JPH10504355A

JPH10504355A - セルロース含有布帛ののり抜き方法

Info

Publication number: JPH10504355A
Application number: JP8506933A
Authority: JP
Inventors: ルンド，ヘンリック
Original assignee: Novo Nordisk AS
Current assignee: Novo Nordisk AS
Priority date: 1994-08-15
Filing date: 1995-08-14
Publication date: 1998-04-28
Also published as: HUT76661A; AU3161595A; TR199500988A2; EP0777779A1; PL318784A1; WO1996005353A1; MX9701113A; BR9508591A

Abstract

(57)【要約】セルロース含有布帛又は繊維を、一定タイプのセルロース分解酵素、例えばカルボキシメチルセルロース(CMC)に対する活性および少なくとも0.01ｓ^-1のｋ_catに相当するpH8.5 でのセロトリオースに対する触媒活性を有しそして好ましくは微生物起源由来であるか、より好ましくはフミコラ（Humicola）、トリコデルマ(Trichoderma)、マイセリオフトラ（Myceliophthora）、ペニシリウム(Penicillium)、イルペックス(Irpex)、アスペルギルス(Aspergillus)、シタリジウム(Scytalidium)又はフサリアム（Fusarium）の菌株により得ることができるか、又はそれらの菌株から由来する、セルロース分解酵素を用いた処理に委ねることにより、布帛又は繊維を本質的に損傷することなくのり抜きすることができる。

Description

【発明の詳細な説明】セルロース含有布帛ののり抜き方法本発明は、セルロース含有繊維又は布帛ののり抜き方法、および該方法で用いるための酵素組成物に関する。発明の背景布帛を織る間、糸に相当の機械的引張り力をかける。破断を防止するため、糸はゼラチン状物質（のり剤）を用いてコーティングする（のり付け）により通常強化される。最も普通の糊付剤は、天然又は改質形であり、しかも他の高分子化合物例えばポリビニルアルコール(PVA)、ポリビニルピロリドン(PVP)、ポリアクリル酸(PAA)又はセルロースの誘導体（例えば、カルボキシメチルセルロース(CM C)、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース又はメチルセルロース）はのり剤中に豊富に存在していてもよい。少量の例えば油脂を、また表面の潤滑化の目的でのり剤に添加できる。のり付けの結果、糸は十分な程度まで水又は仕上げ剤又は組成物（標白用、染色用、しわ防止用）を吸収することはできない。かくして、均一でかつ耐久力のある仕上げが、布帛からのり剤の除去、いわゆるのり抜き後のみに得ることができる。ものも、のり剤が、著るしい量のカルボキシメチルセルロース(CMC)又は他のセルロース誘導体を含んでなる場合、のり抜き処理は、単独で又は他の物質と組合せて、所望により他の酵素、例えば酵素、例えばデンプン分解酵素例えばアミラーゼと組合わせでセルロース分解酵素を用いて行うことができる。しかし、セルロース又はセルロース誘導体を含むのり抜き布帛又は繊維の場合に、セルロース分解酵素を用いたそのような処理は、完全に又は部分的にのり剤を分解するのみならず、繊維又は布帛をもまた分解するかもしれず、その結果未のり抜き繊維又は布帛の強度又は重量と比較して強度損失および／又は重量損失を有するのり抜き布帛又は繊維をもたらす。本発明の目的は、本質的に布帛を傷つけることなく、すなわち強度損失又は重量損失又はその双方を誘発することなくセルロース含有繊維又は布帛をのり抜きする方法を提供することを目的とする。発明の要約驚くべきことに、以下の内容が見出された；すなわち、繊維又は布帛を一定のタイプのセルロース分解酵素による処理に委ねることにより、繊維又は布帛を本質的に傷めることなくセルロース含有布帛又は繊維をのり抜きすることが可能である。従って、本発明はセルロース含有布帛又は繊維をのり抜きする方法を提供し、その方法はその布帛又は繊維を、カルボキシメチルセルロース(CMC)に対する活性および毎秒当たり少なくとも0.01のｋ_catに相当するpH8.5 でのセロトリオースに対する触媒活性を有するセルロース分解酵素を用いて処理することを含んでなる。別の面において、本発明方法において使用するための組成物を提供し、この組成物はカルボキシメチルセルロース(CMC)に対する活性および毎秒当たり少なくとも0.01のｋ_catに相当するpH8.5 でのセロトリオースに対する触媒活性を有するセルロース分解酵素を含んでなる。本発明方法を用いることにより、セルロース含有のり抜きされた布帛又は繊維を得ることができ、この布帛又は繊維はのり抜きされた布帛又は繊維と比較して強度損失又は重量損失を実質的に示さない。発明の詳細な記載語句“のり抜き”は、常法で、すなわち布帛からののり剤の除去であると理解すべきように意図される。本明細書および請求の範囲において、語句“セルロース分解酵素”、“セルラーゼ”および“セルラーゼ成分”は、セルロースを加水分解する酵素を意味することが意図される。セルロース分解酵素、セルラーゼ又はセルラーゼ成分は、定められた微生物により生産されるセルラーゼ系、例えばセロビオヒドロラーゼ、エキソ−セロビオヒドロラーゼ、エンド−β−１，４−グルカナーゼ、β−グルコシダーゼとして通常同定されるセルラーゼ酵素成分を含む幾つかの種々のセルラーゼ酵素成分を大部分含んでなる、例えばセルラーゼ系において見出される成分であってよい。択一的に、セルラーゼ成分は、単一成分であってよく、すなわち、定められた微生物によって生産されるセルラーゼ系において通常見出される他のセルラーゼ成分を実質的に有しない成分であってよく、単一成分は組換え体成分であってよく、すなわち単一成分をコードするDNA 配列のクローニング、引き続き細胞のそのDNA 配列による変質転換および宿主内での発現によって生産される組換え体成分であってよい。宿主は、好ましくは異種宿主であるか、しかし宿主は一定の条件下、同種細胞であってもよい。天然又は未修飾セルラーゼ又はセルラーゼ成分は、セルロース分解酵素を生産し得ることが知られている微生物、例えばフミコラ（Humicola）、サーモマイセス(Thermomyces)、バシラス（Bacillus）、トリコデルマ(Trichoderma)、フサリアム（Fusarium）、マイセリオフトラ（Myceliophthora）、ファネロケーテ(Phanerochaete)、イルペックス(Irpex)、シタリジウム(Scytalidium)、シゾフィラム(Schizophyllum)、ペニシラム(Penicillium)、アスペルギルス(Aspergillus)、およびゲオタイカム(G eotricum)の種から由来することができる。由来される成分は、同族又は異種成分のいずれかであってよい。好ましくは、成分は同種である。しかし、高度に精製されたセルラーゼ成分に対して生起した抗体と免疫学的に反応性でありそして特定の微生物から誘導される異種成分もまた好ましい。本発明方法で用いられる有用なセルラーゼは、微生物起源であることが好ましい。本発明の好ましい態様において、セルロース分解酵素は、フミコラ（Humicola）、トリコデルマ（Tric hoderma）、マイセリオフトラ（Myceliophthora）、ペニシリラム(Penicillium) 、イルペックス(Irpex)、アスペルギルス(Aspergillus)、シタリジウム(Scytali dium)又はフサリアム（Fusarium）から成る群から選ばれる菌株により得ることができるか、又はそれらの菌株から由来する。より好ましくは、酵素はフミコラインソレンス(Humicola insolens)、フサリウムオキシスポラム（Fusarium oxysporum）又はトリコデルマレシー（Trichoderma reesei）の菌株から得ることができるか又は由来できる。本発明に関連して、語句“由来できる”又は“から由来する”は、対象の生物体の菌株により生産されるセルラーゼを示すのみならず、そのような菌株から単離されたDNA 配列によりコードされそして該DNA 配列で形質転換された宿主生物内で生産されるセルラーゼをも示すことが意図される。更に、その語句は、合成のおよび／又はcDNA 起源のDNA 配列によりコードされそして対象のセルラーゼの同定特性を有するセルラーゼを示すことが意図される。好ましくは、本発明方法で用いられるべきセルロース分解酵素は、組換えセルラーゼ、すなわち、他のタンパク質又はセルラーゼタンパク質を本質的に有しないセルラーゼである。組換えセルラーゼ成分は、当業者に好都合の標準法に従ってクローン化されそして発現され得る。好都合には、菌類起源の親セルラーゼが用いられ、例えば菌類属フミコラ（Hu micola）又はフサリアム（Fusarium）の菌株から由来できるセルラーゼが用いられる。例えば、親セルラーゼは、菌類種Ｈ．インソレンス（insolens）又はＦ．オキシスポラム(oxysporum)の菌株から由来できる。これらのセルラーゼの多くは、全て良好に特性化されておりそしてそれらの全アミノ酸配列が開示される。好ましい態様において、親セルラーゼは、Ｈ．インソレンス（insolens）、Ｆ．オキシスポラム(oxysporum)およびトリコデルマレシー（Trichoderma reesei ）セルラーゼから成る群から選ばれるか、又は該親セルラーゼのいずれかの機能性類似体であり、この類似体は、ｉ）親セルラーゼのアミノ酸配列と少なくとも60％相同であるアミノ酸配列を含んでなり、 ii）該親セルラーゼに対して生起した抗体と反応し、および／又は iii）該親セルラーゼをコードするDNA 配列と同じプローブとハイブリダイズするDNA 配列によってコードされる。類似体の性質ｉ）は、第二の配列から第一の配列の誘導を示す親セルラーゼと類似体間の一致の程度を示すことを意図される。特に、ポリペプチドは、もしもそれぞれのアミノ酸配列の比較が、約60％超、例えば70％，80％，85％，90％又は95％よりも大きい同一性を表わす場合、親セルラーゼと相同であると考えられる。相同のセルラーゼは、例えば１種以上の性質例えば熱安定性、酸／アルカリ安定性、最適温度又は最適pH等を改善するために製造された遺伝子操作したセルラーゼであってよい。親セルラーゼの類似体の追加の性質ii）およびiii）は、次の如く測定できる：性質ii）、すなわち免疫交差反応は、親セルラーゼの少なくとも１つのエピトープに対し生起した抗体又は該エピトープと反応性を有する抗体を用いて分析できる。抗体（これは、モノクローナル又はポリクローナルのいずれかであってよい）は、例えば、Hudson et al.，1989 によって記載された如き当業者に公知の技術を用いて製造できる。免疫交差反応は、当業者に公知の分析を用いて測定でき、その例は例えばHudson et al.，1989 によって記載される如きウェスターンブロッティング（Western Blotting）又はラジアル免疫拡散分析である。先に定義した性質iii）に従った類似体の説明において用いられるオリゴヌクレオチドプローブは、全又は部分ヌクレオチド又は親セルラーゼのアミノ酸配列を基礎にして好都合に製造せきる。ハイブリッド形成は、DNA 配列をハイブリッド形成させ得る何らかの適当な条件下で行うことができる。例えば、そのような条件は、例えば、５×SSC 中でのプレソーキングおよび20％のホルムアミド、５ ×デンハルト（Denhardt's）溶液、50mMのリン酸ナトリウム、pH6.8および50μ ｇの変性の音波処理された仔ウシの胸腺DNA の溶液中〜40℃で１時間プレハイブリッド形成次いで 100μＭのATP を加えた同溶液中で〜40℃で18時間ハイブリッド形成を含む、特定した条件下でのハイブリッド形成、又は例えばSambrook et al.，1989 によって記載された他の方法である。本発明に従った有用なセルロース分解酵素の例は、次の通りである：エンドグルカナーゼ成分であって、この成分はフミコラインソレンス(Humic ola insolens)，DSM 1800から由来した高精製の約50kDエンドグルカナーゼに対して生起した抗体と免疫反応性であるか、又はこの成分セルラーゼ活性を示す約 50kDのエンドグルカナーゼの相同体又は誘導体である。好ましいエンドグルカナーゼ成分は、PCT 特許出願No.WO91/17244 に開示されたアミノ酸配列（これは、添付の配列番号２において示される）を有するか、又は該配列と少なくとも60％、好ましくは少なくとも70％、より好ましくは75％、更に好ましくは少なくとも 80％、より好ましくは85％、特に少なくとも70％相同であるアミノ配列を有する該エンドグルカナーゼの変異体である。以下において、エンドグルカナーゼ成分は、EG Ｉと称され；そしてエンドグルカナーゼ成分は、フサリアムオキシスポラム(Fusarium oxysporum)，DSM 2672 から由来する高精製の約50kD（見掛け分子量、アミノ酸組成は、２ｎグリコシル化部位を有して45kDに相当する）のエンドグルカナーゼに対して生起した抗体と免疫反応性であるか、又は該エンドグルカナーゼ成分は、セルラーゼ活性を示す約50kDのエンドグルカナーゼの相同体又は誘導体である。好ましいエンドグルカナーゼ成分は、PCT 特許出願No.WO91/ 17244，Fig．13で開示されたアミノ酸配列（このアミノ酸配列は添付の配列番号３において示される）を有するか、又は該配列と少なくとも60％、好ましくは少なくとも70％、より好ましくは75％、より好ましくは少なくとも80％、より好ましくは85％、特に少なくとも90％相同であるアミノ酸配列を有する該エンドグルカナーゼの変異体である。以下において、エンドグルカナーゼ成分は、EG Ｉ− Ｆと称される。EG Ｉ−Ｆセルラーゼ成分は、添付された配列番号３のアミノ酸配列に対応するDNA 配列を含有するプラスミドを用いて形質転換した後のアスペルギルスオリゼ（Aspergillus oryzae ）によりそして通常のタカ（Taka）プロモーターおよびAMG プロモーターを用いて生産可能である。EG Ｉ−Ｆは、カチオンクロマトグラフィーを用い均質性に至るまで精製できそして９を超えるpIを有する。計算されたpIは、Adv．Protein Chem．17，p.69-165（1962）(C．Tan Ford)からのPHKa値を用いアミノ酸組成に基づいて９である。分子吸光係数は、計算の結果58180 であり；そしてセルラーゼの幾つかは、公開ヨーロッパ特許出願EP−A2−271004において開示され、セルラーゼは少なくとも 500以上の非分解指数(NDI)を有しそして少なくとも７以上の最適pHを有する好アルカリ性セルラーゼであるか、又は少なくとも８以上のpH でのその相対活性は、カルボキシメチルセルロース(CMC)を基質として用いるとき、最適条件で50％はそれ以上の活性でだり；セルラーゼは好ましくは、アルカリセルラーゼＫ（バシラス（Bacillus）SP． KSM−635，FERM BP 1485 により生産）；アルカリセルラーゼＫ−534 （バシラス（Bacillus）SP． KSM−534，FER M BP 1508 により生産）；アルカリセルラーゼＫ−539 （バシラス（Bacillus） SP． KSM−539，FERM BP 1509 により生産）；アルカリセルラーゼＫ−577 （バシラス（Bacillus）SP． KSM−577，FERM BP 1510 により生産）；アルカリセルラーゼＫ−521 （バシラス（Bacillus）SP． KSM−521，FERM BP 1507 により生産）；アルカリセルラーゼＫ−580 （バシラス（Bacillus）SP． KSM−580，FER M BP 1511 により生産）；アルカリセルラーゼＫ−588 （バシラス（Bacillus） SP． KSM−588，FERM BP 1513 により生産）；アルカリセルラーゼＫ−597 （バシラス（Bacillus）SP． KSM−597，FERM BP 1514 により生産）；アルカリセルラーゼＫ−522 （バシラス（Bacillus）SP． KSM−522，FERM BP 1512 により生産）；CMCase Ｉ，CMCase II（両方ともバシラス（Bacillus）SP． KSM−635 ，FERM BP 1485 により生産）；アルカリセルラーゼＥ−IIおよびアルカリセルラーゼＥ−III（両方ともバシラス（Bacil lus ）SP． KSM−522，FERM BP 1512 により生産）から成る群から選ばれる。語句“セルロース含有繊維／布帛”および“セルロース系繊維／布帛”は、セルロース又はセルロース誘導体を含有するセルロース含有物質から、例えば木材パルプおよびから製造したあらゆるタイプの布帛、特に織布を示すことが意図される。布帛上に存在するセルロース又はセルロース誘導体の主部分は、ヤーン、通常ワープ・ヤーンを製織する前に通常のり付けされている。本発明に関連して、語句“布帛”は、ガーメントおよび他のタイプの加工された布帛を含むことがまた意図される。セルロース系布帛の例は、綿、ビスコース（レーヨン）；ビスコース綿又はリオセルと他の繊維例えばポリエスチルとの全てのブレンド；ビスコース／綿ブレンド、レオセル／羊毛ブレンド；アマ（リネン）から造られる布帛、ラミーから造られる布帛、並びにセルロース系繊維と他の繊維例えば羊毛、ポリエステル、ポリアミドおよびアクリル繊維との全てのブレンド、例えば、ビスコース／綿／ポリエステルブレンド、羊毛／綿／ポリエステルブレンド、アマ／綿ブレンド等を含むセルロース繊維に基づいたセルロース系繊維の全てのブレンドである。プロセス条件次のように理解されるであろう、すなわち、本発明方法は、例えば、Olson，E ．S.（1983）、およびPeter，M．and Rouette H．K．(1988)によって記載される如く、当業者に公知の全ての好適なのり抜きプロセスに従って行うことができる。従って、本発明を実施する際に用いられるべきプロセス条件は、使用するのに望ましい特有の装置又は特定のタイプのプロセスに合致するように選んでもよい。本発明に関連して用いられるべきプロセスタイプの好ましい例には、ジッガー／ウインチ、パッド−ロール（Pad-Roll）およびパッド−スチーム (Pad-Steam)タイプが含まれる。これらのタイプは更に以下に詳しく論じられる。本発明方法は、バッチ、半連続プロセス又は連続プロセスとして行うことができる。例として、その方法は次の工程を含んでいてもよい：（ａ）毎秒当たり少なくとも0.01のｋ_catに相当するpH8.5 でセロトリオースに対する触媒活性およびカルボキシメチルセルロース(CMC)に対する活性を有するセルラーゼを（最少として）含有するのり抜き浴に布帛を含浸させ、引き続き行なわれるべき反応に必要な液体の量（通常乾燥布帛の重量の60〜120 ％）を保持するために過剰の液体を絞り取り、（ｂ）布帛を所望の反応温度、一般に20°〜120 ℃にもたらすために含浸布帛を蒸熱に委ね、次いで（ｃ）のり抜きを生起せしめるために十分な時間（通常数分ないし数時間）、Ｊボックス、Ｕボックス、カーペット機等の中に布を、巻いて又は折りたたんで保持する。行なわれるべき処理の前に、有用なセルラーゼは、のり抜きプロセスで好都合に用いられる他の成分と好都合に混合できる。そのような成分の例は、他の酵素、好ましくは以下のような商標的に入手可能なアミラーゼであり、このアミラーゼはのり抜きに対して用いられ、例えば微生物アミラーゼ、例えばWO91/00353又はWO91/16423で記載される如く、バシラス（Bacillus）、例えばＢ．リケニホルミス(licheniformis)，Ｂ．アミロリクエファシエンス(amyloliquefaciens)，Ｂ．ズブチリス（subtilis），Ｂ．ステアロサーモフィラス（stearothermophilus )、又はアスペルギルス(Aspergillus)；又はそれらの変異体によって生産可能なアミラーゼである。のり抜きに対する商標的なアミラーゼの例は、アクアザイム(Aquazym)（商標）、アクアザイムウルトラ(Aquazym Ultra)、デザイム（Dezyme）（商標）、サーモザイム（Thermozyme）（商標）およびノボノルディスクＡ／Ｓのターマミル（商標）である。更に好ましいアミラーゼは、国際特許出願PCT/DK94/00371（これはその番号を引用して本明細書に加えられる）で開示された酸化安定性α− アミラーゼ変異体である。従って、本発明の組成物において、組合わされたのり抜きおよび漂白プロセス（単一操作において行なわれる）、例えば強塩基、界面活性剤、活性化剤、アミロース分解酵素および所望によりセルロース分解酵素と組合わせた塩化ナトリウムを用いるプロセス、又は過酸化水素、金属イオン封鎖剤、界面活性剤、アミロース分解酵素および所望によりセルロース分解酵素を含有する浴中で緩衝剤として四硼酸ナトリウム十水塩を用いるプロセスにおいて組成物を有用ならしめるため改善された酸化安定性を有するα−アミラーゼをとり入れることは好都合であろう。実施されるべきプロセスに対して要求される更なる成分は、別個に加えることができる。そのような成分の例には、安定剤および湿潤剤が含まれる。安定剤は、セルロース分解酵素を安定化する薬剤であってよい。湿潤剤は、繊維の湿潤性を改善し、これにより急速でかつのり抜きでさえ得ることもできる。湿潤剤は、好ましくは酸化安定タイプのものである。本発明方法の好ましい態様において、有用なセルラーゼはのり抜き液１ｌ当たり10〜5000EPU、好ましくはのり抜き液１ｌ当たり50〜500EPUの範囲内のセルラーゼ活性に相当する、１ｇ／ｌを超える量、好ましくは、１〜20ｇ／ｌ、例えば１〜10ｇ／ｌ，１〜５ｇ／ｌ又は１〜３ｇ／ｌの量で用いられる。次のように理解されるであろう；すなわち、用いられるセルラーゼの量は、対象のセルラーゼ製品の処方に依存する。本発明ののり抜きに対して用いられるべき特定タイプのプロセスにかかわらず、本発明方法は30〜100 ℃、例えば35〜60℃の範囲内の温度で、そして３〜11、好ましくは７〜９の範囲内のpHで通常行なわれる。しかし、実際のプロセス条件は、以下の開示から明らかなように、これらの範囲内で広く変化してもよい。本発明に関連して用いられるべきプロセス条件の好ましい例には、以下の条件が含まれる：１〜５ｇ／ｌの有用なセルラーゼ、および0.25〜５ｇ／ｌの湿潤剤、例えばグルノー（ドイツ）から入手可能な商業製品アルビル(Arbyl)Ｒを用いる、例えばジャガー／ウインスタイプのバッチタイププロセス、このプロセスは（NaOHの添加によって得られる）７〜９の範囲内のpHおよび40〜55℃の範囲内の温度で、典型的には１〜２時間行なわれる。１〜５ｇ／ｌの有用なセルラーゼ、および0.25〜５ｇ／ｌの湿潤剤、例えばアルビル(Arbyl)Ｒを用いる、例えばパッド−ロール（Pad-Roll）タイプの半連続プロセス、このプロセスは（NaOHの添加によって得られる）７〜９の範囲内のpH および30〜50℃の範囲内の温度で、典型的には12〜24時間行なわれる。前記方法は、該方法の条件に対し十分耐えられる全ての装置で行ってもよいと理解されるであろう。更に、以下の内容は明らかであろう；すなわち、本発明方法で用いられるべきセルラーゼのｋ_cat制限に加えて、このセルラーゼは３を超えるpH、例えば約pH ７を超えるpHで活性であるものが好ましい。好ましくは、セルラーゼは７〜９の pH範囲内で高活性を有する。本発明方法は、セルラーゼ処理を補足し得るもう一つののり抜き処理の前又は後に用いられ、補足処理は好ましくはアミラーゼを用いた酵素的のり抜き処理である。本発明の組成物有用なセルラーゼはそのまま添加することができるけれども、そのセルラーゼは他ののり抜き酵素、例えば前記のアミラーゼを、好ましくは更に含んでなる適当なのり抜き組成物に製剤化するのが好ましい。本発明ののり抜き組成物は、粒質物、好ましくは無粉塵性粒質物、液体、特に安定化液体の形で、又は保護された形で各酵素の混合物であってよい。無粉塵性粒質物は、例えば米国特許第 4,106,991および米国特許第 4,661,452（双方ともノボノルディスクＡ／Ｓに付与）に記載の如く製造されそして所望により公知の方法で被覆される。液体酵素調製品は、例えば、ポリオール例えばプロピレングリコール、糖又は糖アルコール又は酢酸を確立された方法に従い、添加することにより安定化される。他の酵素安定剤は当業者に周知である。保護された酵素は、ヨーロッパ特許 238216に開示の方法に従って製造される。原則的には、カルボキシメチルセルロース(CMC)に対する活性および少なくとも0.01ｓ^-1のｋ_catに相当するpH8.5 でのセロトリオースに対する触媒活性を有するセルロース分解酵素および所望によりアミラーゼを含んでなる本発明の組成物は、本発明の組合わされたプロセスにおいて用いられるべき他のいかなる薬剤を含んでいてもよい。しかし、本発明組成物は、漂白剤および他の高酸化剤を有しないことが好ましい。本発明の組成物は、湿潤剤、金属イオン封鎖剤および乳化剤から成る群から選ばれる１以上の他の成分を含んでいてもよい。適当な湿潤剤の例は、先に開示される。乳化剤は、布帛上に存在する疎水性不純物を乳化するのに有効である。分散剤は抽出された不純物が布帛上に再付着することを防止するのに有効である。金属イオン封鎖剤はイオン例えばCa，MgおよびFeを除くのに有効であり、これらのイオンはプロセスに不都合を与えるかもしれずそして金属イオン封鎖剤の例には、カセイソーダ（NaOH）およびソーダ灰（炭酸ナトリウム）が含まれる。セロトリオースに対するセルラーゼの活性の測定ｋ_cat（ｓ^-1）を用いた、セロトリオースに対したセルラーゼ活性は、組合わされた分析により測定できる：セロトリオース →グルコース＋セロビオース（触媒：セルラーゼ）グリコール＋Ｏ₂＋H₂O →グルコナート＋H₂O₂ （触媒：グルコースオキシダーゼ） H₂O₂＋ABTS^R →ABTS^ox（触媒：ペルオキシダーゼ）この分析は、418nmで分光光度的に追跡される（418nmのABTS^oxの最大吸光度）。方法： GOD−ペリド試験キット（ベーリンガーマンハイムから入手可能、製品12403 6）を用いた。試験キット中の緩衝剤−酵素溶液を 500mlのミリ(milli)Ｑ水に溶解する。溶液のpHを8.5 に調製した（NaOH）。 80mgのABTS^R（ベーリンガーマンハイムから入手可能、製品756407）を、10m g／mlのABTS^Rの総濃度に対応する10mlの GOD−Peri odに溶解した。水に溶解した５mmole のセロトリオース（メルクから入手可能art．24741）の基質ストック溶液を製造した。1000μ−mole，500μmole，376μmole，250μmol e，100μmole and 60μmoleに対応する水に希釈した溶液を製造した。反応混合物を、１部の GOD−Periodと１部の基質溶液を混合することにより製造した。 1.0〜3.0 μmoleの濃度で測定されるべきセルラーゼ酵素の溶液を製造した。 50μｌの酵素溶液および 450μｌの反応混合物を混合した。測定は、418nmの波長で、１cmのキュベット、40℃に温度設定されたHP 8452A ダイオードアレー分光光度計を用いて行った。20秒毎合計 600秒間ABTSの酸化を測定することにより、反応を追跡した。計算：ｋ_cat（ｓ^-1）を用い、セロトリオースに対するセルラーゼ活性を、ラインウェーバーバーク（Lineweaver−Burk）プロット（１／Ｖ対１〔Ｓ〕のプロット）から計算した：傾きおよび交点を、線状回帰分析により測定した。次の定数を計算に対して用いた：セルラーゼ： ε＝66,310Ｍ^-1・cm^-1 ABTS^ox： ε＝0.0323μmole^-1・cm^-1 次の結果を分析から得た：エンドグルカナーゼのセルロース分解活性を、分析標準に対して測定しそして単位ECU で表わす。セルロース分解酵素は、CMC を加水分解し、これはりインキュベーション混合物の粘度を減少させる。得られる粘度の減少は、振動粘度計(例えば、ソフラゼー（フランス）からのMIVI 3000)により測定できる。 ECU によって測定される、セルロース分解活性測定は、分析方法AF301.1（これは要求により出願人から入手可能である）に従って行うことができる。 ECU 分析は、カルボキシメチルセルロース(CMC)の溶液の粘度を減少させるための試料の能力を測定することにより試料中に存在する触媒活性の量を定める。分析は、CMC 基質の粘度を減少させるための相対応的酵素標準を用い、40℃，pH 7.5 で行なわれる。本発明を、更に次の実施例により非制限的に説明する。例１ラウンダ−Ｏ−メーター(Launder−Ｏ−meter)中でフミコラインソレス（Hu micola insolens）EG ＩおよびEG Ｖを用いた綿ニットフェアのインキュベーション綿布帛に対するフミコラインソレス(Humicola insolens)由来のエンドグルカナーゼＩ（EG Ｉ）の著るしい低活性を説明するため、フミコラインソレンスエンドグルカナーゼＶ（EG Ｖ、約43kDa，WO91/17243 で開示）についての比較研究を行った。双方のセルラーゼはECU による相当の活性を有しそして従ってカルボキシメチルセルロースおよびのり剤組成物中に存在し得る多数の他のヒドロ−コロイドセルロース誘導体を分解することができる。のり抜きされた 100％綿ニットウェアを、以下の条件下で２種の異なる酵素を用いラウンダ−Ｏ−メーター中で処理した。布帛：漂白された両面編成 100％綿(205ｇ／ｍ²)、ビーカー当たり７ｇ（２個のスワッチ、各々約13cm×13cm）。溶液量：140ml（LQR １：20）インキュベーション：55℃で60分各ラウンダ−Ｏ−メータービーカーに、20個の鋼球（ｄ＝14mm，ｗ＝11ｇ）を加えセルラーゼ処理中布帛上で機械的効果を増加させた。次の結果を得た：重量損失は、次のように定義される：重量損失パーセンテージ（％）＝〔１−（処理後の重量）／（処理前の重量）〕・100 結果は以下の内容を実証する；すなわちEG Ｉセルラーゼは、EG Ｖセルラーゼによって引き起こされた重量損失と比較して綿に対し本質的に重量損失を与えない。例２この実施例は以下の２点を示している；すなわち第一に請求の範囲で説明される構成要件によって特徴化されるセルロース分解酵素は、CMC−のり剤の測定可能な過剰の除去を与えそして布帛の風合い／硬さの著るしい改善をもたらす、そして第二に酵素はCMC およびブンプン／デンプン誘導体の混合物から構成される組成物によりのり付けされた布帛に対し有利な作用を有する。純粋なカルボキシメチルセルロース(CMC)から構成されるのり剤組成物又はCMC 中に非常に豊富に存在するものは、通常水に非常に可容性の傾向にある、すなわち、CMC のり剤の主部分は、のり付けされた布帛と水性溶液とを丁度接触させることにより、急速に溶解し得る。更に、CMC のり剤の小部分は布帛に強く粘着しそして布帛に非常に硬い風合いを与える。この硬さのため、布帛は更に仕上げのため不適当となるであろう。これらの実験において用いられる布帛は、100％綿両面ジャージーであった。布帛は、のり抜き実験の前に、純粋なCMC(アクアロン社（ドイツ）から入手可能なブラノーズ７LFD)又はCM（アクアロン社（ドイツ）から入手可能なブラノーズ７LFD およびカルボキシメチル化デンプン(CMC、ランベルチ社（イタリー）から入手可能なSolvitose C5)の１：１（ｗ／ｗ）ブレンドから構成される混合のり剤でのり付けされた。布帛に対するのり剤の量は、CMC−のり剤に対し約6.5(布帛の重量に基づいて) であり、そして CMC/CMC−のり剤に対し約 5.6％であった。布帛を、12cm×14cmのスワッチ（のり剤なしのスワッチ当たり約3.54ｇの重量）に切断した。新しい環境に適応させた後、スワッチを秤量し次いで下記の表に従って酵素を含む50℃の２ｇ／ｌＫ−ホスフェート緩衝液 200ml を含有する 250mlのガラスビーカー中で30分間インキュベートした：セルラーゼ：Ｈ．インソレンス（insolens）由来のEG Ｉ（例１における如し）。アミラーゼ；アクアザイム（Aquazym）120Ｌ（活性：120 KNU/ｇ）、ノボノルディスクＡ／Ｓから入手可能な細菌アミラーゼ。インキュベーション後、スワッチを 103℃で60分間オーブンで乾燥し、順応させ次いで秤量しのり剤を除去を評価した。のり剤の除去に関する平均データを以下に表に示す：表から明らかなように、それぞれCMC のり剤およびCMC/CMC のり剤を用いた両方の場合において、のり剤の除去を促進する。 CMC のり剤に対し、スワッチをセルラーゼなしの緩衝液中でインキュベートするとき多量の除去がまた見られ、しかし繊維の風合いから、残りのCMC(約20mg／スワッチ)は布帛の硬さに対し著るしい効果を有していることが明らかであった。この効果を実証するため、布帛の感覚評価において実験した５人のパネルに尋ね、各シリーズからのスワッチを１から４までの点数でランク付けした、ここで記号１を最も硬い布帛に対して与えられそして記号４は最も柔かい布帛に対して与えられた（最も良いのり抜き結果）。効果は非常に顕著でありその結果試験パネルの全てのメンバーは、下記の表において反映されているものと正しく同じ順位を与えた：シリーズ１対シリーズ２並びにシリーズ３対シリーズ４を比較すると、セルロース分解酵素を用いた処理から得られる布帛の硬さの著るしい減少そして従ってより良いのり抜きが見られた。明細書中で引用された参考文献リプアン（Lipman）およびパールソン(Pearson)、Science 227，1435(1985)；ハドソン（Hudson），Ｌ．、およびヘイ(Hay)、F.，Practical Immunology、第３版（1989），ブラックウェルサイエンティフィクパブリケーションズ；サムブロック（Sambrook）等．、Molecular Cloning : A Laboratory Manual 、第２版、コールドスプリングハーバー、1989；オルソン(Olson)、E．S．Tex tile Wet Processes,Ｉ巻、ノイエスパブリケーション、パークリッジ、ニュージャージー、米国（ 1983）；Ｍ．ペータ(Peter)およびＨ．Ｋルーテ(Rouette)、Grundlagen der Textilvered lung、ドイツチェファッハウェルラークゲームベーハ、フランクフルトアムマイン、ドイツ国（1988）；

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩ (Ｃ１２Ｎ 9/42 Ｃ１２Ｒ 1:885） (Ｃ１２Ｎ 9/42 Ｃ１２Ｒ 1:80） (Ｃ１２Ｎ 9/42 Ｃ１２Ｒ 1:66） (Ｃ１２Ｎ 9/42 Ｃ１２Ｒ 1:77） (Ｃ１２Ｎ 9/42 Ｃ１２Ｒ 1:645） (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ

Claims

【特許請求の範囲】１．セルロース含有布帛又は繊維をのり抜きする方法であって、その布帛又は繊維を、カルボキシメチルセルロース(CMC)に対する活性および少なくとも0.01 ｓ^-1のｋ_catに相当するpH8.5 でのセロトリオースに対する触媒活性を有するセルロース分解酵素を用いて処理することを含んでなる、前記方法。２．pH8.5 でセロトリオースに対する触媒活性が、少なくとも 0.1ｓ^-1、好ましくは少なくとも１ｓ^-1のｋ_catに相当する、請求の範囲第１項記載の方法。３．セルロース分解酵素が、フミコラ（Humicola）、トリコデルマ(Trichoder ma)、マイセリオフトラ（Myceliophthora）、ペニシリウム(Penicillium)、イルペックス(Irpex)、アスペルギルス(Aspergillus)、シタリジウム(Scytalidium) 又はフサリアム（Fusarium）の菌株により得ることができるか、又はそれらの菌株から由来する、請求の範囲第１又は２項記載の方法。４．酵素が、フミコラインソレンス(Humicola insolens)、フサリウムオキシスポラム（Fusarium oxysporum）又はトリコデルマレシー（Trichoderma reesei）の菌株から由来できる、請求の範囲第３項記載の方法。５．酵素が、組換え体セルラーゼ、すなわち、本質的に他のタンパク質を有しないセルラーゼである、請求の範囲第１〜４項のいずれか１項に記載の方法。６．親セルロース分解酵素が、配列番号１で示されるフミコラインソレンスエンドグルカナーゼのアミノ酸配列又は該エンドグルカナーゼの類似体のアミノ酸配列を含んでなり、その類似体はｉ）配列番号１で示される配列と少なくとも60％相同であり、 ii）該エンドグルカナーゼに対して生起した抗体と反応し、および／又は iii）該エンドグルカナーゼをコードするDNA 配列と同じプローブとハイブリダイズするDNA 配列によってコードされる、請求の範囲第５項記載の方法。７．親セルロース分解酵素が、配列番号２で示されるフサリウムオキシスポラムエンドグルカナーゼのアミノ酸配列又は該エンドグルカナーゼの類似体のアミノ酸配列を含んでなり、その類似体はｉ）配列番号２で示される配列と少なくとも60％相同であり、 ii）該エンドグルカナーゼに対して生起した抗体と反応し、および／又は iii）該エンドグルカナーゼをコードするDNA 配列と同じプローブとハイブリダイズするDNA 配列によってコードされる、請求の範囲第５項記載の方法。８．セルロース分解酵素を、のり抜き液１ｌ当たり50〜5000ECU、好ましくはのり抜き液１ｌ当たり50〜500ECUのセルラーゼ活性に相当する量で；好ましくは１〜10ｇ酵素／ｌ、より好ましくは１〜５ｇ／ｌ、特に１〜３ｇ／ｌに相当する量で用いる、請求の範囲第１〜７項のいずれか１項に記載の方法。９．のり抜き処理を、30〜100 ℃、好ましくは30〜60℃の範囲内の温度で、そして３〜11、好ましくは７〜９の範囲内のpHで行なう、請求の範囲第１〜８項のいずれか１項に記載の方法。 10．布帛が、繊維、ビスコース（レーヨン）繊維、リオセル繊維、綿、ビスコース又はレーヨン繊維と他の繊維例えばポリエステル繊維との全てのブレンド、ビスコース／綿繊維ブレンド、レオセル／羊毛繊維ブレンド、綿／羊毛繊維ブレンド、アマ（リネン）から造られる布帛、ラミーから造られる布帛、セルロース系繊維並びにセルロース系繊維と他の繊維例えば羊毛、ポリエステル、ポリアミドおよびアクリル繊維との全てのブレンドを含有する布帛から選ばれる、請求の範囲第１〜９項のいずれか１項に記載の方法。 11．セルロース含有布帛をのり抜きするためののり抜き組成物であって、カルボキシメチルセルロース(CMC)に対する活性および少なくとも0.01ｓ^-1のｋ_catに相当するpH8.5 でのセロトリオースに対する触媒活性を有するセルロース分解酵素およびアミロース分解酵素を含んでなる、前記組成物。 12．セルロース分解触媒が、フミコラ（Humicola）、トリコデルマ(Trichoder ma)、マイセリオフトラ（Myceliophthora）、ペニシリウム(Penicillium)、イルペックス(Irpex)、アスペルギルス(Aspergillus)、シタリジウム(Scytalidium) 又はフサリアム（Fusarium）の菌株により得ることができるか、又はそれらの菌株から由来する、請求の範囲第11項記載ののり抜き組成物。 13．酵素が、フミコラインソレンス(Humicola insolens)、フサリウムオキシスポラム（Fusarium oxysporum）又はトリコデルマレシー（Trichoderma reesei）の菌株から由来できる、請求の範囲第12項記載ののり抜き組成物。 14．親酵素が、配列番号１で示されるフミコラインソレンスエンドグルカナーゼのアミノ酸配列又は該エンドグルカナーゼの類似体のアミノ酸配列を含んでなり、その類似体はｉ）配列番号１で示される配列と少なくとも60％相同であり、 ii）該エンドグルカナーゼに対して生起した抗体と反応し、および／又は iii）該エンドグルカナーゼをコードするDNA 配列と同じプローブとハイブリダイズするDNA 配列によってコードされる、請求の範囲第13項記載の洗剤組成物。 15．親酵素が、配列番号２で示されるフサリウムオキシスポラムエンドグルカナーゼのアミノ酸配列又は該エンドグルカナーゼの類似体のアミノ酸配列を含んでなり、その類似体はｉ）配列番号２で示される配列と少なくとも60％相同であり、 ii）該エンドグルカナーゼに対して生起した抗体と反応し、および／又は iii）該エンドグルカナーゼをコードするDNA 配列と同じプローブとハイブリダイズするDNA 配列によってコードされる、請求の範囲第13項記載ののり抜き組成物。 16．湿潤剤、分散剤、金属イオン封鎖剤および乳化剤から成る群から選ばれる少なくとも１種の追加の成分を、更に含んでなる、請求の範囲第11〜15項のいずれか１項に記載ののり抜き組成物。