JPH10505499A - 分析物の分光光度法測定用の染料対 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 サンプル中の分析物の存在または量を検知するための試薬システムを含有する試験装置中での使用のための染料対化合物が提供される。この試薬システムは分析物の存在下でサンプル中の分析物の量を指示する量で酸化剤を生成する１種もしくはそれ以上の酵素を含んでなる。選択される化合物はメタ［３−メチル２−ベンゾチアゾリノンヒドロゾン］Ｎ−スルホニルベンゼンスルホネートモノナトリウムである。

Description

【発明の詳細な説明】 分析物の分光光度法測定用の染料対技術分野 本発明は水性流体、例えば全血、中の化学および生化学成分（分析物）の比色 測定用の試験装置および方法、そして特にそのような装置および方法における使 用のための染料対に関する。背景技術 着色された水性流体、特に着色された生物流体、例えば全血および尿、並びに 生物流体誘導体、例えば血清および血漿、の化学および生化学成分の定量化の重 要性が増しつつある。医学的な診断および処置並びに治療薬、中毒剤、有害化学 物質などへの露呈の定量化において重要な用途がある。幾つかの場合には、測定 しようとする物質の量は微量−デシリットル当たりミリグラムもしくはそれ以下 の範囲−であるかまたは正確に測定するのが困難なため、使用される装置は複雑 となりそして一般的には専門技術者だけが使用できる。この場合には、結果はサ ンプル採取から数時間ないし数日後に得られる。他の場合には、操作者が試験を 研究室以外の場所で迅速なすなわち即座の情報表示により日常的に、迅速に、且 つ再現可能式に実施できることにもしばしば重点がおかれる。 一つの一般的な医学的試験は糖尿病の血液グルコース水準の測定である。最近 の教示では、糖尿病患者が彼らの血液グルコース水準を彼らの症例の性質および 重さによるが１日に２〜７回測定することが推奨される。疾病をより良く管理す るためには、測定されたグルコース水準における観察されたパターンに基づき、 患者および医師が一緒になって食事、運動、およびインシュリン摂取を調整する 。明らかに、この情報は患者 が即座に入手できなければならない。 多くの血液グルコース試験方法および試験製品が当技術で知られているが、こ れらの全ては種々の制限を受ける。大きな改良法が本出願と同一譲渡人に譲渡さ れている R．Phillips 他による米国特許第４,９３５,３４６号、第５,０４９, ４８７号、第５,０５９,３９４号および第５,１７９,００５号に開示されそして 特許請求されている。 これらの特許に開示されそして特許請求されている方法は、分析しようとする 流体を別の表面に適用しそしてそれがマトリックス中を読み取り表面に移動する 時に分析物と反応して光−吸収性反応生成物を生ずる試薬を含浸させた不活性な 多孔性マトリックスの一表面からの反射率読み取りを含んでいる。この試薬は、 サンプル中のグルコースを消費して過酸化水素を生成する酵素であるグルコース オキシダーゼを含んでおり、該過酸化水素は別の酵素であるホースラディッシュ ペルオキシダーゼの存在下で３−メチル−２−ベンゾチアゾリノンヒドラゾン塩 酸塩（ＭＢＴＨ）および３−ジメチルアミノ安息香酸（ＤＭＡＢ）を含んでなる 染料対を酸化して青色染料を生成する。次に反射率測定を二つの別個の波長にお いて行う。血液中のグルコース濃度はＬＥＤ分光光度計を用いて染料の色強度に 基づいて測定される。 これも共通して譲渡されている私の同時出願中の１９９４年５月１９日に出願 されたＵ.Ｓ.Ｓ.Ｎ.２４５,９４０（ＬＦＳ３０）には、遊離形態または酸形態 の３−メチル−２−ベンゾチアゾリノンヒドラゾン（ＭＢＴＨ）および酸または 塩形態の８−アニリノ−１−ナフタレンスルホネート（ＡＮＳ）を上記のＭＢＴ Ｈ−ＤＭＡＢ染料対の代わりに含んでなる染料対が開示されている。ＭＢＴＨ− ＡＮＳ染料対は酸化されると 酸化されたＭＢＴＨ−ＤＭＡＢ染料対より可溶性が少なく、従って最少の染料退 色でより安定な終点を与える。 これらの今までのシステムはグルコースの存在または量の測定に有用な試験装 置を製造するために効果的に使用されているが、幾つかの欠点が見られる。その ような染料対が使用される試験装置は家庭用および専門用の両方で設計されてお り、そしてかなりの期間にわたり使用者の在庫になるのでもちろんこの期間にわ たり有効性を保たなければならないという予測のもとでそのままで製造業者およ び販売業者により販売されている。かなりの貯蔵寿命に関するこの要望のために 、ＭＢＴＨを染料対の成分の一つとして使用する製品を生成するのは難しい。 第一に、ＭＢＴＨの安定性は温度およびアルカリ度の上昇につれて減少するこ とが見いだされた。ＭＢＴＨの酸遊離形態は非常に不安定であり且つ昇華する傾 向がある。これを克服する試みでは、好適な形態はＭＢＴＨの酸水和物、例えば ３−メチル−２−ベンゾチアゾリノンヒドラゾン塩酸塩である。残念なことに、 この水和物は温度が上昇するとそれ自身不安定になりそして加熱により容易に酸 遊離形態のＭＢＴＨおよびＨＣｌに解離する。高いｐＨにおける低い安定性を有 することの他に、ＭＢＴＨがそのカップリング相手と酸化的に反応する効率はア ルカリ度の上昇につれて大きく減少するため高いｐＨにおいては染料対から本質 的に色はほとんどまたは全く生じない。 これらの関係を考慮すると、不安定性および非効率の影響を最少にするには実 際にＭＢＴＨを大過剰で且つ低いｐＨで使用しなければならない。理想的には、 化合物の低い昇華および高い効率の観点からすると２．０より低いｐＨが好まし いであろう。残念なことに、ここで考えられて いるシステムに関してはそのような理想的に低いｐＨは使用することができない 。上記の如く、使用される試薬システムは基質分析物に対して作用する酵素に依 存しておりそして試験するサンプル中に存在する分析物の量を指示する量で酸化 剤を生成する。ＭＢＴＨ試薬に関して理想的な低いｐＨは例えばグルコースオキ シダーゼおよびホースラディッシュペルオキシダーゼの如き酵素には全く不適切 である。そのような低いｐＨではそのような市販の酵素の多くは活性をほとんど または全く有していない。従って、当技術は中程度のｐＨ、例えば４、および必 要な貯蔵寿命のために試験装置の有効性を確実にするための大過剰の試薬を含ん でなり且つ選択することが強いられている。発明の要旨 本発明の教示によると、酵素を含有する試験装置中に染料対の高度に安定な成 分が供給される。この成分は今までの試験装置中で使用されたものとは対照的に 、高い酵素効率と相入れる相対的に高いｐＨにおいて広範囲のカップリング相手 と効率的な酸化的カップリングが可能である。 特に、本発明の染料カップリング化合物はサンプル中の分析物の存在または量 を検知する試薬システムを含有する試験装置の中で使用され、そこではこの試薬 システムは分析物の存在下でサンプルの分析物の量を指示する量で酸化剤を生成 する１種もしくはそれ以上の酵素を含んでなる。この教示によると、試薬システ ムはさらに生成した酸化剤により酸化される発色団を生成できる染料対を含んで なり、この染料対は化合物： ［式中、Ｒはアルキル、置換されたアルキル、アリール、置換されたアリール、 複素環式、第四級アミンまたは有機酸部分よりなる群から選択されそしてＹはＮ Ｏ₂、ＳＯ₃−、Ｈ、ハライド、アルキルまたは ＳｉＺ₃よりなる群から選択され、ここでＺはアルキルまたはアリールである］ を有する化合物を含んでなる。好適な態様では、Ｒは ［式中、Ｒ₁、Ｒ₂、およびＲ₃のいずれも独立してＨ、アルキル、アリール、シ リル、ハライド、ヒドロキシド、メルカプチド、アルコキシド、チオアルコキシ ド、アミン、スルホネートまたはカルボキシレートよりなる群から選択され、そ してＸはアミン、スルホネートまたはカルボキシレートよりなる群から選択され る］ である。特別な態様では、全てが一般的に測定される血液分析物である例えばグ ルコース、コレステロール、アルコール、尿酸、ホルムアルデヒドまたはグリセ ロール−３−ホスフェートの如き分析物の存在または量を測定する試験装置が提 供される。そのような場合には、酵素システムはグルコースオキシダーゼ、コレ ステロールオキシダーゼ、アルコールオキシダーゼ、ウリカーゼ、アルデヒドオ キシダーゼ、およびグリセロホスフェートオキシダーゼよりなる群から選択され る酵素を、ペルオ キシダーゼまたはペルオキシダーゼ様性質を有する無機錯体、例えばヘマチン、 ヘミンおよびテトラキス［スルホフェニル］ポルフィリンマンガンと一緒に含ん でなるであろう。図面の簡単な記述 図１は分析しようとする液体が適用される反応パッドを含有する試験装置の一 つの態様の透視図である。 図２は図１の試験装置の使用の第二の態様の透視図である。発明の詳細な論議 上記の如く、本発明は液体サンプル中の分析物の存在または量を測定するため の試験装置の中での使用のための改良された染料対化合物を含む。図１を参照す ると、本発明の好適な態様では、試験装置は内部に化学的試薬システムを組み込 んであり且つ担体１２に接着している多孔性マトリックス１０を含んでなる。開 口部１６が担体中に供されており、それにより液体サンプルをマトリックス１０ のサンプル受容表面に適用できる。液体サンプル中に存在する分析物と反応しそ して液体サンプル中に存在する分析物の量を指示する光反射性を有するマトリッ クスの試験表面１９を有する化学システムが供されている。試験表面は肉眼で読 み取ることもできるが、好適には分光マトリックス装置の使用により読み取られ る。そのような装置の要素は図１に図式的に示されておりそして例えば試験表面 １９上に均一波長の光をなるべく向けるための発光ダイオードの如き光源１８を 含んでなる。さらに表面１９からの反射された光を測定しそして検知された光の 量を示す信号２２を生成するための光検知器２０も供されており、その信号は例 えば読み取り装置中に組み込まれているマイクロプロセッサーにより処理されて サンプル中の分析 物の量を計算することができる。 例えば上記のようなシステムは当技術で既知でありそして米国特許第４,９３ ５,３４６号、第５,０４９,４８７号、第５,０５９,３９４号、および第５,１７ ９,００５号に記載されている。そのようなシステムはこれらの装置が読み取り 装置中に挿入されそして次に例えば血液の如きサンプルがサンプル受容表面１７ に適用されるように考えられている。図２はこれの変法を示しており、そこでは 血液が最初にサンプル受容表面１７に適用されそして次に初めて読み取り用の装 置に試験表面１９が呈示される。全ての他の面では、図２中の番号のついた要素 は図１のものと同一である。 液体サンプル中の分析物と多孔性マトリックス中に存在する化学試薬との間の 一連の化学反応の実施による試験表面の反射性質はサンプル中の分析物の量に応 じて変動する。特に、マトリックスは分析物一代替品(analyte-substitute)と一 緒になって過酸化水素または他の強い酸化剤を生成する１種もしくはそれ以上の 酵素を含んでいる。染料対、すなわち酸化されて特定波長において存在する発色 団の量に比例して光を吸収する発色団を生成できる二種の化合物、がマトリック ス中に含まれる。酵素で触媒作用を受ける反応により生成した酸化剤が次に染料 サンプルと反応して発色団を生成する。 酵素の選択、生成する酸化剤および染料対の選択は当技術では広く変動し、そ してそれらは大部分測定しようとする分析物の関数である。例えば、血液サンプ ル中でのコレステロール測定の場合には、コレステロールオキシダーゼの如きオ キシダーゼ酵素を使用できる。同様に、メタノールまたはエタノール測定はアル コールオキシダーゼを使用でき、ホ ルムアルデヒド測定はアルデヒドオキシダーゼを使用でき、またはグリセロール −３−ホスフェート測定はグリセロホスフェートオキシダーゼを使用できる。こ れらの酵素で触媒作用を受ける反応の過酸化水素生成物はその後の酵素で触媒作 用を受ける反応によりさらに改変されて染料対と反応して発色団を生成する活性 な酸化剤を生成できる。このようにして、例えば、活性な酸化試薬を生成する過 酸化水素の反応はホースラディッシュペルオキシダーゼ酵素により触媒作用を受 けることができる。 従って、分析物の例として全血の液体サンプル中のグルコースを採用するが、 本発明の教示を下記の論議の目的のために広く適用できることは理解されよう。 次に好適な化学システムの例としてグルコース基質上で作用して過酸化水素を生 成するグルコースオキシダーゼ酵素を採用する。過酸化水素自身は別の酵素であ るホースラディッシュペルオキシダーゼとの反応により活性な酸化試薬に転化さ れる。 これまでは、上記の種類のグルコース用の診断試験において広く使用されてい る染料対はジメチルアミノベンゼン（式II）と一緒になった３−メチル−２−ベ ンゾチアゾリノンヒドラゾン塩酸塩水和物（ＭＢＴＨ塩酸塩水和物）（式Ｉ）の 組み合わせであった。これらの化合物は下記の酸化反応を受けて青色に着色され た発色団（式III）を生成する。 ［Ｏ］＝過酸化水素／ホースラディッシュペルオキシダーゼ 上記の如く、このシステムは幾つかの欠点を有する。ＭＢＴＨは塩酸塩水和物 形態でも熱およびアルカリの作用下ではかなり不安定である。さらに、上記の反 応は高度の酸性条件下で、例えばｐＨ２もしくはそれ以下で、最も有効である。 残念なことに、これらの条件下では、試験装置中で使用される酵素、例えばグル コースオキシダーゼおよびホースラディッシュペルオキシダーゼ、は活性をほと んどまたは全く有していない。従って、かなり安定なシステムを得るには最適な ｐＨ、例えば約４、を使用しそして大量の酵素および染料対の両者を使用して酵 素の活性減少およびカップリング反応の酸化効率減少を補う商業的な実施法が指 示される。 本発明によると、これまでに遭遇している安定性問題を克服しそしてここで考 えられる試験装置の中で使用される酵素の活性に対してより処理しやすい環境に おいて、例えば約４〜７の範囲のｐＨ値において、効果的に反応性であるＭＢＴ Ｈの改質された形態を提供できることが今回発見された。さらに、ある種の好適 な誘導体は望ましいカップリング相手である芳香族アミン類と高度に反応性であ ることも見いだされた。本発明の誘導体は以下の式IV： ［式中、Ｒはアルキル、置換されたアルキル、アリール、置換されたアリール、 複素環式、第四級アミンまたは有機酸部分よりなる群から選択されそしてＹはＮ Ｏ₂、ＳＯ₃−、Ｈ、ハライド、アルキルまたは ＳｉＺ₃よりなる群から選択され、ここでＺはアルキルまたはアリールである］ に示される一般的な構造を有する。好ましくは、ＹはＨである。好適な態様では 、Ｒは ［式中、Ｒ₁、Ｒ₂、およびＲ₃のいずれも独立してＨ、アルキル、アリール、シ リル、ハライド、ヒドロキシド、メルカプチド、アルコキシド、チオアルコキシ ド、アミン、スルホネートまたはカルボキシレートよりなる群から選択され、そ してＸはアミン、スルホネートまたはカルボキシレートよりなる群から選択され る］ である。 本発明のＭＢＴＨ誘導体は広範囲のカップリング相手、例えば芳香族アミン類 、フェノール類、および置換されたフェノール類との酸化反応を受けることがで きる。さらに、そのような反応は室温および４〜１１に変動できるｐＨにおいて 効率的に進行できる。本発明の誘導体の好適な形態では、酸化反応は約４〜約７ のｐＨにおいて最適であるため、例えば３−ジメチルアミノ安息香酸および８− アニリノ−１−ナフタレンスルホネート類の如き当該アミン染料対相手と一緒に なって診断化学において特に有用である。 酸遊離形態または酸水和物形態のいずれのＭＢＴＨとも異なり、これらの誘導 体は１００℃に１６時間程度加熱する時でも非常に安定である。さらに、酸化反 応の条件においては、過酸化物で触媒作用を受ける酵素、 例えばホースラディッシュペルオキシダーゼ、が酸化カップリング反応において 特に有効である。実施例１−ＭＢＴＨ誘導体の合成 メタ［３−メチル２−ベンゾチアゾリノンヒドラゾン］Ｎ−スルホニルベンゼン スルホネートモノナトリウム、［２］の合成合成経路 物質 ３−メチル２−ベンゾチアゾリノン塩酸塩（ＭＢＴＨ.ＨＣｌ）、ＮａＩ、水 酸化テトラブチルアンモニウム、塩化メチレンおよびｎ−メチル−２−ピロリド ンをウィスコンシン州ミルウォーキーのアルドリッヒ・カンパニーから購入しそ して精製せずに使用した。トリエチルアミンはベーカー・ケミカルズから得られ そしてニュージャージー州フィリッ プスブルグのバクスター・カンパニーにより販売されている。１,３ジスルホニ ルクロライドベンゼンはニューヨーク州ロンコンコマのフルカ・ケミカルズまた はニューハンプシャー州ウィンダムのランカスター・ケミカルズから購入された 。 ［１］の合成 ４グラムサンプルのＭＢＴＨ.ＨＣｌを磁気撹拌棒が装備された１５０ｍｌエ ルレンマイヤーフラスコの中に充填し、そして５０ｍｌのｎ−メチル−２−ピロ リドンおよび５ｍｌのトリエチルアミンを加えた。フラスコにゴム隔壁でふたを しそして磁気撹拌熱板の上に置いた。混合物を激しく撹拌しながら０．５時間に わたり６０−７０℃に加熱して、黄色スラリーを生成した。フラスコを氷浴の中 に入れて冷却した。 ５グラムサンプルの１，３ジスルホニルクロライドベンゼンを磁気撹拌棒が装 備された２５０ｍｌエルレンマイヤーフラスコの中に加えた。フラスコを氷浴の 中に下げ、そして２０ｍｌのｎ−メチル−１−ピロリドンを加えた。混合物を全 ての固体が溶解するまで撹拌した（約１５分間）。予め得られたＭＢＴＨを含ま ないベーススラリーを溶液中に傾斜させた。生じた薄黄色混合物を氷浴温度にお いて１.５時間にわたり反応させた。その時間後に、反応を１０ｍｌの２Ｎ ＨＣ ｌで停止し、そしてそれを室温でさらに３０分間撹拌した。５０ｍｇの１２メッ シュのノルチ(Norti)（活性炭ペレット）を溶液に加えて、１０分間の撹拌後に 、薄黄色溶液を与えた。それを次にアスピレーターを用いて微細等級フリットを 通して濾過した。黄色ないし淡褐色の滑らかな溶液が得られた。３００ｍｌの２ Ｎ ＨＣｌを撹拌されている黄色溶液に加えると、灰白色粉末の沈澱が生じた。 固体を真空濾過により集めそして生成物を ２５ｍｌの脱イオン水で３回洗浄した。１１０℃において真空中で２時間乾燥す ると、５.６グラムの灰白色生成物が得られた。この生成物を¹Ｈ ＮＭＲおよび ＨＰＬＣで分析すると９７％純度であった。 化合物［１］はほとんどの一般的有機溶媒および水中にあまり可溶性ではない 。しかしながら、それは塩基性溶液並びに極性溶媒、例えばＤＭＳＯ、ＮＭＰお よびＤＭＦの中には可溶性である。 ［２］の合成 ２.０グラムサンプルの粗製［１］を５０ｍｌの塩化メチレン中に懸濁させた 。４ｍｌの１Ｍ水酸化テトラブチルアンモニウムを２分間にわたり撹拌されてい る懸濁液にゆっくり加えて淡黄色溶液を与えた。この溶液を１０ｍｌの脱イオン 水で洗浄しそして無水硫酸ナトリウム上で乾燥した。硫酸塩を重力濾過により除 去し、そして生じた混合物を回転−蒸発器を用いて蒸発乾固した。濃厚な黄色の 油が集められた。この油を１２５ｍｌのアセトンで抽出し、そして１０ｍｌのア セトン中２０％ＮａＩを５分間にわたり加えた。白色沈澱が現れた。混合物をさ らに２０分間反応させ、そして沈澱を微細等級フリットを用いる真空濾過により 集めた。生じた灰白色固体を２０ｍｌのアセトンで３回洗浄した。１１０℃で４ ５分間乾燥すると、１.３グラム（６５％）の所望する生成物が得られた。 化合物［２］は水中および水−アルコール混合物中に非常に可溶性である。こ の固体は空気および光中で安定であるが、その溶液は光に長時間にわたり呈され ると淡黄色の曇った混合物にゆっくり分解する。 実施例２試験装置の製造 重合体膜（反応マトリックス）の片を表１中の水性浸漬液の中に飽和するまで 沈める。それを浸漬液から除去しそして過剰の試薬をガラス棒で拭いとる。片を 次に５６℃の空気循環炉の中に約５−１０分間吊して乾燥し、その時間後に片を 取り出しそして表１に記載された有機浸漬液の中に飽和するまで浸す。再び、そ れを前の段階の通りにして乾燥する。生じた片を試験するために望まれる形状に 作成する。 実施例３−グルコースの測定 グルコースを含有する血液サンプルを試薬を含浸させた片の表面上に適用する 。サンプルを直ちにマトリックス中に吸収させると、青色が現れる。色の強度は 時間につれて増加しそして分析物の濃度に比例する。色強度を基にして、グルコ ース濃度を標準目盛り曲線と比べることにより測定する。 同様に、過酸化水素（有機過酸化物、第二鉄塩(ferric)およびキノン）の水溶 液も試薬を含浸させた片上で望まれる青色を生ずる。分析物の濃度は上記と同じ 手段により測定できる。 本発明は今回完全に記載されており、本発明の精神および範囲から逸脱しない 限りいずれの改変でも行えることは当技術の専門家には明らかであろう。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ， ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)， ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，Ｃ Ｈ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ， ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，Ｍ Ｋ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ， ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．サンプル中の分析物の存在または量を測定するための試薬システムを含有し ており、該試薬システムが該サンプル中の該分析物の量を指示する量の酸化剤を 生成する酵素を含んでなる試験装置であって、 該試薬システムが該酸化剤により酸化されると発色団を生成する染料対を含んで なり、該染料対が式： ［式中、Ｒはアルキル、置換されたアルキル、アリール、置換されたアリール、 複素環式、第四級アミンまたは有機酸部分よりなる群から選択されそしてＹはＮ Ｏ₂、ＳＯ₃−、Ｈ、ハライド、アルキルまたは ＳｉＺ₃よりなる群から選択され、ここでＺはアルキルまたはアリールである］ を有する化合物を含んでなる改良。 ２．Ｒが ［式中、Ｒ₁，Ｒ₂、およびＲ₃のいずれも独立してＨ、アルキル、アリール、シ リル、ハライド、ヒドロキシド、メルカプチド、アルコキシド、チオアルコキシ ド、アミン、スルホネートまたはカルボキシレートよりなる群から選択され、そ してＸはアミン、スルホネートまたはカルボキシレートよりなる群から選択され る］ である、請求の範囲第１項記載の試験装置。 ３．ＹがＨである、請求の範囲第２項記載の試験装置。 ４．該酵素がグルコースオキシダーゼ、コレステロールオキシダーゼ、アルコー ルオキシダーゼ、ウリカーゼ、アルデヒドオキシダーゼ、およびグリセロホスフ ェートオキシダーゼよりなる群から選択される、請求の範囲第１項記載の試験装 置。 ５．該酵素がさらにペルオキシダーゼまたはペルオキシダーゼ様性質を有する無 機錯体も含んでなる、請求の範囲第４項記載の試験装置。 ６．該酵素がグルコースオキシダーゼおよびホースラディッシュペルオキシダー ゼを含んでなる、請求の範囲第４項記載の試験装置。 ７．該染料対がさらに３−ジメチルアミノ安息香酸も含んでなる、請求の範囲第 １項記載の試験装置。 ８．該染料対がさらに８−アニリノ−１−ナフタレンスルホネートも含んでなる 、請求の範囲第１項記載の試験装置。 ９．該化合物がメタ［３−メチル２−ベンゾチアゾリノンヒドロゾン］Ｎ−スル ホニルベンゼンスルホネートモノナトリウムである、請求の範囲第１項記載の試 験装置。