環状ジアシル基で保護されてお
り、かつ非求核性強塩基により存在しているいずれのホ
スフェート保護基も除去することが可能であるヌクレオ
チドを連続的に合成し、 ｂ) 固体支持体に結合しているオリゴヌクレオチドから
保護基を除去し、そして ｃ) 保護基を除去したオリゴヌクレオチドを固体支持体
から分離することによって固相合成でオリゴヌクレオチ
ドを製造する方法において、固体支持体に結合している
オリゴヌクレオチドから適当な有機溶媒例えばアセトニ
トリル、ピリジンもしくはＮ−メチルイミダゾール中非
求核性強塩基の存在下に保護基を除去することを特徴と
する上記の製法に関する。
【０００９】非求核性の強塩基例えばＤＢＵ（ジアザビ
シクロ〔５.４.０〕アンデカ−７−エン）、ＤＡＢＣＯ
（ジアザビシクロ〔２.２.２〕オクタン）、ＤＢＮ（ジ
アザビシクロ−〔４.３.０〕ノナ−５−エン）、エチル
ジイソプロピルアミン、トリエチルアミン、Ｎ−エチル
モルホリン、ＤＭＡＰ（ジメチルアミノピリジン）もし
くはルチジンまたは荷電していない過アルキル化ポリア
ミノホスファビン塩基（R. Schwesinger, Angew. Chem.
99 (1987) 1212）は当業者に周知である。非求核性強
塩基ＤＢＵが好ましい。好ましくは、保護基の除去は、
ＤＢＵの０.１〜５Ｍ溶液の存在下０〜７０℃で０.１〜
１６時間、特に好ましくは、ＤＢＵの０.３〜３Ｍ溶液
の存在下１０〜４０℃で０.１〜２時間、非常に特に好
ましくは、ＤＢＵの０.５〜２.５Ｍ溶液の存在下２０〜
３０℃で０.２〜１.５時間実施される。
シクロ〔５.４.０〕アンデカ−７−エン）、ＤＡＢＣＯ
（ジアザビシクロ〔２.２.２〕オクタン）、ＤＢＮ（ジ
アザビシクロ−〔４.３.０〕ノナ−５−エン）、エチル
ジイソプロピルアミン、トリエチルアミン、Ｎ−エチル
モルホリン、ＤＭＡＰ（ジメチルアミノピリジン）もし
くはルチジンまたは荷電していない過アルキル化ポリア
ミノホスファビン塩基（R. Schwesinger, Angew. Chem.
99 (1987) 1212）は当業者に周知である。非求核性強
塩基ＤＢＵが好ましい。好ましくは、保護基の除去は、
ＤＢＵの０.１〜５Ｍ溶液の存在下０〜７０℃で０.１〜
１６時間、特に好ましくは、ＤＢＵの０.３〜３Ｍ溶液
の存在下１０〜４０℃で０.１〜２時間、非常に特に好
ましくは、ＤＢＵの０.５〜２.５Ｍ溶液の存在下２０〜
３０℃で０.２〜１.５時間実施される。
【００１０】「オリゴヌクレオチド」なる用語は、極め
て一般的に、修飾および（または）２′−デオキシリボ
ース構成ブロックを含有するポリデオキシリボヌクレオ
チド（ＤＮＡ）；修飾および（または）未修飾リボース
構成ブロックを含有するポリリボヌクレオチド（ＲＮ
Ａ）；修飾および（または）未修飾プリンまたはピリミ
ジンベースのＮ−グリコシドもしくはＣ−グリコシドか
ら合成されるその他のポリヌクレオチドを包含し、ここ
で、ポリデオキシリボヌクレオチド、ポリリボヌクレオ
チドまたはポリヌクレオチドのホスフェート・ブリッジ
（phosphato bridge）は修飾されていても、また他の構
造で置換されていてもよく、該オリゴヌクレオチドは環
外アミノ基を有する塩基を少なくとも１個を有してい
る。
て一般的に、修飾および（または）２′−デオキシリボ
ース構成ブロックを含有するポリデオキシリボヌクレオ
チド（ＤＮＡ）；修飾および（または）未修飾リボース
構成ブロックを含有するポリリボヌクレオチド（ＲＮ
Ａ）；修飾および（または）未修飾プリンまたはピリミ
ジンベースのＮ−グリコシドもしくはＣ−グリコシドか
ら合成されるその他のポリヌクレオチドを包含し、ここ
で、ポリデオキシリボヌクレオチド、ポリリボヌクレオ
チドまたはポリヌクレオチドのホスフェート・ブリッジ
（phosphato bridge）は修飾されていても、また他の構
造で置換されていてもよく、該オリゴヌクレオチドは環
外アミノ基を有する塩基を少なくとも１個を有してい
る。
【００１１】それら自体既知である方法を用いて導入さ
れるこれらの修飾の例は次のとおりである： ａ) ホスフェート・ブリッジの修飾 例示のために、次のものをあげることができる：ホスホ
ロチオエート、ホスホロジチオエート、メチルホスホネ
ート、ホスホルアミデート、ボラノホスフェート、メチ
ルホスフェート、エチルホスフェートおよびフェニルホ
スフェート。ホスフェート・ブリッジの好ましい修飾
は、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエートおよび
メチルホスホネートである。
れるこれらの修飾の例は次のとおりである： ａ) ホスフェート・ブリッジの修飾 例示のために、次のものをあげることができる：ホスホ
ロチオエート、ホスホロジチオエート、メチルホスホネ
ート、ホスホルアミデート、ボラノホスフェート、メチ
ルホスフェート、エチルホスフェートおよびフェニルホ
スフェート。ホスフェート・ブリッジの好ましい修飾
は、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエートおよび
メチルホスホネートである。
【００１２】ｂ) ホスフェート・ブリッジの置換 例示のために、次のものをあげることができる：アセト
アミド、ホルムアセタール、３′−チオホルムアセター
ル、メチルヒドロキシルアミン、オキシム、メチレンジ
メチルヒドラゾ、ジメチルスルホンおよびシリル基。好
ましくは、アセトアミド、ホルムアセタールおよび３′
−チオホルムアセタールによる置換である。
アミド、ホルムアセタール、３′−チオホルムアセター
ル、メチルヒドロキシルアミン、オキシム、メチレンジ
メチルヒドラゾ、ジメチルスルホンおよびシリル基。好
ましくは、アセトアミド、ホルムアセタールおよび３′
−チオホルムアセタールによる置換である。
【００１３】ｃ) 糖の修飾 例示のために、次のものをあげることができる：α−ア
ノマー糖、２′−Ｏ−メチルリボース、Ｏ−ブチルリボ
ース、２′−Ｏ−アリルリボース、２′−フルオロ−
２′−デオキシリボース、２′−アミノ−２′−デオキ
シリボース、α−アラビノフラノースおよび炭素環式糖
類似体。２′−Ｏ−メチルリボースおよび２′−Ｏ−ｎ
−ブチルリボースによる修飾が好ましい。これらの修飾
は、Ｏ−リボースの２′および３′−炭素原子が二重結
合によって連絡されていて、かつ各例において置換分と
して水素原子を担有している場合、非常に特に好まし
い。
ノマー糖、２′−Ｏ−メチルリボース、Ｏ−ブチルリボ
ース、２′−Ｏ−アリルリボース、２′−フルオロ−
２′−デオキシリボース、２′−アミノ−２′−デオキ
シリボース、α−アラビノフラノースおよび炭素環式糖
類似体。２′−Ｏ−メチルリボースおよび２′−Ｏ−ｎ
−ブチルリボースによる修飾が好ましい。これらの修飾
は、Ｏ−リボースの２′および３′−炭素原子が二重結
合によって連絡されていて、かつ各例において置換分と
して水素原子を担有している場合、非常に特に好まし
い。
【００１４】新規な方法はそれ故に例えば式(Ｉ)
【化１０】 〔式中、Ｒ1は互いに独立して、水素、ヒドロキシル、
Ｃ1〜Ｃ18−アルコキシ（ヒドロキシもしくはＣ1〜Ｃ4
−アルコキシで１〜３回置換されていてもよい）、Ｃ1
〜Ｃ4−アルキル−Ｏ−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ)s（ｓは１〜３
の数である）、Ｏ−アリル、ハロゲン、アジドまたはア
ミノであり；Ａは互いに独立してオキシ、チオキシまた
はメチレンであり；Ｗは互いに独立してオキソ、チオキ
ソまたはセレンオキソであり；Ｖは互いに独立してオキ
シ、スルファンジイルまたはイミノであり；Ｙは互いに
独立してオキシ、スルファンジイル、イミノまたはメチ
レンであり；Ｂはヌクレオチド化学で通常の塩基、例え
ば天然塩基例えばアデニン、シトシン、グアニン、ウラ
シルおよびチミン、または非天然塩基例えばプリン、
２,６−ジアミノプリン、７−デアザアデニン、７−デ
アザグアニン、７−デアザ−７−Ｃ1〜Ｃ3−アルキニル
アデニン、７−デアザ−７−Ｃ1〜Ｃ3−アルキニルグア
ニン、Ｎ4Ｎ4−エタノシトシン、Ｎ6Ｎ6−エタノ−２,
６−ジアミノプリン、プソイドイソシトシン、５−Ｃ2
〜Ｃ6−アルキンウラシル、５−Ｃ2〜Ｃ6−アルキンシ
トシン、好ましくは５−プロピンウラシル、５−プロピ
ンシトシン、５−ヘキシンウラシル、５−ヘキシンシト
シンまたは５−フルオロシトシン、５−フルオロウラシ
ル、５−ヒドロキシメチルウラシルまたは５−ブロモシ
トシンであり；Ｂの少なくとも１個は環外アミノ基を有
する塩基であり；ｎは１〜１００の整数であり；Ｕは互
いに独立してヒドロキシル、メルカプト、ＢＨ3、Ｓｅ
Ｈ、Ｃ1〜Ｃ18−アルコキシ好ましくはＣ1〜Ｃ6−アル
コキシ、Ｃ1〜Ｃ18−アルキル好ましくはＣ1〜Ｃ6−ア
ルキル、Ｃ6〜Ｃ20−アリール、(Ｃ6〜Ｃ14)−アリール
−（Ｃ1〜Ｃ8）アルキル、ＮＨＲ3、ＮＲ3Ｒ4または式
(II) (ＯＣＨ2ＣＨ2)pＯ(ＣＨ2)qＣＨ2Ｒ2 (II) の基であり、
Ｃ1〜Ｃ18−アルコキシ（ヒドロキシもしくはＣ1〜Ｃ4
−アルコキシで１〜３回置換されていてもよい）、Ｃ1
〜Ｃ4−アルキル−Ｏ−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ)s（ｓは１〜３
の数である）、Ｏ−アリル、ハロゲン、アジドまたはア
ミノであり；Ａは互いに独立してオキシ、チオキシまた
はメチレンであり；Ｗは互いに独立してオキソ、チオキ
ソまたはセレンオキソであり；Ｖは互いに独立してオキ
シ、スルファンジイルまたはイミノであり；Ｙは互いに
独立してオキシ、スルファンジイル、イミノまたはメチ
レンであり；Ｂはヌクレオチド化学で通常の塩基、例え
ば天然塩基例えばアデニン、シトシン、グアニン、ウラ
シルおよびチミン、または非天然塩基例えばプリン、
２,６−ジアミノプリン、７−デアザアデニン、７−デ
アザグアニン、７−デアザ−７−Ｃ1〜Ｃ3−アルキニル
アデニン、７−デアザ−７−Ｃ1〜Ｃ3−アルキニルグア
ニン、Ｎ4Ｎ4−エタノシトシン、Ｎ6Ｎ6−エタノ−２,
６−ジアミノプリン、プソイドイソシトシン、５−Ｃ2
〜Ｃ6−アルキンウラシル、５−Ｃ2〜Ｃ6−アルキンシ
トシン、好ましくは５−プロピンウラシル、５−プロピ
ンシトシン、５−ヘキシンウラシル、５−ヘキシンシト
シンまたは５−フルオロシトシン、５−フルオロウラシ
ル、５−ヒドロキシメチルウラシルまたは５−ブロモシ
トシンであり；Ｂの少なくとも１個は環外アミノ基を有
する塩基であり；ｎは１〜１００の整数であり；Ｕは互
いに独立してヒドロキシル、メルカプト、ＢＨ3、Ｓｅ
Ｈ、Ｃ1〜Ｃ18−アルコキシ好ましくはＣ1〜Ｃ6−アル
コキシ、Ｃ1〜Ｃ18−アルキル好ましくはＣ1〜Ｃ6−ア
ルキル、Ｃ6〜Ｃ20−アリール、(Ｃ6〜Ｃ14)−アリール
−（Ｃ1〜Ｃ8）アルキル、ＮＨＲ3、ＮＲ3Ｒ4または式
(II) (ＯＣＨ2ＣＨ2)pＯ(ＣＨ2)qＣＨ2Ｒ2 (II) の基であり、
【００１５】ここで、Ｒ3はＣ1〜Ｃ18−アルキル、好ま
しくはＣ1〜Ｃ8−アルキル、Ｃ6〜Ｃ20−アリール、(Ｃ
6〜Ｃ14）−アリール−（Ｃ1〜Ｃ8）−アルキル、また
は−(ＣＨ2)c−〔ＮＨ(ＣＨ2)c〕d−ＮＲ5Ｒ5（ｃは２
〜６の整数であり、そしてｄは０〜６の整数である）で
あり；Ｒ5は互いに独立して水素、Ｃ1〜Ｃ6−アルキル
またはＣ1〜Ｃ4−アルコキシ−Ｃ1〜Ｃ6−アルキル好ま
しくはメトキシエチルであり；Ｒ4はＣ1〜Ｃ18−アルキ
ル、好ましくはＣ1〜Ｃ8−アルキルそして特に好ましく
はＣ1〜Ｃ4−アルキル、Ｃ6〜Ｃ20−アリールまたは
（Ｃ6〜Ｃ10）−アリール−（Ｃ1〜Ｃ8）−アルキルで
あるか、または、ＮＲ3Ｒ4の場合、Ｒ3およびそれらを
担有している窒素原子と共に、Ｏ、ＳおよびＮの群から
のそれ以上のヘテロ原子をさらに含有していてもよい５
〜６員環複素環式基であり；ｐは１〜１００、好ましく
は３〜１０の整数であり；ｑは０〜２２、好ましくは０
〜１５の整数であり；Ｒ2は水素または官能基例えばヒ
ドロキシル、アミノ、ＮＨＲ6、ＣＯＯＨ、ＣＯＮＨ2、
ＣＯＯＲ7またはハロゲンであり、ここで、Ｒ6はＣ1〜
Ｃ4−アルキルであり、そしてＲ7はＣ1〜Ｃ4−アルキ
ル、好ましくはメチルであり；
しくはＣ1〜Ｃ8−アルキル、Ｃ6〜Ｃ20−アリール、(Ｃ
6〜Ｃ14）−アリール−（Ｃ1〜Ｃ8）−アルキル、また
は−(ＣＨ2)c−〔ＮＨ(ＣＨ2)c〕d−ＮＲ5Ｒ5（ｃは２
〜６の整数であり、そしてｄは０〜６の整数である）で
あり；Ｒ5は互いに独立して水素、Ｃ1〜Ｃ6−アルキル
またはＣ1〜Ｃ4−アルコキシ−Ｃ1〜Ｃ6−アルキル好ま
しくはメトキシエチルであり；Ｒ4はＣ1〜Ｃ18−アルキ
ル、好ましくはＣ1〜Ｃ8−アルキルそして特に好ましく
はＣ1〜Ｃ4−アルキル、Ｃ6〜Ｃ20−アリールまたは
（Ｃ6〜Ｃ10）−アリール−（Ｃ1〜Ｃ8）−アルキルで
あるか、または、ＮＲ3Ｒ4の場合、Ｒ3およびそれらを
担有している窒素原子と共に、Ｏ、ＳおよびＮの群から
のそれ以上のヘテロ原子をさらに含有していてもよい５
〜６員環複素環式基であり；ｐは１〜１００、好ましく
は３〜１０の整数であり；ｑは０〜２２、好ましくは０
〜１５の整数であり；Ｒ2は水素または官能基例えばヒ
ドロキシル、アミノ、ＮＨＲ6、ＣＯＯＨ、ＣＯＮＨ2、
ＣＯＯＲ7またはハロゲンであり、ここで、Ｒ6はＣ1〜
Ｃ4−アルキルであり、そしてＲ7はＣ1〜Ｃ4−アルキ
ル、好ましくはメチルであり；
【００１６】ＱおよびＱ′は互いに独立して水素または
結合体（conjugates）であり、これらの結合体はアンチ
センスオリゴヌクレオチドもしくは三重らせん形成性オ
リゴヌクレオチドの性質に対して好ましい効果を有する
（例えば、細胞浸透、ヌクレアーゼによる分解、標的Ｒ
ＮＡ／ＤＮＡに対する親和力もしくは薬物動態）か、ま
たはＤＮＡプローブのための標識として使用されるか、
または標的核酸と類似のオリゴヌクレオチドのハイブリ
ッド形成に関連して、結合または架橋中に標的核酸をア
タックし、例えばポリリジンとの結合体、インターカレ
ーター例えばピレン、アクリジン、フェナジンもしくは
フェナントリジンとの結合体、蛍光化合物例えばフルオ
レセインとの結合体、架橋剤例えばプソラレンもしくは
アジトプロフラビンとの結合体、親油性分子例えば（Ｃ
12〜Ｃ20）−アルキルとの結合体、脂質例えばrac−１,
２−ジヘキサデシルグリセロールとの結合体、ステロイ
ド例えばコレステロールもしくはテストステロンとの結
合体、ビタミン例えばビタミンＥとの結合体、ポリエチ
レングリコールもしくはオリゴエチレングリコールとの
結合体、（Ｃ12〜Ｃ18）−アルキルホスフェートジエス
テルとの結合体または−Ｏ−ＣＨ2−ＣＨ(ＯＨ)−Ｏ−
（Ｃ12〜Ｃ18）−アルキルとの結合体があり；特に好ま
しいのは、例えば（Ｃ12〜Ｃ20）−アルキルのような親
油性分子、例えばコレステロールもしくはテストステロ
ンのようなステロイド、ポリエチレングリコールもしく
はオリゴエチレングリコール、ビタミンＥ、例えばピレ
ンのようなインターカレーター（Ｃ14〜Ｃ18）−アルキ
ルホスフェートエステルまたは−Ｏ−ＣＨ2−ＣＨ(Ｏ
Ｈ)−Ｏ−(Ｃ12〜Ｃ16)−アルキルとの結合体であり；
Ｒ1および隣接するホスホリル基は２′および３′−位
または反転して３′および２′−位に位置していてもよ
く；各々のヌクレオチドはそのＤまたはＬ配置で存在し
ていてもよく；塩基Ｂはαまたはβ−位に位置していて
もよく、またオリゴヌクレオチドが３′−３′−または
５′−５′反転を含有することもできる（Ch. Chaix等、
Bioorg. & Med. Letters 6 (1996) 872)〕の化合物を
製造するのに適している。
結合体（conjugates）であり、これらの結合体はアンチ
センスオリゴヌクレオチドもしくは三重らせん形成性オ
リゴヌクレオチドの性質に対して好ましい効果を有する
（例えば、細胞浸透、ヌクレアーゼによる分解、標的Ｒ
ＮＡ／ＤＮＡに対する親和力もしくは薬物動態）か、ま
たはＤＮＡプローブのための標識として使用されるか、
または標的核酸と類似のオリゴヌクレオチドのハイブリ
ッド形成に関連して、結合または架橋中に標的核酸をア
タックし、例えばポリリジンとの結合体、インターカレ
ーター例えばピレン、アクリジン、フェナジンもしくは
フェナントリジンとの結合体、蛍光化合物例えばフルオ
レセインとの結合体、架橋剤例えばプソラレンもしくは
アジトプロフラビンとの結合体、親油性分子例えば（Ｃ
12〜Ｃ20）−アルキルとの結合体、脂質例えばrac−１,
２−ジヘキサデシルグリセロールとの結合体、ステロイ
ド例えばコレステロールもしくはテストステロンとの結
合体、ビタミン例えばビタミンＥとの結合体、ポリエチ
レングリコールもしくはオリゴエチレングリコールとの
結合体、（Ｃ12〜Ｃ18）−アルキルホスフェートジエス
テルとの結合体または−Ｏ−ＣＨ2−ＣＨ(ＯＨ)−Ｏ−
（Ｃ12〜Ｃ18）−アルキルとの結合体があり；特に好ま
しいのは、例えば（Ｃ12〜Ｃ20）−アルキルのような親
油性分子、例えばコレステロールもしくはテストステロ
ンのようなステロイド、ポリエチレングリコールもしく
はオリゴエチレングリコール、ビタミンＥ、例えばピレ
ンのようなインターカレーター（Ｃ14〜Ｃ18）−アルキ
ルホスフェートエステルまたは−Ｏ−ＣＨ2−ＣＨ(Ｏ
Ｈ)−Ｏ−(Ｃ12〜Ｃ16)−アルキルとの結合体であり；
Ｒ1および隣接するホスホリル基は２′および３′−位
または反転して３′および２′−位に位置していてもよ
く；各々のヌクレオチドはそのＤまたはＬ配置で存在し
ていてもよく；塩基Ｂはαまたはβ−位に位置していて
もよく、またオリゴヌクレオチドが３′−３′−または
５′−５′反転を含有することもできる（Ch. Chaix等、
Bioorg. & Med. Letters 6 (1996) 872)〕の化合物を
製造するのに適している。
【００１７】この方法において、 (ａ) 式(III)
【化１１】 （式中、Ａ、ＹおよびＶは先の定義のとおりであり、そ
してＲ1′はＲ1の定義のとおりであるが、Ｒ1がヒドロ
キシルまたはアミノである場合Ｒ1′は相当する保護さ
れた基であり、Ｓは酸の条件下で除去することができる
５′保護基、例えばジメトキシトリチル、モノメトキシ
トリチル、トリチルもしくはピキシル、好ましくはジメ
トキシトリチルおよびモノメトキシトリチルであり；Ｂ
PRは、存在することがあり得るいずれの環外アミノ基は
環状ジアシル基で保護されている天然または非天然の核
酸塩基である）を有する化合物を、
してＲ1′はＲ1の定義のとおりであるが、Ｒ1がヒドロ
キシルまたはアミノである場合Ｒ1′は相当する保護さ
れた基であり、Ｓは酸の条件下で除去することができる
５′保護基、例えばジメトキシトリチル、モノメトキシ
トリチル、トリチルもしくはピキシル、好ましくはジメ
トキシトリチルおよびモノメトキシトリチルであり；Ｂ
PRは、存在することがあり得るいずれの環外アミノ基は
環状ジアシル基で保護されている天然または非天然の核
酸塩基である）を有する化合物を、
【００１８】既知の方法に従って、式(IV)
【化１２】 （式中、Ｚ′はＯＲ13またはＣ1〜Ｃ18−アルキル、Ｃ1
〜Ｃ18−アルコキシ、Ｃ6〜Ｃ2 0−アリール、Ｃ6〜Ｃ14
−アリール−Ｃ1〜Ｃ8−アルキル、好ましくはＯＲ13、
Ｃ1〜Ｃ6−アルキル、Ｃ1〜Ｃ6−アルコキシ、Ｃ6〜Ｃ
20−アリール、またはＣ6〜Ｃ14−アリール−Ｃ1〜Ｃ8
−アルキル、特に好ましくはＯＲ13であり；Ｒ11および
Ｒ12は同一または異なって、Ｃ1〜Ｃ8−アルキル、好ま
しくはイソプロピル、またはＣ5〜Ｃ12−シクロアルキ
ル、好ましくはＣ8以下のシクロアルキル、ベンジルも
しくはフェニルあるいは、それらが結合している窒素原
子と一緒になって、飽和または不飽和の、モルホリンの
ような適宜追加のヘテロ原子を有する複素環およびＯＣ
(Ｏ)Ｏ−Ｃ1〜Ｃ4−アルキルエステルのような置換分を
有する前記複素環であり；そしてＲ13は非求核性強塩基
で除去することができる保護基であり、Ｚは塩素または
臭素または式ＮＲ11Ｒ12（式中Ｒ11およびＲ12は先の定
義のとおりである）を有する基である）を有する化合物
と、塩基、好ましくはピリジンまたはテトラヒドロフラ
ン（ＴＨＦ）、ジオキサン、ジクロロメタン(ＤＣＭ)、
クロロホルムおよび（または）アセトニトリルとＣ1〜
Ｃ4−トリアルキルアミン、好ましくはトリメチルアミ
ン、トリエチルアミンまたはジイソプロピルエチルアミ
ンとの混合物の存在下、または、Ｚが式ＮＲ11Ｒ12の基
である場合、式 〔ＨＮＲ14Ｒ15Ｒ16〕(+)Ａ(-) （式中、Ｒ14、Ｒ15およびＲ16は同一または異なって、
Ｃ1〜Ｃ4−アルキル基であり、そして
〜Ｃ18−アルコキシ、Ｃ6〜Ｃ2 0−アリール、Ｃ6〜Ｃ14
−アリール−Ｃ1〜Ｃ8−アルキル、好ましくはＯＲ13、
Ｃ1〜Ｃ6−アルキル、Ｃ1〜Ｃ6−アルコキシ、Ｃ6〜Ｃ
20−アリール、またはＣ6〜Ｃ14−アリール−Ｃ1〜Ｃ8
−アルキル、特に好ましくはＯＲ13であり；Ｒ11および
Ｒ12は同一または異なって、Ｃ1〜Ｃ8−アルキル、好ま
しくはイソプロピル、またはＣ5〜Ｃ12−シクロアルキ
ル、好ましくはＣ8以下のシクロアルキル、ベンジルも
しくはフェニルあるいは、それらが結合している窒素原
子と一緒になって、飽和または不飽和の、モルホリンの
ような適宜追加のヘテロ原子を有する複素環およびＯＣ
(Ｏ)Ｏ−Ｃ1〜Ｃ4−アルキルエステルのような置換分を
有する前記複素環であり；そしてＲ13は非求核性強塩基
で除去することができる保護基であり、Ｚは塩素または
臭素または式ＮＲ11Ｒ12（式中Ｒ11およびＲ12は先の定
義のとおりである）を有する基である）を有する化合物
と、塩基、好ましくはピリジンまたはテトラヒドロフラ
ン（ＴＨＦ）、ジオキサン、ジクロロメタン(ＤＣＭ)、
クロロホルムおよび（または）アセトニトリルとＣ1〜
Ｃ4−トリアルキルアミン、好ましくはトリメチルアミ
ン、トリエチルアミンまたはジイソプロピルエチルアミ
ンとの混合物の存在下、または、Ｚが式ＮＲ11Ｒ12の基
である場合、式 〔ＨＮＲ14Ｒ15Ｒ16〕(+)Ａ(-) （式中、Ｒ14、Ｒ15およびＲ16は同一または異なって、
Ｃ1〜Ｃ4−アルキル基であり、そして
【００１９】Ａはフッ素、塩素または臭素、特に塩素で
ある）を有する化合物またはテトラゾールもしくは５−
（Ｃ1〜Ｃ4−アルキルチオ）−１Ｈ−テトラゾールもし
くは５−（Ｃ6〜Ｃ12）−アリール−１Ｈ−テトラゾー
ルまたは他の活性化剤例えばピリジン塩酸塩の存在下、
好ましくはテトラゾールまたはピリジン塩酸塩の存在下
に反応させて式(Ｖ)
ある）を有する化合物またはテトラゾールもしくは５−
（Ｃ1〜Ｃ4−アルキルチオ）−１Ｈ−テトラゾールもし
くは５−（Ｃ6〜Ｃ12）−アリール−１Ｈ−テトラゾー
ルまたは他の活性化剤例えばピリジン塩酸塩の存在下、
好ましくはテトラゾールまたはピリジン塩酸塩の存在下
に反応させて式(Ｖ)
【化１３】 （式中、Ｓ、Ｖ、Ｙ、Ａ、ＢPR、Ｚ′、Ｒ1′、Ｒ11お
よびＲ12は先の定義のとおりである）を有する化合物を
形成させ；
よびＲ12は先の定義のとおりである）を有する化合物を
形成させ；
【００２０】(ｂ) 式(III)の化合物を、既知の方法に
従って、適当な溶媒例えば塩化メチレン中で、適宜触媒
例えば４−ジメチルアミノピリジンを加えた後、１〜１
０当量好ましくは１〜２当量のリンカー例えば無水コハ
ク酸と反応させ、次いで既知の方法に従って、例えば抽
出結晶化およびクロマトグラフィーの後処理して式（V
I）
従って、適当な溶媒例えば塩化メチレン中で、適宜触媒
例えば４−ジメチルアミノピリジンを加えた後、１〜１
０当量好ましくは１〜２当量のリンカー例えば無水コハ
ク酸と反応させ、次いで既知の方法に従って、例えば抽
出結晶化およびクロマトグラフィーの後処理して式（V
I）
【化１４】 （式中、Ｓ、Ｖ、Ｙ、Ａ、ＢPRおよびＲ1は先の定義の
とおりである）を有し、合成で使用される重合体支持体
に対するリンカーとして役立つ３′−位でのコハク酸残
基を有する化合物を形成させ（ここでは、コハク酸リン
カーの代替物として例えばSonveaux〔Bioorg. Chem. 14
(1986) 274〕に記載されているものもまた使用可能で
ある）；
とおりである）を有し、合成で使用される重合体支持体
に対するリンカーとして役立つ３′−位でのコハク酸残
基を有する化合物を形成させ（ここでは、コハク酸リン
カーの代替物として例えばSonveaux〔Bioorg. Chem. 14
(1986) 274〕に記載されているものもまた使用可能で
ある）；
【００２１】(ｃ) 式(VI)の化合物を、既知の方法に従
って、固体支持体ＳＳ、例えばＣＰＧ(R)（ＣＰＧ＝制
御気泡ガラス）もしくはtentagel(R)、好ましくはＤＢ
Ｕ−安定支持体例えば「長鎖メチルアミノアルキルＣＰ
Ｇ」〔Stengele, TetrahedronLett. 1990, 31, 2549〕
に例えば適当な溶媒中でＤＣＣとｐ−ニトロフェノール
との反応により、または、適宜、例えばＮ−メチルモル
ホリン、Ｎ−エチルモルホリンまたはエチルジイソプロ
ピルアミンもしくはトリエチルアミンのような適当な塩
基を加えて〔例えば、M.J. Gait, Oligonucleotide Syn
thesis-a practical approach, IRL Press, 1984に記載
の如く〕、適当な溶媒中でＴＯＴＵ（Ｏ−〔（エトキシ
カルボニル）シアノメチレンアミノ〕−Ｎ,Ｎ,Ｎ′,
Ｎ′−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート
（W. Koenig, G. Breipohl, D. Pokorny, M. Birkner,
Proceedings of the 21st European Peptide Symposium
1990,E. Giralt, D. Andreu編集, ESCOM, Leiden, 143
頁）と反応させることにより、結合させて式(VII)
って、固体支持体ＳＳ、例えばＣＰＧ(R)（ＣＰＧ＝制
御気泡ガラス）もしくはtentagel(R)、好ましくはＤＢ
Ｕ−安定支持体例えば「長鎖メチルアミノアルキルＣＰ
Ｇ」〔Stengele, TetrahedronLett. 1990, 31, 2549〕
に例えば適当な溶媒中でＤＣＣとｐ−ニトロフェノール
との反応により、または、適宜、例えばＮ−メチルモル
ホリン、Ｎ−エチルモルホリンまたはエチルジイソプロ
ピルアミンもしくはトリエチルアミンのような適当な塩
基を加えて〔例えば、M.J. Gait, Oligonucleotide Syn
thesis-a practical approach, IRL Press, 1984に記載
の如く〕、適当な溶媒中でＴＯＴＵ（Ｏ−〔（エトキシ
カルボニル）シアノメチレンアミノ〕−Ｎ,Ｎ,Ｎ′,
Ｎ′−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート
（W. Koenig, G. Breipohl, D. Pokorny, M. Birkner,
Proceedings of the 21st European Peptide Symposium
1990,E. Giralt, D. Andreu編集, ESCOM, Leiden, 143
頁）と反応させることにより、結合させて式(VII)
【化１５】 を有する化合物が得られ；
【００２２】(ｄ) 既知の方法例えば塩化メチレンまた
はクロロホルム中１〜４％ジクロロ酢酸またはトリクロ
ロ酢酸で処理することにより、化合物(VII)から５′保
護基を除去し； (ｅ) 得られた化合物を適当な有機溶媒好ましくはアセ
トニトリル中、式〔ＨＮＲ14Ｒ15Ｒ16〕(+)Ａ(-)（この
式は先に定義したとおりである）を有する化合物、また
はテトラゾール、５−（Ｃ1〜Ｃ4−アルキルチオ）−１
Ｈ−テトラゾールもしくは５−(Ｃ6〜Ｃ12−アリール）
−１Ｈ−テトラゾールまたはピリジン塩酸塩のようなそ
の他の活性化剤の存在下、好ましくはテトラゾールまた
はピリジン塩酸塩の存在下に式(Ｖ)の化合物と反応さ
せ、
はクロロホルム中１〜４％ジクロロ酢酸またはトリクロ
ロ酢酸で処理することにより、化合物(VII)から５′保
護基を除去し； (ｅ) 得られた化合物を適当な有機溶媒好ましくはアセ
トニトリル中、式〔ＨＮＲ14Ｒ15Ｒ16〕(+)Ａ(-)（この
式は先に定義したとおりである）を有する化合物、また
はテトラゾール、５−（Ｃ1〜Ｃ4−アルキルチオ）−１
Ｈ−テトラゾールもしくは５−(Ｃ6〜Ｃ12−アリール）
−１Ｈ−テトラゾールまたはピリジン塩酸塩のようなそ
の他の活性化剤の存在下、好ましくはテトラゾールまた
はピリジン塩酸塩の存在下に式(Ｖ)の化合物と反応さ
せ、
【００２３】(ｆ) 得られた化合物を既知の方法によ
り、例えば、水性ピリジン、ルチジンもしくはコリジン
の存在下に、適宜さらに例えばテトラヒドロフランのよ
うな追加の有機溶媒の存在下に、ヨウ素反応させること
により、または例えばテトラヒドロフラン中ｔ−ブチル
ヒドロペルオキシドと反応させることにより、またはア
セトニトリル中Ｎ,Ｎ,Ｎ′,Ｎ′-テトラエチルチウラム
ジスルフィドと反応させることにより、または例えばア
ルキルアミンまたはアリールアミンの存在下にヨウ素と
反応させることにより酸化し、ここでこの種々の酸化法
は当業者に周知であり、また天然および修飾オリゴヌク
レオチドの製造に使用されており、そして例えばBeauca
geおよびIyer〔Tetrahedron 49 (1993) 6123〕またUhlm
annおよびPeyman〔Chem. Rev. 90 (1990) 543〕に要約
され、そして酸化は水性ピリジン、ルチジンもしくはコ
リジンの存在下に、適宜さらに例えばテトラヒドロフラ
ンのような追加の有機溶媒の存在下に、ヨウ素との反応
によって実施するのが好ましい；
り、例えば、水性ピリジン、ルチジンもしくはコリジン
の存在下に、適宜さらに例えばテトラヒドロフランのよ
うな追加の有機溶媒の存在下に、ヨウ素反応させること
により、または例えばテトラヒドロフラン中ｔ−ブチル
ヒドロペルオキシドと反応させることにより、またはア
セトニトリル中Ｎ,Ｎ,Ｎ′,Ｎ′-テトラエチルチウラム
ジスルフィドと反応させることにより、または例えばア
ルキルアミンまたはアリールアミンの存在下にヨウ素と
反応させることにより酸化し、ここでこの種々の酸化法
は当業者に周知であり、また天然および修飾オリゴヌク
レオチドの製造に使用されており、そして例えばBeauca
geおよびIyer〔Tetrahedron 49 (1993) 6123〕またUhlm
annおよびPeyman〔Chem. Rev. 90 (1990) 543〕に要約
され、そして酸化は水性ピリジン、ルチジンもしくはコ
リジンの存在下に、適宜さらに例えばテトラヒドロフラ
ンのような追加の有機溶媒の存在下に、ヨウ素との反応
によって実施するのが好ましい；
【００２４】(ｆ′) 工程(ｄ)から得られる未反応の化
合物は適宜キャッピング工程により、例えばＴＨＦ中無
水酢酸−ルチジン−Ｎ−メチルイミダゾールとの反応に
より不活性化し； (ｇ) 反応工程(ｄ)〜(ｆ)を所望の連鎖の長さが得られ
るまでくり返して行い； (ｈ) このようにして得られた化合物を、例えばアセト
ニトリル、ピリジンまたはＮ−メチルイミダゾールのよ
うな適当な有機溶媒中でＤＢＵの０.１〜５Ｍ溶液で０
〜７０℃で０.１〜１６時間、好ましくは０.３〜３Ｍ溶
液で１０〜４０℃で０.１〜２時間、特に好ましくは０.
５〜２.５Ｍ溶液で２０〜３０℃で０.２〜１.５時間処
理することによって保護基を除去し； (ｉ) 既知の方法例えば２０〜３０℃でＮＨ3により、
支持体からオリゴヌクレオチドを分離し、そして式(Ｉ)
の化合物をアンモニア性溶液の凍結乾燥によって得る。
合物は適宜キャッピング工程により、例えばＴＨＦ中無
水酢酸−ルチジン−Ｎ−メチルイミダゾールとの反応に
より不活性化し； (ｇ) 反応工程(ｄ)〜(ｆ)を所望の連鎖の長さが得られ
るまでくり返して行い； (ｈ) このようにして得られた化合物を、例えばアセト
ニトリル、ピリジンまたはＮ−メチルイミダゾールのよ
うな適当な有機溶媒中でＤＢＵの０.１〜５Ｍ溶液で０
〜７０℃で０.１〜１６時間、好ましくは０.３〜３Ｍ溶
液で１０〜４０℃で０.１〜２時間、特に好ましくは０.
５〜２.５Ｍ溶液で２０〜３０℃で０.２〜１.５時間処
理することによって保護基を除去し； (ｉ) 既知の方法例えば２０〜３０℃でＮＨ3により、
支持体からオリゴヌクレオチドを分離し、そして式(Ｉ)
の化合物をアンモニア性溶液の凍結乾燥によって得る。
【００２５】非求核性強塩基で除去することのできる保
護基は非求核性強塩基での処理によって除去され、しか
も除去が一般にはβ−除去によって行われるような保護
基である。これらの保護基の例としては、４−ニトロフ
ェニルエチル、２−シアノエチル、ダンシルスルホニル
エチル、アリールエチルおよびアリールスルホニルエチ
ル（ここで、フェニルは適宜、塩素、臭素、ＣＮ、ＮＯ
2またはＦによって一回もしくは二回以上置換されてい
てもよい）があり、好ましくは４−ニトロフェニルエチ
ルまたは２−シアノエチルである。
護基は非求核性強塩基での処理によって除去され、しか
も除去が一般にはβ−除去によって行われるような保護
基である。これらの保護基の例としては、４−ニトロフ
ェニルエチル、２−シアノエチル、ダンシルスルホニル
エチル、アリールエチルおよびアリールスルホニルエチ
ル（ここで、フェニルは適宜、塩素、臭素、ＣＮ、ＮＯ
2またはＦによって一回もしくは二回以上置換されてい
てもよい）があり、好ましくは４−ニトロフェニルエチ
ルまたは２−シアノエチルである。
【００２６】式（VII）の化合物は、固体支持体をスク
シノイル化し、次に式（III）の化合物に縮合させるこ
とによっても合成することができる。基ＱおよびＱ′
は、当業者に周知の方法により、適宜導入される（例え
ば、Uhlmann & Peyman, Chem. Rev. 90 (1990) 543；M.
Manoharan “Antisense Research and Applications",
CrookeおよびLebleu編，CRC Press, Boca Raton, 199
3, 17章, 303頁以降およびEP-A0 552 766を参照）。
シノイル化し、次に式（III）の化合物に縮合させるこ
とによっても合成することができる。基ＱおよびＱ′
は、当業者に周知の方法により、適宜導入される（例え
ば、Uhlmann & Peyman, Chem. Rev. 90 (1990) 543；M.
Manoharan “Antisense Research and Applications",
CrookeおよびLebleu編，CRC Press, Boca Raton, 199
3, 17章, 303頁以降およびEP-A0 552 766を参照）。
【００２７】Ｒ1がＯＨまたはアミノであるときのＲ1′
の保護基および相当する誘導化されたヌクレオシド構成
ブロックの合成は、当業者に周知であり（例えば、Ｒ1
がヒドロキシルの場合ジメメル−ｔ−ブチルシリル基も
しくは１−（２−クロロ−４−メチルフェニル)−４−
メトキシ−４−ピペリジニル基であり、またはＲ1がア
ミノの場合アセチル基である）、そして例えばUhlmann
およびPeyman, Chem. Rev. 90 (990) 543；Beaucageお
よびIyer, Tetrahedron 48 (1993) 2223またはC. Hendr
ix等, Nucl. Acids Res. 26 (1995) 51に記載されてい
る。
の保護基および相当する誘導化されたヌクレオシド構成
ブロックの合成は、当業者に周知であり（例えば、Ｒ1
がヒドロキシルの場合ジメメル−ｔ−ブチルシリル基も
しくは１−（２−クロロ−４−メチルフェニル)−４−
メトキシ−４−ピペリジニル基であり、またはＲ1がア
ミノの場合アセチル基である）、そして例えばUhlmann
およびPeyman, Chem. Rev. 90 (990) 543；Beaucageお
よびIyer, Tetrahedron 48 (1993) 2223またはC. Hendr
ix等, Nucl. Acids Res. 26 (1995) 51に記載されてい
る。
【００２８】ＢPRの例には次のものがあげられる：
【化１６】 （式中、ｍは０〜４、好ましくは０の整数であり、そし
てＲ8は、互いに独立して水素、フッ素、塩素、臭素、
ニトロ、Ｃ1〜Ｃ4−アルキル、Ｃ1〜Ｃ4−アルコキシ、
またはＣＮであり、Ｒ9は互いに独立して水素、Ｃ1〜Ｃ
6−アルキル、Ｃ2〜Ｃ6−（１−アルキン）、好ましく
は１−プロピニルおよび１−ヘキシニルまたはフッ素で
あり、そしてＲ10は互いに独立して水素もしくはβ−除
去可能な保護基例えばｐ−ニトロフェニルエチルまたは
フェニルスルホニルエチルである）、ここで環状ジアシ
ル保護基および５′−保護基Ｓのヌクレオシドへの導入
は当業者に周知である（例えばKume等, Tetrahedron Le
tt. 23 (1982) 4365；Nucleic Acids Res. 12 (1984)85
23；Nucleic Acids Res. Symp. Ser. 11 (1982) 26；Ch
emistry Letters 1983, 1597もしくはDikshit等, Can.
J. Chem. 66 (1988) 2989もしくはKamaike等,Tetrahedr
on Lett. 36 (1995) 91参照）。修飾ヌクレオシド構成
ブロックは同じようにして保護することができる。Ｒ10
保護基は同様に既知の方法例えばF. Himmelsbach等, Te
trahedron 40 (1984) 59またはBeaucageおよびIyer. Te
trahedron 49 (1993) 6123；BeaucageおよびIyer, Tetr
ahedron 48 (1993) 2223に従って、環状ジアシル基の導
入前に、導入される。
てＲ8は、互いに独立して水素、フッ素、塩素、臭素、
ニトロ、Ｃ1〜Ｃ4−アルキル、Ｃ1〜Ｃ4−アルコキシ、
またはＣＮであり、Ｒ9は互いに独立して水素、Ｃ1〜Ｃ
6−アルキル、Ｃ2〜Ｃ6−（１−アルキン）、好ましく
は１−プロピニルおよび１−ヘキシニルまたはフッ素で
あり、そしてＲ10は互いに独立して水素もしくはβ−除
去可能な保護基例えばｐ−ニトロフェニルエチルまたは
フェニルスルホニルエチルである）、ここで環状ジアシ
ル保護基および５′−保護基Ｓのヌクレオシドへの導入
は当業者に周知である（例えばKume等, Tetrahedron Le
tt. 23 (1982) 4365；Nucleic Acids Res. 12 (1984)85
23；Nucleic Acids Res. Symp. Ser. 11 (1982) 26；Ch
emistry Letters 1983, 1597もしくはDikshit等, Can.
J. Chem. 66 (1988) 2989もしくはKamaike等,Tetrahedr
on Lett. 36 (1995) 91参照）。修飾ヌクレオシド構成
ブロックは同じようにして保護することができる。Ｒ10
保護基は同様に既知の方法例えばF. Himmelsbach等, Te
trahedron 40 (1984) 59またはBeaucageおよびIyer. Te
trahedron 49 (1993) 6123；BeaucageおよびIyer, Tetr
ahedron 48 (1993) 2223に従って、環状ジアシル基の導
入前に、導入される。
【００２９】式(Ｉ)において、Ｒ1が水素、ヒドロキシ
ル、Ｃ1〜Ｃ4−アルコキシまたはフッ素であり；Ａがオ
キシであり；Ｗがオキソもしくはチオキソであり；Ｖが
オキシであり；Ｙがオキシであり；Ｂが互いに独立して
アデニン、シトシン、グアニン、ウラシル、チミン、５
−プロピンウラシル、５−プロピンシトシン、５−ヘキ
シンウラシルまたは５−ヘキシンシトシンであり、少な
くとも１個のＢは環外アミノ基を有する塩基であり；ｎ
が５〜４０の整数であり；Ｕがヒドロキシル、メルカプ
ト、Ｃ1〜Ｃ6−アルコキシ、Ｃ1〜Ｃ6−アルキル、ＮＲ
3Ｒ4またはＮＨＲ3であり、ここでＲ3はＣ1〜Ｃ8−アル
キルもしくはメトキシエチルであり、Ｒ4はＣ1〜Ｃ8−
アルキル、Ｃ6〜Ｃ20−アリールまたは（Ｃ6〜Ｃ10）−
アリール−（Ｃ1〜Ｃ8）−アルキルであり、または、Ｎ
Ｒ3Ｒ4の場合、Ｒ3およびこれらを担有する窒素原子と
共に、Ｏ、ＳおよびＮの群からのそれ以上のヘテロ原子
をさらに含有する５〜６員環複素環であり、Ｑおよび
Ｑ′は互いに独立して水素である式(Ｉ)の化合物の新規
な製造方法が好ましい。
ル、Ｃ1〜Ｃ4−アルコキシまたはフッ素であり；Ａがオ
キシであり；Ｗがオキソもしくはチオキソであり；Ｖが
オキシであり；Ｙがオキシであり；Ｂが互いに独立して
アデニン、シトシン、グアニン、ウラシル、チミン、５
−プロピンウラシル、５−プロピンシトシン、５−ヘキ
シンウラシルまたは５−ヘキシンシトシンであり、少な
くとも１個のＢは環外アミノ基を有する塩基であり；ｎ
が５〜４０の整数であり；Ｕがヒドロキシル、メルカプ
ト、Ｃ1〜Ｃ6−アルコキシ、Ｃ1〜Ｃ6−アルキル、ＮＲ
3Ｒ4またはＮＨＲ3であり、ここでＲ3はＣ1〜Ｃ8−アル
キルもしくはメトキシエチルであり、Ｒ4はＣ1〜Ｃ8−
アルキル、Ｃ6〜Ｃ20−アリールまたは（Ｃ6〜Ｃ10）−
アリール−（Ｃ1〜Ｃ8）−アルキルであり、または、Ｎ
Ｒ3Ｒ4の場合、Ｒ3およびこれらを担有する窒素原子と
共に、Ｏ、ＳおよびＮの群からのそれ以上のヘテロ原子
をさらに含有する５〜６員環複素環であり、Ｑおよび
Ｑ′は互いに独立して水素である式(Ｉ)の化合物の新規
な製造方法が好ましい。
【００３０】式(Ｉ)において、Ｒ1が水素であり；Ａが
オキシであり；Ｗがオキソまたはチオキソであり；Ｖが
オキシであり；Ｙがオキシであり；Ｂがアデニン、シト
シン、グアニン、ウラシル、チミン、５−プロピンウラ
シルおよび５−プロピンシトシン、５−ヘキシンウラシ
ルまたは５−ヘキシンシトシンであり；少なくとも１個
のＢは環外アミノ基を有する塩基であり；ｎが好ましく
は５〜３０であり；ＵがヒドロキシルまたはＣ1〜Ｃ6−
アルキルであり、そしてＱおよびＱ′が水素である式
(Ｉ)の化合物の新規な製造方法が特に好ましい。
オキシであり；Ｗがオキソまたはチオキソであり；Ｖが
オキシであり；Ｙがオキシであり；Ｂがアデニン、シト
シン、グアニン、ウラシル、チミン、５−プロピンウラ
シルおよび５−プロピンシトシン、５−ヘキシンウラシ
ルまたは５−ヘキシンシトシンであり；少なくとも１個
のＢは環外アミノ基を有する塩基であり；ｎが好ましく
は５〜３０であり；ＵがヒドロキシルまたはＣ1〜Ｃ6−
アルキルであり、そしてＱおよびＱ′が水素である式
(Ｉ)の化合物の新規な製造方法が特に好ましい。
【００３１】新規な方法を用いて製造されるオリゴヌク
レオチドは多くの様々な方法で使用することができ、例
えば遺伝子発現の阻害剤として、リボザイムとして、も
しくは診断プローブ（特にＤＮＡプローブとして）とし
て、または一般的な方法で分子生物学での補助手段とし
て使用することができる。本発明はさらに式(Ｖ)
レオチドは多くの様々な方法で使用することができ、例
えば遺伝子発現の阻害剤として、リボザイムとして、も
しくは診断プローブ（特にＤＮＡプローブとして）とし
て、または一般的な方法で分子生物学での補助手段とし
て使用することができる。本発明はさらに式(Ｖ)
【化１７】 （式中、Ｒ1′は互いに独立して水素、Ｃ1〜Ｃ18−アル
コキシ（適宜ヒドロキシルもしくはＣ1〜Ｃ4−アルコキ
シで１〜３回置換されていてもよい）、Ｃ1〜Ｃ4−アル
キル−Ｏ−(ＣＨ2ＣＨ2Ｏ)1-3、Ｏ−アリル、フッ素、
塩素、アジドまたは保護されたヒドロキシル基またはア
ミノ基であり；Ａはオキシ、チオキシまたはメチレンで
あり；Ｖはオキシ、スルファンジイルまたはイミノであ
り；Ｓは酸の条件下で除去することができる５′保護
基、例えばジメトキシトリチル、モノメトキシトリチ
ル、トリチルもしくはピキシル、好ましくはジメトキシ
トリチルおよびモノメトキシトリチルであり；ＢPRは環
外アミノ基を有し、而して該アミノ基が環状ジアシル基
で保護されている天然または非天然核酸塩基であり；
Ｚ′はＯＲ13、Ｃ1〜Ｃ18−アルキル、Ｃ1〜Ｃ18−アル
コキシ、Ｃ6〜Ｃ20−アリールまたはＣ6〜Ｃ14−アリー
ル−Ｃ1〜Ｃ8−アルキルであり；Ｒ11およびＲ12は同一
または異なって、Ｃ1〜Ｃ8−アルキル、好ましくはイソ
プロピルまたはＣ5〜Ｃ12−シクロアルキル、好ましく
はＣ8以下のシクロアルキル、ベンジルもしくはフェニ
ルであるか、または、それらが結合している窒素原子と
共に、飽和または不飽和の、モルホリンのような適宜追
加のヘテロ原子を有する複素環およびＯＣ(Ｏ)Ｏ−Ｃ1
〜Ｃ4−アルキルエステルのような置換分を有する複素
環であり；そしてＲ13はｐ−ニトロフェニルエチルまた
は２−シアノエチルである）の化合物に関する。
コキシ（適宜ヒドロキシルもしくはＣ1〜Ｃ4−アルコキ
シで１〜３回置換されていてもよい）、Ｃ1〜Ｃ4−アル
キル−Ｏ−(ＣＨ2ＣＨ2Ｏ)1-3、Ｏ−アリル、フッ素、
塩素、アジドまたは保護されたヒドロキシル基またはア
ミノ基であり；Ａはオキシ、チオキシまたはメチレンで
あり；Ｖはオキシ、スルファンジイルまたはイミノであ
り；Ｓは酸の条件下で除去することができる５′保護
基、例えばジメトキシトリチル、モノメトキシトリチ
ル、トリチルもしくはピキシル、好ましくはジメトキシ
トリチルおよびモノメトキシトリチルであり；ＢPRは環
外アミノ基を有し、而して該アミノ基が環状ジアシル基
で保護されている天然または非天然核酸塩基であり；
Ｚ′はＯＲ13、Ｃ1〜Ｃ18−アルキル、Ｃ1〜Ｃ18−アル
コキシ、Ｃ6〜Ｃ20−アリールまたはＣ6〜Ｃ14−アリー
ル−Ｃ1〜Ｃ8−アルキルであり；Ｒ11およびＲ12は同一
または異なって、Ｃ1〜Ｃ8−アルキル、好ましくはイソ
プロピルまたはＣ5〜Ｃ12−シクロアルキル、好ましく
はＣ8以下のシクロアルキル、ベンジルもしくはフェニ
ルであるか、または、それらが結合している窒素原子と
共に、飽和または不飽和の、モルホリンのような適宜追
加のヘテロ原子を有する複素環およびＯＣ(Ｏ)Ｏ−Ｃ1
〜Ｃ4−アルキルエステルのような置換分を有する複素
環であり；そしてＲ13はｐ−ニトロフェニルエチルまた
は２−シアノエチルである）の化合物に関する。
【００３２】式(Ｖ)において、ＢPRが、
【化１８】 （式中、ｍは０〜４、好ましくは０の整数であり；そし
てＲ8は互いに独立して水素、フッ素、塩素、臭素、ニ
トロ、Ｃ1〜Ｃ4−アルキル、Ｃ1〜Ｃ4−アルコキシまた
はＣＮであり、そしてＲ9およびＲ10は先に定義したと
おりである）である化合物が好ましい。
てＲ8は互いに独立して水素、フッ素、塩素、臭素、ニ
トロ、Ｃ1〜Ｃ4−アルキル、Ｃ1〜Ｃ4−アルコキシまた
はＣＮであり、そしてＲ9およびＲ10は先に定義したと
おりである）である化合物が好ましい。
【００３３】式(Ｖ)において、Ｒ1′は水素、保護され
たヒドロキシル基、Ｃ1〜Ｃ4−アルコキシまたはフッ素
であり；Ａはオキシであり；Ｖはオキシであり；Ｙはオ
キシであり；Ｚ′はＯＲ13、Ｃ1〜Ｃ6−アルキル、Ｃ1
〜Ｃ6−アルコキシ、Ｃ6〜Ｃ20−アリールまたはＣ6〜
Ｃ14−アリール−Ｃ1〜Ｃ8−アルキル、好ましくはＯＲ
13である化合物が特に好ましい。式(Ｖ)の化合物は、本
発明に従って式(Ｉ)の化合物を製造するための重要な中
間体である。
たヒドロキシル基、Ｃ1〜Ｃ4−アルコキシまたはフッ素
であり；Ａはオキシであり；Ｖはオキシであり；Ｙはオ
キシであり；Ｚ′はＯＲ13、Ｃ1〜Ｃ6−アルキル、Ｃ1
〜Ｃ6−アルコキシ、Ｃ6〜Ｃ20−アリールまたはＣ6〜
Ｃ14−アリール−Ｃ1〜Ｃ8−アルキル、好ましくはＯＲ
13である化合物が特に好ましい。式(Ｖ)の化合物は、本
発明に従って式(Ｉ)の化合物を製造するための重要な中
間体である。
【００３４】
実施例１ ５′−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ6−フタロイル−
２′−Ｏ−デオキシアデノシン−３′−Ｏ−（Ｎ,Ｎ−
ジイソプロピル〔２−（４−ニトロフェニル）エチ
ル〕)ホスフィトアミド １.１ Ｎ6−フタロイル−２′−Ｏ−デオキシアデノシ
ン ２′−Ｏ−デオキシアデノシンの５ｇ（２０ミリモル）
をまず無水ピリジン中で共蒸発させ、次にピリジン８０
mlに溶解する。クロロトリメチルシラン６ml（５０ミリ
モル）を加え、全体を室温（ＲＴ）で３０分間撹拌す
る。塩化フタロイル４ml（２８ミリモル）を次に加え
る。２時間後、氷水を用いて加水分解し、そして混合物
を次に１０分間撹拌する。このものをＡｃＯＥｔの１５
０mlで希釈し、そして塩化ナトリウムの飽和溶液１００
mlで４回抽出する。水相をＡｃＯＥｔの５０mlで４回逆
抽出する。精製のために、残渣をジクロロメタン５０ml
にとり、石油エーテル１０００mlから沈殿させる。黄土
色の固体７.３７ｇ（１８.５ミリモル；９３％）が得ら
れる。
２′−Ｏ−デオキシアデノシン−３′−Ｏ−（Ｎ,Ｎ−
ジイソプロピル〔２−（４−ニトロフェニル）エチ
ル〕)ホスフィトアミド １.１ Ｎ6−フタロイル−２′−Ｏ−デオキシアデノシ
ン ２′−Ｏ−デオキシアデノシンの５ｇ（２０ミリモル）
をまず無水ピリジン中で共蒸発させ、次にピリジン８０
mlに溶解する。クロロトリメチルシラン６ml（５０ミリ
モル）を加え、全体を室温（ＲＴ）で３０分間撹拌す
る。塩化フタロイル４ml（２８ミリモル）を次に加え
る。２時間後、氷水を用いて加水分解し、そして混合物
を次に１０分間撹拌する。このものをＡｃＯＥｔの１５
０mlで希釈し、そして塩化ナトリウムの飽和溶液１００
mlで４回抽出する。水相をＡｃＯＥｔの５０mlで４回逆
抽出する。精製のために、残渣をジクロロメタン５０ml
にとり、石油エーテル１０００mlから沈殿させる。黄土
色の固体７.３７ｇ（１８.５ミリモル；９３％）が得ら
れる。
【００３５】１.２ ５′−Ｏ−ジメトキシトリチル−
Ｎ6−フタロイル−２′−Ｏ−デオキシアデノシン（文
献：Akiko Kume, Mitsuo Sekine, Tsujiaki Hata, Tetr
ahedronLetters 23 (42), 4365-4368 (1982)） Ｎ6−フタロイル−２′−Ｏ−デオキシアデノシン４ｇ
（１０ミリモル）を無水ピリジン中で共蒸発させ、次に
無水ピリジン５０mlおよびジクロロメタン５０mlにＮ,
Ｎ−ジメチルアミノピリジン２０mg（０.１６ミリモ
ル）および４Å分子ふるいと共に溶解し、そして２.５
時間４,４−ジメトキシトリチルクロライド２.７２ｇ
（８ミリモル）と共に撹拌した。溶媒を留去した後、残
渣をジクロロメタン１００mlに溶解し、そしてこの溶液
を炭酸水素ナトリウム水溶液１００mlで抽出する。合し
た有機相を硫酸マグネシウムで乾燥する。有機相を濾過
し、ロータリーエバポレーターにかけ、そして残渣をト
ルエンと共に共蒸発させる。次に、これをトルエン／Ａ
ｃＯＥｔ勾配（４４〜８０％ＡｃＯＥｔ）を用いてシリ
カゲル（１００ｇ）でクロマトグラフィー処理する。白
色フォーム３.１２ｇ（４.５６ミリモル；４６％）が得
られる。
Ｎ6−フタロイル−２′−Ｏ−デオキシアデノシン（文
献：Akiko Kume, Mitsuo Sekine, Tsujiaki Hata, Tetr
ahedronLetters 23 (42), 4365-4368 (1982)） Ｎ6−フタロイル−２′−Ｏ−デオキシアデノシン４ｇ
（１０ミリモル）を無水ピリジン中で共蒸発させ、次に
無水ピリジン５０mlおよびジクロロメタン５０mlにＮ,
Ｎ−ジメチルアミノピリジン２０mg（０.１６ミリモ
ル）および４Å分子ふるいと共に溶解し、そして２.５
時間４,４−ジメトキシトリチルクロライド２.７２ｇ
（８ミリモル）と共に撹拌した。溶媒を留去した後、残
渣をジクロロメタン１００mlに溶解し、そしてこの溶液
を炭酸水素ナトリウム水溶液１００mlで抽出する。合し
た有機相を硫酸マグネシウムで乾燥する。有機相を濾過
し、ロータリーエバポレーターにかけ、そして残渣をト
ルエンと共に共蒸発させる。次に、これをトルエン／Ａ
ｃＯＥｔ勾配（４４〜８０％ＡｃＯＥｔ）を用いてシリ
カゲル（１００ｇ）でクロマトグラフィー処理する。白
色フォーム３.１２ｇ（４.５６ミリモル；４６％）が得
られる。
【００３６】１.３ ５′−Ｏ−ジメトキシトリチル−
Ｎ6−フタロイル−２′−Ｏ−デオキシアデノシン−
３′−Ｏ−（Ｎ,Ｎ−ジイソプロピル〔２−(４−ニトロ
フェニル）エチル〕）ホスフィトアミド ５′−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ6−フタロイル−
２′−デオキシアデノシン４００mg（０.５８ミリモ
ル）をアセトニトリル５mlに溶解し、そしてビス（Ｎ,
Ｎ−ジイソプロピルアミノ）−２−（４−ニトロフェニ
ル）エトキシホスファン３１３mg（０.７９ミリモル）
およびテトラゾール２０mg(０.２９ミリモル)を加え
る。１時間撹拌した後、混合物を保護ガス下にロータリ
ーエバポレーターにかけ、そして残渣をジクロロメタン
５０mlに溶解し、この溶液を炭酸水素ナトリウムの飽和
溶液５０mlで抽出する。ＭｇＳＯ4で乾燥した後、ロー
タリーエバポレーターにかける。残渣をトルエン／Ａｃ
ＯＥｔ（１：１）を用いてシリカゲル（ＳｉＯ2の６
ｇ）でクロマトグラフィー処理し、白色フォーム３８０
mg（０.３９ミリモル；６７％）を得る。 TLC(シリカゲル)：Rf=0.79(トルエン/AcOEt 1:9)；1H-N
MR (DMSO, 250 MHz)：8.91 (s, 1H, H-C(2)), 8.80 (s,
1H, H-C(8)), 8.07 (m, 6H, 4H pth, 2H o から NO2),
7.46 (d, 2H, 2H m から NO2), 7.16 (m, 9H, DMTr),
6.80 (m, 4H, oから OCH3), 6.51 (t, 1H, H-C(1′)),
4.75 (m, 1H, H-C(3′)), 4.13 (m, 1H,H-C(4′)), 3.7
5 (m, 8H, CH2O, 2×O-CH3), 3.50 (m, 2H, H-C(5′),
H-C(5″)), 3.20 (m, 6H, CH2-フェニル, 2×N-CH, H-C
(2′), H-C(2″)), 1.01 (m, 12H, 2×C(CH3)2)；31P-N
MR (DMSO, 161.7 MHz)：1s 147.50；C53H54N7O10P1 (98
0.04)；計算値：C 64.95, H 5.55, N 10.00；実測値：C
64.15, H 5.53, N 9.72
Ｎ6−フタロイル−２′−Ｏ−デオキシアデノシン−
３′−Ｏ−（Ｎ,Ｎ−ジイソプロピル〔２−(４−ニトロ
フェニル）エチル〕）ホスフィトアミド ５′−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ6−フタロイル−
２′−デオキシアデノシン４００mg（０.５８ミリモ
ル）をアセトニトリル５mlに溶解し、そしてビス（Ｎ,
Ｎ−ジイソプロピルアミノ）−２−（４−ニトロフェニ
ル）エトキシホスファン３１３mg（０.７９ミリモル）
およびテトラゾール２０mg(０.２９ミリモル)を加え
る。１時間撹拌した後、混合物を保護ガス下にロータリ
ーエバポレーターにかけ、そして残渣をジクロロメタン
５０mlに溶解し、この溶液を炭酸水素ナトリウムの飽和
溶液５０mlで抽出する。ＭｇＳＯ4で乾燥した後、ロー
タリーエバポレーターにかける。残渣をトルエン／Ａｃ
ＯＥｔ（１：１）を用いてシリカゲル（ＳｉＯ2の６
ｇ）でクロマトグラフィー処理し、白色フォーム３８０
mg（０.３９ミリモル；６７％）を得る。 TLC(シリカゲル)：Rf=0.79(トルエン/AcOEt 1:9)；1H-N
MR (DMSO, 250 MHz)：8.91 (s, 1H, H-C(2)), 8.80 (s,
1H, H-C(8)), 8.07 (m, 6H, 4H pth, 2H o から NO2),
7.46 (d, 2H, 2H m から NO2), 7.16 (m, 9H, DMTr),
6.80 (m, 4H, oから OCH3), 6.51 (t, 1H, H-C(1′)),
4.75 (m, 1H, H-C(3′)), 4.13 (m, 1H,H-C(4′)), 3.7
5 (m, 8H, CH2O, 2×O-CH3), 3.50 (m, 2H, H-C(5′),
H-C(5″)), 3.20 (m, 6H, CH2-フェニル, 2×N-CH, H-C
(2′), H-C(2″)), 1.01 (m, 12H, 2×C(CH3)2)；31P-N
MR (DMSO, 161.7 MHz)：1s 147.50；C53H54N7O10P1 (98
0.04)；計算値：C 64.95, H 5.55, N 10.00；実測値：C
64.15, H 5.53, N 9.72
【００３７】実施例２ ５′−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ6−フタロイル−
２′−Ｏ−デオキシアデノシン−３′−Ｏ−（β−シア
ノエチル−Ｎ,Ｎ−ジイソプロピル）ホスフィトアミド ５′−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ6−フタロイル−
２′−デオキシアデノシン（実施例１.２）５００mg
（０.７３ミリモル）をアセトニトリル５mlに溶解し、
そしてビス−（Ｎ,Ｎ−ジイソプロピルアミノ）−２−
シアノエトキシホスファン２８０mg（０.９２ミリモ
ル）およびテトラゾール２６mg(０.３７ミリモル)を加
える。混合物を保護ガス下に１.５時間撹拌した後、ジ
クロロメタン７０mlおよび炭酸水素ナトリウム溶液６０
mlで抽出する。ＭｇＳＯ4で乾燥した後、ロータリーエ
バポレーターにかける。残渣をトルエン／ＡｃＯＥｔ勾
配（４０〜５０％ＡｃＯＥｔ）中シリカゲル（ＳｉＯ2
の９ｇ）でクロマトグラフィー処理し、白色フォーム４
３０mg（０.４９ミリモル；６７％）を得る。 TLC(シリカゲル)：Rf=0.33/0.42(トルエン/AcOEt 1:
1)；1H-NMR (DMSO, 250 MHz)：8.92 (s, 1H, H-C(2)),
8.82 (s, 1H, H-C(8)), 8.09 (m, 4H, pth), 7.33(m, 2
H, DMTr), 7.21 (m, 7H, DMTr), 6.82 (m, 4H, o から
OCH3), 6.55 (m,1H, H-C(1′)), 4.82 (m, 1H, H-C
(3′)), 4.27 (m, 1H, H-C(4′)), 3.65 (m,10H, CH2O,
2×O-CH3, H-C(5′), H-C(5″)), 3.20 (m, 4H, 2×N-
CH, H-C(2′), H-C(2″)), 1.10 (m, 12H, 2×C(C
H3)2)；31P-NMR (DMSO, 161.7 MHz)：2s 148.51/147.9
9；C48H50N7O8P1(883.95)；計算値：C 65.22, H 5.70,
N 11.09；実測値：C 64.94, H 5.78, N 10.87
２′−Ｏ−デオキシアデノシン−３′−Ｏ−（β−シア
ノエチル−Ｎ,Ｎ−ジイソプロピル）ホスフィトアミド ５′−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ6−フタロイル−
２′−デオキシアデノシン（実施例１.２）５００mg
（０.７３ミリモル）をアセトニトリル５mlに溶解し、
そしてビス−（Ｎ,Ｎ−ジイソプロピルアミノ）−２−
シアノエトキシホスファン２８０mg（０.９２ミリモ
ル）およびテトラゾール２６mg(０.３７ミリモル)を加
える。混合物を保護ガス下に１.５時間撹拌した後、ジ
クロロメタン７０mlおよび炭酸水素ナトリウム溶液６０
mlで抽出する。ＭｇＳＯ4で乾燥した後、ロータリーエ
バポレーターにかける。残渣をトルエン／ＡｃＯＥｔ勾
配（４０〜５０％ＡｃＯＥｔ）中シリカゲル（ＳｉＯ2
の９ｇ）でクロマトグラフィー処理し、白色フォーム４
３０mg（０.４９ミリモル；６７％）を得る。 TLC(シリカゲル)：Rf=0.33/0.42(トルエン/AcOEt 1:
1)；1H-NMR (DMSO, 250 MHz)：8.92 (s, 1H, H-C(2)),
8.82 (s, 1H, H-C(8)), 8.09 (m, 4H, pth), 7.33(m, 2
H, DMTr), 7.21 (m, 7H, DMTr), 6.82 (m, 4H, o から
OCH3), 6.55 (m,1H, H-C(1′)), 4.82 (m, 1H, H-C
(3′)), 4.27 (m, 1H, H-C(4′)), 3.65 (m,10H, CH2O,
2×O-CH3, H-C(5′), H-C(5″)), 3.20 (m, 4H, 2×N-
CH, H-C(2′), H-C(2″)), 1.10 (m, 12H, 2×C(C
H3)2)；31P-NMR (DMSO, 161.7 MHz)：2s 148.51/147.9
9；C48H50N7O8P1(883.95)；計算値：C 65.22, H 5.70,
N 11.09；実測値：C 64.94, H 5.78, N 10.87
【００３８】実施例３ ５′−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ6−フタロイル−
２′−Ｏ−デオキシシチジン−３′−Ｏ−（β−シアノ
エチル−Ｎ,Ｎ−ジイソプロピル）ホスフィトアミド ３.１ Ｎ6−フタロイル−２′−Ｏ−デオキシシチジン 実施例１.１と同様にして合成を実施する：２′−Ｏ−
デオキシシチジン５.８ｇ（２２ミリモル）をクロロト
リメチルシラン７ml（５５ミリモル）と一緒にピリジン
８０ml中で撹拌し、そして１時間後に乾燥ジオキサン１
０ml中塩化フタロイル４.４ml（３３ミリモル）を６０
分かけて滴加する。ＤＭＡＰ ５０mgを加え、そして４
５分後に水で反応を停止させる。混合物をさらに１５分
間撹拌する。混合物をジクロロメタン中の１０％ピリジ
ンおよび水１００mlで抽出する。有機相を水１００mlで
洗い、そして水相をジクロロメタン中の１０％ピリジン
各５０mlで２回逆抽出する。乾燥し、そしてロータリー
エバポレーターで蒸発させた後、残渣をトルエンと共に
共蒸発させ、残渣をジクロロメタンでスラリーとし、そ
して吸引濾過する。黄土色粉末５.０７ｇ（１４.２ミリ
モル；６４％）が得られる。 TLC(シリカゲル)：Rf=0.10(トルエン/AcOEt/MeOH 5:4:
1)；1H-NMR (DMSO, 250MHz)：8.63 (d, 1H, H-C(6)),
8.01 (m, 4H, pth), 6.69 (d, 1H, H-C(5)), 6.10 (t,
1H, H-C(1′)), 5.30 (d, 1H, HO-C(3′)), 5.11 (t, 1
H, HO-C(5′)),4.23 (m, 1H, H-C(3′)), 3.91 (m, 1H,
H-C(4′)), 3.63 (m, 2H, H-C(5′), H-C(5″)), 2.38
(m, 1H, H-C(2′)), 2.14 (m, 1H, H-C(2″))；UV (AC
N)：λmax (nm)/logε：〔331/3.68〕, 316/3.80, 〔30
6/3.79〕, 218/4.51；C17H15N3O6(357.32)；計算値：C
57.14, H 4.23, N 11.76；実測値：C 57.21, H 4.45, N
11.66
２′−Ｏ−デオキシシチジン−３′−Ｏ−（β−シアノ
エチル−Ｎ,Ｎ−ジイソプロピル）ホスフィトアミド ３.１ Ｎ6−フタロイル−２′−Ｏ−デオキシシチジン 実施例１.１と同様にして合成を実施する：２′−Ｏ−
デオキシシチジン５.８ｇ（２２ミリモル）をクロロト
リメチルシラン７ml（５５ミリモル）と一緒にピリジン
８０ml中で撹拌し、そして１時間後に乾燥ジオキサン１
０ml中塩化フタロイル４.４ml（３３ミリモル）を６０
分かけて滴加する。ＤＭＡＰ ５０mgを加え、そして４
５分後に水で反応を停止させる。混合物をさらに１５分
間撹拌する。混合物をジクロロメタン中の１０％ピリジ
ンおよび水１００mlで抽出する。有機相を水１００mlで
洗い、そして水相をジクロロメタン中の１０％ピリジン
各５０mlで２回逆抽出する。乾燥し、そしてロータリー
エバポレーターで蒸発させた後、残渣をトルエンと共に
共蒸発させ、残渣をジクロロメタンでスラリーとし、そ
して吸引濾過する。黄土色粉末５.０７ｇ（１４.２ミリ
モル；６４％）が得られる。 TLC(シリカゲル)：Rf=0.10(トルエン/AcOEt/MeOH 5:4:
1)；1H-NMR (DMSO, 250MHz)：8.63 (d, 1H, H-C(6)),
8.01 (m, 4H, pth), 6.69 (d, 1H, H-C(5)), 6.10 (t,
1H, H-C(1′)), 5.30 (d, 1H, HO-C(3′)), 5.11 (t, 1
H, HO-C(5′)),4.23 (m, 1H, H-C(3′)), 3.91 (m, 1H,
H-C(4′)), 3.63 (m, 2H, H-C(5′), H-C(5″)), 2.38
(m, 1H, H-C(2′)), 2.14 (m, 1H, H-C(2″))；UV (AC
N)：λmax (nm)/logε：〔331/3.68〕, 316/3.80, 〔30
6/3.79〕, 218/4.51；C17H15N3O6(357.32)；計算値：C
57.14, H 4.23, N 11.76；実測値：C 57.21, H 4.45, N
11.66
【００３９】３.２ ５′−Ｏ−ジメトキシトリチル−
Ｎ6−フタロイル−２′−Ｏ−デオキシシチジン 実施例１.２と同様にして合成を実施する：Ｎ,Ｎ−ジメ
チルアミノピリジン５０mg（０.４１ミリモル）および
４Å分子ふるいと共にピリジン６０ml中のＮ6−フタロ
イル−２′−Ｏ−デオキシシチジン３ｇ（８.３９ミリ
モル）を２時間４,４−ジメトキシトリチルクロライド
３.１３ｇ（９.２３ミリモル）と共に撹拌する。ジクロ
ロメタン１００mlおよび炭酸水素ナトリウム溶液１００
mlで抽出した後、トルエン／ＡｃＯＥｔ勾配（３３〜７
５％ＡｃＯＥｔ）を用いてシリカゲル（７.５ｇ）でク
ロマトグラフィー処理をする。白色フォーム３.３５ｇ
（５.１０ミリモル；６１％）が得られる。 TLC(シリカゲル)：Rf=0.39(トルエン/AcOEt/MeOH 5:4:
1)；1H-NMR (DMSO, 250MHz)：8.42 (d, 1H, H-C(6)),
7.99 (m, 4H, pth), 7.30 (m, 9H, DMTr), 6.92(m, 4H,
o から OCH3), 6.53 (d, 1H, H-C(5)), 6.11 (t, 1H,
H-C(1′)), 5.40(d, 1H, HO-C(3′)), 4.31 (m, 1H, H-
C(3′)), 4.01 (m, 1H, H-C(4′)), 3.73(s, 6H, 2×O-
CH3), 3.33 (m, 2H, H-C(5′), H-C(5″)), 2.40 (m, 1
H, H-C(2′)), 2.20 (m, 1H, H-C(2″))；UV (ACN)：λ
max (nm)/logε：〔331/3.68〕,317/3.84, 〔306/3.8
3〕, 283/3.72, 〔275/3.69〕, 232/4.65；C38H33N3O8
(659.70)；計算値：C 69.19, H 5.04, N 6.37；実測
値：C 69.29, H 5.35, N 6.17
Ｎ6−フタロイル−２′−Ｏ−デオキシシチジン 実施例１.２と同様にして合成を実施する：Ｎ,Ｎ−ジメ
チルアミノピリジン５０mg（０.４１ミリモル）および
４Å分子ふるいと共にピリジン６０ml中のＮ6−フタロ
イル−２′−Ｏ−デオキシシチジン３ｇ（８.３９ミリ
モル）を２時間４,４−ジメトキシトリチルクロライド
３.１３ｇ（９.２３ミリモル）と共に撹拌する。ジクロ
ロメタン１００mlおよび炭酸水素ナトリウム溶液１００
mlで抽出した後、トルエン／ＡｃＯＥｔ勾配（３３〜７
５％ＡｃＯＥｔ）を用いてシリカゲル（７.５ｇ）でク
ロマトグラフィー処理をする。白色フォーム３.３５ｇ
（５.１０ミリモル；６１％）が得られる。 TLC(シリカゲル)：Rf=0.39(トルエン/AcOEt/MeOH 5:4:
1)；1H-NMR (DMSO, 250MHz)：8.42 (d, 1H, H-C(6)),
7.99 (m, 4H, pth), 7.30 (m, 9H, DMTr), 6.92(m, 4H,
o から OCH3), 6.53 (d, 1H, H-C(5)), 6.11 (t, 1H,
H-C(1′)), 5.40(d, 1H, HO-C(3′)), 4.31 (m, 1H, H-
C(3′)), 4.01 (m, 1H, H-C(4′)), 3.73(s, 6H, 2×O-
CH3), 3.33 (m, 2H, H-C(5′), H-C(5″)), 2.40 (m, 1
H, H-C(2′)), 2.20 (m, 1H, H-C(2″))；UV (ACN)：λ
max (nm)/logε：〔331/3.68〕,317/3.84, 〔306/3.8
3〕, 283/3.72, 〔275/3.69〕, 232/4.65；C38H33N3O8
(659.70)；計算値：C 69.19, H 5.04, N 6.37；実測
値：C 69.29, H 5.35, N 6.17
【００４０】３.３ ５′−Ｏ−ジメトキシトリチル−
Ｎ6−フタロイル−２′−Ｏ−デオキシシチジン−３′
−Ｏ−（β−シアノエチル−Ｎ,Ｎ−ジイソプロピル）
ホスフィトアミド 実施例２と同様にして合成を実施する：５′−Ｏ−ジメ
トキシトリチル−Ｎ6−フタロイル−２′−デオキシシ
チジン６６０mg（１ミリモル）をアセトニトリル７mlに
溶解し、そしてビス−（Ｎ,Ｎ−ジイソプロピルアミ
ノ）−２−シアノエトキシホスファン３６２mg（１.２
ミリモル）およびテトラゾール３５mg（０.５ミリモ
ル）を加える。１.５時間後、ジクロロメタン１００ml
および炭酸水素ナトリウム溶液６０mlで抽出をする。ト
ルエン／ＡｃＯＥｔ勾配（４０〜５０％ＡｃＯＥｔ）中
シリカゲル(ＳｉＯ2の８ｇ）でクロマトグラフィー処理
をする。白色フォーム６２０mg（０.７２ミリモル；７
２％）が得られる。 TLC(シリカゲル)：Rf=0.47/0.51(トルエン/AcOEt 1:
6)；1H-NMR (DMSO, 250 MHz)：8.45 (m, 1H, H-C(6)),
7.99 (m, 4H, pth), 7.30 (m, 9H, DMTr), 6.91 (m, 4
H, o から OCH3), 6.55 (d, 1H, H-C(5)), 6.15 (m, 1
H, H-C(1′)), 4.52(m, 1H, H-C(3′)), 4.17 (m, 1H,
H-C(4′)), 3.72 (s, 6H, 2×O-CH3), 3.60(m, 6H, H-C
(5′), H-C(5″), CH2O, 2×N-CH)), 2.70 (2t, 2H, CH
2CN), 2.60(m, 1H, H-C(2′)), 2.40 (m, 1H, H-C
(2″)), 0.97-1.19 (m, 12H, 2×C(CH3)2)；31P-NMR (D
MSO, 161.7 MHz)：2s 148.63/148.38；C47H50N5O8P1 (8
59.91)；計算値：C 65.65, H 5.86, N 8.14：実測値：C
64.16, H 6.04, N 8.23
Ｎ6−フタロイル−２′−Ｏ−デオキシシチジン−３′
−Ｏ−（β−シアノエチル−Ｎ,Ｎ−ジイソプロピル）
ホスフィトアミド 実施例２と同様にして合成を実施する：５′−Ｏ−ジメ
トキシトリチル−Ｎ6−フタロイル−２′−デオキシシ
チジン６６０mg（１ミリモル）をアセトニトリル７mlに
溶解し、そしてビス−（Ｎ,Ｎ−ジイソプロピルアミ
ノ）−２−シアノエトキシホスファン３６２mg（１.２
ミリモル）およびテトラゾール３５mg（０.５ミリモ
ル）を加える。１.５時間後、ジクロロメタン１００ml
および炭酸水素ナトリウム溶液６０mlで抽出をする。ト
ルエン／ＡｃＯＥｔ勾配（４０〜５０％ＡｃＯＥｔ）中
シリカゲル(ＳｉＯ2の８ｇ）でクロマトグラフィー処理
をする。白色フォーム６２０mg（０.７２ミリモル；７
２％）が得られる。 TLC(シリカゲル)：Rf=0.47/0.51(トルエン/AcOEt 1:
6)；1H-NMR (DMSO, 250 MHz)：8.45 (m, 1H, H-C(6)),
7.99 (m, 4H, pth), 7.30 (m, 9H, DMTr), 6.91 (m, 4
H, o から OCH3), 6.55 (d, 1H, H-C(5)), 6.15 (m, 1
H, H-C(1′)), 4.52(m, 1H, H-C(3′)), 4.17 (m, 1H,
H-C(4′)), 3.72 (s, 6H, 2×O-CH3), 3.60(m, 6H, H-C
(5′), H-C(5″), CH2O, 2×N-CH)), 2.70 (2t, 2H, CH
2CN), 2.60(m, 1H, H-C(2′)), 2.40 (m, 1H, H-C
(2″)), 0.97-1.19 (m, 12H, 2×C(CH3)2)；31P-NMR (D
MSO, 161.7 MHz)：2s 148.63/148.38；C47H50N5O8P1 (8
59.91)；計算値：C 65.65, H 5.86, N 8.14：実測値：C
64.16, H 6.04, N 8.23
【００４１】実施例４ ５′−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｏ6−〔２−（４−ニ
トロフェニル）エチル〕−Ｎ2−フタロイル−２′−デ
オキシグアノシン−３′−Ｏ−（シアノエチル−Ｎ,Ｎ
−ジイソプロピル）ホスフィトアミド ４.１ Ｏ6−〔２−（４−ニトロフェニル）エチル〕−
Ｎ2−フタロイル−２′−デオキシグアノシン 実施例１.１と同様にして合成を実施する。 変法Ａ：ピリジン／水によるトリメチルシリル基の除去 Ｏ6−〔２−（４−ニトロフェニル）エチル〕−２′−
デオキシグアノシン８３３mg（２ミリモル）をピリジン
１５ml中クロロトリメチルシラン０.６３ml（５ミリモ
ル）と共に撹拌し、そして３０分後乾燥ジオキサン５ml
中の塩化フタロイル０.４３ml（３ミリモル）を１５分
間かけて滴加する。２時間後、水で反応を停止させ、そ
れから混合物をさらに１５分間撹拌する。混合物を炭酸
水素ナトリウム溶液５０mlおよびジクロロメタン５０ml
で２回抽出し、次に水相を再びジクロロメタン５０mlで
抽出する。有機相をＭｇＳＯ4で乾燥し、濾過し、そし
て濃縮する。残渣をトルエン／ＡｃＯＥｔ（５：４）−
ＭｅＯＨ勾配（０〜５％ＭｅＯＨ）でフラッシュクロマ
トグラフィーによりシリカゲルカラム（ＳｉＯ2の２５
ｇ）で精製する。若干黄色味を帯びたフォーム０.５６
ｇ（１.０２ミリモル；５１％）が得られる。
トロフェニル）エチル〕−Ｎ2−フタロイル−２′−デ
オキシグアノシン−３′−Ｏ−（シアノエチル−Ｎ,Ｎ
−ジイソプロピル）ホスフィトアミド ４.１ Ｏ6−〔２−（４−ニトロフェニル）エチル〕−
Ｎ2−フタロイル−２′−デオキシグアノシン 実施例１.１と同様にして合成を実施する。 変法Ａ：ピリジン／水によるトリメチルシリル基の除去 Ｏ6−〔２−（４−ニトロフェニル）エチル〕−２′−
デオキシグアノシン８３３mg（２ミリモル）をピリジン
１５ml中クロロトリメチルシラン０.６３ml（５ミリモ
ル）と共に撹拌し、そして３０分後乾燥ジオキサン５ml
中の塩化フタロイル０.４３ml（３ミリモル）を１５分
間かけて滴加する。２時間後、水で反応を停止させ、そ
れから混合物をさらに１５分間撹拌する。混合物を炭酸
水素ナトリウム溶液５０mlおよびジクロロメタン５０ml
で２回抽出し、次に水相を再びジクロロメタン５０mlで
抽出する。有機相をＭｇＳＯ4で乾燥し、濾過し、そし
て濃縮する。残渣をトルエン／ＡｃＯＥｔ（５：４）−
ＭｅＯＨ勾配（０〜５％ＭｅＯＨ）でフラッシュクロマ
トグラフィーによりシリカゲルカラム（ＳｉＯ2の２５
ｇ）で精製する。若干黄色味を帯びたフォーム０.５６
ｇ（１.０２ミリモル；５１％）が得られる。
【００４２】変法Ｂ：フッ化アンモニウムによるトリメ
チルシリル基の除去 Ｏ6−〔２−（４−ニトロフェニル）エチル〕−２′−
デオキシグアノシン８３３mg（２ミリモル）をピリジン
１５ml中でクロロトリメチルシラン０.６３ml（５ミリ
モル）と共に撹拌し、そして３０分後に乾燥ジオキサン
２ml中の塩化フタロイル０.５７ml（４ミリモル）を５
分間かけて滴加する。２時間後、混合物をロータリーエ
バポレーターにかけ、そして残渣をトルエンと共に共蒸
発させ、次にＭｅＯＨ ２０ml中のフッ化アンモニウム
１６０mg（４.３ミリモル）で処理する。混合物を３分
間撹拌し、次に炭酸水素ナトリウム溶液１００mlおよび
ジクロロメタン１００mlで２回抽出し、そして水相を再
びジクロロメタン５０mlで抽出する。トルエン／ＡｃＯ
Ｅｔ（５：４）−ＭｅＯＨ勾配（０〜５％ＭｅＯＨ）中
フラッシュクロマトグラフィーによりシリカゲルカラム
（ＳｉＯ2の２５ｇ）で精製する。若干黄色味を帯びた
フォーム０.４５ｇ(０.８２ミリモル；４１％)が得られ
る。
チルシリル基の除去 Ｏ6−〔２−（４−ニトロフェニル）エチル〕−２′−
デオキシグアノシン８３３mg（２ミリモル）をピリジン
１５ml中でクロロトリメチルシラン０.６３ml（５ミリ
モル）と共に撹拌し、そして３０分後に乾燥ジオキサン
２ml中の塩化フタロイル０.５７ml（４ミリモル）を５
分間かけて滴加する。２時間後、混合物をロータリーエ
バポレーターにかけ、そして残渣をトルエンと共に共蒸
発させ、次にＭｅＯＨ ２０ml中のフッ化アンモニウム
１６０mg（４.３ミリモル）で処理する。混合物を３分
間撹拌し、次に炭酸水素ナトリウム溶液１００mlおよび
ジクロロメタン１００mlで２回抽出し、そして水相を再
びジクロロメタン５０mlで抽出する。トルエン／ＡｃＯ
Ｅｔ（５：４）−ＭｅＯＨ勾配（０〜５％ＭｅＯＨ）中
フラッシュクロマトグラフィーによりシリカゲルカラム
（ＳｉＯ2の２５ｇ）で精製する。若干黄色味を帯びた
フォーム０.４５ｇ(０.８２ミリモル；４１％)が得られ
る。
【００４３】変法Ｃ:テトラブチルアンモニウムフルオ
リドによるトリメチルシリル基の除去 Ｏ6−〔２−（４−ニトロフェニル）エチル〕−２′−
デオキシグアノシン８３３mg（２ミリモル）をピリジン
１５ml中クロロトリメチルシラン０.７ml（５.５ミリモ
ル）と共に撹拌し、そして３０分後に乾燥ジオキサン３
ml中の塩化フタロイル０.５５ml（３.８ミリモル）を１
０分間かけて滴加する。２時間後、テトラブチルアンモ
ニウムフルオリド・三水和物１.２６ｇ（４ミリモル）
を加え、そして混合物を５分間撹拌する。次にこれを炭
酸水素ナトリウム溶液１００mlおよびジクロロメタン１
００mlで抽出し、そして水相を再びジクロロメタン５０
mlで抽出する。トルエン／ＡｃＯＥｔ（５：４）−Ｍｅ
ＯＨ勾配（０〜５％ＭｅＯＨ）でフラッシュクロマトグ
ラフィーによりシリカゲルカラム（ＳｉＯ2の２５ｇ）
で精製する。若干黄色味を帯びたフォーム０.３９ｇ
(０.７１ミリモル；３６％）が得られる。 TLC(シリカゲル)：Rf=0.42(クロロホルム/メタノール
9:1)；1H-NMR (DMSO, 250 MHz)：8.71 (s, 1H, H-C
(8)), 8.14 (d, 2H, 2H o から NO2), 8.00 (m, 4H,pt
h), 7.61 (d, 2H, 2H m から NO2), 6.39 (t, 1H, H-C
(1′)), 5.32 (d, 1H,HO-C(3′)), 4.91 (t, 1H, HO-C
(5′)), 4.83 (t, 2H, CH2O), 4.40 (m, 1H, H-C
(3′)), 3.85 (m, 1H, H-C(4′)), 3.51-3.58 (m, 2H,
H-C(5′), H-C(5″)),3.32 (t, 2H, CH2-フェニル), 2.
74 (m, 1H, H-C(2′)), 2.32 (m, 1H, H-C(2″))；UV
(ACN)：λmax (nm)/logε：262/4.34, 219/4.68；C26H
22N6O8 (546.50)；計算値：C 57.14, H 4.06, N 15.3
8；実測値：C 57.27, H 4.37, N 15.11
リドによるトリメチルシリル基の除去 Ｏ6−〔２−（４−ニトロフェニル）エチル〕−２′−
デオキシグアノシン８３３mg（２ミリモル）をピリジン
１５ml中クロロトリメチルシラン０.７ml（５.５ミリモ
ル）と共に撹拌し、そして３０分後に乾燥ジオキサン３
ml中の塩化フタロイル０.５５ml（３.８ミリモル）を１
０分間かけて滴加する。２時間後、テトラブチルアンモ
ニウムフルオリド・三水和物１.２６ｇ（４ミリモル）
を加え、そして混合物を５分間撹拌する。次にこれを炭
酸水素ナトリウム溶液１００mlおよびジクロロメタン１
００mlで抽出し、そして水相を再びジクロロメタン５０
mlで抽出する。トルエン／ＡｃＯＥｔ（５：４）−Ｍｅ
ＯＨ勾配（０〜５％ＭｅＯＨ）でフラッシュクロマトグ
ラフィーによりシリカゲルカラム（ＳｉＯ2の２５ｇ）
で精製する。若干黄色味を帯びたフォーム０.３９ｇ
(０.７１ミリモル；３６％）が得られる。 TLC(シリカゲル)：Rf=0.42(クロロホルム/メタノール
9:1)；1H-NMR (DMSO, 250 MHz)：8.71 (s, 1H, H-C
(8)), 8.14 (d, 2H, 2H o から NO2), 8.00 (m, 4H,pt
h), 7.61 (d, 2H, 2H m から NO2), 6.39 (t, 1H, H-C
(1′)), 5.32 (d, 1H,HO-C(3′)), 4.91 (t, 1H, HO-C
(5′)), 4.83 (t, 2H, CH2O), 4.40 (m, 1H, H-C
(3′)), 3.85 (m, 1H, H-C(4′)), 3.51-3.58 (m, 2H,
H-C(5′), H-C(5″)),3.32 (t, 2H, CH2-フェニル), 2.
74 (m, 1H, H-C(2′)), 2.32 (m, 1H, H-C(2″))；UV
(ACN)：λmax (nm)/logε：262/4.34, 219/4.68；C26H
22N6O8 (546.50)；計算値：C 57.14, H 4.06, N 15.3
8；実測値：C 57.27, H 4.37, N 15.11
【００４４】４.２ ５′−Ｏ−ジメトキシトリチル−
Ｏ6−〔２−（４−ニトロフェニル）エチル〕−Ｎ2−フ
タロイル−２′−デオキシグアノシン 実施例１.２と同様の合成：Ｏ6−〔２−(４−ニトロフ
ェニル）エチル〕−Ｎ2−フタロイル−２′−デオキシ
グアノシン９９０mg（１.８１ミリモル）をピリジン２
５mlに溶解し、４,４−ジメトキシトリチルクロライド
６７４mg（１.９９ミリモル）を加え、そして混合物を
３時間撹拌する。これをＡｃＯＥｔの１００mlおよび炭
酸水素ナトリウムの飽和水溶液１００mlで抽出する。次
に、トルエン／ＡｃＯＥｔ勾配（２０〜６６％ＡｃＯＥ
ｔ）でシリカゲル（ＳｉＯ2の２５ｇ)でクロマトグラフ
ィー処理し、白色フォーム１.００ｇ（１.１８ミリモ
ル；６７％）が得られる。 TLC(シリカゲル)：Rf=0.57(トルエン/AcOEt 1:6)；1H-N
MR (DMSO, 250 MHz)：8.59 (s, 1H, H-C(8)), 8.13 (d,
2H, 2H o から NO2), 8.00 (m, 4H, pth), 7.60 (d, 2
H, 2H m から NO2), 7.10-7.26 (m, 9H, DMTr), 6.68
(m, 4H, o からOCH3), 6.43 (m, 1H, H-C(1′)), 5.36
(d, 1H, HO-C(3′)), 4.81 (t, 2H, CH2O), 4.46 (m, 1
H, H-C(3′)), 3.95 (m, 1H, H-C(4′)), 3.67 (s, 6H,
2×O-CH 3), 3.32 (t, 2H, CH2-フェニル), 3.05-3.25
(m, 2H, H-C(5′), H-C(5″)), 2.85 (m, 1H, H-C
(2′)), 2.38 （m, 1H, H-C(2″))；UV (ACN)：λmax
(nm)/logε：262/4.38, 218/4.78；C47H40N6O10 (848.8
7)；計算値：C 66.50, N 4.75, N9.90；実測値：C 66.6
5, H 4.90, N 9.52
Ｏ6−〔２−（４−ニトロフェニル）エチル〕−Ｎ2−フ
タロイル−２′−デオキシグアノシン 実施例１.２と同様の合成：Ｏ6−〔２−(４−ニトロフ
ェニル）エチル〕−Ｎ2−フタロイル−２′−デオキシ
グアノシン９９０mg（１.８１ミリモル）をピリジン２
５mlに溶解し、４,４−ジメトキシトリチルクロライド
６７４mg（１.９９ミリモル）を加え、そして混合物を
３時間撹拌する。これをＡｃＯＥｔの１００mlおよび炭
酸水素ナトリウムの飽和水溶液１００mlで抽出する。次
に、トルエン／ＡｃＯＥｔ勾配（２０〜６６％ＡｃＯＥ
ｔ）でシリカゲル（ＳｉＯ2の２５ｇ)でクロマトグラフ
ィー処理し、白色フォーム１.００ｇ（１.１８ミリモ
ル；６７％）が得られる。 TLC(シリカゲル)：Rf=0.57(トルエン/AcOEt 1:6)；1H-N
MR (DMSO, 250 MHz)：8.59 (s, 1H, H-C(8)), 8.13 (d,
2H, 2H o から NO2), 8.00 (m, 4H, pth), 7.60 (d, 2
H, 2H m から NO2), 7.10-7.26 (m, 9H, DMTr), 6.68
(m, 4H, o からOCH3), 6.43 (m, 1H, H-C(1′)), 5.36
(d, 1H, HO-C(3′)), 4.81 (t, 2H, CH2O), 4.46 (m, 1
H, H-C(3′)), 3.95 (m, 1H, H-C(4′)), 3.67 (s, 6H,
2×O-CH 3), 3.32 (t, 2H, CH2-フェニル), 3.05-3.25
(m, 2H, H-C(5′), H-C(5″)), 2.85 (m, 1H, H-C
(2′)), 2.38 （m, 1H, H-C(2″))；UV (ACN)：λmax
(nm)/logε：262/4.38, 218/4.78；C47H40N6O10 (848.8
7)；計算値：C 66.50, N 4.75, N9.90；実測値：C 66.6
5, H 4.90, N 9.52
【００４５】４.３ ５′−Ｏ−ジメトキシトリチル−
Ｏ6−〔２−（４−ニトロフェニル）エチル〕−Ｎ2−フ
タロイル−２′−デオキシグアノシン−３′−Ｏ−（β
−シアノエチル−Ｎ,Ｎ−ジイソプロピル）ホスフィト
アミド テトラゾールの代わりにピリジン塩酸塩を用いる以外
は、実施例１.３と同様の合成。収率：８７％。 TLC(シリカゲル)：Rf=0.74/0.82(トルエン/AcOEt 1:
6)；1H-NMR (DMSO, 250 MHz)：8.63 (s, 1H, H-C(8)),
8.13 (s, 2H, 2H o から NO2), 8.00 (m, 4H, pth), 7.
61 (s, 2H, 2H m から NO2), 7.08-7.24 (m, 9H, DMT
r), 6.63-6.71 (m, 4H, DMTr), 6.45 (m, 1H, H-C
(1′)), 4.80 (m, 3H, H-C(3′), CH2O), 4.10 (m,1H,
H-C(4′)), 3.66および3.67 (2s, 6H, 2×OCH3), 2.95-
3.59 (m, 10H, NC-CH2O, H-C(5′), H-C(5″)), 2×N-C
H, CH2CN, CH2-フェニル), 2.72 (m, 1H, H-C(2′)),
2.61 (m, 1H, H-C(2″)), 0.90-1.20 (m, 12H, 2×C(CH
3)2)；31P-NMR (DMSO, 161.7 MHz)：2s 148.55/148.0
5；C56H57N8O11P1 (1049.09)；計算値：C 64.11, H 5.4
8, N 10.68；実測値：C 63.92, N 5.47, H 10.12
Ｏ6−〔２−（４−ニトロフェニル）エチル〕−Ｎ2−フ
タロイル−２′−デオキシグアノシン−３′−Ｏ−（β
−シアノエチル−Ｎ,Ｎ−ジイソプロピル）ホスフィト
アミド テトラゾールの代わりにピリジン塩酸塩を用いる以外
は、実施例１.３と同様の合成。収率：８７％。 TLC(シリカゲル)：Rf=0.74/0.82(トルエン/AcOEt 1:
6)；1H-NMR (DMSO, 250 MHz)：8.63 (s, 1H, H-C(8)),
8.13 (s, 2H, 2H o から NO2), 8.00 (m, 4H, pth), 7.
61 (s, 2H, 2H m から NO2), 7.08-7.24 (m, 9H, DMT
r), 6.63-6.71 (m, 4H, DMTr), 6.45 (m, 1H, H-C
(1′)), 4.80 (m, 3H, H-C(3′), CH2O), 4.10 (m,1H,
H-C(4′)), 3.66および3.67 (2s, 6H, 2×OCH3), 2.95-
3.59 (m, 10H, NC-CH2O, H-C(5′), H-C(5″)), 2×N-C
H, CH2CN, CH2-フェニル), 2.72 (m, 1H, H-C(2′)),
2.61 (m, 1H, H-C(2″)), 0.90-1.20 (m, 12H, 2×C(CH
3)2)；31P-NMR (DMSO, 161.7 MHz)：2s 148.55/148.0
5；C56H57N8O11P1 (1049.09)；計算値：C 64.11, H 5.4
8, N 10.68；実測値：C 63.92, N 5.47, H 10.12
【００４６】実施例５ ５′−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｏ6−〔２−（フェニ
ルスルホニル）エチル〕−Ｎ2−フタロイル−２′−デ
オキシグアノシン−３′−Ｏ−（シアノエチル−Ｎ,Ｎ
−ジイソプロピル）ホスフィトアミド ５.１ Ｏ6−〔２−（フェニルスルホニル）エチル〕−
Ｎ2−フタロイル−２′−デオキシグアノシン 実施例１.１と同様にして合成を実施する。 変法Ａ：ピリジン／水によるトリメチルシリル基の除去 Ｏ6−〔２−（フェニルスルホニル）エチル〕−２′−
デオキシグアノシン３００mg（０.６９ミリモル）をピ
リジン１０ml中でクロロトリメチルシラン０.２２ml
（１.７ミリモル）と共に撹拌し、そして３０分後乾燥
ジオキサン２ml中の塩化フタロイル０.１４ml（０.９７
ミリモル）を７分間かけて滴加する。１時間後、水で反
応を停止させ、次に混合物をさらに１５分間撹拌する。
これを水２５mlおよびジクロロメタン２５mlで２回抽出
し、そして水相を再びジクロロメタン２５mlで抽出す
る。石油エーテル／アセトン勾配（５０〜６０％アセト
ン）でフラッシュクロマトグラフィーによりシリカゲル
カラム（ＳｉＯ2の７ｇ）で精製する。ほとんど無色の
フォーム０.１４ｇ（０.２４ミリモル；３６％）が得ら
れる。
ルスルホニル）エチル〕−Ｎ2−フタロイル−２′−デ
オキシグアノシン−３′−Ｏ−（シアノエチル−Ｎ,Ｎ
−ジイソプロピル）ホスフィトアミド ５.１ Ｏ6−〔２−（フェニルスルホニル）エチル〕−
Ｎ2−フタロイル−２′−デオキシグアノシン 実施例１.１と同様にして合成を実施する。 変法Ａ：ピリジン／水によるトリメチルシリル基の除去 Ｏ6−〔２−（フェニルスルホニル）エチル〕−２′−
デオキシグアノシン３００mg（０.６９ミリモル）をピ
リジン１０ml中でクロロトリメチルシラン０.２２ml
（１.７ミリモル）と共に撹拌し、そして３０分後乾燥
ジオキサン２ml中の塩化フタロイル０.１４ml（０.９７
ミリモル）を７分間かけて滴加する。１時間後、水で反
応を停止させ、次に混合物をさらに１５分間撹拌する。
これを水２５mlおよびジクロロメタン２５mlで２回抽出
し、そして水相を再びジクロロメタン２５mlで抽出す
る。石油エーテル／アセトン勾配（５０〜６０％アセト
ン）でフラッシュクロマトグラフィーによりシリカゲル
カラム（ＳｉＯ2の７ｇ）で精製する。ほとんど無色の
フォーム０.１４ｇ（０.２４ミリモル；３６％）が得ら
れる。
【００４７】変法Ｂ：フッ化アンモニウムによるトリメ
チルシリル基の除去 Ｏ6−〔２−（フェニルスルホニル）エチル〕−２′−
デオキシグアノシン０.８７ｇ（２ミリモル）を乾燥ア
セトニトリル１５mlおよびピリジン１.０３ml中でクロ
ロトリメチルシラン０.５６ml（４.４ミリモル）と共に
撹拌し、そして３０分後に塩化フタロイル０.２９ml
（２ミリモル）を滴加する。３５分後、混合物をロータ
リーエバポレーターにかけ、残渣をトルエンと共に共蒸
発させ、そしてＭｅＯＨ ２５ml中のフッ化アンモニウ
ム１６０mgで処理する。この混合物を３分間撹拌し、炭
酸水素ナトリウム溶液１００mlおよびジクロロメタン１
００mlで２回抽出し、そして水相を再びジクロロメタン
５０mlで抽出する。石油エーテル／アセトン勾配（３０
〜７５％アセトン）でフラッシュクロマトグラフィーに
よりシリカゲルカラム（ＳｉＯ2の２５ｇ）で精製す
る。若干黄色味を帯びたフォーム０.４５ｇ（０.７９ミ
リモル；４０％）が得られる。 TLC(シリカゲル)：Rf=0.27(石油エーテル/アセトン 1:
2)；1H-NMR (DMSO, 250MHz)：8.65 (s, 1H, H-C(8)),
7.96-8.7 (m, 4H, pth), 7.82 (m, 2H, o からSO2), 7.
36-7.49 (m, 3H, 2H m から SO2, 1H p から SO2), 6.3
7 (t, 1H, H-C(1′)), 5.32 (d, 1H, HO-C(3′)), 4.92
(t, 1H, HO-C(5′)), 4.80 (t, 2H, CH 2O), 4.41 (m,
1H, H-C(3′)), 4.12 (t, 2H, CH2SO2), 3.86 (m, 1H,
H-C(4′)), 3.45-3.65 (m, 2H, H-C(5′), H-C(5″)),
2.72 (m, 1H, H-C(2′)), 2.33 (m, 1H, H-C(2″))；UV
(ACN)：λmax (nm)/logε：〔294/3.50〕, 259/4.26,
219/4.73；C26H23N5O8S1×H2O (583.58)；計算値：C 5
3.51, H 4.32, N 12.00；実測値：C 53.95, H 4.45, N
11.72
チルシリル基の除去 Ｏ6−〔２−（フェニルスルホニル）エチル〕−２′−
デオキシグアノシン０.８７ｇ（２ミリモル）を乾燥ア
セトニトリル１５mlおよびピリジン１.０３ml中でクロ
ロトリメチルシラン０.５６ml（４.４ミリモル）と共に
撹拌し、そして３０分後に塩化フタロイル０.２９ml
（２ミリモル）を滴加する。３５分後、混合物をロータ
リーエバポレーターにかけ、残渣をトルエンと共に共蒸
発させ、そしてＭｅＯＨ ２５ml中のフッ化アンモニウ
ム１６０mgで処理する。この混合物を３分間撹拌し、炭
酸水素ナトリウム溶液１００mlおよびジクロロメタン１
００mlで２回抽出し、そして水相を再びジクロロメタン
５０mlで抽出する。石油エーテル／アセトン勾配（３０
〜７５％アセトン）でフラッシュクロマトグラフィーに
よりシリカゲルカラム（ＳｉＯ2の２５ｇ）で精製す
る。若干黄色味を帯びたフォーム０.４５ｇ（０.７９ミ
リモル；４０％）が得られる。 TLC(シリカゲル)：Rf=0.27(石油エーテル/アセトン 1:
2)；1H-NMR (DMSO, 250MHz)：8.65 (s, 1H, H-C(8)),
7.96-8.7 (m, 4H, pth), 7.82 (m, 2H, o からSO2), 7.
36-7.49 (m, 3H, 2H m から SO2, 1H p から SO2), 6.3
7 (t, 1H, H-C(1′)), 5.32 (d, 1H, HO-C(3′)), 4.92
(t, 1H, HO-C(5′)), 4.80 (t, 2H, CH 2O), 4.41 (m,
1H, H-C(3′)), 4.12 (t, 2H, CH2SO2), 3.86 (m, 1H,
H-C(4′)), 3.45-3.65 (m, 2H, H-C(5′), H-C(5″)),
2.72 (m, 1H, H-C(2′)), 2.33 (m, 1H, H-C(2″))；UV
(ACN)：λmax (nm)/logε：〔294/3.50〕, 259/4.26,
219/4.73；C26H23N5O8S1×H2O (583.58)；計算値：C 5
3.51, H 4.32, N 12.00；実測値：C 53.95, H 4.45, N
11.72
【００４８】５.２ ５′−Ｏ−ジメトキシトリチル−
Ｏ6−〔２−（フェニルスルホニル）エチル〕−Ｎ2−フ
タロイル−２′−デオキシグアノシン 実施例１.２と同様な合成：ピリジン２０ml中のＯ6−
〔２−（フェニルスルホニル）エチル〕−Ｎ6−フタロ
イル−２′−デオキシグアノシン５６０mg（１ミリモ
ル）を４,４−ジメトキシトリチルクロライド３７３mg
（１.１ミリモル）と共に１６時間撹拌する。混合物を
ジクロロメタン１００mlおよび炭酸水素ナトリウム飽和
溶液１００mlで抽出する。トルエン／ＡｃＯＥｔ勾配
（３０〜８０％ＡｃＯＥｔ）でシリカゲル（ＳｉＯ2の
２０ｇ）でクロマトグラフィー処理し、若干黄色味を帯
びたフォーム５７０mg（０.６６ミリモル；６６％）が
得られる。 TLC(シリカゲル)：Rf=0.39(トルエン/AcOEt/MeOH 5:4:
1)；1H-NMR (DMSO, 250MHz)：8.55 (s, 1H, H-C(8)),
8.01-8.07 (m, 4H, pth), 7.82 (m, 2H, 2H o から S
O2), 7.32-7.38 (m, 3H, 2H m から SO2, 1H p から SO
2), 7.05-7.27 (m,9H, DMTr), 6.67-6.73 (m, 4H, o か
ら OCH3), 6.41 (m, 1H, H-C(1′)), 5.37(d, 1H, HO-C
(3′)), 4.79 (t, 2H, CH2O), 4.46 (m, 1H, H-C
(3′)), 4.10 (t, 2H, CH2SO2), 3.96 (m, 1H, H-C
(4′)), 3.68 (s, 6H, 2×OCH3), 3.09-3.25(m, 2H, H-
C(5′), H-C(5″)), 2.81 (m, 1H, H-C(2′)), 2.35
(m, 1H, H-C(2″))；UV (ACN)：λmax (nm)/logε：261
/4.26, 217/4.80；C47H41N5O1OS1 (867.93)；計算値：C
65.04, H 4.76, N 8.07；実測値：C 64.97, H 4.82, N
7.88
Ｏ6−〔２−（フェニルスルホニル）エチル〕−Ｎ2−フ
タロイル−２′−デオキシグアノシン 実施例１.２と同様な合成：ピリジン２０ml中のＯ6−
〔２−（フェニルスルホニル）エチル〕−Ｎ6−フタロ
イル−２′−デオキシグアノシン５６０mg（１ミリモ
ル）を４,４−ジメトキシトリチルクロライド３７３mg
（１.１ミリモル）と共に１６時間撹拌する。混合物を
ジクロロメタン１００mlおよび炭酸水素ナトリウム飽和
溶液１００mlで抽出する。トルエン／ＡｃＯＥｔ勾配
（３０〜８０％ＡｃＯＥｔ）でシリカゲル（ＳｉＯ2の
２０ｇ）でクロマトグラフィー処理し、若干黄色味を帯
びたフォーム５７０mg（０.６６ミリモル；６６％）が
得られる。 TLC(シリカゲル)：Rf=0.39(トルエン/AcOEt/MeOH 5:4:
1)；1H-NMR (DMSO, 250MHz)：8.55 (s, 1H, H-C(8)),
8.01-8.07 (m, 4H, pth), 7.82 (m, 2H, 2H o から S
O2), 7.32-7.38 (m, 3H, 2H m から SO2, 1H p から SO
2), 7.05-7.27 (m,9H, DMTr), 6.67-6.73 (m, 4H, o か
ら OCH3), 6.41 (m, 1H, H-C(1′)), 5.37(d, 1H, HO-C
(3′)), 4.79 (t, 2H, CH2O), 4.46 (m, 1H, H-C
(3′)), 4.10 (t, 2H, CH2SO2), 3.96 (m, 1H, H-C
(4′)), 3.68 (s, 6H, 2×OCH3), 3.09-3.25(m, 2H, H-
C(5′), H-C(5″)), 2.81 (m, 1H, H-C(2′)), 2.35
(m, 1H, H-C(2″))；UV (ACN)：λmax (nm)/logε：261
/4.26, 217/4.80；C47H41N5O1OS1 (867.93)；計算値：C
65.04, H 4.76, N 8.07；実測値：C 64.97, H 4.82, N
7.88
【００４９】５.３ ５′−Ｏ−ジメトキシトリチル−
Ｏ6−〔２−（フェニルスルホニル）エチル〕−Ｎ2−フ
タロイル−２′−デオキシグアノシン−３′−Ｏ−（シ
アノエチル−Ｎ,Ｎ−ジイソプロピル）ホスフィトアミ
ド 実施例２と同様の合成：５′−Ｏ−ジメトキシトリチル
−Ｏ6−〔２−（フェニルスルホニル）エチル〕−Ｎ2−
フタロイル−２′−デオキシグアノシン４７０mg（０.
５４ミリモル）をアセトニトリル８mlに溶解し、そして
ビス（Ｎ,Ｎ−ジイソプロピルアミノ）−２−シアノエ
トキシホスファン１９６mg（０.６５ミリモル）および
ピリジニウムクロライドの０.５Ｍ溶液０.５４mlを加え
る。３時間後、さらにホスファン１５０mgおよびピリジ
ニウムクロライド溶液０.２７mlを加え、そして混合物
をさらに３.５時間撹拌する。このものをジクロロメタ
ン５０mlおよび炭酸水素ナトリウム溶液５０mlで抽出す
る。トルエン／酢酸エチル勾配（３３〜５０％ＡｃＯＥ
ｔ）でクロマトグラフィー処理し、白色フォーム４２０
mg（０.３９ミリモル）が得られる。 TLC(シリカゲル)：Rf=0.49/0.60(石油エーテル/AcOEt/
トリエチルアミン 1:9:1)；1H-NMR (DMSO, 250 MHz)：
8.57 (2s, 1H, H-C(8)), 7.98-8.03 (m, 4H, pth), 7.8
1 (m, 2H, 2H o から SO2), 7.31-7.40 (m, 3H, 2H m
から SO2, 1H o から SO2), 7.08-7.25 (m, 9H, DMTr),
6.39-6.73 (m, 4H, DMTr), 6.43 (m, 1H,H-C(1′)),
4.78 (m, 3H, H-C(3′), CH2O), 4.10 (m, 3H, CH2SO2,
H-C(4′)),3.66および3.67 (2s, 6H, 2×OCH3), 3.30-
3.60 (m, 4H, NC-CH2O, 2×N-CH),3.23 (m, 2H, H-C
(5′), H-C(5″)), 3.00 (m, 1H, H-C(2′)), 2.62およ
び2.73(2t, 2H, CH2CN), 2.50 (m, 1H, H-C(2″)), 0.8
6-1.19 (m, 12H, 2×C(CH3)2)；31P-NMR (DMSO, 161.7
MHz)：2s 148.54/148.06；C56H58N7O11P1S1 (1068.1
5)；計算値：C 62.97, H 5.47, N 9.18；実測値：C 62.
25, N 5.65, H 8.82
Ｏ6−〔２−（フェニルスルホニル）エチル〕−Ｎ2−フ
タロイル−２′−デオキシグアノシン−３′−Ｏ−（シ
アノエチル−Ｎ,Ｎ−ジイソプロピル）ホスフィトアミ
ド 実施例２と同様の合成：５′−Ｏ−ジメトキシトリチル
−Ｏ6−〔２−（フェニルスルホニル）エチル〕−Ｎ2−
フタロイル−２′−デオキシグアノシン４７０mg（０.
５４ミリモル）をアセトニトリル８mlに溶解し、そして
ビス（Ｎ,Ｎ−ジイソプロピルアミノ）−２−シアノエ
トキシホスファン１９６mg（０.６５ミリモル）および
ピリジニウムクロライドの０.５Ｍ溶液０.５４mlを加え
る。３時間後、さらにホスファン１５０mgおよびピリジ
ニウムクロライド溶液０.２７mlを加え、そして混合物
をさらに３.５時間撹拌する。このものをジクロロメタ
ン５０mlおよび炭酸水素ナトリウム溶液５０mlで抽出す
る。トルエン／酢酸エチル勾配（３３〜５０％ＡｃＯＥ
ｔ）でクロマトグラフィー処理し、白色フォーム４２０
mg（０.３９ミリモル）が得られる。 TLC(シリカゲル)：Rf=0.49/0.60(石油エーテル/AcOEt/
トリエチルアミン 1:9:1)；1H-NMR (DMSO, 250 MHz)：
8.57 (2s, 1H, H-C(8)), 7.98-8.03 (m, 4H, pth), 7.8
1 (m, 2H, 2H o から SO2), 7.31-7.40 (m, 3H, 2H m
から SO2, 1H o から SO2), 7.08-7.25 (m, 9H, DMTr),
6.39-6.73 (m, 4H, DMTr), 6.43 (m, 1H,H-C(1′)),
4.78 (m, 3H, H-C(3′), CH2O), 4.10 (m, 3H, CH2SO2,
H-C(4′)),3.66および3.67 (2s, 6H, 2×OCH3), 3.30-
3.60 (m, 4H, NC-CH2O, 2×N-CH),3.23 (m, 2H, H-C
(5′), H-C(5″)), 3.00 (m, 1H, H-C(2′)), 2.62およ
び2.73(2t, 2H, CH2CN), 2.50 (m, 1H, H-C(2″)), 0.8
6-1.19 (m, 12H, 2×C(CH3)2)；31P-NMR (DMSO, 161.7
MHz)：2s 148.54/148.06；C56H58N7O11P1S1 (1068.1
5)；計算値：C 62.97, H 5.47, N 9.18；実測値：C 62.
25, N 5.65, H 8.82
【００５０】実施例６ ５′−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ6−フタロイル−
３′−Ｏ−スクシノイル−２′−Ｏ−デオキシアデノシ
ン ５′−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ6−フタロイル−
２′−Ｏ−デオキシアデノシン（実施例１.２）３４２m
g（０.５ミリモル）を無水ジクロロメタン１０mlに溶解
し、そして４,４−ジメチルアミノピリジン７９mg（０.
６５ミリモル）および無水コハク酸１００mg（１ミリモ
ル）を加える。１７時間後、混合物をジクロロメタン５
０mlで希釈し、そして炭酸水素ナトリウム飽和溶液３０
ml次いで１０％クエン酸で抽出する。有機相をＭｇＳＯ
4で乾燥した後、ロータリーエバポレーターにかけ、そ
して高真空下に残渣を乾燥すると、白色フォーム３９０
mg（０.４９ミリモル；９８％）が得られる。 TLC(シリカゲル)：Rf=0.17(トルエン/AcOEt/MeOH 5:4:
1)；1H-NMR (DMSO, 250MHz)：12.30 (s, 1H, COOH), 8.
91 (s, 1H, H-C(2)), 8.82 (s, 1H, H-C(8)),8.06 (m,
4H, pth), 7.17 (m, 9H, DMTr), 6.83 (m, 4H, o から
OCH3), 6.56 (t, 1H, H-C(1′)), 5.45 (m, 1H, H-C
(3′)), 4.25 (m, 1H, H-C(4′)), 3.70 (s, 6H, 2×O-
CH3), 3.33 (m, 2H, H-C(5′), H-C(5″)), 2.58 (m, 6
H, H-C(2′), H-C(2″), CH2CH2)；UV (ACN)：λmax (n
m)/logε：〔300/3.60〕, 271/4.17, 〔220/4.72〕；C
43H37N5O10×H2O(801.82)；計算値：C 64.41, H 4.90,
N 8.73；実測値：C 64.47, H 4.98, N 8.74
３′−Ｏ−スクシノイル−２′−Ｏ−デオキシアデノシ
ン ５′−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ6−フタロイル−
２′−Ｏ−デオキシアデノシン（実施例１.２）３４２m
g（０.５ミリモル）を無水ジクロロメタン１０mlに溶解
し、そして４,４−ジメチルアミノピリジン７９mg（０.
６５ミリモル）および無水コハク酸１００mg（１ミリモ
ル）を加える。１７時間後、混合物をジクロロメタン５
０mlで希釈し、そして炭酸水素ナトリウム飽和溶液３０
ml次いで１０％クエン酸で抽出する。有機相をＭｇＳＯ
4で乾燥した後、ロータリーエバポレーターにかけ、そ
して高真空下に残渣を乾燥すると、白色フォーム３９０
mg（０.４９ミリモル；９８％）が得られる。 TLC(シリカゲル)：Rf=0.17(トルエン/AcOEt/MeOH 5:4:
1)；1H-NMR (DMSO, 250MHz)：12.30 (s, 1H, COOH), 8.
91 (s, 1H, H-C(2)), 8.82 (s, 1H, H-C(8)),8.06 (m,
4H, pth), 7.17 (m, 9H, DMTr), 6.83 (m, 4H, o から
OCH3), 6.56 (t, 1H, H-C(1′)), 5.45 (m, 1H, H-C
(3′)), 4.25 (m, 1H, H-C(4′)), 3.70 (s, 6H, 2×O-
CH3), 3.33 (m, 2H, H-C(5′), H-C(5″)), 2.58 (m, 6
H, H-C(2′), H-C(2″), CH2CH2)；UV (ACN)：λmax (n
m)/logε：〔300/3.60〕, 271/4.17, 〔220/4.72〕；C
43H37N5O10×H2O(801.82)；計算値：C 64.41, H 4.90,
N 8.73；実測値：C 64.47, H 4.98, N 8.74
【００５１】実施例７ ５′−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｏ6−〔２−（４−ニ
トロフェニル）エチル〕−Ｎ2−フタロイル−３′−Ｏ
−スクシノイル−２′−Ｏ−デオキシグアノシン ５′−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｏ6−〔２−（４−ニ
トロフェニル）エチル〕−Ｎ2−フタロイル−２′−デ
オキシグアノシン２１２mg（０.２５ミリモル）を無水
ジクロロメタン５mlに溶解し、そして無水コハク酸５０
mg（０.５ミリモル）および４,４−ジメチルアミノピリ
ジン４０mg（０.３２ミリモル）を加える。混合物を２
４時間撹拌した後、これをジクロロメタン６０mlで希釈
し、そしてこの混合物を炭酸水素ナトリウム飽和溶液４
０ml次に１０％クエン酸溶液４０mlで抽出する。有機相
を硫酸マグネシウムで乾燥した後、これをロータリーエ
バポレーターにかけ、そして残渣を高真空下で乾燥す
る。若干黄色味を帯びたフォーム２１０mg（０.２２ミ
リモル；８８％）が得られる。1 H-NMR (DMSO, 250 MHz)：12.27 (s, 1H, COOH), 8.61
(s, 1H, H-C(8)), 8.14 (d, 2H, 2H o から NO2), 7.96
-8.05 (m, 4H, pth), 7.61 (d, 2H, 2H m からNO2), 7.
05-7.27 (m, 9H, DMTr), 6.65-6.71 (m, 4H, o から OC
H3), 6.44 (t,1H, H-C(1′)), 5.36 (m, 1H, H-C
(3′)), 4.82 (t, 2H, OCH2), 4.14 (m, 1H,H-C(4′)),
3.67 (s, 6H, 2×O-CH3), 3.16-3.42 (m, 4H, H-C
(5′), H-C(5″), CH2-フェニル), 2.45-2.60 (m, 6H,
H-C(2′), H-C(2″), CH2CH2)；UV (ACN)：λmax (nm)/
logε：262/4.37, 216/4.78
トロフェニル）エチル〕−Ｎ2−フタロイル−３′−Ｏ
−スクシノイル−２′−Ｏ−デオキシグアノシン ５′−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｏ6−〔２−（４−ニ
トロフェニル）エチル〕−Ｎ2−フタロイル−２′−デ
オキシグアノシン２１２mg（０.２５ミリモル）を無水
ジクロロメタン５mlに溶解し、そして無水コハク酸５０
mg（０.５ミリモル）および４,４−ジメチルアミノピリ
ジン４０mg（０.３２ミリモル）を加える。混合物を２
４時間撹拌した後、これをジクロロメタン６０mlで希釈
し、そしてこの混合物を炭酸水素ナトリウム飽和溶液４
０ml次に１０％クエン酸溶液４０mlで抽出する。有機相
を硫酸マグネシウムで乾燥した後、これをロータリーエ
バポレーターにかけ、そして残渣を高真空下で乾燥す
る。若干黄色味を帯びたフォーム２１０mg（０.２２ミ
リモル；８８％）が得られる。1 H-NMR (DMSO, 250 MHz)：12.27 (s, 1H, COOH), 8.61
(s, 1H, H-C(8)), 8.14 (d, 2H, 2H o から NO2), 7.96
-8.05 (m, 4H, pth), 7.61 (d, 2H, 2H m からNO2), 7.
05-7.27 (m, 9H, DMTr), 6.65-6.71 (m, 4H, o から OC
H3), 6.44 (t,1H, H-C(1′)), 5.36 (m, 1H, H-C
(3′)), 4.82 (t, 2H, OCH2), 4.14 (m, 1H,H-C(4′)),
3.67 (s, 6H, 2×O-CH3), 3.16-3.42 (m, 4H, H-C
(5′), H-C(5″), CH2-フェニル), 2.45-2.60 (m, 6H,
H-C(2′), H-C(2″), CH2CH2)；UV (ACN)：λmax (nm)/
logε：262/4.37, 216/4.78
【００５２】実施例８ ８.１ 長鎖メチルアミノアルキル（ＬＣＭＡＡ）−Ｃ
ＰＧの支持体−誘導体合成 １０００Åもしくは１４００Å ＣＰＧ材料１ｇを高真
空下に１.５時間乾燥する。カルボニルジイミダゾール
１ｇ（１２.４ミリモル）を乾燥ジクロロメタン２０ml
に溶解し、そして乾燥したＣＰＳ支持体材料を加え、そ
して全体を６時間バイブレーターで十分に混和する。上
層の液を傾瀉し、そして乾燥ジクロロメタンによる消化
を３回実施する。この後に、乾燥ジクロロメタン１５ml
にとり、次に１,６−ビス（メチルアミノ）ヘキサン１m
l（５.８ミリモル）を加える。バイブレーター上で３時
間後に、上澄液を傾瀉し、そして次に吸引濾過し、ピリ
ジン、ＤＭＦ、メタノール、アセトンおよびジエチルエ
ーテルで順次洗浄する。次に、高真空下に乾燥する。
ＰＧの支持体−誘導体合成 １０００Åもしくは１４００Å ＣＰＧ材料１ｇを高真
空下に１.５時間乾燥する。カルボニルジイミダゾール
１ｇ（１２.４ミリモル）を乾燥ジクロロメタン２０ml
に溶解し、そして乾燥したＣＰＳ支持体材料を加え、そ
して全体を６時間バイブレーターで十分に混和する。上
層の液を傾瀉し、そして乾燥ジクロロメタンによる消化
を３回実施する。この後に、乾燥ジクロロメタン１５ml
にとり、次に１,６−ビス（メチルアミノ）ヘキサン１m
l（５.８ミリモル）を加える。バイブレーター上で３時
間後に、上澄液を傾瀉し、そして次に吸引濾過し、ピリ
ジン、ＤＭＦ、メタノール、アセトンおよびジエチルエ
ーテルで順次洗浄する。次に、高真空下に乾燥する。
【００５３】８.２ フタロイル保護スクシネートによ
るＬＣＭＡＡ−ＣＰＧのローディングＬＣＭＡＡ−ＣＰ
Ｇの４００mgを乾燥アセトニトリル５ml中で２時間７mg
のＴＯＴＵ（Ｏ−〔（エトキシカルボニル）シアノメチ
レンアミノ〕−Ｎ,Ｎ,Ｎ′,Ｎ′−テトラメチルウロニ
ウムテトラフルオロボレート：W. Koenig, G. Breipoh
l, P. Pokorny, M. Birkner, Proceedings of the 21st
European Peptide Symposium 1990, E. Giralt, D. An
dreu. Eds., ESCOM, Leiden. 143頁)（21μmol）、Ｎ−
メチルモルホリン３μl（２７μmol）およびヌクレオシ
ドスクシネート２３μmolと共に振盪する。吸引濾過
し、フィルター残渣をＤＭＦ、メタノール、アセトンお
よびジエチルエーテルで順次洗浄する。
るＬＣＭＡＡ−ＣＰＧのローディングＬＣＭＡＡ−ＣＰ
Ｇの４００mgを乾燥アセトニトリル５ml中で２時間７mg
のＴＯＴＵ（Ｏ−〔（エトキシカルボニル）シアノメチ
レンアミノ〕−Ｎ,Ｎ,Ｎ′,Ｎ′−テトラメチルウロニ
ウムテトラフルオロボレート：W. Koenig, G. Breipoh
l, P. Pokorny, M. Birkner, Proceedings of the 21st
European Peptide Symposium 1990, E. Giralt, D. An
dreu. Eds., ESCOM, Leiden. 143頁)（21μmol）、Ｎ−
メチルモルホリン３μl（２７μmol）およびヌクレオシ
ドスクシネート２３μmolと共に振盪する。吸引濾過
し、フィルター残渣をＤＭＦ、メタノール、アセトンお
よびジエチルエーテルで順次洗浄する。
【００５４】キャッピング：ヌクレオシドをローディン
グした支持体を０.５時間ＤＭＡＰ １０mg、無水酢酸
０.５mlおよびピリジン１０mlと共に振盪する。次に、
吸引濾過を行い、フィルター残渣をＤＭＦ、メタノー
ル、アセトンおよびジエチルエーテルで順次洗浄する。
５′−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｏ6−〔２−（４−ニ
トロフェニル）エチル〕−Ｎ2−フタロイル−３′−Ｏ
−スクシニル−２′−デオキシグアノシンの場合、Ｎ−
メチルイミダゾール０.５ml、無水酢酸０.５mlおよびピ
リジン５mlからなる混合物を用いてキャッピングを実施
する。次のとおりのローディングが得られる：
グした支持体を０.５時間ＤＭＡＰ １０mg、無水酢酸
０.５mlおよびピリジン１０mlと共に振盪する。次に、
吸引濾過を行い、フィルター残渣をＤＭＦ、メタノー
ル、アセトンおよびジエチルエーテルで順次洗浄する。
５′−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｏ6−〔２−（４−ニ
トロフェニル）エチル〕−Ｎ2−フタロイル−３′−Ｏ
−スクシニル−２′−デオキシグアノシンの場合、Ｎ−
メチルイミダゾール０.５ml、無水酢酸０.５mlおよびピ
リジン５mlからなる混合物を用いてキャッピングを実施
する。次のとおりのローディングが得られる：
【００５５】 支持体 スクシネート ローディング〔μmol／ｇ〕 1000Å dApth 8.9 1400Å dApth 12.5 1400Å dGPpth/npe 10.9
【００５６】８.３ 無水コハク酸によるＬＣＭＡＡ−
ＣＰＧの誘導体合成 １４００Å ＬＣＭＡＡ−ＣＰＧ ５００mgを乾燥ピリジ
ン４ml中で２４時間ＤＭＡＰ １２mg（０.１ミリモル）
および無水コハク酸４００mgと共に振盪する。吸引濾過
を行い、フィルター残渣をピリジンおよびジクロロメタ
ンで洗浄する。フタロイルで保護された５′−Ｏ−ＤＭ
Ｔｒ−ヌクレオシドによるスクシニル−ＬＣＭＡＡ−Ｃ
ＰＧのローディング 乾燥ピリジン３mlおよびトリエチルアミン１２μlを、
スクシニル化ＬＣＭＡＡ−ＣＰＧ １５０mg、ＤＭＡＰ
１.８mg（０.０１５ミリモル）、１−（３−ジメチルア
ミノプロピル）エチルカルボジイミド２９mg（０.１５
ミリモル）および５′−Ｏ−ＤＭＴｒ保護されたフタロ
イル化合物０.０１５ミリモルに加える。混合物を２４
時間振盪し、次にペンタクロロフェノール２０mg（０.
０７ミリモル）を加え、そして全体をさらに２３時間振
盪する。次に、ピペリジン０.７５mlを加え、そして５
分後直ちに吸引濾過し、そしてフィルター残渣をジクロ
ロメタンおよびジエチルエーテルで引き続いて洗浄す
る。
ＣＰＧの誘導体合成 １４００Å ＬＣＭＡＡ−ＣＰＧ ５００mgを乾燥ピリジ
ン４ml中で２４時間ＤＭＡＰ １２mg（０.１ミリモル）
および無水コハク酸４００mgと共に振盪する。吸引濾過
を行い、フィルター残渣をピリジンおよびジクロロメタ
ンで洗浄する。フタロイルで保護された５′−Ｏ−ＤＭ
Ｔｒ−ヌクレオシドによるスクシニル−ＬＣＭＡＡ−Ｃ
ＰＧのローディング 乾燥ピリジン３mlおよびトリエチルアミン１２μlを、
スクシニル化ＬＣＭＡＡ−ＣＰＧ １５０mg、ＤＭＡＰ
１.８mg（０.０１５ミリモル）、１−（３−ジメチルア
ミノプロピル）エチルカルボジイミド２９mg（０.１５
ミリモル）および５′−Ｏ−ＤＭＴｒ保護されたフタロ
イル化合物０.０１５ミリモルに加える。混合物を２４
時間振盪し、次にペンタクロロフェノール２０mg（０.
０７ミリモル）を加え、そして全体をさらに２３時間振
盪する。次に、ピペリジン０.７５mlを加え、そして５
分後直ちに吸引濾過し、そしてフィルター残渣をジクロ
ロメタンおよびジエチルエーテルで引き続いて洗浄す
る。
【００５７】キャッピング：ヌクレオシドをローディン
グした支持体を、Ｎ−メチルイミダゾール０.５ml無水
酢酸０.５mlおよびピリジン５mlからなる混合物と共
に、１.５時間振盪し、次いでＤＭＦ、メタノール、ア
セトンおよびジエチルエーテルで洗浄する。次のとおり
のローディングが得られる： 支持体 ５′−Ｏ−ＤＭＴｒ−ヌクレオチド ローディング〔μmol／ｇ〕 1400Å dCpth 2.2 1400Å dGpth/npe 3
グした支持体を、Ｎ−メチルイミダゾール０.５ml無水
酢酸０.５mlおよびピリジン５mlからなる混合物と共
に、１.５時間振盪し、次いでＤＭＦ、メタノール、ア
セトンおよびジエチルエーテルで洗浄する。次のとおり
のローディングが得られる： 支持体 ５′−Ｏ−ＤＭＴｒ−ヌクレオチド ローディング〔μmol／ｇ〕 1400Å dCpth 2.2 1400Å dGpth/npe 3
【００５８】実施例９ オリゴヌクレオチド合成 未修飾オリゴヌクレオチドを標準ホスホルアミダイト合
成サイクルを用いて自動ＤＮＡ合成装置（Applied Bios
ystems Model 392）で合成した。フタロイル方法によ
り、含水酸化混合物ヨウ素／ピリジン／ＴＨＦ／水もし
くはアセトニトリル中でｔ−ブチルヒドロペルオキシド
を使用する無水の酸化の使用が可能となる。酸化時間は
ヨウ素については１５秒またｔ−ブチルヒドロペルオキ
シドについては９０秒である。合成サイクルが完了した
後、保護基を除去し、一方オリゴヌクレオチドは１５分
乃至１２時間の間、ｎ−メチルイミダゾールもしくはア
セトニトリル中ＤＢＵ（下記を参照）（ＤＢＵ：１,８
−ジアザビシクロ〔６.４.０〕ウンデカ−７−エン）と
共に、なお支持体上に存在している。すべての保護基が
除去されたオリゴヌクレオチドは次に濃アンモニア水
（２５％）による処理によって支持体から遊離される。
ここで、オリゴヌクレオチドはアンモニア溶液中に極め
て純粋な形態で存在し、そしてアンモニア溶液を凍結乾
燥することによって得られる。フタロイル方法では、ア
シル方法とは対照的に、保護基を除去するためのＨＰＬ
ＣもしくはＰＡＧＥによる付加的な精製を必要としな
い。
成サイクルを用いて自動ＤＮＡ合成装置（Applied Bios
ystems Model 392）で合成した。フタロイル方法によ
り、含水酸化混合物ヨウ素／ピリジン／ＴＨＦ／水もし
くはアセトニトリル中でｔ−ブチルヒドロペルオキシド
を使用する無水の酸化の使用が可能となる。酸化時間は
ヨウ素については１５秒またｔ−ブチルヒドロペルオキ
シドについては９０秒である。合成サイクルが完了した
後、保護基を除去し、一方オリゴヌクレオチドは１５分
乃至１２時間の間、ｎ−メチルイミダゾールもしくはア
セトニトリル中ＤＢＵ（下記を参照）（ＤＢＵ：１,８
−ジアザビシクロ〔６.４.０〕ウンデカ−７−エン）と
共に、なお支持体上に存在している。すべての保護基が
除去されたオリゴヌクレオチドは次に濃アンモニア水
（２５％）による処理によって支持体から遊離される。
ここで、オリゴヌクレオチドはアンモニア溶液中に極め
て純粋な形態で存在し、そしてアンモニア溶液を凍結乾
燥することによって得られる。フタロイル方法では、ア
シル方法とは対照的に、保護基を除去するためのＨＰＬ
ＣもしくはＰＡＧＥによる付加的な精製を必要としな
い。
【００５９】実施例１〜５に記載のホスホルアミダイト
および実施例８に記載の誘導化固体支持体を用いて、次
のとおりの配列が合成された。個々の配列において、保
護基を除去するために記載した条件を変えて好結果を得
た。
および実施例８に記載の誘導化固体支持体を用いて、次
のとおりの配列が合成された。個々の配列において、保
護基を除去するために記載した条件を変えて好結果を得
た。
【表１】
【００６０】実施例１〜５に記載のホスホルアミダイト
および実施例８に記載の固体支持体を用いて、次のとお
りの配列を合成した。この場合、アセトニトリル中０.
５Ｍピリジン塩酸塩の溶液をテトラゾールに代わって賦
活物質として使用し、縮合時間は１２〜３０秒であっ
た。個々の配列において、保護基を除去するために記載
した条件を変えて好結果を得た。
および実施例８に記載の固体支持体を用いて、次のとお
りの配列を合成した。この場合、アセトニトリル中０.
５Ｍピリジン塩酸塩の溶液をテトラゾールに代わって賦
活物質として使用し、縮合時間は１２〜３０秒であっ
た。個々の配列において、保護基を除去するために記載
した条件を変えて好結果を得た。
【００６１】
【表２】
【００６２】オリゴヌクレオチドの高純度（＞９５％）
はＨＰＬＣで確認した。 ＨＰＬＣ：勾配： （逆相；ＲＰ１８）；流速１ml／分 溶液Ａ：０.１Ｎ ＴＥＡＡｃ pH７ 溶液Ｂ：０.１Ｎ ＴＥＡＡｃ：ＡｃＣＮ １：１工程 分 容量％ 容量％ １ ０ ９５ ５ ２ ２ ９５ ５ ３ ３２ ６０ ４０ ４ ４５ ０ １００ ５ ５０ ９５ ５ ６ ５５ ９５ ５
はＨＰＬＣで確認した。 ＨＰＬＣ：勾配： （逆相；ＲＰ１８）；流速１ml／分 溶液Ａ：０.１Ｎ ＴＥＡＡｃ pH７ 溶液Ｂ：０.１Ｎ ＴＥＡＡｃ：ＡｃＣＮ １：１工程 分 容量％ 容量％ １ ０ ９５ ５ ２ ２ ９５ ５ ３ ３２ ６０ ４０ ４ ４５ ０ １００ ５ ５０ ９５ ５ ６ ５５ ９５ ５
Claims (12)
- 【請求項１】 ａ) 既知の方法に従って固体支持体上
で、核酸塩基上に存在する環外アミノ基が環状ジアシル
基で保護されており、かつ非求核性強塩基により存在し
ているいずれのホスフェート保護基も除去することが可
能であるヌクレオチドを連続的に合成し、 ｂ) 固体支持体に結合しているオリゴヌクレオチドから
保護基を除去し、そして ｃ) 保護基を除去したオリゴヌクレオチドを固体支持体
から分離することによって固相合成でオリゴヌクレオチ
ドを製造する方法において、固体支持体に結合している
オリゴヌクレオチドから適当な有機溶媒中で非求核性強
塩基の存在下に保護基を除去することを特徴とする上記
の製法。 - 【請求項２】 固体支持体に結合しているオリゴヌクレ
オチドから０〜７０℃で０.１〜１６時間ＤＢＵの０.１
〜５Ｍ溶液で保護基を除去する請求項１記載の方法。 - 【請求項３】 固体支持体に結合しているオリゴヌクレ
オチドから１０〜４０℃で０.１〜２時間ＤＢＵの０.３
〜３Ｍ溶液で保護基を除去する請求項１または２記載の
方法。 - 【請求項４】 固体支持体に結合しているオリゴヌクレ
オチドから２０〜３０℃で０.２〜１.５時間ＤＢＵの
０.５〜２.５Ｍ溶液で保護基を除去する請求項１〜３の
いずれかに記載の方法。 - 【請求項５】 式(Ｉ) 【化１】 〔式中、 Ｒ1は互いに独立して、水素、ヒドロキシル、ヒドロキ
シもしくはＣ1〜Ｃ4−アルコキシで１〜３回置換されて
いてもよいＣ1〜Ｃ18−アルコキシ、Ｃ1〜Ｃ4−アルキ
ル−Ｏ−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ)s（ｓは１〜３の数である）、
Ｏ−アリル、ハロゲン、アジドまたはアミノであり；Ａ
は互いに独立してオキシ、チオキシまたはメチレンであ
り；Ｗは互いに独立してオキソ、チオキソまたはセレン
オキソであり；Ｖは互いに独立してオキシ、スルファン
ジイルまたはイミノであり；Ｙは互いに独立してオキ
シ、スルファンジイル、イミノまたはメチレンであり；
Ｂはヌクレオチド化学で通常の塩基であって、その少な
くとも１個は環外アミノ基を有する塩基であり；ｎは１
〜１００の整数であり；Ｕは互いに独立してヒドロキシ
ル、メルカプト、ＢＨ3、ＳｅＨ、Ｃ1〜Ｃ18−アルコキ
シ好ましくはＣ1〜Ｃ6−アルコキシ、Ｃ1〜Ｃ18−アル
キル好ましくはＣ1〜Ｃ6−アルキル、Ｃ6〜Ｃ20−アリ
ール、(Ｃ6〜Ｃ14)−アリール−（Ｃ1〜Ｃ8）アルキ
ル、ＮＨＲ3、ＮＲ3Ｒ4または式(II) (ＯＣＨ2ＣＨ2)pＯ(ＣＨ2)qＣＨ2Ｒ2 (II) の基であり、 ここで、 Ｒ3はＣ1〜Ｃ18−アルキル、好ましくはＣ1〜Ｃ8−アル
キル、Ｃ6〜Ｃ20−アリール、(Ｃ6〜Ｃ14）−アリール
−（Ｃ1〜Ｃ8）−アルキル、または−(ＣＨ2)c−〔ＮＨ
(ＣＨ2)c〕d−ＮＲ5Ｒ5（ｃは２〜６の整数であり、そ
してｄは０〜６の整数である）であり；Ｒ5は互いに独
立して水素、Ｃ1〜Ｃ6−アルキルまたはＣ1〜Ｃ4−アル
コキシ−Ｃ1〜Ｃ6−アルキル好ましくはメトキシエチル
であり；Ｒ4はＣ1〜Ｃ18−アルキル、好ましくはＣ1〜
Ｃ8−アルキルそして特に好ましくはＣ1〜Ｃ4−アルキ
ル、Ｃ6〜Ｃ20−アリールまたは（Ｃ6〜Ｃ10）−アリー
ル−（Ｃ1〜Ｃ8）−アルキルであるか、または、ＮＲ3
Ｒ4の場合、Ｒ3およびそれらを担有している窒素原子と
共に、Ｏ、ＳおよびＮの群からのそれ以上のヘテロ原子
をさらに含有していてもよい５〜６員環複素環式基であ
り；ｐは１〜１００、好ましくは３〜１０の整数であ
り；ｑは０〜２２、好ましくは０〜１５の整数であり；
Ｒ2は水素もしくは官能基例えばヒドロキシル、アミ
ノ、ＮＨＲ6、ＣＯＯＨ、ＣＯＮＨ2、ＣＯＯＲ7または
ハロゲンであり、 ここで、 Ｒ6はＣ1〜Ｃ4−アルキルであり、そしてＲ7はＣ1〜Ｃ4
−アルキル、好ましくはメチルであり；ＱおよびＱ′は
互いに独立して水素もしくは結合体（アンチセンスオリ
ゴヌクレオチドもしくは三重らせん形成性オリゴヌクレ
オチドの性質に対して好ましい効果を有するか、または
ＤＮＡプローブのための標識として使用されるか、また
は、標的核酸と類似のオリゴヌクレオチドのハイブリッ
ド形成に関連して、結合または架橋中に標的核酸をアタ
ックするような結合体）であり；そして、 Ｒ1および隣接するホスホリル基は２′および３′−位
または反転して３′および２′−位に位置していてもよ
く；各々のヌクレオチドはそのＤまたはＬ配置で存在し
ていてもよく；塩基Ｂはαまたはβ−位に位置していて
もよく、またオリゴヌクレオチドが３′−３′−または
５′−５′反転を含有することもできる〕を有する化合
物を製造するために、 (ａ) 式(III) 【化２】 （式中、Ａ、ＹおよびＶは先の定義のとおりであり、そ
してＲ1′はＲ1の定義のとおりであるが、Ｒ1がヒドロ
キシルもしくはアミノである場合Ｒ1′は相当する保護
された基であり、 Ｓは酸の条件下で除去することができる５′保護基であ
り；ＢPRは、存在することがあり得るいずれかの環外ア
ミノ基は環状ジアシル基で保護されている天然または非
天然の核酸塩基である）を有する化合物を、既知の方法
に従って、式(IV) 【化３】 （式中、 Ｚ′はＯＲ13またはＣ1〜Ｃ18−アルキル、Ｃ1〜Ｃ18−
アルコキシ、Ｃ6〜Ｃ2 0−アリール、Ｃ6〜Ｃ14−アリー
ル−Ｃ1〜Ｃ8−アルキル、好ましくはＯＲ13、Ｃ1〜Ｃ6
−アルキル、Ｃ1〜Ｃ6−アルコキシ、Ｃ6〜Ｃ20−アリ
ール、またはＣ6〜Ｃ14−アリール−Ｃ1〜Ｃ8−アルキ
ル、特に好ましくはＯＲ13であり；Ｒ11およびＲ12は同
一または異なって、Ｃ1〜Ｃ8−アルキル、好ましくはイ
ソプロピル、またはＣ5〜Ｃ12−シクロアルキル、好ま
しくはＣ8以下のシクロアルキル、ベンジルまたはフェ
ニルまたは、それらが結合している窒素原子と一緒にな
って、飽和または不飽和の、モルホリンのような適宜追
加のヘテロ原子を有する複素環および置換分ＯＣ(Ｏ)Ｏ
−Ｃ1〜Ｃ4−アルキルエステルのような置換分を有する
前記複素環であり；そしてＲ13は非求核性強塩基で除去
することができる保護基であり、 Ｚは塩素もしくは臭素または式ＮＲ11Ｒ12（式中Ｒ11お
よびＲ12は先の定義のとおりである）を有する基であ
る）を有する化合物と、塩基、好ましくはピリジンある
いはテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、ジオキサン、ジク
ロロメタン（ＤＣＭ）、クロロホルムおよび（または）
アセトニトリルとＣ1〜Ｃ4−トリアルキルアミン、好ま
しくはトリメチルアミン、トリエチルアミンまたはジイ
ソプロピルエチルアミンとの混合物の存在下、または、
Ｚが式ＮＲ11Ｒ12の基である場合、式 〔ＨＮＲ14Ｒ15Ｒ16〕(+)Ａ(-) （式中、Ｒ14、Ｒ15およびＲ16は同一または異なって、
Ｃ1〜Ｃ4−アルキル基であり、そしてＡはフッ素、塩素
または臭素、特に塩素である）を有する化合物またはテ
トラゾールまたは５−（Ｃ1〜Ｃ4−アルキルチオ）−１
Ｈ−テトラゾールの存在下、好ましくはテトラゾールま
たはピリジン塩酸塩の存在下に反応させて式(Ｖ) 【化４】 （式中、Ｓ、Ｖ、Ｙ、Ａ、ＢPR、Ｚ′、Ｒ1′、Ｒ11お
よびＲ12は先の定義のとおりである）を有する化合物を
形成させ； (ｂ) 式(III)の化合物を、既知の方法に従って、適当
な溶媒中で、適宜触媒を加えた後、１〜１０当量好まし
くは１〜２当量のリンカーと反応させ、次いで既知の方
法に従って後処理して式(VI) 【化５】 （式中、Ｓ、Ｖ、Ｙ、Ａ、ＢPRおよびＲ1は先の定義の
とおりである）を有し、合成で使用される重合体支持体
に対するリンカーとして役立つ３′位でのコハク酸残基
を有する化合物を形成させ； (ｃ) 式(VI)の化合物を、既知の方法に従って適当な溶
媒中で反応させることにより、固体支持体ＳＳに結合さ
せると式(VII) 【化６】 を有する化合物が得られ； (ｄ) 既知の方法に従って、式(VII)から５′保護基を
除去し； (ｅ) 得られた化合物を適当な有機溶媒好ましくはアセ
トニトリル中、式 〔ＨＮＲ14Ｒ15Ｒ16〕(+)Ａ(-) （この式は先に定義したとおりである）を有する化合
物、またはテトラゾール、５−（Ｃ1〜Ｃ4−アルキルチ
オ）−１Ｈ−テトラゾールまたは５−（Ｃ6〜Ｃ1 2−ア
リール）−１Ｈ−テトラゾールの存在下、好ましくはテ
トラゾールまたはピリジン塩酸塩の存在下に式(Ｖ)の化
合物と反応させそして (ｆ) 得られた化合物を、既知の方法に従って、適宜追
加の有機溶媒の存在下に酸化し、 (ｇ) 反応工程(ｄ)〜(ｆ)を所望の連鎖の長さが得られ
るまでくり返して行い； (ｈ) このようよにして得られた化合物を適当な有機溶
媒中でＤＢＵで処理することによって保護基を除去し；
そして (ｉ) 既知の方法によって、オリゴヌクレオチドを支持
体から分離する請求項１〜４のいずれか記載の方法。 - 【請求項６】 工程(ｄ)からの未反応化合物をキャッピ
ング工程によって非活性化する請求項５記載の方法。 - 【請求項７】 式(III)、(Ｖ)、(VI)および(VII)を有す
る化合物において、ＢPRが互いに独立して 【化７】 （式中、 ｍは０〜４、好ましくは０の整数であり、そしてＲ8は
互いに独立して水素、フッ素、塩素、臭素、ニトロ、Ｃ
1〜Ｃ4−アルキル、Ｃ1〜Ｃ4−アルコキシ、ＣＮであ
り、 Ｒ9は互いに独立して水素、Ｃ1〜Ｃ6−アルキル、Ｃ2〜
Ｃ6−(１−アルキン)、好ましくは１−プロピニルおよび
１−ヘキシニルまたはフッ素であり、そしてＲ10は互い
に独立して水素またはβ−除去可能な保護基である）で
ある請求項５もしくは６のいずれかに記載の方法。 - 【請求項８】 Ｒ1が水素、ヒドロキシル、Ｃ1〜Ｃ4−
アルコキシもしくはフッ素であり；Ａがオキシであり；
Ｗがオキソまたはチオキソであり；Ｖがオキシであり；
Ｙがオキシであり；Ｂが互いに独立してアデニン、シト
シン、グアニン、ウラシル、チミン、５−プロピンウラ
シル、５−プロピンシトシン、５−ヘキシンウラシルま
たは５−ヘキシンシトシンであり、 ｎが５〜４０の整数であり；Ｕがヒドロキシル、メルカ
プト、Ｃ1〜Ｃ6−アルコキシ、Ｃ1〜Ｃ6−アルキル、Ｎ
Ｒ3Ｒ4またはＮＨＲ3であり、ここでＲ3はＣ1〜Ｃ8−ア
ルキルもしくはメトキシエチルであり、 Ｒ4はＣ1〜Ｃ8−アルキル、Ｃ6〜Ｃ20−アリールまたは
（Ｃ6〜Ｃ10）−アリール−（Ｃ1〜Ｃ8）−アルキルで
あり、または、ＮＲ3Ｒ4の場合、Ｒ3およびこれらを担
有する窒素原子と共に、Ｏ、ＳおよびＮの群からのそれ
以上のヘテロ原子をさらに含有する５〜６員環複素環で
あり、 ＱおよびＱ′は互いに独立して水素である式(Ｉ)の化合
物を製造するための請求項５〜７のいずれかに記載の方
法。 - 【請求項９】 Ｒ1が水素であり、 ｎが５〜３０の整数であり、 ＵがヒドロキシルまたはＣ1〜Ｃ6−アルキルであり、 ＱおよびＱ′が水素であり、そして残りの可変部分が請
求項７に定義したとおりである請求項８記載の方法。 - 【請求項１０】 式(Ｖ) 【化８】 （式中、 Ｒ1′は互いに独立して水素、Ｃ1〜Ｃ18−アルコキシ
（適宜ヒドロキシルまたはＣ1〜Ｃ4−アルコキシで１〜
３回置換されていてもよい）、Ｃ1〜Ｃ4−アルキル−Ｏ
−(ＣＨ2ＣＨ2Ｏ)1-3、Ｏ−アリル、フッ素、塩素、ア
ジドまたは保護されたヒドロキシル基またはアミノ基で
あり；Ａはオキシ、チオキシまたはメチレンであり；Ｖ
はオキシ、スルファンジイル、イミノまたはメチレンで
あり；Ｓは酸の条件下で除去することができる５′保護
基であり；ＢPRは環外アミノ基を有し、而して該アミノ
基が環状ジアシル基で保護されている天然または非天然
核酸塩基であり；Ｚ′はＯＲ13、Ｃ1〜Ｃ18−アルキ
ル、Ｃ1〜Ｃ18−アルコキシ、Ｃ6〜Ｃ20−アリールもし
くはＣ6〜Ｃ14−アリール−Ｃ1〜Ｃ8−アルキルであ
り；Ｒ11およびＲ12は同一または異なって、Ｃ1〜Ｃ8−
アルキル、好ましくはイソプロピルまたはＣ5〜Ｃ12−
シクロアルキル、好ましくはＣ8以下のシクロアルキ
ル、ベンジルまたはフェニルであるか、または、それら
が結合している窒素原子と共に、飽和または不飽和の、
モルホリンのような適宜追加のヘテロ原子を有する複素
環およびＯＣ(Ｏ)Ｏ−Ｃ1〜Ｃ4−アルキルエステルのよ
うな置換分を有する複素環であり；そしてＲ13はｐ−ニ
トロフェニルエチルまたは２−シアノエチルである）を
有する化合物。 - 【請求項１１】 ＢPRが、 【化９】 （ここで、 ｍは０〜４、好ましくは０の整数であり；そしてＲ8は
互いに独立して水素、フッ素、塩素、臭素、ニトロ、Ｃ
1〜Ｃ4−アルキル、Ｃ1〜Ｃ4−アルコキシまたはＣＮで
あり、 そしてＲ9およびＲ10は請求項７で定義したとおりであ
る）である請求項１０記載の式(Ｖ)の化合物。 - 【請求項１２】 Ｒ1′は水素、保護されたヒドロキシ
ル基、Ｃ1〜Ｃ4−アルコキシまたはフッ素であり；Ａは
オキシであり；Ｖはオキシであり；Ｙはオキシであり；
Ｚ′はＯＲ13、Ｃ1〜Ｃ6−アルキル、Ｃ1〜Ｃ6−アルコ
キシ、Ｃ6〜Ｃ20−アリールまたはＣ6〜Ｃ14−アリール
−Ｃ1〜Ｃ8−アルキル、好ましくはＯＲ13である請求項
１０または１１記載の式(Ｖ)の化合物。
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Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002536381A (ja) * | 1999-02-05 | 2002-10-29 | アマーシャム・ファルマシア・バイオテック・インコーポレーテッド | オリゴヌクレオチドを脱保護するための方法 |
| WO2006025154A1 (ja) * | 2004-08-30 | 2006-03-09 | Gifu University | 修飾オリゴヌクレオチド |
| JP2011521901A (ja) * | 2008-04-24 | 2011-07-28 | ギリンダス・アメリカ・インコーポレイテッド | オリゴヌクレオチドの製造方法 |
| JP2016533391A (ja) * | 2013-09-30 | 2016-10-27 | ジェロン・コーポレーションＧｅｒｏｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ | オリゴヌクレオチドについてのホスホロジアミデート骨格結合 |
| JP2021511354A (ja) * | 2018-01-24 | 2021-05-06 | エスティー ファーム カンパニー リミテッド | 新規なヌクレオシドまたはヌクレオチド誘導体およびこれらの用途 |
Families Citing this family (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6274725B1 (en) * | 1998-06-02 | 2001-08-14 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Activators for oligonucleotide synthesis |
| JP2002520008A (ja) | 1998-07-09 | 2002-07-09 | バイオセプト インコーポレイテッド | Ｄｎａ配列ハイブリッド形成を最適化するための改良されたペプチド核酸汎用ライブラリーの使用法 |
| DE19842164B4 (de) | 1998-09-15 | 2004-06-03 | Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts | Verfahren zur Qualitätskontrolle beim Aufbau von Oligomerrastern |
| US6175001B1 (en) * | 1998-10-16 | 2001-01-16 | The Scripps Research Institute | Functionalized pyrimidine nucleosides and nucleotides and DNA's incorporating same |
| US6465628B1 (en) * | 1999-02-04 | 2002-10-15 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Process for the synthesis of oligomeric compounds |
| US6664388B2 (en) | 2001-03-08 | 2003-12-16 | Applera Corporation | Reagents for oligonucleotide cleavage and deprotection |
| DE102006016473A1 (de) * | 2005-12-08 | 2007-06-14 | Continental Teves Ag & Co. Ohg | Druckregelventil |
| WO2017066782A1 (en) * | 2015-10-16 | 2017-04-20 | Modernatx, Inc. | Hydrophobic mrna cap analogs |
| US11866754B2 (en) | 2015-10-16 | 2024-01-09 | Modernatx, Inc. | Trinucleotide mRNA cap analogs |
| DK3362461T3 (da) | 2015-10-16 | 2022-05-09 | Modernatx Inc | Mrna-cap-analoger med modificeret phosphatbinding |
| JP2019532027A (ja) | 2016-08-17 | 2019-11-07 | ソルスティス バイオロジクス，リミティッド | ポリヌクレオチド構築物 |
| EP3645546A4 (en) | 2017-06-30 | 2021-12-01 | Solstice Biologics, Ltd. | CHIRAL PHOSPHORAMIDITIS AUXILIARIES AND THEIR METHODS OF USE |
| CN117362370B (zh) * | 2023-12-07 | 2024-03-05 | 北京百力格生物科技有限公司 | 核苷亚磷酰胺单体及其制备方法和应用 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NZ245720A (en) * | 1992-01-22 | 1995-12-21 | Hoechst Ag | Oligonucleotide analogues; use as gene expression inhibitor or dna probe |
| US5623068A (en) * | 1994-03-07 | 1997-04-22 | Beckman Instruments, Inc. | Synthesis of DNA using substituted phenylacetyl-protected nucleotides |
-
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Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002536381A (ja) * | 1999-02-05 | 2002-10-29 | アマーシャム・ファルマシア・バイオテック・インコーポレーテッド | オリゴヌクレオチドを脱保護するための方法 |
| JP4705716B2 (ja) * | 1999-02-05 | 2011-06-22 | ジーイー・ヘルスケア・バイオサイエンス・コーポレイション | オリゴヌクレオチドの脱保護法 |
| WO2006025154A1 (ja) * | 2004-08-30 | 2006-03-09 | Gifu University | 修飾オリゴヌクレオチド |
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