JPH10503167A

JPH10503167A - 炎症処置用の成長因子保護ポリマーの使用

Info

Publication number: JPH10503167A
Application number: JP7525454A
Authority: JP
Inventors: ドニバリトール; ジャン−ピエールカルエル; ウィリヤムホルンベック; アンヌメダイ
Original assignee: ウニベルシテパリバルドマルヌ
Priority date: 1994-03-30
Filing date: 1995-03-29
Publication date: 1998-03-24
Also published as: FR2718024B1; FR2718024A1; CA2186758A1; WO1995026738A1; EP0752864A1

Abstract

(57)【要約】ＦＧＦ及びベータＴＧＦファミリーの成長因子をトリプシン分解から特異的に保護でき、且つ凝固を著しくは阻害しない、ＨＢＧＦＰＰとして知られる、ポリマー又はバイオポリマーの少なくとも一種の炎症の処置用の薬剤の製造のための使用が、開示されている。

Description

【発明の詳細な説明】炎症処置用の成長因子保護ポリマーの使用本発明は、炎症処置用の薬剤（drug）を調製するためのポリマー又はバイオポリマーの使用に関する。本発明は、更に、これらのポリマーを含有しかかる処置を意図する組成物に関する。炎症は、自発的な又は外傷性の組織損傷（spontaneous or traumatic tissula r lesion）に続いて起こる、特に複雑な症状発現である。それは、毛細管透過性（capillary permeability）の変異により特徴づけられ、又一般に紅斑及び浮腫により明らかになる、血液、分子状及び細胞性成分（molecular and cellular c omponents）の浸潤を伴う。多数のケミカルメディエーターが、この過程の間に放出され又は活性化され、その間に血液成分、特に白血球細胞が、異なる溶解活性（lytic activities）を蓄積し放出する。多くの物質が、抗炎症剤として、使用されている。それらは、大まかに、ステロイド剤と非ステロイド剤とに分けられる。ヘパリン結合性成長因子（ＨＢＧＦ）のファミリーに属する成長因子は、損傷又は組織の外傷の場合に、これらの分子の天然貯蔵部位である細胞外マトリックスのエレメントからこれらの組織によりそれらの構成細胞を通じて、又は循環細胞及び特に炎症細胞により、自然に放出される。炎症反応は、そのいくつかがＨＢＧＦファミリーに属する成長因子の濃度の局所的な増加を伴う。しょ糖硫酸エステル及びそのアルミニウム塩、スクラルファートは、抗炎症剤として記載され使用されている製品であり（米国特許第3432489号）、種々の医薬配合剤及び組成物として一連の特許に記載されている（米国特許第4975281号、第4885281号、第5013557号、第5164379号、第5196405号、第5240710号及びデンマーク特許第102488号及び第505588号）。抗炎症剤として、他の化合物が記載されている：ラロッカアール．（Larocc a R.）らによるスルホン化有機化合物であるスラミン（suramin）（米国特許第7 479817号）、コーエンアイ．アール．（Cohen I.R.）らによるヘパリンの低分子量混合物を含有する組成物（WO9219249）、エクレエイチ．ピー．（Ekre H. P.）らによる補体システムの阻害効果（complement system inhibiting effects ）を示すヘパリンのフラグメンツ（WO9202232）、ミヤザキケー．（Miyazaki K.）らによる化学修飾によりグリコシル化された蛋白質から誘導された製品（EP 454898）、バーンフィールドエム．（Bernfield M.）らによるシンデカン（syndecan）のようなヘパラン硫酸プロテオグリカン（ WO9305167）、ビアンキニピー．（Bianchini P.）らによるデルマタン硫酸から誘導されたオリゴ糖（WO9305075）。加えて、グリコサミノグリカン（glycosaminoglycans）（ＧＡＧｓ）を含むポリマー混合物である、スロデキシド（sulodexide）とヘパリンとを組み合わせたものを含む組成物について、軽度の外傷の処置におけるその作用が研究されている（ドラガニ(Dragani)ら，1989，ミネルバメディカ(Minerva Medica)，80，N o.4，pp.397-403）。しかしながら、これら二種の化合物は、別個に試験されていない。故に、これら二種の化合物のひとつが治療作用の要因であるのか否かを決定することは不可能である。サギオロ（Saggioro）らにより、他のグリコサミノグリカン混合物であるメソグリカン（mesoglycan）の、痔（hemorrhoids）に対する活性が試験されている（1985，ミン．ダイエト．エ．ガストロ．（Min．Diet．e．Gastr.）31，pp．31 1-315）。この刊行物によれば、メソグリカンは、痔に対して非常に有効に作用し、又それは症状を抑え、内視鏡的所見を改善する。それにもかかわらず、この刊行物は、示された非常に特殊なタイプであり、その上不十分に規定された動物起源の変化しやすい組成を示すポリマーのみに関するものである。ＣＭＤＢＳ，（カルボキシメチル、ベンジルアミン及びスルホネートで置換されたデキストラン）と呼ばれる他のファミリーのポリマーの合成が、フランス特許第2461724号及び米国特許第4740594号に記載されている。これらのポリマーのあるものは模擬ヘパリン（mimic heparin）であり、その抗凝固及び抗補体作用に基づき血漿ヘパリンの代替物として使用できる。これらＣＭＤＢＳポリマーのいくつかは、ＦＧＦファミリーの成長因子のインビトロ生物活性の安定化、保護及び増強（potentialization）からなる他のヘパリン特性の模擬物である（ターディエ(Tardieu)ら、ジャーナルオブセルラーフィジオロジー(Journal of Cellular Physiology)，1992，150 pp．194-20 3）。フランス特許第2644.066号は、ＦＧＦと組み合わせられたある種のＣＭＤＢＳが、皮膚及び角膜の治癒のために使用されることを記載している。実験は、ラットにおいて、直径６ｍｍの中空パンチを用いて、皮膚の傷を生じせしめることにより行われた。この例では、ＦＧＦ２と組み合わせたＣＭＤＢＳは、皮膚の修復の速さと質における明確な効果を得ることを可能にした。従って、従来技術を分析すると、ＣＭＤＢＳタイプのポリマーが、成長因子と組み合わせて、特定の組織即ち皮膚組織のある種の損傷に対して既に使用されていることが、明らかである。与えられた分子の治療上の効果が予測できないので、これらポリマーが皮膚組織以外の組織に対して影響を与えるか否かは、明確ではなかった。事実、ヒトや動物の体の異なる組織が構造的及び機能的な特定の特徴を示し、皮膚組織に対する効果が知られている分子の、炎症を起こした種々の起源の組織に対する作用を予測不可能とすることは、良く知られている。同様に、特定の実験モデル上でのインビトロの結果から、特定の組織に対するインビボでの分子の活性を予測することが不可能であることは良く知られている。驚くべきことに、本発明により、ＨＢＧＦＰＰクラス、特にＣＭＤＢＳに属すると定義されるある種のポリマーが、炎症反応の強度に影響を与え、炎症反応を高度に減少させると同時に損傷組織の修復（reparation）、再生（regeneration ）及び回復（restoration）のプロセスを促進することが、発見された。また、これらのポリマーが非常な低用量で治療効果を有することも示された。本発明は、ＦＧＦ及びベータＴＧＦファミリーの成長因子をトリプシン分解から特異的に保護し且つ凝固を有意には阻害しない、メソグリカンを除くＨＢＧＦＰＰと呼ばれるポリマー又はバイオポリマーの少なくとも一種の、種々の組織の炎症の処置用の薬剤の製造における使用に関する。特に、かかるポリマーは、メイレット（Maillet）ら（モレキュラーイムノロジー(Mol．Immunol)，1988，25，915-923）により測定される、ポリマー１ｍｇ当たり５０国際単位未満の抗凝固活性（anticoagulant activity）を示す。有利には、該ポリマーは、インビトロでＦＧＦを増強する。好ましくは、それは補体システムを実質的に活性化しない、即ち、それはＣＨ₅₀が０．５μｇを越える抗補体システムを有している（マウザック(Mauzac)らによる，バイオマテリアル(B iomaterials)，6，61-63，1985）。本発明によれば、ポリマーは、上記定義に対応したあらゆる天然物質、化学的に修飾された天然物質又は全合成物質を意味すると理解される。それ故、次のポリマーが、関与する： −デキストランから得られるが、他のタイプの基による他のタイプの置換により修飾されたポリマー、 −デキストランに由来するもの以外であるが、オシディック（osidic）残基を含む天然ポリマー（セルロース、キチン、フカン(fucanes)等）、 −非オシディック（non-osidic）性のモノマーの重合によって得られる修飾又は非修飾のポリマー（ポリリンゴ酸(malic polyacid)、ポリ蓚酸(oxalic polyac id)、ポリ乳酸(lactic polyacid)、ポリスチレン、ポリエチレングリコール）。有利には、上記ポリマー又はバイオポリマーは、主にグルコース残基から構成される多糖である。それはまた、グルコサミン残基及び／又はウロン酸残基を、特にグルコサミン −ウロン酸ダイマーの形で、含んでいても良い。特に好ましい多糖は、置換デキストラン、グリコサミノグリカンであり、脂質、ペプチド若しくはプロチド（protide）、又はこれらポリマーのスルフェートと組み合わせても良い。かかる多糖は、好ましくは１０ｋＤ以上、有利には約４０ｋＤの分子量を有する。本発明はまた、これらのポリマーを含有する薬学的組成物にも関する。該ポリマー及び／又はバイオポリマーは、天然物質から選択することができ、必要ならば適当な化学基の付加により修飾されていても良く、また、完全に合成により得ても良い。これらの天然、半合成又は全合成ポリマーは、次いで、いくつかの成長因子、特にＦＧＦ及びベーＴＧＦファミリーの成長因子と特異的に相互作用する能力に基づいて、選択される。それらはまた、この（又はこれらの）因子を蛋白質分解（proteolytic degradation）から保護する能力、及び例えば白血球エラスターゼやプラスミンのような炎症反応に関係するプロテイナーゼ活性の阻害剤として作用する能力、並びにそれらの抗凝固活性に基づいて、選択される。これらポリマーは、以下、包括的略称であるＨＢＧＦＰＰ（ヘパリン結合性成長因子プロテクター及びプロモーター(heparin binding growth factor pro tectors and promotors)）と称する。また、実施例として、これらポリマー又はバイオポリマーの二つのプロトタイプを、これらのポリマーの選択の基準及び方法と共に示す。第一のＨＢＧＦＰＰの実施例は、公知の生成物であるＣＭＤＢＳファミリーに属し、即ち機能化された生物特異的デキストラン（biospecific dextrans）であり、カルボキシメチル、ベンジルアミド及びベンジルアミンスルホネートで置換されている。これらのポリマーは、引き続いて化学的に置換される天然物（デキストラン）からのＨＢＧＦＰＰの取得を示す。第二の実施例は、組織抽出物由来の精製されたグリコサミノグリカンスルフェートのような純天然物からの選択を記載する。これら二つの実施例は、ＦＧＦ及びベータＴＧＦファミリーの成長因子と相互作用し、該成長因子を安定化し、保護し及び増強する、これらＨＢＧＦＰＰの能力、並びにすべての起源の炎症の処置を可能にする薬学的組成物におけるそれらの使用を、説明する。本発明における種々の実施例は、異なる種類の再生又は組織治癒に対するＣＭＤＢＳの治癒効果に加えて、局所炎症反応の強度が非常に低減されることを、示している。本特許出願において、《処置》は、特に、組織の再生及び治癒の刺激剤効果（ stimulator effect）への補足としての白血球エラスターゼ、プラスミン、メタロプロテイナーゼ（metalloproteinases）のようなプロテイナーゼ活性を含む、炎症の予防又は吸収（resorption）のために行われるすべての治癒的又は予防的な操作を意味する。下記の実施例は、損傷を受けた組織を、このタイプの損傷について薬学的に許容され且つ適合性のある１又は２以上の賦形剤と組み合わせて、ＣＭＤＢＳのようなＨＢＧＦＰＰの有効量で処置した場合に炎症反応の強度の減少が観察されることを示す。該薬学的組成物は、また、例えば、抗菌剤、抗黴剤、ビタミン若しくは類似物、防腐剤、鎮痛剤、日光防護剤及び他の抗炎症剤のような薬剤、又はその特定の効果のために組み合わされる他のどのようなタイプの化合物と組み合わされても良く、そして意図された処置のタイプに許容され且つ適合したあらゆる薬学的ガレン製剤の形態（pharmaceutical galenic f orm）で投与される。有利には、そのような組成物は、経口経路により直接吸収されるか、特に皮下、頬（buccal）又は直腸の損傷部のようにもしその損傷部が直接に接近可能であるならば、損傷部に置かれるか又は注入されるか、或いは再び外科的介入（surg ical intervention）の間に組織に置くか注入して、直接的に吸収されるように設計される。単位投与量は、病理学的特異性に適合する容量で、処置すべき組織のｍｌ又はｃｍ²当たりＣＭＤＢＳ又はＨＢＧＦＰＰ１０〜２５００μｇである。使用されるＣＭＤＢＳ又はＨＢＧＦＰ生成物の投与量は、傷の表面に応じて、ミリリットル当たり１０〜２５００μｇの原溶液のフラクションに相当し（それは、通常の傷に局所的に適用される溶液の数百マイクロリッターをめったに越えない付着量（deposit）を意味する）、この投与量は２４時間当たり１回又は２回適用される。使用されているスクラルファート組成物は０．０１〜５％（米国特許第5196405号による）、即ち本発明で記載されるよりも少なくとも１０倍大きい濃度であり、そして米国特許第5196405号に記載されている全ての実施例において記載された効果は組成物１ミリリットル当たり５０ｍｇから得られている。ビヒクルは、生理的漿液（physiological serum）又は緩衝液、例えば０．１５ＭＮａＣｌを含むＰＢＳ又は損傷した組織を刺激しない他のどのような適合性溶液であっても良い。当業者に周知の標準的技術に従って、濃厚溶液若しくはゲル溶液又はエアロゾルを提供する処方が、損傷部のタイプ及び近づき易さによって、提案される。これら化合物の適用範囲は、治療上又は予防上の観点から、エラスターゼ及び／又はプラスミンの活性と関連する病状に対応する。エラスターゼタイプの活性と関連した病状は、次の広いカテゴリーに入るものである： −唇、口腔前庭（buccal cavity）、歯肉（歯周病）、粘膜、膣を含む皮膚の障害、例えば、肛門表面の炎症、痒疹（pruriginous）、紅斑性皮相発疹（erythematous superficial eruptions）、座瘡（acne）又は酒さ（rosaceas）、例えば脂漏又は膿疱タイプの（seborrheal or pustular-type ）炎症、フルンケル（furuncles）、膿瘍（abscesses）、 −細菌性、真菌性、ウイルス性の皮膚カバリング感染症、例えばカンジダ又はヘルペスによるもの、 −種々の原因による急性又は慢性皮膚炎、例えば日焼け、皮相の火傷（superf icial burns）、 −包帯、カテーテルのような異物や痔に対する炎症反応、 −外陰炎（vulvitis）又は肛門周囲の痒み、 −通常の耳、鼻、咽喉（ENT）及び肺（pulmonary）の病状及び障害、例えば、アレルギー性、急性又は慢性の副鼻腔炎（sinusitis）又は鼻炎（rhinitis）、耳炎（otitis）、肺の炎症反応、水腫（edemas）、気腫（emphysemas）、線維症（fibrosis）、気管支炎（bronchitis）に対する二次反応、喘息（asthma）、 −炎症性障害に関連した眼の（ocular）病状、化粧品アレルギー、結膜炎、斑点状角膜炎、潰瘍、 −免疫性又はウイルス性障害に結合した病気、例えば関節炎及びリウマチ様多発性関節炎、滑膜炎、痛風及び異なる形態の関節炎の炎症、紅斑、アナフィラキシー、細菌性の敗血症、エイズ、 −寄生生物病、例えばトキソプラズマ症、サイトメガロウイルス、マラリア、ポリオ（poliomyelitis）等、 −例えば腎臓についての糸球体腎炎のような器官の炎症反応の処置、又は生体に対する異物の移植（implantation）を含み又は含まない外科的操作に関連した炎症反応の処置、 −血管の病状、特にアテローム性の動脈瘤（aneurysms）又は老化に関連した動脈硬化タイプ（arterioscleromatous type）の病状、プラスミンタイプの活性に結合した主要な病状は、腫瘍の進行及びその結果として生じる合併症の範囲をも包含している。本発明を、それにより決して限定するものではない実施例により説明する：図１は、ＣＭＤＢＳの式を示す。図２は、ヘパリン、メソグリカン及びスロデキシド（sulodexide）による、ＦＧＦ１（２Ａ）及びＦＧＦ２（２Ｂ）の生物活性の増強を示す。生物活性は、ＣＣＬ３９細胞におけるトリチウム化チミジンの取り込みの増加を、ＦＧＦ１及びＦＧＦ２を単独で又はヘパリン２０μｇ、メソグリカン１０ μｇ又はスロデキシド１０μｇの存在下で加えられた、ＦＧＦ１及びＦＧＦ２の投与量の関数として測定した。図３及び４は、ＦＧＦ１（３）及びＦＧＦ２（４）の熱分解に対するヘパリン、メソグリカン及びスロデキシドの保護作用を示す。ＦＧＦサンプルは、それ単独で又はヘパリン２０μｇ、メソグリカン１０μｇ又はスロデキシド１０μｇの存在下で、２０℃（ａ）又は３７℃（ｂ）で、１、７、１５、３０日間インキュベートされた。横軸に表された生物活性の測定値は、ＣＣＬ３９細胞におけるトリチウム化チミジンの取り込みの刺激単位値（ＥＤ₅₀）に相当する。図５Ａは、¹²⁵Ｉ−ＦＧＦ１の蛋白質分解に対するヘパリン、メソグリカン及びスロデキシドの保護作用を示す。蛋白質分解消化は３７℃で行われ、サンプルは１８％ポリアクリルアミドゲル電気泳動により分離された。該ゲルは、乾燥され、オートラジオグラフにかけられた。第一のトラック（track）は、¹²⁵Ｉ−ＦＧＦ１単独を含んでいる。¹²⁵Ｉ−ＦＧＦ１は、トリプシン（トラック２）、ヘパリン（トラック３）、メソグリカン（トラック４）又はスロデキシド（トラック５）の存在下に、インキュベートされた。図５Ｂは、¹²⁵Ｉ−ＦＧＦ２の蛋白質分解に対するヘパリン、メソグリカン及びスロデキシドの保護作用を示す。トラックの配置は、図５Ａにおいて¹²⁵Ｉ− ＦＧＦ１について示されたそれと、同じである。図６Ａ及び６Ｂは、それぞれ、カラムのカリブレーションのためのコンドロイチン硫酸（CSA）フラクションの存在下に、ＨＳＭフラクション（図６Ａ）及びＨＳＳフラクション（図６Ｂ）のＤＥＡＥ−トリスアクリル（Trisacryl）カラム溶出プロフィールである。図７Ａ及び７Ｂは、それぞれ、生理的漿液（physiological serum）を吸収したコラーゲン包帯（７Ａ）、及びＣＭＤＢＳを吸収したコラーゲン包帯（７Ｂ）で処置された、炎症を呈している骨組織を示す。図８Ａ〜８Ｃ及び再び図８Ｄ〜８Ｆは、それぞれ、ＣＭＤＢＳを吸収したコラーゲンで及び生理溶液（physiological solution）を吸収したコラーゲンで処置された皮膚の傷の切片を示す。図９は、健康な組織（トラック１及び１２）、ＣＭＤＢＳで処置された瘢こん（cicatricial）組織（トラック２〜４及び１３〜１５）、及び生理溶液で処置された瘢こん組織（トラック５〜１１、１６及び１７）における、メタロプロテイナーゼの５日目（トラック１〜１１）及び６日目（トラック１２〜１７）の出現（expression）を示す。実施例１ＣＭＤＢＳの調製および選択ａ）ＣＭＤＢＳの調製ＣＭＤＢＳはカルボキシメチル、ベンジルアミドおよびベンジルアミドスルホネート基によって置換されたデキストランである。ＣＭＤＢＳの合成方法は、バイオマテリアルズ（Biomaterials）１９８４，５，ｐｐ３０１−３０４にエム．マウザック（M.Mauzac）およびジェイ．ジョセフォンビクツ（J.Josefonvicz）が記載した方法でよい。このプロセスによれば、カルボキシメチルデキストラン（ＣＭＤ）は、位置５および６の炭素上で、カルボキシル基によりいくつかのグリコシル化されたユニットを置換することによってデキストランから調製される。次の段階で、ベンジルアミドをカルボキシル基と結合させて、カルボキシメチル−ベンジルアミドデキストラン（またはＣＭＢＤ）を形成させる。最後に、ベンジルアミドのいくつかの芳香族核（aromatic nodes）をスルホン化してカルボキシメチルデキストラン・ベンジルアミド・スルホネートまたはＣＭＤＢＳを得る。これら誘導体のナトリウム塩を限外濾過し、凍結乾燥し、使用前に適切なバッファに溶解させる。ＣＭＤＢＳの一般式を図１で説明する。ＣＭＤＢＳは異なった置換基の統計的分布を有する。各ＣＭＤＢＳタイプのパーセンテージは標準的な方法を用いることにより測定される。ｂ）ＣＭＤＢＳの選択ｉ：ＦＧＦの保護および安定化試験ＣＭＤＢＳの合成の間、各基の置換割合を、置換反応条件を調節することによって制御できる。パラメーター、例えば、温度、反応時間、構成成分の相対的濃度、置換反応数等の制御により、非常に多数の置換ポリマーを得ることができる。位置５および６の炭素上のカルボキシメチルによる水酸基の置換は、０から２００％（位置５および６の炭素それぞれについて１００％）の範囲のカルボキシメチル化割合を与える。次に、カルボキシメチル基はベンジルアミドを固定するために部分的にまたは全面的に用いられる。ベンジルアミド基は、スルホン化のために部分的にまたは全面的に用いられる。本発明で用いる機能化され置換されたデキストラン（functional ized substituted dextrans）は、具体的にはフランス特許第２，４６１，７２４号に記載されたものの中にある。ＦＧＦファミリーの成長因子を安定化し且つ保護する能力に加えて、タルディエウら（Tardieu）ら，ジャーナルオブセルラーフィジオロジー（J.Cell.Physio.）１９９２，１５０，ｐｐ１９４〜２０３なる刊行物及びフランス特許第２．４６１．７２４号に記載されているように、選択されたＣＭＤＢＳは、下記の評価方法により、ベータＴＧＦファミリーに属する成長因子ファミリーの少なくとも一種と相互作用することおよびベータＴＧＦをタンパク質分解から保護することができなければならない。ｉｉ．ＣＭＤＢＳとベータＴＧＦファミリーの成長因子との間の相互作用能力の評価。ある種のＣＭＤＢＳが、ベータＴＧＦファミリーのメンバーと相互作用し、この相互作用によってベータＴＧＦを保護する能力を評価するために、等級付け試験を工夫した。この試験は、選択されたＣＭＤＢＳが、ベータＴＧＦがプロテアーゼ処理にもかかわらずその生物活性を維持することを許容する能力を測定することからなる。下記の実施例において、用いたＣＭＤＢＳは、カルボキシメチル単位１１０％、ベンジルアミド単位３．６％およびスルホネート単位３６．５％の置換比率によって定義されたバッチ２６．２であり、４ＩＵ/ｍｇ（国際単位）の抗凝血活性を有する。このバッチの抗補体活性は、マウザックら（前に引用された）に従い測定されたＣＨ₅₀が１．１μ ｇである。コントロールとして用いたヘパリンはサノフィカンパニー（Sanofi company ）（チョアイインスティテュート（Choay Institute））によって供給され、１７５１Ｕ/ｍｇの抗凝血活性を提供する。ベータ１ＴＦＧは、多くの刊行物（例えば、グロウスファクターズ・アンド・ゼア・レセプターズ（Growth factors and their receptors），1992,vol 1 p p419-472，エイ．ロバーツ（A.Roberts）およびエム．スポーン（M.Sporn）著、エイ．ロバーツ（A.Roberts）およびエム．スポーン（M．Sporn）編,スプリンガーフェアラークベルリン（Springer Verlag Berlin）出版）に記載されているプロトコルに従ってヒト血小板から調製され、当業者により普通に用いられている。本実施例で用いるベータＴＧＦの生物活性試験は、ＣＣＬ６４細胞（アメリカンティシューカルチャーコレクション（American Tissue Culture Collecti on）から入手）の阻害試験である。この阻害は、ファンゾーレン（Van Zolen ）がプログレスイングロースファクターリサーチ（Progress in Growth Factor Rese arch）,1990,2,pp131〜152に記載したプロトコルに従いＦＧＦによって、またはウシ胎児血清によって刺激されたこれらＣＣＬ６４細胞への用量依存的なトリチウム化チミジンの取り込みをベータＴＧＦが阻害する能力によって測定される。ベータＴＧＦの２つの投与量を用いる。一方はトリチウム化チミジンの取り込みの５０％阻害能力に相当し（阻害活性単位と定義される）、他方は１００％阻害能力に相当する。この実施例において、得られた値は、培養培地の１ｍｌにおいて培養されたＣＣＬ６４細胞についてＴＧＦ２５０ｐｇである。０．１％ウシ血清アルブミン（シグマカンパニー（SIGMA company）,セントルイス米国から入手）を含有する燐酸緩衝生理食塩水中で、ベータＴＧＦ５０ｎｇのサンプルを単独でインキュベートするか、または、ＣＭＤＢＳ５０００μｇ若しくはヘパリン５０００μｇと共に、トリプシン５００μｇの存在下又は非存在下で、インキュベートする。インキュベートされた溶液の最終容量を１ｍｌに調節し、インキュベーションを３７℃で異なった長さの時間行う（記載された実施例では１０分（表１））。それぞれのインキュベーション反応から２０μｌのサンプルを取り、イー．ゾーレン（E．Zohlen）により記載された前述のプロトコルに従い、１ｍｌの培養培地を各ウエルに含む２４ウエルのプレートで培養したＣＣＬ６４細胞に加える。これらの条件で、ウエル当たりのベータＴＧＦの最終濃度は１ｎｇ/ｍｌである。表１は、様々な条件で得られた結果を要約し、ＣＭＤＢＳの保護効果を示す。従って、３７℃で１０分間のインキュベーションの後、ベータＴＧＦの生物活性の７５％が尚存在するが、一方、ヘパリンは、それがベータＴＧＦに固定できるという事実にもかかわらず（マックキャフリーら（Mac Caffrey et al.） , ジャーナルオブセルラーフィジオロジー（J of Cell．Physiology）,1992,v ol 52,pp430-440）、ベータＴＦＧをこのタンパク質分解から保護しない（２０％未満の生物活性が残存する）。ＦＧＦの場合、ヘパリンはトリプシンによって誘発されるタンパク質分解に対して保護することを思い出すべきである（タルデゥーら（Tardieu et al.）ジャーナルオブセルラーフィジオロジー（Jour nal of Cellular Physiology）,1992,150:pp194-203）。ＣＭＤＢＳは、トリプシンの活性に対する阻害力を有しないことが証明された（表２）。従って、トリプシンの１０μｇは、基質（Ｓ．８７パリのセルビオカンパニー（Serbio company）によって供給され、供給者の推薦により用いた）と共に、またはこの基質およびトリプシンインヒビター、例えば、大豆（soya）由来のもの（例えば、シグマ（ Sigma）製の大豆トリプシンインヒビターまたはＳＴＩ）とインキュベートされ、これらのインキュベーションは各種量のＣＭＤＢＳの不存在下又は存在下で実施した（バッチＡＭ２６）。トリプシンの酵素活性を、インキュベーション時間に対するＳ８７のトランスフォーメーション産物の分光光度吸収により測定した。実施例２：他のＨＢＧＦＰＰの選択プロテオグリコサミノグリカンおよびグリコサミノグリカン、スロデキシドの市販の調製品を、そのＦＧＦおよびベータＦＧＦファミリーの成長因子と相互作用する能力により選択した。メソグリカンおよびスロデキシドの分画により得たヘパラン硫酸の調製品も試験した。メソグリカンおよびスロデキシドはシグマケミカルカンパニー（Sigma Ch emical Co）,セントルイスミズーリ米国により供給された。それらの特性を表３に要約する。本実施例で使用された細胞は、アメリカン・ティシュー・カルチャー・コレクション（American Tissue Culture Collection）からのＣＣＬ３９細胞である。培養およびＦＧＦ生物活性の測定試験に関する条件はジャーナルオブセルラーフィジオロジー（Journal of Cellular Physiology），１９９２のタルディウ（Tardieu）らによる刊行物に記載されたものと同じである。用いたＦＧＦ成長因子は、ＦＧＦ１およびＦＧＦ２組換体である。ａ）インビトロでのＦＧＦの生物活性に対するスロデキシドの効果これらの試験において、最大刺激を誘発する投与量の５０％の生物活性の刺激を誘発するために、ＦＧＦ１または２を有効投与量（ＥＤ₅₀という）に相当する用量で用いた。生物活性は、多数の文献に広く、例えば、前出のタルディウ（Ta rdieu）らおよびフランス特許第２６４４０６６号に記載されているプロトコルに従い、細胞中のトリチウム化チミジンの取り込み増加を誘発する能力により測定した。本実施例において、ＥＤ₅₀は、ＦＧＦ１については５ｎｇ／ｍｌ、ＦＧＦ２については３ｎｇ／ｍｌであり、これらの値は実験的に測定した（図２Ａおよび２Ｂ）。ＦＧＦ用量の関数として同じ刺激試験をスロデキシド１０μｇ／ｍｌまたはヘパリン２０μｍ／ｍｌの存在下で行う。図２は、これらの条件でＥＤ₅₀がＦＧＦ１およびＦＧＦ２について、これらの用量のスロデキシドまたはヘパリンの存在下で夫々０．４ｎｇ／ｍｌおよび０．２ｎｇ／ｍｌとなることを示す。ＦＧＦの生物活性を増強するこの能力に加えて、ＨＢＧＦＰＰは、熱分解およびトリプシンのタンパク質分解作用により誘発される不活性化からＦＧＦを保護する（図４および５）。同様に、これらのＨＢＧＦＰＰは、ＦＧＦ１および２をトリプシンのタンパク質分解活性により誘発される不活性化から保護する（図５Ａおよび５Ｂ）。ｂ）スロデキシド、デキストラン、デキストラン硫酸およびスクラーゼのベータＦＧＦに関する保護効果いくつかの他の化合物を評価した：デキストラン硫酸（シグマケミカル（Sigm a Chemical），分子量４０，０００、ＣＭＤＢＳの合成に用いたデキストラン（同様にＳｉｇｍａ製））、スクラーゼまたはスクロースオクタスルフェート（ディー．バーシャロム（D.Bar Shalom），ブクメディックカンパニー（Bukh Medic company），デンマーク製）。これらの化合物のいくつか、例えば、スクラーゼ（米国特許第５２０２３１１号参照）またはデキストラン硫酸（日本特許１３８９０７／８８参照）は、ＦＧＦを保護および安定化するので選択した。該デキストランは、ＣＭＤＢＳＡＭ２６の合成に用いるものである。ベータＴＧＦ生物活性の保護試験を、実施例１ｉｉに記載したＣＭＤＢＳについてと同じ方法で実施した。インキュベーション混合物に、５０ｎｇのベータＴＧＦ（０．１％ウシ血清アルブミン中）およびトリプシン（５００μｇ）を含有させた。メソグリカンまたはスロデキシドまたはデキストラン硫酸またはデキストランまたはスクラーゼを、５０００μｇの用量で用いる。ベータＴＧＦ生物活性は、５０倍に希釈した後ＣＣＬ６４細胞を用いて上記のように測定した。結果を表４に示す。これらの結果は、ＦＧＦおよびベータＦＧＦに関する二つの選択基準に応ずることができる或る種のＣＭＤＢＳのように、スロデキシドがベータＴＧＦについての有意な保護活性があることを示す。ｃ）スロデキシドおよびメソグリカンのヘパラン硫酸フラクションの単離スロデキシドおよびメソグリカンは、種々のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）から実質的になるいくつかの物質の混合物に相当する。最初の精製段階により、これら二つの生成物のそれぞれの乾燥品の１グラム当り、全ＧＡＧが、メソグリカンについては８７４ｍｇおよびスロデキシドについては７９５ｍｇ含まれていることが立証された。この精製は、これら溶解生成物をイオン交換クロマトグラフィー（ＤＥＡＥ− トリスアクリル）に供し、全てのタンパク質汚染物質を除去して得た。その後、全ＧＡＧは、ＤＥＡＥのゲルを、１．５ＭＮａＣｌを含有するｐＨ４の酢酸ナトリウム溶液で溶出することにより精製した。水に対する透析を充分行った後、ＧＡＧの各生成物６０ｍｇを、ＡＢＣコンドロイチナーゼ（ＧＡＧのｍｇ当たり１単位）で一夜３７℃で消化した。この酵素は、ヘパラン硫酸（ＨＳ）を除くすべてのＧＡＧを分解する。消化産物は、分子篩クロマトグラフィー（Ｇ５０Ｓｅｐｈａｄｅｘ，１．８×９５ｃｍカラム）に供した。その後、溶出を重炭酸アンモニウムバッファで１８ｍｌ／時の速度で行う。ＨＳ−タイプＧＡＧに相当する非消化物質を、カラムの溶出の死容積中に集める。ＧＡＧ濃度は、それらのウロン酸含有量からカルバゾール法（ビターティー．（Bitter T.）およびムアーエイチ．エム．（Muir H. M.），１９６２，アナリティカルバイオケミストリー（Anal.Biochem）４，ｐｐ３３０−３３４）を用いて算出する。これらの測定より、各生成物について次の組成を得た：これら二つの生成物のそれぞれのＨＳフラクションを再度ＤＥＡＥトリスアクリルゲル上でクロマトグラフィーにかけた。各ＨＳフラクション１ｍｇは、メソグリカン（図６Ａ）およびスロデキシド（図６Ｂ）３ｍｌに精製され、０．０５ＭＮａＣｌバッファ、０．０５ＭＴｒｉｓ−ＨｃｌｐＨ７．５で平衡化したカラムに付着させた。カラムを１０倍量の同じバッファで洗浄し、１０倍量の０．０５ＭＮａＣｌバッファ、０．０５Ｍ酢酸ナトリウムｐＨ４で洗浄した後、カラムに固定された物質を、同じ酢酸バッファ中で０．０５ＭＮａＣｌから１．５ＭＮａＣｌの塩濃度勾配により脱着する。集めた各フラクションの１ｍｌをカルバゾール法により測定した。もとの生成物のそれぞれのＨＳ成分に相当する物質は、ほぼ同じ溶出プロフィール、従ってほぼ同じ見かけの負荷量（apparent boad）を示す。この溶出ピークの極大は、０．９４ＭＮａＣｌの食塩水濃度で得られる。クロマトグラフィーのキャリブレーションを行なうために、コンドロイチン硫酸（ＣＳＡ）の定義されたフラクションを、同じプロトコルに供した。このＣＳＡフラクションは、二糖当り、一つのみの硫酸基を含み、０．７２ＭＮａＣｌのイオン強度で溶出する。これらの結果は、ＨＳフラクションが、比較のＣＳＡよりも多くの硫酸基を含むことを示す。ＨＳフラクションは、二糖単位当たり約二つの硫酸基を示す。これらフラクションを、それらのベータＴＧＦおよびＦＧＦに関する保護力を、それぞれの原料で立証された保護力と比較して明らかにするために試験した。各種ポリマーによるＦＧＦの保護効果の半定量的評価上記のように、放射性ＦＧＦの一定量を種々の条件下でインキュベートする。反応生成物のオートラジオグラフィーの後、放射性ＦＧＦの非分解量を濃度計により定量する。値は、反応の開始時に付着した量と比較して見い出された放射標識されたＦＧＦのパーセンテージに相当する（図５）。表４及び５の結果は、メソグリカン及びスロデキシドに夫々由来するＨＳＭ及びＨＳＳフラクションが、これら２つの組成物よりも大きく、１００％に近い保護効果を示すことを示している。実施例３：白血球エラスターゼおよびプラスミンの活性に対するＣＭＤＢＳおよびグリコサミノグリカンのインビトロ阻害効果各種ＣＭＤＢＳおよびそれらの合成の中間体化合物の阻害力を、白血球エラスターゼおよびプラスミンについて立証した。精製した白血球エラスターゼを、エラスチンプロダクツカンパニー（Elas tin Products Co）（オウエンビル、ミズーリ、米国（Owenville,MO,USA）から入手し、プラスミンをシグマ（ＳＩＧＭＡ）から入手した。これら異なる化合物による酵素活性の阻害を、恒温浴中において３７℃で実施する。検討対象の酵素を、エラスターゼについてはｐＨ８、プラスミンについてはｐＨ７．４の１００ｍＭトリス−ＨＣｌバッファの溶液中に、プラスミンについては０．０２％ナトリウムアジドおよび０．０１％トリトン（Triton）Ｘ１００の存在下で導入する。基質および酵素の濃度は：８．３ｎＭのエラスターゼについては０．１０ｍＭＭｅＯ−Ｓｕｃ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−ｐＮＡ（パラニトロアニリド）および７７ｎＭのプラスミンについては０．２０ｍＭｄＶａｌ−Ｌｅｕ−ｄＬｙｓ− ｐＮＡである。ＩＣ₅₀を各条件について測定する。表６は得られた結果を示し、バッチＡＭ６は、４０，０００ｋＤのＴ４０デキストランに相当する。バッチＥＭ５は、１０，０００ｋＤのＴ１０デキストランに相当する。合成の中間体生成物は各置換反応の数を特定するインデックスナンバーで上記したシンボルにより特定される。ＩＣ₅₀の値は、白血球エラスターゼ活性に対して、この活性の最良の阻害剤の一つであるヘパリンのそれと同等の非競合的双曲線タイプの阻害効果を有することを示す（１ｎＭのオーダーのＫｉ）。加えて、ヘパリンと異なり、ＣＭＤＢＳはプラスミンに対し阻害効果を示す。表６は、ＨＳＭおよびＨＳＳフラクションの阻害効果が、夫々メソグリカンおよびスロデキシドの阻害効果より大きいことも示す。実施例４骨組織におけるＣＭＤＢＳの抗炎症性効果骨組織におけるＣＭＤＢＳの抗炎症性効果の研究の目的で、ラビットの頭蓋冠骨の再生モデルを用いた。この骨をその半分の厚みで切断した後、肉芽組織の炎症反応をＣＭＤＢＳの存在下および非存在下で比較した。ホワイトアダルトニュージーランドラビットであって骨の成長が終了した、体重３〜４ｋｇのものを、雄雌の８匹のラビットからなる２群に分割した。これらのラビットを塩酸ケタミン（１００ｍｇ／ｋｇ）およびアセプロマジン（acepro mazine）（１００ｍｇ／ｋｇ）の腹腔内注射により、麻酔をかけた。前頭頭頂骨傍正中切開を施し、頭蓋冠にアクセスした。四つの骨の割れ目（直径５ｍｍおよび深さ３ｍｍ）をドリルを用いて形成した。介入（intervention）の間、熱障害をさけるため、手術側をコンスタントに潅注した。後部左および右側をコラーゲン（フランス，ディジョン（Dijon），ラボラトワールフォルニエール（Labor atoires Fournier）製のミクロフィラリア止血性コラーゲン（パンゲン（Ｐａｎｇｅｎ）））またはＣＭＤＢＳの１００μｇ／ｍｌ溶液に夜間浸漬したコラーゲンを充填したが、二つの頭部領域は充填せず、結果としてコントロールとして作用した。適当な止血を、傷の縫合を始める前に実施した。傷はナイロン縫合糸で閉じ、手術側は無菌包帯で覆った。動物は放置して回復させ、術後合併症は観察されなかった。動物は、第３、４および８日及び手術後１２週間の間に安楽死させた。すべての動物は同一の処置を受け、自身のコントロールとして機能した。手術部位の肉眼による診察の後、頭骨を脱灰し、パラフィンに包む。手術側を顕微鏡で培養のために観察した。一旦、モデルを脱灰し、パラフィン中に置き、このようにして形成された割れ目（chinks）に対応するゾーンの矢状切断部分（厚さ５ｍｍ）をミクロトームを用いて切断し、ヘマトキシリンおよびエオシンで着色した。これらの切片を顕微鏡で観察し、割れ目を１００倍に、２．５×２．５ｍｍで各サイドの０．２５ｍｍの１０分割により基準化（normaliz e）したグリル（grille）を用いて拡大した。そして、これらの測定値をグラフに記録し、処置した各種群の結果と比較した。この研究において、ＣＭＤＢＳ、バッチＡＭ２６を用いた。メチルカルボン酸の含有量は１１０％、ベンジルアミドは２．５％、スルホン化ベンジルアミドは３６．５％である。このＣＭＤＢＳの特異的な抗凝血活性は、１７３ＩＵ／ｍｇの抗凝血活性を有する標準ヘパリン（サンプルＮｏ．１０８，サノフィ−チョーイルシエルシユ（Sanofi-Choay Recherches）,ゲンチリー（Gentilly），フランス）と比較して、４ＩＵ／ｍｇである。図７Ａおよび７Ｂは、実験の目的のために形成した骨の割れ目の充填物に対応する肉芽組織において３週間後に観察された炎症反応の相違を示す。生理食塩水だけを吸収させたコラーゲン包帯（dressing）に対応する図７Ａにおいては、炎症反応は非常に強い；肉芽組織は多数の炎症細胞を含み、造骨細胞をほとんど含まない。これに対し、ＣＭＤＢＳ溶液を吸収させたコラーゲンによる同じ処置は、この炎症反応の顕著な緩解を惹起し、骨の割れ目の修復を助長しており、その結果ＣＭＤＢＳの抗炎症効果を証明している。実施例５：胃粘膜に対するＣＭＤＢＳの抗炎症効果原理ラットに無水エタノールの１ｍｌを経口投与すると、１時間以内に胃粘膜の出血性損傷を起こす。方法体重約２００ｇの６匹のＳｐｒａｎｇｕｅＤａｗｌｅｙ雄性ラットの群を試験前に水のみを許される絶食下に２４時間おいた。試験の日に、１ｍｌを経口的に投与し、動物を９０分後に殺した。胃を集めて、大きな曲線にそって開け、すすいだ。粘膜の損傷を以下の基準によって評価した：０：正常粘膜１：若干の表面的な出血性のピンク色の線条（streaks）２：短く且つ広い表面的な出血性の赤い線条４；長く且つ広い表面的な出血性の赤黒い線条５：穿孔処置ＣＭＤＢＳを蒸留水、１０％エタノール中のＰＧＥ₂に溶解させ、その後、生理食塩水中で希釈した。処置は経口経路により、５ｍｌ／ｋｇの体積のエタノールの１時間前及び４５分後に行った。結果の表現動物の各バッチについて、悪化スコアの平均値＋／−平均標準偏差を算出した。それらを表７に示す。統計上の比較を、ホワイトのノンパラメトリック検定法（White's non parametric test）を用いて、コントロール群と関係においてｐ＜０．０１で示される有意差で行った。結果結果は、無水エタノールの投与が動物のほとんどにおいて広い融合性の出血性線条を誘発させることを示す。コントロール動物では、悪化スコアは３．７５＋／−０．１７である。１００μｇ／ｋｇ（１日２回）の投与量で投与（peros）されたＣＭＤＢＳは損傷の重大さを２４時間で５６％（ｐ＞０．０１）減少させる。サイトプロテクティブ活性（cytoprotective activity）は、高投与量では観察されない。ＣＭＤＢＳは、強い局所的炎症反応を誘発する刺激性の局所剤に対する胃粘膜の保護剤と考えられているＰＧＥ２（損傷の６３％の低減）と同等の効果を示す。実施例６：ラットにおけるＴＮＢにより誘発された結腸炎に対する抗炎症効果原理トリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢ）の直腸内投与は、ラットにおける慢性の結腸炎の出現を誘発し、メディエイタ（ＰＡＦ、インターロイキン、エイコサノイド）の放出を伴う急性の炎症反応に起因する粘膜の重篤な損傷と関連し、エバンスブルーにより定量可能な大きい浮腫（major edema）も伴う。方法体重約２００ｇの６匹のスプラグーダウレイ（Sprag ue Dawley）雄性ラットの群を、試験の前に２４時間の水のみを許される断食に供する。試験の日に、動物に、腹腔内経路によりペントバルビタール（３０ｍｇ／ｋｇ）を用いて麻酔する。５０％エタノール０．２５ｍｌに溶解させたＴＮＢ２０ｍｇを、肛門から６ｃｍ離れた結腸に注入する。覚醒した後、動物はケージに戻され、食糧及び飲み物が随意に与えられる。４日後、上記動物をと殺し、結腸が収集される。と殺３０分前に、結腸炎に伴う浮腫を評価するためにエバンスブルー１ｍｌを以下のプロトコルに従って静脈経路により投与する：結腸を、ホルムアミド９ｍｌを含むチューブに入れる。遠心分離の後、浮遊する表面（floating surface）を収集し、波長６２０ｎｍで分光学的測定を行う。処置ＣＭＤＢＳを、０．５％カルボキシメチルセルロースに溶解した。処置を、上記動物のと殺まで一日一回、ＴＮＢの４時間前に、１ｍｌ／ｋｇの容量で直腸内経路により行った。結果動物のそれぞれのバッチについて、悪化スコアの平均値＋/−平均標準偏差を計算した。それらを、表８に示す。統計的な比較を、ｐ＜０．０５で表される有意差をもってコントロールグループに対して、“ｔ”分散検定により行う。本実施例において、ＣＭＤＢＳは、抗炎症効果を有し、それはエバンスブルーを用いた着色により明示される炎症細胞のカウントから判るであろう。１ｋｇにつき３００μｇのＣＭＤＢＳが、この着色を半分に減少させる（ｐ＜０．０５）。実施例７：ラットにおける皮膚の炎症に対する効果Ａ．動物実験を、ヘアレス（Hairless）雄性ラットＯＦＡ−ｈｒ／ｈｒＩｃｏに対して行った。該ラットは、特定の病原性微生物を有しておらず、９〜１０週令であり、体重２５０〜３００ｇｒである（イーファクレド（ＩＦＦＡＣＲＥＤＯ）、フランス）。これらラットは、“ヘアレス”という用語により定義されている劣性のｈｒ遺伝子のために非常に未発達の体毛組織（pilous system）により特徴付けられている。到着と同時に、ラットを、ＥＥＣディレクティブズ（EEC directives）、１９８６年４月の命令（decree）、Ｎｏ．８６／６０９／ＥＥＣに従い保存し、収容する。Ｂ．操作方法ラットに、ナトリウムペントバルビタール（健康なラットに対して０．１ｍｌ／１００ｇ及び糖尿病のラットに対して０．０５ｍｌ／１００ｇ）を腹腔内注射することにより麻酔する。表皮真皮の皮膚の裂け目（chinks）を三つ、直径６ｍｍの中空パンチ（hollow punch）を用いて、脊柱の両側に作った。不活性化されたウシのコラーゲン圧布（compress）（パンジェン（PANGEN）、フォルニエール（Fournier））を、中空パンチを用いて切り取り、試験する溶液又はＰＢＳ溶液、特にＰＢＳを吸収させる；それぞれの創傷に沈着されるまで外界温度において２時間。次に、含水コラーゲンを有する閉塞包帯（オプサイト（OPSITE））を用い、次いでラットが包帯をはずすのを止めるためにエラストプラストを用いて全体を被う。ラットを、随意の食糧と飲み物を有する別々のケージに入れる。それぞれの実験条件を、６〜１０匹の動物のバッチに分類する。瘢痕過程（cicatric ial process）を、操作の日（Ｄ０）の後の日数（Ｄｘ）で表される種々の時間により考慮する。Ｃ．創傷の処置健康なラットの創傷を、５０μｇ／ｍｌのＣＭＤＢＳ−ＡＭ６が存在し又は存在しない生理溶液を吸収させたコラーゲンの包帯により処置する。Ｄ．創傷サンプルコントロール動物（ＣＭＤＢＳ無し）又は処置された動物（ＣＭＤＢＳ有り）のバッチを、ナトリウムペントバルビタールを過剰に注射することにより殺す。創傷の輪郭を、トレーシングペーパー上にトレースし、次にＤ０において用いた同じ寸法の中空パンチを用いて創傷を除去し、−８０℃にて保持する。組織学的研究のために、最初の輪郭のまわりの損傷をうけていない皮膚の５ｍｍを越える断片を収集し、研究によってその構成が変わる固定液（fixator）に入れる。組織学的研究組織サンプルを、過剰な固定液（４％パラホルムアルデヒド、０．１％グルタルアルデヒド、５％サッカロース、１００ｍＭＰＢＳ、ｐＨ７）に２４〜４８時間入れ、次いで徐々に脱水して、パラプラストプラス（プロラボ（Prolabo））に包み込む。５ｍｍの切片を、パラフィンマイクロトーム（レイチャート−ユング（Reichert-Yung））を用いて作成し、マッソントリクローム（Masson tr ichrome）（ジーエービーイー（GABE）、１９８８）を用いて着色する。組織学的観察の結果を、図８Ａ〜８Ｆに示す。該図は、操作の６日後の皮膚（マッソントリクロームを用いて着色した切片）の治癒の上記組織学的研究を示すものである。図８Ａ〜８Ｃは、ＣＭＤＢＳ（５０μｇ／ｍｌ）を用いて処置した創傷を示し、図８Ｄ〜８Ｆは、ビヒクルのみを用いて処置した創傷を示す。これら図は、肉芽組織の質の不均衡（inequality）を示す。図８Ａ（ｘ４）における瘢痕は、コントロール（図８Ｄｘ４）に比し、より成熟した外観を有する。表皮の領域の拡大図（ｘ２５）は、両方の場合（図８Ｂ及び８Ｅｘ２５）における再形成を示す。相違点は、肉芽組織の成熟に存在する：ＣＭＤＢＳにより処置された創傷（図８Ｃｘ２５）は、線維芽細胞（矢印）の存在を示す。該線維芽細胞は、場所を奪い始め、コントロールの創傷におけるものより大きな量のマトリックスを生ずる。ＣＭＤＢＳを用いて処置した創傷における炎症細胞は、コントロール（図８Ｆｘ２５）に比べ数が少なく、大きな炎症現象の存続を表す。実施例８：治癒中の皮膚組織から抽出したマトリックスのメタロープロテイナーゼ活性の曝露皮膚組織のサンプルを、前の実施例で示された同じプロトコル及び同じ実験条件に従い採取する。創傷の処置健康なラットの創傷を、ＣＭＤＢＳ−ＡＭ６５０μｇ／ｍｌが存在し又は存在しない生理溶液を吸収させたコラーゲン包帯を用いて処置する。メタロプロテイナーゼ（ＭＭＰｓ）、より具体的には、９２ｋＤコラゲナーゼ（タイプＶ）及び７２ｋＤコラゲナーゼ（タイプＩＶ）を、電気泳動像法により示す。Ｄ０において収集した皮膚を、コントロール（Ｃ）とみなす。同じ場所で日ｘ（Ｄｘ）において採取し、最初の輪郭をたどるサンプルを、創傷（Ｐ）と呼ぶ。Ｃ及びＰは、常に、同じ時間及び同じプロトコルに従い処置する。それぞれのサンプルを、液体窒素粉砕機（liquid nitrogen crusher）（バイオブロック（Bioblock））中で１分間粉砕する。粉末を秤量し、ｐＨ７．４の１００ｍＭリン酸バッファー、１ＭＮａＣｌ（粉末１００ｍｇに対し１ｍｌ）中に混合する。全体を、ウルトラ−トゥラックス（ultra-turax）を用いて３０秒間ホモジナイズし、４℃にて１時間放置し、４℃にて３０分間４３７００ｇで遠心分離機（ベックマン（Beckman）Ｊ２−２１）にかける。浮遊容量を測定し、その後−８０℃にて保存する前に等分する。基部（base）を量り、−８０℃にて保存する。粉砕された皮膚から得られた抽出物（非還元バッファー中の加熱されていないタンパク質２５ｍｇ）を、瘢痕かどうかを問わず、ゼラチン（シグマ（Sigma）、ｒｅｆ．Ｇ２５００）１ｍｇ／ｍｌを含有する１０％ポリアクリルアミドのゲルに沈積させる。ラエムリ（Laemmli）バッファーにおける泳動の後、ゲル上に沈積した蛋白質を、２．５％トリトン（Triton）ｘ１００を含有するｐＨ７．４の１００ｍＭトリス−ＨＣｌ溶液を用いて復元する（３０分間２回）。該トリトンを、１００ｍＭトリス−ＨＣｌバッファー中で２回洗浄することにより除去する。電気泳動ゲルを、１０ｍＭＣａＣｌ₂、０．００１％ＮａＮ₃、０．００１５％ブリジ３５（Brij 35）、１ｍＭＺｎＣｌ₂を含有する１００ｍＭトリス −ＨＣｌバッファー中で、３７℃にて４８時間インキュベートする。インキュベーションバッファーを注意深く除去した後、ゲルを、酢酸（１０％）、２−プロパノール（３０％）を含有するクーマシーブルーＲ２５０（５ｍｇ／ｍｌ）溶液を用いて２０分間振とうすることにより着色し、その後、細片（strips）が見えるまで変色させる（１０％酢酸、４０％メタノール）。ゲルの写真を撮る。得られた各種消化細片が実際にＭＭＰによることを確かめるために、検体を、特異的な阻害剤の存在下にてインキュベートする：エンドペプチターゼセリン、フェニルメチルスルフォニルフルオライド又はＰＭＳＦ（最終２ｍＭ）の阻害剤、メタロエンドペプチダーゼ、エチレンジアミン四酢酸又はＥＤＴＡ（最終２０ｍＭ）、及びＮ−エチルマレイミド又はＮＥＭ（最終２ｍＭ）の阻害剤。図９は、ＣＭＤＢＳを用いる処置を施した又は施さない創傷の抽出物において検出されたＭＰＰの治癒時間に対する出現（expression）を示す。操作後のＤ５及びＤ６における粉砕された健康な又は瘢痕の皮膚の抽出物から得られた蛋白質２５ｍｇを、基質として１ｍｇ／ｍｌのゼラチンを含有する１０％ポリアクリルアミドゲルに沈積させる。トラック１、１２は、泳動の内部コントロールとして機能する健康な皮膚を表す。トラック２、３、４及び１３、１４、１５は、５０ｍｇ／ｍｌ（６匹の異なるラット）の量のＣＭＤＢＳを用いて得られた抽出物を示す。トラック５〜１１及び１６、１７は、対応するコントロールを示す。それぞれのトラックは、異なるラットを示す。二つのコラゲナーゼのタイプが、健康な皮膚において見出された：７２ｋＤａの形及びその活性化された６８ｋＤａの形。対照的に；Ｄ５及びＤ６において、ＣＭＤＢＳを用いて処置されない又は処置された創傷において、９２ｋＤａが、同一の態様で存在する。相違点は、７２ｋＤａ及びその活性化された形、６８ｋＤａの出現レベル（expression level）にある。Ｄ５において、コントロールの創傷では、７２ｋＤａ及び６８ｋＤａは、ＣＭＤＢＳを用いて処置された創傷に比べて、非常に明白に表される。さらに、ＣＭＤＢＳを用いて処置した創傷にはない低分子量のタイプが生じる。この相違点は、Ｄ６において確認される。なぜなら、Ｄ５におけるものと同じプロテインの沈積に関して、コラゲナーゼ活性は、トラック１６及び１７が二つの白いトレースの形で現れるというようなものだからである。この活性は、ＣＭＤＢＳを用いて処置されたラットには存在しない。従って、ＣＭＤＢＳは、ＭＭＰＳの出現レベル（expression level）を、それらの活性化物質の一つであるプラスミンに対するそれらの阻害する役割を通して、直接的に又は間接的にモジュレートする。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者ホルンベックウィリヤムフランス国エフ−78000 ヴェルサイユルュデブールドネ 19 (72)発明者メダイアンヌフランス国エフ−94000 クレテイユスクワーエディソン 23

Claims

【特許請求の範囲】１ＦＧＦ及びベータＴＧＦファミリーの成長因子をトリプシン分解から特異的に保護し且つ凝固を有意には阻害しない、メソグリカンを除くＨＢＧＦＰＰと呼ばれるポリマー又はバイオポリマーの少なくとも一種の、炎症の処置用の医薬の製造における使用。２該ポリマー又はバイオポリマーが、ポリマー１ｍｇ当たり、５０国際単位未満の抗凝固活性を示すことを特徴とする請求項１に記載の使用。３上記ポリマーが、抗補体活性を示すことを特徴とする請求項１及び２のいずれかに記載の使用。４上記ポリマーが、補体システムを実質的に活性化しないことを特徴とする請求項１〜３のずれかに記載の使用。５上記ポリマーが、エラスターゼ及び／又はプラスミンのプロテアーゼ活性を実質的に阻害することを特徴とする請求項１〜４のいずれかに記載の使用。６上記ポリマー又はバイオポリマーが、多糖であることを特徴とする請求項１〜５のいずれかに記載の使用。７上記多糖が、主にグルコース残基から構成されることを特徴とする請求項６に記載の使用。８上記多糖が、グルコサミン及び／又はウロン酸残基を含んでいることを特徴とする請求項６に記載の使用。９上記多糖が、グルコサミン−ウロン酸ダイマーを含んでいることを特徴とする請求項８に記載の使用。１０上記多糖が、脂質、ペプチド若しくはプロチド、又はこれら化合物の１つのサルフェートであることを特徴とする請求項８及び９のいずれかに記載の使用。１１上記多糖が、置換デキストランであることを特徴とする請求項１〜６のいずれかに記載の使用。１２上記多糖が、ＣＭＤＢＳであることを特徴とする請求項１１に記載の使用。１３上記ポリマーが、非オシディック性（non-osidic nature）であることを特徴とする請求項１〜５のいずれかに記載の使用。１４少なくとも一種の薬理学的に許容される賦形剤と組み合わせて請求項１〜１３に記載されたような少なくとも一種のポリマーを含む炎症処置用の薬学的組成物。１５組成物１ｍｌ当たり約１０〜２５００μｇのポリマー又はバイオポリマーを含むことを特徴とする請求項１４に記載の組成物。