JPH10262681A

JPH10262681A - ヒト遺伝子

Info

Publication number: JPH10262681A
Application number: JP9093044A
Authority: JP
Inventors: Takashi Tokino; 隆至時野; Yusuke Nakamura; 祐輔中村
Original assignee: Otsuka Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Otsuka Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1997-03-26
Filing date: 1997-03-26
Publication date: 1998-10-06
Anticipated expiration: 2017-03-26
Also published as: EP1006186A4; AU6418498A; WO1998042835A1; CA2284859C; JP3885177B2; US6255472B1; AU724681B2; CA2284859A1; EP1006186A1

Abstract

(57)【要約】【課題】特に遺伝子診断並びに新しい治療法の開発に利
用できる新規なヒト遺伝子を提供。【解決手段】配列番号：１で示されるアミノ酸配列の全
部又は一部をコードする塩基配列を含むヒト遺伝子、特
に癌抑制遺伝子ｐ５３による特異的な転写制御下にある
上記遺伝子。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、ヒトの疾患の予
防、診断及び治療の指針として有用な遺伝子、より詳し
くは、癌抑制遺伝子ｐ５３による特異的な転写制御下に
あるヒト遺伝子に関し、遺伝子診断並びに新しい治療法
の開発に利用可能な遺伝子に関する。

【０００２】

【従来の技術】癌抑制遺伝子ｐ５３の変異は、ヒト癌に
見出される遺伝的変異において最も普遍的なものであ
り、ヒトの発癌に関与する最も重要な遺伝子のひとつと
されている〔Hollstein M., et al., Science (Washing
ton DC), 253: 49-53, 1991〕。ｐ５３は転写因子とし
て作用し〔Vogelstein B., et al., Cell, 70: 523-52
6,1992〕、配列特異的なＤＮＡへの結合により、ｐ２１
／ＷＡＦ１、ＭＤＭ２、ＧＡＤＤ４５、ＢＡＸ、cyclin
Ｇ、ＩＧＦ−ＢＰ３、ＰＣＮＡ及びＧＭＬ等の各種遺
伝子を活性化することが確認されている〔EI-Deiry W.
S., et al., Cell,75: 817-825, 1993 ; Wu X., et a
l., Genes Dev., 7: 1126-1132, 1993 ; Kastan M. B.,
et al., Cell, 71: 587-597, 1992 ; Miyashita T., e
t al., Cell,80: 293-299, 1995 ; Okamoto K., et a
l., EMBO. J., 13: 4816-4822, 1994 ;Buckbinder L.,
et al., Nature, 377: 646-649, 1995 ; Morris G. E.,
et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 93: 895-899,
1996 ; Furuhata T., et al., Oncogene, 13: 1965-197
0, 1996〕。ｐ２１／ＷＡＦ１、ＢＡＸ及びＧＭＬは、
ｐ５３により仲介される細胞周期停止及びアポトーシス
の主要因子と思われる。また、ＧＡＤＤ４５は、ＤＮＡ
修復に重要な役割を果たしている。

【０００３】しかして、ｐ５３によって制御されている
遺伝子の確認は、ｐ５３の生物生理学的機能の解明に必
須である。即ち、かかるｐ５３標的遺伝子の同定、解明
は、癌研究の分野はもとより、その標的遺伝子を利用す
る新しい癌の診断乃至治療法の開発の面からも斯界で望
まれているところである。

【０００４】尚、本発明者等は、ヒトゲノムの機能的ｐ
５３結合部位（functional p53-binding sites或はｐ５
３タグサイト：p53-tagged sites）の近隣にｐ５３標的
遺伝子の候補を見出すようにデザインされた方法を確立
しており、この方法に関して、本発明者はその発現が抗
癌剤の感受性に相関すると考えられているＧＭＬの単離
に既に成功している〔Furuhata,T., et al., Oncogene,
13: 1965-1970, 1996〕。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、癌抑制遺伝
子ｐ５３の標的遺伝子（p53-target genes）或はｐ５３
誘導型遺伝子（p53-inducible genes）、即ちｐ５３に
よる特異的な転写制御下にある新規なヒト遺伝子を見出
し、これを同定して斯界で要望される所望の情報を提供
することを目的とする。

【０００６】本発明者等は、ヒトゲノムからの機能的ｐ
５３タグサイトのクローニングにおいて、野生型ｐ５３
によって誘導される新規な遺伝子を単離し、これが上記
目的に合致する新規なヒト遺伝子であることを見出し、
ここに本発明を完成するに至った。

【０００７】

【課題を解決するための手段】即ち、本発明によれば、
配列番号：１で示されるアミノ酸配列の全部又は一部を
コードする塩基配列を含むヒト遺伝子、特に、配列番
号：２で示される塩基配列の全部又は一部を含む遺伝子
が提供される。

【０００８】以下、本明細書におけるアミノ酸、ペプチ
ド、塩基配列、核酸等の略号による表示は、ＩＵＰＡ
Ｃ、ＩＵＢの規定、「塩基配列又はアミノ酸配列を含む
明細書等の作成のためのガイドライン」（特許庁編）及
び当該分野における慣用記号に従うものとする。

【０００９】

【発明の実施の形態】本発明遺伝子の一具体例として
は、後述する実施例に示される「Ｐ２ＸＭ」と名付けら
れたクローンの有するＤＮＡ配列から演繹されるものを
挙げることができ、その塩基配列は、配列表に示される
通りである。

【００１０】本発明遺伝子は、例えば配列番号：２で示
されるように、一本鎖ＤＮＡ配列で表されるが、本発明
はかかる一本鎖ＤＮＡ配列に相補的なＤＮＡ配列や之等
の両者を含むコンポーネントもまた包含する。尚、配列
番号：２に示す本発明遺伝子の配列は、これによりコー
ドされる各アミノ酸残基を示すコドンの一つの組合せ例
であり、本発明遺伝子はこれに限らず、各アミノ酸残基
に対して任意のコドンを組合せ選択したＤＮＡ塩基配列
を有することも勿論可能である。該コドンの選択は常法
に従うことができ、例えば利用する宿主のコドン使用頻
度を考慮することができる〔Nucleic Acids Res., 9: 4
3-74, 1981〕。

【００１１】更に本発明遺伝子には、上記で示されるア
ミノ酸配列の一部のアミノ酸乃至アミノ酸配列を置換、
欠失、付加等により改変してなり、同様の機能を有する
同効物をコードするＤＮＡ配列もまた包含される。これ
らポリペプチドの製造、改変（変異）等は天然に生じる
こともあり、また翻訳後の修飾により或は遺伝子工学的
手法により、天然の遺伝子（例えば本発明の具体例遺伝
子）を、例えばサイトスペシフィック・ミュータゲネシ
ス〔Methods in Enzymology, 154: p.350, 367-382, 19
87 ; 同 100: p.468, 1983 ; Nucleic Acids Res., 12:
p.9441, 1984; 続生化学実験講座１「遺伝子研究法I
I」、日本生化学会編, p.105, 1986〕等の方法により改
変したり、リン酸トリエステル法やリン酸アミダイト法
等の化学合成手段〔J. Am. Chem. Soc., 89: p.4801, 1
967；同 91: p.3350, 1969 ; Science, 150: p.178, 19
68 ; Tetrahedron Lett., 22: p.1859, 1981 ; 同 24:
p.245, 1983〕により変異させたＤＮＡを合成したり、
或はそれらの組合せにより収得することができる。

【００１２】本発明にかかる配列番号：２に示す遺伝子
は、ｐ５３による特異的な転写制御下にある遺伝子であ
り、生体においてｐ５３によりその発現が活性化され、
癌の抑制に寄与すると考えられる。従って、本発明遺伝
子の発現を目的とする遺伝子治療或は本発明遺伝子産物
の生体への投与は、癌の予防及び治療に極めて有用であ
ると考えられる。殊に、遺伝性の高発癌体質であるLi-F
raumeni症候群や、ｐ５３遺伝子のＬＯＨや、変異が認
められる各種の癌等の場合のようにｐ５３による癌抑制
機能が失われた結果として癌化に向かうとされる個体に
おいて、本発明遺伝子乃至同遺伝子産物の利用が好適と
考えられる。

【００１３】尚、上記した本発明遺伝子を利用する遺伝
子治療或は同遺伝子産物を利用する癌処置においては、
必ずしも本発明遺伝子又はそのコードする産物の全て、
即ち全配列からなる遺伝子或は産物、が必要とされるこ
とはなく、本発明にかかる配列番号：２に示す遺伝子に
おける所望の機能と実質的に同質な機能を保持する限り
において、前記したそれらの改変体或はそれらの一部配
列からなる遺伝子或は産物が良好に使用できる。

【００１４】本発明遺伝子は、これを利用して、即ち例
えば、これを微生物のベクターに組込み、形質転換され
た微生物を培養することによって、上記各遺伝子でコー
ドされるｐ５３関連蛋白を容易にかつ安定して製造する
ことができる。

【００１５】また本発明の遺伝子を利用して得られる各
蛋白は、之等のそれぞれを用いて、特異抗体を作成する
こともできる。ここで抗原として用いられるコンポーネ
ントは、上記遺伝子工学的手法に従って大量に産生され
る蛋白を用いることができ、得られる抗体はポリクロー
ナル抗体及びモノクローナル抗体のいずれでもよく、之
等抗体はそれぞれの蛋白の精製、測定、識別等に有利に
利用できる。

【００１６】本発明遺伝子は、本発明によって開示され
た本発明遺伝子についての配列情報に基づいて、一般的
遺伝子工学的手法により容易に製造できる〔Molecular
Cloning 2nd Ed., Cold Spring Harbor Laboratory Pre
ss (1989)；続生化学実験講座「遺伝子研究法I、II、II
I」、日本生化学会編 (1986) 等参照〕。

【００１７】例えば、ヒトｃＤＮＡライブラリー（各遺
伝子の発現される適当な起源細胞より常法に従い調製さ
れたもの）から、本発明遺伝子に特有の適当なプローブ
や抗体を用いて所望クローンを選択することができる
〔Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 78: 6613, 1981 ; Sc
ience, 222: 778, 1983 等〕。

【００１８】上記において、起源細胞としては、目的の
遺伝子を発現する各種の細胞、組織や之等に由来する培
養細胞等が例示され、之等からの全ＲＮＡの分離、ｍＲ
ＮＡの分離や精製、ｃＤＮＡへの変換（合成）とそのク
ローニング等はいずれも常法に従い実施できる。また、
ｃＤＮＡライブラリーは市販されてもおり、本発明にお
いてはそれらｃＤＮＡライブラリー、例えばクローンテ
ック社（Clontech Lab. Inc.）等より市販の各種ｃＤＮ
Ａライブラリー等を用いることもできる。

【００１９】ｃＤＮＡライブラリーからの本発明遺伝子
のスクリーニングは、前記通常の方法に従い実施でき
る。該スクリーニング方法としては、例えばｃＤＮＡの
産生する蛋白質に対して、該蛋白質特異抗体を使用した
免疫的スクリーニングにより、対応するｃＤＮＡクロー
ンを選択する方法、目的のＤＮＡ配列に選択的に結合す
るプローブを用いたプラークハイブリダイゼーション、
コロニーハイブリダイゼーション等や之等の組合せを例
示できる。ここで用いられるプローブとしては、本発明
遺伝子のＤＮＡ配列に関する情報をもとにして化学合成
されたＤＮＡ配列等を用いるのが一般的であり、勿論既
に取得された本発明遺伝子やその断片もかかるプローブ
として利用できる。

【００２０】更に各細胞、組織より抽出、単離精製され
た天然抽出物の部分アミノ酸配列情報に基づき、センス
・プライマー、アンチセンス・プライマーをスクリーニ
ング用プローブとして用いることもできる。

【００２１】また、本発明遺伝子の取得に際しては、Ｐ
ＣＲ法〔Science, 230: 1350-1354,1985〕によるＤＮＡ
／ＲＮＡ増幅法が好適に利用できる。殊に、ライブラリ
ーから全長のｃＤＮＡが得られ難いような場合には、レ
ース法（ＲＡＣＥ：Rapidamplification of cDNA end
s；実験医学、12(6): 35-38, 1994)、殊に５′−ＲＡＣ
Ｅ〔Frohman M. A., et al., Proc. Natl. Acad. Sci.
USA, 8: 8998-9002,1988〕の採用が好適である。かかる
ＰＣＲ法の採用に際して使用されるプライマーは、既に
本発明によって明らかにされた本発明遺伝子の配列情報
に基づいて適宜設定でき、これは常法に従い合成でき
る。

【００２２】尚、増幅させたＤＮＡ／ＲＮＡ断片の単離
精製は、前記の通り常法に従うことができ、例えばゲル
電気泳動法等によればよい。

【００２３】上記で得られる本発明遺伝子或は各種ＤＮ
Ａ断片等の塩基配列の決定も、常法に従うことができ、
例えばジデオキシ法〔Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 7
4: 5463-5467, 1977〕やマキサム−ギルバート法〔Meth
od in Enzymology, 65: 499,1980〕等により行なうこと
ができる。かかる塩基配列の決定は、市販のシークエン
スキット等を用いても容易に行ない得る。

【００２４】本発明遺伝子の利用によれば、通常の遺伝
子組換え技術〔例えば、Science, 224: p.1431, 1984 ;
Biochem. Biophys. Res. Comm., 130: p.692, 1985 ;
Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 80: p.5990, 1983及び前
記引用文献等参照〕に従うことにより、各組換え体蛋白
を得ることができる。該蛋白の製造は、より詳細には、
本発明遺伝子が宿主細胞中で発現できる組換えＤＮＡを
作成し、これを宿主細胞に導入して形質転換し、該形質
転換体を培養することにより行なわれる。

【００２５】ここで宿主細胞としては、真核生物及び原
核生物のいずれも用いることができる。該真核生物の細
胞には、脊椎動物、酵母等の細胞が含まれ、脊椎動物細
胞としては、例えばサルの細胞であるＣＯＳ細胞〔Cel
l, 23: 175-182, 1981〕やチャイニーズ・ハムスター卵
巣細胞及びそのジヒドロ葉酸レダクターゼ欠損株〔Pro
c. Natl. Acad. Sci. USA, 77: 4216-4220, 1980〕等が
よく用いられているが、之等に限定される訳ではない。

【００２６】脊椎動物の発現ベクターとしては、通常発
現しようとする遺伝子の上流に位置するプロモーター、
ＲＮＡのスプライス部位、ポリアデニル化部位及び転写
終了配列等を保有するものを使用でき、これは更に必要
により複製起点を有していてもよい。該発現ベクターの
例としては、例えば、ＳＶ４０の初期プロモーターを保
有するｐＳＶ２dhfr〔Mol. Cell. Biol., 1: 854, 198
1〕等を例示できる。また、真核微生物としては、酵母
が一般によく用いられ、中でもサッカロミセス属酵母を
有利に利用できる。該酵母等の真核微生物の発現ベクタ
ーとしては、例えば酸性ホスフアターゼ遺伝子に対する
プロモーターを有するｐＡＭ８２〔Proc.Natl. Acad. S
ci. USA, 80: 1-5, 1983〕等を利用できる。また、本発
明遺伝子の発現ベクターとしては、原核生物遺伝子融合
ベクターを好ましく例示でき、該ベクターの具体例とし
ては、例えば分子量２６０００のＧＳＴドメイン（S. j
aponicum 由来）を有するｐＧＥＸ−２ＴＫやｐＧＥＸ
−４Ｔ−２等を例示できる。

【００２７】原核生物の宿主としては、大腸菌や枯草菌
が一般によく用いられる。之等を宿主とする場合、例え
ば該宿主菌中で複製可能なプラスミドベクターを用い、
このベクター中に本発明遺伝子が発現できるように該遺
伝子の上流にプロモーター及びＳＤ（シヤイン・アンド
・ダルガーノ）塩基配列、更に蛋白合成開始に必要な開
始コドン（例えばＡＴＧ）を付与した発現プラスミドを
利用するのが好ましい。上記宿主としての大腸菌として
は、エシエリヒア・コリ（Escherichia coli）Ｋ１２株
等がよく用いられ、ベクターとしては一般にｐＢＲ３２
２及びその改良ベクターがよく用いられるが、之等に限
定されず公知の各種の菌株及びベクターをも利用でき
る。プロモーターとしては、例えばトリプトファン(tr
p) プロモーター、lpp プロモーター、lac プロモータ
ー、PL/PRプロモーター等を使用できる。

【００２８】かくして得られる所望の組換えＤＮＡの宿
主細胞への導入方法及びこれによる形質転換方法として
は、一般的な各種方法を採用できる。また得られる形質
転換体は、常法に従い培養でき、該培養により本発明遺
伝子によりコードされる目的の蛋白が生産、発現され
る。該培養に用いられる培地としては、採用した宿主細
胞に応じて慣用される各種のものを適宜選択利用でき、
その培養も宿主細胞の生育に適した条件下で実施でき
る。

【００２９】上記により、形質転換体の細胞内、細胞外
乃至細胞膜上に目的とする組換え蛋白が発現、生産、蓄
積乃至分泌される。

【００３０】各組換え蛋白は、所望により、その物理的
性質、化学的性質等を利用した各種の分離操作〔「生化
学データーブックII」、1175-1259 頁、第１版第１刷、
1980年 6月23日株式会社東京化学同人発行；Biochemist
ry, 25(25): 8274-8277, 1986 ; Eur. J. Biochem., 16
3: 313-321, 1987 等参照〕により分離、精製できる。
該方法としては、具体的には例えば通常の再構成処理、
蛋白沈澱剤による処理（塩析法）、遠心分離、浸透圧シ
ョック法、超音波破砕、限外濾過、分子篩クロマトグラ
フィー（ゲル濾過）、吸着クロマトグラフィー、イオン
交換クロマトグラフィー、アフィニティクロマトグラフ
ィー、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）等の各
種液体クロマトグラフィー、透析法、之等の組合せ等を
例示でき、特に好ましい上記方法としては所望の蛋白を
結合させたカラムを利用したアフィニティクロマトグラ
フィーを例示できる。

【００３１】また、本発明によって明らかにされた本発
明遺伝子の配列情報を基にすれば、例えば該遺伝子の一
部又は全部の塩基配列を利用することにより、各種ヒト
組織における本発明遺伝子の発現の検出を行なうことが
できる。これは常法に従って、例えばＲＴ−ＰＣＲ〔Re
verse transcribed-Polymerase chain reaction; Kawas
aki E. S., et al., Amplification of RNA. In PCR Pr
otocol, A Guide to methods and applications, Acade
mic Press, Inc., SanDiego, 21-27, 1991〕によるＲＮ
Ａ増幅により、またノーザンブロッティング解析〔Mole
cular Cloning,Cold Spring Harbor Laboratory, 198
9〕等により、いずれも良好に実施し得る。

【００３２】尚、前記ＰＣＲ法を採用する場合におい
て、用いられるプライマーは、本発明遺伝子のみを特異
的に増幅できる本発明遺伝子に特有のものである限り何
等限定はなく、本発明遺伝情報に基いてその配列を適宜
設定することができる。通常これは常法に従って２０〜
３０ヌクレオチド程度の部分配列を有するものとするこ
とができる。

【００３３】しかして、本発明はかかる新規なヒト遺伝
子に特有の検出に有用なプライマー及び／又はプローブ
をも提供するものである。

【００３４】

【発明の効果】ヒトゲノムからの機能的ｐ５３タグサイ
トのクローニングにおいて、野生型ｐ５３によって誘導
される新規な遺伝子を単離した。このｃＤＮＡ配列は、
Ｐ２Ｘレセプターファミリーに相同性を示す４３１アミ
ノ酸ペプチドをコードするオープンリーディングフレー
ムを含んでいる。このペプチドは、Ｐ２Ｘファミリーの
メンバーの主要な特徴を有し（ATP-gated ion channel
s）、また、プログラム細胞死（programmed cell deat
h）を誘導された胸腺細胞において活性化される遺伝
子、ＲＰ−２、と類似する。この遺伝子は、主に骨格筋
に発現され、Ｐ２ＸＭ（P2X specifically expressed i
n skeltal muscle）と名付けられた。該Ｐ２ＸＭ遺伝子
は、細胞増殖の抑制及び／又は骨格筋におけるアポトー
シスに関与すると思われる。

【００３５】この遺伝子の発現は、試験した４種の横紋
筋肉種細胞株のひとつにおいて著しく抑制されていた。
トランスメンブラン領域Ｍ１をコードするエクソン１の
一部を欠くマイナーなスプライスバリアントが、試験し
た７種の癌細胞株の２つにおいて相対的に多かった。こ
のことは、このスプライシングによって生じる変異産物
の比率が、これらの癌細胞株において著しく増加するこ
とを示唆する。この遺伝子は、杆状癌（rhabdoid tumo
r）において欠失が知られている染色体バンド２２ｑ１
１に位置していた。

【００３６】本発明によれば、癌抑制遺伝子ｐ５３によ
る特異的な転写制御下にある新規なヒト遺伝子が提供さ
れ、該遺伝子を用いれば、該遺伝子の各種組織での発現
の検出や、そのコードする産物の構造及び機能等を解析
でき、また、該遺伝子産物の遺伝子工学的製造が可能と
なり、之等により、癌の発生、進展、転移等の解明やそ
の診断、予防、治療等に有用な技術が提供される。

【００３７】

【実施例】以下、本発明を更に詳しく説明するため、実
施例を挙げる。

【００３８】

【実施例１】（１）コスミドライブラリーのスクリーニングｐ５３タグサイト（クローンＰ５３−１９１）は、時野
等の方法に従い特定した〔Tokino T., etal., Hum. Mo
l. Gene, 3: 1537-1542, 1994〕。ｐ５３タグサイトを
含む〔³²P〕標識プローブを使用して、ヒト末梢血リン
パ球のコスミドライブラリーをスクリーニングした。得
られたコスミド：ｐ５３−ｃｏｓ１９１をＥｃｏＲＩで
消化し、該ＥｃｏＲＩフラグメントをｐＢｌｕｅｓｃｒ
ｉｐｔIIＳＫ（−）（Stratagene）にサブクローン化し
た。ＤＮＡ配列決定は、キット（Taq DyeDeoxy Termina
tor Cycle Sequencing Kit; ABI）を使用してＡＢＩ３
７７ＤＮＡシークエンサーにて行った。

【００３９】（２）ｃＤＮＡクローニングコスミドｐ５３−ｃｏｓ１９１に存在する遺伝子の単離
に、エクソン増幅とＲＡＣＥの両者を行った。

【００４０】コスミドｐ５３−ｃｏｓ１９１をＢａｍＨ
Ｉ及びＢｇｌIIにて消化し、該制限酵素フラグメント
を、エクソントラップベクターｐＳＰＬ３（Gibco-BR
L）のＢａｍＨＩサイトにサブクローン化し、Ｌｉｐｏ
ｆｅｃｔＡＣＥ（Gibco-BRL）を用いてＣＯＳ７細胞に
導入した。該細胞を２４時間培養後、ＴＲＩＺＯＬ（Gi
bco-BRL）により全ＲＮＡを調製した。ファーストスト
ランドｃＤＮＡ合成及びスプライスしたフラグメントの
ＰＣＲ増幅は、North 等の方法に従い実施した〔North
M. A., et al., Mamm. Genome, 4: 466-474, 1993〕。
ｃＤＮＡフラグメントは、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔIIＳ
Ｋ（−）にサブクローン化され、上記のとおりＴ３又は
Ｔ７プライマーを使用して配列決定された。候補のひと
つとしての配列１９１Ｅ１を、ｃＤＮＡ増幅キット（Ma
rathon cDNA amplification kit; Clontech）を用い、
骨格筋ポリ（Ａ）＋ＲＮＡを鋳型として使用する５’−
及び３’−ＲＡＣＥに付した。

【００４１】（３）ＲＴ−ＰＣＲ解析ｐ５３発現ベクター、ｐ５３−ｗｔ又はｐ５３−２７３
〔Kern S. E., et al., Science (Washington DC), 25
6: 827-830, 1992〕、による大腸癌細胞株ＳＷ４８０の
一過的ＤＮＡ導入及びｃＤＮＡの調製は、Furuhata 等
の報告に従い行った〔Furuhata T., et al., Oncogene,
13: 1965-1970, 1996〕。全ＲＮＡは、Ｓｕｐｅｒｓｃ
ｒｉｐｔII（Gibco-BRL）を使用して逆転写した。ＲＴ
−ＰＣＲの指数的成長相は、２０−３０サイクルにおい
て決定され、同一反応により得られたｃＤＮＡ間の半定
量的比較を可能とした。各ＰＣＲ反応は、２００ｎｇの
全ＲＮＡからのｃＤＮＡを使用して実施した。ＰＣＲ溶
液は文献〔Han H-J., etal., Hum. Mol. Genet., 4: 23
7-242, 1995〕記載のものを使用し、反応は、９４℃２
分の初期変性ステップに次ぐ３０サイクル（１９１Ｅ１
の場合）又は２５サイクル（ｐ２１／ＷＡＦ１及びＧＡ
ＰＤＨの場合）のサイクリングステップ（９４℃３０
秒、５５−６０℃３０秒、７２℃１分）にて行った（Ge
neAmp PCR system 9600; Perkin Elmer）。プライマー
配列は、次表１のとおりである：

【００４２】

【表１】増幅されたｃＤＮＡは、３％ＮｕＳｉｅｖｅＧＴＧ
（２：１）アガロースゲルにて分離した。

【００４３】（４）ノーザンブロット解析正常ヒト組織由来のポリ（Ａ）＋ＲＮＡを含むノーザン
ブロット（Clontech）を本発明ｃＤＮＡのヌクレオチド
９０９−１５８３に相当するランダムプライム〔³²P〕
標識ＤＮＡプローブによりハイブリダイズした。ブロッ
トを５０℃にて洗浄し（0.1×SSC／0.1% SDS）−８０℃
にて２４時間オートラジオグラフィーの感光に付した。

【００４４】（５）ＦＩＳＨＦＩＳＨは、 Inazawa 等の方法に従い実施した〔Inaza
wa J., et al., Genomics, 17: 153-162, 1993〕。ヒト
分裂中期染色体は、常法（thymidine synchronization
/ bromodeoxyuridine release technique）に従い調製
した。ハイブリダイゼーションに先立ち、分裂中期の細
胞は染色（Hoechst 33258）及びＵＶ照射した。コスミ
ドクローンｐ５３−ｃｏｓ１９１は、ニックトランスレ
ーションによりビオチン−１６−ｄＵＴＰにより標識
し、変性した分裂中期染色体とハイブリダイズした。Ａ
ｌｕリピートのような散在する繰返し配列によるノイズ
シグナルを除去する為に、染色体 in situ 抑制（chrom
osomal in situ suppression）ハイブリダイゼーション
を使用した。ハイブリダイズシグナルは、ＦＩＴＣ−ア
ビジンにて検出した。ハイブリダイズシグナルの詳細な
位置決定は、複製−Ｇバンドの可視化によって行った。

【００４５】（６）相同性検索ＤＮＡ比較は、ＦＡＳＴＡプログラムによるデータベー
ス検索により行った（non-redundant nucleic acid seq
uence databese 又は non-redundant proteinsequence
databese；ヒトゲノム解析センター、東京大学医科学研
究所）。

【００４６】（７）結果（イ）ｐ５３誘導遺伝子のクローニングｐ５３タグサイトのひとつ、クローンＰ５３−１９１を
プローブとして、ヒトゲノムコスミドライブラリーをス
クリーニングし、コスミドクローン：ｐ５３−ｃｏｓ１
９１を得た。このコスミドに由来する配列がｐ５３によ
る転写制御を受けているかどうかを調べる為に、ＲＴ−
ＰＣＲ解析を行った。ＲＴ−ＰＣＲでは、野生型又は変
異型ｐ５３ｃＤＮＡを含む発現ベクターで一過的にＤＮ
Ａ導入したＳＷ４８０細胞（ＳＷ４８０−ｗｔ５３又は
ＳＷ４８０−ｍｔ５３）より調製したＲＮＡを鋳型とし
て使用した。候補配列のひとつである１９１Ｅ１を試験
した結果、ＳＷ４８０−ｍｔ５３（変異型）における場
合に比べて、ＳＷ４８０−ｗｔ５３（野生型）における
発現が著しく増加しており（図１参照）、１９１Ｅ１の
発現は野生型ｐ５３によって誘導されていると考えられ
た。

【００４７】尚、図１は、野生型ｐ５３アレルを欠く大
腸癌細胞株ＳＷ４８０におけるｐ５３誘導ｍＲＮＡの発
現をＲＴ−ＰＣＲにより解析した結果を示す図面に代わ
る写真である。

【００４８】これによれば、ＳＷ４８０を、ｐ５３−ｗ
ｔ（Ｗ）又はｐ５３−２７３（Ｍ）で一過的に形質転換
して、ＲＴ−ＰＣＲ増幅によりＰ２ＸＭ遺伝子の発現を
確認した。ＲＮＡサンプルは、逆転写酵素（ＲＴ）存在
下（＋）又は非存在下（−）に逆転写反応に供した。Ｒ
ＮＡ鋳型はＧＡＰＤＨ転写物の増幅によりコントロール
し、これは両サンプルにおいて同程度のシグナルを与え
た。

【００４９】次いで、１９１Ｅ１をプローブとして使用
したｃＤＮＡスクリーニング並びに５’−及び３’−Ｒ
ＡＣＥを行ない、３５５２ｂｐからなるｃＤＮＡを単離
した。「Ｐ２ＸＭ」と名付けられた該ｃＤＮＡは、４３
１アミノ酸の蛋白をコードする１２９３ｂｐのオープン
リーディングフレームを有している。その全ＤＮＡ配列
は、配列番号：３に示すとおりである。即ち、Ｐ２ＸＭ
ｃＤＮＡのコード領域は、塩基番号４６から１３３８に
示され、潜在的なトランスメンブランドメイン（Ｍ１及
びＭ２）は、それぞれアミノ酸番号で３３〜４９番目及
び３２４〜３４４番目のアミノ酸配列にあり、またvolt
age-gated K⁺ channels Ｈ５領域の類似セグメント
（Ｈ）は、アミノ酸番号３０６〜３１９に存在してい
た。

【００５０】該ｃＤＮＡをプローブとするノーザンブロ
ット解析によれば、骨格筋において３．６ｋｂの転写物
が検出されており（図２参照）、従って、該ｃＤＮＡ
は、ほぼ完全な転写物を含んでいるものと考えられる。

【００５１】尚、図２はヒト組織におけるＰ２ＸＭのノ
ーザンブロット解析結果を示す図面代用写真であり、各
種組織（Heart, Brain, Placenta, Lung, Skeletal mus
cle,Kidney, Spleen, Thymus, Prostate, Testis, Ovar
y, Small intestine, Colon, Leukocyte）からのポリ
(A)⁺ＲＮＡ（２μｇ／レーン）のブロットをＰ２ＸＭｃ
ＤＮＡとハイブリダイズさせた結果を示すものである。

【００５２】（ロ）相同性検索蛋白データベースの相同性検索によれば、本発明にかか
るアミノ酸配列は、ATP-gated ion channel(P2X)レセプ
ターファミリー〔Valera S., et al., Nature,371: 516
-519, 1994 ; Brake A. J., et al., Nature, 371: 519
-523, 1994〕と類似性を有し、特に、ラットＰ２Ｘ６
〔Collo G., et al., J. Neurosci., 16: 2495-2507 19
96〕と８０％の同一性を示した（図３参照）。

【００５３】図３は、Ｐ２ＸＭ遺伝子のゲノム構成を示
す図であり、図中、(a)は、１９１遺伝子のエクソン／
イントロン境界のヌクレオチド配列を示している。エク
ソン及びイントロンの配列は、順次、上段及び下段に示
されている。図中、(b)は、エクソンの存在位置を、そ
のサイズに応じた、番号付き箱により示したものであ
る。また、図中(c)は、コスミドｐ５３−１９１のｐ５
３結合部位とｐ５３コンセンサス結合配列を比較したも
のであり、矢印は、ｐ５３コンセンサス結合配列（ペン
タマー）を示す。大文字のヌクレオチドは、コンセンサ
スに一致するゲノム配列を示し、下段はコンセンサス配
列と相違する配列を示している。

【００５４】Ｐ２Ｘレセプター（P2X1-X6）ファミリー
の全てのメンバーは、２つのトランスメンブラン領域
（Ｍ１及びＭ２）、voltage-gated K⁺ channel のＨ５
領域に類似しているセグメント、Ｎ−グリコシレーショ
ンサイト及び進化上保存されている１１システイン残基
を有している（図４参照）。

【００５５】図４は、各種Ｐ２Ｘレセプターのアミノ酸
配列を示すものであり、図中、箱囲みした残基は、Ｐ２
ＸＭの配列及びラットＰ２Ｘ１−Ｐ２Ｘ７レセプターに
共通して保存されている。上線は、保存されている２つ
の疎水性領域（Ｍ１及びＭ２）及びＨ５を示す。星印
は、Ｐ２ＸＭの潜在的Ｎ−結合グリコシレーションサイ
トを示す。

【００５６】本発明のかかる遺伝子によってコードされ
ているアミノ酸配列は、同様にこれらＰ２Ｘレセプター
ファミリーの基本的特徴を有しており、これはヒトＰ２
Ｘレセプターファミリーの新規なメンバーであると考え
られる。

【００５７】（ハ）構造解析上記ｃＤＮＡとその対応するゲノムＤＮＡ配列（p53-co
s191）の比較により、エクソン／イントロン境界及び近
接イントロンの近傍ＤＮＡ配列を含む、この遺伝子のゲ
ノム構成が明らかとなった（図５のａ参照）。この遺伝
子は、約１２ｋｂのゲノム領域におよんでおり、１２の
エクソンからなる（図５のｂ参照）。ｐ５３タグサイト
は、この遺伝子の約１．６ｋｂ下流に存在している（図
５のｃ参照）。コスミドｐ５３−ｃｏｓ１９１をプロー
ブとする蛍光 in situ ハイブリダイゼーション法（Ｆ
ＩＳＨ法）により、この遺伝子の染色体位置は、２２ｑ
１１と確認された（参考写真参照：特異的なハイブリダ
イゼーションシグナルがヒト染色体バンド２２ｑ１１に
認められ、他の染色体上にはシグナルは認められなかっ
た）。

【００５８】（ニ）骨格筋（Skeletal muscle）におけ
る別態様スプライシング（alternativesplicing）骨格筋より調製したＲＮＡのＲＴ−ＰＣＲ後の直接ＤＮ
Ａ配列決定では、エクソン１０、エクソン１０−１１又
はエクソン１の一部（エクソン１のドナーサイトから下
流１８ｂｐ）を欠く、別態様スプライシングの３種のイ
ンフレーム転写物（ＡＬ１、Ｌ２及びＡＬ３）が確認さ
れた（図５参照）。

【００５９】この別態様スプライシングの模式図を図５
に示す。

【００６０】これら別態様スプライシング転写物のそれ
ぞれは、３の倍数のヌクレオチドを欠失しており、いず
れもそのリーディングフレームは維持されていた。

【００６１】図３に示すように、エクソン１−２及びエ
クソン１１は、順次、トランスメンブラン領域Ｍ１及び
Ｍ２に相当する。該Ｍ１及びＭ２領域は、エクソン１０
によってコードされる近接疎水性セグメント（Ｈ５）と
ともに、ion pore and ion-binding サイトを形成する
とされている〔Valera S., et al., Nature, 371: 516-
519, 1994 ; Brake A. J., et al., Nature, 371: 519-
523, 1994〕。構造的推定によれば、これらのエクソン
は、生物学的機能に重要なドメインをコードしているも
のと思われる。

【００６２】（ホ）ヒト癌細胞株における発現と別態様
スプライシング近年、異常な別態様スプライシングがヒト癌の発生、進
展及び又は転移に何等かの関与をなしていることが報告
されている〔Gunthert U., et al., Cell, 65:13-24, 1
991 ; Arch R., et al., Science (Washington DC), 25
7: 682-685, 1992 〕。そこで、４種の横紋筋肉種、２
種の骨肉腫及び１種の脂肪肉腫に由来する細胞株で、本
発明遺伝子のｍＲＮＡレベル及び別態様スプライシング
をＲＴ−ＰＣＲ解析により評価した。その結果、この遺
伝子の発現は、試験した７種の細胞株中、ひとつの横紋
筋肉種細胞株（A673）において顕著に減少していた。ま
た、これら細胞株における別態様スプライシングは、次
のとおりであった。エクソン１０及びエクソン１０−１
１を欠くスプライスバリアントは、癌細胞におけるその
転写パターンが、正常骨格筋でのそれに類似していた。
一方、エクソン１の一部を欠失しているバリアントの割
合は、正常骨格筋では少なかったのに対し、ひとつの横
紋筋肉種細胞株（RD）及びひとつの骨肉腫（HuO3NI）で
は相対的により多く認められた。

【００６３】（ヘ）考察本発明により、ATP-gated ion channels をコードする
Ｐ２Ｘファミリーの新規なメンバーであると考えられる
新規なｐ５３誘導型遺伝子が単離された。ｐ５３結合性
配列は、この遺伝子を含む全コスミドＤＮＡの配列決定
により、該遺伝子の下流約１．６ｋｂに見出された。ｐ
５３により制御されている遺伝子の機能的ｐ５３結合部
位は、今まで、これら遺伝子のイントロン又はプロモー
ター領域中に見出されてきている。本発明の新規遺伝子
においては、該機能的ｐ５３結合部位は、その下流に位
置していた。これらの結果は、ｐ５３結合部位がエンハ
ンサー配列として働く可能性を示唆している。

【００６４】本発明ｃＤＮＡから推定されるアミノ酸配
列は、Ｐ２Ｘレセプターファミリーのメンバー、特にラ
ットＰ２Ｘ６（８０％同一性）、に相同性を有する。し
かしながら、ラットＰ２Ｘ６ｍＲＮＡが脳の広い範囲に
おいて見出されるのに対し、この遺伝子は骨格筋におい
て特異的に発現されており、従って、これがラットＰ２
Ｘ６のヒト相同物であるとは考えられない。Ｐ２Ｘレセ
プターは、ATP-gatedion channels に分類され、細胞死
やシナプス伝達のような細胞外ＡＴＰ誘導型生物活性の
メディエーターとして機能するとされてきている〔Zhen
g L.M., et al., J. Cell Biol., 113: 279-288 1991 ;
Zoeteweij J.P., et al., Biochem.J., 288: 207-213,
1992 ; Kennedy C., et al., Nature, 377: 385-386,
1995〕。また、アミノ酸レベルでの配列類似性は、ＲＰ
−２と呼ばれる部分配列ｃＤＮＡとの間でも認められ
る。ＲＰ−２は、ガンマ照射によりアポトーシスを起こ
しているラット胸腺細胞において誘導されるｍＲＮＡか
らの subtractive ハイブリダイゼーションによって単
離されている〔Owens G. P., et al., Mol. Cell. Bio
l., 11: 4177-4188 1991〕。ＡＴＰは、細胞内カルシウ
ム濃度を増加することにより、胸腺細胞、肝細胞及び各
種のリンパ球細胞株において細胞死を誘導する。これら
の事実によれば、本発明遺伝子は、骨格筋におけるｐ５
３依存性アポトーシス（おそらく細胞外ＡＴＰにより仲
介される）に密接に関与しているものと考えられる。

【００６５】ノーザンブロット解析により、骨格筋にお
いて３．６ｋｂ転写物が検出された。この遺伝子の発現
は、４種の横紋筋肉種細胞株のひとつにおいて著しく減
少していた。加えて、トランスメンブランドメインＭ１
の一部をコードするエクソン１の一部を欠失するマイナ
ーなスプライスバリアントが、残り６種の癌細胞株の内
２つにおいて相対的により多く認められた。試験した癌
細胞株で別態様スプライシングで生じる異常産物の割合
が高かったことは注目され、アミノ末端での不均質性の
生物学的意義を明らかにする事が重要となる。更に、横
紋筋肉種を含む種々の組織の癌では、この遺伝子を含む
染色体領域（22q11）に欠失があることが報告されてお
り〔Newsham I., et al., Genomics, 19: 433-440, 199
4 ; Schofield D. E., et al., Genes Chromosom. Canc
er, 15: 10-17, 1996 ; Biegel J. A., et al., Genes
Chromosom. Cancer, 16: 94-105, 1996〕，この遺伝子
がこの領域に存在する癌抑制遺伝子である可能性を示唆
している。

【００６６】

【配列表】

【００６７】配列番号：１配列の長さ：４３１配列の型：アミノ酸トポロジー：直線状配列の種類：蛋白配列： Met Gly Ser Pro Gly Ala Thr Thr Gly Trp Gly Leu Leu Asp Tyr Lys 1 5 10 15 Thr Glu Lys Tyr Val Met Thr Arg Asn Trp Arg Val Gly Ala Leu Gln 20 25 30 Arg Leu Leu Gln Phe Gly Ile Val Val Tyr Val Val Gly Trp Ala Leu 35 40 45 Leu Ala Lys Lys Gly Tyr Gln Glu Arg Asp Leu Glu Pro Gln Phe Ser 50 55 60 Ile Ile Thr Lys Leu Lys Gly Val Ser Val Thr Gln Ile Lys Glu Leu 65 70 75 80 Gly Asn Arg Leu Trp Asp Val Ala Asp Phe Val Lys Pro Pro Gln Gly 85 90 95 Glu Asn Val Phe Phe Leu Val Thr Asn Phe Leu Val Thr Pro Ala Gln 100 105 110 Val Gln Gly Arg Cys Pro Glu His Pro Ser Val Pro Leu Ala Asn Cys 115 120 125 Trp Val Asp Glu Asp Cys Pro Glu Gly Glu Gly Gly Thr His Ser His 130 135 140 Gly Val Lys Thr Gly Gln Cys Val Val Phe Asn Gly Thr His Arg Thr 145 150 155 160 Cys Glu Ile Trp Ser Trp Cys Pro Val Glu Ser Gly Val Val Pro Ser 165 170 175 Arg Pro Leu Leu Ala Gln Ala Gln Asn Phe Thr Leu Phe Ile Lys Asn 180 185 190 Thr Val Thr Phe Ser Lys Phe Asn Phe Ser Lys Ser Asn Ala Leu Glu 195 200 205 Thr Trp Asp Pro Thr Tyr Phe Lys His Cys Arg Tyr Glu Pro Gln Phe 210 215 220 Ser Pro Tyr Cys Pro Val Phe Arg Ile Gly Asp Leu Val Ala Lys Ala 225 230 235 240 Gly Gly Thr Phe Glu Asp Leu Ala Leu Leu Gly Gly Ser Val Gly Ile 245 250 255 Arg Val His Trp Asp Cys Asp Leu Asp Thr Gly Asp Ser Gly Cys Trp 260 265 270 Pro His Tyr Ser Phe Gln Leu Gln Glu Lys Ser Tyr Asn Phe Arg Thr 275 280 285 Ala Thr His Trp Trp Glu Gln Pro Gly Val Glu Ala Arg Thr Leu Leu 290 295 300 Lys Leu Tyr Gly Ile Arg Phe Asp Ile Leu Val Thr Gly Gln Ala Gly 305 310 315 320 Lys Phe Gly Leu Ile Pro Thr Ala Val Thr Leu Gly Thr Gly Ala Ala 325 330 335 Trp Leu Gly Val Val Thr Phe Phe Cys Asp Leu Leu Leu Leu Tyr Val 340 345 350 Asp Arg Glu Ala His Phe Tyr Trp Arg Thr Lys Tyr Glu Glu Ala Lys 355 360 365 Ala Pro Lys Ala Thr Ala Asn Ser Val Trp Arg Glu Leu Ala Leu Ala 370 375 380 Ser Gln Ala Arg Leu Ala Glu Cys Leu Arg Arg Ser Ser Ala Pro Ala 385 390 395 400 Pro Thr Ala Thr Ala Ala Gly Ser Gln Thr Gln Thr Pro Gly Trp Pro 405 410 415 Cys Pro Ser Ser Asp Thr His Leu Pro Thr His Ser Gly Ser Leu 420 425 430

【００６８】配列番号：２配列の長さ：１２９３配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直線状配列の種類：DNA (cDNA) 配列： ATGGGCTCCC CAGGGGCTAC GACAGGCTGG GGGCTTCTGG ATTATAAGAC GGAGAAGTAT 60 GTGATGACCA GGAACTGGCG GGTGGGCGCC CTGCAGAGGC TGCTGCAGTT TGGGATCGTG 120 GTCTATGTGG TAGGGTGGGC GCTCCTCGCC AAAAAAGGCT ACCAGGAGCG GGACCTGGAA 180 CCCCAGTTTT CCATCATCAC CAAACTCAAA GGGGTTTCCG TCACTCAGAT CAAGGAGCTT 240 GGAAACCGGC TGTGGGATGT GGCCGACTTC GTGAAGCCAC CTCAGGGAGA GAACGTGTTC 300 TTCTTGGTGA CCAACTTCCT TGTGACGCCA GCCCAAGTTC AGGGCAGATG CCCAGAGCAC 360 CCGTCCGTCC CACTGGCTAA CTGCTGGGTC GACGAGGACT GCCCCGAAGG GGAGGGAGGC 420 ACACACAGCC ACGGTGTAAA AACAGGCCAG TGTGTGGTGT TCAATGGGAC CCACAGGACC 480 TGTGAGATCT GGAGTTGGTG CCCCGTGGAG AGTGGCGTTG TGCCCTCGAG GCCCCTGCTG 540 GCCCAGGCCC AGAACTTCAC ACTGTTCATC AAAAACACAG TCACCTTCAG CAAGTTCAAC 600 TTCTCTAAGT CCAATGCCTT GGAGACCTGG GACCCCACCT ATTTTAAGCA CTGCCGCTAT 660 GAACCACAAT TCAGCCCCTA CTGTCCCGTG TTCCGCATTG GGGACCTCGT GGCCAAGGCT 720 GGAGGGACCT TCGAGGACCT GGCGTTGCTG GGTGGCTCTG TAGGCATCAG AGTTCACTGG 780 GATTGTGACC TGGACACCGG GGACTCTGGC TGCTGGCCTC ACTACTCCTT CCAGCTGCAG 840 GAGAAGAGCT ACAACTTCAG GACAGCCACT CACTGGTGGG AGCAACCGGG TGTGGAGGCC 900 CGCACCCTGC TCAAGCTCTA TGGAATCCGC TTCGACATCC TCGTCACCGG GCAGGCAGGG 960 AAGTTCGGGC TCATCCCCAC GGCCGTCACA CTGGGCACCG GGGCAGCTTG GCTGGGCGTG 1020 GTCACCTTTT TCTGTGACCT GCTACTGCTG TATGTGGATA GAGAAGCCCA TTTCTACTGG 1080 AGGACAAAGT ATGAGGAGGC CAAGGCCCCG AAAGCAACCG CCAACTCTGT GTGGAGGGAG 1140 CTGGCCCTTG CATCCCAAGC CCGACTGGCC GAGTGCCTCA GACGGAGCTC AGCACCTGCA 1200 CCCACGGCCA CTGCTGCTGG GAGTCAGACA CAGACACCAG GATGGCCCTG TCCAAGTTCT 1260 GACACCCACT TGCCAACCCA TTCCGGGAGC CTG 1293

【００６９】配列番号：３配列の長さ：１６９７配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直線状配列の種類：DNA (cDNA) 配列の特徴：特徴を表わす記号：CDS 存在位置：４６．．１３３８特徴を決定した方法：Ｅ配列： CTGCCATGCT GACTCATGTG CCCGCAGCTA GCAGGAGCTG GCAGC ATG GGC TCC 54 Met Gly Ser CCA GGG GCT ACG ACA GGC TGG GGG CTT CTG GAT TAT AAG ACG GAG AAG 102 Pro Gly Ala Thr Thr Gly Trp Gly Leu Leu Asp Tyr Lys Thr Glu Lys 5 10 15 TAT GTG ATG ACC AGG AAC TGG CGG GTG GGC GCC CTG CAG AGG CTG CTG 150 Tyr Val Met Thr Arg Asn Trp Arg Val Gly Ala Leu Gln Arg Leu Leu 20 25 30 35 CAG TTT GGG ATC GTG GTC TAT GTG GTA GGG TGG GCG CTC CTC GCC AAA 198 Gln Phe Gly Ile Val Val Tyr Val Val Gly Trp Ala Leu Leu Ala Lys 40 45 50 AAA GGC TAC CAG GAG CGG GAC CTG GAA CCC CAG TTT TCC ATC ATC ACC 246 Lys Gly Tyr Gln Glu Arg Asp Leu Glu Pro Gln Phe Ser Ile Ile Thr 55 60 65 AAA CTC AAA GGG GTT TCC GTC ACT CAG ATC AAG GAG CTT GGA AAC CGG 294 Lys Leu Lys Gly Val Ser Val Thr Gln Ile Lys Glu Leu Gly Asn Arg 70 75 80 CTG TGG GAT GTG GCC GAC TTC GTG AAG CCA CCT CAG GGA GAG AAC GTG 342 Leu Trp Asp Val Ala Asp Phe Val Lys Pro Pro Gln Gly Glu Asn Val 85 90 95 TTC TTC TTG GTG ACC AAC TTC CTT GTG ACG CCA GCC CAA GTT CAG GGC 390 Phe Phe Leu Val Thr Asn Phe Leu Val Thr Pro Ala Gln Val Gln Gly 100 105 110 115 AGA TGC CCA GAG CAC CCG TCC GTC CCA CTG GCT AAC TGC TGG GTC GAC 438 Arg Cys Pro Glu His Pro Ser Val Pro Leu Ala Asn Cys Trp Val Asp 120 125 130 GAG GAC TGC CCC GAA GGG GAG GGA GGC ACA CAC AGC CAC GGT GTA AAA 486 Glu Asp Cys Pro Glu Gly Glu Gly Gly Thr His Ser His Gly Val Lys 135 140 145 ACA GGC CAG TGT GTG GTG TTC AAT GGG ACC CAC AGG ACC TGT GAG ATC 534 Thr Gly Gln Cys Val Val Phe Asn Gly Thr His Arg Thr Cys Glu Ile 150 155 160 TGG AGT TGG TGC CCC GTG GAG AGT GGC GTT GTG CCC TCG AGG CCC CTG 582 Trp Ser Trp Cys Pro Val Glu Ser Gly Val Val Pro Ser Arg Pro Leu 165 170 175 CTG GCC CAG GCC CAG AAC TTC ACA CTG TTC ATC AAA AAC ACA GTC ACC 630 Leu Ala Gln Ala Gln Asn Phe Thr Leu Phe Ile Lys Asn Thr Val Thr 180 185 190 195 TTC AGC AAG TTC AAC TTC TCT AAG TCC AAT GCC TTG GAG ACC TGG GAC 678 Phe Ser Lys Phe Asn Phe Ser Lys Ser Asn Ala Leu Glu Thr Trp Asp 200 205 210 CCC ACC TAT TTT AAG CAC TGC CGC TAT GAA CCA CAA TTC AGC CCC TAC 726 Pro Thr Tyr Phe Lys His Cys Arg Tyr Glu Pro Gln Phe Ser Pro Tyr 215 220 225 TGT CCC GTG TTC CGC ATT GGG GAC CTC GTG GCC AAG GCT GGA GGG ACC 774 Cys Pro Val Phe Arg Ile Gly Asp Leu Val Ala Lys Ala Gly Gly Thr 230 235 240 TTC GAG GAC CTG GCG TTG CTG GGT GGC TCT GTA GGC ATC AGA GTT CAC 822 Phe Glu Asp Leu Ala Leu Leu Gly Gly Ser Val Gly Ile Arg Val His 245 250 255 TGG GAT TGT GAC CTG GAC ACC GGG GAC TCT GGC TGC TGG CCT CAC TAC 870 Trp Asp Cys Asp Leu Asp Thr Gly Asp Ser Gly Cys Trp Pro His Tyr 260 265 270 275 TCC TTC CAG CTG CAG GAG AAG AGC TAC AAC TTC AGG ACA GCC ACT CAC 918 Ser Phe Gln Leu Gln Glu Lys Ser Tyr Asn Phe Arg Thr Ala Thr His 280 285 290 TGG TGG GAG CAA CCG GGT GTG GAG GCC CGC ACC CTG CTC AAG CTC TAT 966 Trp Trp Glu Gln Pro Gly Val Glu Ala Arg Thr Leu Leu Lys Leu Tyr 295 300 305 GGA ATC CGC TTC GAC ATC CTC GTC ACC GGG CAG GCA GGG AAG TTC GGG 1014 Gly Ile Arg Phe Asp Ile Leu Val Thr Gly Gln Ala Gly Lys Phe Gly 310 315 320 CTC ATC CCC ACG GCC GTC ACA CTG GGC ACC GGG GCA GCT TGG CTG GGC 1062 Leu Ile Pro Thr Ala Val Thr Leu Gly Thr Gly Ala Ala Trp Leu Gly 325 330 335 GTG GTC ACC TTT TTC TGT GAC CTG CTA CTG CTG TAT GTG GAT AGA GAA 1110 Val Val Thr Phe Phe Cys Asp Leu Leu Leu Leu Tyr Val Asp Arg Glu 340 345 350 355 GCC CAT TTC TAC TGG AGG ACA AAG TAT GAG GAG GCC AAG GCC CCG AAA 1158 Ala His Phe Tyr Trp Arg Thr Lys Tyr Glu Glu Ala Lys Ala Pro Lys 360 365 370 GCA ACC GCC AAC TCT GTG TGG AGG GAG CTG GCC CTT GCA TCC CAA GCC 1206 Ala Thr Ala Asn Ser Val Trp Arg Glu Leu Ala Leu Ala Ser Gln Ala 375 380 385 CGA CTG GCC GAG TGC CTC AGA CGG AGC TCA GCA CCT GCA CCC ACG GCC 1254 Arg Leu Ala Glu Cys Leu Arg Arg Ser Ser Ala Pro Ala Pro Thr Ala 390 395 400 ACT GCT GCT GGG AGT CAG ACA CAG ACA CCA GGA TGG CCC TGT CCA AGT 1302 Thr Ala Ala Gly Ser Gln Thr Gln Thr Pro Gly Trp Pro Cys Pro Ser 405 410 415 TCT GAC ACC CAC TTG CCA ACC CAT TCC GGG AGC CTG TAGCCGTTCC 1348 Ser Asp Thr His Leu Pro Thr His Ser Gly Ser Leu 420 425 430 CTGCTGGTTG AGAGTTGGGG GCTGGGAAGG GCGGGGCCCT GCCTGGGGAT TTCAAGGATG 1408 AGGCCCCAGC ATGGAGGATT GGGGGTAGAA TTCCACCCTT GAACCCCAGC AAACAGTCCC 1468 TCCCCTGACT CCCACCTTGG TAGGGTGCTG CCTCAGGGAG CCATAAAAGT CGGCTGTGTT 1528 TTGAGACGGC GACAGAACCT GACCCGTGGA GACTGGGAGA GCCCAGCAGG CACCTGTATT 1588 GCAGGGCTCC GACTGCATGT GGCAGGGGCT CCTGCTGCGT CTGGGCCTGA AGGTCTCTCT 1648 CCCAGTGCTC TGTCCCCAGT GTTCCTAGCA GAGGTATGCT TACCAGCTG 1697

【図面の簡単な説明】

【図１】野生型ｐ５３によるＰ２ＸＭ遺伝子発現の誘導
を調べるために、野生型ｐ５３アレルを欠く大腸癌細胞
株ＳＷ４８０におけるｐ５３誘導ｍＲＮＡの発現をＲＴ
−ＰＣＲにより解析した結果を示す図面代用写真であ
る。

【図２】ヒト組織におけるＰ２ＸＭのノーザンブロット
解析結果を示す図面代用写真である。

【図３】Ｐ２ＸＭ遺伝子のゲノム構成を示す図である。

【図４】各種Ｐ２Ｘレセプターのアミノ酸配列を示す図
である。

【図５】別態様スプライシングバリアント、ＡＬ１、Ａ
Ｌ２及びＡＬ３を示す図である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＣ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｐ 21/02 ＣＣ１２Ｑ 1/68 Ｃ１２Ｑ 1/68 ＡＧ０１Ｎ 33/53 Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｄ (Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡＣ１２Ｒ 1:91） (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:91） (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:19）

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】配列番号：１で示されるアミノ酸配列の全
部又は一部をコードする塩基配列を含むヒト遺伝子。
【請求項２】配列番号：２で示される塩基配列の全部又
は一部を含む請求項１に記載の遺伝子。