JPH1066595A - アルコール性化合物の配糖体の製造方法 - Google Patents
アルコール性化合物の配糖体の製造方法Info
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- JPH1066595A JPH1066595A JP22482696A JP22482696A JPH1066595A JP H1066595 A JPH1066595 A JP H1066595A JP 22482696 A JP22482696 A JP 22482696A JP 22482696 A JP22482696 A JP 22482696A JP H1066595 A JPH1066595 A JP H1066595A
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- Japan
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- glycoside
- alcoholic compound
- water
- galactosidase
- alcoholic
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 アルコール性化合物の配糖体を簡便な操作
で、安価に、かつ容易に製造することができるアルコー
ル性化合物の配糖体の製造方法を提供する。 【解決手段】 ラクトースと、β−ガラクトシダーゼ又
はβ−ガラクトシダーゼを含有する菌体とを含む水溶液
に、水と混和しないアルコール性化合物を添加してアル
コール性化合物の配糖体を製造するに際し、水と混和し
ないアルコール性化合物を水に対する飽和濃度以上とな
るように添加して２層系で配糖化反応を行うことを特徴
とするアルコール性化合物の配糖体の製造方法。
で、安価に、かつ容易に製造することができるアルコー
ル性化合物の配糖体の製造方法を提供する。 【解決手段】 ラクトースと、β−ガラクトシダーゼ又
はβ−ガラクトシダーゼを含有する菌体とを含む水溶液
に、水と混和しないアルコール性化合物を添加してアル
コール性化合物の配糖体を製造するに際し、水と混和し
ないアルコール性化合物を水に対する飽和濃度以上とな
るように添加して２層系で配糖化反応を行うことを特徴
とするアルコール性化合物の配糖体の製造方法。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、生産効率に優れた
アルコール性化合物の配糖体の製造方法に関するもので
ある。
アルコール性化合物の配糖体の製造方法に関するもので
ある。
【０００２】
【従来の技術】配糖体は動植物界に広く存在し、これら
の中には種々の生理活性を有するものも知られている。
油性のアルコール性化合物は、糖とＯ−グリコシル化し
て配糖体の形態になると、不揮発性となり安定化し、さ
らに疎水性化合物が親水化される等、物理・化学的な性
質が大きく変化する。このため、油性のアルコール性化
合物の配糖体を種々に応用することが提案されている。
このようなアルコール性化合物の配糖体は、従来、化学
的手法及び酵素的手法により合成されてきた。化学的手
法としては、例えば、糖のアセタート誘導体とアルコー
ル類を酸触媒の存在下でグリコシル化させる反応を用い
た方法やKoenigs-Knorr 反応を用いた方法が報告されて
いる〔油化学,43,31(1994)〕。また、酵素的手法として
は、シクロマルトデキストリングルカノトランスフェラ
ーゼやβ−ガラクトシダーゼを用いて各種アルコール性
化合物の配糖体を合成できることが報告されている〔バ
イオテクノロジーレターズ,13,863(1991) 〕。
の中には種々の生理活性を有するものも知られている。
油性のアルコール性化合物は、糖とＯ−グリコシル化し
て配糖体の形態になると、不揮発性となり安定化し、さ
らに疎水性化合物が親水化される等、物理・化学的な性
質が大きく変化する。このため、油性のアルコール性化
合物の配糖体を種々に応用することが提案されている。
このようなアルコール性化合物の配糖体は、従来、化学
的手法及び酵素的手法により合成されてきた。化学的手
法としては、例えば、糖のアセタート誘導体とアルコー
ル類を酸触媒の存在下でグリコシル化させる反応を用い
た方法やKoenigs-Knorr 反応を用いた方法が報告されて
いる〔油化学,43,31(1994)〕。また、酵素的手法として
は、シクロマルトデキストリングルカノトランスフェラ
ーゼやβ−ガラクトシダーゼを用いて各種アルコール性
化合物の配糖体を合成できることが報告されている〔バ
イオテクノロジーレターズ,13,863(1991) 〕。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】しかし、これらのう
ち、化学的手法は工程数が多く、高価な糖供与体を使用
するためにコスト高になる等の問題があり、また、酵素
的手法では、特に高価な試薬は必要とはしないものの、
生成物である配糖体は水溶液中に溶解しているため、カ
ラム操作等の繁雑な操作により精製しなければならず、
このため、配糖体を工業的に製造するのは難しいという
問題があった。本発明は、アルコール性化合物の配糖体
を、安価に、かつ容易に製造することができ、さらに、
カラム操作等の繁雑な精製操作を必要としないアルコー
ル性化合物の配糖体の製造方法を提供することを目的と
するものである。
ち、化学的手法は工程数が多く、高価な糖供与体を使用
するためにコスト高になる等の問題があり、また、酵素
的手法では、特に高価な試薬は必要とはしないものの、
生成物である配糖体は水溶液中に溶解しているため、カ
ラム操作等の繁雑な操作により精製しなければならず、
このため、配糖体を工業的に製造するのは難しいという
問題があった。本発明は、アルコール性化合物の配糖体
を、安価に、かつ容易に製造することができ、さらに、
カラム操作等の繁雑な精製操作を必要としないアルコー
ル性化合物の配糖体の製造方法を提供することを目的と
するものである。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、前記の課
題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、ラクトース
と、β−ガラクトシダーゼ又はこの酵素を含有する菌体
とを含む水溶液に水と混和しないアルコール性化合物を
水に対する飽和濃度以上となるように添加して２層系で
配糖化反応を行うと、生成した配糖体はアルコール層へ
優先的に分配するため、後の精製操作が容易になるとい
うことを見出し、本発明を完成するに至った。すなわ
ち、本発明は、ラクトースと、β−ガラクトシダーゼ又
はβ−ガラクトシダーゼを含有する菌体とを含む水溶液
に、水と混和しないアルコール性化合物を添加してアル
コール性化合物の配糖体を製造するに際し、水と混和し
ないアルコール性化合物を水に対する飽和濃度以上とな
るように添加して２層系で配糖化反応を行うことを特徴
とするアルコール性化合物の配糖体の製造方法を要旨と
するものである。
題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、ラクトース
と、β−ガラクトシダーゼ又はこの酵素を含有する菌体
とを含む水溶液に水と混和しないアルコール性化合物を
水に対する飽和濃度以上となるように添加して２層系で
配糖化反応を行うと、生成した配糖体はアルコール層へ
優先的に分配するため、後の精製操作が容易になるとい
うことを見出し、本発明を完成するに至った。すなわ
ち、本発明は、ラクトースと、β−ガラクトシダーゼ又
はβ−ガラクトシダーゼを含有する菌体とを含む水溶液
に、水と混和しないアルコール性化合物を添加してアル
コール性化合物の配糖体を製造するに際し、水と混和し
ないアルコール性化合物を水に対する飽和濃度以上とな
るように添加して２層系で配糖化反応を行うことを特徴
とするアルコール性化合物の配糖体の製造方法を要旨と
するものである。
【０００５】
【発明の実施の形態】以下、本発明を詳細に説明する。
本発明でいう水と混和しないアルコール性化合物とは、
水への溶解性が２０重量％以下の疎水性アルコール性化
合物をいい、このような化合物としては、例えば、ゲラ
ニオール、シトロネロール、ネロール、シス−３−ヘキ
セノール、１−ヘキサノール、１−オクタノール等の脂
肪族アルコール類、メントール、サンタロール等の脂環
族アルコール類、アニスアルコール、ベンジルアルコー
ル、フェネチルアルコール、シンナミルアルコール等の
芳香族アルコール類等が挙げられる。これらのアルコー
ル性化合物のうち、常温で固体のものは、加熱するなど
して溶解して使用すればよい。また、これらのアルコー
ル性化合物は減圧蒸留によって容易に回収・再利用され
る。
本発明でいう水と混和しないアルコール性化合物とは、
水への溶解性が２０重量％以下の疎水性アルコール性化
合物をいい、このような化合物としては、例えば、ゲラ
ニオール、シトロネロール、ネロール、シス−３−ヘキ
セノール、１−ヘキサノール、１−オクタノール等の脂
肪族アルコール類、メントール、サンタロール等の脂環
族アルコール類、アニスアルコール、ベンジルアルコー
ル、フェネチルアルコール、シンナミルアルコール等の
芳香族アルコール類等が挙げられる。これらのアルコー
ル性化合物のうち、常温で固体のものは、加熱するなど
して溶解して使用すればよい。また、これらのアルコー
ル性化合物は減圧蒸留によって容易に回収・再利用され
る。
【０００６】本発明に用いられるβ−ガラクトシダーゼ
としては、エシェリチア・コリ（Escherichia coli）、
アスペルギルス・オリーゼ（Aspergillus oryzae）、ア
スペルギルス・ニガー（Aspergillus niger ）等の微生
物由来の酵素、牛肝臓等の動物臓器由来の酵素、ジャク
ビーンズ（Jack beans）等の植物由来の酵素が挙げら
れる。これらの酵素は、そのままの形で使用してもよい
し、各種の固定化法により固定化したものも使用するこ
とができる。さらには、脂質等で修飾した修飾酵素とし
て使用することも可能である。
としては、エシェリチア・コリ（Escherichia coli）、
アスペルギルス・オリーゼ（Aspergillus oryzae）、ア
スペルギルス・ニガー（Aspergillus niger ）等の微生
物由来の酵素、牛肝臓等の動物臓器由来の酵素、ジャク
ビーンズ（Jack beans）等の植物由来の酵素が挙げら
れる。これらの酵素は、そのままの形で使用してもよい
し、各種の固定化法により固定化したものも使用するこ
とができる。さらには、脂質等で修飾した修飾酵素とし
て使用することも可能である。
【０００７】また、本発明に用いられる菌体としては、
β−ガラクトシダーゼ活性を有する菌体であればいかな
るものでもよく、野生型菌体は勿論のこと、自然的並び
に人為的変異型菌体や、β−ガラクトシダーゼ遺伝子を
組み入れた組換え菌体等が挙げられる。このような菌体
としては、例えば、エシェリチア・コリ JM109/p βGa
12（FERM P-15642）、エシェリチア・コリ C600等が挙
げられる。
β−ガラクトシダーゼ活性を有する菌体であればいかな
るものでもよく、野生型菌体は勿論のこと、自然的並び
に人為的変異型菌体や、β−ガラクトシダーゼ遺伝子を
組み入れた組換え菌体等が挙げられる。このような菌体
としては、例えば、エシェリチア・コリ JM109/p βGa
12（FERM P-15642）、エシェリチア・コリ C600等が挙
げられる。
【０００８】これらの菌体は一般にラクトースを含む培
地で培養することにより、β−ガラクトシダーゼ活性の
高い菌体を得ることができる。また、炭素源としてグル
コース、ショ糖、廃糖蜜等を用い、菌体を充分増殖させ
た後にラクトースを添加し、さらに培養を続け、β−ガ
ラクトシダーゼを充分誘導させた後に、菌体を遠心、濾
過等の通常用いられる方法により回収すれば、β−ガラ
クトシダーゼ活性の高い菌体をより大量に得ることがで
きる。培養に用いる窒素源としては、例えば、ペプト
ン、カゼイン、コーンステイプリカー、肉エキス、酵母
エキス等の有機窒素源や、硫安、塩化アンモニウム、尿
素等の無機窒素源を用いることができる。さらに、β−
ガラクトシダーゼの生産性を上げるために、イソプロピ
ル−β−Ｄ−チオ−ガラクトピラノシド等の誘導物質を
添加してもよい。本発明においては、このようにして得
られた菌体を、遠心、濾過等の方法により回収し、洗浄
したものをそのまま反応に用いることもできるし、さら
には、これらの菌体を各種の固定化法により固定化した
ものも使用することができる。
地で培養することにより、β−ガラクトシダーゼ活性の
高い菌体を得ることができる。また、炭素源としてグル
コース、ショ糖、廃糖蜜等を用い、菌体を充分増殖させ
た後にラクトースを添加し、さらに培養を続け、β−ガ
ラクトシダーゼを充分誘導させた後に、菌体を遠心、濾
過等の通常用いられる方法により回収すれば、β−ガラ
クトシダーゼ活性の高い菌体をより大量に得ることがで
きる。培養に用いる窒素源としては、例えば、ペプト
ン、カゼイン、コーンステイプリカー、肉エキス、酵母
エキス等の有機窒素源や、硫安、塩化アンモニウム、尿
素等の無機窒素源を用いることができる。さらに、β−
ガラクトシダーゼの生産性を上げるために、イソプロピ
ル−β−Ｄ−チオ−ガラクトピラノシド等の誘導物質を
添加してもよい。本発明においては、このようにして得
られた菌体を、遠心、濾過等の方法により回収し、洗浄
したものをそのまま反応に用いることもできるし、さら
には、これらの菌体を各種の固定化法により固定化した
ものも使用することができる。
【０００９】本発明においては、ラクトースと、ガラク
トシダーゼ又はβ−ガラクトシダーゼを含有する菌体と
を含む水溶液に、水と混和しないアルコール性化合物を
水に対する飽和濃度以上となるように添加することによ
ってアルコール層と水層の２層系を形成し、配糖化反応
を進行させる。
トシダーゼ又はβ−ガラクトシダーゼを含有する菌体と
を含む水溶液に、水と混和しないアルコール性化合物を
水に対する飽和濃度以上となるように添加することによ
ってアルコール層と水層の２層系を形成し、配糖化反応
を進行させる。
【００１０】このときのアルコール性化合物の添加量と
しては、水に対する飽和濃度以上であれば特に限定され
るものではないが、生産性の観点から考えて、水層に対
して１／３〜３倍容を加えることが好ましく、特に１／
２〜２倍容を加えることが好ましい。また、ラクトース
の濃度としては、水層の１〜５０重量％が適当であり、
１０〜４０重量％が好ましい。β−ガラクトシダーゼ又
はβ−ガラクトシダーゼ活性を有する菌体の濃度として
は、酵素活性換算で１〜１００ユニット／ミリリットル
が好ましく、特に２０〜１００ユニット／ミリリットル
が好ましい。
しては、水に対する飽和濃度以上であれば特に限定され
るものではないが、生産性の観点から考えて、水層に対
して１／３〜３倍容を加えることが好ましく、特に１／
２〜２倍容を加えることが好ましい。また、ラクトース
の濃度としては、水層の１〜５０重量％が適当であり、
１０〜４０重量％が好ましい。β−ガラクトシダーゼ又
はβ−ガラクトシダーゼ活性を有する菌体の濃度として
は、酵素活性換算で１〜１００ユニット／ミリリットル
が好ましく、特に２０〜１００ユニット／ミリリットル
が好ましい。
【００１１】反応時のｐＨ及び反応温度としては、使用
する酵素種ごとに適宜選べばよいが、それぞれの酵素の
至適ｐＨ及び至適温度を選べばよい。また、反応時間と
しては、使用する酵素量あるいは菌体量により適宜選べ
ばよいが、目的とするアルコール性化合物の配糖体の蓄
積量が最大になるような時間を選べばよい。通常、配糖
体はアルコール層中に０．５〜１０重量％蓄積する。
する酵素種ごとに適宜選べばよいが、それぞれの酵素の
至適ｐＨ及び至適温度を選べばよい。また、反応時間と
しては、使用する酵素量あるいは菌体量により適宜選べ
ばよいが、目的とするアルコール性化合物の配糖体の蓄
積量が最大になるような時間を選べばよい。通常、配糖
体はアルコール層中に０．５〜１０重量％蓄積する。
【００１２】このような方法によって製造したアルコー
ル性化合物の配糖体はアルコール層中に優先的に分配す
るので、アルコール層と水層を分離し、得られたアルコ
ール層からアルコール性化合物を減圧蒸留によって除い
た後の残渣として配糖体を得ることができる。残渣とし
て得られた配糖体は一般にかなりの量のアルコール性化
合物を含んでいるが、これらの未反応原料は酢酸エチ
ル、クロロホルム、トルエン、ヘキサン等の比較的疎水
性の高い溶媒により選択的に抽出・除去することが可能
である。また、適当な溶媒から配糖体を再結晶すること
によっても、未反応原料を除くことができる。
ル性化合物の配糖体はアルコール層中に優先的に分配す
るので、アルコール層と水層を分離し、得られたアルコ
ール層からアルコール性化合物を減圧蒸留によって除い
た後の残渣として配糖体を得ることができる。残渣とし
て得られた配糖体は一般にかなりの量のアルコール性化
合物を含んでいるが、これらの未反応原料は酢酸エチ
ル、クロロホルム、トルエン、ヘキサン等の比較的疎水
性の高い溶媒により選択的に抽出・除去することが可能
である。また、適当な溶媒から配糖体を再結晶すること
によっても、未反応原料を除くことができる。
【００１３】本発明の方法により製造したアルコール性
化合物の配糖体は、水溶解性及び保存安定性に優れ、無
香性であるため、例えば、徐放性の香料として、香水、
オーデコロン、シャンプー、リンス、石鹸、整髪料、洗
口剤、制汗剤、マッサージ粉末等の化粧料、清涼飲料、
菓子、冷菓、乳製品、酒類、肉、歯磨粉、煙草等の食
品、台所用、住居用、風呂用等の芳香剤、紙おむつ、生
理用ナプキン等の吸収性物品、入浴剤、洗剤等に使用す
ることができる。
化合物の配糖体は、水溶解性及び保存安定性に優れ、無
香性であるため、例えば、徐放性の香料として、香水、
オーデコロン、シャンプー、リンス、石鹸、整髪料、洗
口剤、制汗剤、マッサージ粉末等の化粧料、清涼飲料、
菓子、冷菓、乳製品、酒類、肉、歯磨粉、煙草等の食
品、台所用、住居用、風呂用等の芳香剤、紙おむつ、生
理用ナプキン等の吸収性物品、入浴剤、洗剤等に使用す
ることができる。
【００１４】
【実施例】次に、本発明を実施例によって具体的に説明
する。 実施例１ LB培地〔トリプトン（ディフコ社製）１重量％、イース
トエキストラクト（ディフコ社製）０．５重量％、Ｎａ
Ｃｌ１重量％：ｐＨ７．２〕１００ミリリットルの入っ
た三角フラスコ２本にエシェリチア・コリ JM109/p β
Ga12（FERM P-15642）を各１白金耳植菌し、３７℃で一
晩前培養した。この前培養液をLB培地２０リットルに植
菌し、３７℃で５時間培養した後、イソプロピル−β−
Ｄ−チオ−ガラクトピラノシド（和光純薬工業社製、特
級試薬）を１mMとなるように加えて、さらに３７℃で８
時間培養した。得られた培養液を遠心分離して湿菌体１
００ｇを得た。湿菌体１００ｇを１mMの塩化マグネシウ
ムを含む５０mMのリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）５００ミ
リリットルに懸濁し、超音波破砕した。破砕液を遠心分
離（４，０００ｇ、３０分）し、その上清液をβ−ガラ
クトシダーゼ粗酵素液とした（比活性９５ユニット／ｍ
ｇ）。
する。 実施例１ LB培地〔トリプトン（ディフコ社製）１重量％、イース
トエキストラクト（ディフコ社製）０．５重量％、Ｎａ
Ｃｌ１重量％：ｐＨ７．２〕１００ミリリットルの入っ
た三角フラスコ２本にエシェリチア・コリ JM109/p β
Ga12（FERM P-15642）を各１白金耳植菌し、３７℃で一
晩前培養した。この前培養液をLB培地２０リットルに植
菌し、３７℃で５時間培養した後、イソプロピル−β−
Ｄ−チオ−ガラクトピラノシド（和光純薬工業社製、特
級試薬）を１mMとなるように加えて、さらに３７℃で８
時間培養した。得られた培養液を遠心分離して湿菌体１
００ｇを得た。湿菌体１００ｇを１mMの塩化マグネシウ
ムを含む５０mMのリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）５００ミ
リリットルに懸濁し、超音波破砕した。破砕液を遠心分
離（４，０００ｇ、３０分）し、その上清液をβ−ガラ
クトシダーゼ粗酵素液とした（比活性９５ユニット／ｍ
ｇ）。
【００１５】次に、ラクトース４０ｇ及びβ−ガラクト
シダーゼ粗酵素液６０００ユニットを１０mMのリン酸緩
衝液（ｐＨ８．０）に溶解して１００ミリリットルと
し、これにフェネチルアルコール（和光純薬工業社製、
特級試薬）１００ミリリットル（水層に対して約１倍
容）を重層して水層とフェネチルアルコール層の２層系
を形成し、４０℃で激しく攪拌しながら２０時間反応さ
せた。反応終了後、フェネチルアルコール層を分液ロー
トを用いて分離し、得られたフェネチルアルコール層を
減圧蒸留することによって得られた残渣を３０ミリリッ
トルの水に溶解し、等容のクロロホルムで３回抽出する
ことにより、残存するフェネチルアルコールを除去し
た。次いで、得られた水層をスプレードライすることに
よりフェネチルアルコールの配糖体粉末７．１ｇを得
た。得られたフェネチルアルコールの配糖体の13Ｃ−Ｎ
ＭＲを重水中でバリアン社製のVXR300を用いて測定し
た。その結果、38.1、63.8、71.5、73.5、73.6、75.6、
77.9、105.7 、129.4 、131.5 、131.9 、141.6ppmにシ
グナルが観察された。また、得られたフェネチルアルコ
ールの配糖体をアスペルギルス・オリーゼ由来のβ−ガ
ラクトシダーゼ（新日本化学社製）で加水分解すると、
フェネチルアルコールとＤ−ガラクトースが生成した。
以上の結果から、上記で得られたフェネチルアルコール
の配糖体の構造はフェネチル−β−Ｄ−ガラクトピラノ
シドであることが判明した。
シダーゼ粗酵素液６０００ユニットを１０mMのリン酸緩
衝液（ｐＨ８．０）に溶解して１００ミリリットルと
し、これにフェネチルアルコール（和光純薬工業社製、
特級試薬）１００ミリリットル（水層に対して約１倍
容）を重層して水層とフェネチルアルコール層の２層系
を形成し、４０℃で激しく攪拌しながら２０時間反応さ
せた。反応終了後、フェネチルアルコール層を分液ロー
トを用いて分離し、得られたフェネチルアルコール層を
減圧蒸留することによって得られた残渣を３０ミリリッ
トルの水に溶解し、等容のクロロホルムで３回抽出する
ことにより、残存するフェネチルアルコールを除去し
た。次いで、得られた水層をスプレードライすることに
よりフェネチルアルコールの配糖体粉末７．１ｇを得
た。得られたフェネチルアルコールの配糖体の13Ｃ−Ｎ
ＭＲを重水中でバリアン社製のVXR300を用いて測定し
た。その結果、38.1、63.8、71.5、73.5、73.6、75.6、
77.9、105.7 、129.4 、131.5 、131.9 、141.6ppmにシ
グナルが観察された。また、得られたフェネチルアルコ
ールの配糖体をアスペルギルス・オリーゼ由来のβ−ガ
ラクトシダーゼ（新日本化学社製）で加水分解すると、
フェネチルアルコールとＤ−ガラクトースが生成した。
以上の結果から、上記で得られたフェネチルアルコール
の配糖体の構造はフェネチル−β−Ｄ−ガラクトピラノ
シドであることが判明した。
【００１６】実施例２ ラクトース４０ｇ及びβ−ガラクトシダーゼ精製標品
（シグマ社製）２０００ユニットを１０mMのリン酸緩衝
液（ｐＨ８．０）に溶解して１００ミリリットルとし、
これにシス−３−ヘキセノール（和光純薬工業社製、特
級試薬）１００ミリリットル（水層に対して約１倍容）
を重層して水層とシス−３−ヘキセノール層の２層系を
形成し、４０℃で激しく攪拌しながら２０時間反応させ
た。反応終了後、シス−３−ヘキセノール層を分液ロー
トを用いて分離し、得られたシス−３−ヘキセノール層
を減圧蒸留することによって得られた残渣を２０ミリリ
ットルの水に溶解し、等容のクロロホルムで３回抽出す
ることにより、残存するシス−３−ヘキセノールを除去
した。次いで、得られた水層をスプレードライすること
によりシス ３−ヘキセノールの配糖体粉末３．６ｇを
得た。得られたシス−３−ヘキセノール配糖体の13Ｃ−
ＮＭＲを重水中でバリアン社製のVXR300を用いて測定し
た。その結果、14.0、20.9、30.2、62.0、62.8、69.8、
73.0、73.9、76.1、97.5、124.4 、134.9ppmにシグナル
が観察された。また、得られたシス−３−ヘキセノール
の配糖体をアスペルギルス・オリーゼ由来のβ−ガラク
トシダーゼで加水分解すると、シス−３−ヘキセノール
とＤ−ガラクトースが生成した。以上の結果から、上記
で得られたシス−３−ヘキセノールの配糖体の構造はシ
ス−３−ヘキセニル−β−Ｄ−ガラクトピラノシドであ
ることが判明した。
（シグマ社製）２０００ユニットを１０mMのリン酸緩衝
液（ｐＨ８．０）に溶解して１００ミリリットルとし、
これにシス−３−ヘキセノール（和光純薬工業社製、特
級試薬）１００ミリリットル（水層に対して約１倍容）
を重層して水層とシス−３−ヘキセノール層の２層系を
形成し、４０℃で激しく攪拌しながら２０時間反応させ
た。反応終了後、シス−３−ヘキセノール層を分液ロー
トを用いて分離し、得られたシス−３−ヘキセノール層
を減圧蒸留することによって得られた残渣を２０ミリリ
ットルの水に溶解し、等容のクロロホルムで３回抽出す
ることにより、残存するシス−３−ヘキセノールを除去
した。次いで、得られた水層をスプレードライすること
によりシス ３−ヘキセノールの配糖体粉末３．６ｇを
得た。得られたシス−３−ヘキセノール配糖体の13Ｃ−
ＮＭＲを重水中でバリアン社製のVXR300を用いて測定し
た。その結果、14.0、20.9、30.2、62.0、62.8、69.8、
73.0、73.9、76.1、97.5、124.4 、134.9ppmにシグナル
が観察された。また、得られたシス−３−ヘキセノール
の配糖体をアスペルギルス・オリーゼ由来のβ−ガラク
トシダーゼで加水分解すると、シス−３−ヘキセノール
とＤ−ガラクトースが生成した。以上の結果から、上記
で得られたシス−３−ヘキセノールの配糖体の構造はシ
ス−３−ヘキセニル−β−Ｄ−ガラクトピラノシドであ
ることが判明した。
【００１７】実施例３ ラクトース４０ｇ及びエシェリチア・コリ JM109/p β
Ga12（FERM P-15642）菌体１．３ｇを１０mMのリン酸緩
衝液（ｐＨ８．０）に懸濁して１００ミリリットルと
し、これにメントール（和光純薬工業社製、特級試薬）
１００ｇを加熱溶解して重層して水層とメントール層の
２層系を形成し、４７℃で激しく攪拌しながら２０時間
反応させた。反応終了後、メントール層を分液ロートを
用いて分離し、得られたメントール層を減圧蒸留するこ
とによって得られた残渣を１００ミリリットルの水に溶
解し、等容のヘキサンで３回抽出することにより、残存
するメントールを除去した。次いで、得られた水層をス
プレードライすることによりメントールの配糖体粉末
１．０ｇを得た。得られたメントールの配糖体の13Ｃ−
ＮＭＲを重水中でバリアン社製のVXR300を用いて測定し
た。その結果、16.2、21.0、22.2、23.3、25.9、31.7、
34.6、45.1、50.2、62.0、69.8、71.5、73.0、73.9、7
6.1、97.5ppm にシグナルが観察された。また、得られ
たメントールの配糖体をアスペルギルス・オリーゼ由来
のβ−ガラクトシダーゼで加水分解すると、メントール
とＤ−ガラクトースが生成した。以上の結果から、上記
で得られたメントール配糖体の構造はメンチル−β−Ｄ
−ガラクトピラノシドであることが判明した。
Ga12（FERM P-15642）菌体１．３ｇを１０mMのリン酸緩
衝液（ｐＨ８．０）に懸濁して１００ミリリットルと
し、これにメントール（和光純薬工業社製、特級試薬）
１００ｇを加熱溶解して重層して水層とメントール層の
２層系を形成し、４７℃で激しく攪拌しながら２０時間
反応させた。反応終了後、メントール層を分液ロートを
用いて分離し、得られたメントール層を減圧蒸留するこ
とによって得られた残渣を１００ミリリットルの水に溶
解し、等容のヘキサンで３回抽出することにより、残存
するメントールを除去した。次いで、得られた水層をス
プレードライすることによりメントールの配糖体粉末
１．０ｇを得た。得られたメントールの配糖体の13Ｃ−
ＮＭＲを重水中でバリアン社製のVXR300を用いて測定し
た。その結果、16.2、21.0、22.2、23.3、25.9、31.7、
34.6、45.1、50.2、62.0、69.8、71.5、73.0、73.9、7
6.1、97.5ppm にシグナルが観察された。また、得られ
たメントールの配糖体をアスペルギルス・オリーゼ由来
のβ−ガラクトシダーゼで加水分解すると、メントール
とＤ−ガラクトースが生成した。以上の結果から、上記
で得られたメントール配糖体の構造はメンチル−β−Ｄ
−ガラクトピラノシドであることが判明した。
【００１８】実施例４ 実施例１のフェネチルアルコールの代わりにゲラニオー
ル、シトロネロール、ネロール、１−ヘキサノール、１
−オクタノール、サンタノール、ベンジルアルコール、
シンナミルアルコール、アニスアルコールを用いた以外
は実施例１の方法と同様にして、対応するそれぞれのア
ルコールのβ−Ｄ−ガラクトシドを合成した。
ル、シトロネロール、ネロール、１−ヘキサノール、１
−オクタノール、サンタノール、ベンジルアルコール、
シンナミルアルコール、アニスアルコールを用いた以外
は実施例１の方法と同様にして、対応するそれぞれのア
ルコールのβ−Ｄ−ガラクトシドを合成した。
【００１９】
【発明の効果】本発明によれば、アルコール性化合物の
配糖体をカラム処理等の繁雑な精製操作を必要としない
簡便な操作で、安価に、かつ容易に製造することができ
る。
配糖体をカラム処理等の繁雑な精製操作を必要としない
簡便な操作で、安価に、かつ容易に製造することができ
る。
Claims (1)
- 【請求項１】 ラクトースと、β−ガラクトシダーゼ又
はβ−ガラクトシダーゼを含有する菌体とを含む水溶液
に、水と混和しないアルコール性化合物を添加してアル
コール性化合物の配糖体を製造するに際し、水と混和し
ないアルコール性化合物を水に対する飽和濃度以上とな
るように添加して２層系で配糖化反応を行うことを特徴
とするアルコール性化合物の配糖体の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP22482696A JPH1066595A (ja) | 1996-08-27 | 1996-08-27 | アルコール性化合物の配糖体の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP22482696A JPH1066595A (ja) | 1996-08-27 | 1996-08-27 | アルコール性化合物の配糖体の製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH1066595A true JPH1066595A (ja) | 1998-03-10 |
Family
ID=16819808
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP22482696A Pending JPH1066595A (ja) | 1996-08-27 | 1996-08-27 | アルコール性化合物の配糖体の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH1066595A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001014575A1 (fr) * | 1999-08-19 | 2001-03-01 | Showa Sangyo Co., Ltd. | Procede de production de glycosides |
| JP2005281203A (ja) * | 2004-03-30 | 2005-10-13 | Hayashibara Biochem Lab Inc | 皮膚外用剤、ならびにグラブリジン配糖体及びその製造方法 |
| JP2007176893A (ja) * | 2005-12-28 | 2007-07-12 | Kao Corp | アルキルガラクトシドの製造方法 |
| CN106046070A (zh) * | 2016-05-24 | 2016-10-26 | 广州市澳键丰泽生物科技股份有限公司 | 一种耐高温缓释糖苷型大茴香醇及其酶法制备方法和应用 |
-
1996
- 1996-08-27 JP JP22482696A patent/JPH1066595A/ja active Pending
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001014575A1 (fr) * | 1999-08-19 | 2001-03-01 | Showa Sangyo Co., Ltd. | Procede de production de glycosides |
| US6797496B1 (en) | 1999-08-19 | 2004-09-28 | Showa Sangyo Co., Ltd. | Process for producing glycosides |
| JP4504607B2 (ja) * | 1999-08-19 | 2010-07-14 | 焼津水産化学工業株式会社 | 配糖体の製造方法 |
| JP2005281203A (ja) * | 2004-03-30 | 2005-10-13 | Hayashibara Biochem Lab Inc | 皮膚外用剤、ならびにグラブリジン配糖体及びその製造方法 |
| JP2007176893A (ja) * | 2005-12-28 | 2007-07-12 | Kao Corp | アルキルガラクトシドの製造方法 |
| CN106046070A (zh) * | 2016-05-24 | 2016-10-26 | 广州市澳键丰泽生物科技股份有限公司 | 一种耐高温缓释糖苷型大茴香醇及其酶法制备方法和应用 |
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