HUT76661A

HUT76661A - A method for desizing cellulose-containing fabric

Info

Publication number: HUT76661A
Application number: HU9701235A
Authority: HU
Inventors: Henrik Lund
Original assignee: Novo Nordisk As
Priority date: 1994-08-15
Filing date: 1995-08-14
Publication date: 1997-10-28
Also published as: AU3161595A; JPH10504355A; TR199500988A2; EP0777779A1; PL318784A1; WO1996005353A1; MX9701113A; BR9508591A

Description

A jelen találmány a cellulóz-tartalmú anyagok vagy szövetek írtelenítésére szolgáló módszerrel és az ezen módszerben használt enzim készítményekkel kapcsolatos.

A találmány háttere

A szövetek szövése során a fonalak jelentős mechanikai feszülésnek vannak kitéve. A szakadás megelőzése céljából a fonalakat gyakran egy zselatin-szerű anyaggal (írező anyag) való burkolással erősítik (írezik). A leggyakoribb írező anyag • · a természetes vagy a módosított formájú keményítő, azonban más polimer vegyületek, mint például a polivinilalkohol (PVA), polivinilpirrolidon (PVP), poliakrilsav (PAA) vagy cellulóz származékok (például karboximetilcellulóz (CMC), hidroxietilcellulóz, hidroxipropilcellulóz vagy metilcellulóz) is jelentős mennyiségben lehetnek jelen az írező anyagban. Kis mennyiségű például zsír vagy olaj szintén hozzáadható az írező anyaghoz, a felszín sikamlóssá tétele céljából.

Az írezés következtében a fonalak nem képesek a vizet vagy a befejező anyagokat vagy vegyületeket (például fehérítő, festő gyűrésmentesítő anyagok, stb.) a megfelelő mértékben abszorbeálni. Az egyforma és tartós befejezés így csak az írező anyag szövetből való eltávolítása után valósítható meg, ez az úgynevezett írtelenítés.

Abban az esetben ha az írező anyag jelentős mennyiségű karboximetilcellulózt (CMC) vagy más cellulóz-származékot tartalmaz az írtelenítő kezelés egy cellulolitikus enzimmel magában vagy más anyagokkal együtt, tetszés szerint más enzimekkel együtt, például keményítőbontó enzimekkel, például amilázokkal együtt valósítható meg. Azonban a cellulolitikus enzimekkel való kezelés a cellulózt vagy cellulóz-származékot tartalmazó írezett anyagok vagy szövetek esetében nemcsak teljesen vagy részlegesen bontja le az írező anyagot, hanem kárt tesz magában az anyagban vagy a szövetben is, így olyan írtelenített anyagot vagy szövetet eredményez, melynek romlik az anyag erőssége és/vagy csökken a súlya a nem írezett anyag vagy szövet erősségéhez vagy súlyához viszonyítva.

A jelen találmány tárgya egy olyan az anyagok vagy szövetek írtelenítésére szolgáló módszer biztosítása, melynek • · • · · · · · • · · · ··· · · • · · ·· · * » 3 során az anyagok vagy szövetek nem károsodnak, azaz nem indukálnak a szövetben erősség veszteséget vagy súlycsökkenést vagy esetleg mindkettőt.

A találmány összefoglalása

Meglepő módon, azt találták, hogy lehetséges a cellulóztartalmú anyagot vagy szövetet oly módon írteleníteni, hogy alapjában véve az anyagok vagy szövetek nem károsodnak és ez úgy valósítható meg, hogy az anyagot vagy szövetet bizonyos típusú cellulolitikus enzimmel való kezelésnek vetjük alá.

Ennek megfelelően a jelen találmány a cellulóz-tartalmú anyagok és szövetek írtelenítésére szolgáló módszert biztosít, melynek során az anyagot vagy szövetet egy cellulolitikus enzimmel kezeljük, mely karboximetilcellulózon (CMC) aktivitással rendelkezik és cellotriózon pH=8,5 értéken legalább k]_<at=0,01/sec értéknek megfelelő katalitikus aktivitással rendelkezik.

EGy másik megvalósulásban a jelen találmány módszerében való alkalmazáshoz egy olyan készítményt biztosítunk, mely készítmény egy cellulolitikus enzimet tartalmaz, mely karboximetilcellulózon (CMC) aktivitással rendelkezik és cellotriózon pH=8,5 értéken legalább kj_<at=O, 01/sec értéknek megfelelő aktivitással rendelkezik. Ezt úgy kell érteni, hogy a készítmény nem tartalmaz semmilyen olyan celluláz komponenst, mely szövet károsodást indukálna.

A jelen találmány módszerét alkalmazva olyan írtelenített cellulóz-tartalmú anyagot vagy szövetet nyerünk, mély a nem írezett anyaghoz vagy szövethez viszonyítva alapjában véve nem mutat szilárdságbeli veszteséget vagy súlyveszteséget.

A találmány részletes leírása

Az írtelenítés fogalmán a hagyományos értelmezést értjük, azaz az írező anyag szövetből való eltávolítását.

A jelen specifikációban és igénypontokban a cellulolitikus enzim, a celluláz és celluláz komponens kifejezések alatt egy olyan enzimet értünk, mely a cellulózt hidrolizálja. A cellulolitikus enzim, a celluláz vagy a celluláz komponens lehet egy adott mikroorganizmus által termelt celluláz rendszerben előforduló komponens, egy ilyen celluláz rendszer leginkább különböző eltérő celluláz enzim komponensből áll, ideértve azokat, melyeket általában például cellobiohidrolázokként, exo-cellobiohidrolázokként, endo-beta1, 4-glükanázokként, beta-glükozidázokként azonosítunk. Másik lehetőségként a celluláz komponens lehet egy egyedüli komponens, azaz egy más celluláz komponensektől alapjában véve mentes alkotórész, mely általában egy adott mikroorganizmus által termelt celluláz rendszerben fordul elő, az egyedüli komponens egy rekombináns alkotórész, azaz úgy állítják elő, hogy az egyedüli alkotórészt kódoló DNS szekvenciát klónozzák, majd ezután a DNS szekvenciával a sejtet transzformálják és egy gazdában expresszálják. A gazda előnyösen egy heterológ gazda, de a gazda bizonyos körülmények között lehet homológ gazda is.

A natív vagy nem módosított celluláz vagy celluláz komponens származhat olyan mikroorganizmusokból is, melyekről ismert, hogy cellulolitikus enzimeket képesek termelni, például a Humicola, Thermomyces, Bacillus, Trichoderma, Fusaríum, Myceliophthora, Phanerochaete, Irpex, Scytalidium, Schizophyllum, Penicillium, Aspergillus és Geoticum fajai. A származtatott alkotórész lehet homológ vagy heterológ • · • · · · komponens. Előnyösen az alkotórész homológ. Azonban a heterológ alkotórész, mely immunológiai szempontból reakcióképes egy nagy tisztaságú celluláz alkotórész ellen termelt antitesttel szemben és mely egy specifikus mikroorganizmusból származik, szintén előnyben részesülhet.

Előnyben részesül, ha a jelen folyamatban használandó alkalmazható celluláz mikrobiális eredetű. A találmány egy előnyben részesített megvalósulásában a cellulolitikus enzim kinyerhető vagy származtatható egy a Humicola, Trichoderma, Myceliophthora, Penicillium, Irpex, Aspergillus, Scytalidium vagy Fusarium fajokat magába foglaló csoportból szelektált fajból. Még előnyösebben az enzim a Humicola insolens-ből, a Fusarium oxisporum-ból vagy a Trichoderma reesei-ből nyerhető vagy származtatható.

A jelen szöveg összefüggésben a származtatható vagy valahonnan származó kifejezést nem csupán a kérdéses organizmus egy faja által termelt cellulázra értjük, hanem egy ilyen törzsből izolált DNS szekvencia által kódolt és az említett DNS szekvenciával transzformált gazda szervezetben termelt cellulázra is értjük. Továbbá, a fogalom olyan cellulázt is magába foglal, melyet egy szintetikus és/vagy cDNS eredetű DNS szekvencia kódol és mely rendelkezik a kérdéses celluláz azonosító tulajdonságaival.

Előnyösen a jelen találmány módszerében használandó cellulolitikus enzim egy rekombináns celluláz, azaz olyan celluláz, mely alapjában véve mentes más proteinektől vagy celluláz proteinektől. Egy rekombináns celluláz alkotórész a tudomány e területén átlagosan képzett szakember számára hagyományos standard technikákkal klónozható és expresszálható.

• ·

Előnyösen, egy fonalasgomba eredetű szülői celluláz is alkalmazható, például egy a Humicola vagy Fusarium genusba tartozó gomba törzsből származtatható celluláz. Például a szülői celluláz származhat a fonalasgomba H. insolens vagy a F. oxisporum fajok egy törzséből. Ezen cellulázok közül sok jól jellemzett és leírásra került teljes aminosav szekvenciájuk is.

Egy előnyben részesített megvalósulásban a szülői cellulázt egy a H. insolens, a F. oxisporum és a Trichoderma reesei cellulázokat magába foglaló csoportból szelektáljuk, vagy a szülői celluláz az említett szülői cellulázok bármelyikének funkcionális analógja is lehet, melyek

i) egy olyan aminosav szekvenciát tartalmaz, mely legalább 60%-ban homológ a szülői celluláz aminosav szekvenciájával, ii) a szülői cellulázzal szemben termelt antitesttel szemben reaktív és/vagy iii) melyet a szülői cellulázt kódoló DNS szekvencia próbájával hibridizáló DNS szekvencia termeli.

Az analóg i) tulajdonságán az analóg és a szülői celluláz közötti azonosság fokát szándékozzuk jelezni, az első szekvencia egy második szekvenciából való származtatását jelezve. Különösen egy polipeptidet tartunk homológnak a szülői cellulázzal, ha a megfelelő aminosav szekvenciák összehasonlítása 60%-nál nagyobb, mint például amikor 70%-os, 80%-os, 85%-os, 90%-os vagy akár 95%-os azonosságot tár fel. A szekvencia összehasonlítás ismert algoritmusokon keresztül végezhető el, mint például a Lipman and Pearson (1985) által leírt algoritmussal.

A homológ celluláz lehet génsebészetileg manipulált cellulóz, például melyet úgy állítunk elő, hogy egy vagy több tulajdonságot fejlesztünk, például a termostabilitást, a sav/lúg stabilitást, a hőmérséklet vagy pH optimumot és más hasonló tulajdonságokat.

A szülői celluláz analógjainak további ii) és iii) tulajdonságai a következők alapján határozhatók meg: a ii) tulajdonság, azaz az immunológiai kereszt reaktivitás, vizsgálható a szülői celluláz legalább egy epitópjával szemben reaktív, vagy az ellen termelt antitest használatával. Az antitest, mely lehet monoklonális vagy poliklonális, a tudomány e területén ismert módszerekkel állítható elő, például a Hudson et al., (1989) leírt módszerrel. Az immunológiai kereszt reaktivitást a tudomány e területén ismert vizsgálatokkal lehet meghatározni, ezekre példák a Western lenyomattechnika, vagy a radiális immonodiffúziós vizsgálat, például a Hudson et al., (1989) által leírt vizsgálat.

Az analóg jellemzésében használt oligonukleotid próba - a iii) pontban leírt, a fentiekben jellemzett tulajdonsággal összhangban - megfelelőképpen előállítható a szülői celluláz teljes vagy részleges nukleotid vagy aminosav szekvenciája alapján. A hibridizáció elvégezhető bármilyen megfelelő körülmények között, ami lehetővé teszi a DNS szekvenciák hibridizálódását. Például az ilyen körülmények közé tartoznak a meghatározott körülmények között végzett hibridizációk, például ideértve az 5 x SSC-ben végzett előáztatást és az 1 órán keresztül körülbelül 40 C° hőmérsékleten, 20% formamid, 5 x Denhardt-féle oldat, 50 mM nátrium foszfát (pH=6,8) és 50 pg denaturált szonikált borjú timusz DNS elegyében végzett • ·· · ·· • · • ··· endonukleázzal szemben immunoreaktív, vagy mely előhibridizációt, melyet ugyanezen oldatban - 100 μΜ ATP-vel kiegészített oldat - végzett hibridizáció követ 18 órán keresztül körülbelül 40 C° hőmérsékleten, vagy más leírt módszerek, például a Sambrook és munkatársai (1989) által leírt módszerek.

A találmány szerint használható cellulolitikus enzimekre példák a következők:

Egy endonukleáz alkotórész, mely egy nagy tisztaságú Humicola insolens-ből (DSM 1800) származó körülbelül 50 kD termelt antitesttel szemben a cellulóz aktivitást mutató körülbelül 50 kD endonukleázzal homológ, vagy annak származéka. Egy előnyben részesített endonukleáz komponens aminosav szekvenciája olyan, mint ami a WO 91/17244 számú PCT szabadalomban került leírásra. A 14A-E ábrák, melyek a csatolt

2. számú szekvenciában kerültek bemutatásra, vagy az említett endonukleáz egy variánsa, mely az említett szekvenciával legalább 60%-os, előnyösen 70%-os, még előnyösebben legalább 75%-os, még előnyösebben legalább 80%-os, még előnyösebben 85%os, különösen legalább 90% homológiát mutat. Az alábbiakban az endonukleáz komponensre EG I-ként utalunk; és egy olyan endonukleáz alkotórész, mely egy nagy tisztaságú Fusarium oxysporu/n-ból (DSM 2672) származó körülbelül 50 kD (nyilvánvaló molekulasúly, az aminosav összetétel 45 kD-nak felel meg 2n glikozilációs hellyel) endonukleázzal szemben termelt antitesttel szemben immunoreaktív, vagy mely a cellulóz aktivitást mutató körülbelül 50 kD endonukleázzal homológ, vagy annak származéka. Egy előnyben részesített endonukleáz komponens aminosav szekvenciája olyan, mint ami a WO 91/17244

I-F-et homogenitásig számú PCT szabadalomban került leírásra. A 13 ábra, mely a csatolt 3. számú szekvenciában került bemutatásra, vagy az említett endonukleáz egy variánsa, mely az említett szekvenciával legalább 60%-os, előnyösen 70%-os, még előnyösebben legalább 75%-os, még előnyösebben legalább 80%-os, még előnyösebben 85%-os, különösen legalább 90% homológiát mutat. Az alábbiakban az endonukleáz komponensre EG I-F-ként hivatkozunk. Az EG I-F celluláz komponens előállítható Aspergillus oryzae segítségével is a csatolt 3. számú szekvenciának megfelelő aminosav szekvenciának megfelelő DNS szekvenciát tartalmazó plazmiddal való transzformálás után, melynek során a hagyományos Taka promótert és az AMG terminátort alkalmazzuk. Az EG tisztíthatjuk kationos kromatográfiát használva és pl értéke nagyobb lehet 9-nél. A számított pl 9 az aminosav összetételre alapozva, PHKa értékeket használva az Adv. Protein Chem. 17, p.69-165 (1962) (C. Tanford) hivatkozásból. A moláris extinció koefficienst 58180 értéknek számítottuk; és az EP-A2-271 004 számú Európai Szabadalmi Alkalmazásban leírt bármely celluláz, mely celluláz egy 500 értéknél nem kisebb nem-lebontó indexszel (non-degrading index; NDI) rendelkezik, és mely egy alkalofil celluláz, melynek pH optimuma 7 értéknél nem kevesebb, vagy melynek relatív aktivitása 8-as pH értéknél nem alacsonyabb értéken 50%-os, vagy az optimális körülmények alatt - amikor a szubsztrát karboximetilcellulóz (CMC) - mért aktivitás felett van; a cellulázt előnyösen az alkalikus celluláz K-t (a Bacillus sp.

KSM-635, FERM BP 1485 termeli), az alkalikus celluláz Κ-534-et (a Bacillus sp. KSM-534, FERM BP 1508 termeli), az alkalikus

eel hiiaz	Κ-539-et (a	Bacillus	sp. KSM-539,	FERM	BP 1509
í ívmeii) ,	az	alkalikus	celluláz	Κ-577-et (a Bacillus	sp. KSM-
ff/7, FERM	BP 1510 termeli) , az	alkalikus celluláz K-	521-et (a
kscilius	sp	. KSM-521,	FERM BP	1507 termeli),	az	alkalikus
celluláz	K-	580-at (a	Bacillus	sp. KSM-580,	FERM	BP 1511
termeli),	az	alkalikus	celluláz	Κ-588-at (a Bacillus	sp. KSM-
787, FERM	BP	1513 termeli), az alakalikus celluláz K-	597-et (a
tv ci llus	sp	. KSM-597,	FERM BP	1514 termeli),	az	alkalikus
cc1J uiáz	K-	522-őt (a	Bacillus	sp. KSM-522,	FERM	BP 1512
ί < .rrneli ) ,	a	CMC-áz I	-et és a	CMC-áz Il-őt	(mindkettőt a
1 kei i i us	sp	. KSM-635,	FERM BP	1485 termeli),	az	alkalikus

Iluláz E-II-t és az alkalikus celluláz E-III-at (mindkettőt a kccillus sp. KSM-522, FERM BP 1512 termeli) magába foglaló >-oportból szelektáltuk.

k cellulóz-tartalmú anyag vagy szövet kifejezés és a cellulózos anyag/szövet kifejezés alatt bármely olyan szövetet értünk, különösen a szőtt anyagokat, melyek cellulózt Tartalmazó anyagból készülnek, melyek cellulózt vagy cellulóz származékot, például fa pépet és gyapotot tartalmazó anyagból készülnek. A szövetben normálisan jelen levő cellulóz vagy a <'cliuióz származék fő része normálisan az írező anyag, amivel a fonalat, normálisan a hosszanti szálakat a szövés előtt levonták. A jelen szövegösszefüggésben a szövet kifejezés magába foglalja a ruhaneműket és a feldolgozott szövetek más típusait is. A cellulózos szövetekre példák a pamut, a viszkóz (műselyem), a liocell, az összes viszkóz keverék, a pamut vagy liocell más rostokkal, mint például poliészterrel, viszkóz/pamut keverék, liocell/pamut keverékek, viszkóz/gyapjú keverékek, liocell/gyapjú keverékek, pamut/gyapjú keverékek, • »· len (vászon), ramié és más cellulóz rostokra alapuló szövetek, ideértve a cellulóz rostok más rostokkal, mint például gyapjúval, poliamiddal, akril és poliészter rostokkal való őszes keverékét, például a viszkóz/pamut/poliészter keveréket, a gyapjú/pamut/poliészter keverékeket, a len/pamut keverékeket stb.

Feldolgozási körülmények

Érthető lesz, hogy a jelen találmány módszerei megvalósíthatók bármilyen a tudomány számára ismert megfelelő írezési módszerrel, például az Olson, E.S. (1983) és Peter, M. és Rouette H.K. (1988) által leírtak szerint. így a jelen találmány megvalósításában a használandó feldolgozás körülményeit meg lehet úgy választani, hogy megfeleljen az adott készüléknek vagy egy adott feldolgozási típusnak, mely a használathoz kívánatos. A jelen találmánnyal kapcsolatban használandó feldolgozási típusokra szolgáló előnyben részesülő példák közé tartoznak a Jigger/Winch, Pad-Roll és Pad-Steam típusok. Ezekkel a típusokkal az alábbiakban foglalkozunk részletesen.

A jelen találmány módszere elvégezhető szakaszos, félfolyamatos vagy folyamatos feldolgozás során. Példaként a módszer a következőlépéseket foglalhatja magába:

a) a szövetet egy olyan fürdőben impregnáljuk, mely (minimumként) olyan cellulázt tartalmaz, mely karboximetilcellulózon (CMC) aktivitást mutat és cellotriózon, pH=8,5 értéken ^kat⁼ legalább 0,01/sec értéknek megfelelő katalitikus aktivitással rendelkezik, ezután a felesleges folyadékot kicsavarjuk úgy, hogy a reakció elvégzéséhez tt ···· ** » · · · «»· · ·** • · » » szükséges folyadék mennyiséget megtartsuk (normálisan a száraz szövet 60-120%-a),

b) az impregnált szövetet gőzölésnek vetjük alá, hogy a szövet elérje a kívánt reakció hőmérsékletet, ez általában 20-120 C° hőmérséklet között van, és

c) a szövetet felcsavarva vagy redőzve egy J-Box-ba, U-Box-ba, vagy egy szőnyeg készülékbe vagy valami hasonlóba helyezzük megfelelő időtartamra (ez normálisan pár perc és néhány óra között változik) és hagyjuk, hogy az írtelenítés bekövetkezzen.

Az elvégzendő kezelés előtt a használandó cellulázt kényelmesen más olyan komponensekkel keverjük össze, melyek hagyományosan felhasználásra kerülnek az irtelenítési folyamatban. Az ilyen komponensekre példák más enzimek, előnyösen a kereskedelemben beszerezhető amilázok, melyek hagyományosan felhasználásra kerülnek az írtelenítés során, mint például a mikrobiális amilázok, különösen a Bacillus, például a B. licheniformás, a B. amyloláquefacáens, a B. subtilis, a B. stearothermophilus vagy az Aspergillus, amilázai vagy ezek mutánsainak amilázai, amint az a WO 91/00353 számú szabadalomban leírásra került. Az írtelenítéshez használt kereskedelemben beszerezhető amilázokra példák az Aquazym, az Aquazym Ultra, a Dezym, a Thermozyme és a Termamyl a Novo Nordisk A/S-től. Más előnyben részesített amilázok az oxidációstabil alfa-amiláz mutánsok, melyek a PCT/DK94/00371 számú Nemzetközi Szabadalmi Alkalmazásban kerültek leírásra, mely a hivatkozás révén részét képezi a találmánynak.

így a jelen találmány készítményében előnyös lehet ha javított oxidáció-stabilitású alfa-amiláz is szerepel, így a készítmény hasznos lehet egy kombinált irtelenítési és • · •·· · «·* · · • · · · · · • · · · · · • 13 fehérítési folyamatban (egy egyszeri műveletben végezzük el) , például nátrium klorit használata egy erős bázissal, felületaktív anyaggal, egy aktivátorral és amilolitikus enzimmel és tetszés szerint egy cellulolitikus enzimmel kombinációban; vagy a folyamatban nátrium tetraborát dexahidrát használata pufferként egy olyan fürdőben, mely hidrogén peroxidot, egy elkülönítő anyagot, egy felületaktív anyagot, egy amilolitikus enzimet és tetszés szerint egy cellulolitikus enzimet tartalmaz.

Az elvégzendő folyamathoz szükséges további alkotórészek külön-külön is hozzáadhatok. Az ilyen alkotórészekre példák a stabilizátorok és a nedvesítő anyagok. A stabilizátor lehet egy olyan anyag, mely a cellulolitikus enzimet stabilizálja.

A nedvesítő anyag a rostok nedvesíthetőségét javítja, mellyel egy gyors és egyenletes írtelenítés érhető el. A nedvesítő anyag előnyösen egy oxidáció stabil típusú anyag.

A jelen találmány folyamatának egy előnyben részesített megvalósulásában a hasznos cellulázt olyan mennyiségben használjuk, mely meghaladja az 1 g/1, előnyösen az 1-20 g/1 mennyiséget, mint például 1-10 g/1, 1-5 g/1 vagy 1-3 g/1 mennyiséget, ami megfelel 10-5000 ECU/liter írtelenítő folyadék celluláz aktivitásnak, előnyösen 50-500 ECU/liter írtelenítő folyadék értéknek. Érthető, hogy a használandó celluláz mennyisége a kérdéses celluláz termék formulázásától is függ.

A jelen találmány 1rtelenítésre szolgáló alkalmazandó adott folyamatának típusától függetlenül a jelen találmány módszerét normálisan 30-100 C° hőmérsékleti intervallumban, mint például 35-60 C° hőmérsékleten és 3-11 pH érték intervallumban, előnyösen 7-9 pH értéken hajtjuk végre. Azonban • · az aktuális feldolgozási folyamatok széleskörűen változnak ezen határértékek között, amint az a következő leírás során látható.

A jelen találmánnyal kapcsolatban alkalmazandó előnyben részesített feldolgozási folyamat körülményei közé a következők tartoznak:

Egy szakaszos típusú folyamatban, például a Jigger/Winch típusú folyamatban, 1-5 g/1 a hasznos celluláz mennyisége, 0,25-5 g/1 a nedvesítő anyag mennyisége, például a kereskedelmi termék Arbyl R (a Grünau-tól szerezhető be, Germany) a folyamatot 7-9 pH érték tartományban végezzük el (ezt NaOH hozzáadásával érjük el) és a hőmérséklet 40-55 C° hőmérséklet közötti az időtartam pedig 1-2 óra.

A fél-folyamatos eljárásban például a Pad-Roll típusú folyamatban 1-5 g/1 a hasznos celluláz mennyisége, 0,25-5 g/1 a nedvesítő anyag mennyisége, például Arbyl R, a folyamatot 7-9 pH értékek között végezzük (lehetőleg NaOH hozzáadásával érjük el) és a hőmérséklet 30-50 C° között változik, tipikusan 12-24 óra a folyamat időtartama.

Érthető, hogy a módszer elvégezhető bármilyen olyan készülékben is, mely megfelelően toleráns a módszer körülményeivel szemben.

Továbbá, egyértelmű, hogy a jelen találmány módszerében használandó celluláz k^t restrikcióján túl ez a celluláz előnyösen olyan celluláz legyen, mely pH=3 érték fölött, például pH=7 értéken aktív legyen. Előnyösen a celluláz magas aktivitással rendelkezik 7-9 pH érték határok között.

A jelen találmány módszere felhasználható más írtelenítési kezelési lépés előtt vagy után, mely kiegészíthető a cellulázos • · · kezelést, a kiegészítő kezelés előnyösen egy amilázzal végzett enzimatikus írtelenítési kezelés.

A találmány készítménye

Bár a hasznos celluláz magában is hozzáadható, előnyben részesül, ha egy megfelelő írtelenítő készítménnyé formulázzuk, előnyösen olyanná, ami tartalmaz még más írtelenítő enzimeket is, például a fent leírt amilázokat.

A jelen találmány írtelenítő készítménye az egyes enzimek keveréke lehet garnulátum formájában, előnyösen egy nem-porozó granulátum, egy folyadék, különösen egy stabilizált folyadék, iszap vagy védett formában. A pormentes granulátumok például a 4,106,991 és a 4,661,452 számú US szabadalmakban (mindkettő Novo Nordisk A/S) leírtak alapján állíthatók elő és a tudomány e területén ismert módszerekkel burkolhatok.

A folyadék enzim készítmények például stabilizálhatok megalapozott módszerekkel egy poliol például egy propilén glikol, egy cukor vagy egy cukor alkohol vagy ecetsav hozzáadásával. Más enzim stabilizátorok is jól ismertek a tudomány e területén. A védett enzimek előállíthatok az EP 238 216 szabadalomban leírt módszerekkel.

Elméletileg a jelen találmány készítménye tartalmaz egy cellulolitikus enzimet - mely karboximetilcellulózon (CMC) aktivitással rendelkezik és melynek katalitikus aktivitása cellotriózon pH=8,5 értéken legalább 0,01/sec k^_at értéknek felel meg - és tetszés szerint egy amilázt is magába foglal és tartalmazhat más a jelen találmány kombinált módszerében használandó bármilyen más anyagot. Azonban előnyben részesül, , 16 ha a készítmény fehérítő anyagtól és más erősen oxidáló anyagtól mentes.

A jelen találmány készítménye tartalmazhat további egy vagy több olyan komponenst, amit a nedvesítő anyagokat, diszpergáló anyagokat, elkülönítő anyagokat és emulgeáló anyagokat magába foglaló csoportból szelektálunk. A megfelelő nedvesítő anyagokra példák a fent leírtak. Az emulgeáló anyagok a szövetben jelen levő hidrofób szennyeződések emulgeálására szolgálnak. A diszpergáló anyagok a kivont szennyeződések szövetbe való újra lerakódásának megelőzésére szolgálnak. Az elkülönítő anyagok az ionok, mint a kálcium, magnézium és vas ionok, melyek negatív hatással lehetnek a folyamatra, eltávolítására szolgálnak, az előnyben részesített példák közé tartoznak a nátronlúg (nátrium hidroxid) és a nyers szóda (nátrium karbonát).

A celluláz cellotriózon való aktivitásának meghatározása

A cellotriózon való celluláz aktivitás kj_<at (s^-1) értékben kifejezve egy összekapcsolt vizsgálattal határozható meg:

Cellotrióz -> Glükóz + Cellobióz (kát.: celluláz)

Glükóz +02+ H2O -> Glükonát + H2O2 (kát.:glükózoxidáz)

HgOg + ABTS^r -> ΑΒΤεθ^χ (kát.:peroxidáz) melyet spektrofotometriásán követünk nyomon 418 nm hullámhosszon (az ABTS^Ox maximális abszorbanciája 418 nm hullámhosszon mérhető).

·· ···· · · · ·

Módszer

A GOD-Perid Test Kitet (a Boehringer Mannheim-től szerezzük be, 124 036 katalógusszám) használjuk. A teszt kitben levő puffer-enzim oldatot 500 ml milli Q vízben oldjuk fel. Az oldat pH értékét 8,5-re állítjuk (NaOH) . 80 mg ABTS^R-1 (a

Boehringer Mannheim-től szerezzük be, 756 407 katalógusszám) oldunk fel 10 ml GOD-Perid oldatban, ami megfelel 10 mg/ml teljes ABTS^r koncentrációnak.

Az 5 mmolos (2,52 mg/ml) vízben levő cellotrióz szubsztrát törzs oldatot (a Merck-től szerezzük be, katalógusszám: 24741) elkészítjük. A hígított oldatokból a következő koncentrációknak megfelelő oldatokat állítjuk elő: 1000 pmol, 500 pmol, 376 pmol, 250 pmol, 100 pmol és 60 pmol.

A reakcióelegyet úgy állítjuk elő, hogy összekeverünk 1 rész szubsztrát oldatot 1 rész GOD-Periddel.

A meghatározandó celluláz enzim oldatát 1,0 - 3,0 pmol koncentrációban állítjuk elő.

Az enzim oldat 50 pl mennyiségét és a reakcióelegy 450 pl mennyiségét keverjük össze.

A méréseket egy HP 8452A Diódé Array Spectrophotometer segítségével végezzük el, melyet 40 C° hőmérsékleten termosztálunk, 1 cm-es küvettát használunk és a hullámhossz 418 nm. A reakciót úgy követjük nyomon, hogy minden 20 másodpercben mérjük az ABTS oxidálódását, összesen 600 másodpercig.

Számítás

A cellotriózon mért celluláz aktivitás k]_ca-(- (s^--'-) értékben kifejezve egy Lineweaver-Burk ábrázolással számítjuk ki (1/V • · · · · · ··· · ··· ♦ · • · · · · · • · · · · · ' 18 versus 1/[ S] görbe): a lejtést és a metszést lineáris regressziós analízissel határozzuk meg.

A következő konstansokat használjuk a számításokhoz:

Celluláz: e = 66,310 M^_1*cm^_1

ABTS^Ox e = 0,0323 gmol^-l*cm^_l

A következő eredményeket kapjuk a vizsgálatból:

Enzim	^kkat <^s
EG I	1,5
EG I-F	5, 5

Az endoglükanáz cellulolitikus aktivitását egy analitikai standardhez való viszonyítással határozzuk meg és egység ECU értékben lehet kifejezni.

A cellulolitikus enzimek hidrolizálják a CMC-t, így csökkentik az inkubációs keverék viszkozitását. A kapott viszkozitásbeli csökkenést egy vibrációs viszkoziméterrel határozhatjuk meg (például MIVI 3000 a Sofraser-től, Francé).

A cellulolitikus aktivitás meghatározását, ECU értékekben kifejezve, az AF 301,1 analitikai módszer szerint határozhatjuk meg, mely a szabadalom leíróitól szerezhető be.

Az ECU vizsgálat a mintában levő katalitikus aktivitás mennyiségi meghatározását teszi lehetővé, oly módon, hogy mérjük a minta azon képességét, hogy mennyire csökkenti a karboximetilcellulóz (CMC) oldat viszkozitását. A vizsgálatot 40 C° hőmérsékleten pH=7,5 értéken végezzük el és egy relatív enzim standardét használunk a CMC szubsztrát viszkozitásának csökkentéséhez.

•·· · ··· · • · · · · • · · · · ·

A találmányt a továbbiakban a nem korlátozásként szolgáló példákkal szemléltetjük.

1. példa

A pamut kötöttáru Humicola insolens EG I-gyel és EG V-tel való inkubálása Launder-O-meterben

A Humicola insolens-ből származó endoglükanáz I (EG I) pamut szövetekkel szembeni rendkívül alacsony aktivitásának szemléltetéséhez egy összehasonlító vizsgálatot végzünk el a Humicola insolens EG V-tel (EG V, körülbelül 43 kDa, a WO

91/17243 szabadalomban került leírásra) . Mindkét celluláz jelentős aktivitással rendelkezik ECU-ben kifejezve, és így képesek lebontani a karboximetilcellulózt és számos más hidrokolloidális cellulóz származékot, melyek jelen lehetnek az írező készítményben.

Az írtelenített 100%-os pamut kötöttárut egy Launder-Ometerben kezeljük a két különböző enzimmel a következő körülmények között:

Enzim	Dózis	Puffér
H. insolens EG I	5,0 ECU/ml	2 g/1 KH₂PO₄/NaOH pH=7,3
H. insolens EG V	1,0 ECU/ml	2 g/1 KH₂PO₄/NaOH pH=7,0

Szövet: fehérített, interlockal kötött 100% pamut (205 g/m2, 7 g/csőröspohár (2 szövetdarab, egyenként körülbelül 13 cm x 13 cm)

Folyadék térfogat: 140 ml (LQR 1:20)

Inkubáció:

perc 55 C° hőmérsékleten • · · · · · • · · · · · ' 20

Az egyes Launder-O-meter sütőhöz 20 acél golyót adunk (d=14 mm, súly=ll g) a cellulázos kezelés során a szövetre kifejtett mechanikai hatás növelése céljából.

A következő eredményeket kapjuk:

Enzim	Dózis	Súlyveszteség (%)
H. insolens EG I	5,0 ECU/ml	0,1
H. insolens EG V	1,0 ECU/ml	3,9

A súlyveszteséget az alábbiak szerint definiáljuk: Százalékos súlyveszteség (%)=[ 1-(kezelés utáni súly)/(kezelés előtti súly)]* 100

Az eredmények azt mutatják, hogy az EG I celluláz alapjában véve nem okoz súlyveszteséget a pamuton, ha az EG V celluláz által okozott súlyveszteséghez viszonyítjuk.

2. példa

Ez a példa azt illusztrálja, hogy a szabadalmi igénypontokban megadott tulajdonságokkal jellemzett cellulolitikus enzim mérhető a CMC-írező anyag feleslegben levő mennyiségének eltávolítását teszi lehetővé és jelentős javulást idéz elő a szövet kezelhetőségében /merevségében és a továbbiakban az enzim jótékony hatással van a CMC és keményítő/keményítő-származék keverékekkel írezett szövetekre.

Az irező készítmények - melyek tiszta karboximetilcellulózból (CMC) állnak, vagy melyek nagyon gazdagok CMC-ben - úgy tűnik jól oldódnak vízben, azaz a CMC fő része gyorsan feloldható ha az írezett szövetet egy vizes ·

• · · · ' 21 oldatba helyezzük. Mégis, a CMC-írező anyag egy kis része továbbra is szorosan kötődik a szövethez és nagyon merevvé teszi azt. Ez a merevség a szövetet alkalmatlanná teszi a végső befejezésre.

Az ezen kísérletekben használt szövet egy 100% pamut interlock jersey anyag. Az írtelenítési kísérlet előtt a szövetet vagy tiszta CMC-vel (Blanose 7LFD, az Aqualom GmbH-tól szerezhető be, Germany) vagy 1:1 (w/w) arányú CMC (Blanose 7LFD, az Aqualom GmbH-tól szerezhető be, Germany) és karboximetilált keményítő (CMS, Solvitose C5 a Lamberti S.p.a.tól szerezhető be, Italy) elegyével íreztük.

A szöveten levő írező anyag mennyisége körülbelül 6,5 % (a szövet súlyához viszonyítva) a CMC-írező anyag esetében és körülbelül 5, 6 % (a szövet súlyához viszonyítva) a CMC/CMSírező anyag esetében.

A szövetet 12 cm x 14 cm-es darabokra vágjuk (az írező anyag nélkül a súly körülbelül 3,54 g/szövetdarab).

A szövetdarabokat a klimatizáció után mérjük, majd 30 percig 200 ml 2g/l K-foszfát puffért (pH=7,0) tartalmazó 250 ml üveg törőkben ínkubáljuk 50 C° hőmérsékleten az enzimet is ideértve az alábbi táblázat szerint:

Sorozat	Méret	Celluláz	Amiláz
1	CMC	nincs	nincs
2	CMC	20 ECU/g szövet	nincs
3	CMC/CMS	nincs	100 KNU/g szövet
4	CMC/CMS	20 ECU/g szövet	100 KNU/g szövet

Celluláz:

EG I a H. insolens-ből (az 1. példa szerint) • ·· · • · ’ 22

Amiláz: Aqazym 120L (aktivitás:120 KNU/g), a bakteriális amiláz a Novo Nordisk A/S-től szerezhető be.

Inkubálás után a szövetdarabokat kemencében megszárítjuk 103 C° hőmérsékleten 60 percen keresztül, klimatizáljuk, majd megmérjük súlyukat az írező anyag eltávolításának értékelése céljából. Az írező anyag eltávolítás átlag adatait az alábbiakban adjuk meg:

Sorozat	átlag g ír/szövetdarab	átlag g eltávolított ír/szövetdarab	% eltávolítás
1	0,23	0,21	91%
2	0,23	0,23	100%
3	0,20	0, 15	75%
4	0,20	0, 17	85%

Amint az látható, a celluláz mindkét esetben - sorrendben CMC-írező anyaggal és CMC/CMS-írező anyaggal - elősegíti az írező anyag eltávolítást.

A CMC-írező anyag esetében nagy eltávolítás látható akkor is, ha a szövetdarabokat celluláz nélküli pufferben inkubáljuk, azonban a szövet kezeléséből egyértelmű, hogy a maradék CMC (körülbelül 20 mg/szövetdarab) kifejezettebb hatással van a szövet merevségére.

Ezen hatás illusztrálásához egy 5 emberből álló csoporttal végeztünk érzékszervi értékelést a szövetekkel kapcsolatban. Arra kértük őket, hogy rangsorolják az egyes sorozatokból származó szövetdarabokat 1-4-ig, ahol az 1-es szám jelenti a legmerevebb szövetdarabot és a 4-es szám a legpuhábbat (legjobb írtelenítés).

• · · • ·♦ 4

A hatás olyan kifejezett, hogy a teszt csoport összes tagja pontosan ugyanazt az értékelést adta, amint az az alábbi táblázatból is látható.

Sorozat	értékelés (átlag)
1	2
2	4
3	1
4	3

Az 1-es és a 2-es sorozat és a 3-as és a 4-es sorozat összehasonlítása egy szignifikáns csökkenést fed fel a szövet merevségében és így jobb az írtelenítés, ami a cellulolitikus enzimmel való kezelésből származik.

• · · · · ·

IRODALMI JEGYZÉK

Lipman and Pearson, Science 227, 1435 (1985) ;

Hudson, L., and Hay, F., Practical Immunology, Third Edition (1989), Blackwell Scientific Publications;

Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd Ed., Cold Spring Harbor, 1989;

Olson, E.S. Textilé Wet Processes, Vol. I, Noyes Publication, Park Ridge, New Jersey, USA (1983);

M. Peter und H.K Rouette, Grundlagen dér Textilveredlung, Deutsche Fachverlag GmbH, Frankfurt am Main, Germany (1988);

»· « ·«« ·*· «! ··» « · • ♦ » · · · •· · ·· « • 25

SZEKVENCIA LISTA (2) AZ 1. SZÁMÚ SZEKVENCIA ADATAI:

(i) A SZEKVENCIA JELLEMZŐI:

(A) HOSSZÚSÁG: 514 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (C) SZÁLTÍPUS: egyszálú (D) TOPOLÓGIA: lineáris (ii) A MOLEKULA TÍPUSA: protein (vi) EREDETI FORRÁS:

(A) ORGANIZMUS:Humicola insolens (B) TÖRZS: DSM 1800

	(xi) AZ	, 1.	SZÁMÚ SZEKVENCIA LEIRASA:
Gin	Lys Pro	Gly	Glu Thr Lys Glu Val His Pro Gin Leu Thr Thr Phe
1			5 10 15
Arg	Cys Thr	Lys	Arg Gly Gly Cys Lys Pro Alá Thr Asn Phe Ile Val
		20	25 30
Leu	Asp Ser	Leu	Ser His Pro Ile His Arg Alá Glu Gly Leu Gly Pro
	35		40 45
Gly	Gly Cys	Gly	Asp Trp Gly Asn Pro Pro Pro Lys Asp Val Cys Pro
	50		55 60
Asp	Val Glu	Ser	Cys Alá Lys Asn Cys Ile Met Glu Gly Ile Pro Asp
65			70 75 80
Tyr	Ser Gin	Tyr	Gly Val Thr Thr Asn Gly Thr Ser Leu Arg Leu Gin
			85 90 95
His	Ile Leu	Pro	Asp Gly Arg Val Pro Ser Pro Arg Val Tyr Leu Leu

100

105

110 t

Asp Lys Thr Lys Arg Arg

115

Phe Thr Phe Asp Val Asp

130

Alá Leu Tyr Leu Ser Glu

145 150

Asn Pro Gly Gly Alá Tyr

165

Phe Val Thr Pro Phe Ile

180

Ser Cys Cys Asn Glu Met

195

His Val Alá Pro His Thr

210

Gly Glu Glu Cys Alá Phe

225 230

Trp Asn Asn Tyr Arg Val

245

Glu Phe Lys Val Asn Thr

260

Leu Alá Asn Arg Arg Gly

275

Gin Asp Gly Lys Val Ile

290

Pro Tyr Thr Asn Met Ile

305 310

Arg Lys Tyr Met Glu Leu

Tyr Glu Met Leu His

120

Alá Thr Lys Leu Pro

135

Met His Pro Thr Gly

155

Tyr Gly Thr Gly Tyr

170

Asn Gly Leu Gly Asn

185

Asp Ile Trp Glu Alá

200

Cys Asn Lys Lys Gly

215

Glu Gly Val Cys Asp

235

Asn Val Thr Asp Tyr

250

Leu Lys Pro Phe Thr

265

Lys Leu Glu Lys Ile

280

Glu Ser Phe Tyr Thr

295

Asp Asp Glu Phe Cys.

315

Gly Alá Thr Gin Gly « * * · · ’ · ··» · « • · · · · · «· » ·· ·

Leu Thr Gly Phe Glu

125

Cys Gly Met Asn Ser

140

Alá Lys Ser Lys Tyr

160

Cys Asp Alá Gin Cys

175

Ile Glu Gly Lys Gly

190

Asn Ser Arg Alá Ser

205

Leu Thr Leu Cys Glu

220

Lys Asn Gly Cys Gly

240

Tyr Gly Arg Gly Glu

255

Val Val Thr Gin Phe

270

His Arg Phe Tyr Val

285

Asn Lys Glu Gly Val

300

Glu Alá Thr Gly Ser

320

Met Gly Glu Alá Leu

325

330

335 • · ··· · ··· · · • · · · » • · · · · · » 27

Thr

Arg Gly Met 340

Val

Leu Alá

Met

Ser 345

Ile

Trp

Asp

Gin 350

Gly

Asn

Met

Glu

Trp

Leu

Asp

His

Gly

Glu

Alá

Gly

Pro

Cys

Alá

Lys

Gly

355

360

365

Glu

Gly

Alá

Pro

Ser

Asn

Ile

Val

Gin

Val

Glu

Pro

Phe

Pro

Glu

Val

370

375

380

Thr

Tyr

Thr

Asn

Leu

Arg

Trp

Gly

Glu

Ile

Gly

Ser

Thr

Tyr

Gin

Glu

385

390

395

400

Val

Gin

Lys

Pro

Lys

Pro

Lys

Pro

Gly

His

Gly

Pro

Arg

Ser

Asp

405 410 415 (2) A 2. SZÁMÚ SZEKVENCIA ADATAI:

(i) A SZEKVENCIA JELLEMZŐI:

(A) HOSSZÚSÁG: 409 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (C) SZÁLTÍPUS: egyszálú (D) TOPOLÓGIA: lineáris (ii) A MOLEKULA TÍPUSA: protein (vi) EREDETI FORRÁS:

(A) ORGANIZMUS:Fusarium oxisporum (B) TÖRZS: DSM 2672 (xi) A 2. SZÁMÚ SZEKVENCIA LEÍRÁSA:

Gin Thr Pro Asp Lys Alá Lys Glu Gin His Pro Lys Leu Glu Thr Tyr

10 15

Arg Cys Thr Lys Alá Ser Gly Cys Lys Lys Gin Thr Asn Tyr Ile Val • · . 28

Alá Asp Alá Gly Ile His Gly Ile Arg Arg Ser Alá Gly Cys Gly Asp

40 45

Trp Gly Gin Lys Pro Asn Alá Thr Alá Cys Pro Asp Glu Alá Ser Cys

55 60

Alá Lys Asn Cys Ile Leu Ser Gly Met Asp Ser Asn Alá Tyr Lys Asn

70 75 80

Alá Gly Ile Thr Thr Ser Gly Asn Lys Leu Arg Leu Gin Gin Leu Ile

90 95

Asn Asn Gin Leu Val Ser Pro Arg Val Tyr Leu Leu Glu Glu Asn Lys

100 105 110

Lys Lys Tyr Glu Met Leu His Leu Thr Gly Thr Glu Phe Ser Phe Asp

115 120 125

Val Glu Met Glu Lys Leu Pro Cys Gly Met Asn Gly Alá Leu Tyr Leu

130 135 140

Ser Glu Met Pro Gin Asp Gly Gly Lys Ser Thr Ser Arg Asn Ser Lys 145 150 155 160

Alá Gly Alá Tyr Tyr Gly Alá Gly Tyr Cys Asp Alá Gin Cys Tyr Val

165 170 175

Thr Pro Phe Ile Asn Gly Val Gly Asn Ile Lys Gly Gin Gly Val Cys

180 185 190

Cys Asn Glu Leu Asp Ile Trp Glu Alá Asn Ser Arg Alá Thr His Ile

195 200 205

Alá Pro His Pro Cys Ser Lys Pro Gly Leu Tyr Gly Cys Thr Gly Asp

210 215 220

Glu Cys Gly Ser Ser Gly Ile Cys Asp Lys Alá Gly Cys Gly Trp Asn

225 230 235 240

His Asn Arg Ile Asn Val Thr Asp Phe Tyr Gly Arg Gly Lys Gin Tyr

245 250 255 • · · · • · • · · · · · ··· · ··· · · • · · · · · • · · · · · ‘ 29

Lys Val Asp Ser Thr Arg Lys Phe Thr Val Thr Ser Gin Phe Val Alá

260 265 270

Asn Lys Gin Gly Asp Leu Ile Glu Leu His Arg His Tyr Ile Gin Asp

275 280 285

Asn Lys Val Ile Glu Ser Alá Val Val Asn Ile Ser Gly Pro Pro Lys

290 295 300

Ile Asn Phe Ile Asn Asp Lys Tyr Cys Alá Alá Thr Gly Alá Asn Glu

305 310 315 320

Tyr Met Arg Leu Gly Gly Thr Lys Gin Met Gly Asp Alá Met Ser Arg

325 330 335

Gly Met Val Leu Alá Met Ser Val Trp Trp Ser Glu Gly Asp Phe Met

340 345 350

Alá Trp Leu Asp Gin Gly Val Alá Gly Pro Cys Asp Alá Thr Glu Gly

355 360 365

Asp Pro Lys Asn Ile Val Lys Val Gin Pro Asn Pro Glu Val Thr Phe 370 375 380

Ser Asn Ile Arg Ile Gly Glu Ile Gly Ser Thr Ser Ser Val Lys Alá

385 390 395 400

Pro Alá Tyr Pro Gly Pro His Arg Leu

Claims

1. Egy a cellulóz-tartalmú anyagok vagy írtelenítésére szolgáló módszer azzal jellemezve, anyagot vagy szövetet egy olyan cellulolitikus kezeljük, mely karboximetilcellulózon aktivitást cellotriózon katalitikus aktivitása pH=8,5 értéken k)_<af- = 0,01 s^_1 értéknek megfelel.

szövetek hogy az enzimmel mutat és legalább

2. Az 1. igénypont szerinti módszer, azzal jellemezve, hogy a cellotriózon tapasztalt katalitikus aktivitás pH=8,5 értéken legalább kj_<at = O,l s^_1 értéknek, előnyösen legalább 1 s“1 értéknek megfelel.

3. Az 1. vagy a 2. igénypontok szerinti módszer, azzal jellemezve, hogy a cellulolitikus enzimet a Humicola, Trichoderma, Mycelíophthora, Penicillium, Irpex, AAspergillus, Scytalidium vagy Fusarium törzseiből nyerjük.

4. A 3. igénypont szerinti módszer, azzal jellemezve, hogy az enzimet a Humicola insolens, Fusarium oxysporum vagy a Trichoderma reesei törzseiből származtatjuk.

5. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti módszer, azzal jellemezve, hogy az enzim egy rekombináns cellulóz, azaz a cellulóz alapjában véve más proteinektől mentes.

6. Az 5. igénypont szerinti módszer, azzal jellemezve, hogy a szülői cellulolitikus enzim az 1. számú szekvenciában • · • · bemutatott Humicola insolens endoglükanáz aminosav szekvenciáját vagy az említett endoglükanáz egy analógját uartalmazza, mely

i) az 1. számú szekvenciában bemutatott szekvenciával legalább 60% homológiát mutat, ii) az említett endoglükanázzal szemben termelt antitesttel reakcióba lép, és/vagy iii) egy olyan DNS szekvencia kódolja, mely az említett endoglükanázt kódoló DNS szekvenciáéval azonos próbával hibridizálódik.

7. Az 5. igénypont szerinti módszer, azzal jellemezve, hogy a szülői cellulolitikus enzim a 2. számú szekvenciában bemutatott Fusarium oxysporum endoglükanáz aminosav szekvenciáját vagy az említett endoglükanáz egy analógját tartalmazza, mely

i) a 2. számú szekvenciában bemutatott szekvenciával legalább 60% homológiát mutat, ii) az említett endoglükanázzal szemben termelt antitesttel reakcióba lép, és/vagy iii) egy olyan DNS szekvencia kódolja, mely az említett endoglükanázt kódoló DNS szekvenciáéval azonos próbával hibridizálódik.

8. Az 1-7. igénypontok bármelyike szerinti módszer, azzal jellemezve, hogy a cellulolitikus enzimet olyan mennyiségben használjuk, mely megfelel a 10 és 5000 ECU celluláz aktivitás/liter írtelenítő folyadék értéknek, előnyösen az 50 és 500 ECU/liter írtelenítő folyadék értéknek, előnyösen olyan mennyiségben használjuk, mely az 1-10 g enzim/liter, még előnyösebben 1-5 g/1, különösen 1-3 g/1 értéknek megfelel.

• · ···· ·· ·· * ¢. .

9. Az 1-8. igénypontok bármelyike szerinti módszer, azzal jellemezve, hogy az írtelenítési folyamatot 30-100 C° hőmérsékleti intervallumban végezzük, előnyösen 30-60 C° hőmérsékleti intervallumban és a pH érték 3-11 közötti, előnyösen 7-9 érték között van.

10. Az 1-9. igénypontok bármelyike szerinti módszer, azzal jellemezve, hogy a szövetet a pamut szövetet, viszkóz (műselyem) rostokat, liocell rostokat, a pamut összes keverékét, a viszkóz vagy liocell rostok más rostokkal, például poliészter rostokkal való keverékét, a viszkóz/pamut rost keveréket, a liocell/pamut rost keveréket, a viszkóz/gyapjú rost keveréket, a liocell/gyapjú rost keveréket, a pamut/gyapjú rost keveréket, a len (vászon), a ramié, más cellulóz rostokat tartalmazó szövetet és a cellulózos rostokat más rostokkal például gyapjú, poliészter, poliamid és akril rostok összes keverékét magába foglaló szövetekből szelektáljuk.

11. Egy a cellulóz-tartalmú szövetek írtelenítésére szolgáló írtelenítő készítmény, azzal jellemezve, hogy egy olyan cellulolitikus enzimet foglal magába, mely karboximetilcellulózon aktivitást mutat és cellotriózon katalitikus aktivitása pH=8,5 értéken legalább kkat⁼⁽Y értéknek felel meg és egy amilolitikus enzimet is magába foglal.

12. A 11. igénypont szerinti módszer, azzal jellemezve, hogy a cellulolitikus enzimet a Humicola, Trichoderma, • · >*

Myceliophthora, Penicillium, Irpex, Aspergillus, Scytalidium vagy Fusarium törzseiből nyerjük vagy származtatjuk.

13. A 12. igénypont szerinti írtelenítő készítmény, azzal jellemezve, hogy az enzimet a Humicola insolens, Fusarium oxysporum vagy a Trichoderma reesei törzseiből származtatjuk.

14. A 13. igénypont szerinti írtelenítő készítmény, azzal jellemezve, hogy a szülői cellulolitikus enzim az 1. számú szekvenciában bemutatott Humicola insolens endoglükanáz aminosav szekvenciáját vagy az említett endoglükanáz egy analógját tartalmazza, mely

i) az 1. számú szekvenciában bemutatott szekvenciával legalább 60% homológiát mutat, ii) az említett endoglükanázzal szemben termelt antitesttel reakcióba lép, és/vagy iii) egy olyan DNS,szekvencia kódolja, mely az említett endoglükanázt kódoló DNS szekvenciáéval azonos próbával hibridizálódik.

15. A 13. igénypont szerinti írtelenítő készítmény, azzal jellemezve, hogy a szülői cellulolitikus enzim a 2. számú szekvenciában bemutatott Fusarium oxysporum endoglükanáz aminosav szekvenciáját vagy az említett endoglükanáz egy analógját tartalmazza, mely

i) a 2. számú szekvenciában bemutatott szekvenciával legalább 60% homológiát mutat, ii) az említett endoglükanázzal szemben termelt antitesttel reakcióba lép, és/vagy ·· · • · · iii) egy olyan DNS szekvencia kódolja, mely az említett endoglükanázt kódoló DNS szekvenciáéval azonos próbával hibridizálódik.

16. A 11-15. igénypontok bármelyike szerinti írtelenítő készítmény, azzal jellemezve, hogy a továbbiakban tartalmaz legalább egy további olyan komponenst, melyet a nedvesítő anyagokat, diszpergáló anyagokat, elkülönítő anyagokat és emulgeáló anyagokat magába foglaló csoportból szelektáljuk.