JP2002502264A

JP2002502264A - サイクリン関連タンパク質

Info

Publication number: JP2002502264A
Application number: JP50298899A
Authority: JP
Inventors: ヒルマン、ジェニファー・エル; コーレイ、ニール・シー; ゲグラー、カーン・ジェイ; コックス、ベンジャミン・グリーム; シャー、パルビ
Original assignee: Incyte Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Incyte Corp
Priority date: 1997-06-05
Filing date: 1998-06-05
Publication date: 2002-01-22
Also published as: WO1998055510A2; EP1003880A2; CA2292643A1; AU7954998A; WO1998055510A3

Abstract

(57)【要約】本発明は、ヒトサイクリン関連タンパク質（ＨＣＲＰ）及びＨＣＲＰを同定しコードするポリヌクレオチドを提供する。また本発明は、発現ベクター、宿主細胞、アゴニスト、抗体、及びアンタゴニストを提供する。また本発明は、ＨＣＲＰの発現に関連する疾病の治療方法を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】サイクリン関連タンパク質技術分野本発明は、２種類のサイクリン関連タンパク質の核酸及びアミノ酸配列、及び癌、免疫疾患、及び発達障害の診断、予防、及び治療におけるこれらの配列の利用に関するものである。発明の背景細胞分裂は、全ての生物の成長や生殖がこれによって行われる基礎的なプロセスである。酵母菌や細菌のような単細胞生物では、１回の細胞分裂により生物の数が２倍に増加し、多細胞生物では、新たな組織や器官を作り出したり、摩耗やプログラムされた細胞死によって失われた細胞を新たな細胞に置き換えるために多数回の細胞分裂が必要である。細胞分裂周期は、詳細な点では様々に異なっていることもあるが、基本的なプロセスは３つの主な事象からなる。第１の事象である静止期では、細胞分裂の準備が行われ、ＤＮＡが複製され、必須タンパク質が生成される。第２の事象である有糸分裂では、核の物質が分かれて、細胞の両側に集まる。最後の事象である細胞質分裂では、細胞質が分割し分裂する。これらの細胞周期事象の順番及びタイミングは、種々のチェックポイントにおいてこのプロセスを調節する細胞周期制御系の制御の下にある。過去２０年間に渡って、これらの事象を調節する様々なタンパク質の構造や機能について多くの研究がなされてきた。細胞が有糸分裂期に入ったりそれを脱したりすることは、サイクリンと称する活性化タンパク質のファミリーの合成と破壊により調節される。サイクリンは、サイクリン依存性タンパク質キナーゼの群に結合し、それを活性化することによって作用する。このサイクリン依存性プロテインキナーゼは、有糸分裂プロセスに関与する選択されたタンパク質をリン酸化し、活性化する。サイクリンには様々なタイプが存在する（Ciechanover, A.(1994)Cell 79:13-2）。主要な２つのタイプは、細胞が有糸分裂期に入ることを調節する有糸分裂サイクリンであるサイクリンＢと、細胞が有糸分裂期から脱するのを誘導する事象を調節するＧ１サイクリンである。サイクリンは、「サイクリンボックス」と称する約１８０アミノ酸からなる長さの大きな共通の相同領域をその特徴とする（Chapman,D.L．及びWolgemuth,D.J.(1993)Development I18 :229-40）。更にサイクリンは、「破壊ボックス(destruction box)」と呼ばれる分子のＮ末端領域におけるアミノ酸配列を含む（Hunt,T.(1991)Nature 349:100- 101）。この配列は、RXXLXXIXNなる保存的モチーフを有し、サイクリンＢのユビキチン依存性分解を生じさせる認識コードであると考えられている（後述の説明を参照）。サイクリンの分解はユビキチン結合系（ＵＣＳ）を介してなされる。このＵＣＳは、真核細胞及び幾つかの細菌における細胞のタンパク質の分解のための主要な経路である。ＵＣＳは、異常なタンパク質の除去を媒介したり、遺伝子の転写や細胞周期の進行のような細胞プロセスを調節する重要な調節性タンパク質の半減期を調節する。ＵＣＳは、有糸分裂サイクリンキナーゼ（mitotic cyclic kin ase）、腫瘍性タンパク質、ｐ５３のような癌抑制遺伝子、ウイルスタンパク質、シグナル伝達に関連する細胞表面受容体、転写制御因子、及び変異した或いは損傷を受けたタンパク質の分解に関与する（Ciechanover，前出）。ユビキチン結合及びタンパク分解のプロセスは、４つの主要なステップで生ずる（Jentsch,S.(1992)Annu.Rev.Genet.26:179-207）。第１ステップは、小型の熱安定性タンパク質（７６アミノ酸）であるユビキチン（Ｕｂ）が、ＡＴＰ依存性反応におけるユビキチン活性化酵素（Ｅ１）によって活性化される。このＡＴＰ依存性反応では、ＵｂのＣ末端が、Ｅ１の内部のシステイン残基のチオール基に結合する。第２ステップでは、活性化されたＵｂが、幾つかのＵｂ結合酵素（Ｅ２）の１つに移送される。異なるユビキチン依存性タンパク分解経路は、構造的に類似しているが異なるユビキチン結合酵素を利用する。このユビキチン結合酵素は、認識サブユニットに結合し、それを特定の分解シグナルを有するタンパク質に誘導する。次にＥ２がＵｂ分子を、そのＣ末端グリシンを介して標的タンパク質の内部のリジン（アクセプタリジン）に結合する。別のＵｂ分子が加わって多Ｕｂ鎖構造を形成することもある。次にユビキチンが結合したタンパク質を、大型の多サブユニットタンパク分解酵素複合体であるプロテアーゼが認識し、分解して、Ｕｂは再利用のために放出される。Ｅ２（Ｕｂ結合）酵素は、異なるＵＣＳ経路における基質特異性に関して重要な酵素である。全てのＥ２は、ＵＢＣドメインと称する約１６ｋＤａの保存的ドメインを有し、このＵＢＣドメインは、全てのＥ２の間で３５％以上の配列同一性を有し、ユビキチンー酵素チオールエステル形成のために必要な中央に位置するシステイン残基を有する（Jentsch，前出）。良く保存されたプロリンを多く含むエレメントが活性システイン残基のＮ末端に位置している。この保存的ドメインの先の構造的な相違を、Ｅ２酵素の分類のために使用する。クラスＩのＥ２は、概ね保存的ＵＢＣドメインのみからなる。クラスＩＩのＥ２は、基質特異性や細胞局在化の原因となる様々な近縁でないＣ末端延長部を有している。クラスＩＩＩのＥ２は、酵素の調節や基質特異性に関与すると考えられる独特のＮ末端延長部を有している。最近になって、有糸分裂サイクリンに対して選択的な新規なタイプのＥ２が発見された（Aris tarkhov,A.et al.(1996)Proc.Natl.Acad.Sci.93:4294-99）。サイクリン特異的Ｅ２、つまりＥ２−Ｃは、保存的ＵＢＣドメインと、他のＥ２では見られない３０アミノ酸からなるＮ末端延長部と、この延長部に隣接する独特の配列TLLMSGDをその特徴とする。これらの特徴は、Ｅ２−Ｃのサイクリンに対する高い親和性と相俟って、このＥ２が新たなクラスのＥ２であることを示している。新規なサイクリン関連タンパク質及びそれをコードするポリヌクレオチドの発見により、癌、免疫疾患、及び発達障害の診断、予防及び治療において役立つ新たな物質が提供されて当分野における必要性が満たされることになる。発明の要約本発明は、配列番号：１に示すアミノ酸配列を有する実質的に精製されたポリペプチド、即ちサイクリン関連タンパク質ＨＣＲＰ−１、またはその断片を提供する。更に本発明は、配列番号：１のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする単離され実質的に精製されたポリヌクレオチド配列又はその断片及び前記ポリヌクレオチド配列を含む組成物を提供する。また本発明は、配列番号：１のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド配列と厳密な条件の下でハイブリダイズするポリヌクレオチド配列、又は前記ポリヌクレオチド配列の断片を提供する。更に本発明は、配列番号：１のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド配列の相補配列を含むポリヌクレオチド配列、又は前記ポリヌクレオチド配列の断片若しくは変異配列を提供する。また本発明は、配列番号：２の配列を含む単離され精製された配列又はその変異配列を提供する。更に本発明は、配列番号：２のポリヌクレオチド配列に厳密な条件の下でハイブリダイズするポリヌクレオチド配列を提供する。別の実施態様では、本発明は、配列番号：２の相補配列を含む単離され精製されたポリヌクレオチド配列又はその断片若しくは変異配列を含む組成物を提供する。また本発明は、配列番号：２の相補配列を含むポリヌクレオチド配列を提供する。更に本発明は、開示されたポリヌクレオチド配列の何れかの少なくとも断片を含む発現ベクターを提供する。別の実施態様では、該ポリヌクレオチド配列を含む発現ベクターは宿主細胞に含められる。また本発明は、配列番号：１のアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその断片を製造する方法であって、（ａ）前記ポリペプチドの発現に適した条件の下で、ＨＣＲＰ−１をコードするポリヌクレオチドの少なくとも断片を含む発現ベクターを含む宿主細胞を培養する過程と、（ｂ）前記宿主細胞の培地から前記ポリペプチドを回収する過程とを含む配列番号：１のアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその断片を製造する方法を提供する。また本発明は、配列番号：１のアミノ酸配列を有する実質的に精製されたＨＣＲＰ−１を、適切な医薬用担体と共に含む医薬品組成物を提供する。更に本発明は、配列番号：１のポリペプチドの活性を変調する精製されたアゴニストを提供する。また本発明は、癌の治療又は予防方法であって、そのような治療が必要な患者に、精製されたＨＣＲＰ−１を含む医薬品組成物を有効な量投与する過程を含む癌の治療又は予防方法を提供する。また本発明は、免疫疾患の治療又は予防方法であって、そのような治療が必要な患者に、精製されたＨＣＲＰ−１を含む医薬品組成物を有効な量投与する過程を含む免疫疾患の治療又は予防方法を提供する。また本発明は、生物学的サンプルにおけるＨＣＲＰ−１をコードするポリヌクレオチドの検出方法であって、（ａ）ＨＣＲＰ−１（配列番号：１）に相補的なポリヌクレオチド配列と、生物学的サンプルの核酸材料とをハイブリダイズさせ、ハイブリダイゼーション複合体を形成する過程と、（ｂ）前記ハイブリダイゼーション複合体を検出する過程であって、前記複合体の存在が、前記生物学的サンプルにおけるＨＣＲＰ−１をコードするポリヌクレオチドの存在と相関性を有する、該過程とを含む生物学的サンプルにおけるＨＣＲＰ−１をコードするポリヌクレオチドの検出方法を提供する。好適な実施例では、ハイブリダイゼーションの前に、前記生物学的サンプルの前記核酸材料を、ＰＣＲ法により増幅する。また本発明は、配列番号：３に示すアミノ酸配列を有する実質的に精製されたポリペプチド、即ちサイクリン関連タンパク質ＨＣＲＰ−２、又はその断片を提供する。更に本発明は、配列番号：３のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする単離され実質的に精製されたポリヌクレオチド配列又はその断片、及び前記ポリヌクレオチド配列を含む組成物を提供する。また本発明は、配列番号：３のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド配列と厳密な条件の下でハイブリダイズするポリヌクレオチド配列、又は前記ポリヌクレオチド配列の断片を提供する。更に本発明は、配列番号：３のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド配列の相補配列を含むポリヌクレオチド配列、又は前記ポリヌクレオチド配列の断片又は変異配列を提供する。また本発明は、配列番号：４の配列を含む単離され精製された配列、又はその変異配列を提供する。更に本発明は、配列番号：４のポリヌクレオチド配列と厳密な条件の下でハイブリダイズするポリヌクレオチド配列を提供する。別の実施態様では、本発明は、配列番号：４の相補配列を含む単離され精製されたポリヌクレオチド配列、又はその断片若しくは変異配列を含む組成物を提供する。また本発明は、配列番号：４の相補配列を含むポリヌクレオチド配列を提供する。更に本発明は、開示されたポリヌクレオチド配列の何れかの少なくとも断片を含む発現ベクターを提供する。別の実施態様では、前記ポリヌクレオチド配列を含む発現ベクターが宿主細胞に含められる。また本発明は、配列番号：３のアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその断片の製造方法であって、（ａ）前記ポリペプチドの発現に適した条件の下で、ＨＣＲＰ−２をコードするポリヌクレオチド配列の少なくとも断片を含む発現ベクターを含む宿主細胞を培養する過程と、（ｂ）前記宿主細胞の培地から前記ポリペプチドを回収する過程とを含む配列番号：３のアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその断片の製造方法を提供する。また本発明は、配列番号：３のアミノ酸配列を有する実質的に精製されたＨＣＲＰ−２を、適切な医薬用担体と共に含む医薬品組成物を提供する。更に本発明は、配列番号：３のポリペプチドの活性を変調する精製されたアゴニストを提供する。また本発明は、配列番号：３のポリペプチドの活性を低下させる精製されたアンタゴニストを提供する。或る態様では、本発明は、配列番号：３のアミノ酸配列の少なくとも断片を含むポリペプチドに結合する精製された抗体を提供する。また本発明は、発達障害の治療又は予防方法であって、そのような治療が必要な患者に、精製されたＨＣＲＰ−２を含む医薬品組成物を有効な量投与する過程を含む発達障害の治療又は予防方法を提供する。また本発明は、癌の治療又は予防方法であって、そのような治療が必要な患者に、ＨＣＲＰ−２の精製されたアンタゴニストを有効な量投与する過程を含む癌の治療又は予防方法を提供する。また本発明は、生物学的サンプルにおけるＨＣＲＰ−２をコードするポリヌクレオチドの検出方法であって、（ａ）ＨＣＲＰ−２（配列番号：３）に相補的なポリヌクレオチド配列と、生物学的サンプルの核酸材料とをハイブリダイズさせ、ハイブリダイゼーション複合体を形成する過程と、（ｂ）前記ハイブリダイゼーション複合体を検出する過程であって、前記複合体の存在が、前記生物学的サンプルにおけるＨＣＲＰ−２をコードするポリヌクレオチドの存在と相関性を有する、該過程とを含む生物学的サンプルにおけるＨＣＲＰ−２をコードするポリヌクレオチドの検出方法を提供する。好適な実施例では、ハイブリダイゼーションの前に、前記生物学的サンプルの前記核酸材料を、ＰＣＲ法により増幅する。図面の簡単な説明第１Ａ図、第１Ｂ図、及び第１Ｃ図は、ＨＣＲＰ−１のアミノ酸配列（配列番号：１）及び核酸配列（配列番号：２）を示す。配列アライメントは、MacDNASI S PRO^TMソフトウェア（Hitachi Software Engineering Co.,Ltd.,San Bruno，CA ）を用いて作成した。第２Ａ図、第２Ｂ図、第２Ｃ図、第２Ｄ図、第２Ｅ図、及び第２Ｆ図は、ＨＣＲＰ−２のアミノ酸配列（配列番号：３）及び核酸配列（配列番号：４）を示す。配列アライメントは、MacDNASIS PRO^TMソフトウェアを用いて作成した。第３図は、ＨＣＲＰ−１（配列番号：１）、atlantic clam由来のシステイン特異的ユビキチンキャリアタンパク質Ｅ２−Ｃ（GI 1493838；配列番号：５）、及び酵母菌を起源とするユビキチンキャリアタンパク質Ｅ２−１８ＫＤ（GI 171 866；配列番号：６）の間のアミノ酸配列アライメントを示す。この配列アライメントは、DNASTAR^TMソフトウェア（DNASTAR Inc,Madison WI）のマルチシーケンスアライメントプログラムを用いて作成した。第４Ａ図及び第４Ｂ図は、ＨＣＲＰ−２（配列番号：３）、及びマウスを起源とするサイクリンＢ（GI 50613；配列番号：７）及びヒトを起源とするサイクリンＢ（GI 105763；配列番号：８）の間のアミノ酸配列アライメントを示す。この配列アライメントは、DNASTAR^TMソフトウェアのマルチシーケンスアライメントプログラムを用いて作成した。第５Ａ図及び第５Ｂ図は、それぞれＨＣＲＰ−１（配列番号：１）とatlantic clamを起源とするサイクリン特異的ユビキチンキャリアタンパク質Ｅ２−Ｃ（配列番号：５）の疎水性プロットを示す。Ｘ軸は正の方向にアミノ酸の位置を表し、Ｙ軸は負の方向に疎水性のレベルを表す（MacDNASIS PRO^TMソフトウェアで作成）。第６Ａ図及び第６Ｂ図は、それぞれＨＣＲＰ−２（配列番号：３）及びマウスを起源とするサイクリンＢ（配列番号：７）の疎水性プロットを示す。Ｘ軸は正の方向にアミノ酸の位置を表し、Ｙ軸は負の方向に疎水性のレベルを表す（MacD NASIS PRO^TMソフトウェアを用いて作成）。発明の実施の形態本発明のタンパク質、核酸配列、及び方法について説明する前に、本発明は、ここに開示した特定の方法論、プロトコル、細胞系、ベクター、及び試薬に限定されず、その実施形態を変えて実施できることを理解されたい。また、ここで用いられる用語法は、特定の実施例のみを説明する目的で用いられたものであり、請求の範囲のみによって限定される本発明の範囲を限定することを意図したものではないということも理解されたい。本明細書及び請求の範囲において、単数を表す「或る」及び「その」と形容されたものは、前後関係でそうでないことが明らかである場合以外は、複数の意味も含んでいることに注意しなければならない。従って、例えば「宿主細胞」なる表記が表すものには、複数のそのような宿主細胞が含まれ、「抗体」なる表記は、１またはそれ以上の抗体及び当業者に周知のその等価物等も表している。本明細書における全ての科学技術専門用語は、特別に定義されていない場合には、本発明の属する技術分野の専門家に一般に理解されるのと同じ意味を有する。ここに説明したものと類似のまたは等価な方法や材料を本発明の実施や試験において用いることができるが、好適な方法、装置、及び材料はここに説明されている。本明細書に記載された全ての文献は、本発明の関連において用いられ得る文献で報告された細胞系、ベクター、及び方法論を説明し開示する目的で引用されたものであり、この引用により本明細書の一部とする。この引用の記載は、本発明には許容されない、従来発明によって先行開示されたそのような開示内容に先行することを本発明に許容するためのものと解釈してはならない。定義本明細書において、ＨＣＲＰは、任意の種、特にウシ、ヒツジ、ブタ、マウス、ウマ、及び好ましくはヒトを含む哺乳動物から得られる天然の、合成の、半合成の、又は組換え体を起源とする実質的に精製されたＨＣＲＰのアミノ酸配列である。本明細書において、用語「アゴニスト」は、ＨＣＲＰに結合したとき、ＨＣＲＰの効果を強めたり、その効果の持続時間を長くさせる分子である。アゴニストには、ＨＣＲＰに結合し、その効果を変調するタンパク質、核酸、糖質や、任意の他の分子が含まれ得る。本明細書において「アレル」或いは「アレル配列」とは、ＨＣＲＰの対立形である。アレルは変異、すなわち核酸配列の変化によって生じ、一般に変異したｍＲＮＡ或いはポリペプチドを生成するが、そのｍＲＮＡ或いはポリペプチドの構造或いは機能は、変わる場合もあれば変わらない場合もある。遺伝子によっては、アレル形が存在しないもの、１つ存在するもの、或いは多数存在するものがある。一般にアレルを生じる変異はアミノ酸の自然な欠失、付加並びに置換に起因する。このタイプの変化はそれぞれ単独で、或いは他の変化と同時に、所定の配列内で１又は２回以上生じ得る。本明細書において、ＨＣＲＰをコードする「変異」核酸配列とは、異なるヌクレオチド残基の欠失、挿入並びに置換を含み、結果的に同一の、または機能的に等価なＨＣＲＰをコードするポリヌクレオチドとなるものである。この定義には、ＨＣＲＰをコードするポリヌクレオチド配列の正常な染色体上の遺伝子座以外の位置における、アレルとの不適切又は予期されないハイブリダイゼーション、及びＨＣＲＰをコードするポリヌクレオチドの特定のオリゴヌクレオチドプローブを用いて容易に検出可能な、或いは検出が困難な多形性が含まれている。コードされたタンパク質も同様に「変異」したものであり、サイレント変化を生ずるアミノ酸残基の欠失、挿入並びに置換を含み、結果的に機能的に等価なＨＣＲＰとなるものであり得る。意図的な（deliberate）アミノ酸置換は、ＨＣＲＰの生物学的活性が保持される限りにおいて、残基の極性、電荷、溶解度、疎水性、親水性並びにまた両親媒性についての類似性に基づいてなされ得る。例えば負に荷電したアミノ酸にはアスパラギン酸及びグルタミン酸が含まれ、正に荷電したアミノ酸にはリジン及びアルギニンが含まれ、近い親水性値を持つ荷電していない極性頭基を有するアミノ酸には、ロイシン、イソロイシン、バリン、グリシン、アラニン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、フェニルアラニン並びにチロシンが含まれる。本明細書において「アミノ酸配列」は、オリゴペプチド、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質の配列及びその断片であり、自然発生又は合成の分子である。ＨＣＲＰの断片は、好ましくは約５〜約１５のアミノ酸からなる長さを有し、ＨＣＲＰの生物学的活性又は免疫学的活性を保持しているものである。ここでは「アミノ酸配列」が、自然発生タンパク質分子のアミノ酸配列を指すものとして用いられているが、「アミノ酸配列」や類似の用語は、アミノ酸配列を、説明されるタンパク質分子に関連する完全で元のままのアミノ酸配列に限定する意味で用いられるわけではない。本明細書において「増幅」は、核酸配列の更なる複製物を生成することであり、通常は当業者に周知のポリメラーゼ連鎖反応（PCR）技術を用いて行われる（D ieffenbach,C.W.及びG.S.Dveksler(1995)PCR Primer.a Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Press,Plainview,NY）。本明細書において、用語「アンタゴニスト」は、ＨＣＲＰに結合したとき、ＨＣＲＰの生物学的又は免疫学的作用の大きさを低下させたり、持続時間を短縮させる分子である。アンタゴニストには、ＨＣＲＰの作用を低下させるタンパク質、核酸、糖質や、任意の他の分子が含まれ得る。本明細書において、用語「抗体」は、そのままの抗体分子及び、例えば抗原決定基と結合し得るFa、F(ab')₂、及びFvのようなその断片である。ＨＣＲＰポリペプチドに結合する抗体は、そのままのポリペプチド、或いは免疫化する抗原としての目的の小型のペプチドを含む断片を用いて調製することができる。動物を免疫するのに用いられるポリペプチドまたはペプチドは、翻訳されたｃＤＮＡまたは化学的合成物を起源とするものであり得、必要ならば担体タンパク質と結合することができる。ペプチドに化学的に結合する通常用いられる担体には、ウシ血清アルブミン及びサイログロブリンが含まれる。次にこの結合したペプチドを用いて動物（例えばマウス、ラット、またはウサギ）を免疫化する。本明細書において、用語「抗原決定基」は、特定の抗体と接触する分子の一部分（即ちエピトープ）である。タンパク質またはタンパク質の断片を用いてホストの動物を免疫すると、このタンパク質の種々の領域が、該タンパク質上の所定の領域または三次元構造に特異的に結合する抗体の産生を誘発し得る。このような領域または構造を抗原決定基と称する。抗原決定基は、抗体への結合について、元の抗原（即ち免疫応答を引き出すために用いられる免疫原）と競合し得る。本明細書において用語「アンチセンス」は、特定のＤＮＡまたはＲＮＡ配列に対して相補的なヌクレオチド配列である。「アンチセンス鎖」は、「センス」鎖に対して相補的な核酸鎖の意味で用いられる。アンチセンス分子はペプチド核酸を含み、合成や転写を含む任意の方法で作ることができる。この相補的ヌクレオチドは、一度細胞内に導入されると、細胞によって作られた天然の配列と結合して二重鎖を形成し、この二重鎖は更なる転写や翻訳を阻害する。表記「ネガティブ（−）」はアンチセンス鎖の意味で時折用いられ、「ポジティブ（＋）」はセンス鎖の意味で用いられることがある。本明細書において、用語「生物学的に活性」は、自然発生の分子の構造的機能、調節機能、又は生化学的機能を有するタンパク質である。同様に「免疫学的に活性」は、天然の、組換え体の、又は合成のＨＣＲＰ、若しくはその任意のオリゴペプチドが適当な動物や細胞における特定の免疫応答を誘発し、特定の抗体に結合する能力を指す。本明細書において、用語「相補的」または「相補性」は、許容的な塩及び温度の条件の下での塩基対によるポリヌタレオチド同士の自然の結合である。例えば、配列「Ａ−Ｇ−Ｔ」は相補的配列「Ｔ−Ｃ−Ａ」に結合する。２つの二本鎖分子間の相補性は、幾つかの核酸のみが結合している「部分的」なものであるか、若しくは一本鎖分子間に完全な相補性が存在する場合は完全に相補的なものであり得る。核酸鎖同士の相補性の程度は、核酸鎖同士のハイブリダイゼーションの効率及び強度に有意な影響を与える。このことは、核酸鎖同士の結合によって左右される増幅反応や、ＰＮＡ分子の設計及び使用において特に重要である。本明細書において「所定のポリヌクレオチド配列を含む組成物」とは、広く所定のポリヌクレオチド配列を含む任意の物質をさす。この組成物は、乾燥した製剤又は水溶液を含み得る。ＨＣＲＰ（配列番号：１又は配列番号：３）をコードするポリヌクレオチド配列又はその断片（例えば配列番号：２又は配列番号：４又はその断片）を含む組成物は、ハイブリダイゼーションプローブとして利用することができる。このプローブは凍結乾燥した形態で保存することができ、糖質のような安定化剤と結合させることができる。ハイブリダイゼーションにおいて、このプローブは、塩（例えばＮａＣｌ）、界面活性剤（例えばＳＤＳ）及び他の物質（例えばデンハート液、乾燥ミルク、サケの精子ＤＮＡ等）に展開することができる。本明細書において「コンセンサス」は、再度シークエンシングされて不要な塩基が分離された核酸配列か、XL-PCR^TM（Perkin Elmer,Norwalk,CT）を用いて５ ’方向及び／または３’方向に延長されて、再度シークエンシングされた核酸配列か、GELVIEW^TM Fragment Assembly system（GCG,Madison WI）を用いて２以上のインサイト社クローンの重複した配列を元に組み立てられた核酸配列か、若しくは延長と組み立ての双方によって形成された核酸配列の何れかである。本明細書において、「ポリヌクレオチドの発現と相関性を有する」なる表現は、ノーザン解析ハイブリダイゼーションアッセイにより、配列番号：２又は配列番号：４に類似なリボ核酸の存在が検出されることが、サンプル内のＨＣＲＰをコードするｍＲＮＡの存在を表しており、従って該タンパク質をコードする遺伝子からの転写物の発現と相関性を有しているということを表している。本明細書において「欠失」は、１または２以上のヌクレオチド若しくはアミノ酸残基が欠ける、ヌクレオチド配列またはアミノ酸配列における変化である。本明細書において、用語「誘導体」は、ＨＣＲＰ或いはその相補配列をコードする核酸、又はコードされたＨＣＲＰを化学的に修飾したものを意味する。このような修飾の例には、水素からアルキル基、アシル基、又はアミノ基への置換がある。核酸誘導体は、未修飾のＨＣＲＰの生物学的又は免疫学的機能を保持しているポリペプチドをコードする。誘導体ポリペプチドは、元のポリペプチドの生物学的又は免疫学的機能を保持している、グリコシル化、ポリエチレングリコール化、又は他の任意のプロセスで修飾されたものである。本明細書において、用語「相同性」は、相補性の程度を意味する。部分的な相同性と、完全な相同性（即ち同一性）の場合があり得る。部分的に相補的な配列は、同一の配列が標的の核酸とハイブリダイズするのを少なくとも部分的に阻害するものであり、これを機能的な用語「実質的に相同な」を用いて表す。完全に相補的な配列と標的配列とのハイブリダイゼーションの阻害は、低い厳密性の条件の下で、ハイブリダイゼーションアッセイ（サザンブロット法またはノーザンブロット法、溶液ハイブリダイゼーション等）を用いて検定することができる。実質的に相同な配列またはプローブは、低い厳密性の条件の下で標的の配列と、完全に相同な配列またはプローブとの結合（即ちハイブリッド形成）について競合し、それを阻害する。これは、低い厳密性の条件が、非特異的な結合を許容するようなものであるということを意味するのではない。低い厳密性の条件では、２つの配列の相互の結合が特異的(即ち選択的)相互作用であることが必要である。非特異的結合が存在しないことは、部分的な程度の相補性（即ち約３０％未満の同一性）を有していない第２の標的配列を用いることにより試験できる。非特異的結合が存在しない場合、プローブは第２の非相補的標的配列とハイブリダイズしない。ヒト人工染色体（ＨＡＣ）は１０Ｋ〜１０ＭのサイズのＤＮＡ配列を含み得、安定した分裂染色体分離及び維持に必要な全ての要素を含む直鎖状の小染色体である（Harrington,J.J.等(1997)Nat Genet.15:345-355）。本明細書において、用語「ヒト化抗体」は、元の結合能力をそのまま保持しつつ、非抗体結合領域においてアミノ酸を置換してヒトの抗体により近づけた抗体分子である。本明細書において、用語「ハイブリダイゼーション（ハイブリッド形成）」は、核酸の鎖が塩基対合を介して相補鎖と結合する過程である。本明細書において、用語「ハイブリダイゼーション複合体」は、相補的なＧ塩基とＣ塩基の間及び相補的なＡ塩基とＴ塩基の間での水素結合の形成によって、２つの核酸配列で形成された複合体である。これらの水素結合は、塩基スタッキング相互作用（base stacking interaction）により更に安定化し得る。この２つの相補的核酸配列は水素結合して、逆平行構造をなす。ハイブリダイゼーション複合体は、溶液中で形成されるか（例えばＣ₀ｔ又はＲ₀ｔ解析）、或いは核酸は溶液中に存在する一方の核酸と、固定支持体（例えばin situハイブリダイゼーションのために細胞が固定される紙、メンブラン、フィルタ、ピン、またはスライドガラス）に固定化された他方の核酸との間で形成され得る。本明細書において「挿入」或いは「付加」は、自然発生の分子と比較して、１または２以上のヌクレオチド、アミノ酸残基がそれぞれ加わるような、ヌクレオチド配列或いはアミノ酸配列の変化を指す。「マイクロアレイ」とは、基板上に、合成された個々のポリヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドを配列したものである。基板には例えば紙、ナイロン又は他のタイプのメンブラン、濾紙、チップ、スライドガラス、又は他の任意の適切な固形支持体が用いられる。本明細書において、用語「変調」は、ＨＣＲＰの活性の変化である。例えば、変調によって、タンパク質活性の上昇や低下、結合特性の変化、又はＨＣＲＰの生物学的、機能的、免疫学的特性の他の変化がもたらされる。本明細書において「核酸配列」は、一本鎖か二本鎖の、センス鎖又はアンチセンス鎖である、ゲノム起源又は合成起源のＤＮＡ、ＲＮＡや、オリゴヌクレオチド、ヌクレオチド、又はポリヌクレオチド、及びその断片又は一部分である。「断片（フラグメント）」は、長さが６０ヌクレオチド以上の核酸配列であり、最も好ましくは、長さが１００ヌクレオチド以上又は１０００ヌクレオチド以上、及び１００００ヌクレオチド以上の断片を含む。本明細書において「オリゴヌクレオチド」は、ＰＣＲ増幅又はハイブリダイセーションアッセイ、若しくはマイクロアレイで用いることができる核酸配列であって、長さが約６ヌクレオチド以上、最大６０ヌクレオチド程度、好適には１５〜３０ヌクレオチド、より好適には２０〜２５ヌクレオチドであるものを指す。本明細書において、オリゴヌクレオチドは、当分野において一般に定義されている用語「アンブリマー」、「プライマー」、「オリゴマー」、及び「プローブ」と実質的に等価である。本明細書において「ペプチド核酸」ＰＮＡは、末端がリジンであるアミノ酸残基のペプチドバックボーンに結合した５ヌクレオチド以上の長さのオリゴヌクレオチドを含むアンチセンス分子又は抗遺伝子剤を意味する。末端のリジンがこの物質に安定性を与えている。ＰＮＡをポリエチレングリコール化して細胞におけるＰＮＡの寿命を延ばすことができる。このような細胞では、ＰＮＡが相補的な一本鎖ＤＮＡやＲＮＡに優先的に結合して、転写物の伸長を止める。（ Nielsen,P.E.等(1993)Anticancer Drug Des.8:53-63）。本明細書において、（「所定のタンパク質の一部分」と用いられるような）タンパク質に関連する用語「一部分」は、そのタンパク質の断片である。この断片のサイズは５つのアミノ酸残基から、（全アミノ酸配列−１）個のアミノ酸の範囲に亘る。従って、「配列番号：１又は配列番号：３のアミノ酸配列の少なくとも一部分を含む」タンパク質は、完全長ヒトＨＣＲＰとその断片を含む。本明細書において、用語「サンプル」は、その最も広い意味で用いられる。ＨＣＲＰをコードする核酸またはその断片またはＨＣＲＰ自体を含む疑いのある生物学的サンプルは、体液や、細胞から単離された染色体、細胞小器官、又は細胞膜からの抽出物や、細胞や、（溶液中の、または例えばサザンブロット解析用に固体支持体に結合した）ゲノムのＤＮＡ、ＲＮＡ、またはｃＤＮＡや、組織や、組織プリントその他を含み得る。本明細書において、用語「特異的結合」または「特異的に結合する」は、抗体及びタンパク質またはペプチドの相互作用が、タンパク質上の特定の構造（即ち抗原決定基、つまりエピトープ）の存在に左右されることを意味している。つまり、この抗体はタンパク質全体ではなく、特定のタンパク質構造を認識して結合する。例えば、抗体がエピトープ「Ａ」に対して特異的である場合、標識した「Ａ」及びその抗体を含む反応において、エピトープＡ（つまり結合していない、無標識のＡ）を含むタンパク質が存在すると、抗体に結合した標識Ａの量が低下する。本明細書において、用語「厳密な条件」又は「厳密性」は、核酸、塩、及び温度によって定義されるようなハイブリダイゼーションの条件をさす。これらの条件は当分野でよく知られており、同一のポリヌクレオチド配列の同定や検出のためであるか、或いは近縁なポリヌクレオチド配列の同定や検出のためであるかによって変えることができる。低い厳密性条件か高い厳密性条件の何れかを含む名目上の等価な条件は、例えば配列の長さ及び性質（ＤＮＡ、ＲＮＡ、塩基構成）、標的の性質（ＤＮＡ、ＲＮＡ、塩基構成）、環境（溶液中に存在するか或いは固定化されているか等）、塩や他の成分の濃度（例えばホルムアミド、デキストラン硫酸、及び／またはポリエチレングリコールの有無）、及び反応の温度（プローブの融解温度（Ｔｍ）より５℃下からＴｍの約２０〜２５℃下までの範囲内）のような要素によってきます。１又は２以上の因子を変更することによって、上に列挙した条件とは異なるが等価である低い厳密性または高い厳密性の何れかの条件を作り出すことができる。本明細書において、用語「実質的に精製」は、天然の環境から取り除かれ、天然にはそれが結合して存在する他の構成要素から単離又は分離されて、その構成要素が６０％以上、好ましくは７５％以上、最も好ましくは９０％以上除去された核酸配列又はアミノ酸配列である。本明細書において「置換」は、それぞれ１または２以上のヌクレオチド或いはアミノ酸を、異なるヌクレオチド或いはアミノ酸に置換することによって生ずる変化である。本明細書の定義では、「形質転換」は、外来ＤＮＡが入り込みレシピエント細胞を変化させるプロセスを意味する。このプロセスは、よく知られた種々の方法を用いた天然または人工の条件の下で生じ得る。形質転換は、外来核酸配列を原核細胞または真核細胞の宿主細胞に導入するための任意の既知の方法に基づいている。この方法は形質転換される宿主細胞によって選択され、以下のものに限定されないが、ウイルス感染、電気穿孔法、リポフェクション、及び微粒子銃を用いる方法が含まれ得る。このように「形質転換された」細胞は、その中で挿入されたＤＮＡが自律的に複製するプラスミドとして、或いは宿主の染色体の一部として複製が可能な安定的に形質転換された細胞を含む。またこのような細胞は、限られた時間だけ導入されたＤＮＡの一過性の発現をする細胞も含む。本明細書においてＨＣＲＰの「変異体」は、１又は２箇所以上のアミノ酸が変異したアミノ酸配列である。この変異体は「保存的」変化を含むものであり得、この保存的変化の場合は、例えばロイシンをイソロイシンで置き換える場合のように置換されるアミノ酸が類似な構造的及び化学的特性を有する。稀に、変異体が「非保存的」に変化する場合もあり、この非保存的変化の場合は、例えばグリシンがトリプトファンで置換される。類似した小変化には、アミノ酸の欠失か挿入、若しくはその両方も含まれる。例えばDNASTARソフトウエアのような良く知られたコンピュータプログラムを用いて、何れのアミノ酸が生物学的或いは免疫学的活性を損なわずに置換、挿入、又は除去できるものであるかということ、及びそのようなアミノ酸がいくつかということを決定することができる。発明本発明は、新規なヒトサイクリン関連タンパク質（以下ＨＣＲＰと称する）の発見、ＨＣＲＰをコードするポリヌクレオチド、及び癌、免疫疾患、及び発達障害の診断、予防、及び治療のためのこれらの物質の使用に基づくものである。或る実施例では、本発明は、第１図に示すような配列番号：１のアミノ酸配列を含む精製されたヒトサイクリン関連タンパク質（ＨＣＲＰ−１）を包含する。ＨＣＲＰ−１は１７９個のアミノ酸からなる長さを有し、残基Ｇ（19番）にミリストイル化可能部位を有する。カゼインキナーゼにリン酸化可能部位はＴ（72番）に、プロテインキナーゼＣリン酸化可能部位はＴ（95番）に存在する。ロイシンジッパーモチーフは、Ｌ（118番）から始まり、規則的な間隔でＬ（118番）、Ｌ（125番）、Ｌ（132番）、及びＬ（139番）から反復するロイシン残基からなる。第３図に示すように、ＨＣＲＰ−１は、atlantic clamを起源とするサイクリン特異的ユビキチンキャリアタンパク質Ｅ２−Ｃ（GI 1493838；配列番号：５）及び酵母菌を起源とするユビキチンキャリアタンパク質Ｅ２−１８ＫＤ（GI 1 71866；配列番号：６）と化学的及び構造的相同性を有する。詳述すると、ＨＣＲＰ−１は、Ｅ２−Ｃ及びＥ２−１８ＫＤとそれぞれ６１％及び５３％の配列同一性を共有している。Ｕｂ結合酵素の活性部位のシステイン残基は、ＨＣＲＰ− １においてＣ（114番）に存在し、Ｅ２−Ｃ及びＥ２−１８ＫＤの双方で保存されている。この活性部位を取り囲むＵＢＣドメインは、概ねＹ（103番）からＬ（118番）まで延びており、他のＥ２においても高度に保存されている。プロリンを豊富に含む領域は、ＨＣＲＰ−１では活性システイン残基のＮ末端側に存在する。ＨＣＲＰ−１においてＰ（86番）、Ｐ（90番）、Ｐ（94番）、Ｐ（101番）、及びＰ（105番）に位置するプロリン残基は、他のＥ２でも保存されている。ＨＣＲＰ−１は、残基Ａ（14番）からＡ（27番）にわたる、クラスＩＩＩのＥ２の特徴である独特なＮ末端延長部を有する。第５Ａ図及び第５Ｂ図に示すように、ＨＣＲＰ−１とＥ２−Ｃはかなり類似した疎水性プロットを示す。ノーザン解析の結果から種々のライブラリーにおけるこの配列の発現が分かるが、この配列を発現するライブラリーの５１％以上は不死化又は癌性のものであり、２４％以上は、炎症及び免疫応答に関連するものである。特に注目すべきは、膀胱癌及び膵臓癌におけるＨＣＲＰ−１の発現、脳及び肺の転移性腫瘍におけるＨＣＲＰ−１の発現及びリウマチ性関節炎に関連する炎症組織におけるＨＣＲＰ−１の発現である。本発明のＨＣＲＰ−１をコードする核酸は、胎仔結腸ｃＤＮＡライブラリー(C OLNFET02)を起源とするインサイト社クローンNo.1308478において、アミノ酸配列アライメントのコンピュータ検索によって初めに同定された。コンセンサス配列の配列番号：２は、以下の重複及び又は延長された核酸配列、即ちインサイト社クローンNo.993201(COLNNOT11を起源)、1308478(COLNFET02を起源)、及び2342 963（TESTTUT02を起源）から構成されたものである。別の実施例では、本発明は、第２Ａ図に示すような配列番号：３のアミノ酸配列を含む精製されたサイクリン関連タンパク質(ＨＣＲＰ−２)を包含する。ＨＣＲＰ−２は３９８個のアミノ酸からなる長さを有し、Ｍ（165番）からＳ（313番）にわたる１８０個のアミノ酸からなる典型的な「サイクリンボックス」サイン配列を有する。推定上の「破壊ボックス」配列は、Ｒ（32番）から始まる（RTVL EEIGN）である。第４図に示すように、ＨＣＲＰ−２はマウスを起源とするサイクリンＢ(GI 50613;配列番号：７)及びヒトを起源とするサイクリンＢ(GI 10576 3；配列番号：８)と化学的及び構造的相同性を有する。詳述すると、ＨＣＲＰ− ２は、それぞれマウス及びヒトのサイクリンＢと８９％及び５４％の配列同一性を共有している。ＨＣＲＰ−２における「サイクリンボックス」の領域は、マウスサイクリンＢ及びヒトサイクリンＢの双方で良く保存されている。ユビキチン媒介分解のための「破壊ボックス」も、マウス及びヒトのサイクリンで良く保存されている。第６Ａ図及び第６Ｂ図に示すように、ＨＣＲＰ−２とマウスのサイクリンＢはかなり類似した疎水性プロットを示す。ノーザン解析の結果から種々のライブラリーにおけるこの配列の発現が分かる。この配列を発現するライブラリーの７０％以上は不死化細胞系又は癌性のものであり、２０％は胎仔組織関連である。本発明のＨＣＲＰ−２をコードする核酸は、ヒト・マスト細胞系ｃＤＮＡライブラリー（HMC1NOT01）を起源とするインサイト社クローンNo.7755において、アミノ酸配列アラーイメントのコンピュータ検索によって初めに同定された。コンセンサス配列の配列番号：４は、以下の重複及び又は延長された核酸配列、即ちインサイト社クローンNo.7755（HMC1NOT01を起源）、256850及び484361(HNT2RAT 01を起源)、及び441496（MPHGNOT03を起源）から構成されたものである。また本発明は、ＨＣＲＰ変異体を包含する。好適なＨＣＲＰ変異体は、ＨＣＲＰアミノ酸配列（配列番号：１又は配列番号：３）と８０％以上、より好適には９０％以上のアミノ酸配列同一性を有するものである。最も好適なＨＣＲＰ変異体は、配列番号：１又は配列番号：３と９５％以上のアミノ酸配列同一性を有するものである。また本発明は、ＨＣＲＰをコードするポリヌクレオチドを包含する。従って、ＨＣＲＰのアミノ酸配列をコードする核酸配列を用いて、ＨＣＲＰを発現する組換え分子を作り出すことができる。具体的な実施例では、本発明は、それぞれ第１図又は第３図に示すような配列番号：２又は配列番号：４の核酸配列を含むポリヌクレオチドを包含する。当業者には理解されるように、遺伝暗号の縮重の結果、任意の既知の自然発生遺伝子のヌクレオチド配列と最小限の相同性しか有していないものも含めて、多種のＨＣＲＰコーディングヌクレオチド配列が作り出され得る。従って本発明は、可能なコドン選択に基づく組み合わせを選択することにより作り出され得る、全ての可能な核酸配列の変異をその範囲に含んでいる。それらの組み合わせは、自然発生のＨＣＲＰのヌクレオチド配列に適用されるような標準的なトリプレット遺伝暗号に基づいて作り出されるものであり、このような全ての変異は、ここに具体的に示されたものと考えられたい。ＨＣＲＰ及びその変異体をコードするヌクレオチド配列は、適切に選択された厳密性の条件の下で自然発生配列のヌクレオチド配列とハイブリッド形成可能なものであるのが好ましいが、実質的に異なるコドンの使用頻度を有するＨＣＲＰ又はその変異体をコードするヌクレオチド配列を作り出すことは有益であり得る。コドン選択では、特定のコドンが宿主によって使用される頻度に従って、特定の原核細胞又は真核細胞の発現宿主におけるペプチド発現の発生率を高めるように選択することができる。ＨＣＲＰ及びその誘導体をコードするヌクレオチド配列を、コードされるアミノ酸配列を変えないように実質的に変更する理由は、例えば自然発生配列から作り出される転写物より長い半減期のような、より望ましい特性を有するＲＮＡ転写物を作り出すためである。本発明の範囲には、ＨＣＲＰ又はその誘導体をコードするＤＮＡ配列又はその一部の、完全な合成ケミストリによる作製も含まれる。作製したこの合成遺伝子を、この出願時点において周知の試薬を用いて任意の入手可能なＤＮＡベクター及び細胞系に挿入することができる。更に、合成ケミストリを用いてＨＣＲＰをコードする配列又はその任意の一部分に突然変異を誘発させることができる。また本発明の範囲に含まれるものとして、種々の厳密性の条件の下で請求項に記載のヌクレオチド配列、特に配列番号：２又は配列番号：４のヌクレオチド配列とハイブリダイズし得るポリヌクレオチド配列がある。ハイブリダイゼーション条件は、Wahl,G.M．及びS.L.Berger(1987;Methods Enzymol.152:399-407)及びKimmel,A.R.(1987;Methods in Enzymol.152:507-511) に記載されている。当業者が一般に利用可能な周知のＤＮＡ配列決定のための方法を、本発明の実施において用いることができる。この方法では酵素、例えばＤ Cleveland OH）、Taqポリメラーゼ（Perkin Elmer）、熱安定性T7ポリメラーゼ（Amersham,Chicago IL）、或いはGibco BRL（Gaithersburg MD）社から市販されているELONGASE増幅システムのような校正エキソヌクレアーゼと組換え体ポリメラーゼとの組み合わせを使用する。この処理は、Hamilton Micro Lab2200(Ham ilton,Reno,NV)、Peltier Thermal Cycler(PTC200;MJ Reserch,Watertown MA)並びにABI377 DNAシーケンサ（Perkin Elmer）のような装置を用いて自動化するのが好ましい。ＨＣＲＰをコードする核酸配列は、部分的なヌクレオチド配列と、プロモーター及び調節エレメントのような上流配列を検出するための当業者には周知の様々な方法とを用いて伸長させることができる。例えば、用いることができる或る方法、即ち「制限部位」ＰＣＲ法では、汎用プライマーを用いて既知の座位に隣接する未知の配列を得る（Sarkar,G.(1993)PCR Methods Applic 2:318-322）。詳述すると、まずゲノムＤＮＡを、既知の領域に対して特異的なプライマー及びリンカー配列に対するプライマーの存在下で増幅する。増幅された配列を、その同じリンカープライマー及び最初のプライマーの内部に含まれる別の特異的プライマーを用いてＰＣＲの２巡目にかける。ＰＣＲの各回の生成物を、適切なＲＮＡポリメラーゼを用いて転写させ、逆転写酵素を用いて配列決定する。逆ＰＣＲ法を用いて、既知領域に基づく多様なプライマーを利用した配列の増幅、または伸長を行うことができる（Triglia,T.等（1988）Nucleic Acids Res 16:8186）。プライマーは、OLIGO 4.06（National Biosciences社,Plymouth MN ）や別の適切なプログラムを用いて、長さが２２〜３０ヌクレオチドで、５０％以上のＧＣ含量を有し、かつ約６８〜７２℃の温度で標的配列にアニールするように設計される。この方法ではいくつかの制限酵素を用いて遺伝子の既知領域の適当な断片を作り出す。次にこの断片を分子内ライゲーションにより環状にし、ＰＣＲ用の鋳型として使用する。使用できる別の方法にはキャプチャＰＣＲ法があり、この方法ではヒト及び酵母菌人工染色体ＤＮＡ内の既知の配列に隣接するＤＮＡ断片をＰＣＲ増幅する（ Lagerstrom,M.等（1991）PCR Methods Applic 1:111-119）。この方法では、ＰＣＲ処理の前に、ＤＮＡ分子の未知の部分に、複数の制限酵素による消化及びライゲーションによって組換え二本鎖配列を配置しておいてもよい。未知の配列を得るために用いることができる別の方法は、Parker,J.D.等の方法（1991;Nucleic Acids Res 19:3055-3060）である。更に、ＰＣＲ、ネスト化プライマー、PromoterFinder^TMライブラリーを用いて、ゲノムＤＮＡ内歩行を行うことができる（Clontech,Palo Alto CA）。このプロセスは、ライブラリーをスクリーニングする必要がなく、イントロン／エクソン接合部を探し出すのに有用である。完全長ｃＤＮＡをスクリーニングするときに好適なライブラリーは、サイズ選択された、より大きなｃＤＮＡを含むライブラリーである。またランダムプライミングした（rondom primed）ライブラリーは、遺伝子の5’及び上流領域を含む配列をより多く含むという点で好適である。ランダムプライミングしたライブラリーは、オリゴｄ（Ｔ）ライブラリーで完全長ｃＤＮＡが得られない場合に特に有用である。またゲノムライブラリーは、5’及び3’非翻訳領域への配列の伸長のために役立つことがある。配列決定やＰＣＲの産物のヌクレオチド配列をサイズ分析したり確認するためには、市販のキャピラリー電気泳動システムを用いることができる。特に、キャピラリーシークエンシングでは、電気泳動による分離のための流動性ポリマー、レーザーで活性化される４つの異なる蛍光色素（各ヌクレオチドに対して１つ）を使用し、ＣＣＤカメラにより放射線の波長の検出を行う。出力／光強度は適切なソフトウエア（例えばPerkin elmer製のGenotyper^TM及びSequence Navigator^T ^M ）を用いで電気信号に変換され、サンプルの負荷からコンピュータ解析及び電子データ表示までの全過程がコンピュータ制御される。キャピラリー電気泳動法は、特定のサンプル内に限られた量だけ存在するＤＮＡ小片の配列決定に特に適している。本発明の別の実施例では、ＨＣＲＰ、融合タンパク質或いはその機能的等価物をコードするポリヌクレオチド配列を、適切な宿主細胞内でのＨＣＲＰの発現を誘導する組換えＤＮＡ分子において用いることができる。遺伝暗号固有の縮重のために、同一か機能的に等価なアミノ酸配列を実質的にコードする他のＤＮＡ配列も、ＨＣＲＰのクローニングや発現のために用いることができる。当業者には理解できるように、非自然発生コドンを有するＨＣＲＰコードディングヌクレオチド配列を作り出すことが有益なことがある。特定の原核細胞或いは真核細胞の宿主において選好されるコドンを選択して、例えば、ＨＣＲＰ発現率を増大させたり、或いは自然発生配列から生成された転写物より長い半減期のような望ましい特性を有する組換えＲＮＡ転写物を生成することができる。本発明のヌクレオチド配列は、様々な理由でＨＣＲＰをコードする配列を変更するために周知の方法を用いて組換えることができる。このような配列変更には、限定するものではないが、例えば遺伝子産物のクローニング、プロセシング及び／又は発現を変えるような変更が含まれる。無作為断片によるＤＮＡ再編成や遺伝子断片のＰＣＲ再会合及び合成オリゴヌクレオチドを用いて、ヌクレオチド配列を組換えることができる。例えば、特定部位突然変異誘発のような当業者には周知の技術を用いて突然変異を誘発させることによって、新しい制限部位の挿入、グリコシル化パターンの変更、コドン選好の変化、スプライスバリアントの生成等をもたらし得る。本発明の別の実施例では、未改変ＨＣＲＰコーディング配列、変異ＨＣＲＰコーディング配列、又は組換えＨＣＲＰコーディング配列を異種の配列に結合して、融合タンパク質をコードする配列にする。例えば、ＨＣＲＰ活性のインヒビターをペプチドライブラリーからスクリーニングする場合、市販の抗体により認識される異なるペプチドを発現するキメラＨＣＲＰタンパク質をコードすることが役立つ。融合タンパク質はＨＣＲＰ配列と異種のタンパク質配列との間の位置に切断部位を有するように設計することもでき、これによってＨＣＲＰを切断して、ヘテロの部分から分けて精製することが可能となる。本発明の別の実施例では、当業者によく知られた化学的方法（Caruthers.M.H.等(1980)Nuc Acids Res Symp Ser 7:215-223;Horn,T.等（1980 ）Nucl.Acids Res Symp.Ser.225-232参照)を用いて、ＨＣＲＰコーディング配列の全体、或いはその一部を合成することができる。別法では、化学的方法を用いてタンパク質自体を作り出して、ＨＣＲＰアミノ酸配列の全体或いはその一部を合成することができる。例えば、種々の固相技術（Roberge,J.Y.等(1995)Scienc e 269:202-204）でペプチド合成を行うことができ、合成の自動化は、例えばABI 431Aペプチドシンセサイザ（Perkin Elmer）を用いることにより達成することができる。この新たに合成されたペプチドは、分離用高速液体クロマトグラフィにより実質的に精製することができる（例えばCreighton T．(1983)Proteins Structure And Molecular Principles ,WH Freeman and Co.,NY参照）。合成されたペプチドの構成は、アミノ酸解析或いはシークエンシングにより確認することができる（例えばエドマン分解法；Creighton，上述）。さらにＨＣＲＰのアミノ酸配列或いはその任意の部分を、その直接の合成の際の改変することにより、及び／又は化学的方法を用いて他のタンパク質或いはその任意の部分に由来する配列との結合することによって変異体ポリペプチドを作ることができる。生物学的に活性なＨＣＲＰを発現させるために、ＨＣＲＰコーディングヌクレオチド配列或いはその機能的等価物を、適切な発現ベクター、すなわち挿入されたコーディング配列の転写及び翻訳に必要なエレメントを含むベクターに挿入する。ＨＣＲＰコーディング配列及び適切な転写や翻訳の調節領域を含む発現ベクターを作製するために当業者に周知の方法が用いられる。これらの方法には、in v itro組換えＤＮＡ技術、合成技術、並びにin vivo組換え技術、又は遺伝子組換え技術が含まれる。このような技術は、Sambrook,J.等(1989)Molecular Cloning ,A Laboratory Manual ,Cold Spring Harbor Press,Planview NY及びAusubel,F.M .等Current Protocol in Molecular Biology,John Wiley & Sons,New York NYに記載されている。種々の発現ベクター／宿主系を、ＨＣＲＰコーディング配列を保持させ、かつ発現させるために利用することができる。このようなものには、以下のものに限定はしないが、組換えバクテリオファージ、プラスミド或いはコスミドＤＮＡ発現ベクターで形質転換した細菌のような微生物や、酵母菌発現ベクターで形質転換した酵母菌や、ウイルス発現ベクター（例えばバキュロウイルス）を感染させた昆虫細胞系や、ウイルス発現ベクター（例えばカリフラワーモザイクウイルスCaMV、タバコモザイクウイルスTMV）をトランスフェクトした、或いは細菌の発現ベクター（例えばTi、或いはpBR322プラスミド）で形質転換した植物細胞系や、或いは動物細胞系が含まれる。これらの系の「調節領域」或いは「制御配列」は、転写及び翻訳を実行するために宿主細胞のタンパク質と相互作用するベクターの非翻訳領域、即ちエンハンサー、プロモーター及び３’非翻訳領域である。このようなエレメントの、強さ及び特異性は様々であり得る。利用されるベクター及び宿主に応じて、構成的及び誘導的プロモーターを含む任意の数の適切な転写及び翻訳エレメントを用いることができる。例えば、細（Stratagene,LaJolla CA）のハイブリッド lacZ プロモーター及びptrp-lacハイブリッド等のような誘導的プロモーターを用いることができる。バキュロウイルスポリヘドリンプロモーターは昆虫細胞において用いることができる。植物細胞のゲノムに由来するプロモーター或いはエンハンサ（例えば熱ショック遺伝子 ,RUBISCO及び貯蔵タンパク質遺伝子）、若しくは植物ウイルスに由来するプロモーター或いはエンハンサ（例えばウイルス性プロモータ或いはリーダー配列）を、ベクターにクローン化してもよい。哺乳動物細胞では、哺乳類遺伝子或いは哺乳類ウイルス由来のプロモーターが最適である。ＨＣＲＰをコードする配列の多数の複製を含む株細胞を作る必要がある場合には、SV40或いはEBVに基づくベクターを適切な選択マーカーと共に用いる。細菌系では、ＨＣＲＰの用途に応じて多数の発現ベクターを選択することができる。例えば抗体誘発のために大量のＨＣＲＰが必要とされる場合は、容易に精製される融合タンパク質を高レベルで発現できるベクターが望ましい。そのようなベクターには、以下のものに限定はしない（Stratagene）（このベクターでは、ＨＣＲＰをコードする配列を、アミノ末端メチオニン及び後続のβ−ガラタトシダーゼの７残基の配列を備えたフレーム内においてベクターに結合してハイブリッドタンパク質を生成できる）や、pINベクター（Van Heeke,G.及びS.M.Schuster（1989）J.Biol.Chem.264:5503-5509）等が含まれる。またpGEXベクター（Promage、Madison WI）も、グルタチオンＳ −トランスファーゼ（GST）を有する融合タンパク質として異種ポリペプチドを発現するため用いることができる。一般に、そのような融合タンパク質は可溶性であり、グルタチオンアガロースビーズへ吸着させた後、遊離グルタチオンの存在下で溶出させることにより溶解した細胞から容易に精製できる。その系において生成されたタンパク質は、ヘパリン、トロンビン或いはＸＡ因子プロテアーゼ切断部位を含めて、目的のクローン化ポリペプチドをGST部分から随意に放出させることができるように設計される。酵母菌、サッカロミセスセレビシエ（Saccharomyces cerevisiae）では、α因子、アルコールオキシダーゼ及びPGHのような構成的或いは誘導的プロモーターを含む多数のベクターを用いることができる。その概要を知るには、Ausubel等（前出）及びGrant等（1987）Methods Enzymol 153:516-544を参照されたい。植物発現ベクターを用いる場合には、ＨＣＲＰをコードする配列の発現は、多数のプロモーターの何れかで促進される。例えばCaMVの35S及び19Sプロモーターのようなウイルスのプロモーターを、単独で、或いはTMV（Takamatsu,N.等（1987）EMBO J 6:307-311）由来のオメガリーダー配列と共に用いることができる。別法として、RUBISCOの小サブユニット、或いは熱ショックプロモーターのような植物プロモーターが用いてもよい（Coruzzi,G. 等（1984）EMBO J 3:1671-1680）；Broglie,R.等（1984）Science 224:838-843; 及びWinter,J.等（1991）Results Probl.Cell Differ.17:85-105）。これらの構成は、直接のＤＮＡ形質転換或いは病原体によるトランスフェクションにより植物細胞内に導入できる。このような技術の種々の一般に入手可能な文献に記載されている(Hobbs,S.又はMurry,L.E.McGraw Hill Yearbok of Science and Techno logy (1992)McGraw Hill NY,pp191-196を参照されたい)。ＨＣＲＰの発現のために用いることができる別の発現系に、昆虫系がある。例えば、そのような系の一つでは、Spodoptera frugiperda細胞或いはTrichoplusi a の幼虫において外来遺伝子を発現するためのベクターとして、Autographa cali fornica 核多角体病ウイルス（AcNPV）が用いられる。ＨＣＲＰをコードする配列は、ポリヘドリン遺伝子のようなウイルスの非必須領域にクローニングされ、ポリヘドリンプロモーターの制御下に置かれ得る。ＨＣＲＰコーディング配列の挿入が成功すると、ポリヘドリン遺伝子が不活性になり、コートタンパク質膜が欠如した変異体ウイルスが生成される。次に、この変異体ウイルスを用いて、S.fr ugiperda 細胞或いはTrivhoplusiaの幼虫へ感染させ、その中でＨＣＲＰが発現される（Engelhard,E.K.等（1994）Proc.Natl.Acad.Sci.91:3224-3227）。哺乳動物の宿主細胞では、多数のウイルス性発現系を利用することができる。発現ベクターとしてアデノウイルスが用いられる場合には、ＨＣＲＰをコードする配列は、後期プロモータ及び三連リーダー配列からなるアデノウイルス転写物／翻訳物複合体内に結合され得る。ウイルスのゲノムの非必須E1又はE3領域へ挿入することにより、感染した宿主細胞でＨＣＲＰを発現できる生ウイルスになる(Logan,J.及びShenk,T.（1984）Proc.Natl.A cad.Sci.81:3655-3659)。さらに、哺乳動物宿主細胞内の発現を増加させるためにラウス肉腫ウイルス（RSV）エンハンサのような転写エンハンサを用いることができる。また、ヒト人工染色体（ＨＡＣ）を用いることにより、プラスミドに含められて発現され得るものより大きいＤＮＡの断片を供給することもできる。治療の目的で、従来のデリバリー方法（リポソーム、ポリカチオンのアミノポリマー、又は小胞）を用いて６〜１０ＭのＨＡＣを構築し、供給することができる。また、ＨＣＲＰ配列の効率的な翻訳のためには、特定の開始シグナルも必要である。これらのシグナルには、ATG開始コドン及び隣接する配列が含まれる。ＨＣＲＰ及びその開始コドン及び上流配列が適切な発現ベクター内に挿入される場合には、翻訳制御シグナルを加える必要はない。しかしながらコーディング配列又はその一部のみが挿入される場合には、ATG開始コドンを含む外来の翻訳制御シグナルを与えなければならない。さらに、全インサートの転写が確実に行われるようにするために、開始コドンは正しい読み枠に存在しなければならない。外来転写エレメント及び開始コドンは、自然及び合成両方の様々な起源に由来するものであり得る。例えば文献（Scharf,D.等（1994）ResultsProbl.Cell Differ. 20:125-162）に記載されているもののような、その細胞系に適切なエンハンサーを含めることにより、発現の効率を高めることができる。さらに宿主細胞株は、挿入された配列の発現を調節したり、発現したタンパク質を望ましい形にプロセシングする能力で選択される。このようなポリペプチドの修飾には、以下のものに限定はしないが、アセチル化、カルボキシル化、グリコシル化、リン酸化、脂質化（lipidation）並びにアシル化が含まれる。またタンパク質の「プレプロ」部分を切り離す翻訳後プロセシングも、正しい挿入、折り畳み、及び／又は機能の発揮のために重要である。そのような翻訳後の作用のための特定の細胞装置及び特徴的な機構を有している異なる宿主細胞（例えばCHO、HeLa、MDCK、293、WI38)はAmerican Type C ulture Collection（ATCC;Bethesda,MD）より市販されており、導入される外来タンパク質の正しい修飾やプロセシングが確実に行われるようにするために、これを選択することができる。長期間にわたって組換えタンパク質の高収率の産生を確保するためには安定した発現が望ましい。例えば、ウイルスの複製起源及び／または内在性発現エレメント及び選択マーカー遺伝子を、同一のベクター上、或いは別のベクター上に含む発現ベクターを用いて、ＨＣＲＰを安定的に発現する株細胞を形質転換することができる。ベクターの導入の後、細胞を、選択培地に切り替える前に濃縮培地内で１〜２日間増殖させる。選択マーカーの目的は、選択のための耐性を与え、その存在によって導入された配列をうまく発現する細胞を増殖、回収できるようにすることである。安定的に形質転換された細胞の耐性クローンは、その細胞の型に適した組織培養技術を用いて増殖することができる。形質転換された細胞系を回収するために任意の数の選択系を用いることができる。選択系には、以下のものに限定はしないが、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（tk）(Wigler,M.等（1977）Cell 11:223-32)及びアデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ(aprt)（Lowy,I.等（1980）Cell 22:817-23）遺伝子が含まれ、それぞれtk^-及びaprt^-細胞において用いられる。また代謝拮抗物質、抗生物質或いは除草剤への耐性を選択の基礎として用いることができる。例えばdh frはメトトレキセートに対する耐性を与え（Wigler,M.等(1980)Natl Acad Sci 77:3567）、nptはアミノ配糖体のネオマイシン及びG-418に対する耐性を与え（C olberre-Garapin,F.等（1981）J Mol Biol 150:1）、als或いはpatはクロルスルフロン（chlorsulfuron）、ホスフィノトリシンアセチルトランスフェラーゼ（p hosphinotricin acetyltransferase）に対する耐性を与える（Murry，前出）。さらに選択に利用できる遺伝子として、例えば細胞がトリプトファンの代わりにインドールを利用できるようにするtrpB、細胞がヒスチジンの代わりにヒスチノール（histinol）を利用できるようにするhisDが文献に記載されている(Hartman ,S.C.及びR.C.Mulligan（1988）Proc.Natl.Acad.Sci.85:8047-51)。最近になって、形質転換体を特定するためばかりではなく、特定ベクター系による一過性の或いは安定的なタンパク質発現の量を定量するために広く用いられる、例えばアントシアニン、β−グルクロニダーゼ及びその基質、GUS、及びルシフェラーゼ及びその基質、ルシフェリンのような可視マーカーがよく利用されるようになった（Rhodes,C.A.等（1995）Methods Mol.Biol.55:121-131）。マーカー遺伝子発現の存在／不存在によって目的の遺伝子の存在も示されるが、その存在及び発現は確認すべきである。例えばＨＣＲＰをコードする配列がマーカー遺伝子配列内に挿入された場合は、ＨＣＲＰをコードする配列を含む組換え体細胞をマーカー遺伝子の機能の存在により確認できる。別法では、マーカー遺伝子をＨＣＲＰをコードする配列と直列に配置して、両者が単一プロモータの制御下となるようにすることができる。誘導に応じてのマーカー遺伝子の発現、つまり選択は、通常直列に配置された配列の発現をも同時に示すことになる。或いは、当業者には周知の様々な方法により、ＨＣＲＰのコーディング配列を含みＨＣＲＰを発現する宿主細胞を識別できる。このような方法には、以下のものに限定はしないが、DNA-DNA或いはDNA-RNAハイブリダイゼーション及び、核酸及びタンパク質を検出及び／又は定量するための膜ベース、溶液ベース或いはチップベースの技術を含むタンパク質バイオアッセイ或いはイムノアッセイが含まれる。ＨＣＲＰをコードする配列のプローブ、一部、或いは断片を用いるDNA-DNA又はDNA-RNAハイブリダイゼーション若しくは増幅により、ＨＣＲＰポリヌクレオチド配列の存在を検出することができる。核酸増幅に基づくアッセイでは、ＨＣＲＰをコードするDNA或いはRNAを含む形質転換体を検出するために、核酸配列に基づくオリゴヌクレオチド或いはオリゴマーを用いる。このタンパク質に特異的なポリクローナル抗体及びモノクローナル抗体のいずれかを用いる、ＨＣＲＰポリペプチドの発現を検出し、測定するための種々のプロトコルが当業者には周知である。このようなプロトコルの例には、酵素結合免疫検定法（ELISA）、ラジオイムノアッセイ（RIA）及び蛍光表示式細胞分取器法（FACS）を含まれる。ＨＣＲＰポリペプチド上で２つの非干渉なエピトープに対して反応するモノクローナル抗体を利用する二部位モノクローナルベースイムノアッセイ（two-site,monoclonal-based immunoassay）が好適であるが、競合的結合アッセイも用いられる。これらアッセイの並びに他のアッセイは、他の文献、Hampton,R.等(1990;Serlogical Methods,a Laboratory Manual,APS Press,St. Paul MN)及びMaddox,D.E.等（1983,J.Exp.Med.158:1211-1216）に記載されている。他にも様々な標識及び結合技術が当業者には周知であり、種々の核酸及びアミノ酸のアッセイにおいて用いることができる。近縁な配列を検出するための、標識されたハイブリダイゼーションプローブやＰＣＲプローブを作成するための手段には、オリゴ標識、ニックトランスレーション法、末端標識、或いは標識ヌクレオチドを用いるＰＣＲ増幅などが含まれる。別法では、ＨＣＲＰコーディング配列、或いはその任意の部分を、ｍＲＮＡプローブの作成のためのベクターにクローン化する。そのようなベクターは当分野では周知で、市販されており、例えばT7、T3、或いはSP6のような適切なＲＮＡポリメラーゼ及び標識されたヌクレオチドを加えることにより、in vit roでＲＮＡプローブを合成するために用いることができる。これらの方法は、種々の市販のキット（Pharmacia Upjohn（Kalamazoo,MI）；Promega（Madison WI ）；及びU.S.Biochemical Corp．(Cleveland OH)）を用いて実行することができる。適切なリポーター分子、すなわち標識には、放射性核種、酵素、フルオレセント（蛍光剤）、化学発光剤或いは色素剤や、基質、補助因子、インヒビター、磁気粒子等が含まれる。ＨＣＲＰをコードするヌクレオチド配列で形質転換された宿主細胞を、コードされたタンパク質を細胞培地で発現させ、そこから回収するのに適した条件下で培養することができる。組換え体細胞により生成されるタンパク質は、用いられる配列及び／またはベクターに応じて、細胞内に分泌、つまり細胞内に含まれるようにすることができる。当業者には理解されるように、ＨＣＲＰをコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを、原核細胞か真核細胞の細胞膜を通してのＨＣＲＰ分泌を誘導するシグナル配列を含むように設計することができる。また他の作製物を用いて、ＨＣＲＰをコードする配列を、可溶性タンパク質の精製を容易にするポリペプチドドメインをコードするヌクレオチド配列に結合することができる。そのような精製を容易にするドメインには、以下のものに限定はしないが、固定化金属上での精製を可能にするヒスチジントリプトファンモジュールのような金属キレートペプチド、固定化免疫グロブリン上での精製を可能にするプロテインＡドメイン、並びにFLAGS伸長／アフィニティ精製システムにおいて用いられるドメイン（Immunex Corp.,Seattle WA）が含まれる。精製ドメインとＨＣＲＰの間にＸＡ因子或いはエンテロキナーゼ（Invitrogen,San Diego CA）に対して特異的な配列のような切断可能なリンカー配列を含めるのは精製を促進するのに役立つ。ＨＣＲＰをコードする配列とともに、６個のヒスチジン残基、それに続くチオレドキシン及びエンテロキナーゼ切断部位をコードする核酸配列を含むこのような発現ベクターの１つは、融合タンパク質を発現する。ヒスチジン残基がIMIAC(Pora th,J等(1992;Protein Exp.Purif.3:263-281)に記載のような固定化金属イオンアフィニティクロマトグラフィー)精製を促進するとともに、エンテロキナーゼ切断部位が融合タンパク質からのＨＣＲＰの精製のための手段となる。融合タンパク質を含むベクターについての解説は、Kroll,D.J.等（1993;DNA Cell Biol.12: 441-453）に記載されている。組換え体の産生に加えて、ＨＣＲＰの断片を、固層技術を用いた直接のペプチド合成で形成することもできる（Merrifield J.(1963)J.Am.Chem.Soc.85:2149-2 154参照）。in vitroタンパク質合成は手作業で行えるが、自動化することもできる。自動的な合成は、例えば、Applied Biosystem 431Aペプチドシンセサイザ（Perkin Elmer）を用いて行うことができる。ＨＣＲＰの種々の断片を個別に化学的に合成し、化学的方法を用いて結合して完全長分子を作り出してもよい。治療ＨＣＲＰ−１とatlantic clamを起源とするサイクリン特異的ユビキチンキャリアタンパク質Ｅ２−Ｃ（GI 1493838）及び酵母菌を起源とするユビキチンキャリアタンパク質Ｅ２−１８ＫＤ（GI 171866）の間に化学的及び構造的相同性が存在する。更に、ＨＣＲＰは炎症及び免疫応答に関連する組織及び癌性組織において発現される。従って、ＨＣＲＰ −１は、癌及び免疫疾患において一定の役割を果たしていると考えられる。詳述すると、ＨＣＲＰ−１の濃度又は活性の低下は、癌又は免疫疾患の発生と関連を有すると考えられる。従って、或る実施例では、癌の予防又は治療のために、ＨＣＲＰ−１又はその断片若しくは誘導体を患者に投与し得る。癌には、以下に限定されないが、腺癌、白血病、リンパ腫、黒色腫、骨髄腫、肉腫、及び奇形癌が含まれ、具体的には、副腎、膀胱、骨、骨髄、脳、乳房、子宮頚、胆嚢、神経節、胃腸管、心臓、腎臓、肝臓、肺、筋肉、卵巣、膵臓、副甲状腺、陰茎、前立腺、唾液腺、皮膚、脾臓、精巣、胸腺、甲状腺、及び子宮の癌が含まれ得る。別の実施例では、上述の癌を含む癌の予防又は治療のために、ＨＣＲＰ−１又はその断片若しくは誘導体を発現し得るベクターを患者に投与することもできる。更に別の実施例では、上述のような癌の予防又は治療のために、ＨＣＲＰ−１の活性を変調するアゴニストを患者に投与することもできる。別の実施例では、免疫疾患の予防又は治療のために、ＨＣＲＰ−１又はその断片若しくは誘導体を患者に投与し得る。このような疾患には、以下に限定されないが、ＡＩＤＳ、アジソン病、成人呼吸窮迫症候群、アレルギー、貧血症、喘息、アテローム性動脈硬化症、気管支炎、胆嚢炎、クローン病、潰瘍性大腸炎、アトピー性皮膚炎、皮膚筋炎、糖尿病、肺気腫、萎縮性胃炎、腎炎、痛風、グレーブス病、過好酸球増加症、過敏性腸症候群、エリテマトーデス、多発性硬化症、重症筋無力症、心筋又は心膜の炎症、変形性関節炎、骨粗鬆症、膵炎、多発性筋炎、リウマチ性関節炎、強皮症、シェーグレン症候群、及び自己免疫性甲状腺炎；癌と血液透析と体外循環の合併症；ウイルス、細菌、真菌、寄生虫、原虫、及び蠕虫の感染症、及び外傷が含まれ得る。別の実施例では、上述したものを含む免疫疾患の予防又は治療のために、ＨＣＲＰ−１又はその断片若しくは誘導体を発現し得るベクターを患者に投与することもできる。更に別の実施例では、上述したもののような免疫疾患の予防又は治療のために、ＨＣＲＰ−１の活性を変調するアゴニストを患者に投与することもできる。ＨＣＲＰ−２とマウスを起源とするサイクリンＢ（GI 506137）及びヒトを起源とするサイクリンＢ（GI 105763）の間に化学的及び構造的相同性が存在する。更に、ＨＣＲＰ−２は、癌性組織や胎仔の組織で発現される。従って、ＨＣＲＰ−２は、癌や発達障害において一定の役割を果たすと考えられる。詳述すると、ＨＣＲＰ−２の濃度又は活性の上昇は癌と関連を有し、ＨＣＲＰ−２の濃度又は活性の低下は発達障害と関連を有すると考えられる。従って、別の実施例では、発達障害の予防又は治療のために、ＨＣＲＰ−２又はその断片若しくは誘導体を患者に投与し得る。用語「発達障害」は、患者の器官又は器官系、即ち副腎、骨格系、生殖系等の発達に関連するあらゆる障害である。このような障害には、以下に限定されないが、尿細管性アシドーシス、貧血症、クッシング症候群、軟骨形成不全性小人症、てんかん、性腺形成異常症、シャルコー−マリー−ツース病や神経線維腫症のような遺伝性神経病、甲状腺機能低下症、水頭症、シドナム舞踏病や脳性麻痺のような発作障害、２分脊椎、及び先天性緑内障、白内障、又は感覚神経性聴力損失が含まれる。別の実施例では、上述のものを含む発達障害の予防又は治療のために、ＨＣＲＰ−２又はその断片若しくは誘導体を発現し得るベクターを患者に投与することもできる。更に別の実施例では、上述したものを含む発達障害の予防又は治療のために、ＨＣＲＰ−２の活性を変調するアゴニストを患者に投与することもできる。別の実施例では、癌の予防又は治療のために、ＨＣＲＰ−２の活性を低下させるアンタゴニストを患者に投与することができる。癌には、以下に限定されないが、腺癌、白血病、リンパ腫、黒色腫、骨髄腫、肉腫、及び奇形癌、具体的には、副腎、膀胱、骨、骨髄、脳、乳房、子宮頚、胆嚢、神経節、胃腸管、心臓、腎臓、肝臓、肺、筋肉、卵巣、膵臓、副甲状腺、陰茎、前立腺、唾液腺、皮膚、脾臓、精巣、胸腺、甲状腺、及び子宮の癌が含まれ得る。或る実施態様では、ＨＣＲＰ−２に特異的に結合する抗体を、アンタゴニストとして直接的に用いたり、或いはＨＣＲＰ−２を発現する細胞又は組織に薬物を送達するためのターゲティング又はデリバリー機構として間接的に用いることができる。別の実施例では、上述したものを含む癌の治療又は予防のために、ＨＣＲＰ− ２をコードするポリヌクレオチドの相補配列を発現するベクターを患者に投与することができる。別の実施例では、本発明のタンパタ質、アンタゴニスト、抗体、アゴニスト、相補配列、又はベクターの何れかを、他の適切な薬剤と組み合わせて投与することができる。当業者は、従来の医薬上の原理に基づいて、併用療法において使用するために適切な薬剤を選択することができるであろう。治療薬を組み合わせることにより、上述の種々の疾患の治療又は予防に効果をあげる相乗作用を与え得る。この方法を用いることにより、より低い容量の各薬剤で同じ治療効果を達成することができ、従って副作用の可能性を低下させることができる。ＨＣＲＰのアンタゴニスト又は抗体は、当分野において周知の方法を用いて製造することができる。詳述すると、精製されたＨＣＲＰを用いて抗体を作り出したり、或いはＨＣＲＰに特異的に結合するものを同定するべく薬物のライブラリーをスクリーニングすることができる。ＨＣＲＰに対する抗体は、当分野において周知の方法を用いて作り出すことができる。このような抗体には、以下に限定されないが、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、一本鎖抗体、Ｆａｂフラグメント、及びＦａｂ発現ライブラリーによって作られたフラグメントが含まれ得る。中和抗体（即ち二量体形成を阻害するもの）は、治療上の用途に特に好適である。抗体を産生するため、ＨＣＲＰ或いは免疫学的特性を保持するその任意の一部、断片或いはオリゴペプチドを注射することによって、ヤギ、ウサギ、ラット、マウス等を含む種々の宿主を免疫することができる。宿主の種に応じて、種々のアジュバントを免疫学的反応を増強するために用いることができる。そのようなアジュバントには、以下のものに限定はしないが、フロイントのアジュバント、水酸化アルミニウムのような無機質ゲルアジュバント、リゾレシチンのような界面活性物質アジュバント、プルロニックポリオールアジュバント、ポリアニオンアジュバント、ペプチドアジュバント、油性乳剤アジュバント、キーホールリンペットヘモシニアンアジュバント並びにジニトロフェノールアジュバントが含まれる。ヒトで使用するアジュバントのなかで、ＢＣＧ（カルメット‐ゲラン杆菌）及びコリネバクテリウム−パルヴム（Corynebacterium parvum）は特に好適である。ＨＣＲＰに対する特異的抗体を誘発するために用いられるペプチドは、５個以上のアミノ酸、より好ましくは１０個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列を有するものであるのが好ましい。またこれらの配列は、自然タンパク質のアミノ酸配列の一部と同一であり、小形の自然発生の分子の全アミノ酸配列を含んでいるのが好ましい。ＨＣＲＰアミノ酸の短いストレッチを、キーホールリンペットヘモシアニン及びキメラ分子に対して産生された抗体のような他のタンパク質の配列に融合してもよい。ＨＣＲＰのモノクローナル抗体は、培地内の連続株細胞によって抗体分子を産生する任意の技術を用いて調製できる。このような技術には、以下のものに限定はしないが、ハイブリドーマ技術、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術、及びＥＢＶ −ハイブリドーマ技術（Kohler,G.等(1975)Nature 256:495-497；Kozbor,D.等(1 983)Immunol Methods 81:31-42；Cote,R.J.等(1983)Proc.Natl.Acad.Sci.80:202 6-2030；Cole,S.P.等(1984)Mol.Cell Biol.62:109-120）が含まれる。さらに、適切な抗原特異性並びに生物活性を有する分子を得るための「キメラ抗体」の産生、即ちヒト抗体遺伝子へのマウス抗体遺伝子の結合のために開発された技術が用いられる（Morrison,S.L.等(1984)Proc.Natl.Acad.Sci.81:6851-68 55；Neuberger,M.S.等（1984）Nature 312:604-608；Takeda,S.等（1985）Natur e 314:452-454）。或いは、一本鎖抗体の生成のための周知技術を適用して、ＨＣＲＰ特異的一本鎖抗体を作り出すことができる。関連する特異性を有するがイディオタイプの構成が異なる抗体は、無作為の免疫グロブリン組み合わせライブラリーからの鎖再編成（chain shuming）によって作り出すことができる（Burto n D.R.(1991)Proc.Natl.Acad.Sci.88:11120-3）。また抗体は、文献（Orlandi,R.等(1989),Proc.Natl.Acad.Sci.86:3833-3837； Winter,G.等1991,Nature 349:293-299）に開示されているように高度に特異的な結合試薬のパネルや組換え免疫グロブリンライブラリーをスクリーニングすることにより、或いはリンパ球集団でのin vivo産生を誘導することにより作り出すこともできる。ＨＣＲＰに対する特異結合部位を含む抗体フラグメントも生成することができる。このようなフラグメントには例えば、限定はしないが、抗体分子のペプシンによる消化で生成することができるF(ab’)₂フラグメントや、F(ab’)₂フラグメントのジスルフィド架橋を減らすことにより生成することができるFabフラグメントが含まれる。別法として、所望の特異性を有するモノクローナルFabフラグメントを迅速かつ容易に同定できるように、Fab発現ライブラリーを作製してもよい（Huse,W.D.等（1989）Science 256:1275-1281）。種々のイムノアッセイを、所望の特異性を有する抗体を同定するためのスクリーニングに利用することができる。確立された特異性を有するモノクローナル抗体或いはポリクローナル抗体のいずれかを用いる競合的結合アッセイ或いは免疫放射線測定法の種々のプロトコルが当分野ではよく知られている。このようなイムノアッセイでは、ＨＣＲＰとその特異的抗体との複合体の形成、並びに複合体形成の測定が行われる。特定のＨＣＲＰタンパク質上の２つの互いに非干渉なエピトープに対して反応するモノクローナル抗体を用いる二部位モノクローナルベースイムノアッセイが好適であるが、競合的結合アッセイも用いられる(Maddox, 前出)。本発明の別の実施例では、ＨＣＲＰをコードするポリヌクレオチド、またはその任意の断片やアンチセンス配列を、治療目的で用いることができる。或る態様では、このタンパク質の合成を阻害することが望ましいような状況において、ＨＣＲＰをコードするポリヌクレオチドに対するアンチセンスを用いることができる。詳述すると、ＨＣＲＰをコードするポリヌクレオチドに対するアンチセンス配列で細胞を形質転換することができる。従って、アンチセンス配列を用いて、ＨＣＲＰ関連の組織損傷を予防したり、遺伝子機能の調節を達成することができる。このような技術は現在周知となっており、センス又はアンチセンスオリゴマー、若しくはより大きな断片を、ＨＣＲＰコーディング配列のコード領域や調節領域の種々の位置から設計することができる。レトロウイルス、アデノウイルス、ヘルペス或いはワクシニアウイルス由来の発現ベクター、或いは種々の細菌性プラスミドに由来する発現ベクターは、標的の器官、組織、または細胞群へのヌクレオチド配列の送達のために用いられる。当業者によく知られた方法を用いて、ＨＣＲＰをコードする配列のアンチセンスを発現する組換えベクターを作り出すことができる。これらの技術はSambrook等（前出）及びAusubel等（前出）に記載されている。所望のＨＣＲＰ断片を高レベルで発現する発現ベクターを細胞または組織にトランスフェクトすることにより、ＨＣＲＰをコードする遺伝子の機能を停止させることができる。このような作製物は、翻訳不可能なセンス配列或いはアンチセンス配列で細胞に導入するために用いることができいる。このようなベクターは、ＤＮＡへ組み込まれない場合ですら、全ての複製物が内在性ヌクレアーゼにより分解されるまで、ＲＮＡ分子を転写し続ける。このような一過性の発現は、非複製ベクターでも１ヶ月以上、適当な複製エレメントがベクター系の一部である場合には更に長い期間継続し得る。上述のように、ＨＣＲＰをコードする遺伝子の制御、５’、又は調節領域（シグナル配列、プロモータ、エンハンサ、及びイントロン）に対する相補配列、つまりアンチセンス分子（ＤＮＡ、ＲＮＡまたはＰＮＡ）を設計することにより遺伝子発現を変化させることができる。転写開始部位、例えばリーダー配列の＋１０〜−１０領域の間に由来するオリゴヌクレオチドが好適である。同様に、「三重らせん」塩基対合法を用いて阻害を達成することができる。三重らせん対合が有用なのは、それが、ポリメラーゼ、転写因子、或いは調節分子が結合するために二重らせんが十分にほどける能力を阻害するからである。三重らせんＤＮＡを用いた最近の治療法の進歩については、文献（Gee,J.E.等(1994)In:Huber, B.E.及びB.I．Carr,Molecular and Immunologic Approaches,Futura Publishing Co,Mt Kisco NY）に記載されている。リボザイムはＲＮＡの特異的切断を触媒することができる酵素性ＲＮＡ分子である。リボザイムの作用機序では、相補的標的ＲＮＡへのリボザイム分子の配列特異的ハイブリダイゼーションが行われ、その後エンドヌクレアーゼによる切断（endonucleolytic cleavage）がなされる。発明の範囲内には、ＨＣＲＰのエンドヌクレアーゼによる切断を特異的かつ効果的に触媒し得る人工合成のハンマーヘッド型リボザイム分子も含まれている。任意のＲＮＡ標的可能部分内の特異的なリボザイム切断部位を、初めに、配列 GUA、GUU並びにGUCが後続するリボザイム切断部位に対する標的分子を調べることによって同定する。ひとたびその同定がなされると、切断部位を含む標的遺伝子の領域に対応する１５〜２０個のリボヌクレオチドの間の短いＲＮＡ配列を、そのオリゴヌクレオチドの機能を停止させる２次構造の特徴について評価することが可能となる。候補の標的部分の適切性も、リボヌクレアーゼ保護アッセイを用いて相補的なオリゴヌクレオチドとのハイブリッド形成に対する接触性（acce ssibility）をアッセイすることにより評価することができる。本発明の相補的リボ核酸分子及びリボザイムは、ＲＮＡ分子を合成するのための当分野で周知の方法により作製することができる。これらの技術には、固相ホスホラミダイト（phosphoramidite）化学合成のようなオリゴヌクレオチドの化学的合成技術が含まれる。或いは、ＲＮＡ分子を、ＨＣＲＰをコードするＤＮＡ配列のin vivo及びin vitro転写により生成することができる。このようなＤＮＡ配列は、Ｔ７或いはＳＰ６のような適切なＲＮＡポリメラーゼプロモーターを有する多種のベクターに組み込むことができる。或いは、構成的に或いは誘導的にアンチセンスＲＮＡを合成するアンチセンスｃＤＮＡ作成物を、株細胞、細胞或いは組織内に導入することができる。ＲＮＡ分子はその細胞内安定性を高め及び半減期を長くするために修飾することができる。可能な修飾には、限定はしないが、その分子の５’末端か３’末端、或いはその両方へのフランキング配列の付加や、分子のバックボーン内においてホスホジエステラーゼ結合ではなくホスホロチオネート（phosphorothioate）或いは２’Ｏ−メチルを使用することが含まれる。このコンセプトは、ＰＮＡ生成固有のものであり、内在性エンドヌクレアーゼにより容易に認識されないアデニン、グアニン、シチジン、チミン、及びウリジンの、アセチル−、メチル−、チオ−形態、及び類似の改変形態とともに、イノシン、キュエオシン（queosine ）、及びワイブトシン（Wybutosine）のような従来あまり用いられなかった塩基を含めることによって、これら全ての分子に拡張することができる。細胞或いは組織内にベクターを導入するための多くの方法が利用可能であり、in vivo 、in vitro、及びex vivoの使用に対しても同様に適切なものである。ex vivo治療法の場合には、患者から採取された幹細胞にベクターを導入し、自家移植用のクローンとして増殖して同じ患者に戻す方法がある。またトランスフェクションによるデリバリー、リポソーム注入またはポリカチオンアミノポリマーによるデリバリー（Goldman,C.K.等(1997)Nature Biotechnology 15:462-66;引用により本明細書の一部とする）は、当分野でよく知られた方法を用いて実施することができる。上述の治療法の何れも、例えばイヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ウサギ、サル、及び最も好ましくはヒトのような哺乳類を含む、任意の適切な被験体に適用することができる。本発明の更に別の実施例では、上述の治療効果のいずれかをあげるために、医薬品組成物を薬学的に許容される担体とともに投与する。このような医薬品組成物は、ＨＣＲＰ、ＨＣＲＰに対する抗体、ＨＣＲＰの擬似物、アゴニスト、アンタゴニスト、又はインヒビターからなるものであり得る。この医薬品組成物は、単体で、或いは例えば安定剤のような１種以上の他の薬剤と組み合わせて、任意の滅菌した生体適合性の医薬用担体に含めて投与される。このような担体には、限定はしないが、生理食塩水、緩衝食塩水、ブドウ糖或いは水が含まれる。これらの分子は、患者に対して、単体で、或いは他の薬品やホルモンと結合して投与され得る。本発明で用いられる医薬品組成物の投与経路には、以下の経路に限定されないが、経口投与、静脈内投与、筋肉内投与、動脈内投与、髄内投与、くも膜下内投与、心室内投与、経皮投与、皮下投与、腹腔内投与、鼻腔内投与、経腸投与、局所投与、舌下投与、或いは直腸内投与が含まれ得る。これらの医薬品組成物は、活性成分に加えて、薬学的に用いられ得、調合物内への活性化合物の処理を容易にする賦形剤及び補助剤を含む適切な製薬学的に許容される担体を含み得る。調合或いは投与に関する技術の詳細は、“Remington' s Pharmaceutical Sciences”（Maack Publishing Co,Easton PA）の最新版において見ることができる。経口投与用の医薬品組成物は、当分野でよく知られる製薬学的に許容される担体を用いて適切な剤形に製剤される。このような担体により、医薬品組成物は、治療を受ける患者による経口及び鼻腔摂取のための、錠剤、丸剤、カプセル剤、液体剤、ゲル剤、シロップ剤、スラリー剤、懸濁液或いは類似の製剤として処方される。経口投与するための製剤は、活性化合物と固形の賦形剤とを結合することによって得ることができるが、所望に応じて、必要なら適切な補助剤を添加した後、得られた混合物を粉砕し、顆粒の混合物を処理して、錠剤或いは糖衣剤核を得ることができる。適切な賦形剤は、ラクトース、スクロース、マンニトール或いはソルビトールを含む砂糖のような糖質或いはタンパク質充填剤、とうもろこし、小麦、米、じゃがいも等からのでんぷん、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース或いはカルボキシルメチルセルロースナトリウムのようなセルロース、アラビアゴム或いはトラガカントのようなゴム、並びにゼラチン或いはコラーゲンのようなタンパク質である。必要ならば、架橋結合したポリビニルピロリドン、寒天、アルギン酸ナトリウムのようなアルギン酸或いはアルギン酸ナトリウムや、その塩のような、崩壊剤或いは可溶化剤が加えられる。糖衣剤核（dragee core）は、濃縮砂糖溶液のような適切な錠皮を与えられるが、溶液はアラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポルゲル剤、ポリエチレングリコール並びにまた二酸化チタン、ラッカー溶液及び適切な有機溶剤或いは溶剤混合物が含み得る。錠剤の識別のため、すなわち活性化合物の量、すなわち投与量を特徴付けるために染料或いは色素が錠剤或いは糖衣錠皮に加えられてもよい。経口投与可能な製剤は、ゼラチンからなるプッシュフィットカプセル及びゼラチンからなる柔らかい、密封されたカプセル、並びにグリセロール或いはソルビトールのような錠皮を含む。プッシュフィットカプセルは、ラクトース或いはでんぷんのような充填剤或いは結合剤、タルク或いはステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤、並びに付加的には安定剤と混合された活性処方組成物を含み得る。柔らかいカプセルでは、活性化合物は、安定剤とともに或いは安定剤なしで、脂肪油、液体パラフィン、液体ポリエチレングリコールのような適切な液体に溶解或いは懸濁される。非経口投与用の製剤は、水溶性の活性化合物の水溶液を含む。注射用として、本発明の薬品組成物を水溶液、好適にはハンクの溶液、リンゲル溶液或いは生理緩衝食塩水のような生理学的に適合性の緩衝液に入れて製剤することができる。水性の注入懸濁剤は、カルボキシルメチルセルロースナトリウム、ソルビトール或いはデキストランのような懸濁剤の粘性を高める物質を含み得る。更に、活性成分の懸濁液は、適切な油性注入懸濁剤として調製される。適切な親油性の溶媒或いは媒介物は、胡麻油のような脂肪油や、オレイン酸エチル、トリグリセリド或いはリポソームのような合成脂肪酸エステルを含む。また懸濁剤は、所望に応じて、溶解度を増加し濃縮度の高い溶液の調製を可能にする適切な安定剤或いは薬剤を含んでもよい。局所的投与または経鼻粘膜投与用には、浸透される特定の障壁に対して適切な浸透剤を用いて調合が行われる。このような浸透剤は、当技術分野において周知である。本発明の薬品組成物は周知の方法、例えば従来の混合処理、溶解処理、顆粒化処理、糖衣形成処理、研和処理、乳化処理、封入処理(entrappineg)処理或いは凍結乾燥処理により製造される。この医薬品組成物は塩類として提供されることもあり、限定はしないが、塩酸、硫酸、酢酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸等を含む、多くの酸とともに形成することができる。塩は、対応する遊離塩基形態である水性或いはプロトニック溶剤において、より可溶性が高くなる傾向がある。他の場合には、好適な製剤は、１ｍＭ〜５０ｍＭのヒスチジン、０．１％〜２％のショ糖、使用前に緩衝剤と結合させたｐＨ範囲４．５〜５．５にある２％〜７％のマンニトールにおける凍結乾燥粉末である。製薬学的に許容される担体内に製剤された本発明の化合物を含む組成物は、調製された後、適切な容器内に入れて、さらに提示した疾病状態の治療のためにラベル付けすることができる。ＨＣＲＰの投与の場合、このようなラベルには、投与の量、頻度、方法が表示される。本発明において使用するために適切な医薬品組成物は、活性成分を所望の目的を達成するための有効量含む組成物である。有効量の決定は、当業者の能力の範囲内で十分行うことができる。任意の化合物について、治療的有効量は、初めに、新生物細胞、或いは通常マウス、ウサギ、イヌ、ブタのような動物モデルの何れかの細胞培地のアッセイから推定される。次に、このような情報を利用して、ヒトにおける有効量や投与経路を決定することができる。治療上の有効な量とは、症状や状態を改善するタンパク質、その抗体、アンタゴニスト、またはインヒビターの量である。そのような化合物の毒性及び治療上の有効性は、例えばＬＤ５０（個体群の５０％の致死投与量）及びＥＤ５０（個体群の５０％における治療上の有効量、５０％有効量）を決定するための、細胞培地或いは実験動物における標準的な製薬学的方法により決定することができる。毒性と治療有効性との間の投与量比は治療指数であり、ＬＤ５０／ＥＤ５０の比として表すことができる。大きな治療指数を示す医薬品組成物が好ましい。これらの細胞培地のアッセイ及び付加的な動物研究から得られるデータは、ヒトへの使用に対する投与量の範囲を決める際に用いることができる。そのような化合物の投与量は、毒性がほとんど或いは全くなく、ＥＤ５０を達成する循環濃度の範囲内にあることが望ましい。投与量は、用いられる剤形、患者の感受性並びに投与経路に応じてこの範囲内で変化する。正確な投与量は治療されるべき患者を考慮して個々の医師により選択される。投与量及び投薬量は、十分なレベルの活性成分を与え、かつ所定の効果を維持するために調節される。考慮すべき付加的な要因は、疾患状態の重症度、または患者の年齢、体重並びに性別、食事、投与の時間及び頻度、併用する薬剤、反応感受性、並びに治療への耐性／反応を含む。長期的に作用する薬品組成物は３〜４日毎に、１週間毎に、或いは半減期及び特定の処方のクリアランス速度に応じて２週間に１度投与してもよい。通常の投与量は０．１〜１００，０００μｇの範囲にあって、全投与量は最大約１ｇであり、投与経路に応じて変わってくる。特定の投与量或いは送達の方法に関する手引きは、当分野の実施者が通常入手できる文献において見出すことができる。当業者なれば、ヌクレオチドに対しては、タンパク質やインヒビター用の剤形とは異なる剤形を採用するであろう。同様に、ポリヌクレオチドまたはポリペプチドの送達方式は、特定の細胞、状態、位置等によって決まってくる。診断別の実施例において、ＨＣＲＰに特異的に結合する抗体を、ＨＣＲＰの発現を特徴とする状態や疾病の診断や、ＨＣＲＰで治療を受けている患者のモニタリングのためのアッセイにおいて用いることができる。診断目的で有用な抗体は、上述の治療用のものと同一の方法で調製することができる。ＨＣＲＰの診断検査法には、ヒトの体液、細胞或いは組織の抽出物においてＨＣＲＰを検出するために抗体或いは標識を利用する方法が含まれる。本発明のポリペプチド及び抗体は、修飾したものでも、修飾なしでも用いることができ、共有結合、或いは非共有結合かのいずれかでリポーター分子と結合することにより標識することができる。種々のリポーター分子が周知となっており、その幾つかについては上記した。例えばELISA（酵素結合免疫測定法）、RIA（ラジオイムノアッセイ）並びにFACS（蛍光表示式細胞分取器法）を含む、ＨＣＲＰを測定するための種々のプロトコルが当分野では周知であり、これによってＨＣＲＰ発現の変化や異常を診断するための基礎が得られる。ＨＣＲＰの発現の正常値、つまり標準値は、哺乳類、好ましくはヒトの正常被験者から得られる体液或いは細胞抽出物とＨＣＲＰに対する抗体とを、複合体形成に適した条件の下で結合することによって得ることができる。標準の複合体形成量は、種々の方法、好ましくは測光手段を用いることにより定量することができる。被験者、対照標準、及び生検組織からの患部組織サンプルにおいて発現されたＨＣＲＰの量を、標準値と比較する。標準値と被験者の値との偏差で、疾病診断のパラメータが確立される。本発明の別の実施例では、ＨＣＲＰをコードするポリヌクレオチドを、診断目的で用いることができる。使用できるポリヌクレオチドには、オリゴヌクレオチド配列、アンチセンスＲＮＡ及びＤＮＡ分子、及びペプチド核酸（ＰＮＡ）が含まれる。このポリヌクレオチドは、ＨＣＲＰの発現が疾病と相関性を有する生検組織における遺伝子発現を検出し、定量するために用いられる。診断アッセイは、ＨＣＲＰが存在、不存在、及び過剰発現の何れの状態にあるかを区別したり、治療的介入の際にＨＣＲＰレベルの調節をモニタリングするのに役立つ。或る実施態様では、ＨＣＲＰまたは近縁な分子をコードする、ゲノム配列を含むポリヌクレオチド配列を検出できるハイブリダイゼーションプローブ或いはＰＣＲプローブを用いて、ＨＣＲＰをコードする核酸配列を同定することができる。そして、そのプローブの特異性、即ち、そのプローブが非常に高度な保存領域（例えば５’調節領域における１０個の独特のヌクレオチド）と、保存的である度合いの低い領域（例えば特に３’領域におけるシステイン残基の間の領域）の何れに由来するのかということ、及びハイブリダイゼーション或いは増幅の（高い、中程度の或いは低い）厳密性によって、そのプローブが自然発生ＨＣＲＰのみを同定するものであるか、或いはアレル配列や近縁な配列も同定するものであるかということが決まってくる。プローブは、近縁なインヒビターをコードする配列を検出するためにも用いることができ、好ましくは、これらのＨＣＲＰをコードする任意の配列から得られるヌクレオチドを少なくとも５０％含むべきである。本発明のハイブリダイゼーションプローブは、配列番号：２又は配列番号：４のヌクレオチド配列か、自然発生ＨＣＲＰのイントロン、プロモータ、及びエンハンサーエレメントを含むゲノムの配列に由来するものであり得る。ＨＣＲＰをコードするＤＮＡに対して特異的なハイブリダイゼーションプローブの作製のための他の手段には、ＨＣＲＰやＨＣＲＰ誘導体をコードする核酸配列を、ｍＲＮＡプローブ生成のためのベクターにクローン化する方法がある。このようなベクターは周知で市販されており、適切なＲＮＡポリメラーゼや適切な放射性標識ヌクレオチドを付加することにより、in vitroでのＲＮＡプローブを合成のために用いることができる。ハイブリダイゼーションプローブは種々のリポータ分子により標識することができ、この標識には、³²Ｐや³⁵Ｓのような放射性核種、アビジン／ビオチン結合系によりプローブに結合するアルカリホスファターゼのような酵素標識等が含まれる。ＨＣＲＰをコードするポリヌクレオチド配列を、ＨＣＲＰの発言に関連する状態、疾患、又は疾病の診断のために用いることができる。このような状態または疾病の例には、例えば副腎、膀胱、骨、骨髄、脳、乳房、子宮頚、胆嚢、神経節、胃腸管、心臓、腎臓、肝臓、肺、筋肉、卵巣、膵臓、副甲状腺、陰茎、前立腺、唾液腺、皮膚、脾臓、精巣、胸腺、甲状腺、及び子宮の癌；例えばＡＩＤＳ、アジソン病、成人呼吸窮迫症候群、アレルギー、貧血症、喘息、アテローム性動脈硬化症、気管支炎、胆嚢炎、クローン病、潰瘍性大腸炎、アトピー性皮膚炎、皮膚筋炎、糖尿病、肺気腫、萎縮性胃炎、腎炎、痛風、グレーブス病、過好酸球増加症、過敏性腸症候群、エリテマトーデス、多発性硬化症、重症筋無力症、心筋又は心膜の炎症、変形性関節炎、骨粗鬆症、膵炎、多発性筋炎、リウマチ性関節炎、強皮症、シェーグレン症候群、及び自己免疫性甲状腺炎；癌と血液透析と体外循環の合併症；ウイルス、細菌、真菌、寄生虫、原虫、及び蠕虫の感染症、及び外傷のような免疫疾患；及び例えば尿細管性アシドーシス、貧血症、クッシング症候群、軟骨形成不全性小人症、てんかん、性腺形成異常症、シャルコー−マリー−ツース病や神経線維腫症のような遺伝性神経病、甲状腺機能低下症、水頭症、シドナム舞踏病や脳性麻痺のような発作障害、２分脊椎、及び先天性緑内障、白内障、又は感覚神経性聴力損失のような発達障害が含まれる。ＨＣＲＰをコードするポリヌクレオチド配列は、ＨＣＲＰ発現の変化を検出するための生検組織や体液を試験するための、サザンブロット法或いはノーザンブロット法、ドットブロット法或いは他の膜ベース技術、ＰＣＲ技術、ディップスティック試験法(試験紙法)、ピン或いはチップ技術及びELISAアッセイにおいて用いることができる。このような定性的或いは定量的試験方法は当分野ではよく知られている。具体的な実施態様では、種々の癌、特に上述の癌の活性化または誘導を検出するアッセイにおいてＨＣＲＰをコードするヌクレオチド配列が役立つことがある。ＨＣＲＰをコードするヌクレオチド配列を標準的な方法で標識し、ハイブリダイゼーション複合体の形成に適した条件の下で患者の体液や組織サンプルに加える。適切なインキュベーション時間の経過後、このサンプルを洗浄しシグナルを定量して、標準値を比較する。生検サンプルまたは抽出サンプルにおけるシグナルの量が、比較できる対照サンプルのシグナル量と有意に異なっている場合、このヌクレオチド配列はサンプルのヌクレオチド配列とハイブリダイズしており、サンプルにおけるＨＣＲＰをコードするヌクレオチド配列のレベルの変化が存在することは、関連疾患の存在を示している。このようなアッセイは、動物実験、臨床試験、または個々の患者の治療のモニタリングにおける特定の治療措置の効果を評価するために用いることもできる。ＨＣＲＰの発現が関係する疾病の診断の基礎を得るために、正常な、或いは標準の発現プロフィールを確立する。この標準プロフイールは、動物或いはヒト何れかの正常な被験者から得られる体液或いは細胞抽出物を、ハイブリダイセーション或いは増幅に適切な条件下で、ＨＣＲＰをコードする配列又はその一部分と結合することにより確立される。標準のハイブリッド形成量は、既知の量の実質的に精製されたＨＣＲＰが用いられる同一の実験で得られる値と、正常被験者に対して得られる値とを比較することにより定量することができる。正常なサンプルから得られた標準値は、疾病の症状を示す患者からのサンプルから得られる値と比較することができる。標準値と被験者値との偏差を用いて疾病の存在を確認する。ひとたび疾患が確認され、治療プロトコルが開始されると、患者での発現レベルが正常な患者において観察されるレベルに近づき始めたか否かを評価するために、このようなアッセイが定期的に繰り返される。継続的なアッセイから得られる結果を用いて、数日間或いは数ヶ月の期間にわたる治療効果を知ることができる。癌については、患者の生検組織において転写物が比較的少ない量存在することが疾病の発生の素因を示し、つまり実際の臨床的症状が現れる前に疾病を検出する手段となり得る。この型の一層確定的な診断により、医療従事者が予防的処置を講じたり、より早期に積極的な治療を開始することが可能となり、癌の発生や更なる進行を予防することができるようになり得る。ＨＣＲＰをコードするオリゴヌクレオチドの別の診断目的の使用では、ＰＣＲを使用することがある。このようなオリゴマーは一般には化学的に合成するが、酵素を用いて作製したり、或いはin vitroで作り出すこともできる。オリゴマーは、特定の遺伝子或いは状態を識別するために最適な条件下で用いられる２つのヌクレオチド配列、即ちセンス方向（５’→３’）のヌクレオチド及びアンチセンス方向（３’←５’）のヌクレオチドからなる。同一の２つのオリゴマー、入れ子オリゴマーの組、或いはオリゴマーの縮重プールでさえ、近縁なＤＮＡまたはＲＮＡ配列の検出や定量のためのより厳密性の低い条件の下であっても用いることができる。さらにＨＣＲＰの発現を定量するための方法には、放射性標識（radiolabelin g）或いはビオチン標識ヌクレオチドの利用、コントロールの核酸の同時増幅（c oamplification）の利用、並びに実験結果を補完して引かれた標準的なグラフ曲線の利用も含まれる（Melby,P.C.等1993 J.Immunol Methods,159:235-44；Dupla a,C.等(1993)Anal.Biochem.229-236）。多数のサンプルの定量は、ELISA形式の連続アッセイを実行することにより一層迅速に行うことができる。このアッセイでは目的のオリゴマーが様々な希釈溶液中に存在し、分光光度計を用いる分析或いは比色分析反応により迅速に定量することができる。別の実施例では、ここに開示する任意のポリヌクレオチド配列を起源とするオリゴヌクレオチドをマイクロアレイにおける標的として用い得る。マイクロアレイを用いることにより、多くの遺伝子の発現レベルを同時にモニタし（転写物イメージを生成する）、また遺伝子の変異体、変異及び多形性を同定することができる。この情報は、遺伝子の機能の決定や、疾病の遺伝的な基礎の理解、疾病の診断、及び治療薬の開発や活性のモニタリングにおいて役立つ（Heller,R．等.(1997)Proc.Natl.Acad.Sci.94:2150- 55）。或る実施例では、ＰＣＴ出願ＷＯ 95/11995(Chee等.)、Lockhart,D.J．等.(19 96;Nat.Biotech.14:1675-1680)及びSchena,M．等.(1996;Proc.Natl.Acad.Sci.93 :10614-10619に記載の方法によりマイクロアレイを準備し、利用する。上記の文献はここに引用することにより本明細書の一部とする。マイクロアレイは、好ましくは、固体支持体に固定された、通常は合成アンチセンスオリゴヌクレオチドかｃＤＮＡの断片の何れかである、数多くの独特で一本鎖の核酸配列からなる。マイクロアレイは、既知の５’又は３’配列をカバーするオリゴヌクレオチド、完全長配列をカバーする連続的なオリゴヌクレオチド、又は配列の長さに沿った特定の領域から選択された独特のオリゴヌクレオチドを含み得る。マイクロアレイにおいて用いられるポリヌクレオチドは、特定の細胞の型、発達又は疾病の状態について共通な１又は２以上の未同定ｃＤＮＡに特異的な、或いは少なくとも配列の断片が既知である標的の遺伝子又は遺伝子群に特異的なオリゴヌクレオチドであり得る。マイクロアレイ用に既知の配列に対するオリゴヌクレオチドを製造するために、ヌクレオチド配列の５’又は又はより好ましくは３’末端からコンピュータアルゴリズムを用いて目的の遺伝子を検定する。このアルゴリズムは、その遺伝子に独特な、ハイブリダイゼーションに適した範囲内のＧＣ含量を有し、且つハイブリダイゼーションを妨げ得る推定２次構造を有していない決まった長さのオリゴマーを同定する。このオリゴヌクレオチドは、光照射化学プロセスを用いて基板上の所定の領域において合成される。この基板は、紙、ナイロン、又は他のタイプのメンブラン、濾紙、チップ、スライドガラス、又は他の任意の適切な固形支持体であり得る。別の実施態様では、オリゴヌクレオチドが、ＰＣＴ出願ＷＯ 95/251116（Bald eschweiler等.）に記載のように化学結合プロシージャ及びインクジェット装置を用いることによって基板の表面上で合成され得る。上記ＰＣＴ出願はここに引用することにより本明細書の一部とする。別の態様では、ドットブロット（又はスロットブロット）に類似した「格子型」アレイを用いて、真空システム、熱、ＵＶ、機械的又は化学的結合プロシージャを用いてｃＤＮＡ断片又はオリゴヌクレオチドを基板の表面上に配置し結合することができる。上述のようなアレイは、手で製作するか、或いは市販の装置(スロットブロット又はドットブロット装置)、材料（任意の適切な固形支持体）、及び機械（ロボット装置を含む）を用いることにより製作することができ、８ドット、２４ドット、９６ドット、３８４ドット、１５３６ドット、又は６１４４ドット、若しくは市販の器具で有効に使用できるような他のドット数の格子を有する。マイクロアレイを用いるサンプル解析を行うために、生物学的サンプルからのＲＮＡ又はＤＮＡをハイブリダイゼーションプローブにする。このｍＲＮＡは単離され、ｃＤＮＡが作られて、アンチセンスＲＮＡ(ａＲＮＡ)を作るためのテンプレートとして用いられる。ａＲＮＡは蛍光ヌクレオチドの存在のもとで増幅され、標識されたプローブはマイクロアレイと共にインキュベートされて、プローブ配列がマイクロアレイの相補的なオリゴヌクレオチドとハイブリダイズする。インキュベーション条件は、ハイブリダイゼーションが正確な相補的な一致又は様様なレベルのより低い相補性をもってハイブリダイゼーションが発生するように調節される。ハイブリダイズしたかったプローブを除去した後、スキャナーを用いて、蛍光のレベル及びパターンを求める。スキャンされたイメージを調べて、マイクロアレイ上の各オリゴヌクレオチド配列の相補性の程度及び相対的な量を求める。生物学的サンプルは、体液（例えば血液、尿、唾液、痰、胃液等）、培養された細胞、生検組織、又は他の組織調製物から得ることができる。検出システムを用いることにより、全ての個別の配列について同時にハイブリダイゼーションの不存在、存在、及び量を測定することができる。このデータは、サンプルにおける配列、突然変異、変異、又は多形体についてのラージスケールの相関性の研究のために用いることができる。本発明の別の実施例では、ＨＣＲＰをコードする核酸配列を用いて、自然発生のゲノム配列マッピングのためのハイブリダイゼーションプローブを作り出すこともできる。この配列を、特定の染色体、染色体の特定の領域、又は人工染色体作成物にマッピングすることができる。前記人工染色体作成物には、例えばヒト人工染色体（ＨＡＣ）、酵母菌人工染色体（ＹＡＣ）、細菌人工染色体（ＢＡＣ）、細菌性Ｐ１作成物又は一本鎖染色体ｃＤＮＡライブラリーがあり、Price,C. M.(1993)Blood Rev.7:127-134，及びTrask,B.J.(1991)Trends Genet.7:149-154 にその概要が記載されている。蛍光in situハイブリダイゼーション(FISH、Verma等(1988)Human Chromosomes :A Manual of Basic Technique ,Pergamon Press,New York,NY”に記載)は、他の染色体マッピング技術及び遺伝子地図データと関係を有し得る。遺伝子地図データの例は、種々の科学誌や、Online Mendelian Inheritance in Man（OMIM）に見ることができる。物理的染色体地図上でのＨＣＲＰをコードする配列の位置と、特定の疾病（または特定の疾病の素因）との相関関係を助けとして、ある遺伝病が関係するＤＮＡの領域の限界決定ができる。本発明のヌクレオチド配列を用いて、正常者とキャリアまたは患者との遺伝子配列の違いを検出することができる。染色体調製物のin situハイブリダイゼーション及び確定された染色体マーカーを用いる連鎖解析のような物理的地図作成技術は、遺伝子地図を延長するために大変重要である。多くの場合、特定のヒト染色体の数或いは腕が未知であっても、マウスのような別の哺乳類種の染色体上の遺伝子配置から、関連するマーカーがわかる。新しい配列は、物理的マッピングにより染色体のアーム、或いはその一部へ割当てることができる。これは位置クローニング或いは他の遺伝子発見技術を用いて疾患遺伝子を調査する研究者に貴重な情報を提供する。ひとたび毛細血管拡張性運動失調（AT）のような疾患或いは症候群が、特定のゲノム領域へ、例えばATならば11q22-23(Gatti,R.A.等(1988)Nature 336:577-580)へ、遺伝子連鎖によって粗い局所化がなされれば、その領域にマッピングされる任意の配列は、さらなる研究のための関連する遺伝子、或いは調節遺伝子ということになる。本発明のヌクレオチド配列は、正常者とキャリアまたは患者との間の、転座、逆位等による染色体位置の違いを検出するために用いることもできる。本発明の別の実施例では、ＨＣＲＰや、その触媒作用性または免疫原性フラグメント或いはオリゴペプチドを、種々の薬物スクリーニング技術において治療用化合物のスクリーニングのために用いることができる。そのような試験において用いられるフラグメントは、溶液に遊離した形態か、固体支持体へ付着したものか、細胞表面へ付着したものか、或いは細胞内に存在するものであり得る。ＨＣＲＰと試験される薬剤との結合複合体形成を測定することができる。ＨＣＲＰポリペプチドへの適切な結合親和性を有する化合物の高スループットスクリーニングのために用いることができる別の薬物スクリーニング技術が、公開されたPCT出願ＷＯ84/03564に詳細に記載されでいる。この方法をＨＣＲＰに適用する場合には、多数の異なる小形ペプチドの試験用化合物を、プラスチックピン或いは他の表面のような固体基質上で合成する。ポリペプチド試験用化合物をＨＣＲＰ又はその断片と反応させ、洗浄する。次いで結合ＨＣＲＰを当分野で周知の方法により検出する。また、前述の薬物スクリーニング技術において使用するために、精製ＨＣＲＰをプレート上に直接コーティングすることもできる。この他、ペプチドを捕捉し固体支持体上にペプチドを固定するために非中和抗体を用いることができる。別の実施例では、ＨＣＲＰに結合し得る中和抗体が、ＨＣＲＰとの結合について試験化合物と特異的に競合する競合的薬物スクリーニングアッセイを使用することができる。このように、抗体を用いて、１または２以上のＨＣＲＰと共通のエピトープを有する任意のペプチドの存在を検出することができる。更に別の実施例では、ここに開示するＨＣＲＰをコードするヌクレオチド配列は、その新技術が、以下に限らないが、例えばトリプレット遺伝暗号及び特異的塩基対合相互作用のような特性を含む、現在周知のヌクレオチド配列の特性に基づく技術であれば、まだ開発されていない分子生物学的技術においても用いることができる。以下に示す本発明の実施例は、単なる例示であって、本発明をこの実施例に限定しようとするものではない。実施例１ｃＤＮＡライブラリーの作製 COLNFET02 COLNFET02 ｃＤＮＡライブラリーを、２０週目の白人女子胎児から得た結腸組織から作製した。妊娠中の母親は、第１三半期において７日間、気管支炎のためにエリスロマイシンを投薬されていた（specimen#RU95-10 -0739;HAM,Exton,PA）。冷凍組織を、Brinkmann Homogenizer Polytron PT-3000（Brinkmann Instrume nts,Westbury,NJ）を用いて、グアニジウムイソチオシアネート溶液の中でホモジナイズし溶解した。この溶解産物を、Beckman L81-70M UltracentrifugeにおいてBeckman SW28 rotor（Beckman Instruments）を用いて、5.7Mの塩化セシウムクッションを通して、室温で18時間、一分当たり25,000回転で遠心分離した。酸性フェノールpH4.7を用いてＲＮＡを抽出し、0.3Mの酢酸ナトリウム及び2.5倍量のエタノールを用いて沈殿させ、ＲＮアーゼの無い水に再懸濁し、37℃でＤＮアーゼ処理した。このＲＮＡの抽出と沈殿を前回と同様に反復した。次にこのｍＲＮＡを、Qiagen Oligotex kit（QIAGEN，Inc.，Chatsworth，CA）を用いて単離し、ｃＤＮＡライブラリーの作製に用いた。このｍＲＮＡは、SuperScript Plasmid System for cDNA Synthesis and Plas mid Cloning（Cat.#18248-013,Gibco/BRL）の推奨プロトコルに従って取り扱った。CONUTUT01 ｃＤＮＡはSepharose CL4Bカラム（Cat.#275105-01,Pharmacia ）で分画化し、４００ｂｐを越えるｃＤＮＡをpSportＩにリゲートした。次にこのプラスミドpSportＩをDH5a^TMコンピテント細胞（Cat.#18258-012,Gibco/B RL ）に入れて形質転換させた。 HMCINOT01 ヒトマスト細胞HMCINOT01 ｃＤＮＡライブラリーを、Stratagene社（Stratage ne,La Jolla,CA 92037）に依頼し、カスタム品として、培養したＨＭＣ−１細胞から精製されたｍＲＮＡを用いて作製した。このライブラリーは、Stratagene社が概ね以下に説明するように作製した。ヒトマスト細胞（ＨＭＣ−１）ｃＤＮＡライブラリーは、ヒトマスト細胞からポリ（Ａ＋）ＲＮＡ（ｍＲＮＡ）を精製し、次にｍＲＮＡの二本鎖相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）複製を酵素を用いて合成することによって作製した。合成アダプターオリゴヌクレオチドをｃＤＮＡの末端に連結して、このｃＤＮＡをラムダベクターに挿入できるようにした。ＨＭＣ−１ライブラリーは、Uni-ZAP^TMベクターシステム（Stratagene）を用いて作製した。ＨＭＣ−１のｃＤＮＡライブラリーは、ＤＮＡプローブか抗体プローージミド（Stratagene）はin vivoで速やかに切除することができる。（Stratagene）に感染させた。この他の一方向性ベクターには、以下に限定されないが、pcDNAI（Invitrogen.San Diego，CA）やpSHlox-1（Novagen,Madison WI ）が含まれるであろう。２ｃＤＮＡクローンの単離及び配列決定ファージミドに組込まれた形態の個々のｃＤＮＡクローンを、in vivo切除プロセスによって得た。このプロセスでは、宿主菌株にλライブラリーファージとｆ１ヘルパーファージを同時感染させる。ライブラリーを含むファージとヘルパーファージの双方に由来するタンパク質がλＤＮＡにニックを入れ、ラムダ標的ＤＮＡ上の決まった配列から新たなＤＮＡ合成を開始させ、小形の一本鎖環状ファージミドＤＮＡ分子を作っＤＮＡ配列とｃＤＮＡインサートを含んでいた。ファージミドＤＮＡを細胞から放出させ精製して、新たな宿主細胞に再感染するのに用いた。この宿主細胞で二本鎖のファージミドＤＮＡが作られた。このファージミドはβラクタマーゼの遺伝子を有しているため、新たに形質転換された細菌は、アンピシリンを含む培地で選択される。ファージミドＤＮＡは、Magic Minipreps^TM DNA Purification System（catal ogue#A7100.Promega Corp:,Madison,WI 53711）を用いて精製した。このＤＮＡは精製用レジンから溶出され、ＤＮＡシークエンシング及び他の解析操作のために調製された。 Purification System（QIAGEN Inc,Chatsworth,CA）を用いても精製することができる。このＤＮＡは、精製用レジンから溶出され、ＤＮＡシークエンシング及び他の解析操作のために調製された。ファージミドＤＮＡを精製するための別の方法では、Advanced Genetic Techn ologies Corp．(Gaithersburg,Maryland,Catalog No.77468)から市販されている Miniprep Kitを利用する。このキットは、９６穴形式で、９６０回の精製のために十分な試薬が備えられたものである。各キットは、推奨プロトコルを有するが、以下の変更点を除いてこのプロトコルを採用した。初めに、９６個をウェルを、それぞれ25mg/Lのカルベニシリン及び0.4％のグリセロールと共に１ｍｌの滅菌Terrific Broth（Catalog#22711）で満たす。ウェルに植菌した後、最近を24 時間インキュベートし、60μlの溶解バッファーに溶解する。遠心分離（１分当たり2900回転で５分間）にかけた後、ブロックの内容物を一次濾板(primary fil ter plate)に加える。イソプロパノールをTRISバッファーに加えるオプションのステップは行わない。プロトコルの最終ステップの後、サンプルを保管のために 96穴ブロックに移す。ファージミドＤＮＡを精製するための別の方法では、REAL Prep 96 Plasmid K it（Catalog#26173,QIAGEN,Inc.）を用いる。このキットでは、マルチチャネル試薬ディスペンサを用いて96穴ブロックにおいて96のサンプルを同時に精製することができる。推奨プロトコルを用いたが、以下の点を変更した。（１）25mg/Lのカルベニシリン及び0.4％のグリセロールと共に1mlの滅菌Terrific Broth（Catalog#22711,Gibco/BRL）において細菌を培養した。（２）植菌の後、培地を19時間インキュベートし、インキュベーションの終わりに、細胞を0.3mlの溶解バッファに溶解した。（３）イソプロパノール沈殿の後、プラスミドＤＮＡペレットを0.1mlの蒸留水に再懸濁した。プロトコルの最終ステップの後、サンプルを96穴ブロックに移し４℃で保管した。このｃＤＮＡの配列決定は、Peltier Thermal Cyclers（PTC200 from MJ Rese arch,Watertown,MA）及びApplied Biosystems 377 DNA Sequencing Systemsと組み合わせてHamilton Micro Lab 2200（Hamilton,Reno,NV）を用いてSangerらの方法（1975,J.Mol.Biol.94:441f）により行い、読み枠を決定した。３ｃＤＮＡクローン及びそれらの類推されるタンパク質の相同性検索COLNFET0 2 配列表のヌクレオチド配列及び、それらから類推されるアミノ酸配列を問い合わせ配列として用いて、例えばGenBank,SwissProt、BLOCKS、及びPima IIのようなデータベースを検索した。これらのデータベースには既に同定された配列が注釈付きで含められており、BLAST（Basic Local Alignment Toolを表す）を用いて相同性（類似性）を有する領域をこのデータベースのなかから検索した（Alts chul S.F.(1993)J.Mol.Evol.36:290-300;Altschul.S.F.等(1993)J.Mol.Biol.215 :403-410）。 BLASTはヌクレオチド及びアミノ酸配列の両方のアライメントを生成して配列類似性を決定する。そのアライメントの局所性のために、BLASTは厳密な一致、すなわち原核生物（細菌）や真核生物（動物、菌類、又は植物）を起源とするホモログを求める際に特に有効である。一次配列パターンや二次構造ギャップペナルティを処理する際には、本明細書に一体に引用されたSmith等(1992,Protein Engineering 5:35-51)に記載のもののような他のアルゴリズムを用いることができる。本明細書に開示された配列の長さは少なくとも49ヌクレオチドであり、不必要な塩基は12％以下である（ここで、ＮはＡ、Ｃ、Ｇ、又はＴ以外と記録されたものである）。 BLAST法は、本明細書に一体に引用されたKarlin等（前出）に詳細に記載されているように、問い合わせ配列とデータベースの配列の一致を検索する。BLAST は発見したあらゆる配列の一致の統計的有意性を評価して、ユーザが選択した有意性の閾値を満たす一致のみを報告する。本出願での閾値は、ヌクレオチドで１０^-25、ペプチドで１０^-14に設定した。インサイト社のヌクレオチド配列を、霊長類（pri）、げっ歯類（rod）、及び他の哺乳類配列（mam）のGenBankデータベースで検索した。次に同じクローンから類推されたアミノ酸配列を、GenBankの機能性タンパク質データベース、哺乳類（mamp）、脊椎動物（vrtp）、及び真核生物（eukp）で、相同性について検索した。これらのデータベースは特定の一致をGixxx±pという形式で報告した（ここでxxxはpri;rod等であり、存在の場合はp=ペプチドである）。 HMCINOT01 Applied Biosystems社で開発された検索アルゴリズムを、INHERIT 670^TM配列解析システムに組み込んで用いて、各ｃＤＮＡの配列をGenBankの配列と比較した。このアルゴリズムでは、Pattern Specification Language（TRW社、LosAnge les CA）を用いて相同な領域を決定した。配列の比較をどのように行うかを決定する３つのパラメータは、ウィンドウサイズ、ウィンドウオフセット、及び誤差許容度であった。これら３つのパラメータの組を用いて、対象の配列と相同な領域を含む配列をＤＮＡデータベースから検索し、適切な配列には、初期値とともにスコアが付けられた。次に、これらの相同な領域をドットマトリクスホモロジーブロット法を用いて検定し、相同な領域と偶然の一致とを区別した。相同性検索の結果は、Smith-Waterman alignmentsを用いて表示した。ペプチド及びタンパク質配列の相同性は、INHERIT 670配列解析システムをＤＮＡ配列の相同性検索で用いたのと同様に用いて確かめた。Pattern Specificat ion Language及びパラメータウィンドウを用いて、タンパク質データベースから相同性領域を含む配列を検索し、その結果には初期値とともにスコアが付けられた。ドットマトリクスホモロジーブロット法を用いて検定し、有意な相同性を有する領域と偶然の一致とを区別した。 BLASTは、Basic Local Alignment Search Tool（Altschul,S.F.(1993)J.Mol.E vol.36:290-300;Altschul,SF等(1990)J Mol Biol215:403-410）の略称であり、これを用いて局部的な配列アライメントを検索した。BLASTはヌクレオチド及びアミノ酸配列の両方のアライメントを作成して配列類似性を求める。そのアライメントの局所性のために、BLASTは厳密な一致、すなわちホモログを求める際に特に有効である。BLASTは間隙を含まない一致を求めるのに役立つ。BLASTアルゴリズム出力の基本的な単位は、High-scoring Segment Pair(HSP)である。 HSPは２つの配列フラグメントからなり、両フラグメントは任意ではあるが、そのアライメントが局所的に最大となっている等しい長さものであり、そのアライメントスコアはユーザにより設定された閾値であるカットオフスコアを満足している、即ち、カットオフスコアを超えている。BLASTアプローチは問い合わせ配列とデータベース配列との間の HSPを見つけ出すものであり、見出された任意の一致の統計的有意性を評価し、そのユーザが設定した有意性の閾値を満足する一致のみを報告するものである。パラメータＥはデータベース配列一致を知らせるための統計的に有意な閾値を確定するパラメータである。Ｅは全データベース検索の情況においてHSP（或いはH SPの組）生起の予測頻度の上限として解釈される。その一致がＥを満足する任意のデータベース内の配列がプログラム出力において報告される。４ノーザン法による解析ノーザン解析は、標識されたヌクレオチド配列と特定の細胞型または組織に由来するＲＮＡが結合したメンブランとのハイブリッド形成を伴う、遺伝子の転写物の存在を検出するために用いられる実験技術である（Sambrook等、上述）。 BLAST（Altschul,S.F.1993及び1990，上述）を用いる類似のコンピュータ技術で、GenBankまたはLIFESEQ^TMデータベース（Incyte,PaloAlto CA）のようなデータベースにおける同一のまたは近縁な分子を検索した。この解析は、多くの膜ベースのハイブリダイゼーションより非常に短時間で行うことができる。更に、コンピュータ検索の感度を変更して、ある一致が正確な一致か、相同的であるかの分類を決定することができる。検索の基準値は、積スコア（product score）であり、これは以下の式で定義されるものである。（配列の一致（％）×最大BLASTスコア（％））／１００この積スコアでは、２つの配列間の類似性の程度、及び配列の長さの一致の双方が考慮されている。例えば、積スコアが４０の場合は、一致は誤差が１〜２％の範囲で正確であり、スコアが７０の場合は正確に一致している。相同な分子は、通常積スコアとして１５〜４０を示すものを選択することにより同定されるが、スコアの低いものは近縁関係にある分子として同定される。検索の結果は、完全長配列、又はその部分が存在するライブラリー、配列の存在量（abundance）、及びパーセント存在量（percent abundance）のリストとして報告される。存在量は、特定の転写物の検出回数を直接反映し、パーセント存在量は、存在量をライブラリー内で検出された配列の総数で除したものである。５ＨＣＲＰをコードする配列の延長インサイト社クローンNo.7755及び1308478の核酸配列を用いて、部分的ヌクレオチド配列を完全長まで伸長させるためのオリゴヌクレオチドプライマーを設計した。一方のプライマーはアンチセンス方向（ＸＬＲ）の延長を開始するために合成し、他方のプライマーはセンス方向（ＸＬＦ）に配列を延長するために合成した。これらのプライマーを用いて、周知のＨＣＲＰ配列を「外側に」延長し、対象の制御領域の新しい未知のヌクレオチド配列を含むアンプリコンを生成した。初めのプライマーは、OLIGO 4.06（National Biosciences社）、或いは他の適切なプログラムを用いて、長さが２２〜３０ヌクレオチドで５０％以上のＧＣ含量を有し、かつ約６８〜７２℃の温度で標的配列にアニールするように設計した。ヘアピン構造及びプライマー−プライマー二量体化を生じるような任意のヌクレオチドのストレッチの延長は避けた。選択されたヒトｃＤＮＡライブラリー（Gibco/BRL）を用いて配列を延長した。２以上の延長が必要な場合は、既知領域をさらに延長するために追加のプライマーの組を設計する。 XL-PCRキット（Perkin Elmer）の説明書の指示に従って、酵素と反応混合物とを完全に混合することにより、高い忠実度の増幅がなされる。４０pmolの各プライマーと、推奨された濃度のキットの他の全ての成分とから増幅を開始する場合、Peltier Thermal Cycler（PTC200；M.J.Reserch,Wa tertown MA）を用いて、以下のパラメータでＰＣＲを行った。ステップ１９４℃で１分間（初期変性）ステップ２６５℃で１分間ステップ３６８℃で６分間ステップ４９４℃で１５秒間ステップ５６５℃で１分間ステップ６６８℃で７分間ステップ７ステップ４〜６をさらに１５サイクル反復ステップ８９４℃で１５秒間ステップ９６５℃で１分間ステップ１０６８℃で７分１５秒間ステップ１１ステップ８〜１０を１２サイクル反復ステップ１２７２℃で８分間ステップ１３４℃（その温度を保持）反応混合物の５〜１０μｌのアリコットを、低濃度（約０．６〜０．８％）アガロースミニゲル上での電気泳動で解析して、反応物が配列を延長することに成功したか否かを決定した。最も大きな生成物或いはバンドを選択して、ゲルから切り出し、QIAQuick^TM（QIAGEN Inc.,Chatsworth,CA）を用いて精製し、クレノウ酵素を用いて一本鎖ヌクレオチドの延び出しを切り取って再結合及びクローニングを容易にする平滑末端を作った。エタノール沈殿の後、生成物を１３μｌのライゲーション緩衝液内に再溶解し、１μｌのＴ４−ＤＮＡリガーゼ（１５単位）及び１μｌのＴ４ポリヌクレオチドキナーゼを加えて、その混合物を室温で２〜３時間、或いは１６℃で一昼夜インキュベートした。コンピテントな大腸菌細胞（４０μ ｌの適切な溶媒内にある）を、３μｌのライゲーション混合物を用いて形質転換し、８０μｌのＳＯＣ培地（Sembrook等、上記）で培養した。３７℃で１時間のインキュベーションの後、全ての形質転換混合物を、2xCarbを含むLuria Bertan i（LB）寒天（Sembrook等、上記）上にのせた。後日、いくつかのコロニーを各プレートから無作為に選択し、適切な市販の無菌の９６穴マイクロタイタープレートの個々のウェル内に入れられた１５０μｌの液状LB/2xCarb培地で培養した。さらに後日、５μｌの各一昼夜の培養物を非無菌９６穴プレート内に移し、水で１：１０に希釈した後、それぞれ５μｌのサンプルをＰＣＲアレイに移した。ＰＣＲ増幅のため、４単位のｒＴｔｈＤＮＡポリメラーゼを含む１８μｌの濃縮ＰＣＲ反応混合物（３．３ｘ）、ベクタープライマー、並びに延長反応に用いられる遺伝子特異的プライマーの一方或いは両方を各ウェルに加えた。増幅は以下の条件に従って行った。ステップ１９４℃で６０秒間ステップ２９４℃で２０秒間ステップ３５５℃で３０秒間ステップ４７２℃で９０秒間ステップ５ステップ２〜４をさらに２９サイクル反復ステップ６７２℃で１８０秒間ステップ７４℃（そのまま保持）ＰＣＲ反応物のアリコットを、分子量マーカーと共にアガロースゲル上で移動させた。ＰＣＲ生成物のサイズを元の部分的なｃＤＮＡと比較して、適切なクローンを選択し、プラスミドに結合して、配列決定を行った。同様に配列番号：２又は配列番号：４のヌクレオチド配列を用いて、上述の手順を用いて５’調節配列を得たり、５’延長のために設計されたオリゴヌクレオチドを得たり、及び適切なゲノムライブラリーを得ることができる。６ハイブリダイゼーションプローブの標識及び使用配列番号：２又は配列番号：４の配列に基づくハイブリダイゼーションプローブを用いて、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡ並びにゲノムＤＮＡをスクリーニングする。約２０の塩基対からなるオリゴヌクレオチドの標識について特に記すが、大きなｃＤＮＡフラグメントの場合でも概ね同じ手順を用いる。オリゴヌクレオチドをOL IGO4.06（National Bioscience）のような最新式のソフトウェアを用いてデザインし、５０ｐｍｏｌの各オリゴマーと、２５０ｍＣｉの[γ‐³²Ｐ]アデノシン三リン酸 Boston MA）とを組み合わせて用いて標識する。標識されたオリゴヌクレオチドを、SephadexG-25超精細樹脂カラム（Pharmacia）を用いで精製する。毎分１０⁷ カウントのセンス及びアンチセンスオリゴヌクレオチドのそれぞれを含む部分を、エンドヌクレアーゼAseI，BglII, したヒトゲノムＤＮＡの典型的な膜べースのハイブリダイゼーション解析において用いる。各切断物からのＤＮＡを、０．７％アガロースゲル上で分画化して、ナイロン膜（Nytran Plus,Schleicher & Schuell,Durham NH）にトランスファーする。ハイブリダイゼーションは４０℃で１６時間かけて行う。非特異的シグナルを取り除くため、ブロットを、０．１ｘクエン酸ナトリウム食塩水及び０．５％ドデシル硫酸ナトリウムまで段階的に厳密性が増す条件下で、室温にて順次洗浄する。 XOMAT AR^TMフィルム（Kodak，Rochester，NY）を、Phosphoimager cassette（Molecular Dynamics,S unnyvale，CA）においてブロットに数時間露光した後、ハイブリダイセーションパターンを視覚的に比較する。７マイクロアレイマイクロアレイ用のオリゴヌクレオチドを作るために、ここに開示したヌクレオチド配列を、ヌクレオチド配列の３’末端からコンピュータアルゴリズムを用いて調べる。このアルゴリズムは、その遺伝子に独特な、ハイブリダイゼーションに適した範囲内のＧＣ含量を有し、且つハイブリダイゼーションを妨げるような推定される２次構造が存在しない、決まった長さの各オリゴマーを同定する。このアルゴリズムは、長さ２０ヌクレオチドの２０個の配列特異的オリゴヌクレオチド（20量体）を同定する。各配列の中央の１個のヌクレオチドだけが変化している点を除いて一致しているオリゴヌクレオチドの組が作り出される。このプロセスはマイクロアレイにおける各遺伝子について反復され、２０個の二十量体が２組、光照射化学プロセスを用いてシリコンチップの表面上で合成され配列される（Chee,M．等,PCT/ＷＯ95/11995、この引用により本明細書の一部とする）。或いは、化学結合プロシージャ及びインクジェット装置を用いて、基板の表面上でオリゴマーを合成する（Baldeschweiler,J.D．等，PCT/ＷＯ95/25116、この引用により本明細書の一部とする）。更に別の形態では、ドットブロット法（スロットブロット法）に類似した「格子型」アレイを用いて、真空システム、熱、ＵＶ、機械的又は化学的結合プロシージャを利用してｃＤＮＡ断片又はオリゴヌクレオチドを基板の表面に配置し結合させる。アレイは、手を用いることにより、又は市販の材料及び機械を用いることによって製造され得、８ドット、２４ドット、９４ドット、３８４ドット、１５３６ドット、又は６１４４ドットの格子を有している。ハイブリダイゼーションの後、マイクロアレイを洗浄してハイブリダイズしていないプローブを取り除き、スキャナーを用いて蛍光のレベル及びパターンを求める。スキャンされた画像を調べて、マイクロアレイ上の各オリゴヌクレオチド配列の相補性の程度及び相対的な量を求める。８相補的ポリヌクレオチドＨＣＲＰをコードする配列或いはその任意の一部分に対して相補的な配列は、自然発生のＨＣＲＰの発現を低下又は阻害するために用られる。約１５〜約３０塩基対からなるアンチセンスオリゴヌクレオチドの使用について特に記すが、より小さな或いはより大きなｃＤＮＡフラグメントの場合でも概ね同じ方法を用いることができる。Oligo4.06ソフトウェア及びＨＣＲＰのコーディング配列（配列番号：１）を用いて、適切なオリゴヌクレオチドを設計することができる。転写を抑制するためには、最も独特な５’配列から相補的なオリゴヌクレオチドを設計し、これを用いてプロモーターが結合するのを阻害する。翻訳を阻害するためには、相補的なオリゴヌクレオチドを設計して、リボソームがＨＣＲＰをコードする転写物に結合するのを阻害する。９ＨＣＲＰの発現ＨＣＲＰの発現は、ｃＤＮＡを適切なベクター内にサブクローニングし、そのベクターを宿主細胞にトランスフェクトすることによって行われる。この場合、前にｃＤＮＡライブラリーの作製の際に用いたクローニングベクターを用いて、大腸菌においてＨＣＲＰを発現させる。クローニング部位の上流には、β−ガラクトシダーゼに対するプロモータが存在し、その後ろにはアミノ基末端Met及び β−ガラクトシダーゼの７残基が存在する。後続のこれら８つの残基は、転写に役立つバクテリオファージプロモーターであり、多くの独特の切断部位を含むリンカーである。単離されたトランスフェクト菌株を、IPTGを用いて標準的な方法で誘導し、初めのβガラクトシダーセの７残基、約５〜１５残基のリンカー、及び完全長ＨＣＲＰからなる融合タンパク質を作り出す。このシグナル配列は菌培地へのＨＣＲＰの分泌を誘導し、この培地は後の活性のアッセイにおいて直接用いることができる。１０ＨＣＲＰ活性の確認ＨＣＲＰ−１ＨＣＲＰ−１の活性を、サイクリン−ユビキチン結合アッセイによって測定する(Aristarkhov等，前出)。反応混合物10μlの量には、40mMのTrisHCl（pH7.6）、5mMのMgCl₂、0.5mMのATP、10mMのホスホクレアチン、1ml当たり50μｇのクレアチンホスホキナーゼ、1mM当たり1mgの還元されたカルボキシメチル化ウシ血清アルブミン、50μＭのユビキチン、1μＭのユビキチンアルデヒド、1〜2pmolの¹ ²⁵ Ｉ標識したサイクリンＢ、1pmolのＥ１、１μＭのオカダ酸、10μｇのＭ期分画１Ａのタンパク質（活性Ｅ３−Ｃ及び概ね遊離したＥ２−Ｃを含む）、及び様々な量のＨＣＲＰ−１が含まれている。この反応混合物を、18℃で60分間ィンキュベートする。次にサンプルをSDS/12％ポリアクリルアミドゲル上で電気泳動により分離する。PhosphorImagerによる解析により形成された¹²⁵Ｉ−サイクリン −ユビキチンを定量する。サイクリン−ユビキチン形成の量は、この反応におけるＨＣＲＰ−１の量に比例する。ＨＣＲＰ−２ＨＣＲＰ−２の活性を、上述したものと同様のアッセイで測定する。この場合は、固定量の¹²⁵Ｉ標識したサイクリンＢを用いる代わりに、可変量の¹²⁵Ｉ標識したＨＣＲＰ−２を用い、固定量の精製したＥ２− Ｃを、可変量のＨＣＲＰ−１の代わりに用いる。このような条件の下で、ユビキチン−ＨＣＲＰ−２の形成量はこの反応におけるＨＣＲＰ−２の量に比例する。１１ＨＣＲＰ特異的抗体の産生標準的なプロトコルを用いたウサギの免疫化及び抗体の産生には、ＰＡＧＥ電気泳動法（Sambrook前出）を用いて実質的に精製されたＨＣＲＰを用いる。配列番号：２から類推されるアミノ酸配列をDNAStarソフトウエア（DNASTAR社）を用いて解析して免疫抗原性の高い領域を決定し、対応するオリゴペプチドを当業者には周知の手段により合成して、当業者に周知の方法で抗体を産生するために用いる。Ｃ末端付近の、或いは隣接する親水性領域内のエピトープのような、適切なエピトープを選択するための解析法は、Ausubel等（上記）の論文他に記載されている。通常、約１５残基の長さを有するオリゴペプチドを、Applied BiosystemsのペプチドシンセサイザModel 431Aを用いてｆｍｏｃ法のケミストリにより合成し、Ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ： Ausubel等、上記）を用いた反応によりキーホールリンペットヘモシニアン（ＫＬＨ、Sigma,St.Louls,MO）に結合する。フロイントの完全アジュバントにおいてオリゴペプチド−ＫＬＨ複合体を用いてウサギを免疫する。得られた抗血清の抗ペプチド活性を検査するには、例えばペプチドをプラスチックに結合し、１％ BSAを用いてブロックし、ウサギ抗血清と反応させて洗浄し、さらに放射性ヨウ素標識されたヤギ抗ウサギＩｇＧと反応させる。１２特異的抗体を用いる自然発生ＨＣＲＰの精製自然発生ＨＣＲＰ或いは組換えＨＣＲＰは、ＨＣＲＰに特異的な抗体を用いるイムノアフィニティークロマトグラフィにより精製することができる。イムノアフィニティーカラムは、CnBr-activated Sepharose（Pharmaci a Biotech社）のような活性化クロマトグラフレジンとＨＣＲＰ抗体とを共有結合させることにより構築される。結合後、そのレジンを使用説明書の指示に従って、ブロックし洗浄する。ＨＣＲＰを含む培地をイムノアフィニティーカラムに通し、そのカラムをＨＣＲＰを優先的に吸着できる条件下で（例えば界面活性剤の存在下において高イオン強度バッファで）洗浄する。このカラムを、抗体／ＨＣＲＰ結合を切るような条件下（例えばｐＨ２〜３のバッファ、或いは高濃度の尿素またはチオシアン酸塩イオンのようなカオトロピックイオン）で溶出させ、ＨＣＲＰを回収する。１３ＨＣＲＰと相互作用する分子の同定ＨＣＲＰ又は生物学的に活性なその断片を、¹²⁵Ｉボルトンハンター試薬（Bol ton,A.E.及びW.M.Hunter(1973)Biochem.J.133:529-38）で標識する。マルチウェルプレートに予め配列しておいた候補の分子を、標識したＨＣＲＰとともにインキュベートし、洗浄して、標識ＨＣＲＰ複合体を有する任意のウェルをアッセイする。異なる濃度のＨＣＲＰを用いて得られたデータを用いて、候補の分子とＨＣＲＰの会合、親和性、数の数値を計算する。上記のすべての刊行物及び特許明細書は、引用により本明細書の一部とする。本発明の記載した方法及びシステムの種々の改変は、本発明の範囲及び精神から逸脱しないことは当業者には明らかであろう。本発明は特に好適な実施例に関連して記載されているが、本発明の請求の範囲は、そのような特定の実施例に不当に制限されるべきではないことを理解されたい。実際には、本発明を実施するために記載された方法の種々の改変は、分子生物学或いは関連する分野の専門家には明らかなように、請求の範囲内に含まれるものである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 43/00 Ｃ０７Ｋ 16/18 １１１Ｃ１２Ｎ 1/15 Ｃ０７Ｋ 14/47 1/19 16/18 1/21 Ｃ１２Ｎ 1/15 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 1/19 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ 1/21 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ 5/10 5/00 ＡＣ１２Ｐ 21/02 Ａ６１Ｋ 37/02 Ｃ１２Ｑ 1/68 37/48 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＴ，ＡＵ，ＢＲ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＩＬ，ＪＰ，ＫＲ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＲＵ，ＳＥ，ＳＧ，ＵＳ (72)発明者ゲグラー、カーン・ジェイアメリカ合衆国カリフォルニア州94025・メンロパーク・オークランドアベニュー 1048 (72)発明者コックス、ベンジャミン・グリームアメリカ合衆国カリフォルニア州94306・パロアルト・ウィルキウェイ 4292―ディー (72)発明者シャー、パルビアメリカ合衆国カリフォルニア州94087・サニーベイル・クイーンシャルロットドライブ 1608

Claims

【特許請求の範囲】１．配列番号：１のアミノ酸配列を含む実質的に精製されたサイクリン関連タンパク質又はその断片。２．請求項１のサイクリン関連タンパク質をコードする単離され精製されたポリヌクレオチド配列又は前記ポリヌクレオチド配列の断片又は変異配列。３．請求項２のポリヌクレオチド配列を含む組成物。４．請求項２のポリヌクレオチド配列と厳密な条件の下でハイブリダイズするポリヌクレオチド配列。５．請求項２のポリヌクレオチド配列に相補的なポリヌクレオチド配列又はその断片若しくは変異配列。６．配列番号：２の配列を含む単離され精製されたポリヌクレオチド配列又はその断片若しくは変異配列。７．請求項６のポリヌクレオチド配列を含む組成物。８．請求項６のポリヌクレオチド配列に相補的なポリヌクレオチド配列。９．請求項２のポリヌクレオチド配列の少なくとも断片を含む発現ベクター。１０．請求項９のベクターを宿主細胞。１１．配列番号：１のアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその断片の製造方法であって、（ａ）前記ポリペプチドの発現に適した条件の下で請求項１０の宿主細胞を培養する過程と、（ｂ）前記宿主細胞の培地から前記ポリペプチドを回収する過程とを含むことを特徴とする配列番号：１のアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその断片の製造方法。１２．配列番号：１のアミノ酸配列を有する実質的に精製されたサイクリン関連タンパク質を、適切な医薬用担体と共に含む医薬品組成物。１３．請求項１のポリペプチドに特異的に結合する精製された抗体。１４．請求項１のポリペプチドの活性を変調する精製されたアゴニスト。１５．癌の治療方法であって、そのような治療が必要な患者に、請求項１２の医薬品組成物を有効な量投与する過程を含む癌の治療方法。１６．免疫疾患の治療方法であって、そのような治療が必要な患者に、請求項１２の医薬品組成物を有効な量投与する過程を含む免疫疾患の治療方法。１７．生物学的サンプルにおけるサイクリン関連タンパク質をコードするポリヌクレオチドの検出方法であって、（ａ）請求項８のポリヌクレオチドと、生物学的サンプルの核酸材料とをハイブリダイズさせ、ハイブリダイゼーション複合体を形成する過程と、（ｂ）前記ハイブリダイゼーション複合体を検出する過程であって、前記複合体の存在が、前記生物学的サンプルにおけるサイクリン関連タンパク質をコードするポリヌクレオチドの存在と相関性を有する、該過程とを含むことを特徴とする生物学的サンプルにおけるサイクリン関連タンパク質コードするポリヌクレオチドの検出方法。１８．前記核酸材料がＰＣＲ法により増幅されることを特徴とする請求項１７に記載の方法。１９．配列番号：３のアミノ酸配列を含む実質的に精製されたサイクリン関連タンパク質又はその断片。２０．請求項１９のサイクリン関連タンパク質をコードする単離され精製されたポリヌクレオチド又は前記ポリヌクレオチド配列の断片若しくは変異配列。２１．請求項２０のポリヌクレオチド配列を含む組成物。２２．請求項２０のポリヌクレオチド配列と厳密な条件の下でハイブリダイズするポリヌクレオチド配列。２３．請求項２０のポリヌクレオチド配列に相補的なポリヌクレオチド配列又はその断片若しくは変異配列。２４．配列番号：４の配列を含む単離され精製されたポリヌクレオチド配列又はその断片若しくは変異配列。２５．請求項２４のポリヌクレオチド配列を含む組成物。２６．請求項２４のポリヌクレオチド配列に相補的なポリヌクレオチド配列。２７．請求項２０のポリヌクレオチド配列の少なくとも断片を含む発現ベクター。２８．請求項２７のベクターを含む宿主細胞。２９．配列番号：３のアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその断片の製造方法であって、（ａ）前記ポリペプチドの発現に適した条件の下で、請求項２８の宿主細胞を培養する過程と、（ｂ）前記宿主細胞の培地から前記ポリペプチドを回収すること含むことを特徴とする配列番号：３のアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその断片の製造方法。３０．配列番号：３のアミノ酸配列を有する実質的に精製されたサイクリン関連タンパク質を、適切な医薬用担体と共に含む医薬品組成物。３１．請求項１９のポリペプチドに特異的に結合する精製された抗体。３２．請求項１９のポリペプチドの活性を変調する精製されたアゴニスト。３３．請求項１９のポリペプチドの効果を低下させる精製されたアンタゴニスト。３４．発達障害の治療方法であって、そのような治療が必要な患者に、請求項３０の医薬品組成物を有効な量投与する過程を含む発達障害の治療方法。３５．免疫疾患の治療方法であって、そのような治療が必要な患者に、請求項３３の精製されたアンタゴニストを有効な量投与する過程を含む免疫疾患の治療方法。３６．生物学的サンプルにおけるサイクリン関連タンパク質をコードするポリヌクレオチドの検出方法であって、（ａ）請求項２６のポリヌクレオチドと、生物学的サンプルの核酸材料とをハイブリダイズさせ、ハイブリダイゼーション複合体を形成する過程と、（ｂ）前記ハイブリダイゼーション複合体を検出する過程であって、前記複合体の存在が、前記生物学的サンプルにおけるサイクリン関連タンパク質をコードするポリヌクレオチドの存在と相関性を有する、該過程とを含むことを特徴とする生物学的サンプルにおけるサイクリン関連タンパク質をコードするポリヌクレオチドの検出方法。３７．前記核酸材料が、ＰＣＲ法により増幅されることを特徴とする請求項３６に記載の方法。