JPH10117782A - ヒトＭａｄ関連蛋白遺伝子 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】その利用により、遺伝子の各種組織での発現の
検出や、その構造、機能を解析でき、また、該遺伝子で
コードされるヒト蛋白の遺伝子工学的製造が可能とな
り、之等により、その発現物の解析等により、之等の関
与する疾患、例えば遺伝子病、癌等の病態解明や診断、
治療等が可能な新しいヒト遺伝子を提供する。 【解決手段】配列番号：１及び：４で示されるアミノ酸
配列をコードする塩基配列を含むことを特徴とする新規
なヒトＭａｄ関連蛋白遺伝子。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、ヒトの疾患の予
防、診断及び治療の指針として有用な遺伝子、より詳し
くはラット、マウス、酵母、線虫、ヒトの他の遺伝子等
と類似性を有する新規なヒト遺伝子に関し、該遺伝子の
ｃＤＮＡ解析、ｃＤＮＡ染色体へのマッピング及びｃＤ
ＮＡの機能解析により、該遺伝子を用いた遺伝子診断並
びに新しい治療薬の開発に利用可能な遺伝子に関する。

【０００２】

【従来の技術】生物の遺伝情報は、細胞の核内に存在す
るＡ、Ｃ、Ｇ及びＴの４種の塩基の並び（ＤＮＡ）とし
て蓄積され、この遺伝情報は個々の生物の系統維持と個
体発生のために保存されている。ヒトの場合、その塩基
数は約３０億（３×１０⁹）といわれ、その中に５〜１
０万の遺伝子があると推測されている。これらの遺伝情
報は、遺伝子（ＤＮＡ）からｍＲＮＡが転写され、次に
蛋白質に翻訳されるという流れに沿って調節蛋白質、構
造蛋白質、酵素等の創製を通して、生命現象の維持に関
与している。

【０００３】上記遺伝子から蛋白質翻訳までの流れの異
常は、細胞の増殖・分化等の生命維持システムの異常を
惹起し、各種疾患の原因となるとされている。これまで
の遺伝子解析の結果から、インスリン受容体やＬＤＬ受
容体等の各種受容体、細胞の増殖・分化に係わる例えば
プロテアーゼやＡＴＰａｓｅ、スーパーオキシドディス
ムターゼのような代謝酵素等の遺伝子が、医薬品開発に
とって有用な素材となると考えられた。

【０００４】しかしながら、ヒト遺伝子の解析や、かか
る解析された遺伝子の機能と各種疾患との係わり等につ
いての研究は、まだ始まったばかりであり、不明な点が
多く、更なる新しい遺伝子の解析、それらの遺伝子の機
能解析及び疾患との係わりの研究、ひいては解析された
遺伝子の利用による遺伝子診断や該遺伝子の医薬用途へ
の応用研究等が当業界で望まれている。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】上記の如く、新たなヒ
ト遺伝子が提供できれば、各細胞での発現レベルやその
構造及び機能を解析でき、またその発現物の解析等によ
り、之等の関与する疾患、例えば遺伝子病、癌等の病態
解明や診断、治療等が可能となると考えられ、本発明
は、かかる新たなヒトの遺伝子の提供を目的としてい
る。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記目的
より以下の如く鋭意研究を重ねた。即ち、本発明者ら
は、まずヒト胎児脳、成人血管、胎盤の各種組織より抽
出したｍＲＮＡよりｃＤＮＡを合成し、これをベクター
に組込んでライブラリーを構築し、該ライブラリーでト
ランスフォームした大腸菌コロニーを寒天培地上に形成
させ、該コロニーをランダムにピックアップして９６ウ
ェルマイクロプレートに移し、各種のヒト遺伝子を含む
大腸菌クローンを作製、登録した。次いで、之等の各ク
ローンを培養後、ＤＮＡを抽出精製し、得られるｃＤＮ
Ａを鋳型としてデオキシターミネーター法により４種の
塩基特異的に停止する伸長反応を行ない、自動ＤＮＡシ
ークエンサーにより、登録された各クローンの有するヒ
ト遺伝子の５’末端から約４００塩基配列を決定し、か
くして得られたヒト遺伝子の塩基配列情報より、公知の
バクテリア、酵母、線虫、マウス、ヒト等の各種動植物
種に類似性を有する新規なファミリー遺伝子を検索し
た。尚、上記ｃＤＮＡ解析方法については、本発明者の
ひとりである藤原らの文献に細述されている（藤原
力, 細胞工学, 14,645-654(1995)）。

【０００７】その結果、検索されたグループ（レセプタ
ー、ＤＮＡ結合ドメインを有する転写調節因子やシグナ
ル伝達系因子、代謝酵素等）中に、既知の遺伝子と相同
性を有する新規な遺伝子を見い出し、ここに本発明を完
成するに至った。

【０００８】即ち、本発明によれば、配列番号：１及
び：４で示されるアミノ酸配列をコードする塩基配列を
含むことを特徴とする新規なヒト遺伝子、前記各アミノ
酸配列をコードする配列番号：２及び：５で示される塩
基配列を含むことを特徴とするヒト遺伝子、並びに配列
番号：３及び：６で示される塩基配列であることを特徴
とする新規なヒト遺伝子が提供される。

【０００９】以下、本明細書におけるアミノ酸、ペプチ
ド、塩基配列、核酸等の略号による表示は、ＩＵＰＡ
Ｃ、ＩＵＢの規定、「塩基配列又はアミノ酸配列を含む
明細書等の作成のためのガイドライン」（特許庁編）及
び当該分野における慣用記号に従うものとする。

【００１０】

【発明の実施の形態】本発明遺伝子の一具体例として
は、後述する実施例１に示される「ＧＥＮ−５７０Ｅ１
１Ｆ」及び「ＧＥＮ−５７０Ｅ１１ＦＳ」とそれぞれ名
付けられた各クローンの有するＤＮＡ配列から演繹され
るものを挙げることができ、それらの各塩基配列は、配
列表に示される通りである。

【００１１】これら各クローンの有する遺伝子は、同配
列表に示される各アミノ酸でコードされるヌクレオチド
（核酸）のオープンリーディングフレームを有してお
り、それぞれ後記実施例に示される分子量を有している
と計算された。従って、本明細書においては、以下本発
明に係わる各ヒト遺伝子を、後記実施例１に示す名称に
て表示することがある。

【００１２】以下、本発明ヒト遺伝子につき詳述すれ
ば、本発明ヒト遺伝子のそれぞれは、上述した通り、ラ
ット、マウス、酵母、線虫及び他のヒト遺伝子と類似性
を有し、それら類似性ある遺伝子の情報に基づくヒト遺
伝子の解析と、それら解析された遺伝子の機能と各種疾
患との係わりについての研究に利用でき、該遺伝子と関
係ある疾患への遺伝子診断並びに該遺伝子の医薬用途へ
の応用研究に用いることが可能である。即ち、本発明遺
伝子によりコードされる蛋白質（遺伝子産物）の機能
は、既知の相同性遺伝子のそれより類推でき、また本発
明遺伝子の提供によれば、その候補遺伝子を発現ベクタ
ーに組込み、リコンビナントを作製し、酵素活性や結合
活性等の機能を調べることもできる。

【００１３】本発明遺伝子は、例えば配列番号：２で示
されるように、一本鎖ＤＮＡ配列で表されるが、本発明
遺伝子には、かかる一本鎖ＤＮＡ配列に相補的なＤＮＡ
配列や之等の両者を含むコンポーネントもまた包含され
る。尚、配列番号：２及び：５に示す本発明遺伝子の配
列は、これによりコードされる各アミノ酸残基を示すコ
ドンの一つの組合わせ例であり、本発明遺伝子はこれに
限らず、各アミノ酸残基に対して任意のコドンを組合わ
せ選択したＤＮＡ塩基配列を有することも勿論可能であ
る。尚、該コドンの選択は常法に従うことができ、例え
ば利用する宿主のコドン使用頻度を考慮することができ
る〔Ncl.Acids Res., 9, 43-74 (1981)〕。

【００１４】更に本発明遺伝子には、上記で示されるア
ミノ酸配列の一部のアミノ酸乃至アミノ酸配列を置換、
欠失、付加等により改変してなり、同様の機能を有する
同効物をコードするＤＮＡ配列もまた包含される。之等
改変体の製造、改変（変異）等は天然に生じることもあ
り、また翻訳後の修飾により、或は遺伝子工学的手法に
より天然の遺伝子（本発明遺伝子）を、例えばサイトス
ペシフィック・ミュータゲネシス〔Methods in Enzymol
ogy, 154, p350, 367-382 (1987); 同 100, p468 (198
3); Nucleic Acids Research, 12, p9441 (1984); 続生
化学実験講座１「遺伝子研究法II」、日本生化学会編,
p105 (1986)〕等の方法により改変したり、リン酸トリ
エステル法やリン酸アミダイト法等の化学合成手段〔J.
Am. Chem. Soc., 89, p4801 (1967); 同91, p3350 (19
69); Science, 150, p178 (1968); Tetrahedron Lett.,
22, p1859 (1981); 同24, p245 (1983)〕により変異さ
せたＤＮＡを合成したり、それらの組合せにより収得す
ることができる。

【００１５】本発明遺伝子は、これを利用して、即ち例
えばこれを微生物のベクターに組込み、形質転換された
微生物を培養することによって、上記各遺伝子でコード
される蛋白を容易にかつ安定して発現できる。

【００１６】また本発明の遺伝子を利用して得られる各
蛋白は、之等を用いて、特異抗体を作成することもでき
る。ここで抗原として用いられるコンポーネントは、上
記遺伝子工学的手法に従って大量に産生される蛋白を用
いることができ、得られる抗体はポリクローナル抗体及
びモノクローナル抗体のいずれでもよく、之等抗体はそ
れぞれの蛋白の精製、測定、識別等に有利に利用でき
る。

【００１７】本発明遺伝子の製造は、本発明によって開
示された本発明遺伝子についての配列情報によれば、一
般的遺伝子工学的手法により容易に実施できる〔Molecu
larCloning 2nd Ed, Cold Spring Harbor Laboratory P
ress (1989)；続生化学実験講座「遺伝子研究法Ｉ、I
I、III」、日本生化学会編 (1986)等参照〕。

【００１８】これは例えばヒトｃＤＮＡライブラリー
（各遺伝子の発現される適当な起源細胞より常法に従い
調製されたもの）から、本発明遺伝子に特有の適当なプ
ローブや抗体を用いて所望クローンを選択することによ
り実施できる〔Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 78, 661
3 (1981); Science, 222, 778 (1983)等〕。

【００１９】上記方法において、起源細胞としては、目
的の遺伝子を発現する各種の細胞、組織や之等に由来す
る培養細胞等が例示され、これからの全ＲＮＡの分離、
ｍＲＮＡの分離や精製、ｃＤＮＡへの変換（合成）とそ
のクローニング等はいずれも常法に従い実施できる。ま
た、ｃＤＮＡライブラリーは市販されてもおり、本発明
においてはそれらｃＤＮＡライブラリー、例えばクロー
ンテック社（ClontechLab. Inc.）より市販の各種ｃＤ
ＮＡライブラリー等を用いることもできる。

【００２０】ｃＤＮＡライブラリーからの本発明遺伝子
のスクリーニングは、前記通常の方法に従い実施するこ
とができる。該スクリーニング方法としては、例えばｃ
ＤＮＡの産生する蛋白質に対して、該蛋白質特異抗体を
使用した免疫的スクリーニングにより、対応するｃＤＮ
Ａクローンを選択する方法、目的のＤＮＡ配列に選択的
に結合するプローブを用いたプラークハイブリダイゼー
ション、コロニーハイブリダイゼーション等や之等の組
合せを例示できる。ここで用いられるプローブとして
は、本発明遺伝子のＤＮＡ配列に関する情報をもとにし
て化学合成されたＤＮＡ配列等を用いるのが一般的であ
り、勿論既に取得された本発明遺伝子やその断片もかか
るプローブとして利用できる。

【００２１】更に各細胞、組織より抽出、単離精製され
た天然抽出物の部分アミノ酸配列情報に基づき、センス
・プライマー、アンチセンス・プセイマーをスクリーニ
ング用プローブとして用いることもできる。

【００２２】また、本発明遺伝子の取得に際しては、Ｐ
ＣＲ法〔Science, 230, 1350-1354(1985)〕によるＤＮ
Ａ／ＲＮＡ増幅法が好適に利用できる。殊にライブラリ
ーから全長のｃＤＮＡが得られ難いような場合に、レー
ス法（ＲＡＣＥ：Rapid amplification of cDNA ends；
実験医学、12(6), 35-38 (1994)）、殊に５′−レース
（５′−ＲＡＣＥ）法〔Frohman,M.A., et al., Proc.N
atl.Acad.Sci., USA.,8, 8998-9002 (1988)〕の採用が
好適である。かかるＰＣＲ法の採用に際して使用される
プライマーは、既に本発明によって明らかにされた本発
明遺伝子の配列情報に基づいて適宜設定することがで
き、これは常法に従い合成することができる。

【００２３】尚、増幅させたＤＮＡ／ＲＮＡ断片の単離
精製は、前記の通り常法に従うことができ、例えばゲル
電気泳動法等によればよい。

【００２４】上記で得られる本発明遺伝子或は各種ＤＮ
Ａ断片等の塩基配列の決定も、常法に従うことができ、
例えばジデオキシ法〔Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 7
4, 5463-5467 (1977)〕やマキサム−ギルバート法〔Met
hod in Enzymology, 65, 499(1980)〕等により行なうこ
とができる。かかる塩基配列の決定は、市販のシークエ
ンスキット等を用いても容易に行ない得る。

【００２５】本発明遺伝子の利用によれば、通常の遺伝
子組換え技術〔例えば、Science, 224, p1431 (1984);
Biochem. Biophys. Res. Comm., 130, p692 (1985); Pr
oc.Natl. Acad. Sci., USA., 80, p5990 (1983)及び前
記引用文献等参照〕に従うことにより各組換え体蛋白を
得ることができる。該蛋白の製造は、より詳細には、本
発明遺伝子が宿主細胞中で発現できる組換えＤＮＡを作
成し、これを宿主細胞に導入して形質転換し、該形質転
換体を培養することにより行なわれる。

【００２６】ここで宿主細胞としては、真核生物及び原
核生物のいずれも用いることができる。該真核生物の細
胞には、脊椎動物、酵母等の細胞が含まれ、脊椎動物細
胞としては、例えばサルの細胞であるＣＯＳ細胞〔Cel
l, 23, 175-182 (1981)〕やチャイニーズ・ハムスター
卵巣細胞及びそのジヒドロ葉酸レダクターゼ欠損株〔Pr
oc. Natl. Acad. Sci., USA., 77, 4216-4220 (1980)〕
等がよく用いられているが、之等に限定される訳ではな
い。

【００２７】脊椎動物の発現ベクターとしては、通常発
現しようとする遺伝子の上流に位置するプロモーター、
ＲＮＡのスプライス部位、ポリアデニル化部位及び転写
終了配列等を保有するものを使用でき、これは更に必要
により複製起点を有していてもよい。該発現ベクターの
例としては、例えば、ＳＶ４０の初期プロモーターを保
有するｐＳＶ２dhfr〔Mol. Cell. Biol., 1, 854 (198
1)〕等を例示できる。また、真核微生物としては、酵母
が一般によく用いられ、中でもサッカロミセス属酵母を
有利に利用できる。該酵母等の真核微生物の発現ベクタ
ーとしては、例えば酸性ホスフアターゼ遺伝子に対する
プロモーターを有するｐＡＭ８２〔Proc. Natl. Acad.
Sci., USA., 80, 1-5 (1983)〕等を利用できる。

【００２８】また、本発明遺伝子の発現ベクターとして
は、原核生物遺伝子融合ベクターを好ましく利用するこ
とができ、該ベクターの具体例としては、例えば分子量
２６０００のＧＳＴドメイン（S. japonic um 由来）を
有するｐＧＥＸ−２ＴＫやｐＧＥＸ−４Ｔ−２等を例示
することができる。

【００２９】原核生物の宿主としては、大腸菌や枯草菌
が一般によく用いられる。之等を宿主とする場合、例え
ば該宿主菌中で複製可能なプラスミドベクターを用い、
このベクター中に本発明遺伝子が発現できるように該遺
伝子の上流にプロモーター及びＳＤ（シヤイン・アンド
・ダルガーノ）塩基配列、更に蛋白合成開始に必要な開
始コドン（例えばＡＴＧ）を付与した発現プラスミドを
利用するのが好ましい。上記宿主としての大腸菌として
は、エシエリヒア・コリ（Escherichia coli）Ｋ１２株
等がよく用いられ、ベクターとしては一般にｐＢＲ３２
２及びその改良ベクターがよく用いられるが、之等に限
定されず公知の各種の菌株及びベクターをも利用でき
る。プロモーターとしては、例えばトリプトファン（tr
p） プロモーター、lpp プロモーター、lac プロモータ
ー、PL/PR プロモーター等を使用できる。

【００３０】かくして得られる所望の組換えＤＮＡの宿
主細胞への導入方法及びこれによる形質転換方法として
は、一般的な各種方法を採用できる。また得られる形質
転換体は、常法に従い培養でき、該培養により本発明遺
伝子によりコードされる目的の蛋白が生産、発現され
る。該培養に用いられる培地としては、採用した宿主細
胞に応じて慣用される各種のものを適宜選択利用でき、
その培養も宿主細胞の生育に適した条件下で実施でき
る。

【００３１】上記により、形質転換体の細胞内、細胞外
乃至は細胞膜上に目的とする組換え蛋白が発現、生産、
蓄積乃至分泌される。

【００３２】各組換え蛋白は、所望により、その物理的
性質、化学的性質等を利用した各種の分離操作〔「生化
学データーブックII」、1175-1259頁、第１版第１刷、1
980年 6月23日株式会社東京化学同人発行；Biochemistr
y, 25(25), 8274-8277 (1986); Eur. J. Biochem., 16
3, 313-321 (1987) 等参照〕により分離、精製できる。
該方法としては、具体的には例えば通常の再構成処理、
蛋白沈澱剤による処理（塩析法）、遠心分離、浸透圧シ
ョック法、超音波破砕、限外濾過、分子篩クロマトグラ
フィー（ゲル濾過）、吸着クロマトグラフィー、イオン
交換クロマトグラフィー、アフィニティクロマトグラフ
ィー、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）等の各
種液体クロマトグラフィー、透析法、之等の組合せ等を
例示でき、特に好ましい上記方法としては所望の蛋白を
結合させたカラムを利用したアフィニティクロマトグラ
フィーを例示できる。

【００３３】また、本発明によって明らかにされた本発
明遺伝子の配列情報を基にすれば、例えば該遺伝子の一
部又は全部の塩基配列を利用することにより、各種ヒト
組織における本発明遺伝子の発現の検出を行なうことが
できる。これは常法に従って行なうことができ、例えば
ＲＴ−ＰＣＲ（Reverse transcribed-Polymerase chain
reaction）（Kawasaki, E.S., et al., Amplification
of RNA. In PCR Protocol, A Guide to methods and a
pplications, Academic Press, Inc., SanDiego, 21-27
(1991)〕によるＲＮＡ増幅により、またノーザンブロッ
ティング解析〔Molecular Cloning, Cold Spring Harbo
r Laboratory(1989)〕等により、いずれも良好に実施し
得る。

【００３４】尚、前記ＰＣＲ法を採用する場合におい
て、用いられるプライマーは、本発明遺伝子のみを特異
的に増幅できる本発明遺伝子に特有のものである限り何
等限定はなく、本発明遺伝情報に基いてその配列を適宜
設定することができる。通常これは常法に従って２０〜
３０ヌクレオチド程度の部分配列を有するものとするこ
とができる。その好適な例は、後記実施例１に示す通り
である。

【００３５】しかして、本発明はかかる新規なヒト遺伝
子に特有の検出に有用なプライマー及び／又はプローブ
をも提供するものである。

【００３６】

【発明の効果】本発明によれば、新規なヒト遺伝子が提
供され、該遺伝子を用いれば、該遺伝子の各種組織での
発現の検出や、その構造及び機能を解析でき、また、該
遺伝子でコードされるヒト蛋白の遺伝子工学的製造が可
能となり、これらにより、その発現物の解析等により、
之等の関与する疾患、例えば遺伝子病、癌等の病態解明
や診断、治療等が可能となる。

【００３７】

【実施例】以下、本発明を更に詳しく説明するため、実
施例を挙げる。

【００３８】

【実施例１】ヒトＭａｄ関連蛋白遺伝子（癌抑制遺伝
子） （１）ヒトＭａｄ関連蛋白遺伝子のクローニング及びＤ
ＮＡシークエンシングＴＧＦ（Transformig growth fac
tor）−βによる増殖抑制効果への抵抗性が、種々の癌
の悪性化や浸潤能と強く関連していることは、よく知ら
れている〔Fynan and Reiss, Crit.Rev.Oncog., 4, 493
-540, (1993)〕。

【００３９】ＴＧＦ−β抵抗性がＴＧＦ−βレセプター
の減少により説明され得るとの報告もあるが〔Kalkhove
n et al., Cell.Growth.Differ., 6, 1151-1161, (199
5)〕、一般的なＴＧＦ−β抵抗性獲得に至る機序を説明
しうるモデルは未だ明らかではない。

【００４０】ＴＧＦ−βは細胞増殖抑制活性を持つ分泌
蛋白質であり、セリン・スレオニンキナーゼ活性を持つ
ヘテロ２量体をレセプターとしてそのシグナルを核に伝
えることが知られている。このシグナル伝達経路に関連
する遺伝子としては、ショウジョウバエ由来のＭａｄ
（Mothers against dpp）遺伝子が単離されている〔Sek
elsky et al., Genetics, 139, 1347-1358, (199
5）〕。

【００４１】Ｍａｄは、同じくこの経路との関連が示唆
される線虫のＳｍａ２，３，４〔Savage et al., Proc.
Natl.Acad.Sci., U.S.A., 93, 790-794, (1996)〕に類
似性を示し、これらの遺伝子はいずれも分子量約５０Ｋ
ダルトンで、非常に強く保存されたＮ末端及びＣ末端の
ドメインがプロリン残基に富む中央部の配列によりつな
がった構造を有している。実際、Ｍａｄのヒト相同遺伝
子ＭＡＤＲ１／Ｓｍａｄは、ＴＧＦ−βファミリー遺伝
子の一つであるＢＭＰ２又はＢＭＰ４において、シグナ
ル特異的にリン酸化され、核に移行することが明らかと
なっている〔Liu et al., Nature, 38 1, 620-623，(199
6)；Hoodless et al., Cell, 85, 489-500, (1996)〕。

【００４２】またＭＡＤＲ１／Ｓｍａｄ及びＤＰＣ４の
Ｃ末端側は、転写活性をもつドメインである可能性が示
唆されており、Ｍａｄ関連遺伝子群は、全く新しいタイ
プの転写因子かもしれない〔Liu et al., Nature, 381,
620-623，(1996)；Hoodlesset al., Cell, 85, 489-50
0, (1996)〕。之等の知見よりＴＧＦ−βレセプターの
下流でシグナルを伝達するＭａｄ遺伝子群の機能喪失
は、ＴＧＦ−β抵抗性を引き起こすことが明らかであ
る。

【００４３】Ｍａｄヒト相同遺伝子は、現在まで少なく
とも６個存在すると考えられ〔Riggins et al., Nature
Genet., 13, 347-349, (1996)〕、ＤＰＣ−４〔homozy
gously deleted in pancreatic carcinoma, locus-4〕
及びＭＡＤＲ１（又はＳｍａｄ１）の２つの全翻訳領域
が決定されている〔Liu et al., Nature, 381, 620-62
3，(1996)；Hoodless et al., Cell, 85,489-500, (199
6)； Hahn et al., Science, 271, 350-353, (199
6)〕。

【００４４】このうちＤＰＣ−４は染色体１８ｑ２１．
１（この領域は膵臓癌の９０％でＬＯＨ(loss of heter
ozygosity)が見られる）に存在し、膵臓癌の約５０％で
欠失又は変異をおこしており、膀胱がん、胆癌、大腸癌
においてもＬＯＨが見られる〔Hahn et al., Science,
271, 350-363, (1996)〕。この領域は、大腸癌において
も２／３以上でＬＯＨが見られ、癌抑制遺伝子の候補遺
伝子としてＤＣＣ（deleted in colon cancer）が単離
されたが変異の頻度は低く、ＤＣＣに近接したＤＰＣ−
４において２８％で変異、欠失が検出されている〔Thia
galingam et al., Nature Genet., 13, 343-346, (199
6)〕。

【００４５】ＤＰＣ−４は、之等の癌の抑制遺伝子とし
て機能していると考えられる。更にＤＰＣ−４に近接し
て（約３Ｍｂ）同じくＭａｄ遺伝子群のひとつＪＶ−１
８−１が存在し、大腸癌において１１％において欠失及
び変異が同定された〔Riggins et al., Nature Genet.,
13, 347-349, (1996)〕。

【００４６】他のＭａｄ遺伝子群（ＪＶ１５−１，ＪＶ
１５−２，ＪＶ５−１，Ｓｍａｄ１／ＭＡＤＲ１）もそ
の染色体座位より癌との関連が示唆されている。

【００４７】現在まで、之等のＭａｄ遺伝子群がＴＧＦ
−βのシグナル伝達を通して機能しているかどうかは定
かではないが、癌抑制遺伝子として機能していることは
明らかであると考えられている。

【００４８】本例では、以下の通り、ヒト胎盤ｃＤＮＡ
ライブラリーから無作為に選択したｃＤＮＡクローンの
ＤＮＡ配列を決定した。

【００４９】即ち、ヒト胎盤より抽出したｍＲＮＡをク
ローンテック社より購入して出発材料とした。上記ｍＲ
ＮＡよりｃＤＮＡを合成し、ベクターλＺＡＰII（スト
ラタジーン社製）に挿入し、ｃＤＮＡライブラリーを構
築した（大塚ＧＥＮリサーチ・インスティチュート、大
塚製薬株式会社）。インビボ・エキシジョン法（in viv
o excision: Short, J. M., et al., Nucleic Acids Re
s., 16, 7583-7600 (1988)）によって寒天培地上にヒト
遺伝子を含む大腸菌コロニーを形成させ、ランダムにそ
のコロニーをピックアップし、９６ウエルマイクロプレ
ートにヒト遺伝子を含む大腸菌クローンを登録した。登
録されたクローンは、−８０℃にて保存した。

【００５０】次に登録した各クローンを１．５ｍｌのＬ
Ｂ培地で一昼夜培養し、プラスミド自動抽出装置ＰＩ−
１００（クラボウ社製）を用いてＤＮＡを抽出精製し
た。尚、コンタミした大腸菌のＲＮＡは、ＲＮase処理
により分解除去した。最終的に３０μｌに溶解し、２μ
ｌはミニゲルによりおおまかにＤＮＡのサイズ及び量を
チェックした。その７μｌをシークエンス反応用に用
い、残りの２１μｌは、プラスミドＤＮＡとして４℃に
保存した。また、この方法は若干のプログラム変更によ
って後記に示されるＦＩＳＨ（fluoresence in situ hy
bridization）のプローブ用としても使用可能なコスミ
ドを抽出することができる。

【００５１】続いてＴ３、Ｔ７、或は合成オリゴヌクレ
オチド・プライマーを用いるサンガーらのジデオキシタ
ーミネーター法（Sanger, F., et al., Proc. Natl. A
cad.Sci., U.S.A., 74, 5463-5467 (1977)）或はジデオ
キシターミネーター法にＰＣＲ法を加味した方法である
サイクルシークエンス法（Carothers, A.M., et al., B
io. Techniques, 7, 494-499 (1989)）を実施した。之
等の方法は少量のプラスミドＤＮＡ（およそ０．１−
０．５μｇ）をテンプレート（鋳型）として４種の塩基
を特異的に停止する伸長反応させる方法である。

【００５２】シークエンスプライマーとして、ＦＩＴＣ
（fluorescein isothiocyanate）蛍光標識したものを使
用し、Ｔａｑポリメラーゼにより約２５サイクル反応さ
せた。蛍光標識したＤＮＡ断片につき、自動ＤＮＡシー
クエンサー、ＡＬＦ^TMＤＮＡシークエンサー（ファルマ
シア社製）によりｃＤＮＡの５’末端側から約４００塩
基の配列を決定した。

【００５３】３’非翻訳領域は、各遺伝子の異質性（he
terogeneity）が高く、個々の遺伝子を区別するのに適
しているので、場合によっては、３’側のシークエンス
も行なった。

【００５４】ＤＮＡシークエンサーで得られた膨大な塩
基配列情報を、６４ビットのコンピューターＤＥＣ３４
００に転送し、コンピュターによるホモロジー解析を行
なった。該ホモロジー解析は、ＵＷＧＣＧのＦＡＳＴＡ
プログラム（Pearson, W.R.and Lipman, D. J., Proc.N
atl.Acad.Sci., USA., 85, 2444-2448 (1988)）による
データーベース（GenBank, EMBL）検索により行なっ
た。

【００５５】ヒト胎児脳ｃＤＮＡライブラリーについて
の上記解析方法は、藤原ら〔Fujiwara, t., et al., DN
A Res., 2, 107-111 (1991)〕に詳述されている。

【００５６】上記と同様な方法で、構築されたヒト胎盤
ｃＤＮＡライブラリーから無作為に選択した２８０００
以上のｃＤＮＡクローンの配列解析により、ショウジョ
ウバエのDrosophila melanogaster Mad(Mothers agains
t dpp)遺伝子を始めとするいくつかのＭａｄファミリー
遺伝子に類似のｃＤＮＡ配列を有するクローンを見いだ
した。これを「ＧＥＮ−５７０Ｅ１１」と名付けた。該
ＧＥＮ−５７０Ｅ１１クローンは、他のＭａｄファミリ
ー遺伝子と比較した時、５’部分を欠いていたので、欠
けているセグメントを単離するために、以下の通り、
５’レースの技術を用いた〔Frohman M.A., et al., Pr
oc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 8, 8998-9002 (198
8)〕。

【００５７】（２）５′−レース法（５’ＲＡＣＥ：5'
rapid amplification of cDNA ends） 本発明遺伝子の５′部分を含むｃＤＮＡクローンの単離
・解析を、製品使用プロトコールを一部修飾し、市販キ
ット（5'-Rapid AmpliFinder RACE Kit, クローンテッ
ク社製）を用いた５′レース法により、以下の通り実施
した。

【００５８】即ち、ヒト胎盤poly（Ａ）＋ＲＮＡの０．
１μｇを、逆転写酵素（Superscript TMII RNase H Rev
erse Transcriptase, Life Technologies社）を用いた
ランダムヘキサマー（ランダムプライマーｐ（ｄＮ）
６：ファルマシア社製）により逆転写してｃＤＮＡを
得、これを下記表１に示す塩基配列の遺伝子特異的プラ
イマーＰ０５、プライマーＰ０６及び市販のキットに付
属のアンカープライマーを用いたＰＣＲにより増幅させ
た。

【００５９】

【表１】

【００６０】尚、 ここで用いたＰ０５及びＰ０６プラ
イマーは、常法に従い合成されたものであり、上記ＰＣ
Ｒの反応条件は、９４℃３０秒、６８℃２分のサイクル
を３５サイクル行ない、７２℃で５分間反応させるもの
とした。

【００６１】その後、第１のＰＣＲ反応物を遺伝子特異
的ネスティッドＰ０６プライマーとアンカー・プライマ
ーを用いる第２のＰＣＲ反応において、９４℃３０秒、
６８℃２分のサイクルを３５サイクル行ない、７２℃で
５分間反応させ、増幅させた。

【００６２】第２ＰＣＲ産物は１．５％アガロース・ゲ
ル電気泳動により分析した。アガロース・ゲル電気泳動
により、単一のバンドを検出し、このバンドの産物をベ
クター（ｐＴ７Ｂｌｕｅ（Ｒ）Ｔ−Ｖｅｃｔｏｒ，ノバ
ゲン（Novagen）社）に挿入し、適当なサイズの挿入が
みられる複数のクローンを選別した。

【００６３】ＰＣＲ反応物から得られ１．４ｋｂの５’
レース産物とオリジナルのＧＥＮ−５７０Ｅ１１ｃＤＮ
Ａクローンのヌクレオチド配列を決定した。更に、この
配列がキメラでないことの確認及び別のタイプのスプラ
イシング産物を得ることを目的として、この配列の両端
に下記表２に示すＰＣＲプライマーＤ０４及びＤ０５を
設定し、ヒト胎盤ｃＤＮＡを鋳型としてＲＴ−ＰＣＲを
行ない、同じ遺伝子に由来すると考えられる２つのタイ
プのｃＤＮＡクローンＧＥＮ−５７０Ｅ１１ＦとＧＥＮ
−５７０Ｅ１１ＦＳを得た。

【００６４】

【表２】

【００６５】（３）ＲＴ−ＰＣＲ ＲＴ−ＰＣＲは、通常の方法に従い、ヒト胎児脳Ｐoly
（Ａ）＋ＲＮＡの０．１μｇを逆転写酵素（Superscrip
t TMII RNase H Reverse Transcriptase,LifeTechnolog
ies社）を用いたオリゴｄＴプライマーにより逆転写し
てｃＤＮＡを得、これを表２に示す塩基配列の遺伝子特
異的プライマーＤ０４及びＤ０５プライマー用いたＰＣ
Ｒにより増幅させた。

【００６６】尚、 ここで用いたＤ０４及びＤ０５プラ
イマーは常法に従い合成されたものであり、上記ＰＣＲ
の反応条件は、９４℃３０秒、５５℃３０秒、７２℃２
分のサイクルを３５サイクル行ない、７２℃で５分間反
応させるものとした。

【００６７】かくして、得られたＧＥＮ−５７０Ｅ１１
Ｆ遺伝子は、配列番号：３に示す１４９１塩基の核酸配
列からなる全長配列を有していた。また該遺伝子は、配
列番号：２に示す１４０１塩基のオープン・リーディン
グ・フレームを含む核酸配列及び配列番号：１に示す４
６７アミノ酸残基からなる推定アミノ酸配列を有してい
る。

【００６８】上記ＧＥＮ−５７０Ｅ１１Ｆ遺伝子の４８
５塩基から５６５塩基まで（即ち、アミノ酸では１４４
残基から１７０残基まで）が欠失した別のタイプのスプ
ライシング産物を、ＧＥＮ−５７０Ｅ１１ＦＳとする。

【００６９】このＧＥＮ−５７０Ｅ１１ＦＳ遺伝子は、
配列番号：６に示す１３８０塩基の核酸配列からなる全
長配列を有していた。また該遺伝子は、配列番号：５に
示す１２９０塩基のオープン・リーディング・フレーム
を含む核酸配列及び配列番号：４に示す４３０アミノ酸
残基からなる推定アミノ酸配列を有していた。

【００７０】ＦＡＳＴＡプログラムを用いた配列比較に
より、本発明遺伝子５７０Ｅ１１Ｆによってコードされ
た推定アミノ酸配列は、ヒトＳａｍｄ／ＭＡＤＲ１アミ
ノ酸配列と４６５アミノ酸に亘って８１％の一致率を示
し、その他のＭａｄファミリー遺伝子とも４０−７０％
程度の一致率を示した。

【００７１】（４）ダイレクト・Ｒ−バンディングＦＩ
ＳＨによるＢＡＣ（bacterial artificial chromosom
e）クローンと染色体の局在 ＦＩＳＨ分析用のプローブを調製するために、ＧＥＮ−
５７０Ｅ１１Ｆ／ＦＳ遺伝子に相当する配列を含むＢＡ
Ｃクローンを単離した。

【００７２】下記表３に示す塩基配列のプライマーＣ０
１とＣ０２とを合成し、該プライマーでＰＣＲによって
全体で１５３６００個のコスミド・クローンのスクリー
ニングを行なった。反応条件として９４℃３０秒、５５
℃４５秒、７２℃４５秒のサイクルを３５サイクル行な
った。

【００７３】

【表３】

【００７４】かくして単離されたひとつのＢＡＣクロー
ンを、複製プロメタフェーズＲ−バンドと組合わせたＦ
ＩＳＨに基づく技術であるダイレクトＲ−バィンディン
グ・フルオレッセン・インサイチュー・ハイブリダイゼ
ーション（ＦＩＳＨ）によるマッピングのためのプロー
ブとして使用し〔Takahashi E., et al, Hum. Genet.,
86, 14-16(1990): Takahashi E., et al, Hum. Genet.,
88, 119-121(1991)〕、該ＦＩＳＨ法によって、ＧＥＮ
−５７０Ｅ１１Ｆ／ＦＳの染色体の座位のマッピングを
行なった。

【００７５】尚、これらのクローンに供されている反復
配列によるバックグラウンドの抑制のために、リヒター
〔Lichter P. et al., Proc. Natl. Sci., U.S.A., 87,
6634-6638 (1990)〕によって記載された方法を少し修
飾して、１０倍過剰のヒトＣｏｔ−１ＤＮＡ（ＢＲＬ社
製）を加えた。

【００７６】標識、ハイブリダイゼーション、洗浄、検
出は、通常の方法に従い実施した。プロビア１００フィ
ルム（フジＩＳＯ１００；フジ・フィルム社製）を顕微
鏡写真撮影のために用いた（フィルター・コンビネーシ
ョン、ニコンＢ−２Ａ）。

【００７７】その結果、ＧＥＮ−５７０Ｅ１１Ｆ／ＦＳ
は、染色体バンド１３ｑ１３．２−ｑ１４．１上にマッ
プされた。

【００７８】（５）ラジエイション・ハイブリッドマッ
ピングによる詳細な染色体座位決定 リサーチジェネテイクス社より購入したＧｅｎｅＢｒｉ
ｄｇｅ４を用いてプロトコールに従い検索した。反応条
件、使用したプライマーは全て上記ＢＡＣクローニング
と同一である。

【００７９】その結果、本遺伝子は、ＦＩＳＨ法と同様
に、染色体１３番長腕にある２つのマーカーＷＩ−３３
７４とＤ１３Ｓ７５６との間に存在し、ＷＩ−３３７４
より３．０５ｃＲに位置することが分かった。

【００８０】本例に従い単離解析されたＧＥＮ−５７０
Ｅ１１Ｆ／ＦＳ遺伝子は、 １）Ｍａｄファミリー遺伝子に非常に高い類似性を示す
こと、 ２）肝癌、乳癌及び前立腺癌で高頻度に欠失が見られ癌
抑制遺伝子が存在すると考えられている１３ｑ〔Kuroki
et al., Br.J.Cancer, 72, 383-385, (1995)〕に存在
することより、同様に癌抑制遺伝子として機能している
可能性がある。

【００８１】従って、ＧＥＮ−５７０Ｅ１１Ｆ／ＦＳ
は、癌の悪性度浸潤度等の指標となるとともに、この遺
伝子の機能を補うことにより、癌の進展を阻止できる可
能性を提供する。

【００８２】またＭＡＤＲ１／Ｓｍａｄは、ＴＧＦ−β
ファミリーの中でもＢＭＰ−２、ＢＭＰ−４のシグナル
を選択的に伝達し、同じファミリーに属するＴＧＦ−
β、アクチビン（activin）等のシグナルは伝達しない
ことより〔Liu et al., Nature,381, 620-623 (1996)；
Hoodless et al., Cell, 85, 489-500, (1996)〕、之等
多くのＭａｄ遺伝子群は、各々特定のシグナルの伝達に
寄与していると考えられる。

【００８３】上述したようにＭａｄ遺伝子群は、中央部
においてのみ類似性が低く、ＧＥＮ−５７０Ｅ１１Ｆ／
ＦＳは、別々の増殖関連因子のシグナル伝達に関わって
いる可能性もある。

【００８４】本発明によれば、新規なヒトＭａｄ関連遺
伝子（癌抑制遺伝子）が提供され、該遺伝子を用いれ
ば、該遺伝子が癌抑制遺伝子として機能し、癌の制御機
構の解明の研究、該遺伝子の各種組織での発現の検出
や、癌の悪性度浸潤度等の指標となるとともに、この遺
伝子の機能を補うことにより癌の進展を阻止できる可能
性が提供される。

【００８５】

【配列表】

【００８６】配列番号：１ 配列の長さ：４６７ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直線状 配列の種類：蛋白 配列： Met His Ser Thr Thr Pro Ile Ser Ser Leu Phe Ser Phe Thr Ser Pro 1 5 10 15 Ala Val Lys Arg Leu Leu Gly Trp Lys Gln Gly Asp Glu Glu Glu Lys 20 25 30 Trp Ala Glu Lys Ala Val Asp Ser Leu Val Lys Lys Leu Lys Lys Lys 35 40 45 Lys Gly Ala Met Asp Glu Leu Glu Arg Ala Leu Ser Cys Pro Gly Gln 50 55 60 Pro Ser Lys Cys Val Thr Ile Pro Arg Ser Leu Asp Gly Arg Leu Gln 65 70 75 80 Val Ser His Arg Lys Gly Leu Pro His Val Ile Tyr Cys Arg Val Trp 85 90 95 Arg Trp Pro Asp Leu Gln Ser His His Glu Leu Lys Pro Leu Glu Cys 100 105 110 Cys Glu Phe Pro Phe Gly Ser Lys Gln Lys Glu Val Cys Ile Asn Pro 115 120 125 Tyr His Tyr Arg Arg Val Glu Thr Pro Val Leu Pro Pro Val Leu Val 130 135 140 Pro Arg His Ser Glu Tyr Asn Pro Gln Leu Ser Leu Leu Ala Lys Phe 145 150 155 160 Arg Ser Ala Ser Leu His Ser Glu Pro Leu Met Pro His Asn Ala Thr 165 170 175 Tyr Pro Asp Ser Phe Gln Gln Pro Pro Cys Ser Ala Leu Pro Pro Ser 180 185 190 Pro Ser His Ala Phe Ser Gln Ser Pro Cys Thr Ala Ser Tyr Pro His 195 200 205 Ser Pro Gly Ser Pro Ser Glu Pro Glu Ser Pro Tyr Gln His Ser Val 210 215 220 Asp Thr Pro Pro Leu Pro Tyr His Ala Thr Glu Ala Ser Glu Thr Gln 225 230 235 240 Ser Gly Gln Pro Val Asp Ala Thr Ala Asp Arg His Val Val Leu Ser 245 250 255 Ile Pro Asn Gly Asp Phe Arg Pro Val Cys Tyr Glu Glu Pro Gln His 260 265 270 Trp Cys Ser Val Ala Tyr Tyr Glu Leu Asn Asn Arg Val Gly Glu Thr 275 280 285 Phe Gln Ala Ser Ser Arg Ser Val Leu Ile Asp Gly Phe Thr Asp Pro 290 295 300 Ser Asn Asn Arg Asn Arg Phe Cys Leu Gly Leu Leu Ser Asn Val Asn 305 310 315 320 Arg Asn Ser Thr Ile Glu Asn Thr Arg Arg His Ile Gly Lys Gly Val 325 330 335 His Leu Tyr Tyr Val Gly Gly Glu Val Tyr Ala Glu Cys Val Ser Asp 340 345 350 Ser Ser Ile Phe Val Gln Ser Arg Asn Cys Asn Tyr Gln His Gly Phe 355 360 365 His Pro Ala Thr Val Cys Lys Ile Pro Ser Gly Cys Ser Leu Lys Val 370 375 380 Phe Asn Asn Gln Leu Phe Ala Gln Leu Leu Ala Gln Ser Val His His 385 390 395 400 Gly Phe Glu Val Val Tyr Glu Leu Thr Lys Met Cys Thr Ile Arg Met 405 410 415 Ser Phe Val Lys Gly Trp Gly Ala Glu Tyr His Arg Gln Asp Val Thr 420 425 430 Ser Thr Pro Cys Trp Ile Glu Ile His Leu His Gly Pro Leu Gln Trp 435 440 445 Leu Asp Lys Val Leu Thr Gln Met Gly Ser Pro His Asn Pro Ile Ser 450 455 460 Ser Val Ser 465

【００８７】配列番号：２ 配列の長さ：１４０１ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直線状 配列の種類：DNA (cDNA) 配列： ATGCACTCCA CCACCCCCAT CAGCTCCCTC TTCTCCTTCA CCAGCCCCGC AGTGAAGAGA 60 CTGCTAGGCT GGAAGCAAGG AGATGAAGAG GAAAAGTGGG CAGAGAAGGC AGTGGACTCT 120 CTAGTGAAGA AGTTAAAGAA GAAGAAGGGA GCCATGGACG AGCTGGAGAG GGCTCTCAGC 180 TGCCCGGGGC AGCCCAGCAA ATGCGTCACG ATTCCCCGCT CCCTGGACGG GCGGCTGCAG 240 GTGTCCCACC GCAAGGGCCT GCCCCATGTG ATTTACTGTC GCGTGTGGCG CTGGCCGGAT 300 CTGCAGTCCC ACCACGAGCT GAAGCCGCTG GAGTGCTGTG AGTTCCCATT TGGCTCCAAG 360 CAGAAAGAAG TGTGCATTAA CCCTTACCAC TACCGCCGGG TGGAGACTCC AGTACTGCCT 420 CCTGTGCTCG TGCCAAGACA CAGTGAATAT AACCCCCAGC TCAGCCTCCT GGCCAAGTTC 480 CGCAGCGCCT CCCTGCACAG TGAGCCACTC ATGCCACACA ACGCCACCTA TCCTGACTCT 540 TTCCAGCAGC CTCCGTGCTC TGCACTCCCT CCCTCACCCA GCCACGCGTT CTCCCAGTCC 600 CCGTGCACGG CCAGCTACCC TCACTCCCCA GGAAGTCCTT CTGAGCCAGA GAGTCCCTAT 660 CAACACTCAG TTGACACACC ACCCCTGCCT TATCATGCCA CAGAAGCCTC TGAGACCCAG 720 AGTGGCCAAC CTGTAGATGC CACAGCTGAT AGACATGTAG TGCTATCGAT ACCAAATGGA 780 GACTTTCGAC CAGTTTGTTA CGAGGAGCCC CAGCACTGGT GCTCGGTCGC CTACTATGAA 840 CTGAACAACC GAGTTGGGGA GACATTCCAG GCTTCCTCCC GAAGTGTGCT CATAGATGGG 900 TTCACCGACC CTTCAAATAA CAGGAACAGA TTCTGTCTTG GACTTCTTTC TAATGTAAAC 960 AGAAACTCAA CGATAGAAAA TACCAGGAGA CATATAGGAA AGGGTGTGCA CTTGTACTAC 1020 GTCGGGGGAG AGGTGTATGC CGAGTGCGTG AGTGACAGCA GCATCTTTGT GCAGAGCCGG 1080 AACTGCAACT ATCAACACGG CTTCCACCCA GCTACCGTCT GCAAGATCCC CAGCGGCTGC 1140 AGCCTCAAGG TCTTCAACAA CCAGCTCTTC GCTCAGCTCC TGGCCCAGTC AGTTCACCAC 1200 GGCTTTGAAG TCGTGTATGA ACTGACCAAG ATGTGTACTA TCCGGATGAG TTTTGTTAAG 1260 GGTTGGGGTG CTGAGTATCA TCGCCAGGAT GTCACCAGCA CCCCCTGCTG GATTGAGATT 1320 CATCTTCATG GGCCACTGCA GTGGCTGGAC AAAGTTCTGA CTCAGATGGG CTCTCCACAT 1380 AACCCCATTT CTTCAGTGTC T 1401

【００８８】配列番号：３ 配列の長さ：１４９１ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直線状 配列の種類：DNA (cDNA) 配列の特徴： 特徴を表わす記号：CDS 存在位置：５６．．１４５６ 特徴を決定した方法：Ｅ 配列： TTGCCGTGAA GGGCTGTGCG GTTCCCGTGC GCGCCGGAGC CTGCTGTGGC CTCTT ATG 58 Met 1 CAC TCC ACC ACC CCC ATC AGC TCC CTC TTC TCC TTC ACC AGC CCC GCA 106 His Ser Thr Thr Pro Ile Ser Ser Leu Phe Ser Phe Thr Ser Pro Ala 5 10 15 GTG AAG AGA CTG CTA GGC TGG AAG CAA GGA GAT GAA GAG GAA AAG TGG 154 Val Lys Arg Leu Leu Gly Trp Lys Gln Gly Asp Glu Glu Glu Lys Trp 20 25 30 GCA GAG AAG GCA GTG GAC TCT CTA GTG AAG AAG TTA AAG AAG AAG AAG 202 Ala Glu Lys Ala Val Asp Ser Leu Val Lys Lys Leu Lys Lys Lys Lys 35 40 45 GGA GCC ATG GAC GAG CTG GAG AGG GCT CTC AGC TGC CCG GGG CAG CCC 250 Gly Ala Met Asp Glu Leu Glu Arg Ala Leu Ser Cys Pro Gly Gln Pro 50 55 60 65 AGC AAA TGC GTC ACG ATT CCC CGC TCC CTG GAC GGG CGG CTG CAG GTG 298 Ser Lys Cys Val Thr Ile Pro Arg Ser Leu Asp Gly Arg Leu Gln Val 70 75 80 TCC CAC CGC AAG GGC CTG CCC CAT GTG ATT TAC TGT CGC GTG TGG CGC 346 Ser His Arg Lys Gly Leu Pro His Val Ile Tyr Cys Arg Val Trp Arg 85 90 95 TGG CCG GAT CTG CAG TCC CAC CAC GAG CTG AAG CCG CTG GAG TGC TGT 394 Trp Pro Asp Leu Gln Ser His His Glu Leu Lys Pro Leu Glu Cys Cys 100 105 110 GAG TTC CCA TTT GGC TCC AAG CAG AAA GAA GTG TGC ATT AAC CCT TAC 442 Glu Phe Pro Phe Gly Ser Lys Gln Lys Glu Val Cys Ile Asn Pro Tyr 115 120 125 CAC TAC CGC CGG GTG GAG ACT CCA GTA CTG CCT CCT GTG CTC GTG CCA 490 His Tyr Arg Arg Val Glu Thr Pro Val Leu Pro Pro Val Leu Val Pro 130 135 140 145 AGA CAC AGT GAA TAT AAC CCC CAG CTC AGC CTC CTG GCC AAG TTC CGC 538 Arg His Ser Glu Tyr Asn Pro Gln Leu Ser Leu Leu Ala Lys Phe Arg 150 155 160 AGC GCC TCC CTG CAC AGT GAG CCA CTC ATG CCA CAC AAC GCC ACC TAT 586 Ser Ala Ser Leu His Ser Glu Pro Leu Met Pro His Asn Ala Thr Tyr 165 170 175 CCT GAC TCT TTC CAG CAG CCT CCG TGC TCT GCA CTC CCT CCC TCA CCC 634 Pro Asp Ser Phe Gln Gln Pro Pro Cys Ser Ala Leu Pro Pro Ser Pro 180 185 190 AGC CAC GCG TTC TCC CAG TCC CCG TGC ACG GCC AGC TAC CCT CAC TCC 682 Ser His Ala Phe Ser Gln Ser Pro Cys Thr Ala Ser Tyr Pro His Ser 195 200 205 CCA GGA AGT CCT TCT GAG CCA GAG AGT CCC TAT CAA CAC TCA GTT GAC 730 Pro Gly Ser Pro Ser Glu Pro Glu Ser Pro Tyr Gln His Ser Val Asp 210 215 220 225 ACA CCA CCC CTG CCT TAT CAT GCC ACA GAA GCC TCT GAG ACC CAG AGT 778 Thr Pro Pro Leu Pro Tyr His Ala Thr Glu Ala Ser Glu Thr Gln Ser 230 235 240 GGC CAA CCT GTA GAT GCC ACA GCT GAT AGA CAT GTA GTG CTA TCG ATA 826 Gly Gln Pro Val Asp Ala Thr Ala Asp Arg His Val Val Leu Ser Ile 245 250 255 CCA AAT GGA GAC TTT CGA CCA GTT TGT TAC GAG GAG CCC CAG CAC TGG 874 Pro Asn Gly Asp Phe Arg Pro Val Cys Tyr Glu Glu Pro Gln His Trp 260 265 270 TGC TCG GTC GCC TAC TAT GAA CTG AAC AAC CGA GTT GGG GAG ACA TTC 922 Cys Ser Val Ala Tyr Tyr Glu Leu Asn Asn Arg Val Gly Glu Thr Phe 275 280 285 CAG GCT TCC TCC CGA AGT GTG CTC ATA GAT GGG TTC ACC GAC CCT TCA 970 Gln Ala Ser Ser Arg Ser Val Leu Ile Asp Gly Phe Thr Asp Pro Ser 290 295 300 305 AAT AAC AGG AAC AGA TTC TGT CTT GGA CTT CTT TCT AAT GTA AAC AGA 1018 Asn Asn Arg Asn Arg Phe Cys Leu Gly Leu Leu Ser Asn Val Asn Arg 310 315 320 AAC TCA ACG ATA GAA AAT ACC AGG AGA CAT ATA GGA AAG GGT GTG CAC 1066 Asn Ser Thr Ile Glu Asn Thr Arg Arg His Ile Gly Lys Gly Val His 325 330 335 TTG TAC TAC GTC GGG GGA GAG GTG TAT GCC GAG TGC GTG AGT GAC AGC 1114 Leu Tyr Tyr Val Gly Gly Glu Val Tyr Ala Glu Cys Val Ser Asp Ser 340 345 350 AGC ATC TTT GTG CAG AGC CGG AAC TGC AAC TAT CAA CAC GGC TTC CAC 1162 Ser Ile Phe Val Gln Ser Arg Asn Cys Asn Tyr Gln His Gly Phe His 355 360 365 CCA GCT ACC GTC TGC AAG ATC CCC AGC GGC TGC AGC CTC AAG GTC TTC 1210 Pro Ala Thr Val Cys Lys Ile Pro Ser Gly Cys Ser Leu Lys Val Phe 370 375 380 385 AAC AAC CAG CTC TTC GCT CAG CTC CTG GCC CAG TCA GTT CAC CAC GGC 1258 Asn Asn Gln Leu Phe Ala Gln Leu Leu Ala Gln Ser Val His His Gly 390 395 400 TTT GAA GTC GTG TAT GAA CTG ACC AAG ATG TGT ACT ATC CGG ATG AGT 1306 Phe Glu Val Val Tyr Glu Leu Thr Lys Met Cys Thr Ile Arg Met Ser 405 410 415 TTT GTT AAG GGT TGG GGT GCT GAG TAT CAT CGC CAG GAT GTC ACC AGC 1354 Phe Val Lys Gly Trp Gly Ala Glu Tyr His Arg Gln Asp Val Thr Ser 420 425 430 ACC CCC TGC TGG ATT GAG ATT CAT CTT CAT GGG CCA CTG CAG TGG CTG 1402 Thr Pro Cys Trp Ile Glu Ile His Leu His Gly Pro Leu Gln Trp Leu 435 440 445 GAC AAA GTT CTG ACT CAG ATG GGC TCT CCA CAT AAC CCC ATT TCT TCA 1450 Asp Lys Val Leu Thr Gln Met Gly Ser Pro His Asn Pro Ile Ser Ser 450 455 460 465 GTG TCT TAACAGTCAT GTCTTAAGCT GCATTTCCAT AGGAT 1491 Val Ser

【００８９】配列番号：４ 配列の長さ：４３０ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直線状 配列の種類：蛋白 配列： Met His Ser Thr Thr Pro Ile Ser Ser Leu Phe Ser Phe Thr Ser Pro 1 5 10 15 Ala Val Lys Arg Leu Leu Gly Trp Lys Gln Gly Asp Glu Glu Glu Lys 20 25 30 Trp Ala Glu Lys Ala Val Asp Ser Leu Val Lys Lys Leu Lys Lys Lys 35 40 45 Lys Gly Ala Met Asp Glu Leu Glu Arg Ala Leu Ser Cys Pro Gly Gln 50 55 60 Pro Ser Lys Cys Val Thr Ile Pro Arg Ser Leu Asp Gly Arg Leu Gln 65 70 75 80 Val Ser His Arg Lys Gly Leu Pro His Val Ile Tyr Cys Arg Val Trp 85 90 95 Arg Trp Pro Asp Leu Gln Ser His His Glu Leu Lys Pro Leu Glu Cys 100 105 110 Cys Glu Phe Pro Phe Gly Ser Lys Gln Lys Glu Val Cys Ile Asn Pro 115 120 125 Tyr His Tyr Arg Arg Val Glu Thr Pro Val Leu Pro Pro Val Leu Val 130 135 140 Pro Arg His Ser Glu Tyr Asn Pro Gln Leu Ser Leu Leu Ala Lys Phe 145 150 155 160 Arg Ser Ala Ser Leu His Ser Glu Pro Leu Met Pro His Asn Ala Thr 165 170 175 Tyr Pro Asp Ser Phe Gln Gln Pro Pro Cys Ser Ala Leu Pro Pro Ser 180 185 190 Pro Ser His Ala Phe Ser Gln Ser Pro Cys Thr Ala Ser Tyr Pro His 195 200 205 Ser Pro Gly Ser Pro Ser Glu Pro Glu Ser Pro Tyr Gln His Ser Asp 210 215 220 Phe Arg Pro Val Cys Tyr Glu Glu Pro Gln His Trp Cys Ser Val Ala 225 230 235 240 Tyr Tyr Glu Leu Asn Asn Arg Val Gly Glu Thr Phe Gln Ala Ser Ser 245 250 255 Arg Ser Val Leu Ile Asp Gly Phe Thr Asp Pro Ser Asn Asn Arg Asn 260 265 270 Arg Phe Cys Leu Gly Leu Leu Ser Asn Val Asn Arg Asn Ser Thr Ile 275 280 285 Glu Asn Thr Arg Arg His Ile Gly Lys Gly Val His Leu Tyr Tyr Val 290 295 300 Gly Gly Glu Val Tyr Ala Glu Cys Val Ser Asp Ser Ser Ile Phe Val 305 310 315 320 Gln Ser Arg Asn Cys Asn Tyr Gln His Gly Phe His Pro Ala Thr Val 325 330 335 Cys Lys Ile Pro Ser Gly Cys Ser Leu Lys Val Phe Asn Asn Gln Leu 340 345 350 Phe Ala Gln Leu Leu Ala Gln Ser Val His His Gly Phe Glu Val Val 355 360 365 Tyr Glu Leu Thr Lys Met Cys Thr Ile Arg Met Ser Phe Val Lys Gly 370 375 380 Trp Gly Ala Glu Tyr His Arg Gln Asp Val Thr Ser Thr Pro Cys Trp 385 390 395 400 Ile Glu Ile His Leu His Gly Pro Leu Gln Trp Leu Asp Lys Val Leu 405 410 415 Thr Gln Met Gly Ser Pro His Asn Pro Ile Ser Ser Val Ser 420 425 430

【００９０】配列番号：５ 配列の長さ：１２９０ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直線状 配列の種類：DNA (cDNA) 配列： ATGCACTCCA CCACCCCCAT CAGCTCCCTC TTCTCCTTCA CCAGCCCCGC AGTGAAGAGA 60 CTGCTAGGCT GGAAGCAAGG AGATGAAGAG GAAAAGTGGG CAGAGAAGGC AGTGGACTCT 120 CTAGTGAAGA AGTTAAAGAA GAAGAAGGGA GCCATGGACG AGCTGGAGAG GGCTCTCAGC 180 TGCCCGGGGC AGCCCAGCAA ATGCGTCACG ATTCCCCGCT CCCTGGACGG GCGGCTGCAG 240 GTGTCCCACC GCAAGGGCCT GCCCCATGTG ATTTACTGTC GCGTGTGGCG CTGGCCGGAT 300 CTGCAGTCCC ACCACGAGCT GAAGCCGCTG GAGTGCTGTG AGTTCCCATT TGGCTCCAAG 360 CAGAAAGAAG TGTGCATTAA CCCTTACCAC TACCGCCGGG TGGAGACTCC AGTACTGCCT 420 CCTGTGCTCG TGCCAAGACA CAGTGAATAT AACCCCCAGC TCAGCCTCCT GGCCAAGTTC 480 CGCAGCGCCT CCCTGCACAG TGAGCCACTC ATGCCACACA ACGCCACCTA TCCTGACTCT 540 TTCCAGCAGC CTCCGTGCTC TGCACTCCCT CCCTCACCCA GCCACGCGTT CTCCCAGTCC 600 CCGTGCACGG CCAGCTACCC TCACTCCCCA GGAAGTCCTT CTGAGCCAGA GAGTCCCTAT 660 CAACACTCAG ACTTTCGACC AGTTTGTTAC GAGGAGCCCC AGCACTGGTG CTCGGTCGCC 720 TACTATGAAC TGAACAACCG AGTTGGGGAG ACATTCCAGG CTTCCTCCCG AAGTGTGCTC 780 ATAGATGGGT TCACCGACCC TTCAAATAAC AGGAACAGAT TCTGTCTTGG ACTTCTTTCT 840 AATGTAAACA GAAACTCAAC GATAGAAAAT ACCAGGAGAC ATATAGGAAA GGGTGTGCAC 900 TTGTACTACG TCGGGGGAGA GGTGTATGCC GAGTGCGTGA GTGACAGCAG CATCTTTGTG 960 CAGAGCCGGA ACTGCAACTA TCAACACGGC TTCCACCCAG CTACCGTCTG CAAGATCCCC 1020 AGCGGCTGCA GCCTCAAGGT CTTCAACAAC CAGCTCTTCG CTCAGCTCCT GGCCCAGTCA 1080 GTTCACCACG GCTTTGAAGT CGTGTATGAA CTGACCAAGA TGTGTACTAT CCGGATGAGT 1140 TTTGTTAAGG GTTGGGGTGC TGAGTATCAT CGCCAGGATG TCACCAGCAC CCCCTGCTGG 1200 ATTGAGATTC ATCTTCATGG GCCACTGCAG TGGCTGGACA AAGTTCTGAC TCAGATGGGC 1260 TCTCCACATA ACCCCATTTC TTCAGTGTCT 1290

【００９１】配列番号：６ 配列の長さ：１３８０ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直線状 配列の種類：DNA (cDNA) 配列の特徴： 特徴を表わす記号：CDS 存在位置：５６．．１３４５ 特徴を決定した方法：Ｅ 配列： ＴＴＧＣＣＧＴＧＡＡ ＧＧＧＣＴＧＴＧＣＧ ＧＴＴＣＣＣＧＴＧＣ ＧＣＧ
ＣＣＧＧＡＧＣ ＣＴＧＣＴＧＴＧＧＣ ＣＴＣＴＴ ＡＴＧ ５８
Ｍｅｔ
１ ＣＡＣ ＴＣＣ ＡＣＣ ＡＣＣ ＣＣＣ ＡＴＣ ＡＧＣ ＴＣＣ ＣＴＣ
ＴＴＣ ＴＣＣ ＴＴＣ ＡＣＣ ＡＧＣ ＣＣＣ ＧＣＡ １０６ Ｈｉｓ Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｐｒｏ Ｉｌｅ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｌｅｕ
Ｐｈｅ Ｓｅｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ａｌａ ５ １０
１５ ＧＴＧ ＡＡＧ ＡＧＡ ＣＴＧ ＣＴＡ ＧＧＣ ＴＧＧ ＡＡＧ ＣＡＡ
ＧＧＡ ＧＡＴ ＧＡＡ ＧＡＧ ＧＡＡ ＡＡＧ ＴＧＧ １５４ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｔｒｐ Ｌｙｓ Ｇｌｎ
Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ｔｒｐ ２０ ２５
３０ ＧＣＡ ＧＡＧ ＡＡＧ ＧＣＡ ＧＴＧ ＧＡＣ ＴＣＴ ＣＴＡ ＧＴＧ
ＡＡＧ ＡＡＧ ＴＴＡ ＡＡＧ ＡＡＧ ＡＡＧ ＡＡＧ ２０２ Ａｌａ Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｖａｌ
Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｌｙｓ ３５ ４０
４５ ＧＧＡ ＧＣＣ ＡＴＧ ＧＡＣ ＧＡＧ ＣＴＧ ＧＡＧ ＡＧＧ ＧＣＴ
ＣＴＣ ＡＧＣ ＴＧＣ ＣＣＧ ＧＧＧ ＣＡＧ ＣＣＣ ２５０ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｍｅｔ Ａｓｐ Ｇｌｕ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ａｒｇ Ａｌａ
Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｃｙｓ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｇｌｎ Ｐｒｏ ５０ ５５
６０ ６５ ＡＧＣ ＡＡＡ ＴＧＣ ＧＴＣ ＡＣＧ ＡＴＴ ＣＣＣ ＣＧＣ ＴＣＣ
ＣＴＧ ＧＡＣ ＧＧＧ ＣＧＧ ＣＴＧ ＣＡＧ ＧＴＧ ２９８ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｃｙｓ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｉｌｅ Ｐｒｏ Ａｒｇ Ｓｅｒ
Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ｖａｌ ７０
７５ ８０ ＴＣＣ ＣＡＣ ＣＧＣ ＡＡＧ ＧＧＣ ＣＴＧ ＣＣＣ ＣＡＴ ＧＴＧ
ＡＴＴ ＴＡＣ ＴＧＴ ＣＧＣ ＧＴＧ ＴＧＧ ＣＧＣ ３４６ Ｓｅｒ Ｈｉｓ Ａｒｇ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ｈｉｓ Ｖａｌ
Ｉｌｅ Ｔｙｒ Ｃｙｓ Ａｒｇ Ｖａｌ Ｔｒｐ Ａｒｇ ８５ ９０
９５ ＴＧＧ ＣＣＧ ＧＡＴ ＣＴＧ ＣＡＧ ＴＣＣ ＣＡＣ ＣＡＣ ＧＡＧ
ＣＴＧ ＡＡＧ ＣＣＧ ＣＴＧ ＧＡＧ ＴＧＣ ＴＧＴ ３９４ Ｔｒｐ Ｐｒｏ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ｓｅｒ Ｈｉｓ Ｈｉｓ Ｇｌｕ
Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｐｒｏ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｃｙｓ Ｃｙｓ １００ １０５
１１０ ＧＡＧ ＴＴＣ ＣＣＡ ＴＴＴ ＧＧＣ ＴＣＣ ＡＡＧ ＣＡＧ ＡＡＡ
ＧＡＡ ＧＴＧ ＴＧＣ ＡＴＴ ＡＡＣ ＣＣＴ ＴＡＣ ４４２ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｐｒｏ Ｐｈｅ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｙｓ
Ｇｌｕ Ｖａｌ Ｃｙｓ Ｉｌｅ Ａｓｎ Ｐｒｏ Ｔｙｒ １１５ １２０
１２５ ＣＡＣ ＴＡＣ ＣＧＣ ＣＧＧ ＧＴＧ ＧＡＧ ＡＣＴ ＣＣＡ ＧＴＡ
ＣＴＧ ＣＣＴ ＣＣＴ ＧＴＧ ＣＴＣ ＧＴＧ ＣＣＡ ４９０ Ｈｉｓ Ｔｙｒ Ａｒｇ Ａｒｇ Ｖａｌ Ｇｌｕ Ｔｈｒ Ｐｒｏ Ｖａｌ
Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ｐｒｏ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ｖａｌ Ｐｒｏ １３０ １３５
１４０ １４５ ＡＧＡ ＣＡＣ ＡＧＴ ＧＡＡ ＴＡＴ ＡＡＣ ＣＣＣ ＣＡＧ ＣＴＣ
ＡＧＣ ＣＴＣ ＣＴＧ ＧＣＣ ＡＡＧ ＴＴＣ ＣＧＣ ５３８ Ａｒｇ Ｈｉｓ Ｓｅｒ Ｇｌｕ Ｔｙｒ Ａｓｎ Ｐｒｏ Ｇｌｎ Ｌｅｕ
Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｌｙｓ Ｐｈｅ Ａｒｇ １５０
１５５ １６０ ＡＧＣ ＧＣＣ ＴＣＣ ＣＴＧ ＣＡＣ ＡＧＴ ＧＡＧ ＣＣＡ ＣＴＣ
ＡＴＧ ＣＣＡ ＣＡＣ ＡＡＣ ＧＣＣ ＡＣＣ ＴＡＴ ５８６ Ｓｅｒ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｈｉｓ Ｓｅｒ Ｇｌｕ Ｐｒｏ Ｌｅｕ
Ｍｅｔ Ｐｒｏ Ｈｉｓ Ａｓｎ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｔｙｒ １６５ １７０
１７５ ＣＣＴ ＧＡＣ ＴＣＴ ＴＴＣ ＣＡＧ ＣＡＧ ＣＣＴ ＣＣＧ ＴＧＣ
ＴＣＴ ＧＣＡ ＣＴＣ ＣＣＴ ＣＣＣ ＴＣＡ ＣＣＣ ６３４ Ｐｒｏ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｐｈｅ Ｇｌｎ Ｇｌｎ Ｐｒｏ Ｐｒｏ Ｃｙｓ
Ｓｅｒ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｐｒｏ １８０ １８５
１９０ ＡＧＣ ＣＡＣ ＧＣＧ ＴＴＣ ＴＣＣ ＣＡＧ ＴＣＣ ＣＣＧ ＴＧＣ
ＡＣＧ ＧＣＣ ＡＧＣ ＴＡＣ ＣＣＴ ＣＡＣ ＴＣＣ ６８２ Ｓｅｒ Ｈｉｓ Ａｌａ Ｐｈｅ Ｓｅｒ Ｇｌｎ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ｃｙｓ
Ｔｈｒ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｔｙｒ Ｐｒｏ Ｈｉｓ Ｓｅｒ １９５ ２００
２０５ ＣＣＡ ＧＧＡ ＡＧＴ ＣＣＴ ＴＣＴ ＧＡＧ ＣＣＡ ＧＡＧ ＡＧＴ
ＣＣＣ ＴＡＴ ＣＡＡ ＣＡＣ ＴＣＡ ＧＡＣ ＴＴＴ ７３０ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｇｌｕ Ｐｒｏ Ｇｌｕ Ｓｅｒ
Ｐｒｏ Ｔｙｒ Ｇｌｎ Ｈｉｓ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｐｈｅ ２１０ ２１５
２２０ ２２５ ＣＧＡ ＣＣＡ ＧＴＴ ＴＧＴ ＴＡＣ ＧＡＧ ＧＡＧ ＣＣＣ ＣＡＧ
ＣＡＣ ＴＧＧ ＴＧＣ ＴＣＧ ＧＴＣ ＧＣＣ ＴＡＣ ７７８ Ａｒｇ Ｐｒｏ Ｖａｌ Ｃｙｓ Ｔｙｒ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｐｒｏ Ｇｌｎ
Ｈｉｓ Ｔｒｐ Ｃｙｓ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ａｌａ Ｔｙｒ ２３０
２３５ ２４０ ＴＡＴ ＧＡＡ ＣＴＧ ＡＡＣ ＡＡＣ ＣＧＡ ＧＴＴ ＧＧＧ ＧＡＧ
ＡＣＡ ＴＴＣ ＣＡＧ ＧＣＴ ＴＣＣ ＴＣＣ ＣＧＡ ８２６ Ｔｙｒ Ｇｌｕ Ｌｅｕ Ａｓｎ Ａｓｎ Ａｒｇ Ｖａｌ Ｇｌｙ Ｇｌｕ
Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｇｌｎ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ａｒｇ ２４５ ２５０
２５５ ＡＧＴ ＧＴＧ ＣＴＣ ＡＴＡ ＧＡＴ ＧＧＧ ＴＴＣ ＡＣＣ ＧＡＣ
ＣＣＴ ＴＣＡ ＡＡＴ ＡＡＣ ＡＧＧ ＡＡＣ ＡＧＡ ８７４ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ｉｌｅ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ａｓｐ
Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ａｓｎ Ａｓｎ Ａｒｇ Ａｓｎ Ａｒｇ ２６０ ２６５
２７０ ＴＴＣ ＴＧＴ ＣＴＴ ＧＧＡ ＣＴＴ ＣＴＴ ＴＣＴ ＡＡＴ ＧＴＡ
ＡＡＣ ＡＧＡ ＡＡＣ ＴＣＡ ＡＣＧ ＡＴＡ ＧＡＡ ９２２ Ｐｈｅ Ｃｙｓ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ａｓｎ Ｖａｌ
Ａｓｎ Ａｒｇ Ａｓｎ Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ｉｌｅ Ｇｌｕ ２７５ ２８０
２８５ ＡＡＴ ＡＣＣ ＡＧＧ ＡＧＡ ＣＡＴ ＡＴＡ ＧＧＡ ＡＡＧ ＧＧＴ
ＧＴＧ ＣＡＣ ＴＴＧ ＴＡＣ ＴＡＣ ＧＴＣ ＧＧＧ ９７０ Ａｓｎ Ｔｈｒ Ａｒｇ Ａｒｇ Ｈｉｓ Ｉｌｅ Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ｇｌｙ
Ｖａｌ Ｈｉｓ Ｌｅｕ Ｔｙｒ Ｔｙｒ Ｖａｌ Ｇｌｙ ２９０ ２９５
３００ ３０５ ＧＧＡ ＧＡＧ ＧＴＧ ＴＡＴ ＧＣＣ ＧＡＧ ＴＧＣ ＧＴＧ ＡＧＴ
ＧＡＣ ＡＧＣ ＡＧＣ ＡＴＣ ＴＴＴ ＧＴＧ ＣＡＧ １０１８ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｖａｌ Ｔｙｒ Ａｌａ Ｇｌｕ Ｃｙｓ Ｖａｌ Ｓｅｒ
Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｉｌｅ Ｐｈｅ Ｖａｌ Ｇｌｎ ３１０
３１５ ３２０ ＡＧＣ ＣＧＧ ＡＡＣ ＴＧＣ ＡＡＣ ＴＡＴ ＣＡＡ ＣＡＣ ＧＧＣ
ＴＴＣ ＣＡＣ ＣＣＡ ＧＣＴ ＡＣＣ ＧＴＣ ＴＧＣ １０６６ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ａｓｎ Ｃｙｓ Ａｓｎ Ｔｙｒ Ｇｌｎ Ｈｉｓ Ｇｌｙ
Ｐｈｅ Ｈｉｓ Ｐｒｏ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｖａｌ Ｃｙｓ ３２５ ３３０
３３５ ＡＡＧ ＡＴＣ ＣＣＣ ＡＧＣ ＧＧＣ ＴＧＣ ＡＧＣ ＣＴＣ ＡＡＧ
ＧＴＣ ＴＴＣ ＡＡＣ ＡＡＣ ＣＡＧ ＣＴＣ ＴＴＣ １１１４ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｌｙｓ
Ｖａｌ Ｐｈｅ Ａｓｎ Ａｓｎ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｐｈｅ ３４０ ３４５
３５０ ＧＣＴ ＣＡＧ ＣＴＣ ＣＴＧ ＧＣＣ ＣＡＧ ＴＣＡ ＧＴＴ ＣＡＣ
ＣＡＣ ＧＧＣ ＴＴＴ ＧＡＡ ＧＴＣ ＧＴＧ ＴＡＴ １１６２ Ａｌａ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｇｌｎ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ｈｉｓ
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｐｈｅ Ｇｌｕ Ｖａｌ Ｖａｌ Ｔｙｒ ３５５ ３６０
３６５ ＧＡＡ ＣＴＧ ＡＣＣ ＡＡＧ ＡＴＧ ＴＧＴ ＡＣＴ ＡＴＣ ＣＧＧ
ＡＴＧ ＡＧＴ ＴＴＴ ＧＴＴ ＡＡＧ ＧＧＴ ＴＧＧ １２１０ Ｇｌｕ Ｌｅｕ Ｔｈｒ Ｌｙｓ Ｍｅｔ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｉｌｅ Ａｒｇ
Ｍｅｔ Ｓｅｒ Ｐｈｅ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ｔｒｐ ３７０ ３７５
３８０ ３８５ ＧＧＴ ＧＣＴ ＧＡＧ ＴＡＴ ＣＡＴ ＣＧＣ ＣＡＧ ＧＡＴ ＧＴＣ
ＡＣＣ ＡＧＣ ＡＣＣ ＣＣＣ ＴＧＣ ＴＧＧ ＡＴＴ １２５８ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｇｌｕ Ｔｙｒ Ｈｉｓ Ａｒｇ Ｇｌｎ Ａｓｐ Ｖａｌ
Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ｐｒｏ Ｃｙｓ Ｔｒｐ Ｉｌｅ ３９０
３９５ ４００ ＧＡＧ ＡＴＴ ＣＡＴ ＣＴＴ ＣＡＴ ＧＧＧ ＣＣＡ ＣＴＧ ＣＡＧ
ＴＧＧ ＣＴＧ ＧＡＣ ＡＡＡ ＧＴＴ ＣＴＧ ＡＣＴ １３０６ Ｇｌｕ Ｉｌｅ Ｈｉｓ Ｌｅｕ Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｌｅｕ Ｇｌｎ
Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｌｙｓ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ｔｈｒ ４０５ ４１０
４１５ ＣＡＧ ＡＴＧ ＧＧＣ ＴＣＴ ＣＣＡ ＣＡＴ ＡＡＣ ＣＣＣ ＡＴＴ
ＴＣＴ ＴＣＡ ＧＴＧ ＴＣＴ ＴＡＡＣＡＧＴＣＡＴ １３５５ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ｈｉｓ Ａｓｎ Ｐｒｏ Ｉｌｅ
Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ｓｅｒ ４２０ ４２５
４３０ ＧＴＣＴＴＡＡＧＣＴ ＧＣＡＴＴＴＣＣＡＴ ＡＧＧＡＴ
１３８０

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＤＵ

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】配列番号：１で示されるアミノ酸配列をコ
   ードする塩基配列を含むことを特徴とするヒトＭａｄ関
   連蛋白遺伝子。
2. 【請求項２】配列番号：２で示される塩基配列を含むこ
   とを特徴とするヒトＭａｄ関連蛋白遺伝子。
3. 【請求項３】配列番号：３で示される塩基配列である請
   求項２に記載のヒトＭａｄ関連蛋白遺伝子。