KR20060104262A - 인간 원암 유전자, 이에 의해 코드되는 단백질 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 신규 원암 유전자 및 이에 의해 코드되는 단백질에 관한 것으로, 본 발명의 원암 유전자는 유방암, 백혈병, 자궁암, 및 악성림프종 등을 비롯한 암의 진단 등에 효과적으로 이용될 수 있다.
Description
도 1은 정상 유방 조직, 유방암 조직, 및 MCF-7 암세포에서 FC21(a);FC23(f);FC34(g);FC24(l);FC54(m);FC71(n);BBCC5-5(o);FC4(q)의 발현여부를 확인한 감별전개 역전사 중합효소 연쇄반응(DDRT-PCR)의 결과; 정상 자궁경부 조직, 자궁경부 종양조직, 전이 임파절 종양조직 및 CUMC-6 암세포에서 MC113 DNA 단편(b);CA338d DNA 단편(c);H124 DNA 단편(d);H122 DNA 단편(e);H148 DNA 단편(r)의 발현여부를 확인한 감별전개 역전사 중합효소 연쇄반응 (DDRT-PCR)의 결과를 나타낸 것이며, 정상 간 조직, 간암 조직, 및 HepG2 간암세포에서 HP103(h); HP11(j);HP23(k);HP15(p);HP47(t)의 발현여부를 확인한 감별전개 역전사 중합효소 연쇄반응(DDRT-PCR)의 결과; 정상 말초혈액 백혈구 조직, 백혈병조직, 및 K562 백혈병 세포주에서 GV11 DNA 단편(i)의 발현여부를 확인한 감별전개 역전사 중합효소 연쇄반응 (DDRT-PCR)의 결과를 나타낸 것이며 또 정상 폐 조직, 좌측 폐암 조직, 좌측에서 우측으로 전이된 전이 폐암조직 및 A549 폐암세포에서 L738(s);L690(u)의 발현여부를 확인한 감별전개 역전사 중합효소 연쇄반응(DDRT-PCR)의 결과를 나타낸 것이다.
도 2는 유방암 조직들에서 PIG12(a); PIG30(f); PIG31(g);PIG46(l); PIG47(m); PIG48(n); PIG50(o);PIG55(q) 원암 유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸 것이며; 정상 자궁경부 조직, 자궁암 조직, 자궁경부 전이 임파절조직 및 자궁경부암 세포주들에서 PIG18(b);PIG23(c); PIG27(d);PIG28(e);GIG9(r) 원암유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸 것이고, 인간 정상 간, 간암 및 간암세포주들에서 PIG38(h); PIG43(j);PIG44(k); PIG54(p);GIG18(t) 원암 유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸 것이며, 정상 말초혈액 백혈구 조직, 백혈병조직, 및 K562 백혈병 세포주에서 PIG40(i) 원암유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸 것이고, 도 2s 및 2u는 정상 폐조직, 좌측 폐암 조직, 좌측 폐에서 우측폐로 전이된 전이 폐암조직, A549, NCI-H2009, NCI-H441 폐암세포주들에서 HLC9(s);MIG22(u) 원암 유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸 것이며; 각 도 2 하단은 각 도 2 상단과 동일한 샘플들을 β-액틴으로 하이브리드시켜 얻은 결과를 나타낸 것이다.
도 3은 정상 인간 12-열 다중 조직에서 PIG12(a);PIG18(b);PIG23(c); PIG27(d);PIG28(e); PIG30(f);PIG31(g); PIG38(h);PIG40(i); PIG43(j);PIG44(k) ;PIG46(l); PIG47(m); PIG48(n); PIG50(o);PIG54(p); PIG55(q);GIG9(r); HLC-9(s);GIG18(t);MIG22(u) 원암 유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸 것이며; 각 도 3 하단은 도 3 상단과 동일한 샘플을 β-액틴으로 하이브리드시켜 얻은 결과를 나타낸 것이며;
도 4는 인간 암 세포주들에서 PIG12(a);PIG18(b);PIG23(c); PIG27(d);PIG28(e); PIG30(f);PIG31(g); PIG38(h);PIG40(i); PIG43(j);PIG44(k) ;PIG46(l); PIG47(m); PIG48(n); PIG50(o);PIG54(p); PIG55(q);GIG9(r); HLC-9(s);GIG18(t);MIG22(u) 원암 유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸 것이며; 각 도 4 하단은 각 도 4 상단과 동일한 샘플을 β-액틴으로 하이브리드시켜 얻은 결과를 나타낸 것이며;
도 5는 PIG12(a);PIG18(b);PIG23(c); PIG27(d);PIG28(e); PIG30(f);PIG31(g); PIG38(h);PIG40(i); PIG43(j);PIG44(k) ;PIG46(l); PIG47(m); PIG48(n); PIG50(o);PIG54(p); PIG55(q);GIG9(r); HLC-9(s);GIG18(t);MIG22(u) 원암 유전자를 대장균에 형질도입시킨 후 IPTG 유도 이전 및 이후에 발현되는 단백질의 크기를 나트륨 도데실 설페이트(SDS)-폴리아크릴아마이드 겔(PAGE)에서 전기영동한 결과이다.
본 발명은 암발생과 암전이 유발능을 나타내는 신규 원암유전자 및 이에 의해 코드되는 단백질에 관한 것이다.
인간을 포함한 고등동물들은 약 30,000 개의 유전자들을 갖고 있으나 이들중 약 15% 만이 각각의 개체에서 발현된다. 따라서, 어떠한 유전자가 선택되어 발현되느냐에 따라서 생명의 모든 현상 즉, 발생, 분화, 항상성(homeostasis), 자극에 대한 반응, 세포분열 주기조절, 노화 및 아폽토시스(apoptosis; programmed cell death) 등이 결정된다(Liang, P. and A. B. Pardee, Science, 257: 967-971(1992)).
종양발생과 같은 병리학적 현상은 유전자 변이과정으로 유발되어 결국에는 유전자 발현의 변화를 유도하게 된다. 따라서 상이한 세포들 사이에서 나타나는 유전자 발현들의 비교는 여러 생물학적 현상을 이해하는데 기본적이고 효과적인 접근방법이라고 할 수 있다.
예를 들면, 리앙과 파디(Liang and Pardee, 상기 문헌 참조)에 의해 제안된 mRNA 감별전개(differential display) 방법은 현재 종양억제 유전자나 세포분열 주기(cell cycle)에 관련된 유전자 및 아폽토시스에 관련된 전사조절 유전자(transcriptional regulatory gene) 등의 탐색에 효과적으로 이용되고 있으며 또한 하나의 세포에서 일어나는 다양한 유전자들의 상호 관련성의 규명에도 다양하게 활용되고 있다.
종양발생에 대한 여러 연구결과들을 종합하여 보면 특정 염색체부위의 소실(loss of chromosomal heterozygosity), 원암 유전자들의 활성화 및 p53 유전자를 포함한 다른 종양억제 유전자들의 불활성화 등과 같은 여러 가지 유전적 변화들이 종양조직에 축적되어 인간종양을 일으킨다고 보고되었다(Bishop, J. M., Cell, 64: 235-248(1991); 및 Hunter, T., Cell, 64: 249-270(1991)). 또한, 암의 10 내지 30%는 원암유전자가 증폭됨으로써 원암 유전자가 활성화되어 일어난다고 보고되어 있다.
원암유전자의 활성화는 많은 암의 병인학 연구에 중요한 역할을 하며, 이를 밝히는 것이 요구되고 있다.
이에 본 발명자들은 유방암의 발생기전을 원암 유전자 수준에서 접근한 결과, 인간 세포 증식유도 유전자(proliferation-inducing gene; PIG)로 명명된 원암유전자가 암세포에서만 특이하게 발현이 증가된다는 것을 밝혀내었다. 상기 원암유전자는 유방암, 백혈병, 자궁암, 및 악성림프종등과 같은 다양한 암의 진단, 예방 및 치료에 효과적으로 사용될 수 있다.
따라서, 본 발명의 목적은 원암 유전자 및 그의 단편을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 상기 원암 유전자 또는 그의 단편을 포함하는 재조합 벡터 및 이에 의해 형질전환된 미생물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 원암 유전자에 의해 코드되는 단백질 및 그의 단편을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 원암 유전자 또는 그의 단편을 포함하는 암 진단용 키트를 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 단백질 또는 그의 단편을 포함하는 암 진단용 키트를 제공하는 것이다.
상기 목적에 따라, 본 발명에서는 서열번호: 1;서열번호 5; 서열번호: 9;서열번호 13; 서열번호: 17;서열번호: 21;서열번호 25; 서열번호: 29;서열번호 33 서열번호: 37;서열번호: 41;서열번호 45; 서열번호: 49;서열번호 53;서열번호 57; 서열번호: 61;서열번호 65; 서열번호: 69;서열번호 73; 서열번호: 77; 또는 서열번호: 81의 염기 서열을 갖는 원암 유전자 또는 그의 단편을 제공한다.
상기 다른 목적에 따라, 본 발명에서는 상기 원암 유전자 또는 그의 단편을 포함하는 재조합 벡터 및 이에 의해 형질전환된 미생물을 제공된다.
상기 또다른 목적에 따라, 본 발명에서는 상기의 유전자에 의하여 코딩되는 서열번호: 2; 서열번호: 6; 서열번호: 10; 서열번호: 14; 서열번호: 18;서열번호: 22; 서열번호: 26; 서열번호: 30; 서열번호: 34; 서열번호: 38;서열번호: 42; 서열번호: 46; 서열번호: 50; 서열번호: 54;서열번호: 58; 서열번호: 62; 서열번호: 66; 서열번호: 70; 서열번호: 74; 서열번호: 78; 또는 서열번호: 82의 아미노산 서열을 갖는 단백질 또는 그의 단편을 제공한다.
상기 또다른 목적에 따라, 본 발명에서는 상기 원암 유전자 또는 그의 단편을 포함하는 암 진단용 키트를 제공한다.
상기 또다른 목적에 따라, 본 발명에서는 상기 원암 단백질 또는 그의 단편을 포함하는 암 진단용 키트를 제공한다.
이하 본 발명을 상세히 설명한다.
1.
PIG12
본 발명의 원암(原癌)유전자(protooncogene)인 인간 세포 증식유도 유전자 12(proliferation-inducing gene 12; PIG12, “이후 PIG12 원암유전자로 지칭함”)는 서열번호: 1로 나타낸 바와 같은 1258 bp 길이의 전체 염기서열을 가진다.
서열번호: 1의 염기서열에서, 뉴클레오티드 번호 68 내지 1252 부위(1250-1252: 종료코돈)에 해당하는 오픈 리딩 프레임(open reading frame)은 전체 단백질 코딩 영역으로서 이로부터 유도되는 아미노산 서열은 서열번호: 2에 나타나 있으며 394개의 아미노산으로 이루어져 있다(“PIG12 단백질”).
그러나, 코돈의 축퇴성(degeneracy)으로 인해서 또는 상기 원암 유전자를 발현시키고자 하는 생물에서 선호되는 코돈을 고려하여 본 발명의 원암 유전자는 코딩영역으로부터 발현되는 발암단백질의 아미노산 서열을 변화시키지 않는 범위내에서 코딩영역에 다양한 변형이 이루어질 수 있고 코딩영역을 제외한 부분에서도 유전자의 발현에 영향을 미치지 않는 범위내에서 다양한 변형 또는 수식이 이루어질 수 있으며, 그러한 변형 유전자 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 서열번호: 1의 원암 유전자와 실질적으로 동일한 염기 서열을 갖는 폴리뉴클레오티드 및 상기 유전자의 단편을 역시 포함한다. 실질적으로 동일한 폴리뉴클레오티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 원암 유전자로부터 발현되는 단백질은 394개의 아미노산으로 이루어져 있고 서열번호: 2와 같은 서열을 가지며 크기는 약 46 kDa이다. 그러나, 상기 단백질의 아미노산 서열에서도 역시 단백질의 기능에 영향을 미치지 않는 범위내에서 아미노산의 치환, 부가 또는 결실이 이루어질 수 있으며, 목적에 따라 단백질의 일부만이 사용될 수도 있다. 그러한 변형된 아미노산 서열 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 발암 단백질과 실질적으로 동일한 아미 노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 그의 단편을 역시 포함하며, 실질적으로 동일한 폴리펩티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
2.PIG18
본 발명의 원암 (原癌) 유전자 (protooncogene)인 인간 세포 성장 유도 유전자 18 (human proliferation-inducing gene 18; 이후 PIG18로 지칭함)은 서열번호: 5로 기재되는 1024 bp 길이의 전체 염기서열을 가진다.
서열번호: 5의 염기서열에서, 뉴클레오티드 번호 875 내지 1063 부위 (1061-1063: 종료코돈)에 해당하는 오픈 리딩 프레임 (open reading frame)은 전체 단백질 코딩 영역으로서 이로부터 유도되는 아미노산 서열은 서열번호: 6에 나타나 있으며 62개의 아미노산으로 이루어져 있다 (이후 "PIG18A 단백질"로 지칭함).
서열번호: 5의 염기서열은 미국 국립보건원의 진뱅크(NIH GenBank) 데이터베이에 등록번호 제 AY771596 호로 등록되었으며(공개예정일: 2005년 12월 31일) 염기서열 분석결과 이 데이터베이스에 등록된 제 NM_001992호인 Homo sapiens 응고 인자(coagulation factor) II (thrombin) receptor (F2R) 유전자와 유전자 염기서열이 유사함이 확인되었다. 그러나 금번 연구 결과 자궁암을 포함한 여러 인간 종양들에서는 발현이 높고 반면에 여러 정상조직들에서는 발현이 매우 낮은 PIG18 원암유전자를 발굴하게 되었다.
그러나, 코돈의 축퇴성 (degeneracy)으로 인해서 또는 상기 원암유전자를 발현시키고자 하는 생물에서 선호되는 코돈을 고려하여 본 발명의 원암유전자는 코딩 영역으로부터 발현되는 발암단백질의 아미노산 서열을 변화시키지 않는 범위 내에서 코딩영역에 다양한 변형이 이루어질 수 있고 코딩영역을 제외한 부분에서도 유전자의 발현에 영향을 미치지 않는 범위 내에서 다양한 변형 또는 수식이 이루어질 수 있으며, 그러한 변형 유전자 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 서열번호: 5의 원암유전자와 실질적으로 동일한 염기 서열을 갖는 폴리뉴클레오티드 및 상기 유전자의 단편을 역시 포함한다. 실질적으로 동일한 폴리뉴클레오티드란 서열번호: 6과 동일한 단백질 번역 생성물을 암호화하는 DNA로서 서열번호: 5와 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 원암유전자로부터 발현되는 단백질은 62개의 아미노산으로 이루어져 있고 서열번호: 6으로 기재되는 아미노산 서열을 가지며 크기는 약 7 kDa이다. 그러나, 상기 단백질의 아미노산 서열에서도 역시 단백질의 기능에 영향을 미치지 않는 범위 내에서 아미노산의 치환, 부가 또는 결실이 이루어질 수 있으며, 목적에 따라 단백질의 일부만이 사용될 수도 있다. 그러한 변형된 아미노산 서열 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 발암 단백질과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 그의 단편을 역시 포함하며, 실질적으로 동일한 폴리펩티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
3.
PIG23
본 발명의 원암 (原癌) 유전자 (protooncogene)인 인간 세포 성장 유도 유전 자 23 (human proliferation-inducing gene 23; 이후 PIG23으로 지칭함)은 서열번호: 9로 기재되는 2150 bp 길이의 전체 염기서열을 가진다.
서열번호: 9의 염기서열에서, 뉴클레오티드 번호 25 내지 1953 부위 (1951-1953: 종료코돈)에 해당하는 오픈 리딩 프레임 (open reading frame)은 전체 단백질 코딩 영역으로서 이로부터 유도되는 아미노산 서열은 서열번호: 10에 나타나 있으며 642개의 아미노산으로 이루어져 있다 (이후 "PIG23 단백질"로 지칭함).
서열번호: 9의 염기서열은 미국 국립보건원의 진뱅크(NIH GenBank) 데이터베이에 등록번호 제 AY826819 호로 등록되었으며(공개예정일: 2005년 12월 31일) 염기서열 분석결과 이 데이터베이스에 등록된 제 NM_016166 호인 Homo sapiens 활성화된 STAT, 1의 단백질 저해제(PIAS1) 유전자와 유전자 염기서열이 유사함이 확인되었다. 그러나 금번 연구 결과 자궁암을 포함한 여러 인간 종양들에서는 발현이 높고 반면에 여러 정상조직들에서는 발현이 매우 낮은 PIG23 원암유전자를 발굴하게 되었다.
그러나, 코돈의 축퇴성 (degeneracy)으로 인해서 또는 상기 원암유전자를 발현시키고자 하는 생물에서 선호되는 코돈을 고려하여 본 발명의 원암유전자는 코딩영역으로부터 발현되는 발암단백질의 아미노산 서열을 변화시키지 않는 범위 내에서 코딩영역에 다양한 변형이 이루어질 수 있고 코딩영역을 제외한 부분에서도 유전자의 발현에 영향을 미치지 않는 범위 내에서 다양한 변형 또는 수식이 이루어질 수 있으며, 그러한 변형 유전자 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 서열번호: 9의 원암유전자와 실질적으로 동일한 염기 서열을 갖는 폴리 뉴클레오티드 및 상기 유전자의 단편을 역시 포함한다. 실질적으로 동일한 폴리뉴클레오티드란 서열번호: 10과 동일한 단백질 번역 생성물을 암호화하는 DNA로서 서열번호: 9와 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 원암유전자로부터 발현되는 단백질은 642개의 아미노산으로 이루어져 있고 서열번호: 10으로 기재되는 아미노산 서열을 가지며 크기는 약 70 kDa이다. 그러나, 상기 단백질의 아미노산 서열에서도 역시 단백질의 기능에 영향을 미치지 않는 범위 내에서 아미노산의 치환, 부가 또는 결실이 이루어질 수 있으며, 목적에 따라 단백질의 일부만이 사용될 수도 있다. 그러한 변형된 아미노산 서열 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 발암 단백질과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 그의 단편을 역시 포함하며, 실질적으로 동일한 폴리펩티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
4. PIG27
본 발명의 원암 (原癌) 유전자 (protooncogene)인 인간 세포 성장 유도 유전자 27 (human proliferation-inducing gene 27; 이후 PIG27로 지칭함)은 서열번호: 13으로 기재되는 446 bp 길이의 전체 염기서열을 가진다.
서열번호: 13의 염기서열에서, 뉴클레오티드 번호 20 내지 337 부위 (335-337: 종료코돈)에 해당하는 오픈 리딩 프레임 (open reading frame)은 전체 단백질 코딩 영역으로서 이로부터 유도되는 아미노산 서열은 서열번호: 14에 나타나 있으 며 105개의 아미노산으로 이루어져 있다 (이후 "PIG27 단백질"로 지칭함).
서열번호: 13의 염기서열은 미국 국립보건원의 진뱅크(NIH GenBank) 데이터베이에 등록번호 제 AY453399 호로 등록되었으며(공개예정일: 2005년 3월 31일) 염기서열 분석결과 이 데이터베이스에 등록된 제 CR456487호인 Homo sapiens DNAL4 전장 오픈 리딩 프레임(ORF) cDNA clone 유전자 등과 유전자 염기서열이 유사함이 확인되었다. 이들 유전자의 기능은 아직 확인되지 않고 있다. 그러나 금번 연구 결과 자궁암을 포함한 여러 인간 종양들에서는 발현이 높고 반면에 여러 정상조직들에서는 발현이 매우 낮은 PIG27 원암유전자를 발굴하게 되었다.
그러나, 코돈의 축퇴성 (degeneracy)으로 인해서 또는 상기 원암유전자를 발현시키고자 하는 생물에서 선호되는 코돈을 고려하여 본 발명의 원암유전자는 코딩영역으로부터 발현되는 발암단백질의 아미노산 서열을 변화시키지 않는 범위 내에서 코딩영역에 다양한 변형이 이루어질 수 있고 코딩영역을 제외한 부분에서도 유전자의 발현에 영향을 미치지 않는 범위 내에서 다양한 변형 또는 수식이 이루어질 수 있으며, 그러한 변형 유전자 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 서열번호: 13의 원암유전자와 실질적으로 동일한 염기 서열을 갖는 폴리뉴클레오티드 및 상기 유전자의 단편을 역시 포함한다. 실질적으로 동일한 폴리뉴클레오티드란 서열번호: 14와 동일한 단백질 번역 생성물을 암호화하는 DNA로서 서열번호: 13과 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 원암유전자로부터 발현되는 단백질은 105개의 아미노산으로 이루 어져 있고 서열번호: 14로 기재되는 아미노산 서열을 가지며 크기는 약 12 kDa이다. 그러나, 상기 단백질의 아미노산 서열에서도 역시 단백질의 기능에 영향을 미치지 않는 범위 내에서 아미노산의 치환, 부가 또는 결실이 이루어질 수 있으며, 목적에 따라 단백질의 일부만이 사용될 수도 있다. 그러한 변형된 아미노산 서열 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 발암 단백질과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 그의 단편을 역시 포함하며, 실질적으로 동일한 폴리펩티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
5.
PIG28
본 발명의 원암 (原癌) 유전자 (protooncogene)인 인간 세포 성장 유도 유전자 28 (human proliferation-inducing gene 28; 이후 PIG28로 지칭함)은 서열번호: 17로 기재되는 1024 bp 길이의 전체 염기서열을 가진다.
서열번호: 17의 염기서열에서, 뉴클레오티드 번호 33 내지 998 부위 (996-998: 종료코돈)에 해당하는 오픈 리딩 프레임 (open reading frame)은 전체 단백질 코딩 영역으로서 이로부터 유도되는 아미노산 서열은 서열번호: 18에 나타나 있으며 321개의 아미노산으로 이루어져 있다 (이후 "PIG28 단백질"로 지칭함).
서열번호: 17의 염기서열은 미국 국립보건원의 진뱅크(NIH GenBank) 데이터베이에 등록번호 제 AY453398 호로 등록되었으며(공개예정일: 2005년 3월 31일) 염기서열 분석결과 이 데이터베이스에 등록된 제 NM_001153호인 Homo sapiens annexin A4 (ANXA4) 유전자와 제 BC000182호인 Homo sapiens annexin A4 유전자와 유전자 염기서열이 유사함이 확인되었다. 그러나 금번 연구 결과 자궁암을 포함한 여러 인간 종양들에서는 발현이 높고 반면에 여러 정상조직들에서는 발현이 매우 낮은 PIG28 원암유전자를 발굴하게 되었다.
그러나, 코돈의 축퇴성 (degeneracy)으로 인해서 또는 상기 원암유전자를 발현시키고자 하는 생물에서 선호되는 코돈을 고려하여 본 발명의 원암유전자는 코딩영역으로부터 발현되는 발암단백질의 아미노산 서열을 변화시키지 않는 범위 내에서 코딩영역에 다양한 변형이 이루어질 수 있고 코딩영역을 제외한 부분에서도 유전자의 발현에 영향을 미치지 않는 범위 내에서 다양한 변형 또는 수식이 이루어질 수 있으며, 그러한 변형 유전자 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 서열번호: 17의 원암유전자와 실질적으로 동일한 염기 서열을 갖는 폴리뉴클레오티드 및 상기 유전자의 단편을 역시 포함한다. 실질적으로 동일한 폴리뉴클레오티드란 서열번호: 18과 동일한 단백질 번역 생성물을 암호화하는 DNA로서 서열번호: 17과 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 원암유전자로부터 발현되는 단백질은 321개의 아미노산으로 이루어져 있고 서열번호: 18로 기재되는 아미노산 서열을 가지며 크기는 약 36 kDa이다. 그러나, 상기 단백질의 아미노산 서열에서도 역시 단백질의 기능에 영향을 미치지 않는 범위 내에서 아미노산의 치환, 부가 또는 결실이 이루어질 수 있으며, 목적에 따라 단백질의 일부만이 사용될 수도 있다. 그러한 변형된 아미노산 서열 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 발암 단백질과 실질적 으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 그의 단편을 역시 포함하며, 실질적으로 동일한 폴리펩티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
6.
PIG30
본 발명의 원암(原癌)유전자(protooncogene)인 인간 세포 증식유도 유전자 30(proliferation-inducing gene 30; PIG30, “이후 PIG30 원암유전자로 지칭함”)는 서열번호: 21로 나타낸 바와 같은 2152 bp 길이의 전체 염기서열을 가진다.
서열번호: 21의 염기서열에서, 뉴클레오티드 번호 6 내지 2150 부위(2148-2150: 종료코돈)에 해당하는 오픈 리딩 프레임(open reading frame)은 전체 단백질 코딩 영역으로서 이로부터 유도되는 아미노산 서열은 서열번호: 22에 나타나 있으며 714개의 아미노산으로 이루어져 있다(“PIG30 단백질”).
그러나, 코돈의 축퇴성(degeneracy)으로 인해서 또는 상기 원암 유전자를 발현시키고자 하는 생물에서 선호되는 코돈을 고려하여 본 발명의 원암 유전자는 코딩영역으로부터 발현되는 발암단백질의 아미노산 서열을 변화시키지 않는 범위내에서 코딩영역에 다양한 변형이 이루어질 수 있고 코딩영역을 제외한 부분에서도 유전자의 발현에 영향을 미치지 않는 범위내에서 다양한 변형 또는 수식이 이루어질 수 있으며, 그러한 변형 유전자 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 서열번호: 21의 원암 유전자와 실질적으로 동일한 염기 서열을 갖는 폴리뉴클레오티드 및 상기 유전자의 단편을 역시 포함한다. 실질적으로 동일한 폴리뉴클레오티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서 열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 원암 유전자로부터 발현되는 단백질은 714개의 아미노산으로 이루어져 있고 서열번호: 22와 같은 서열을 가지며 크기는 약 82 kDa이다. 그러나, 상기 단백질의 아미노산 서열에서도 역시 단백질의 기능에 영향을 미치지 않는 범위내에서 아미노산의 치환, 부가 또는 결실이 이루어질 수 있으며, 목적에 따라 단백질의 일부만이 사용될 수도 있다. 그러한 변형된 아미노산 서열 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 발암 단백질과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 그의 단편을 역시 포함하며, 실질적으로 동일한 폴리펩티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
7.
PIG31
본 발명의 원암(原癌)유전자(protooncogene)인 인간 세포 증식유도 유전자 31(proliferation-inducing gene 31; PIG31, “이후 PIG31 원암유전자로 지칭함”)는 서열번호: 25로 나타낸 바와 같은 2246 bp 길이의 전체 염기서열을 가진다.
서열번호: 25의 염기서열에서, 뉴클레오티드 번호 37 내지 2232 부위(2230-2232: 종료코돈)에 해당하는 오픈 리딩 프레임(open reading frame)은 전체 단백질 코딩 영역으로서 이로부터 유도되는 아미노산 서열은 서열번호: 26에 나타나 있으며 731개의 아미노산으로 이루어져 있다(“PIG31 단백질”).
그러나, 코돈의 축퇴성(degeneracy)으로 인해서 또는 상기 원암 유전자를 발현시키고자 하는 생물에서 선호되는 코돈을 고려하여 본 발명의 원암 유전자는 코 딩영역으로부터 발현되는 발암단백질의 아미노산 서열을 변화시키지 않는 범위내에서 코딩영역에 다양한 변형이 이루어질 수 있고 코딩영역을 제외한 부분에서도 유전자의 발현에 영향을 미치지 않는 범위내에서 다양한 변형 또는 수식이 이루어질 수 있으며, 그러한 변형 유전자 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 서열번호: 25의 원암 유전자와 실질적으로 동일한 염기 서열을 갖는 폴리뉴클레오티드 및 상기 유전자의 단편을 역시 포함한다. 실질적으로 동일한 폴리뉴클레오티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 원암 유전자로부터 발현되는 단백질은 731개의 아미노산으로 이루어져 있고 서열번호: 26과 같은 서열을 가지며 크기는 약 83 kDa이다. 그러나, 상기 단백질의 아미노산 서열에서도 역시 단백질의 기능에 영향을 미치지 않는 범위내에서 아미노산의 치환, 부가 또는 결실이 이루어질 수 있으며, 목적에 따라 단백질의 일부만이 사용될 수도 있다. 그러한 변형된 아미노산 서열 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 발암 단백질과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 그의 단편을 역시 포함하며, 실질적으로 동일한 폴리펩티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
8.
PIG38
본 발명의 원암(原癌)유전자(protooncogene)인 인간 세포 증식유도 유전자 38(proliferation-inducing gene 38; PIG38, “이후 PIG38 원암유전자로 지칭함”) 는 서열번호: 29로 나타낸 바와 같은 1973 bp 길이의 전체 염기서열을 가진다.
서열번호: 29의 염기서열에서, 뉴클레오티드 번호 25 내지 1956 부위(1954-1956: 종료코돈)에 해당하는 오픈 리딩 프레임(open reading frame)은 전체 단백질 코딩 영역으로서 이로부터 유도되는 아미노산 서열은 서열번호: 30에 나타나 있으며 643개의 아미노산으로 이루어져 있다(“PIG38 단백질”).
그러나, 코돈의 축퇴성(degeneracy)으로 인해서 또는 상기 원암 유전자를 발현시키고자 하는 생물에서 선호되는 코돈을 고려하여 본 발명의 원암 유전자는 코딩영역으로부터 발현되는 발암단백질의 아미노산 서열을 변화시키지 않는 범위내에서 코딩영역에 다양한 변형이 이루어질 수 있고 코딩영역을 제외한 부분에서도 유전자의 발현에 영향을 미치지 않는 범위내에서 다양한 변형 또는 수식이 이루어질 수 있으며, 그러한 변형 유전자 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 서열번호: 29의 원암 유전자와 실질적으로 동일한 염기 서열을 갖는 폴리뉴클레오티드 및 상기 유전자의 단편을 역시 포함한다. 실질적으로 동일한 폴리뉴클레오티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 원암 유전자로부터 발현되는 단백질은 643개의 아미노산으로 이루어져 있고 서열번호: 30과 같은 서열을 가지며 크기는 약 73 kDa이다. 그러나, 상기 단백질의 아미노산 서열에서도 역시 단백질의 기능에 영향을 미치지 않는 범위내에서 아미노산의 치환, 부가 또는 결실이 이루어질 수 있으며, 목적에 따라 단백질의 일부만이 사용될 수도 있다. 그러한 변형된 아미노산 서열 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 발암 단백질과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 그의 단편을 역시 포함하며, 실질적으로 동일한 폴리펩티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
9.
PIG40
본 발명의 원암 (原癌) 유전자 (protooncogene)인 인간 세포 성장 유도 유전자 40 (human proliferation-inducing gene 40; 이후 PIG40으로 지칭함)은 서열번호: 33으로 기재되는 1586 bp 길이의 전체 염기서열을 가진다.
서열번호: 33의 염기서열에서, 뉴클레오티드 번호 36 내지 1541 부위 (1539-1541: 종료코돈)에 해당하는 오픈 리딩 프레임 (open reading frame)은 전체 단백질 코딩 영역으로서 이로부터 유도되는 아미노산 서열은 서열번호: 34에 나타나 있으며 501개의 아미노산으로 이루어져 있다 (이후 "PIG40 단백질"로 지칭함).
서열번호: 33의 염기서열은 미국 국립보건원의 진뱅크(NIH GenBank) 데이터베이에 등록번호 제 AY762100 호로 등록되었으며(공개예정일: 2005년 12월 31일) 염기서열 분석결과 이 데이터베이스에 등록된 제 NM_001349호인 Homo sapiens 아스파틸-tRNA 신쎄테이즈(DARS) 유전자 등과 유전자 염기서열이 유사함이 확인되었다. 그러나 금번 연구 결과 백혈병을 포함한 여러 인간 종양들에서는 발현이 높고 반면에 여러 정상조직들에서는 발현이 매우 낮은 PIG40 원암유전자를 발굴하게 되었다.
그러나, 코돈의 축퇴성 (degeneracy)으로 인해서 또는 상기 원암유전자를 발현시키고자 하는 생물에서 선호되는 코돈을 고려하여 본 발명의 원암유전자는 코딩 영역으로부터 발현되는 발암단백질의 아미노산 서열을 변화시키지 않는 범위 내에서 코딩영역에 다양한 변형이 이루어질 수 있고 코딩영역을 제외한 부분에서도 유전자의 발현에 영향을 미치지 않는 범위 내에서 다양한 변형 또는 수식이 이루어질 수 있으며, 그러한 변형 유전자 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 서열번호: 33의 원암유전자와 실질적으로 동일한 염기 서열을 갖는 폴리뉴클레오티드 및 상기 유전자의 단편을 역시 포함한다. 실질적으로 동일한 폴리뉴클레오티드란 서열번호: 34와 동일한 단백질 번역 생성물을 암호화하는 DNA로서 서열번호: 33과 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 원암유전자로부터 발현되는 단백질은 501개의 아미노산으로 이루어져 있고 서열번호: 34로 기재되는 아미노산 서열을 가지며 크기는 약 57 kDa이다. 그러나, 상기 단백질의 아미노산 서열에서도 역시 단백질의 기능에 영향을 미치지 않는 범위 내에서 아미노산의 치환, 부가 또는 결실이 이루어질 수 있으며, 목적에 따라 단백질의 일부만이 사용될 수도 있다. 그러한 변형된 아미노산 서열 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 발암 단백질과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 그의 단편을 역시 포함하며, 실질적으로 동일한 폴리펩티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
10.
PIG43
본 발명의 원암(原癌)유전자(protooncogene)인 인간 세포 증식유도 유전자 43(proliferation-inducing gene 43; PIG43, “이후 PIG43 원암유전자로 지칭함”)는 서열번호: 37로 나타낸 바와 같은 1245 bp 길이의 전체 염기서열을 가진다.
서열번호: 37의 염기서열에서, 뉴클레오티드 번호 57 내지 758 부위(756-758: 종료코돈)에 해당하는 오픈 리딩 프레임(open reading frame)은 전체 단백질 코딩 영역으로서 이로부터 유도되는 아미노산 서열은 서열번호: 38에 나타나 있으며 233개의 아미노산으로 이루어져 있다(“PIG43 단백질”).
그러나, 코돈의 축퇴성(degeneracy)으로 인해서 또는 상기 원암 유전자를 발현시키고자 하는 생물에서 선호되는 코돈을 고려하여 본 발명의 원암 유전자는 코딩영역으로부터 발현되는 발암단백질의 아미노산 서열을 변화시키지 않는 범위내에서 코딩영역에 다양한 변형이 이루어질 수 있고 코딩영역을 제외한 부분에서도 유전자의 발현에 영향을 미치지 않는 범위내에서 다양한 변형 또는 수식이 이루어질 수 있으며, 그러한 변형 유전자 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 서열번호: 37의 원암 유전자와 실질적으로 동일한 염기 서열을 갖는 폴리뉴클레오티드 및 상기 유전자의 단편을 역시 포함한다. 실질적으로 동일한 폴리뉴클레오티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 원암 유전자로부터 발현되는 단백질은 233개의 아미노산으로 이루어져 있고 서열번호: 38과 같은 서열을 가지며 크기는 약 26 kDa이다. 그러나, 상기 단백질의 아미노산 서열에서도 역시 단백질의 기능에 영향을 미치지 않는 범위내에서 아미노산의 치환, 부가 또는 결실이 이루어질 수 있으며, 목적에 따라 단백 질의 일부만이 사용될 수도 있다. 그러한 변형된 아미노산 서열 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 발암 단백질과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 그의 단편을 역시 포함하며, 실질적으로 동일한 폴리펩티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
11.
PIG44
본 발명의 원암(原癌)유전자(protooncogene)인 인간 세포 증식유도 유전자 44(proliferation-inducing gene 44; PIG44, “이후 PIG44 원암유전자로 지칭함”)는 서열번호: 41로 나타낸 바와 같은 1721 bp 길이의 전체 염기서열을 가진다.
서열번호: 41의 염기서열에서, 뉴클레오티드 번호 55 내지 1512 부위(1510-1512: 종료코돈)에 해당하는 오픈 리딩 프레임(open reading frame)은 전체 단백질 코딩 영역으로서 이로부터 유도되는 아미노산 서열은 서열번호: 42에 나타나 있으며 485개의 아미노산으로 이루어져 있다(“PIG44 단백질”).
그러나, 코돈의 축퇴성(degeneracy)으로 인해서 또는 상기 원암 유전자를 발현시키고자 하는 생물에서 선호되는 코돈을 고려하여 본 발명의 원암 유전자는 코딩영역으로부터 발현되는 발암단백질의 아미노산 서열을 변화시키지 않는 범위내에서 코딩영역에 다양한 변형이 이루어질 수 있고 코딩영역을 제외한 부분에서도 유전자의 발현에 영향을 미치지 않는 범위내에서 다양한 변형 또는 수식이 이루어질 수 있으며, 그러한 변형 유전자 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 서열번호: 41의 원암 유전자와 실질적으로 동일한 염기 서열을 갖는 폴 리뉴클레오티드 및 상기 유전자의 단편을 역시 포함한다. 실질적으로 동일한 폴리뉴클레오티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 원암 유전자로부터 발현되는 단백질은 485개의 아미노산으로 이루어져 있고 서열번호: 42와 같은 서열을 가지며 크기는 약 55 kDa이다. 그러나, 상기 단백질의 아미노산 서열에서도 역시 단백질의 기능에 영향을 미치지 않는 범위내에서 아미노산의 치환, 부가 또는 결실이 이루어질 수 있으며, 목적에 따라 단백질의 일부만이 사용될 수도 있다. 그러한 변형된 아미노산 서열 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 발암 단백질과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 그의 단편을 역시 포함하며, 실질적으로 동일한 폴리펩티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
12.
PIG46
본 발명의 원암(原癌)유전자(protooncogene)인 인간 세포 증식유도 유전자 46(proliferation-inducing gene 46; PIG46, “이후 PIG46 원암유전자로 지칭함”)는 서열번호: 45로 나타낸 바와 같은 1312 bp 길이의 전체 염기서열을 가진다.
서열번호: 45의 염기서열에서, 뉴클레오티드 번호 5 내지 1297 부위(1295-1297: 종료코돈)에 해당하는 오픈 리딩 프레임(open reading frame)은 전체 단백질 코딩 영역으로서 이로부터 유도되는 아미노산 서열은 서열번호: 46에 나타나 있으며 430개의 아미노산으로 이루어져 있다(“PIG46 단백질”).
그러나, 코돈의 축퇴성(degeneracy)으로 인해서 또는 상기 원암 유전자를 발현시키고자 하는 생물에서 선호되는 코돈을 고려하여 본 발명의 원암 유전자는 코딩영역으로부터 발현되는 발암단백질의 아미노산 서열을 변화시키지 않는 범위내에서 코딩영역에 다양한 변형이 이루어질 수 있고 코딩영역을 제외한 부분에서도 유전자의 발현에 영향을 미치지 않는 범위내에서 다양한 변형 또는 수식이 이루어질 수 있으며, 그러한 변형 유전자 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 서열번호: 45의 원암 유전자와 실질적으로 동일한 염기 서열을 갖는 폴리뉴클레오티드 및 상기 유전자의 단편을 역시 포함한다. 실질적으로 동일한 폴리뉴클레오티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 원암 유전자로부터 발현되는 단백질은 430개의 아미노산으로 이루어져 있고 서열번호: 46과 같은 서열을 가지며 크기는 약 48 kDa이다. 그러나, 상기 단백질의 아미노산 서열에서도 역시 단백질의 기능에 영향을 미치지 않는 범위내에서 아미노산의 치환, 부가 또는 결실이 이루어질 수 있으며, 목적에 따라 단백질의 일부만이 사용될 수도 있다. 그러한 변형된 아미노산 서열 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 발암 단백질과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 그의 단편을 역시 포함하며, 실질적으로 동일한 폴리펩티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
13.
PIG47
본 발명의 원암(原癌)유전자(protooncogene)인 인간 세포 증식유도 유전자 47(proliferation-inducing gene 47; PIG47, “이후 PIG47 원암유전자로 지칭함”)는 서열번호: 49로 나타낸 바와 같은 827 bp 길이의 전체 염기서열을 가진다.
서열번호: 49의 염기서열에서, 뉴클레오티드 번호 56 내지 826 부위(824-826: 종료코돈)에 해당하는 오픈 리딩 프레임(open reading frame)은 전체 단백질 코딩 영역으로서 이로부터 유도되는 아미노산 서열은 서열번호: 50에 나타나 있으며 256개의 아미노산으로 이루어져 있다(“PIG47 단백질”).
그러나, 코돈의 축퇴성(degeneracy)으로 인해서 또는 상기 원암 유전자를 발현시키고자 하는 생물에서 선호되는 코돈을 고려하여 본 발명의 원암 유전자는 코딩영역으로부터 발현되는 발암단백질의 아미노산 서열을 변화시키지 않는 범위내에서 코딩영역에 다양한 변형이 이루어질 수 있고 코딩영역을 제외한 부분에서도 유전자의 발현에 영향을 미치지 않는 범위내에서 다양한 변형 또는 수식이 이루어질 수 있으며, 그러한 변형 유전자 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 서열번호: 49의 원암 유전자와 실질적으로 동일한 염기 서열을 갖는 폴리뉴클레오티드 및 상기 유전자의 단편을 역시 포함한다. 실질적으로 동일한 폴리뉴클레오티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 원암 유전자로부터 발현되는 단백질은 256개의 아미노산으로 이루어져 있고 서열번호: 50과 같은 서열을 가지며 크기는 약 29 kDa이다. 그러나, 상기 단백질의 아미노산 서열에서도 역시 단백질의 기능에 영향을 미치지 않는 범위 내에서 아미노산의 치환, 부가 또는 결실이 이루어질 수 있으며, 목적에 따라 단백질의 일부만이 사용될 수도 있다. 그러한 변형된 아미노산 서열 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 발암 단백질과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 그의 단편을 역시 포함하며, 실질적으로 동일한 폴리펩티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
14.
PIG48
본 발명의 원암(原癌)유전자(protooncogene)인 인간 세포 증식유도 유전자 48(proliferation-inducing gene 48; PIG48, “이후 PIG48 원암유전자로 지칭함”)는 서열번호: 53으로 나타낸 바와 같은 1707 bp 길이의 전체 염기서열을 가진다.
서열번호: 53의 염기서열에서, 뉴클레오티드 번호 57 내지 1694 부위(1692-1694: 종료코돈)에 해당하는 오픈 리딩 프레임(open reading frame)은 전체 단백질 코딩 영역으로서 이로부터 유도되는 아미노산 서열은 서열번호: 54에 나타나 있으며 545개의 아미노산으로 이루어져 있다(“PIG48 단백질”).
그러나, 코돈의 축퇴성(degeneracy)으로 인해서 또는 상기 원암 유전자를 발현시키고자 하는 생물에서 선호되는 코돈을 고려하여 본 발명의 원암 유전자는 코딩영역으로부터 발현되는 발암단백질의 아미노산 서열을 변화시키지 않는 범위내에서 코딩영역에 다양한 변형이 이루어질 수 있고 코딩영역을 제외한 부분에서도 유전자의 발현에 영향을 미치지 않는 범위내에서 다양한 변형 또는 수식이 이루어질 수 있으며, 그러한 변형 유전자 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명 은 상기 서열번호: 53의 원암 유전자와 실질적으로 동일한 염기 서열을 갖는 폴리뉴클레오티드 및 상기 유전자의 단편을 역시 포함한다. 실질적으로 동일한 폴리뉴클레오티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 원암 유전자로부터 발현되는 단백질은 545개의 아미노산으로 이루어져 있고 서열번호: 54와 같은 서열을 가지며 크기는 약 60 kDa이다. 그러나, 상기 단백질의 아미노산 서열에서도 역시 단백질의 기능에 영향을 미치지 않는 범위내에서 아미노산의 치환, 부가 또는 결실이 이루어질 수 있으며, 목적에 따라 단백질의 일부만이 사용될 수도 있다. 그러한 변형된 아미노산 서열 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 발암 단백질과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 그의 단편을 역시 포함하며, 실질적으로 동일한 폴리펩티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
15.
PIG50
본 발명의 원암(原癌)유전자(protooncogene)인 인간 세포 증식유도 유전자 50(proliferation-inducing gene 50; PIG50, “이후 PIG50 원암유전자로 지칭함”)는 서열번호: 57로 나타낸 바와 같은 643 bp 길이의 전체 염기서열을 가진다.
서열번호: 57의 염기서열에서, 뉴클레오티드 번호 2 내지 595 부위(593-595: 종료코돈)에 해당하는 오픈 리딩 프레임(open reading frame)은 전체 단백질 코딩 영역으로서 이로부터 유도되는 아미노산 서열은 서열번호: 58에 나타나 있으며 197 개의 아미노산으로 이루어져 있다(“PIG50 단백질”).
그러나, 코돈의 축퇴성(degeneracy)으로 인해서 또는 상기 원암 유전자를 발현시키고자 하는 생물에서 선호되는 코돈을 고려하여 본 발명의 원암 유전자는 코딩영역으로부터 발현되는 발암단백질의 아미노산 서열을 변화시키지 않는 범위내에서 코딩영역에 다양한 변형이 이루어질 수 있고 코딩영역을 제외한 부분에서도 유전자의 발현에 영향을 미치지 않는 범위내에서 다양한 변형 또는 수식이 이루어질 수 있으며, 그러한 변형 유전자 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 서열번호: 57의 원암 유전자와 실질적으로 동일한 염기 서열을 갖는 폴리뉴클레오티드 및 상기 유전자의 단편을 역시 포함한다. 실질적으로 동일한 폴리뉴클레오티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 원암 유전자로부터 발현되는 단백질은 197개의 아미노산으로 이루어져 있고 서열번호: 58과 같은 서열을 가지며 크기는 약 22 kDa이다. 그러나, 상기 단백질의 아미노산 서열에서도 역시 단백질의 기능에 영향을 미치지 않는 범위내에서 아미노산의 치환, 부가 또는 결실이 이루어질 수 있으며, 목적에 따라 단백질의 일부만이 사용될 수도 있다. 그러한 변형된 아미노산 서열 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 발암 단백질과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 그의 단편을 역시 포함하며, 실질적으로 동일한 폴리펩티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
16.PIG54
본 발명의 원암(原癌)유전자(protooncogene)인 인간 세포 증식유도 유전자 54(proliferation-inducing gene 54; PIG54, “이후 PIG54 원암유전자로 지칭함”)는 서열번호: 61로 나타낸 바와 같은 1936 bp 길이의 전체 염기서열을 가진다.
서열번호: 61의 염기서열에서, 뉴클레오티드 번호 38 내지 1840 부위(1838-1840: 종료코돈)에 해당하는 오픈 리딩 프레임(open reading frame)은 전체 단백질 코딩 영역으로서 이로부터 유도되는 아미노산 서열은 서열번호: 62에 나타나 있으며 600개의 아미노산으로 이루어져 있다(“PIG54 단백질”).
그러나, 코돈의 축퇴성(degeneracy)으로 인해서 또는 상기 원암 유전자를 발현시키고자 하는 생물에서 선호되는 코돈을 고려하여 본 발명의 원암 유전자는 코딩영역으로부터 발현되는 발암단백질의 아미노산 서열을 변화시키지 않는 범위내에서 코딩영역에 다양한 변형이 이루어질 수 있고 코딩영역을 제외한 부분에서도 유전자의 발현에 영향을 미치지 않는 범위내에서 다양한 변형 또는 수식이 이루어질 수 있으며, 그러한 변형 유전자 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 서열번호: 61의 원암 유전자와 실질적으로 동일한 염기 서열을 갖는 폴리뉴클레오티드 및 상기 유전자의 단편을 역시 포함한다. 실질적으로 동일한 폴리뉴클레오티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 원암 유전자로부터 발현되는 단백질은 600개의 아미노산으로 이루어져 있고 서열번호: 62와 같은 서열을 가지며 크기는 약 69 kDa이다. 그러나, 상 기 단백질의 아미노산 서열에서도 역시 단백질의 기능에 영향을 미치지 않는 범위내에서 아미노산의 치환, 부가 또는 결실이 이루어질 수 있으며, 목적에 따라 단백질의 일부만이 사용될 수도 있다. 그러한 변형된 아미노산 서열 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 발암 단백질과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 그의 단편을 역시 포함하며, 실질적으로 동일한 폴리펩티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
17.
PIG55
본 발명의 원암(原癌)유전자(protooncogene)인 인간 세포 증식유도 유전자 55(proliferation-inducing gene 55; PIG55, “이후 PIG55 원암유전자로 지칭함”)는 서열번호: 65로 나타낸 바와 같은 526 bp 길이의 전체 염기서열을 가진다.
서열번호: 65의 염기서열에서, 뉴클레오티드 번호 15 내지 485 부위(483-485: 종료코돈)에 해당하는 오픈 리딩 프레임(open reading frame)은 전체 단백질 코딩 영역으로서 이로부터 유도되는 아미노산 서열은 서열번호: 66에 나타나 있으며 156개의 아미노산으로 이루어져 있다(“PIG55 단백질”).
그러나, 코돈의 축퇴성(degeneracy)으로 인해서 또는 상기 원암 유전자를 발현시키고자 하는 생물에서 선호되는 코돈을 고려하여 본 발명의 원암 유전자는 코딩영역으로부터 발현되는 발암단백질의 아미노산 서열을 변화시키지 않는 범위내에서 코딩영역에 다양한 변형이 이루어질 수 있고 코딩영역을 제외한 부분에서도 유전자의 발현에 영향을 미치지 않는 범위내에서 다양한 변형 또는 수식이 이루어질 수 있으며, 그러한 변형 유전자 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 서열번호: 65의 원암 유전자와 실질적으로 동일한 염기 서열을 갖는 폴리뉴클레오티드 및 상기 유전자의 단편을 역시 포함한다. 실질적으로 동일한 폴리뉴클레오티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 원암 유전자로부터 발현되는 단백질은 156개의 아미노산으로 이루어져 있고 서열번호: 66과 같은 서열을 가지며 크기는 약 18 kDa이다. 그러나, 상기 단백질의 아미노산 서열에서도 역시 단백질의 기능에 영향을 미치지 않는 범위내에서 아미노산의 치환, 부가 또는 결실이 이루어질 수 있으며, 목적에 따라 단백질의 일부만이 사용될 수도 있다. 그러한 변형된 아미노산 서열 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 발암 단백질과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 그의 단편을 역시 포함하며, 실질적으로 동일한 폴리펩티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
18.GIG9
본 발명의 원암 (原癌) 유전자 (protooncogene)인 인간 원암유전자 GIG9은 서열번호: 69로 기재되는 1008 bp 길이의 전체 염기서열을 가진다.
서열번호: 69의 염기서열에서, 뉴클레오티드 번호 1 내지 1008 부위 (1006-1008: 종료코돈)에 해당하는 오픈 리딩 프레임 (open reading frame)은 전체 단백질 코딩 영역으로서 이로부터 유도되는 아미노산 서열은 서열번호: 70에 나타나 있 으며 335개의 아미노산으로 이루어져 있다 (이후 "GIG9 단백질"로 지칭함).
서열번호: 69의 염기서열은 미국 국립보건원의 진뱅크(NIH GenBank) 데이터베이에 등록번호 제 AY453396 호로 등록되었으며(공개예정일: 2005년 3월 31일) 염기서열 분석결과 이 데이터베이스에 등록된 제 NM_016930호인 Homo sapiens syntaxin 18 (STX18) 유전자와 유전자 염기서열이 유사함이 확인되었다. 그러나 금번 연구 결과 자궁암을 포함한 여러 인간 종양들에서는 발현이 높고 반면에 여러 정상조직들에서는 발현이 매우 낮은 GIG9 원암유전자를 발굴하게 되었다.
그러나, 코돈의 축퇴성 (degeneracy)으로 인해서 또는 상기 원암유전자를 발현시키고자 하는 생물에서 선호되는 코돈을 고려하여 본 발명의 원암유전자는 코딩영역으로부터 발현되는 발암단백질의 아미노산 서열을 변화시키지 않는 범위 내에서 코딩영역에 다양한 변형이 이루어질 수 있고 코딩영역을 제외한 부분에서도 유전자의 발현에 영향을 미치지 않는 범위 내에서 다양한 변형 또는 수식이 이루어질 수 있으며, 그러한 변형 유전자 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 서열번호: 69의 원암유전자와 실질적으로 동일한 염기 서열을 갖는 폴리뉴클레오티드 및 상기 유전자의 단편을 역시 포함한다. 실질적으로 동일한 폴리뉴클레오티드란 서열번호: 70과 동일한 단백질 번역 생성물을 암호화하는 DNA로서 서열번호: 69와 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 원암유전자로부터 발현되는 단백질은 335개의 아미노산으로 이루어져 있고 서열번호: 70으로 기재되는 아미노산 서열을 가지며 크기는 약 38 kDa이 다. 그러나, 상기 단백질의 아미노산 서열에서도 역시 단백질의 기능에 영향을 미치지 않는 범위 내에서 아미노산의 치환, 부가 또는 결실이 이루어질 수 있으며, 목적에 따라 단백질의 일부만이 사용될 수도 있다. 그러한 변형된 아미노산 서열 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 발암 단백질과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 그의 단편을 역시 포함하며, 실질적으로 동일한 폴리펩티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
19.HLC-9
본 발명의 원암(原癌)유전자(protooncogene)인 Human lung cancer-associated gene 9 (이후 “HLC9 원암유전자”로 지칭함)은 서열번호: 73으로 나타낸 바와 같은 1382 bp 길이의 전체 염기서열을 가진다.
서열번호: 73의 염기서열에서, 뉴클레오티드 번호 27 내지 1370 부위(1368-1370: 종료코돈)에 해당하는 오픈 리딩 프레임(open reading frame)은 전체 단백질 코딩 영역으로서 이로부터 유도되는 아미노산 서열은 서열번호: 74에 나타나 있으며 447개의 아미노산으로 이루어져 있다(이후“HLC9 단백질”로 지칭함).
서열번호: 73의 염기서열은 미국 국립보건원의 진뱅크(NIH GenBank) 데이터베이스에 등록번호 제 AY189686 호로 등록되었으며(공개예정일: 2004년 5월 1일) 염기서열 분석결과 이 데이터베이스에 등록된 제 NM_002717호인 Homo sapiens 단백질 포스페테이즈 2 (formerly 2A), 조절 소단위체 B (PR 52), 알파 이소폼 (PPP2R2A)유전자 등과 일부 유전자 염기서열이 유사함이 확인되었다. 그러나 금번 연구 결과 폐암을 포함한 여러 인간 종양들에서는 발현이 높고 반면에 여러 정상조직들에서는 발현이 매우 낮은 HLC9 원암유전자를 발굴하게 되었다.
그러나, 코돈의 축퇴성(degeneracy)으로 인해서 또는 상기 원암 유전자를 발현시키고자 하는 생물에서 선호되는 코돈을 고려하여 본 발명의 원암 유전자는 코딩영역으로부터 발현되는 발암단백질의 아미노산 서열을 변화시키지 않는 범위내에서 코딩영역에 다양한 변형이 이루어질 수 있고 코딩영역을 제외한 부분에서도 유전자의 발현에 영향을 미치지 않는 범위내에서 다양한 변형 또는 수식이 이루어질 수 있으며, 그러한 변형 유전자 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 서열번호: 73의 원암 유전자와 실질적으로 동일한 염기 서열을 갖는 폴리뉴클레오티드 및 상기 유전자의 단편을 역시 포함한다. 실질적으로 동일한 폴리뉴클레오티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 원암 유전자 HLC9으로부터 발현되는 단백질은 447개의 아미노산으로 이루어져 있고 서열번호: 74와 같은 서열을 가지며 크기는 약 51 kDa이다.
그러나, 상기 단백질들의 아미노산 서열에서도 역시 단백질의 기능에 영향을 미치지 않는 범위내에서 아미노산의 치환, 부가 또는 결실이 이루어질 수 있으며, 목적에 따라 단백질의 일부만이 사용될 수도 있다. 그러한 변형된 아미노산 서열 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 발암 단백질들과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 그의 단편을 역시 포함하며, 실질적으로 동일한 폴리펩티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게 는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
20.GIG18
본 발명의 원암(原癌)유전자(protooncogene)인 GIG18 유전자 (“이후 GIG18 원암유전자로 지칭함”)는 서열번호: 77로 나타낸 바와 같은 1301 bp 길이의 전체 염기서열을 가진다.
서열번호: 77의 염기서열에서, 뉴클레오티드 번호 3 내지 1244 부위(1242-1244: 종료코돈)에 해당하는 오픈 리딩 프레임(open reading frame)은 전체 단백질 코딩 영역으로서 이로부터 유도되는 아미노산 서열은 서열번호: 78에 나타나 있으며 413개의 아미노산으로 이루어져 있다(“GIG18 단백질”).
그러나, 코돈의 축퇴성(degeneracy)으로 인해서 또는 상기 원암 유전자를 발현시키고자 하는 생물에서 선호되는 코돈을 고려하여 본 발명의 원암 유전자는 코딩영역으로부터 발현되는 발암단백질의 아미노산 서열을 변화시키지 않는 범위내에서 코딩영역에 다양한 변형이 이루어질 수 있고 코딩영역을 제외한 부분에서도 유전자의 발현에 영향을 미치지 않는 범위내에서 다양한 변형 또는 수식이 이루어질 수 있으며, 그러한 변형 유전자 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 서열번호: 77의 원암 유전자와 실질적으로 동일한 염기 서열을 갖는 폴리뉴클레오티드 및 상기 유전자의 단편을 역시 포함한다. 실질적으로 동일한 폴리뉴클레오티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 원암 유전자로부터 발현되는 단백질은 413개의 아미노산으로 이루 어져 있고 서열번호: 78과 같은 서열을 가지며 크기는 약 46 kDa이다. 그러나, 상기 단백질의 아미노산 서열에서도 역시 단백질의 기능에 영향을 미치지 않는 범위내에서 아미노산의 치환, 부가 또는 결실이 이루어질 수 있으며, 목적에 따라 단백질의 일부만이 사용될 수도 있다. 그러한 변형된 아미노산 서열 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 발암 단백질과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 그의 단편을 역시 포함하며, 실질적으로 동일한 폴리펩티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
21.MIG22
본 발명의 원암 (原癌) 유전자 (protooncogene)인 인간 이동 유도유전자 14 (human migration-inducing gene 22; MIG22, 이후 “MIG22 원암유전자”로 지칭함)은 서열번호: 81로 기재되는 749 bp 길이의 전체 염기서열을 가진다.
서열번호: 81의 염기서열에서, 뉴클레오티드 번호 15 내지 734 부위 (732-734: 종료코돈)에 해당하는 오픈 리딩 프레임 (open reading frame)은 전체 단백질 코딩 영역으로서 이로부터 유도되는 아미노산 서열은 서열번호: 82에 나타나 있으며 239개의 아미노산으로 이루어져 있다 (이후 "MIG22 단백질"로 지칭함).
서열번호: 81의 염기서열은 미국 국립보건원의 진뱅크(NIH GenBank) 데이터베이스에 등록번호 제 AY771595 호로 등록되었으며(공개예정일: 2005년 12월 31일) 염기서열 분석결과 이 데이터베이스에 등록된 제 D45248호 유전자와 제 BC072025호인 유전자와 염기서열이 유사함이 확인되었다. 그러나 기 보고된 RAE1 유전자의 기 능과는 달리 금번 연구 결과 폐암을 포함한 여러 인간 종양들에서는 발현이 높고 반면에 여러 정상조직들에서는 발현이 매우 낮은 MIG22 원암유전자를 발굴하게 되었다.
그러나, 코돈의 축퇴성 (degeneracy)으로 인해서 또는 상기 원암유전자를 발현시키고자 하는 생물에서 선호되는 코돈을 고려하여 본 발명의 원암유전자는 코딩영역으로부터 발현되는 발암단백질의 아미노산 서열을 변화시키지 않는 범위 내에서 코딩영역에 다양한 변형이 이루어질 수 있고 코딩영역을 제외한 부분에서도 유전자의 발현에 영향을 미치지 않는 범위 내에서 다양한 변형 또는 수식이 이루어질 수 있으며, 그러한 변형 유전자 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 서열번호: 81의 원암유전자와 실질적으로 동일한 염기 서열을 갖는 폴리뉴클레오티드 및 상기 유전자의 단편을 역시 포함한다. 실질적으로 동일한 폴리뉴클레오티드란 서열번호: 82와 동일한 단백질 번역 생성물을 암호화하는 DNA로서 서열번호: 81과 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 원암유전자로부터 발현되는 단백질은 239개의 아미노산으로 이루어져 있고 서열번호: 82로 기재되는 아미노산 서열을 가지며 크기는 약 27 kDa이다. 그러나, 상기 단백질의 아미노산 서열에서도 역시 단백질의 기능에 영향을 미치지 않는 범위 내에서 아미노산의 치환, 부가 또는 결실이 이루어질 수 있으며, 목적에 따라 단백질의 일부만이 사용될 수도 있다. 그러한 변형된 아미노산 서열 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 발암 단백질과 실질적으 로 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 그의 단편을 역시 포함하며, 실질적으로 동일한 폴리펩티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 원암 유전자 및 단백질은 사람의 암 조직으로부터 분리하거나, 공지의 DNA 또는 펩타이드 합성 방법에 따라 합성할 수도 있다. 또한, 이렇게 제조된 유전자를 당 분야에 공지된 미생물 발현용 벡터에 삽입하여 발현 벡터를 제조한 후 이를 적절한 숙주 세포, 예를 들어, 대장균 또는 효모 세포 등에 도입시킬 수 있다. 이와 같이 형질전환된 숙주를 이용하여 본 발명의 유전자의 DNA를 대량으로 복제하거나 단백질을 대량 생산할 수 있다. 예를 들어, 본 발명에서는 PIG 전장 cDNA를 발현 벡터 pBAD/Thio-Topo (Invitrogen, USA)에 삽입한 후 대장균 DH5α에 형질전환시켜, 형질전환체를 얻을 수 있다.
벡터의 제작시에는, 상기 원암 유전자 또는 단백질을 생산하고자 하는 숙주 세포의 종류에 따라 프로모터, 터미네이터 등과 같은 발현 조절서열, 자가복제서열 및 분비 시그날 등을 적절히 선택하고 조합할 수 있다.
본 발명의 유전자는 노던 블롯(northern blot) 등의 분석방법에서 정상 유방조직에서는 발현이 거의 확인되지 않은 반면 유방암 조직과 유방암 세포주들에서는 그 과발현이 확인되므로 유방암을 유발시키는 강력한 발암 유전자로 판단된다. 유방암과 같은 상피성 조직외에도, 본 발명의 원암 유전자는 유방암, 백혈병, 자궁암, 및 악성림프종등과 같은 많은 다른 암 종양들에서 높게 발현된다. 따라서, 본 발명의 원암유전자는 다양한 암의 발생에 공통된 발암유전자일 것으로 판단되며, 다양한 암의 진단, 형질전환된 동물의 제조 및 안티-센스(anti-sense) 유전자 치료 등에 효과적으로 이용될 수 있다.
상기 원암 유전자를 이용한 암의 진단 방법은, 예를 들어, 상기 원암 유전자의 전부 또는 일부를 프로브로서 사용하여 대상자의 체액으로부터 분리한 핵산과 하이브리드화한 후 당 분야에 공지된 다양한 방법으로 이를 검출하므로써 대상자가 본 발명의 원암 유전자를 가지고 있는지를 판단하는 과정을 포함한다. 상기 프로브를 방사선 동위원소 또는 효소 등으로 표지하면 용이하게 유전자의 존재를 확인할 수 있다. 따라서, 본 발명에서는 상기 원암 유전자의 전부 또는 일부를 포함하는 암 진단용 키트를 역시 제공한다.
형질전환 동물은 본 발명의 원암 유전자를 포유동물, 예를 들어, 래트 등의 설치류 동물에 도입함으로써 제조할 수 있으며, 이 유전자를 적어도 8세포기 이전의 수정란 단계에서 도입하는 것이 바람직하다. 이렇게 제조된 형질전환 동물은 발암성 물질 또는 항산화제와 같은 항암성 물질의 탐색 등에 유용하게 사용될 수 있다.
본 발명의 원암 유전자로부터 유도되는 단백질은 진단 도구로서 항체를 생산하는데 유용하게 사용될 수 있다. 본 발명의 항체는, 본 발명의 원암 유전자로부터 발현된 서열번호: 2; 서열번호: 6; 서열번호: 10; 서열번호: 14; 서열번호: 18; 서열번호: 22; 서열번호: 26; 서열번호: 30; 서열번호: 34; 서열번호: 38; 서열번호: 42;서열번호: 46; 서열번호: 50; 서열번호: 54; 서열번호: 58; 서열번호: 62; 서열번호: 66; 서열번호: 70; 서열번호: 74; 서열번호: 78; 또는 서열번호: 82의 아미노산 서열을 갖는 단백질 또는 그의 단편을 이용하여 당 분야에 공지된 통상의 방법에 따라 모노클로날 항체 또는 폴리클로날 항체로서 제조할 수 있으며, 이러한 항체들을 이용하여 당분야에 공지된 효소 면역측정법(enzyme linked immunosorbent assay; ELISA), 방사선면역측정법(radioimmunoassay; RIA), 샌드위치 측정법(sandwich assay), 폴리아크릴 겔상의 웨스턴 블롯 또는 면역 블롯 등의 방법에 의해 대상자의 체액 시료중에 상기 단백질이 발현되었는지를 확인함으로써 암을 진단할 수 있다.
또한, 본 발명의 원암 유전자를 이용하여 지속적으로 증식할 수 있는 암 세포주를 확립할 수 있으며, 이러한 세포주는 예를 들어, 상기 원암 유전자가 형질도입된 섬유모세포를 이용하여 누드 마우스 등에 형성시킨 종양조직으로부터 제조할 수 있다. 이러한 암 세포주는 항암제 등의 탐색에 유용하게 이용될 수 있다.
이하 본 발명을 실시예에 의하여 상세히 설명하나, 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1: 종양세포 배양 및 총 RNA의 분리
1-1;
PIG12
,
PIG30
,
PIG31
,
PIG46
,
PIG47
,
PIG48
,
PIG50
,
PIG55
(단계 1) 종양세포 배양
mRNA의 감별 전개를 위하여, 유방적출술(mastectomy)을 받은 유방암 환자로부터 정상유방 조직, 그리고 이전에 항암요법과 방사선치료를 받지않은 유방암 환자로부터 수술시에 원발성 유방 종양조직을 취하였다. 감별 전개법에는 인간 유방암 세포주로 MCF-7 (American Type Culture Collection; ATCC Number HTB-22) 유방 암세포주를 사용하였다. 실험에 사용한 배양 세포들은 지수적 증식 도중의 세포들로서 트리판 블루(trypan blue) 염료로 염색할 때 95% 이상의 생존도를 보이는 세포를 이용하였다(프레쉬니(Freshney), "Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique" 2nd Ed., A. R. Liss, New York(1987) 참조).
(단계 2) RNA의 분리 및 mRNA의 감별 전개법
상업적으로 판매되는 시스템인 RNeasy 총 RNA 키트(Qiagen Inc., 독일)을 사용하여 단계 1에서 얻은 정상 유방 조직, 원발성 유방암조직, 및 MCF-7 세포로부터 총 RNA를 추출하였다. 메시지 클린 키트(Message clean kit)(GenHunter Corp., Brookline, MA)를 사용하여 RNA로부터 DNA 오염원을 제거하였다.
1-2;PIG18,
PIG23
,
PIG27
,
PIG28,GIG9
(단계 1) 종양세포의 배양
mRNA의 감별 전개를 위하여, 자궁적출술 (hysterectomy)을 받은 자궁근종 환자로부터 정상자궁경부 (exocervical) 조직, 그리고 이전에 항암요법과 방사선치료를 받지 않은 자궁암 환자로부터 수술시에 원발성 자궁경부 종양조직 및 전이 임파절 종양조직을 취하였다. 감별 전개법에는 인간 자궁경부암 세포주로 CUMC-6 (Kim, J. W. et al., Gynecol. Oncol . 62: 230-240, 1996)을 사용하였다.
상기 수득된 조직 및 CUMC-6 세포주로부터 얻은 세포를 2 mM 글루타민, 100 IU/㎖ 페니실린, 100 ㎍/㎖ 스트렙토마이신 및 10% 우태아 혈청 (Gibco, USA)이 함유된 웨이마우쓰 (Waymouth's) MB 752/1 배양액 (Gibco)에서 증식시켰다. 실험에 사용한 배양 세포들은 지수적 증식 과정의 세포들로서 트리판 블루 (trypan blue) 염색에 의해 95% 이상의 생존도를 보이는 세포를 이용하였다 (Freshney, "Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique" 2nd Ed., A. R. Liss, New York, 1987).
(단계 2) RNA의 분리 및 mRNA의 감별 전개법
상업적으로 판매되는 시스템인 RNeasy 총 RNA 키트 (Qiagen Inc., 독일)를 사용하여 단계 1에서 얻은 정상 자궁경부 조직, 원발성 자궁경부 종양조직, 전이 임파절 종양조직 및 CUMC-6 세포로부터 총 RNA를 추출하였다. 메시지 클린 키트 (Message clean kit, GenHunter Corp., Brookline, MA)를 사용하여 RNA로부터 DNA 오염원을 제거하였다.
1-3;
PIG38
,
PIG43
,
PIG44,PIG54,GIG18
(단계 1) 종양세포 배양
mRNA의 감별 전개를 위하여, 간 조직생검 (liver biopsy)을 받은 환자로부터 정상간 조직, 그리고 이전에 항암요법과 방사선치료를 받지않은 간암 환자로부터 조직생검시에 원발성 간 종양조직을 취하였다. 감별 전개법에는 인간 간암 세포주로 HepG2 (American Type Culture Collection) 간암세포주를 사용하였다. 실험에 사용한 배양 세포들은 지수적 증식 도중의 세포들로서 트리판 블루(trypan blue) 염료로 염색할 때 95% 이상의 생존도를 보이는 세포를 이용하였다(프레쉬니(Freshney), "Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique" 2nd Ed., A. R. Liss, New York(1987) 참조).
(단계 2) RNA의 분리 및 mRNA의 감별 전개법
상업적으로 판매되는 시스템인 RNeasy 총 RNA 키트(Qiagen Inc., 독일)을 사용하여 단계 1에서 얻은 정상 간 조직, 원발성 간암조직, 및 HepG2 세포로부터 총 RNA를 추출하였다. 메시지 클린 키트(Message clean kit)(GenHunter Corp., Brookline, MA)를 사용하여 RNA로부터 DNA 오염원을 제거하였다.
1-4;
PIG40
(단계 1) 종양세포의 배양
mRNA의 감별 전개를 위하여, 정상인의 말초혈액 (peripheral blood leukocytes) 조직, 그리고 이전에 항암요법과 방사선치료를 받지 않은 백혈병환자로부터 골수조직생검사 (bone marrow biopsy)에 원발성 백혈병 골수조직을 취하였다. 감별 전개법에는 인간 만성 골수성 백혈병 세포주로 K-562 (Americal Type Cell Collection; ATCC Number CCL-243)를 사용하였다.
상기 수득된 조직 및 K-562 세포주로부터 얻은 세포를 2 mM 글루타민, 100 IU/㎖ 페니실린, 100 ㎍/㎖ 스트렙토마이신 및 10% 우태아 혈청 (Gibco, USA)이 함유된 웨이마우쓰 (Waymouth's) MB 752/1 배양액 (Gibco)에서 증식시켰다. 실험에 사용한 배양 세포들은 지수적 증식 과정의 세포들로서 트리판 블루 (trypan blue) 염색에 의해 95% 이상의 생존도를 보이는 세포를 이용하였다 (Freshney, "Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique" 2nd Ed., A. R. Liss, New York, 1987).
(단계 2) RNA의 분리 및 mRNA의 감별 전개법
상업적으로 판매되는 시스템인 RNeasy 총 RNA 키트 (Qiagen Inc., 독일)를 사용하여 단계 1에서 얻은 정상인의 말초혈액 (peripheral blood leukocytes), 원발성 백혈병 골수조직 및 인간 만성 골수성 백혈병 세포주로부터 총 RNA를 추출하였다. 메시지 클린 키트 (Message clean kit, GenHunter Corp., Brookline, MA)를 사용하여 RNA로부터 DNA 오염원을 제거하였다.
1-5;HLC-9,MIG22
(단계 1) 종양세포 배양
mRNA의 감별 전개를 위하여, 정상 폐조직, 그리고 이전에 항암요법과 방사선치료를 받지않은 폐암 환자로부터 수술시에 원발성 폐암조직 및 우측 폐에 전이된 암조직을 취하였다. 감별 전개법에는 인간 폐암 세포주로 A549(American Type Culture Collection; ATCC Number CCL-185)를 사용하였다.
상기 수득된 조직 및 A549 폐암세포주로부터 얻은 세포를 2 mM 글루타민, 100 IU/㎖ 페니실린, 100 ㎍/㎖ 스트렙토마이신 및 10% 우태아 혈청(Gibco, USA)이 함유된 웨이마우쓰(Waymouth's) MB 752/1 배양액(Gibco)에서 증식시켰다. 실험에 사용한 배양 세포들은 지수적 증식 도중의 세포들로서 트리판 블루(trypan blue) 염료로 염색할 때 95% 이상의 생존도를 보이는 세포를 이용하였다(프레쉬니(Freshney), "Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique" 2nd Ed., A. R. Liss, New York(1987) 참조).
(단계 2) RNA의 분리 및 mRNA의 감별 전개법
상업적으로 판매되는 시스템인 RNeasy 총 RNA 키트(Qiagen Inc., 독일)을 사용하여 단계 1에서 얻은 정상 폐조직, 원발성 폐암조직, 전이된 폐암조직 및 A549 세포로부터 총 RNA를 추출하였다. 메시지 클린 키트(Message clean kit)(GenHunter Corp., Brookline, MA)를 사용하여 RNA로부터 DNA 오염원을 제거하였다.
실시예 2: 감별 전개 역전사 중합효소 연쇄반응(differential display reverse transcription(DDRT)-PCR)
감별전개 역전사는 상기 리앙과 파디에 의해 기술된 역전사-중합효소 연쇄반응(RT-PCR)을 약간 변형하여 수행하였다.
2-1;
PIG12
먼저, 실시예 1의 단계 1에서 얻은 총 RNA 0.2㎍ 씩에 고정된 올리고-dT 프라이머로서 서열번호 : 3의 H-T11A 고정 프라이머 (5’-AAGCTTTTTTTTTTTA-3’)를 사용하여 역전사를 수행하였다.
이어서, 0.5mM [α-35S] dATP(1200 Ci/mmole) 존재하에, 동일한 고정 프라이머 및 무작위 5‘ 13프라이머(RNAimage primer sets 1-5, H-AP 1-40들중 H-AP21 프라이머(서열번호: 4) (5’-AAGCTTTCTCTGG-3’)를 사용하여 PCR을 수행하였다. PCR 반응의 조건은 95℃에서 40초 반응 후 40℃에서 2분, 72℃에서 40초를 40회 반응시키며 최종 연장(final extension)을 위하여 72℃에서 5 분간 더 반응시켰다.
PCR-증폭된 단편을 6% 폴리아크릴아미드 시퀀싱 겔에 용해시킨 후, 방사능 사진을 이용하여 서로 다른 발현(differentially expressed) 정도를 보이는 밴드의 위치를 확인하였다.
건조된 겔로부터 262 염기쌍(bp) 크기의 밴드, FC21 cDNA (서열번호: 1의 913-1174 bp)를 도려내었다. 15분간 가열하여 FC21 cDNA를 용출시킨후, [α-35S] 표지된 dATP(1200 Ci/mmole) 및 20μM dNTP를 사용하지 않는 것을 제외하고는 상기와 동일한 프라이머 및 동일한 조건하에서 PCR을 수행하여 재증폭시켰다.
2-2; PIG18
고정된 올리고-dT 프라이머로서 서열번호: 7로 기재되는 염기서열을 갖는 H-T11C 고정 프라이머 (5‘-AAGCTTTTTTTTTTTC-3', RNAimage kit, Genhunter, Cor., MA, 및 서열번호: 8로 기재되는 염기서열을 갖는 H-AP11 프라이머 (5'-AAGCTTCGGGTAA-3')를 사용한 것을 제외하곤 2-1과 동일한 과정을 거쳐서 PCR을 수행하였다.
건조된 겔로부터 277 염기쌍 (bp) 크기의 밴드, MC113 cDNA (서열번호: 5의 2023-2299 bp)를 도려내었다. 15분간 가열하여 MC113 cDNA를 용출시킨 후, [α-35S] 표지된 dATP (1200 Ci/mmole) 및 20 μM dNTP를 사용하지 않는 것을 제외하고는 상기와 동일한 프라이머 및 동일한 조건 하에서 PCR을 수행하여 재증폭시켰다.
2-3;
PIG23
고정된 올리고-dT 프라이머로서 서열번호: 11로 기재되는 염기서열을 갖는 H-T11C 고정 프라이머 (5‘-AAGCTTTTTTTTTTTC-3', RNAimage kit, Genhunter, Cor., MA, 및 서열번호: 12로 기재되는 염기서열을 갖는 H-AP33 프라이머 (5'-AAGCTTGCTGCTC-3')를 사용한 것을 제외하곤 2-1과 동일한 과정을 거쳐서 PCR을 수행하였다.
건조된 겔로부터 278 염기쌍 (bp) 크기의 밴드, CA338d cDNA (서열번호: 9의 1822-2099 bp)를 도려내었다. 15분간 가열하여 CA338d cDNA를 용출시킨 후, [α-35S] 표지된 dATP (1200 Ci/mmole) 및 20 μM dNTP를 사용하지 않는 것을 제외하고는 상 기와 동일한 프라이머 및 동일한 조건 하에서 PCR을 수행하여 재증폭시켰다.
2-4;
PIG27
올리고-dT 프라이머로서 서열번호: 15로 기재되는 염기서열을 갖는 H-T11A 고정 프라이머 (5‘-AAGCTTTTTTTTTTTA-3', RNAimage kit, Genhunter, Cor., MA, USA) 및 서열번호: 16으로 기재되는 염기서열을 갖는 H-AP12 프라이머 (5'-AAGCTTGAGTGCT-3')를 사용한 것을 제외하곤 2-1과 동일한 과정을 거쳐서 PCR을 수행하였다.
건조된 겔로부터 177 염기쌍 (bp) 크기의 밴드, H124 cDNA (서열번호: 13의 243-419 bp)를 도려내었다. 15분간 가열하여 H124 cDNA를 용출시킨 후, [α-35S] 표지된 dATP (1200 Ci/mmole) 및 20 μM dNTP를 사용하지 않는 것을 제외하고는 상기와 동일한 프라이머 및 동일한 조건 하에서 PCR을 수행하여 재증폭시켰다.
2-5;
PIG28
고정된 올리고-dT 프라이머로서 서열번호: 19로 기재되는 염기서열을 갖는 H-T11C 고정 프라이머 (5‘-AAGCTTTTTTTTTTTC-3', RNAimage kit, Genhunter, Cor., MA, USA)및 서열번호: 20으로 기재되는 염기서열을 갖는 H-AP12 프라이머 (5'-AAGCTTGAGTGCT-3')를 사용한 것을 제외하곤 2-1과 동일한 과정을 거쳐서 PCR을 수행하였다.
건조된 겔로부터 232 염기쌍 (bp) 크기의 밴드, H122 cDNA (서열번호: 17의 748-979 bp)를 도려내었다. 15분간 가열하여 H122 cDNA를 용출시킨 후, [α-35S] 표지된 dATP (1200 Ci/mmole) 및 20 μM dNTP를 사용하지 않는 것을 제외하고는 상기와 동일한 프라이머 및 동일한 조건 하에서 PCR을 수행하여 재증폭시켰다.
2-6;
PIG30
고정된 올리고-dT 프라이머로서 서열번호: 23으로 기재되는 염기서열을 갖는 H-T11C 고정 프라이머 (5‘-AAGCTTTTTTTTTTTC-3', RNAimage kit, Genhunter, Cor., MA, 및 서열번호: 24로 기재되는 염기서열을 갖는 H-AP33 프라이머 (5'-AAGCTTGCTGCTC-3')를 사용한 것을 제외하곤 2-1과 동일한 과정을 거쳐서 PCR을 수행하였다.
건조된 겔로부터 271 염기쌍(bp) 크기의 밴드, FC23 cDNA (서열번호: 21의 1823-2093 bp)를 도려내었다. 15분간 가열하여 FC23 cDNA를 용출시킨후, [α-35S] 표지된 dATP(1200 Ci/mmole) 및 20μM dNTP를 사용하지 않는 것을 제외하고는 상기와 동일한 프라이머 및 동일한 조건하에서 PCR을 수행하여 재증폭시켰다.
2-7;
PIG31
고정된 올리고-dT 프라이머로서 서열번호 : 27의 H-T11G 고정 프라이머 (5’-AAGCTTTTTTTTTTTG-3’) 및 서열번호: 28로 기재되는 염기서열을 갖는 H-AP34 프라이머 (5’-AAGCTTCAGCAGC-3’)를 사용한 것을 제외하곤 2-1과 동일한 과정을 거쳐서 PCR을 수행하였다.
건조된 겔로부터 312 염기쌍(bp) 크기의 밴드, FC34 cDNA (서열번호: 25의 1884-2195 bp)를 도려내었다. 15분간 가열하여 FC34 cDNA를 용출시킨후, [α-35S] 표지된 dATP(1200 Ci/mmole) 및 20μM dNTP를 사용하지 않는 것을 제외하고는 상기와 동일한 프라이머 및 동일한 조건하에서 PCR을 수행하여 재증폭시켰다.
2-8;
PIG38
고정된 올리고-dT 프라이머로서 서열번호 : 31의 H-T11C 고정 프라이머 (5’-AAGCTTTTTTTTTTTC-3’) 및 서열번호: 32로 기재되는 염기서열을 갖는 H-AP10 프라이머(5’-AAGCTTCCACGTA-3’)를 사용한 것을 제외하곤 2-1과 동일한 과정을 거쳐서 PCR을 수행하였다.
건조된 겔로부터 267 염기쌍(bp) 크기의 밴드, HP103 cDNA (서열번호: 29의 1633-1899 bp)를 도려내었다. 15분간 가열하여 HP103 cDNA를 용출시킨후, [α-35S] 표지된 dATP(1200 Ci/mmole) 및 20μM dNTP를 사용하지 않는 것을 제외하고는 상기와 동일한 프라이머 및 동일한 조건하에서 PCR을 수행하여 재증폭시켰다.
2-9;
PIG40
고정된 올리고-dT 프라이머로서 서열번호 : 35의 H-T11C 고정 프라이머 (5‘-AAGCTTTTTTTTTTTC-3', RNAimage kit, Genhunter, Cor., MA, USA)
및 서열번호: 36으로 기재되는 염기서열을 갖는 H-AP11 프라이머 (5'-AAGCTTCGGGTAA-3')를 사용한 것을 제외하곤 2-1과 동일한 과정을 거쳐서 PCR을 수행하였다.
건조된 겔로부터 215 염기쌍 (bp) 크기의 밴드, GV11 cDNA (서열번호: 33의 1313-1527 bp)를 도려내었다. 15분간 가열하여 GV11 cDNA를 용출시킨 후, [α-35S] 표지된 dATP (1200 Ci/mmole) 및 20 μM dNTP를 사용하지 않는 것을 제외하고는 상기와 동일한 프라이머 및 동일한 조건 하에서 PCR을 수행하여 재증폭시켰다.
2-10;
PIG43
고정된 올리고-dT 프라이머로서 서열번호 : 39의 H-T11G 고정 프라이머 (5’ -AAGCTTTTTTTTTTTG-3’) 및 서열번호: 40으로 기재되는 염기서열을 갖는 H-AP11 프라이머(5’-AAGCTTCGGGTAA-3’)를 사용한 것을 제외하곤 2-1과 동일한 과정을 거쳐서 PCR을 수행하였다.
건조된 겔로부터 321 염기쌍(bp) 크기의 밴드, HP11 cDNA (서열번호: 37의 879-1199 bp)를 도려내었다. 15분간 가열하여 HP11 cDNA를 용출시킨후, [α-35S] 표지된 dATP(1200 Ci/mmole) 및 20μM dNTP를 사용하지 않는 것을 제외하고는 상기와 동일한 프라이머 및 동일한 조건하에서 PCR을 수행하여 재증폭시켰다.
2-11;
PIG44
고정된 올리고-dT 프라이머로서 서열번호 : 43의 H-T11C 고정 프라이머 (5’-AAGCTTTTTTTTTTTC-3’)및 서열번호: 44로 기재되는 염기서열을 갖는 H-AP23 프라이머(5’-AAGCTTGGCTATG-3’)를 사용한 것을 제외하곤 2-1과 동일한 과정을 거쳐서 PCR을 수행하였다.
건조된 겔로부터 311 염기쌍(bp) 크기의 밴드, HP23 cDNA (서열번호: 41의 1633-1899 bp)를 도려내었다. 15분간 가열하여 HP23 cDNA를 용출시킨후, [α-35S] 표지된 dATP(1200 Ci/mmole) 및 20μM dNTP를 사용하지 않는 것을 제외하고는 상기와 동일한 프라이머 및 동일한 조건하에서 PCR을 수행하여 재증폭시켰다.
2-12;
PIG46
고정된 올리고-dT 프라이머로서 서열번호 : 47의 H-T11A 고정 프라이머 (5’-AAGCTTTTTTTTTTTA-3’)및 서열번호: 48로 기재되는 염기서열을 갖는 H-AP24 프라이머(5’-AAGCTTCACTAGC-3’)를 사용한 것을 제외하곤 2-1과 동일한 과정을 거쳐서 PCR을 수행하였다.
건조된 겔로부터 256 염기쌍(bp) 크기의 밴드, FC24 cDNA (서열번호: 45의 992-1247 bp)를 도려내었다. 15분간 가열하여 FC24 cDNA를 용출시킨후, [α-35S] 표지된 dATP(1200 Ci/mmole) 및 20μM dNTP를 사용하지 않는 것을 제외하고는 상기와 동일한 프라이머 및 동일한 조건하에서 PCR을 수행하여 재증폭시켰다.
2-13;
PIG47
고정된 올리고-dT 프라이머로서 서열번호 : 51의 H-T11C 고정 프라이머 (5’-AAGCTTTTTTTTTTTC-3’) 및 서열번호: 52로 기재되는 염기서열을 갖는 H-AP5 프라이머(5’-AAGCTTAGTAGGC-3’)를 사용한 것을 제외하곤 2-1과 동일한 과정을 거쳐서 PCR을 수행하였다.
건조된 겔로부터 192 염기쌍(bp) 크기의 밴드, FC54 cDNA (서열번호: 49의 587-778 bp)를 도려내었다. 15분간 가열하여 FC54 cDNA를 용출시킨후, [α-35S] 표지된 dATP(1200 Ci/mmole) 및 20μM dNTP를 사용하지 않는 것을 제외하고는 상기와 동일한 프라이머 및 동일한 조건하에서 PCR을 수행하여 재증폭시켰다.
2-14;
PIG48
고정된 올리고-dT 프라이머로서 서열번호 : 55의 H-T11A 고정 프라이머 (5’-AAGCTTTTTTTTTTTA-3’) 및 서열번호: 56으로 기재되는 염기서열을 갖는 H-AP7 프라이머(5’-AAGCTTAACGAGG-3’)를 사용한 것을 제외하곤 2-1과 동일한 과정을 거쳐서 PCR을 수행하였다.
건조된 겔로부터 272 염기쌍(bp) 크기의 밴드, FC71 cDNA (서열번호: 53의 1348-1619 bp)를 도려내었다. 15분간 가열하여 FC71 cDNA를 용출시킨후, [α-35S] 표지된 dATP(1200 Ci/mmole) 및 20μM dNTP를 사용하지 않는 것을 제외하고는 상기와 동일한 프라이머 및 동일한 조건하에서 PCR을 수행하여 재증폭시켰다.
2-15;
PIG50
고정된 올리고-dT 프라이머로서 서열번호 : 59의 H-T11C 고정 프라이머 (5’-AAGCTTTTTTTTTTTC-3’) 및 서열번호: 60으로 기재되는 염기서열을 갖는 H-AP5 프라이머(5’-AAGCTTAGTAGGC-3’)를 사용한 것을 제외하곤 2-1과 동일한 과정을 거쳐서 PCR을 수행하였다.
건조된 겔로부터 182 염기쌍(bp) 크기의 밴드, BBCC5-5 cDNA (서열번호: 57의 418-599 bp)를 도려내었다. 15분간 가열하여 BBCC5-5 cDNA를 용출시킨후, [α-35S] 표지된 dATP(1200 Ci/mmole) 및 20μM dNTP를 사용하지 않는 것을 제외하고는 상기와 동일한 프라이머 및 동일한 조건하에서 PCR을 수행하여 재증폭시켰다.
2-16;PIG54
고정된 올리고-dT 프라이머로서 서열번호 : 63의 H-T11A 고정 프라이머 (5’-AAGCTTTTTTTTTTTA-3’) 및 서열번호: 64로 기재되는 염기서열을 갖는 H-AP15 프라이머(5’-AAGCTTACGCAAC-3’)를 사용한 것을 제외하곤 2-1과 동일한 과정을 거쳐서 PCR을 수행하였다.
건조된 겔로부터 345 염기쌍(bp) 크기의 밴드, HP15 cDNA (서열번호: 61의 1533-1877 bp)를 도려내었다. 15분간 가열하여 HP15 cDNA를 용출시킨후, [α-35S] 표지된 dATP(1200 Ci/mmole) 및 20μM dNTP를 사용하지 않는 것을 제외하고는 상기 와 동일한 프라이머 및 동일한 조건하에서 PCR을 수행하여 재증폭시켰다.
2-17;
PIG55
고정된 올리고-dT 프라이머로서 서열번호 : 67의 H-T11G 고정 프라이머 (5’-AAGCTTTTTTTTTTTG-3’)및 서열번호: 68로 기재되는 염기서열을 갖는 H-AP4 프라이머(5’-AAGCTTCTCAACG-3’)를 사용한 것을 제외하곤 2-1과 동일한 과정을 거쳐서 PCR을 수행하였다.
건조된 겔로부터 186 염기쌍(bp) 크기의 밴드, FC4 cDNA (서열번호: 65의 292-477 bp)를 도려내었다. 15분간 가열하여 FC4 cDNA를 용출시킨후, [α-35S] 표지된 dATP(1200 Ci/mmole) 및 20μM dNTP를 사용하지 않는 것을 제외하고는 상기와 동일한 프라이머 및 동일한 조건하에서 PCR을 수행하여 재증폭시켰다.
2-18;GIG9
고정된 올리고-dT 프라이머로서 서열번호 : 71의 H-T11A 고정 프라이머 (5‘-AAGCTTTTTTTTTTTA-3', RNAimage kit, Genhunter, Cor., MA, USA) 및 서열번호: 72로 기재되는 염기서열을 갖는 H-AP14 프라이머 (5'-AAGCTTGGAGCTT-3')를 사용한 것을 제외하곤 2-1과 동일한 과정을 거쳐서 PCR을 수행하였다.
건조된 겔로부터 221 염기쌍 (bp) 크기의 밴드, H148 cDNA (서열번호: 69의 769-989 bp)를 도려내었다. 15분간 가열하여 H148 cDNA를 용출시킨 후, [α-35S] 표지된 dATP (1200 Ci/mmole) 및 20 μM dNTP를 사용하지 않는 것을 제외하고는 상기와 동일한 프라이머 및 동일한 조건 하에서 PCR을 수행하여 재증폭시켰다.
2-19;HLC-9
고정된 올리고-dT 프라이머로서 서열번호 : 75의 H-T11G (5‘-AAGCTTTTTTTTTTTG-3') 및 서열번호: 76으로 기재되는 염기서열을 갖는 H-AP7 프라이머(5'-AAGCTTAACGAGG-3')를 사용한 것을 제외하곤 2-1과 동일한 과정을 거쳐서 PCR을 수행하였다.
건조된 겔로부터 322 염기쌍(bp) 크기의 밴드, L738 cDNA (서열번호: 73의 1007-1328 bp)를 도려내었다. 15분간 가열하여 L738 cDNA를 용출시킨후, [α-35S] 표지된 dATP(1200 Ci/mmole) 및 20μM dNTP를 사용하지 않는 것을 제외하고는 상기와 동일한 프라이머 및 동일한 조건하에서 PCR을 수행하여 재증폭시켰다.
2-20;GIG18
고정된 올리고-dT 프라이머로서 서열번호 : 79의 H-T11C 고정 프라이머 (5’-AAGCTTTTTTTTTTTC-3’) 및 서열번호: 80으로 기재되는 염기서열을 갖는 H-AP4 프라이머(5’-AAGCTTCTCAACG-3’)를 사용한 것을 제외하곤 2-1과 동일한 과정을 거쳐서 PCR을 수행하였다.
건조된 겔로부터 321 염기쌍(bp) 크기의 밴드, HP47 cDNA (서열번호: 77의 879-1199 bp)를 도려내었다. 15분간 가열하여 HP47 cDNA를 용출시킨후, [α-35S] 표지된 dATP(1200 Ci/mmole) 및 20μM dNTP를 사용하지 않는 것을 제외하고는 상기와 동일한 프라이머 및 동일한 조건하에서 PCR을 수행하여 재증폭시켰다.
2-21;MIG22
고정된 올리고-dT 프라이머로서 서열번호 : 83의 H-T11A 고정 프라이머 (5‘-AAGCTTTTTTTTTTTA-3', RNAimage kit, Genhunter, Cor., MA, USA) 및 서열번호: 84로 기재되는 염기서열을 갖는 H-AP6 프라이머 (5'-AAGCTTGCACCAT-3')를 사용한 것을 제외하곤 2-1과 동일한 과정을 거쳐서 PCR을 수행하였다.
건조된 겔로부터 327 염기쌍 (bp) 크기의 밴드, L690 cDNA (서열번호: 81의 273-599 bp)를 도려내었다. 15분간 가열하여 L690 cDNA를 용출시킨 후, [α-35S] 표지된 dATP (1200 Ci/mmole) 및 20 μM dNTP를 사용하지 않는 것을 제외하고는 상기와 동일한 프라이머 및 동일한 조건 하에서 PCR을 수행하여 재증폭시켰다.
실시예 3: 클로닝
상기에서 얻은 재증폭된 FC21;MC113;CA338d;H124;H122;FC23; FC34;HP103;GV11;HP11;HP23;FC24;FC54;FC71;BBCC5-5;HP15;FC4;H148;L738;HP47;또는L690 PCR 산물을 TA클로닝 시스템(Promega, USA)을 사용하여 제조사의 방법에 따라 pGEM-T 이지(EASY) 벡터에 삽입하였다.
(단계 1) 연결반응
실시예 2에서 얻은 재증폭된 FC21 ;MC113;CA338d ;H124 ;H122 ;FC23; FC34;HP103 ;GV11 ;HP11 ;HP23 ;FC24 ;FC54 ;FC71 ;BBCC5-5 ;HP15;FC4;H148;L738 ;HP47;또는 L690 PCR 산물 2㎕, pGEM-T 이지 벡터(50 ng) 1 ㎕, T4 DNA 연결효소 10X 완충액 1㎕ 및 T4 DNA 연결효소(3 weiss units/ul; T4 DNA ligase, Promega) 1 ㎕를 0.5㎖ 시험관에 넣은 후, 증류수를 가하여 최종 부피가 10 ㎕가 되도록 하였다. 연결 반응 혼합물은 14℃에서 밤새 배양하였다.
(단계 2) TA 클로닝 형질전환
대장균 JM109(Promega, WI, USA)를 10 ㎖의 LB 브로쓰(박토-트립톤 10 g, 박토-효모 추출물 5 g, NaCl 5 g) 중에서 600㎚에서의 광학밀도 값이 약 0.3 - 0.6이 될 때까지 배양하였다. 배양 혼합물을 얼음에 약 10분간 방치한 후, 4℃에서 10 분간 4000 rpm으로 원심분리하여 상청액을 버리고 세포를 수집하였다. 수집한 세포 펠릿을 10 ㎖의 빙냉 0.1 M CaCl2에 30분 내지 1시간 가량 노출시켜 컴피턴트(competent) 세포를 제조하였다. 결과물을 4℃, 4000 rpm에서 10분 동안 다시 원심분리하여 상청액을 버리고 세포를 모아서 2 ml의 빙냉 0.1 M CaCl2에 현탁시켰다.
컴피턴트 세포 현탁액 200 ㎕를 새로운 마이크로퓨즈(microfuge) 튜브에 옮기고, 여기에 단계 1에서 제조한 연결 반응 산물 2㎕를 가하였다. 혼합물을 42℃의 수욕(water bath)에서 90초간 배양시킨 후, 0℃에서 급냉시켰다. 여기에, SOC 배지(박토-트립톤 2.0 g, 박토-효모 추출물 0.5 g, 1 M NaCl 1 ml, 1 M KCl 0.25 ml, TDW 97 ml, 2M Mg2+ 1 ml, 2 M 글루코스 1 ml) 800 ㎕를 첨가하고, 혼합물을 37℃에서 220 rpm의 회전진탕 배양기에서 45분간 배양시켰다.
37℃ 배양기에 미리 넣어둔, 앰피실린이 첨가된 LB 플레이트에 X-gal(40㎎/㎖ 디메틸포름아미드에 저장) 25 ㎕를 유리봉으로 확산시킨 후, 여기에 25 ㎕의 형질전환된 세포를 넣어서 다시 유리봉으로 확산시키고 37℃에서 밤새 배양하였다. 배양 후 형성된 백색 콜로니를 3-4개 선택하여 앰피실린이 첨가된 LB 플레이트에 각각의 선택된 클론들을 심었다. 플라스미드를 제조하기 위하여 이들 중 삽입이 확인된 콜로니, 즉, 형질전환된 대장균 JM109/FC21 ; JM109/MC113;JM109/CA338d ; JM109/H124 ; JM109/H122; JM109/FC23; JM109/FC34; JM109/HP103 ; JM109/GV11 ; JM109/HP11 ; JM109/HP23;JM109/FC24;JM109/FC54; JM109/FC71 ; JM109/BBCC5-5 ; JM109/HP15;JM109/FC4;JM109/H148;JM109/L738;JM109/HP47;또는 JM109/L690을 선택하여 10 ml의 테리픽 브로쓰(terrific broth; TDW 900 ml, 박토-트립톤 12 g, 박토-효모 추출물 24 g, 글리세롤 4 ml, 0.17 M KH2PO4, 0.72 N K2HPO4 100 ml)에서 배양하였다.
실시예 4: 재조합 플라스미드 DNA의 분리
위저드 플러스 미니프렙스 DNA 정제 키트(WizardTM Plus Minipreps DNA Purificatin Kit, Promega, USA)를 사용해서 제조사의 지시에 따라 형질전환된 대장균으로부터 FC21 플라스미드 DNA를 분리하였다.
분리된 플라스미드 DNA의 일부를 ECoRI 효소로 처리한 후, 2% 겔에서 전기영동을 실시하여 FC21; MC113;CA338d; H124 ;H122 ;FC23; FC34;HP103 ;GV11 ;HP11 ;HP23 ;FC24 ;FC54 ;FC71 ;BBCC5-5 ;HP15;FC4;H148;L738;HP47;또는 L690 부분서열이 플라스미드에 삽입되었음을 확인하였다.
실시예 5: DNA 염기서열 분석
실시예 2에서 수득한 FC21; MC113;CA338d; H124 ;H122 ;FC23; FC34;HP103 ;GV11 ;HP11;HP23 ;FC24 ;FC54 ;FC71 ;BBCC5-5 ;HP15;FC4;H148;L738;HP47;또는 L690 PCR 산물을 통상적인 방법에 따라 PCR시킨 후, 클로닝되고 재증폭된 FC21; MC113;CA338d; H124 ;H122 ;FC23 ; FC34;HP103 ;GV11 ;HP11;HP23 ;FC24 ;FC54 ;FC71 ;BBCC5-5 ;HP15;FC4;H148;L738;HP47;또는 L690 PCR 단편을 시쿼나제 버전 2.0 DNA 서열분석 키트(Sequenase version 2.0 DNA Sequencing kit; United States Biochemical, Cleveland, OH, USA)를 이용하여 디데옥시 쇄 종결법(dideoxy chain termination)에 따라 서열 분석을 실시하였다.
상기 DNA의 염기 서열은 서열번호: 1의 뉴클레오티드 번호 913 내지 1174에 해당하며, 본원에서 “FC21”으로 지칭하였다.
5‘ 무작위 프라이머 H-AP21 및 3' H-T11A 고정 프라이머를 사용하여 상기에서 수득한 262 bp cDNA 단편, 즉, FC21을 감별전개 역전사 중합효소 연쇄반응(DDRT-PCR)시키고, 전기 영동으로 확인하였다. 도 1a에 나타낸 바와 같이, 정상 유방 조직, 유방암 조직 및 MCF-7 세포에서 DD에 의한 유전자 발현이 상이한 것으로 확인되었다. 도 1a에서 알 수 있는 바와 같이, 262 bp cDNA 단편인 FC21은 유방 암, 및 MCF-7 암 세포에서는 강하게 발현되었으나, 정상 조직에서는 발현이 아주 약하였다.
상기 DNA의 염기 서열은 서열번호: 5의 뉴클레오티드 번호 2023 내지 2299에 해당하며, 본 발명에서는 "MC113"으로 지칭하였다.
5' 무작위 프라이머 H-AP11 및 3' H-T11C 고정 프라이머를 사용하여 상기에서 수득한 277 bp cDNA 단편, 즉, MC113을 감별전개 역전사 중합효소 연쇄반응 (DDRT-PCR)시키고, 전기 영동으로 확인하였다.
도 1b에 나타낸 바와 같이, 정상 자궁경부 조직, 전이 임파절 조직 및 CUMC-6 세포에서 DD에 의한 유전자 발현이 상이한 것으로 확인되었다. 도 1b에서 알 수 있는 바와 같이, 277 bp cDNA 단편인 MC113은 자궁경부암, 전이 임파절 조직 및 CUMC-6 암세포에서는 발현되었으나, 정상 조직에서는 발현이 약하였다.
상기 DNA의 염기 서열은 서열번호: 9의 뉴클레오티드 번호 1822 내지 2099에 해당하며, 본 발명에서는 "CA338d"로 지칭하였다.
5' 무작위 프라이머 H-AP33 및 3' H-T11C 고정 프라이머를 사용하여 상기에서 수득한 278 bp cDNA 단편, 즉, CA338d 를 감별전개 역전사 중합효소 연쇄반응 (DDRT-PCR)시키고, 전기 영동으로 확인하였다.
도 1c에 나타낸 바와 같이, 정상 자궁경부 조직, 전이 임파절 조직 및 CUMC-6 세포에서 DD에 의한 유전자 발현이 상이한 것으로 확인되었다. 도 1c에서 알 수 있는 바와 같이, 278 bp cDNA 단편인 CA338d는 자궁경부암, 전이 임파절 조직 및 CUMC-6 암세포에서는 발현되었으나, 정상 조직에서는 발현이 매우 약하였다.
상기 DNA의 염기 서열은 서열번호: 13의 뉴클레오티드 번호 243 내지 419에 해당하며, 본 발명에서는 "H124"로 지칭하였다.
5' 무작위 프라이머 H-AP12 및 3' H-T11A 고정 프라이머를 사용하여 상기에서 수득한 177 bp cDNA 단편, 즉, H124 를 감별전개 역전사 중합효소 연쇄반응 (DDRT-PCR)시키고, 전기 영동으로 확인하였다.
도 1d에 나타낸 바와 같이, 정상 자궁경부 조직, 전이 임파절 조직 및 CUMC-6 세포에서 DD에 의한 유전자 발현이 상이한 것으로 확인되었다. 도 1d에서 알 수 있는 바와 같이, 177 bp cDNA 단편인 H124는 자궁경부암, 전이 임파절 조직 및 CUMC-6 암세포에서는 발현되었으나, 정상 조직에서는 발현이 매우 약하였다.
상기 DNA의 염기 서열은 서열번호: 17의 뉴클레오티드 번호 748 내지 979에 해당하며, 본 발명에서는 "H122"로 지칭하였다.
5' 무작위 프라이머 H-AP12 및 3' H-T11C 고정 프라이머를 사용하여 상기에서 수득한 232 bp cDNA 단편, 즉, H122 를 감별전개 역전사 중합효소 연쇄반응 (DDRT-PCR)시키고, 전기 영동으로 확인하였다.
도 1e에 나타낸 바와 같이, 정상 자궁경부 조직, 전이 임파절 조직 및 CUMC-6 세포에서 DD에 의한 유전자 발현이 상이한 것으로 확인되었다. 도 1e에서 알 수 있는 바와 같이, 232 bp cDNA 단편인 H122는 자궁경부암, 전이 임파절 조직 및 CUMC-6 암세포에서는 발현되었으나, 정상 조직에서는 발현이 매우 약하였다.
상기 DNA의 염기 서열은 서열번호: 21의 뉴클레오티드 번호 1823 내지 2093에 해당하며, 본원에서 “FC23”으로 지칭하였다.
5‘ 무작위 프라이머 H-AP23 및 3' H-T11C 고정 프라이머를 사용하여 상기에서 수득한 271 bp cDNA 단편, 즉, FC23을 감별전개 역전사 중합효소 연쇄반응(DDRT-PCR)시키고, 전기 영동으로 확인하였다. 도 1f에 나타낸 바와 같이, 정상 유방 조직, 유방암 조직 및 MCF-7 세포에서 DD에 의한 유전자 발현이 상이한 것으로 확인되었다. 도 1f에서 알 수 있는 바와 같이, 271 bp cDNA 단편인 FC23은 유방 암, 및 MCF-7 암 세포에서는 강하게 발현되었으나, 정상 조직에서는 발현이 아주 약하였다.
상기 DNA의 염기 서열은 서열번호: 25의 뉴클레오티드 번호 1884 내지 2195에 해당하며, 본원에서 “FC34”로 지칭하였다.
5‘ 무작위 프라이머 H-AP34 및 3' H-T11G 고정 프라이머를 사용하여 상기에서 수득한 312 bp cDNA 단편, 즉, FC34를 감별전개 역전사 중합효소 연쇄반응(DDRT-PCR)시키고, 전기 영동으로 확인하였다. 도 1g에 나타낸 바와 같이, 정상 유방 조직, 유방암 조직 및 MCF-7 세포에서 DD에 의한 유전자 발현이 상이한 것으로 확인되었다. 도 1g에서 알 수 있는 바와 같이, 312 bp cDNA 단편인 FC34는 유방 암, 및 MCF-7 암 세포에서는 강하게 발현되었으나, 정상 조직에서는 발현이 아주 약하였다.
상기 DNA의 염기 서열은 서열번호: 29의 뉴클레오티드 번호 1633 내지 1899에 해당하며, 본원에서 “HP103”으로 지칭하였다.
5‘ 무작위 프라이머 H-AP10 및 3' H-T11C 고정 프라이머를 사용하여 상기에서 수득한 267 bp cDNA 단편, 즉, HP103을 감별전개 역전사 중합효소 연쇄반응(DDRT-PCR)시키고, 전기 영동으로 확인하였다. 도 1h에 나타낸 바와 같이, 정상 간 조직, 간암 조직 및 HepG2 세포에서 DD에 의한 유전자 발현이 상이한 것으로 확인되었다. 도 1h에서 알 수 있는 바와 같이, 267 bp cDNA 단편인 HP103은 간암, 및 HepG2 암 세포에서는 발현되었으나, 정상 조직에서는 발현이 되지 않거나 없었다.
상기 DNA의 염기 서열은 서열번호: 33의 뉴클레오티드 번호 1313 내지 1527에 해당하며, 본 발명에서는 "GV1"으로 지칭하였다.
5' 무작위 프라이머 H-AP11 및 3' H-T11C 고정 프라이머를 사용하여 상기에서 수득한 215 bp cDNA 단편, 즉, GV11을 감별전개 역전사 중합효소 연쇄반응 (DDRT-PCR)시키고, 전기 영동으로 확인하였다.
도 1i에 나타낸 바와 같이, 정상 말초혈액 조직, 백혈병 조직 및 K-562 세포에서 DD에 의한 유전자 발현이 상이한 것으로 확인되었다. 도 1i에서 알 수 있는 바와 같이, 215 bp cDNA 단편인 GV11은 백혈병 조직 및 K-562 세포에서는 발현되었으나, 정상 조직에서는 발현이 매우 약하였다.
상기 DNA의 염기 서열은 서열번호: 37의 뉴클레오티드 번호 879 내지 1199에 해당하며, 본원에서 “HP11”으로 지칭하였다.
5‘ 무작위 프라이머 H-AP11 및 3' H-T11G 고정 프라이머를 사용하여 상기에서 수득한 321 bp cDNA 단편, 즉, HP11을 감별전개 역전사 중합효소 연쇄반응(DDRT-PCR)시키고, 전기 영동으로 확인하였다. 도 1j에 나타낸 바와 같이, 정상 간 조직, 간암 조직 및 HepG2 세포에서 DD에 의한 유전자 발현이 상이한 것으로 확인되었다. 도 1j에서 알 수 있는 바와 같이, 321 bp cDNA 단편인 HP11은 간암, 및 HepG2 암 세포에서는 발현되었으나, 정상 조직에서는 발현이 되지 않거나 없었다.
상기 DNA의 염기 서열은 서열번호: 41의 뉴클레오티드 번호 1369 내지 1679에 해당하며, 본원에서 “HP23”으로 지칭하였다.
5‘ 무작위 프라이머 H-AP23 및 3' H-T11C 고정 프라이머를 사용하여 상기에서 수득한 311 bp cDNA 단편, 즉, HP23을 감별전개 역전사 중합효소 연쇄반응(DDRT-PCR)시키고, 전기 영동으로 확인하였다. 도 1k에 나타낸 바와 같이, 정상 간 조직, 간암 조직 및 HepG2 세포에서 DD에 의한 유전자 발현이 상이한 것으로 확인되었다. 도 1k에서 알 수 있는 바와 같이, 311 bp cDNA 단편인 HP23은 간암, 및 HepG2 암 세포에서는 발현되었으나, 정상 조직에서는 발현이 되지 않거나 약하였다.
상기 DNA의 염기 서열은 서열번호: 45의 뉴클레오티드 번호 992 내지 1247에 해당하며, 본원에서 “FC24”로 지칭하였다.
5‘ 무작위 프라이머 H-AP24 및 3' H-T11A 고정 프라이머를 사용하여 상기에서 수득한 256 bp cDNA 단편, 즉, FC24를 감별전개 역전사 중합효소 연쇄반응(DDRT-PCR)시키고, 전기 영동으로 확인하였다. 도 1(l)에 나타낸 바와 같이, 정상 유방 조직, 유방암 조직 및 MCF-7 세포에서 DD에 의한 유전자 발현이 상이한 것으로 확인되었다. 도 1(l)에서 알 수 있는 바와 같이, 256 bp cDNA 단편인 FC24는 유방 암, 및 MCF-7 암 세포에서는 강하게 발현되었으나, 정상 조직에서는 발현이 아주 약하였다.
상기 DNA의 염기 서열은 서열번호: 49의 뉴클레오티드 번호 587 내지 778에 해당하며, 본원에서 “FC54”로 지칭하였다.
5‘ 무작위 프라이머 H-AP5 및 3' H-T11C 고정 프라이머를 사용하여 상기에서 수득한 192 bp cDNA 단편, 즉, FC54를 감별전개 역전사 중합효소 연쇄반응(DDRT-PCR)시키고, 전기 영동으로 확인하였다. 도 1m에 나타낸 바와 같이, 정상 유방 조직, 유방암 조직 및 MCF-7 세포에서 DD에 의한 유전자 발현이 상이한 것으로 확인되었다. 도 1m에서 알 수 있는 바와 같이, 192 bp cDNA 단편인 FC54는 유방 암, 및 MCF-7 암 세포에서는 강하게 발현되었으나, 정상 조직에서는 발현이 아주 약하였다.
상기 DNA의 염기 서열은 서열번호: 53의 뉴클레오티드 번호 1348 내지 1619에 해당하며, 본원에서 “FC71”로 지칭하였다.
5‘ 무작위 프라이머 H-AP7 및 3' H-T11A 고정 프라이머를 사용하여 상기에서 수득한 272 bp cDNA 단편, 즉, FC71을 감별전개 역전사 중합효소 연쇄반응(DDRT-PCR)시키고, 전기 영동으로 확인하였다. 도 1n에 나타낸 바와 같이, 정상 유방 조직, 유방암 조직 및 MCF-7 세포에서 DD에 의한 유전자 발현이 상이한 것으로 확인되었다. 도 1n에서 알 수 있는 바와 같이, 272 bp cDNA 단편인 FC71은 유방암, 및 MCF-7 암 세포에서는 강하게 발현되었으나, 정상 조직에서는 발현이 아주 약하였다.
상기 DNA의 염기 서열은 서열번호: 57의 뉴클레오티드 번호 418 내지 599에 해당하며, 본원에서 “BBCC5-5”로 지칭하였다.
5‘ 무작위 프라이머 H-AP5 및 3' H-T11C 고정 프라이머를 사용하여 상기에서 수득한 182 bp cDNA 단편, 즉, BBCC5-5를 감별전개 역전사 중합효소 연쇄반응(DDRT-PCR)시키고, 전기 영동으로 확인하였다. 도 1(o)에 나타낸 바와 같이, 정상 유방 조직, 유방암 조직 및 MCF-7 세포에서 DD에 의한 유전자 발현이 상이한 것으로 확인되었다. 도 1(o)에서 알 수 있는 바와 같이, 182 bp cDNA 단편인 BBCC5-5는 유방 암, 및 MCF-7 암 세포에서는 강하게 발현되었으나, 정상 조직에서는 발현이 아주 약하였다.
상기 DNA의 염기 서열은 서열번호: 61의 뉴클레오티드 번호 1533 내지 1877에 해당하며, 본원에서 “HP15”으로 지칭하였다.
5‘ 무작위 프라이머 H-AP15 및 3' H-T11A 고정 프라이머를 사용하여 상기에서 수득한 345 bp cDNA 단편, 즉, HP15를 감별전개 역전사 중합효소 연쇄반응(DDRT-PCR)시키고, 전기 영동으로 확인하였다. 도 1p에 나타낸 바와 같이, 정상 간 조직, 간암 조직 및 HepG2 세포에서 DD에 의한 유전자 발현이 상이한 것으로 확인되었다. 도 1p에서 알 수 있는 바와 같이, 345 bp cDNA 단편인 HP15는 간암, 및 HepG2 암 세포에서는 발현되었으나, 정상 조직에서는 발현이 되지 않거나 약하였다.
상기 DNA의 염기 서열은 서열번호: 65의 뉴클레오티드 번호 292 내지 477에 해당하며, 본원에서 “FC4”로 지칭하였다.
5‘ 무작위 프라이머 H-AP4 및 3' H-T11G 고정 프라이머를 사용하여 상기에서 수득한 186 bp cDNA 단편, 즉, FC4를 감별전개 역전사 중합효소 연쇄반응(DDRT-PCR)시키고, 전기 영동으로 확인하였다. 도 1q에 나타낸 바와 같이, 정상 유방 조직, 유방암 조직 및 MCF-7 세포에서 DD에 의한 유전자 발현이 상이한 것으로 확인되었다. 도 1q에서 알 수 있는 바와 같이, 186 bp cDNA 단편인 FC4는 유방 암, 및 MCF-7 암 세포에서는 강하게 발현되었으나, 정상 조직에서는 발현이 아주 약하였다.
상기 DNA의 염기 서열은 서열번호: 69의 뉴클레오티드 번호 769 내지 989에 해당하며, 본 발명에서는 "H148"로 지칭하였다.
5' 무작위 프라이머 H-AP14 및 3' H-T11A 고정 프라이머를 사용하여 상기에서 수득한 221 bp cDNA 단편, 즉, H148을 감별전개 역전사 중합효소 연쇄반응 (DDRT-PCR)시키고, 전기 영동으로 확인하였다.
도 1r에 나타낸 바와 같이, 정상 자궁경부 조직, 전이 임파절 조직 및 CUMC-6 세포에서 DD에 의한 유전자 발현이 상이한 것으로 확인되었다. 도 1r에서 알 수 있는 바와 같이, 221 bp cDNA 단편인 H148은 자궁경부암, 전이 임파절 조직 및 CUMC-6 암세포에서는 발현되었으나, 정상 조직에서는 발현이 매우 약하였다.
상기 DNA의 염기 서열은 서열번호: 73의 뉴클레오티드 번호 1007 내지 1328에 해당하며, 본원에서 “L738”로 지칭하였다.
5‘ 무작위 프라이머 H-AP7 및 3' H-T11G 고정 프라이머를 사용하여 상기에서 수득한 322 bp cDNA 단편, 즉, L738을 감별전개 역전사 중합효소 연쇄반응(DDRT-PCR)시키고, 전기 영동으로 확인하였다. 도 1s에 나타낸 바와 같이, 정상 폐 조직, 좌측 폐암 조직, 좌측에서 우측으로 전이된 전이 폐암조직 및 A549 폐암세포에서 DD에 의한 유전자 발현이 상이한 것으로 확인되었다. 도 1s에서 알 수 있는 바와 같이, 322 bp cDNA 단편인 L738은 폐암, 전이 폐암조직 및 A549 폐암 세포에서는 발현되었으나, 정상 폐조직에서는 발현되지 않거나 매우 약하였다.
상기 DNA의 염기 서열은 서열번호: 77의 뉴클레오티드 번호 879 내지 1199에 해당하며, 본원에서 “HP47”으로 지칭하였다.
5‘ 무작위 프라이머 H-AP4 및 3' H-T11C 고정 프라이머를 사용하여 상기에서 수득한 321 bp cDNA 단편, 즉, HP47을 감별전개 역전사 중합효소 연쇄반응(DDRT-PCR)시키고, 전기 영동으로 확인하였다. 도 1t에 나타낸 바와 같이, 정상 간 조직, 간암 조직 및 HepG2 세포에서 DD에 의한 유전자 발현이 상이한 것으로 확 인되었다. 도 1t에서 알 수 있는 바와 같이, 321 bp cDNA 단편인 HP47은 간암, 및 HepG2 암 세포에서는 발현되었으나, 정상 조직에서는 발현이 약하였다.
상기 DNA의 염기 서열은 서열번호: 81의 뉴클레오티드 번호 273 내지 599에 해당하며, 본 발명에서는 "L690"으로 지칭하였다.
5' 무작위 프라이머 H-AP6 및 3' H-T11A 고정 프라이머를 사용하여 상기에서 수득한 327 bp cDNA 단편, 즉, L690을 감별전개 역전사 중합효소 연쇄반응 (DDRT-PCR)시키고, 전기 영동으로 확인하였다.
도 1u에 나타낸 바와 같이, 정상 폐조직, 좌측 폐암조직, 좌측에서 우측으로 전이된 전이 폐암조직 및 A549 폐암세포에서 DD에 의한 유전자 발현이 상이한 것으로 확인되었다. 도 1u에서 알 수 있는 바와 같이, 327 bp cDNA 단편인 L690은 폐암, 전이 폐암조직 및 A549 폐암세포에서는 발현되었으나, 정상 폐조직에서는 발현이 약하거나 발현되지 않았다. 암조직에서도 특히 전이암 조직에서 가장 발현이 높았다.
실시예 6: 원암유전자의 전체 cDNA 서열 분석
6-1;
PIG12
32P-표지된 FC21을 프로브로 사용하여 박테리오파지 λgt11 인간 폐 태아 섬유모세포 cDNA 라이브러리(Miki, T. et al., Gene, 83: 137-146(1989))를 스크리닝하였다. 상기 인간 폐 태아 섬유모세포 cDNA 라이브러리로부터 pCEV-LAC 벡터 중에 1258 bp가 삽입된 전체 PIG12 cDNA 클론을 얻고, 이를 2004년 2월 16일자로 AY550973 호로 미국 진뱅크(GeneBank)에 등록하였다(공개예정일: 2005년 12월 31 일).
AY550973 유전자는 이 데이터베이스에 등록된 제 NM_006299호인 Homo sapiens 진크 핑거 단백질 193 (ZNF193)유전자 등과 서열이 유사하다. 그러나 기 보고된 바와 같은 기능과는 달리 AY550973 유전자는 특히 유방암을 포함한 인간의 각종 암화과정에 깊숙히 관련되어 있는 것으로 금번 연구결과 밝혀졌다. 연구 결과 유방조직을 포함한 여러 인간 정상 조직들에서는 발현이 약하고 반면에 유방암을 포함한 여러 암조직들에서는 발현이 매우 증가된 PIG12 원암유전자를 발굴하게 되었다.
1258 bp로 이루어진 PIG12의 전체 서열은 서열번호: 1에 나타내었다.
서열번호: 1의 염기서열에서, 본 발명의 원암유전자의 전체 오픈 리딩 프레임(open reading frame)은 뉴클레오티드 번호 68 내지 1252에 해당하며, 서열번호: 2의 394개의 아미노산으로 이루어진 단백질을 코드하는 것으로 예측된다.
6-2;PIG18
32P-표지된 MC113을 프로브로 사용하여 박테리오파지 λgt11 인간 폐 태아 섬유모세포 cDNA 라이브러리 (Miki, T. et al., Gene 83: 137-146, 1989)를 스크리닝하였다. 상기 인간 폐 태아 섬유모세포 cDNA 라이브러리로부터 pCEV-LAC 벡터 중에 2403 bp가 삽입된 전체 PIG18 cDNA 클론을 얻고, 이를 2004년 10월 5일자로 등재번호 제AY771596호로 미국 진뱅크 (GeneBank)에 등록하였다 (공개예정일: 2005년 12월 31일).
파지로부터 λpCEV 벡터에 삽입된 PIG18 클론을 NotI 절단에 의해 앰피실린 내성 pCEV-LAC 파지미드 (phagemid) 벡터 형태로 분리하였다 (Miki, T. et al., Gene 83: 137-146, 1989).
상기 PIG18 유전자를 함유하는 pCEV-LAC 벡터를 T4 DNA 리게이즈로 연결시켜 PIG18 플라스미드 DNA를 제조하고, 연결된 클론으로 대장균 DH5α를 형질전환시켰다.
2403 bp로 이루어진 PIG18의 전체 염기서열은 서열번호: 5에 나타내었다.
서열번호: 5의 염기서열에서, 본 발명의 원암유전자의 전체 오픈 리딩 프레임 (open reading frame)은 뉴클레오티드 번호 875 내지 1063에 해당하며, 서열번호: 6의 62개의 아미노산으로 이루어진 단백질을 코드하는 것으로 예측된다.
6-3;
PIG23
32P-표지된 CA338d를 프로브로 사용하여 박테리오파지 λgt11 인간 폐 태아 섬유모세포 cDNA 라이브러리 (Miki, T. et al., Gene 83: 137-146, 1989)를 스크리닝하였다. 상기 인간 폐 태아 섬유모세포 cDNA 라이브러리로부터 pCEV-LAC 벡터 중에 2150 bp가 삽입된 전체 PIG23 cDNA 클론을 얻고, 이를 2004년 10월 23일자로 등재번호 제AY826819호로 미국 진뱅크 (GeneBank)에 등록하였다 (공개예정일: 2005년 12월 31일).
파지로부터 λpCEV 벡터에 삽입된 PIG23 클론을 NotI 절단에 의해 앰피실린 내성 pCEV-LAC 파지미드 (phagemid) 벡터 형태로 분리하였다 (Miki, T. et al., Gene 83: 137-146, 1989).
상기 PIG23 유전자를 함유하는 pCEV-LAC 벡터를 T4 DNA 리게이즈로 연결시켜 PIG23 플라스미드 DNA를 제조하고, 연결된 클론으로 대장균 DH5α를 형질전환시켰다.
2150 bp로 이루어진 PIG23의 전체 염기서열은 서열번호: 9에 나타내었다.
서열번호: 9의 염기서열에서, 본 발명의 원암유전자의 전체 오픈 리딩 프레임 (open reading frame)은 뉴클레오티드 번호 25 내지 1953에 해당하며, 서열번호: 10의 642개의 아미노산으로 이루어진 단백질을 코드하는 것으로 예측된다.
6-4;
PIG27
32P-표지된 H124를 프로브로 사용하여 박테리오파지 λgt11 인간 폐 태아 섬유모세포 cDNA 라이브러리 (Miki, T. et al., Gene 83: 137-146, 1989)를 스크리닝하였다. 상기 인간 폐 태아 섬유모세포 cDNA 라이브러리로부터 pCEV-LAC 벡터 중에 446 bp가 삽입된 전체 PIG27 cDNA 클론을 얻고, 이를 2003년 10월 30일자로 등재번호 제AY453399호로 미국 진뱅크 (GeneBank)에 등록하였다 (공개예정일: 2005년 3월 31일).
파지로부터 λpCEV 벡터에 삽입된 PIG27 클론을 NotI 절단에 의해 앰피실린 내성 pCEV-LAC 파지미드 (phagemid) 벡터 형태로 분리하였다 (Miki, T. et al., Gene 83: 137-146, 1989).
상기 PIG27 유전자를 함유하는 pCEV-LAC 벡터를 T4 DNA 리게이즈로 연결시켜 PIG27 플라스미드 DNA를 제조하고, 연결된 클론으로 대장균 DH5α를 형질전환시켰다.
446 bp로 이루어진 PIG27의 전체 염기서열은 서열번호: 13에 나타내었다.
서열번호: 13의 염기서열에서, 본 발명의 원암유전자의 전체 오픈 리딩 프레임 (open reading frame)은 뉴클레오티드 번호 20 내지 337에 해당하며, 서열번호: 14의 105개의 아미노산으로 이루어진 단백질을 코드하는 것으로 예측된다.
6-5;
PIG28
32P-표지된 H122를 프로브로 사용하여 박테리오파지 λgt11 인간 폐 태아 섬유모세포 cDNA 라이브러리 (Miki, T. et al., Gene 83: 137-146, 1989)를 스크리닝하였다. 상기 인간 폐 태아 섬유모세포 cDNA 라이브러리로부터 pCEV-LAC 벡터 중에 1024 bp가 삽입된 전체 PIG28 cDNA 클론을 얻고, 이를 2003년 10월 30일자로 등재번호 제AY453398호로 미국 진뱅크 (GeneBank)에 등록하였다 (공개예정일: 2005년 3월 31일).
파지로부터 λpCEV 벡터에 삽입된 PIG28 클론을 NotI 절단에 의해 앰피실린 내성 pCEV-LAC 파지미드 (phagemid) 벡터 형태로 분리하였다 (Miki, T. et al., Gene 83: 137-146, 1989).
상기 PIG28 유전자를 함유하는 pCEV-LAC 벡터를 T4 DNA 리게이즈로 연결시켜 PIG28 플라스미드 DNA를 제조하고, 연결된 클론으로 대장균 DH5α를 형질전환시켰다.
1024 bp로 이루어진 PIG28의 전체 염기서열은 서열번호: 17에 나타내었다.
서열번호: 17의 염기서열에서, 본 발명의 원암유전자의 전체 오픈 리딩 프레임 (open reading frame)은 뉴클레오티드 번호 33 내지 998에 해당하며, 서열번호: 18의 321개의 아미노산으로 이루어진 단백질을 코드하는 것으로 예측된다.
6-6;
PIG30
32P-표지된 FC23을 프로브로 사용하여 박테리오파지 λgt11 인간 폐 태아 섬유모세포 cDNA 라이브러리(Miki, T. et al., Gene, 83: 137-146(1989))를 스크리닝하였다. 상기 인간 폐 태아 섬유모세포 cDNA 라이브러리로부터 pCEV-LAC 벡터 중에 2152 bp가 삽입된 전체 PIG30 cDNA 클론을 얻고, 이를 2004년 2월 16일자로 AY550975 호로 미국 진뱅크(GeneBank)에 등록하였다(공개예정일: 2005년 12월 31일).
AY550975 유전자는 이 데이터베이스에 등록된 제 NM_005186 호인 Homo sapiens calpain 1, (mu/I) 큰 소단위체(CAPN1)유전자와 서열이 유사하다. 그러나 기 보고된 바와 같은 기능과는 달리 AY550975 유전자는 특히 유방암을 포함한 인간의 각종 암화과정에 깊숙히 관련되어 있는 것으로 금번 연구결과 밝혀졌다. 연구 결과 유방조직을 포함한 여러 인간 정상 조직들에서는 발현이 약하고 반면에 유방암을 포함한 여러 암조직들에서는 발현이 매우 증가된 PIG30 원암유전자를 발굴하게 되었다.
2152 bp로 이루어진 PIG30의 전체 서열은 서열번호: 21에 나타내었다.
서열번호: 21의 염기서열에서, 본 발명의 원암유전자의 전체 오픈 리딩 프레임(open reading frame)은 뉴클레오티드 번호 6 내지 2150에 해당하며, 서열번호: 22의 714개의 아미노산으로 이루어진 단백질을 코드하는 것으로 예측된다.
6-7;
PIG31
32P-표지된 FC34를 프로브로 사용하여 박테리오파지 λgt11 인간 폐 태아 섬 유모세포 cDNA 라이브러리(Miki, T. et al., Gene, 83: 137-146(1989))를 스크리닝하였다. 상기 인간 폐 태아 섬유모세포 cDNA 라이브러리로부터 pCEV-LAC 벡터 중에 2246 bp가 삽입된 전체 PIG31 cDNA 클론을 얻고, 이를 2004년 6월 3일자로 AY644768 호로 미국 진뱅크(GeneBank)에 등록하였다(공개예정일: 2005년 12월 31일). AY644768 유전자는 이 데이터베이스에 등록된 제 AF085199호인 Homo sapiens golgin-84 mRNA 유전자 등과 유전자 서열이 유사하다. 그러나 기 보고된 바와 같은 기능과는 달리 AY644768 유전자는 특히 유방암을 포함한 인간의 각종 암화과정에 깊숙히 관련되어 있는 것으로 금번 연구결과 밝혀졌다. 연구 결과 유방조직을 포함한 여러 인간 정상 조직들에서는 발현이 약하고 반면에 유방암을 포함한 여러 암조직들에서는 발현이 매우 증가된 PIG31 원암유전자를 발굴하게 되었다.
2246 bp로 이루어진 PIG31의 전체 서열은 서열번호: 25에 나타내었다.
서열번호: 25의 염기서열에서, 본 발명의 원암유전자의 전체 오픈 리딩 프레임(open reading frame)은 뉴클레오티드 번호 37 내지 2232에 해당하며, 서열번호: 26의 731개의 아미노산으로 이루어진 단백질을 코드하는 것으로 예측된다.
6-8;
PIG38
32P-표지된 HP103을 프로브로 사용하여 박테리오파지 λgt11 인간 폐 태아 섬유모세포 cDNA 라이브러리(Miki, T. et al., Gene, 83: 137-146(1989))를 스크리닝하였다. 상기 인간 폐 태아 섬유모세포 cDNA 라이브러리로부터 pCEV-LAC 벡터 중에 1973 bp가 삽입된 전체 PIG38 cDNA 클론을 얻고, 이를 2003년 12월 24일자로 AY513282 호로 미국 진뱅크(GeneBank)에 등록하였다(공개예정일: 2005년 12월 31 일). AY513282 유전자는 이 데이터베이스에 등록된 ACCESSION BC024178 호인 Homo sapiens 가설 단백질 FLJ10094 유전자 등과 서열이 유사한 유전자이다. 그러나 이들 유전자들의 기능은 아직 밝혀져 있지 않다. 그러나 기 보고된 바와 같은 기능과는 달리 AY513282 유전자는 특히 간암을 포함한 인간의 각종 암화과정에 깊숙히 관련되어 있는 것으로 금번 연구결과 밝혀졌다. 연구 결과 간조직을 포함한 여러 인간 정상 조직들에서는 발현이 약하고 반면에 간암을 포함한 여러 암조직들에서는 발현이 매우 증가된 PIG38 원암유전자를 발굴하게 되었다.
1973 bp로 이루어진 PIG38의 전체 서열은 서열번호: 29에 나타내었다.
서열번호: 29의 염기서열에서, 본 발명의 원암유전자의 전체 오픈 리딩 프레임(open reading frame)은 뉴클레오티드 번호 25 내지 1956에 해당하며, 서열번호: 30의 643개의 아미노산으로 이루어진 단백질을 코드하는 것으로 예측된다.
6-9;
PIG40
32P-표지된 GV11을 프로브로 사용하여 박테리오파지 λgt11 인간 폐 태아 섬유모세포 cDNA 라이브러리 (Miki, T. et al., Gene 83: 137-146, 1989)를 스크리닝하였다. 상기 인간 폐 태아 섬유모세포 cDNA 라이브러리로부터 pCEV-LAC 벡터 중에 1586 bp가 삽입된 전체 PIG40 cDNA 클론을 얻고, 이를 2004년 9월 23일자로 등재번호 제AY762100호로 미국 진뱅크 (GeneBank)에 등록하였다 (공개예정일: 2005년 12월 31일).
파지로부터 λpCEV 벡터에 삽입된 PIG40 클론을 NotI 절단에 의해 앰피실린 내성 pCEV-LAC 파지미드 (phagemid) 벡터 형태로 분리하였다 (Miki, T. et al., Gene 83: 137-146, 1989).
상기 PIG40 유전자를 함유하는 pCEV-LAC 벡터를 T4 DNA 리게이즈로 연결시켜 PIG40 플라스미드 DNA를 제조하고, 연결된 클론으로 대장균 DH5α를 형질전환시켰다.
1586 bp로 이루어진 PIG40의 전체 염기서열은 서열번호: 33에 나타내었다.
서열번호: 33의 염기서열에서, 본 발명의 원암유전자의 전체 오픈 리딩 프레임 (open reading frame)은 뉴클레오티드 번호 36 내지 1541에 해당하며, 서열번호: 34의 501개의 아미노산으로 이루어진 단백질을 코드하는 것으로 예측된다.
6-10;
PIG43
32P-표지된 HP11을 프로브로 사용하여 박테리오파지 λgt11 인간 폐 태아 섬유모세포 cDNA 라이브러리(Miki, T. et al., Gene, 83: 137-146(1989))를 스크리닝하였다. 상기 인간 폐 태아 섬유모세포 cDNA 라이브러리로부터 pCEV-LAC 벡터 중에 1245 bp가 삽입된 전체 PIG43 cDNA 클론을 얻고, 이를 2003년 12월 25일자로 AY513283 호로 미국 진뱅크(GeneBank)에 등록하였다(공개예정일: 2005년 12월 31일). AY513283 유전자는 이 데이터베이스에 등록된 제 NM_002065호인 Homo sapiens glutamate-ammonia ligase (glutamine synthase) (GLUL) 유전자 등과 서열이 유사하나 단백질이 다른 유전자이다. 그러나 기 보고된 바와 같은 기능과는 달리 AY513283 유전자는 특히 간암을 포함한 인간의 각종 암화과정에 깊숙히 관련되어 있는 것으로 금번 연구결과 밝혀졌다. 연구 결과 간조직을 포함한 여러 인간 정상 조직들에서는 발현이 약하고 반면에 간암을 포함한 여러 암조직들에서는 발현이 매 우 증가된 PIG43 원암유전자를 발굴하게 되었다.
1245 bp로 이루어진 PIG43의 전체 서열은 서열번호: 37에 나타내었다.
서열번호: 37의 염기서열에서, 본 발명의 원암유전자의 전체 오픈 리딩 프레임(open reading frame)은 뉴클레오티드 번호 57 내지 758에 해당하며, 서열번호: 38의 233개의 아미노산으로 이루어진 단백질을 코드하는 것으로 예측된다.
6-11;
PIG44
32P-표지된 HP23을 프로브로 사용하여 박테리오파지 λgt11 인간 폐 태아 섬유모세포 cDNA 라이브러리(Miki, T. et al., Gene, 83: 137-146(1989))를 스크리닝하였다. 상기 인간 폐 태아 섬유모세포 cDNA 라이브러리로부터 pCEV-LAC 벡터 중에 1721 bp가 삽입된 전체 PIG44 cDNA 클론을 얻고, 이를 2003년 12월 25일자로 AY513284 호로 미국 진뱅크(GeneBank)에 등록하였다(공개예정일: 2005년 12월 31일). AY513282 유전자는 이 데이터베이스에 등록된 제 AB037773 호인 Homo sapiens KIAA1352 단백질에 대한 mRNA 유전자 등과 유사하나 단백질이 다르다. 그러나 기 보고된 바와 같은 기능과는 달리 AY513284 유전자는 특히 간암을 포함한 인간의 각종 암화과정에 깊숙히 관련되어 있는 것으로 금번 연구결과 밝혀졌다. 연구 결과 간조직을 포함한 여러 인간 정상 조직들에서는 발현이 약하고 반면에 간암을 포함한 여러 암조직들에서는 발현이 매우 증가된 PIG44 원암유전자를 발굴하게 되었다.
1721 bp로 이루어진 PIG44의 전체 서열은 서열번호: 41에 나타내었다.
서열번호: 41의 염기서열에서, 본 발명의 원암유전자의 전체 오픈 리딩 프레임(open reading frame)은 뉴클레오티드 번호 55 내지 1512에 해당하며, 서열번호: 42의 485개의 아미노산으로 이루어진 단백질을 코드하는 것으로 예측된다.
6-12;
PIG46
32P-표지된 FC24를 프로브로 사용하여 박테리오파지 λgt11 인간 폐 태아 섬유모세포 cDNA 라이브러리(Miki, T. et al., Gene, 83: 137-146(1989))를 스크리닝하였다. 상기 인간 폐 태아 섬유모세포 cDNA 라이브러리로부터 pCEV-LAC 벡터 중에 1312 bp가 삽입된 전체 PIG46 cDNA 클론을 얻고, 이를 2004년 9월 23일자로 AY762101 호로 미국 진뱅크(GeneBank)에 등록하였다(공개예정일: 2005년 12월 31일). AY762101 유전자는 이 데이터베이스에 등록된 제 NM_000224호인 Homo sapiens keratin 18 (KRT18), 전사 변이체 1 유전자 등과 유전자 서열이 유사하다. 그러나 기 보고된 바와 같은 기능과는 달리 AY762101 유전자는 특히 유방암을 포함한 인간의 각종 암화과정에 깊숙히 관련되어 있는 것으로 금번 연구결과 밝혀졌다. 연구 결과 유방조직을 포함한 여러 인간 정상 조직들에서는 발현이 약하거나 없고 반면에 유방암을 포함한 여러 암조직들에서는 발현이 매우 증가된 PIG46 원암유전자를 발굴하게 되었다.
1312 bp로 이루어진 PIG46의 전체 서열은 서열번호: 45에 나타내었다.
서열번호: 45의 염기서열에서, 본 발명의 원암유전자의 전체 오픈 리딩 프레임(open reading frame)은 뉴클레오티드 번호 5 내지 1297에 해당하며, 서열번호: 46의 430개의 아미노산으로 이루어진 단백질을 코드하는 것으로 예측된다.
6-13;
PIG47
32P-표지된 FC54를 프로브로 사용하여 박테리오파지 λgt11 인간 폐 태아 섬 유모세포 cDNA 라이브러리(Miki, T. et al., Gene, 83: 137-146(1989))를 스크리닝하였다. 상기 인간 폐 태아 섬유모세포 cDNA 라이브러리로부터 pCEV-LAC 벡터 중에 827 bp가 삽입된 전체 PIG47 cDNA 클론을 얻고, 이를 2005년 1월 1일자로 AY871272 호로 미국 진뱅크(GeneBank)에 등록하였다(공개예정일: 2006년 10월 1일). AY871272 유전자는 이 데이터베이스에 등록된 제 NM_001688 호인 Homo sapiens ATP 신테이즈, H+ 트랜스포팅, 미토콘드리아 F0 복함체 소단위체 b, 이소폼1 (ATP5F1) 과 유전자 서열이 유사하다. 그러나 기 보고된 바와 같은 기능과는 달리 AY871272 유전자는 특히 유방암을 포함한 인간의 각종 암화과정에 깊숙히 관련되어 있는 것으로 금번 연구결과 밝혀졌다. 연구 결과 유방조직을 포함한 여러 인간 정상 조직들에서는 발현이 약하고 반면에 유방암을 포함한 여러 암조직들에서는 발현이 매우 증가된 PIG47 원암유전자를 발굴하게 되었다. 827 bp로 이루어진 PIG47의 전체 서열은 서열번호: 49에 나타내었다.
서열번호: 49의 염기서열에서, 본 발명의 원암유전자의 전체 오픈 리딩 프레임(open reading frame)은 뉴클레오티드 번호 56 내지 826에 해당하며, 서열번호: 50의 256개의 아미노산으로 이루어진 단백질을 코드하는 것으로 예측된다.
6-14;
PIG48
32P-표지된 FC71을 프로브로 사용하여 박테리오파지 λgt11 인간 폐 태아 섬유모세포 cDNA 라이브러리(Miki, T. et al., Gene, 83: 137-146(1989))를 스크리닝하였다. 상기 인간 폐 태아 섬유모세포 cDNA 라이브러리로부터 pCEV-LAC 벡터 중에 1707 bp가 삽입된 전체 PIG48 cDNA 클론을 얻고, 이를 2004년 1월 12일자로 AY524046 호로 미국 진뱅크(GeneBank)에 등록하였다(공개예정일: 2005년 12월 31일). AY524046 유전자는 이 데이터베이스에 등록된 제 NM_005998 호인 Homo sapiens TCP1 함유 샤페로닌, 소단위체 3 (gamma) (CCT3)유전자 등과 유전자 서열이 유사하다. 그러나 기 보고된 바와 같은 기능과는 달리 AY524046 유전자는 특히 유방암을 포함한 인간의 각종 암화과정에 깊숙히 관련되어 있는 것으로 금번 연구결과 밝혀졌다. 연구 결과 유방조직을 포함한 여러 인간 정상 조직들에서는 발현이 약하고 반면에 유방암을 포함한 여러 암조직들에서는 발현이 매우 증가된 PIG48 원암유전자를 발굴하게 되었다.
1707 bp로 이루어진 PIG48의 전체 서열은 서열번호: 53에 나타내었다.
서열번호: 53의 염기서열에서, 본 발명의 원암유전자의 전체 오픈 리딩 프레임(open reading frame)은 뉴클레오티드 번호 57 내지 1694에 해당하며, 서열번호: 54의 545개의 아미노산으로 이루어진 단백질을 코드하는 것으로 예측된다.
6-15;
PIG50
32P-표지된 BBCC5-5를 프로브로 사용하여 박테리오파지 λgt11 인간 폐 태아 섬유모세포 cDNA 라이브러리(Miki, T. et al., Gene, 83: 137-146(1989))를 스크리닝하였다. 상기 인간 폐 태아 섬유모세포 cDNA 라이브러리로부터 pCEV-LAC 벡터 중에 643 bp가 삽입된 전체 PIG50 cDNA 클론을 얻고, 이를 2004년 2월 5일자로 AY542309 호로 미국 진뱅크(GeneBank)에 등록하였다(공개예정일: 2005년 12월 31일). AY542309 유전자는 이 데이터베이스에 등록된 제 AK000504호인 Homo sapiens cDNA FLJ20497 fis 유전자와 유사하다. 그러나 기 보고된 바와 같은 기능과는 달리 AY542309 유전자는 특히 유방암을 포함한 인간의 각종 암화과정에 깊숙히 관련되어 있는 것으로 금번 연구결과 밝혀졌다. 연구 결과 유방조직을 포함한 여러 인간 정상 조직들에서는 발현이 약하고 반면에 유방암을 포함한 여러 암조직들에서는 발현이 매우 증가된 PIG50 원암유전자를 발굴하게 되었다.
643 bp로 이루어진 PIG50의 전체 서열은 서열번호: 57에 나타내었다.
서열번호: 57의 염기서열에서, 본 발명의 원암유전자의 전체 오픈 리딩 프레임(open reading frame)은 뉴클레오티드 번호 2 내지 595에 해당하며, 서열번호: 58의 197개의 아미노산으로 이루어진 단백질을 코드하는 것으로 예측된다.
6-16;PIG54
32P-표지된 HP15를 프로브로 사용하여 박테리오파지 λgt11 인간 폐 태아 섬유모세포 cDNA 라이브러리(Miki, T. et al., Gene, 83: 137-146(1989))를 스크리닝하였다. 상기 인간 폐 태아 섬유모세포 cDNA 라이브러리로부터 pCEV-LAC 벡터 중에 1936 bp가 삽입된 전체 PIG44 cDNA 클론을 얻고, 이를 2004년 2월 16일자로 AY550968 호로 미국 진뱅크(GeneBank)에 등록하였다(공개예정일: 2005년 12월 31일). AY550968 유전자는 이 데이터베이스에 등록된 제 BC041361호인 Homo sapiens SCC-112 단백질 유전자 등과 서열이 유사한 유전자이다. 그러나 기 보고된 바와 같은 기능과는 달리 AY550968 유전자는 특히 간암을 포함한 인간의 각종 암화과정에 깊숙히 관련되어 있는 것으로 금번 연구결과 밝혀졌다. 연구 결과 간조직을 포함한 여러 인간 정상 조직들에서는 발현이 약하고 반면에 간암을 포함한 여러 암조직들에서는 발현이 매우 증가된 PIG54 원암유전자를 발굴하게 되었다.
1936 bp로 이루어진 PIG54의 전체 서열은 서열번호: 61에 나타내었다.
서열번호: 61의 염기서열에서, 본 발명의 원암유전자의 전체 오픈 리딩 프레임(open reading frame)은 뉴클레오티드 번호 38 내지 1840에 해당하며, 서열번호: 62의 600개의 아미노산으로 이루어진 단백질을 코드하는 것으로 예측된다.
6-17;
PIG55
32P-표지된 FC4를 프로브로 사용하여 박테리오파지 λgt11 인간 폐 태아 섬유모세포 cDNA 라이브러리(Miki, T. et al., Gene, 83: 137-146(1989))를 스크리닝하였다. 상기 인간 폐 태아 섬유모세포 cDNA 라이브러리로부터 pCEV-LAC 벡터 중에 526 bp가 삽입된 전체 PIG55 cDNA 클론을 얻고, 이를 2004년 6월 2일자로 AY644767 호로 미국 진뱅크(GeneBank)에 등록하였다(공개예정일: 2005년 12월 31일). AY644767 유전자는 이 데이터베이스에 등록된 제 NM_007362 호인 Homo sapiens 핵 캡 결합 단백질 소단위체 2, 20kDa (NCBP2)유전자 등과 유사하다. 그러나 기 보고된 바와 같은 기능과는 달리 AY644767 유전자는 특히 유방암을 포함한 인간의 각종 암화과정에 깊숙히 관련되어 있는 것으로 금번 연구결과 밝혀졌다. 연구 결과 유방조직을 포함한 여러 인간 정상 조직들에서는 발현이 약하고 반면에 유방암을 포함한 여러 암조직들에서는 발현이 매우 증가된 PIG55 원암유전자를 발굴하게 되었다.
526 bp로 이루어진 PIG55의 전체 서열은 서열번호: 65에 나타내었다.
서열번호: 65의 염기서열에서, 본 발명의 원암유전자의 전체 오픈 리딩 프레임(open reading frame)은 뉴클레오티드 번호 15 내지 485에 해당하며, 서열번호: 66의 156개의 아미노산으로 이루어진 단백질을 코드하는 것으로 예측된다.
6-18;GIG9
32P-표지된 H148을 프로브로 사용하여 박테리오파지 λgt11 인간 폐 태아 섬유모세포 cDNA 라이브러리 (Miki, T. et al., Gene 83: 137-146, 1989)를 스크리닝하였다. 상기 인간 폐 태아 섬유모세포 cDNA 라이브러리로부터 pCEV-LAC 벡터 중에 1008 bp가 삽입된 전체 GIG9 cDNA 클론을 얻고, 이를 2003년 10월 29일자로 등재번호 제AY453396호로 미국 진뱅크 (GeneBank)에 등록하였다 (공개예정일: 2005년 3월 31일).
파지로부터 λpCEV 벡터에 삽입된 GIG9 클론을 NotI 절단에 의해 앰피실린 내성 pCEV-LAC 파지미드 (phagemid) 벡터 형태로 분리하였다 (Miki, T. et al., Gene 83: 137-146, 1989).
상기 GIG9 유전자를 함유하는 pCEV-LAC 벡터를 T4 DNA 리게이즈로 연결시켜 GIG9 플라스미드 DNA를 제조하고, 연결된 클론으로 대장균 DH5α를 형질전환시켰다.
1008 bp로 이루어진 GIG9의 전체 염기서열은 서열번호: 69에 나타내었다.
서열번호: 69의 염기서열에서, 본 발명의 원암유전자의 전체 오픈 리딩 프레임 (open reading frame)은 뉴클레오티드 번호 1 내지 1008에 해당하며, 서열번호: 70의 335개의 아미노산으로 이루어진 단백질을 코드하는 것으로 예측된다.
6-19;HLC-9
32P-표지된 L738을 프로브로 사용하여 박테리오파지 λgt11 인간 폐 태아 섬유모세포 cDNA 라이브러리(Miki, T. et al., Gene, 83: 137-146(1989))를 스크리닝 한 결과 L738 cDNA 염기서열을 가지고 있는 전장 유전자들을 구하였다. 상기 인간 폐 태아 섬유모세포 cDNA 라이브러리로부터 두종류의 전장 유전자들을 구하였으며 하나는 pCEV-LAC 벡터 중에 1382 bp가 삽입된 전체 HLC9 cDNA 클론을 얻고, 이를 2002년 11월 30일자로 AY189686 호로 미국 진뱅크(GeneBank)에 등록하였다(공개일: 2004년 5월 1일).
파지로부터 λpCEV 벡터에 삽입된 HLC9 클론을 Not I 절단에 의해 앰피실린 내성 pCEV-LAC 파지미드(phagemid) 벡터 형태로 분리하였다(상기 문헌 참조).
상기 HLC9 유전자를 함유하는 pCEV-LAC 벡터를 T4 DNA 리게이즈로 연결시켜 HLC9 플라스미드 DNA를 제조하고, 연결된 클론으로 대장균 DH5α를 형질전환시켰다.
1382 bp로 이루어진 HLC9의 전체 서열은 서열번호: 73에 나타내었다.
서열번호: 73의 염기서열에서, 본 발명의 원암유전자의 전체 오픈 리딩 프레임(open reading frame)은 뉴클레오티드 번호 27 내지 1370에 해당하며, 서열번호: 74의 447개의 아미노산으로 이루어진 단백질을 코드하는 것으로 예측된다.
6-20;GIG18
32P-표지된 HP47을 프로브로 사용하여 박테리오파지 λgt11 인간 폐 태아 섬유모세포 cDNA 라이브러리(Miki, T. et al., Gene, 83: 137-146(1989))를 스크리닝하였다. 상기 인간 폐 태아 섬유모세포 cDNA 라이브러리로부터 pCEV-LAC 벡터 중에 1301 bp가 삽입된 전체 GIG18 cDNA 클론을 얻고, 이를 2003년 12월 24일자로 AY513279 호로 미국 진뱅크(GeneBank)에 등록하였다(공개예정일: 2005년 12월 31 일). AY513279 유전자는 이 데이터베이스에 등록된 제 NM_002079 호인 Homo sapiens 글루타믹-옥살로아세틱 트랜스아미네이즈 1, 수용성(아스파테이트 아미노트랜스퍼레이즈1) (GOT1), mRNA 유전자와 서열이 유사함이 확인되었다. 그러나 기 보고된 바와 같은 기능과는 달리 AY513279 유전자는 특히 간암을 포함한 인간의 각종 암화과정에 깊숙히 관련되어 있는 것으로 금번 연구결과 밝혀졌다. 연구 결과 간조직을 포함한 여러 인간 정상 조직들에서는 발현이 약하고 반면에 간암을 포함한 여러 암조직들에서는 발현이 매우 증가된 GIG18 원암유전자를 발굴하게 되었다. 1301 bp로 이루어진 GIG18의 전체 서열은 서열번호: 77에 나타내었다.
서열번호: 77의 염기서열에서, 본 발명의 원암유전자의 전체 오픈 리딩 프레임(open reading frame)은 뉴클레오티드 번호 3 내지 1244에 해당하며, 서열번호: 78의 413개의 아미노산으로 이루어진 단백질을 코드하는 것으로 예측된다.
6-21;MIG22
32P-표지된 L690을 프로브로 사용하여 박테리오파지 λgt11 인간 폐 태아 섬유모세포 cDNA 라이브러리 (Miki, T. et al., Gene 83: 137-146, 1989)를 스크리닝하였다. 상기 인간 폐 태아 섬유모세포 cDNA 라이브러리로부터 pCEV-LAC 벡터 중에 749 bp가 삽입된 전체 MIG22 cDNA 클론을 얻고, 이를 2004년 10월 5일자로 등재번호 제AY771595호로 미국 진뱅크 (GeneBank)에 등록하였다 (공개예정일: 2005년 12월 31일).
파지로부터 λpCEV 벡터에 삽입된 MIG22 클론을 NotI 절단에 의해 앰피실린 내성 pCEV-LAC 파지미드 (phagemid) 벡터 형태로 분리하였다 (Miki, T. et al., Gene 83: 137-146, 1989).
상기 MIG22 유전자를 함유하는 pCEV-LAC 벡터를 T4 DNA 리게이즈로 연결시켜 MIG22 플라스미드 DNA를 제조하고, 연결된 클론으로 대장균 DH5α를 형질전환시켰다.
서열번호: 81의 염기서열에서, 본 발명의 원암유전자의 전체 오픈 리딩 프레임 (open reading frame)은 뉴클레오티드 번호 15 내지 734에 해당하며, 서열번호: 82의 239개의 아미노산으로 이루어진 단백질을 코드하는 것으로 예측된다.
실시예 7 : 다양한 세포에서의 원암 유전자의 노던 블롯 분석
7-1;
PIG12
,
PIG30
,
PIG31
,
PIG46
,
PIG47
,
PIG48
,
PIG50
,
PIG55
실시예 1-1에서와 같이, 정상 유방조직, 유방암 조직, 및 유방암 세포주 MCF-7으로부터 총 RNA를 추출하였다.
PIG 유전자 발현 정도를 결정하기 위하여, 각각의 조직 및 세포주로부터 추출한 변성된 총 RNA 20 ㎍씩을 1% 포름알데히드 아가로즈 겔에서 전기영동한 후 나일론 막(Boehringer-Mannheim, 독일)으로 옮겼다. 레디프라임 II(Rediprime II) 무작위 프라임 표지 시스템(Amersham, 영국)을 사용하여 제조한 32P-표지된 무작위 프라임된 FC21 cDNA 프로브로 블롯을 하이브리드시켰다. 노던 블롯 분석을 2회 반복 실시하였으며, 그 결과는 농도계(densitometry)를 사용하여 정량화하였고, β-액틴(actin)으로 표준화시켰다.
도 2a는 정상 유방 조직, 유방암조직 및 유방암 세포주(MCF-7)들에서 PIG12 원암 유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸다. 도 2a에서 알 수 있는 바와 같이, 유방암 조직 및 유방암 세포주인 MCF-7 세포주들에서는 현저한 유전자 발현이 관찰되었으나, 정상조직에서는 발현 정도가 매우 낮거나 관찰되지 않았다. 도 2a에서, 정상(Normal)열은 정상 유방 조직을, 암(Cancer)열은 유방암 조직을, 그리고 MCF-7열은 유방암 세포주를 각각 나타낸다. 도 2a 하단은 동일한 시료를 β-액틴 프로브로 하이브리드시켜 mRNA의 존재를 확인한 것이다.
도 3a는 정상 인간 12-열 다중 조직(Clontech), 뇌, 심장, 횡문근, 대장, 흉선, 비장, 신장, 간, 소장, 태반, 폐 및 말초 혈액 백혈구 조직에서 PIG12 원암 유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸 것이다. 도 3a 하단은 동일한 시료를 β-액틴 프로브로 하이브리드시켜 mRNA의 존재를 확인한 것이다. 도 3a에서 알 수 있는 바와 같이, PIG12 mRNA(약 2.0 kb)은 여러 정상조직들에서 발현이 되지 않고 있다.
도 4a는 인간 암 세포주, HL-60, HeLa, K-562, MOLT-4, Raji. SW480, A549 및 G361 (Clontech)에서 PIG12 원암 유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸 것이다. 도 4a 하단은 동일한 시료를 β-액틴 프로브로 하이브리드시켜 mRNA의 존재를 확인한 것이다. 도 4a에서 알 수 있는 바와 같이, PIG12는 HeLa 자궁암 세포주, 만성 골수 백혈병 세포주인 K-562, 임파아구 백혈병 세포주인 MOLT-4, 버키트(Burkitt) 림프종 세포주인 Raji 들에서는 강하게 발현되었으나 전골수세포 백혈병 세포주인 HL-60, 대장암세포주 SW480, 피부암세포주 G361 및 폐암세포주 A549 들에서는 발현이 없었다.
도 2f는 정상 유방 조직, 유방암조직 및 유방암 세포주(MCF-7)들에서 PIG30 원암 유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸다. 도 2f에서 알 수 있는 바와 같이, 유방암 조직 및 유방암 세포주인 MCF-7 세포주들에서는 현저한 유전자 발현이 관찰되었으나, 정상조직에서는 발현 정도가 매우 낮거나 관찰되지 않았다. 도 2f에서, 정상(Normal)열은 정상 유방 조직을, 암(Cancer)열은 유방암 조직을, 그리고 MCF-7열은 유방암 세포주를 각각 나타낸다. 도 2f 하단은 동일한 시료를 β-액틴 프로브로 하이브리드시켜 mRNA의 존재를 확인한 것이다.
도 3f는 정상 인간 12-열 다중 조직(Clontech), 뇌, 심장, 횡문근, 대장, 흉선, 비장, 신장, 간, 소장, 태반, 폐 및 말초 혈액 백혈구 조직에서 PIG30 원암 유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸 것이다. 도 3f 하단은 동일한 시료를 β-액틴 프로브로 하이브리드시켜 mRNA의 존재를 확인한 것이다. 도 3f에서 알 수 있는 바와 같이, PIG30 mRNA(약 3.5 kb)은 여러 정상조직들에서 발현이 아주 약하였다.
도 4f는 인간 암 세포주, HL-60, HeLa, K-562, MOLT-4, Raji. SW480, A549 및 G361 (Clontech)에서 PIG30 원암 유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸 것이다. 도 4f 하단은 동일한 시료를 β-액틴 프로브로 하이브리드시켜 mRNA의 존재를 확인한 것이다. 도 4f에서 알 수 있는 바와 같이, PIG30은 전골수세포 백혈병 세포주인 HL-60, HeLa 자궁암 세포주, 만성 골수 백혈병 세포주인 K-562, 임파아구 백혈병 세포주인 MOLT-4, 버키트(Burkitt) 림프종 세포주인 Raji, 대장암세포주 SW480, 폐암세포주 A549, 및 피부암세포주 G361 들에서는 발현이 강 하였다.
도 2g는 정상 유방 조직, 유방암조직 및 유방암 세포주(MCF-7)들에서 PIG31 원암 유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸다. 도 2g에서 알 수 있는 바와 같이, 유방암 조직 및 유방암 세포주인 MCF-7 세포주들에서는 현저한 유전자 발현이 관찰되었으나, 정상조직에서는 발현 정도가 매우 낮거나 관찰되지 않았다. 도 2g에서, 정상(Normal)열은 정상 유방 조직을, 암(Cancer)열은 유방암 조직을, 그리고 MCF-7열은 유방암 세포주를 각각 나타낸다. 도 2g 하단은 동일한 시료를 β-액틴 프로브로 하이브리드시켜 mRNA의 존재를 확인한 것이다.
도 3g는 정상 인간 12-열 다중 조직(Clontech), 뇌, 심장, 횡문근, 대장, 흉선, 비장, 신장, 간, 소장, 태반, 폐 및 말초 혈액 백혈구 조직에서 PIG31 원암 유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸 것이다. 도 3g 하단은 동일한 시료를 β-액틴 프로브로 하이브리드시켜 mRNA의 존재를 확인한 것이다. 도 3g에서 알 수 있는 바와 같이, PIG31 mRNA(약 2.5 kb)은 여러 정상조직들에서 발현이 약하였다.
도 4g는 인간 암 세포주, HL-60, HeLa, K-562, MOLT-4, Raji. SW480, A549 및 G361 (Clontech)에서 PIG31 원암 유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸 것이다. 도 4g 하단은 동일한 시료를 β-액틴 프로브로 하이브리드시켜 mRNA의 존재를 확인한 것이다. 도 4g에서 알 수 있는 바와 같이, PIG31은 전골수세포 백혈병 세포주인 HL-60, HeLa 자궁암 세포주, 만성 골수 백혈병 세포주인 K-562, 임파아구 백혈병 세포주인 MOLT-4, 버키트(Burkitt) 림프종 세포주인 Raji, 대장암세포주 SW480, 폐암세포주 A549, 및 피부암세포주 G361 들에서는 발현이 강하였다.
도 2(l)은 정상 유방 조직, 유방암조직 및 유방암 세포주(MCF-7)들에서 PIG46 원암 유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸다. 도 2(l)에서 알 수 있는 바와 같이, 유방암 조직 및 유방암 세포주인 MCF-7 세포주들에서는 현저한 유전자 발현이 관찰되었으나, 정상조직에서는 발현 정도가 매우 낮거나 관찰되지 않았다. 도 2(l)에서, 정상(Normal)열은 정상 유방 조직을, 암(Cancer)열은 유방암 조직을, 그리고 MCF-7열은 유방암 세포주를 각각 나타낸다. 도 2(l) 하단은 동일한 시료를 β-액틴 프로브로 하이브리드시켜 mRNA의 존재를 확인한 것이다.
도 3(l)은 정상 인간 12-열 다중 조직(Clontech), 뇌, 심장, 횡문근, 대장, 흉선, 비장, 신장, 간, 소장, 태반, 폐 및 말초 혈액 백혈구 조직에서 PIG46 원암 유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸 것이다. 도 3(l) 하단은 동일한 시료를 β-액틴 프로브로 하이브리드시켜 mRNA의 존재를 확인한 것이다. 도 3(l)에서 알 수 있는 바와 같이, PIG46 mRNA(약 1.4 kb)은 여러 정상조직들에서 발현이 아주 약하거나 없었다.
도 4(l)은 인간 암 세포주, HL-60, HeLa, K-562, MOLT-4, Raji. SW480, A549 및 G361 (Clontech)에서 PIG46 원암 유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸 것이다. 도 4(l) 하단은 동일한 시료를 β-액틴 프로브로 하이브리드시켜 mRNA의 존재를 확인한 것이다. 도 4(l)에서 알 수 있는 바와 같이, PIG46 mRNA(약 1.4 kb)은 HeLa 자궁암 세포주, 만성 골수 백혈병 세포주인 K-562, 대장암세포주 SW480, 및 폐암세포주 A549 들에서는 발현이 강하였으나 전골수세포 백혈병 세포주인 HL-60, 임파아구 백혈병 세포주인 MOLT-4, 버키트(Burkitt) 림프종 세포주인 Raji, 및 피부암세포주 G361 들에서는 발현이 없었다.
도 2m은 정상 유방 조직, 유방암조직 및 유방암 세포주(MCF-7)들에서 PIG47 원암 유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸다. 도 2m에서 알 수 있는 바와 같이, 유방암 조직 및 유방암 세포주인 MCF-7 세포주들에서는 현저한 유전자 발현이 관찰되었으나, 정상조직에서는 발현 정도가 매우 낮거나 관찰되지 않았다. 도 2m에서, 정상(Normal)열은 정상 유방 조직을, 암(Cancer)열은 유방암 조직을, 그리고 MCF-7열은 유방암 세포주를 각각 나타낸다. 도 2m 하단은 동일한 시료를 β-액틴 프로브로 하이브리드시켜 mRNA의 존재를 확인한 것이다.
도 3m은 정상 인간 12-열 다중 조직(Clontech), 뇌, 심장, 횡문근, 대장, 흉선, 비장, 신장, 간, 소장, 태반, 폐 및 말초 혈액 백혈구 조직에서 PIG47 원암 유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸 것이다. 도 3m 하단은 동일한 시료를 β-액틴 프로브로 하이브리드시켜 mRNA의 존재를 확인한 것이다. 도 3m에서 알 수 있는 바와 같이, PIG47 mRNA(약 1.3 kb)은 정상 심장과 근육조직에서는 발현이 되고 있으나 다른 여러 정상조직들에서 발현이 아주 약하였다.
도 4m은 인간 암 세포주, HL-60, HeLa, K-562, MOLT-4, Raji. SW480, A549 및 G361 (Clontech)에서 PIG47 원암 유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸 것이다. 도 4m 하단은 동일한 시료를 β-액틴 프로브로 하이브리드시켜 mRNA의 존재를 확인한 것이다. 도 4m에서 알 수 있는 바와 같이, PIG47은 전골수세포 백혈병 세포주인 HL-60, HeLa 자궁암 세포주, 만성 골수 백혈병 세포주인 K-562, 임파아구 백혈병 세포주인 MOLT-4, 및 버키트(Burkitt) 림프종 세포주인 Raji 에서는 발현이 강하였으나 대장암세포주 SW480, 폐암세포주 A549, 및 피부암세포주 G361 들에서는 발현이 없었다.
도 2n은 정상 유방 조직, 유방암조직 및 유방암 세포주(MCF-7)들에서 PIG48 원암 유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸다. 도 2n에서 알 수 있는 바와 같이, 유방암 조직 및 유방암 세포주인 MCF-7 세포주들에서는 현저한 유전자 발현이 관찰되었으나, 정상조직에서는 발현 정도가 매우 낮거나 관찰되지 않았다. 도 2n에서, 정상(Normal)열은 정상 유방 조직을, 암(Cancer)열은 유방암 조직을, 그리고 MCF-7열은 유방암 세포주를 각각 나타낸다. 도 2n 하단은 동일한 시료를 β-액틴 프로브로 하이브리드시켜 mRNA의 존재를 확인한 것이다.
도 3n은 정상 인간 12-열 다중 조직(Clontech), 뇌, 심장, 횡문근, 대장, 흉선, 비장, 신장, 간, 소장, 태반, 폐 및 말초 혈액 백혈구 조직에서 PIG48 원암 유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸 것이다. 도 3n 하단은 동일한 시료를 β-액틴 프로브로 하이브리드시켜 mRNA의 존재를 확인한 것이다. 도 3n에서 알 수 있는 바와 같이, PIG48 mRNA(약 2.0 kb)은 여러 정상조직들에서 발현이 아주 약하거나 없었다.
도 4n은 인간 암 세포주, HL-60, HeLa, K-562, MOLT-4, Raji. SW480, A549 및 G361 (Clontech)에서 PIG48 원암 유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸 것이다. 도 4n 하단은 동일한 시료를 β-액틴 프로브로 하이브리드시켜 mRNA의 존재를 확인한 것이다. 도 4n에서 알 수 있는 바와 같이, PIG48은 전골수세포 백혈병 세포주인 HL-60, HeLa 자궁암 세포주, 만성 골수 백혈병 세포주인 K-562, 임파아구 백혈병 세포주인 MOLT-4, 버키트(Burkitt) 림프종 세포주인 Raji, 대장암세포주 SW480, 폐암세포주 A549, 및 피부암세포주 G361 들에서는 발현이 강하였다.
도 2(o)는 정상 유방 조직, 유방암조직 및 유방암 세포주(MCF-7)들에서 PIG50 원암 유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸다. 도 2(o)에서 알 수 있는 바와 같이, 유방암 조직 및 유방암 세포주인 MCF-7 세포주들에서는 현저한 유전자 발현이 관찰되었으나, 정상조직에서는 발현 정도가 관찰되지 않았다. 도 2에서, 정상(Normal)열은 정상 유방 조직을, 암(Cancer)열은 유방암 조직을, 그리고 MCF-7열은 유방암 세포주를 각각 나타낸다. 도 2(o) 하단은 동일한 시료를 β-액틴 프로브로 하이브리드시켜 mRNA의 존재를 확인한 것이다.
도 3(o)는 정상 인간 12-열 다중 조직(Clontech), 뇌, 심장, 횡문근, 대장, 흉선, 비장, 신장, 간, 소장, 태반, 폐 및 말초 혈액 백혈구 조직에서 PIG50 원암 유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸 것이다. 도 3(o) 하단은 동일한 시료를 β-액틴 프로브로 하이브리드시켜 mRNA의 존재를 확인한 것이다. 도 3(o)에서 알 수 있는 바와 같이, PIG50 mRNA(약 1.0 kb)은 여러 정상조직들에서 발현이 아주 약하거나 없었다. 동시에 약 5.0 kb의 PIG50 mRNA 전사물도 아주 약하게 발현이 되고 있다.
도 4(o)는 인간 암 세포주, HL-60, HeLa, K-562, MOLT-4, Raji. SW480, A549 및 G361 (Clontech)에서 PIG50 원암 유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸 것이다. 도 4(o) 하단은 동일한 시료를 β-액틴 프로브로 하이브리드시켜 mRNA의 존재를 확인한 것이다. 도 4(o)에서 알 수 있는 바와 같이, PIG50은 전골수세포 백혈병 세포주인 HL-60, HeLa 자궁암 세포주, 만성 골수 백혈병 세포주인 K-562, 임파아구 백혈병 세포주인 MOLT-4, 버키트(Burkitt) 림프종 세포주인 Raji, 대장암세포주 SW480, 폐암세포주 A549, 및 피부암세포주 G361 들에서는 발현이 강하였다. 동시에 약 5.0 kb의 PIG50 mRNA 전사물도 강하게 발현이 되고 있다.
도 2q는 정상 유방 조직, 유방암조직 및 유방암 세포주(MCF-7)들에서 PIG55 원암 유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸다. 도 2q에서 알 수 있는 바와 같이, 유방암 조직 및 유방암 세포주인 MCF-7 세포주들에서는 현저한 유전자 발현이 관찰되었으나, 정상조직에서는 발현 정도가 매우 낮거나 관찰되지 않았다. 도 2q에서, 정상(Normal)열은 정상 유방 조직을, 암(Cancer)열은 유방암 조직을, 그리고 MCF-7열은 유방암 세포주를 각각 나타낸다. 도 2q 하단은 동일한 시료를 β-액틴 프로브로 하이브리드시켜 mRNA의 존재를 확인한 것이다.
도 3q는 정상 인간 12-열 다중 조직(Clontech), 뇌, 심장, 횡문근, 대장, 흉선, 비장, 신장, 간, 소장, 태반, 폐 및 말초 혈액 백혈구 조직에서 PIG55 원암 유 전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸 것이다. 도 3q 하단은 동일한 시료를 β-액틴 프로브로 하이브리드시켜 mRNA의 존재를 확인한 것이다. 도 3q에서 알 수 있는 바와 같이, PIG55 mRNA(약 3.0 kb)은 여러 정상조직들에서 발현이 아주 약하거나 없었다.
도 4q는 인간 암 세포주, HL-60, HeLa, K-562, MOLT-4, Raji. SW480, A549 및 G361 (Clontech)에서 PIG55 원암 유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸 것이다. 도 4q 하단은 동일한 시료를 β-액틴 프로브로 하이브리드시켜 mRNA의 존재를 확인한 것이다. 도 4q에서 알 수 있는 바와 같이, PIG55는 전골수세포 백혈병 세포주인 HL-60, HeLa 자궁암 세포주, 만성 골수 백혈병 세포주인 K-562, 임파아구 백혈병 세포주인 MOLT-4, 버키트(Burkitt) 림프종 세포주인 Raji, 대장암세포주 SW480, 폐암세포주 A549, 및 피부암세포주 G361 들에서는 발현이 강하였다.
7-2;PIG18,
PIG23
,
PIG27
,
PIG28,GIG9
실시예 1-2에서와 같이, 정상 자궁경부 조직, 자궁경부암 조직, 자궁암 전이 임파절조직 및 자궁경부암 세포주 CaSki (ATCC CRL 1550), CUMC-6으로부터 총 RNA를 추출하였다.
PIG 또는 GIG 유전자 발현 정도를 결정하기 위하여, 각각의 조직 및 세포주로부터 추출한 변성된 총 RNA 20 ㎍씩을 1% 포름알데히드 아가로즈 겔에서 전기영동한 후 나일론 막 (Boehringer-Mannheim, 독일)으로 옮겼다. 레디프라임 II (Rediprime II) 무작위 프라임 표지 시스템 (Amersham, 영국)을 사용하여 제조한 32P-표지된 무작위 프라임된 PIG23 전체 cDNA 프로브로 블롯을 혼성화시켰다. 노던 블롯 분석을 2회 반복 실시하였으며, 그 결과는 농도계 (densitometry)를 사용하여 정량화하였고, β-액틴 (actin)으로 표준화시켰다.
도 2b는 정상 자궁경부 조직, 자궁경부암 조직, 자궁경부암 전이 임파절 조직 및 자궁경부암 세포주 (CaSki 및 CUMC-6)들에서 PIG18 원암유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸 것이다. 도 2b에서 알 수 있는 바와 같이, PIG18 원암유전자는 자궁경부암 조직과 자궁경부암 세포주인 CaSki와 CUMC-6 세포주들에서는 유전자 발현이 증가되었으며 즉 약 5.0 kb의 우점(dominant) PIG18 mRNA 전사물이 과발현되었다, 도 2b에서, 정상 (Normal)열은 정상 자궁 경부 조직을, 암 (Cancer)열은 자궁경부암 조직을, 전이 (metastasis)열은 자궁경부암 전이 임파절 조직을, 그리고 CaSki열 및 CUMC-6열은 각각 자궁암 세포주를 나타낸다. 도 2b 하단은 동일한 시료를 β-액틴 프로브로 혼성화시켜 mRNA의 존재를 확인한 것이다.
도 3b는 정상 인간 12-열 다중 조직 (Clontech), 뇌, 심장, 횡문근, 대장, 흉선, 비장, 신장, 간, 소장, 태반, 폐 및 말초 혈액 백혈구 조직에서 PIG18 원암유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸 것이다. 도 3b 하단은 동일한 시료를 β-액틴 프로브로 혼성화시켜 mRNA의 존재를 확인한 것이다. 도 3b에서 알 수 있는 바와 같이, PIG18 mRNA (약 5.0 kb의 우점(dominant) PIG18 mRNA 전사물)는 정상 뇌, 심장과 정상근육, 대장, 흉선, 비장, 콩팥, 간, 소장, 태반, 폐 및 말초 혈액 백혈구 조직들에서는 아주 약하게 발현이 되거나 발현이 없었다. 또한 동시에 약 3.0 kb의 PIG18 mRNA 전사물도 정상 심장에서 아주 약하게 발현이 되었다.
도 4b는 인간 암 세포주, HL-60, HeLa, K-562, MOLT-4, Raji, SW480, A549 및 G361 (Clontech)에서 PIG18 원암유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸 것이다. 도 4b 하단은 동일한 시료를 β-액틴 프로브로 혼성화시켜 mRNA의 존재를 확인한 것이다. 도 4b에서 알 수 있는 바와 같이, PIG18 mRNA (약 5.0 kb의 우점(dominant) PIG18 mRNA 전사물)는 HL-60 전골수세포 백혈병 세포주, HeLa 자궁암 세포주, 만성 골수 백혈병 세포주 K-562, 임파구 백혈병 세포주 MOLT-4, 버키트 (Burkitt) 림프종 세포주 Raji, 대장암 세포주 SW480, 폐암세포주 A549 및 피부암세포주 G361 들에서 매우 증가된 수준으로 발현되었다. 또한 동시에 약 3.0 kb의 PIG18 mRNA 전사물도 HeLa 자궁암 세포주, 만성 골수 백혈병 세포주 K-562, 임파구 백혈병 세포주 MOLT-4 들에서 증가된 수준으로 발현되었다.
도 2c는 정상 자궁경부 조직, 자궁경부암 조직, 자궁경부암 전이 임파절 조직 및 자궁경부암 세포주 (CaSki 및 CUMC-6)들에서 PIG23 원암유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸 것이다. 도 2c에서 알 수 있는 바와 같이, PIG23 원암유전자는 자궁경부암 조직, 자궁경부암 전이조직 및 자궁경부암 세포주인 CaSki와 CUMC-6 세포주들에서는 유전자 발현이 증가되었으며 즉 약 4.5 kb의 우점(dominant) PIG23 mRNA 전사물이 과발현되었다, 도 2c에서, 정상 (Normal)열은 정상 자궁 경부 조직을, 암 (Cancer)열은 자궁경부암 조직을, 전이 (metastasis)열은 자궁경부암 전이 임파절 조직을, 그리고 CaSki열 및 CUMC-6열은 각각 자궁암 세 포주를 나타낸다. 도 2c 하단은 동일한 시료를 β-액틴 프로브로 혼성화시켜 mRNA의 존재를 확인한 것이다.
도 3c는 정상 인간 12-열 다중 조직 (Clontech), 뇌, 심장, 횡문근, 대장, 흉선, 비장, 신장, 간, 소장, 태반, 폐 및 말초 혈액 백혈구 조직에서 PIG23 원암유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸 것이다. 도 3c 하단은 동일한 시료를 β-액틴 프로브로 혼성화시켜 mRNA의 존재를 확인한 것이다. 도 3c에서 알 수 있는 바와 같이, PIG23 mRNA (약 4.5 kb의 우점(dominant) PIG23 mRNA 전사물)는 정상 뇌, 심장과 정상근육, 대장, 흉선, 비장, 콩팥, 간, 소장, 태반, 폐 및 말초 혈액 백혈구 조직들에서는 아주 약하게 발현이 되거나 발현이 없었다.
도 4c는 인간 암 세포주, HL-60, HeLa, K-562, MOLT-4, Raji, SW480, A549 및 G361 (Clontech)에서 PIG23 원암유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸 것이다. 도 4c 하단은 동일한 시료를 β-액틴 프로브로 혼성화시켜 mRNA의 존재를 확인한 것이다. 도 4c에서 알 수 있는 바와 같이, PIG23 mRNA (약 4.5 kb의 우점(dominant) PIG23 mRNA 전사물)는 HeLa 자궁암 세포주, 만성 골수 백혈병 세포주 K-562, 임파구 백혈병 세포주 MOLT-4, 버키트 (Burkitt) 림프종 세포주 Raji, 대장암 세포주 SW480, 폐암세포주 A549 및 피부암세포주 G361 들에서 매우 증가된 수준으로 발현되었다. 또한 동시에 약 7.0 kb 및 2.0 kb의 PIG23 mRNA 전사물들도 HeLa 자궁암 세포주, 만성 골수 백혈병 세포주 K-562, 임파구 백혈병 세포주 MOLT-4, 버키트 (Burkitt) 림프종 세포주 Raji, 대장암 세포주 SW480, 폐암세포주 A549 및 피부암세포주 G361 들에서 증가된 수준으로 발현되었다.
도 2d는 정상 자궁경부 조직, 자궁경부암 조직, 자궁경부암 전이 임파절 조직 및 자궁경부암 세포주 (CaSki 및 CUMC-6)들에서 PIG27 원암유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸 것이다. 도 2d에서 알 수 있는 바와 같이, PIG27 원암유전자는 자궁경부암 조직과 자궁경부암 세포주인 CaSki와 CUMC-6 세포주들에서는 유전자 발현이 증가되었으며 즉 약 1.5 kb의 우점(dominant) PIG27 mRNA 전사물이 과발현되었다, 도 2d에서, 정상 (Normal)열은 정상 자궁 경부 조직을, 암 (Cancer)열은 자궁경부암 조직을, 전이 (metastasis)열은 자궁경부암 전이 임파절 조직을, 그리고 CaSki열 및 CUMC-6열은 각각 자궁암 세포주를 나타낸다. 도 2d 하단은 동일한 시료를 β-액틴 프로브로 혼성화시켜 mRNA의 존재를 확인한 것이다.
도 3d는 정상 인간 12-열 다중 조직 (Clontech), 뇌, 심장, 횡문근, 대장, 흉선, 비장, 신장, 간, 소장, 태반, 폐 및 말초 혈액 백혈구 조직에서 PIG27 원암유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸 것이다. 도 3d 하단은 동일한 시료를 β-액틴 프로브로 혼성화시켜 mRNA의 존재를 확인한 것이다. 도 3d에서 알 수 있는 바와 같이, PIG27 mRNA (약 1.5 kb의 우점(dominant) PIG27 mRNA 전사물)는 정상 뇌, 심장과 정상근육, 대장, 흉선, 비장, 콩팥, 간, 소장, 태반, 폐 및 말초 혈액 백혈구 조직들에서는 아주 약하게 발현이 되고 있었다.
도 4d는 인간 암 세포주, HL-60, HeLa, K-562, MOLT-4, Raji, SW480, A549 및 G361 (Clontech)에서 PIG27 원암유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸 것이다. 도 4d 하단은 동일한 시료를 β-액틴 프로브로 혼성화시켜 mRNA의 존재를 확인한 것이다. 도 4d에서 알 수 있는 바와 같이, PIG27 mRNA (약 1.5 kb의 우점(dominant) PIG27 mRNA 전사물)는 HL-60 전골수세포 백혈병 세포주, HeLa 자궁암 세포주, 만성 골수 백혈병 세포주 K-562, 임파구 백혈병 세포주 MOLT-4, 버키트 (Burkitt) 림프종 세포주 Raji, 대장암 세포주 SW480, 폐암세포주 A549 및 피부암세포주 G361 들에서 매우 증가된 수준으로 발현되었다.
도 2e는 정상 자궁경부 조직, 자궁경부암 조직, 자궁경부암 전이 임파절 조직 및 자궁경부암 세포주 (CaSki 및 CUMC-6)들에서 PIG28 원암유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸 것이다. 도 2e에서 알 수 있는 바와 같이, PIG28 원암유전자는 자궁경부암 조직과 자궁경부암 세포주인 CaSki와 CUMC-6 세포주들에서는 유전자 발현이 증가되었으며 즉 약 1.5 kb의 우점(dominant) PIG28 mRNA 전사물이 과발현되었다, 도 2e에서, 정상 (Normal)열은 정상 자궁 경부 조직을, 암 (Cancer)열은 자궁경부암 조직을, 전이 (metastasis)열은 자궁경부암 전이 임파절 조직을, 그리고 CaSki열 및 CUMC-6열은 각각 자궁암 세포주를 나타낸다. 도 2e 하단은 동일한 시료를 β-액틴 프로브로 혼성화시켜 mRNA의 존재를 확인한 것이다.
도 3e는 정상 인간 12-열 다중 조직 (Clontech), 뇌, 심장, 횡문근, 대장, 흉선, 비장, 신장, 간, 소장, 태반, 폐 및 말초 혈액 백혈구 조직에서 PIG28 원암유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸 것이다. 도 3e 하단은 동일한 시료를 β-액틴 프로브로 혼성화시켜 mRNA의 존재를 확인한 것이다. 도 3e에서 알 수 있는 바와 같이, PIG28 mRNA (약 1.5 kb의 우점(dominant) PIG28 mRNA 전사물)는 정상 뇌, 심장과 정상근육, 대장, 흉선, 비장, 콩팥, 간, 소장, 태반, 폐 및 말초 혈액 백혈구 조직들에서는 아주 약하게 발현이 되거나 발현이 없었다. 또한 동시에 약 2.2 kb의 PIG28 mRNA 전사물도 정상 뇌, 심장과 정상근육, 대장, 흉선, 비장, 콩팥, 간, 소장, 태반, 폐 및 말초 혈액 백혈구 조직들에서 아주 약하게 발현이 되거나 발현이 없었다.
도 4e는 인간 암 세포주, HL-60, HeLa, K-562, MOLT-4, Raji, SW480, A549 및 G361 (Clontech)에서 PIG28 원암유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸 것이다. 도 4e 하단은 동일한 시료를 β-액틴 프로브로 혼성화시켜 mRNA의 존재를 확인한 것이다. 도 4a에서 알 수 있는 바와 같이, PIG28 mRNA (약 1.5 kb의 우점(dominant) PIG28 mRNA 전사물)는 HL-60 전골수세포 백혈병 세포주, HeLa 자궁암 세포주, 만성 골수 백혈병 세포주 K-562, 임파구 백혈병 세포주 MOLT-4, 버키트 (Burkitt) 림프종 세포주 Raji, 대장암 세포주 SW480, 폐암세포주 A549 및 피부암세포주 G361 들에서 매우 증가된 수준으로 발현되었다. 또한 동시에 약 2.2 kb의 PIG28 mRNA 전사물도 HL-60 전골수세포 백혈병 세포주, HeLa 자궁암 세포주, 만성 골수 백혈병 세포주 K-562, 임파구 백혈병 세포주 MOLT-4, 버키트 (Burkitt) 림프종 세포주 Raji, 대장암 세포주 SW480, 폐암세포주 A549 및 피부암세포주 G361 들에서 증가된 수준으로 발현되었다.
도 2r은 정상 자궁경부 조직, 자궁경부암 조직, 자궁경부암 전이 임파절 조직 및 자궁경부암 세포주 (CaSki 및 CUMC-6)들에서 GIG9 원암유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸 것이다. 도 2r에서 알 수 있는 바와 같이, GIG9 원암유전자는 자궁경부암 조직과 자궁경부암 세포주인 CaSki와 CUMC-6 세포주들에서는 유전자 발현이 증가되었으며 즉 약 1.5 kb의 우점(dominant) GIG9 mRNA 전사물이 과발현되었다, 도 2r에서, 정상 (Normal)열은 정상 자궁 경부 조직을, 암 (Cancer)열은 자궁경부암 조직을, 전이 (metastasis)열은 자궁경부암 전이 임파절 조직을, 그리고 CaSki열 및 CUMC-6열은 각각 자궁암 세포주를 나타낸다. 도 2r 하단은 동일한 시료를 β-액틴 프로브로 혼성화시켜 mRNA의 존재를 확인한 것이다.
도 3r은 정상 인간 12-열 다중 조직 (Clontech), 뇌, 심장, 횡문근, 대장, 흉선, 비장, 신장, 간, 소장, 태반, 폐 및 말초 혈액 백혈구 조직에서 GIG9 원암유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸 것이다. 도 3r 하단은 동일한 시료를 β-액틴 프로브로 혼성화시켜 mRNA의 존재를 확인한 것이다. 도 3r에서 알 수 있는 바와 같이, GIG9 mRNA (약 1.5 kb의 우점(dominant) GIG9 mRNA 전사물)는 정상 뇌, 심장과 정상근육, 대장, 흉선, 비장, 콩팥, 간, 소장, 태반, 폐 및 말초 혈액 백혈구 조직들에서는 아주 약하게 발현이 되고 있었다.
도 4r은 인간 암 세포주, HL-60, HeLa, K-562, MOLT-4, Raji, SW480, A549 및 G361 (Clontech)에서 GIG9 원암유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸 것이다. 도 4r 하단은 동일한 시료를 β-액틴 프로브로 혼성화시켜 mRNA의 존재를 확인한 것이다. 도 4r에서 알 수 있는 바와 같이, GIG9 mRNA (약 1.5 kb의 우점(dominant) GIG9 mRNA 전사물)는 HL-60 전골수세포 백혈병 세포주, HeLa 자궁암 세포주, 만성 골수 백혈병 세포주 K-562, 임파구 백혈병 세포주 MOLT-4, 버키트 (Burkitt) 림프종 세포주 Raji, 대장암 세포주 SW480, 폐암세포주 A549 및 피부암세포주 G361 들에서 매우 증가된 수준으로 발현되었다.
7-3;
PIG38
,
PIG43
,
PIG44,PIG54,GIG18
실시예 1-3에서와 같이, 정상 간조직, 간암 조직, 및 간암 세포주 HepG2로부터 총 RNA를 추출하였다.
PIG 유전자 발현 정도를 결정하기 위하여, 각각의 조직 및 세포주로부터 추출한 변성된 총 RNA 20 ㎍씩을 1% 포름알데히드 아가로즈 겔에서 전기영동한 후 나일론 막(Boehringer-Mannheim, 독일)으로 옮겼다. 레디프라임 II(Rediprime II) 무작위 프라임 표지 시스템(Amersham, 영국)을 사용하여 제조한 32P-표지된 무작위 프라임된 HP103 cDNA 프로브로 블롯을 하이브리드시켰다. 노던 블롯 분석을 2회 반복 실시하였으며, 그 결과는 농도계(densitometry)를 사용하여 정량화하였고, β-액틴(actin)으로 표준화시켰다.
도 2h는 정상 간조직, 간암조직 및 간암 세포주(HepG2)들에서 PIG38 원암 유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸다. 도 2h에서 알 수 있는 바와 같이, 간암 조직 및 간암 세포주인 HepG2 세포주들에서는 현저한 유전자 발현이 관찰되었으나, 정상조직에서는 발현이 되지 않거나 약하였다. 도 2h 하단은 동일한 시료를 β-액틴 프로브로 하이브리드시켜 mRNA의 존재를 확인한 것이다.
도 3h는 정상 인간 12-열 다중 조직(Clontech), 뇌, 심장, 횡문근, 대장, 흉선, 비장, 신장, 간, 소장, 태반, 폐 및 말초 혈액 백혈구 조직에서 PIG38 원암 유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸 것이다. 도 3h 하단은 동일한 시료를 β-액틴 프로브로 하이브리드시켜 mRNA의 존재를 확인한 것이다. 도 3h에서 알 수 있는 바와 같이, PIG38 mRNA(약 1.5 kb)는 정상 간조직에서와 같이 여러 다른 정상조직들에서도 발현이 되지 않거나 발현이 약하였다. 도 4h는 인간 암 세포주, HL-60, HeLa, K-562, MOLT-4, Raji. SW480, A549 및 G361 (Clontech)에서 PIG38 원암 유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸 것이다. 도 4h 하단은 동일한 시료를 β-액틴 프로브로 하이브리드시켜 mRNA의 존재를 확인한 것이다. 도 4h에서 알 수 있는 바와 같이, PIG38 mRNA(약 1.5 kb)는 전골수세포 백혈병 세포주인 HL-60, HeLa 자궁암 세포주, 만성 골수 백혈병 세포주인 K-562, 임파아구 백혈병 세포주인 MOLT-4, 버키트(Burkitt) 림프종 세포주인 Raji, 대장암세포주 SW480, 폐암세포주 A549, 및 피부암세포주 G361 들에서는 발현이 강하였다. 또한 암세포주들에서는 PIG38 mRNA의 또다른 전사물인 2.5 kb, 3kb, 및 4.5 kb 전사물들도 발현이 확인되었다.
도 2j는 정상 간조직, 간암조직 및 간암 세포주(HepG2)들에서 PIG43 원암 유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸다. 도 2j에서 알 수 있는 바와 같이, 간암 조직 및 간암 세포주인 HepG2 세포주들에서는 현저한 유전자 발현이 관찰되었으나, 정상조직에서는 발현이 되지 않거나 약하였다. 도 2j 하단은 동일한 시료를 β-액틴 프로브로 하이브리드시켜 mRNA의 존재를 확인한 것이다.
도 3j는 정상 인간 12-열 다중 조직(Clontech), 뇌, 심장, 횡문근, 대장, 흉선, 비장, 신장, 간, 소장, 태반, 폐 및 말초 혈액 백혈구 조직에서 PIG43 원암 유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸 것이다. 도 3j 하단은 동일한 시료를 β-액틴 프로브로 하이브리드시켜 mRNA의 존재를 확인한 것이다. 도 3j에서 알 수 있는 바와 같이, PIG43 mRNA(약 3.0 kb)은 정상 간조직에서와 같이 여러 다른 정상조직들에서도 발현이 되지 않거나 발현이 약하였다. 도 4j는 인간 암 세포주, HL-60, HeLa, K-562, MOLT-4, Raji. SW480, A549 및 G361 (Clontech)에서 PIG43 원암 유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸 것이다. 도 4j 하단은 동일한 시료를 β-액틴 프로브로 하이브리드시켜 mRNA의 존재를 확인한 것이다. 도 4j에서 알 수 있는 바와 같이, PIG43은 전골수세포 백혈병 세포주인 HL-60, HeLa 자궁암 세포주, 만성 골수 백혈병 세포주인 K-562, 임파아구 백혈병 세포주인 MOLT-4, 대장암세포주 SW480, 및 피부암세포주 G361 들에서는 발현이 강하였으나 버키트(Burkitt) 림프종 세포주인 Raji, 및 폐암세포주 A549 들에서는 발현이 없었다.
도 2k는 정상 간조직, 간암조직 및 간암 세포주(HepG2)들에서 PIG44 원암 유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸다. 도 2k에서 알 수 있는 바와 같이, 간암 조직 및 간암 세포주인 HepG2 세포주들에서는 현저한 유전자 발현이 관찰되었으나, 정상조직에서는 발현이 되지 않거나 약하였다. 도 2k 하단은 동일한 시료를 β-액틴 프로브로 하이브리드시켜 mRNA의 존재를 확인한 것이다.
도 3k는 정상 인간 12-열 다중 조직(Clontech), 뇌, 심장, 횡문근, 대장, 흉선, 비장, 신장, 간, 소장, 태반, 폐 및 말초 혈액 백혈구 조직에서 PIG44 원암 유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸 것이다. 도 3k 하단은 동일한 시료를 β-액틴 프로브로 하이브리드시켜 mRNA의 존재를 확인한 것이다. 도 3k에서 알 수 있는 바와 같이, PIG44 mRNA(약 4.5 kb)은 정상 간조직에서와 같이 여러 다른 정상조직들에서도 발현이 되지 않았고 단지 정상 심장과 근육에서만 발현이 약하였다. 또한 정상 심장과 근육에서는 약 5.0 kb의 PIG44 mRNA도 아주 약하게 발현이 되고 있다. 도 4k는 인간 암 세포주, HL-60, HeLa, K-562, MOLT-4, Raji. SW480, A549 및 G361 (Clontech)에서 PIG38 원암 유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸 것이다. 도 4k 하단은 동일한 시료를 β-액틴 프로브로 하이브리드시켜 mRNA의 존재를 확인한 것이다. 도 4k에서 알 수 있는 바와 같이, PIG44는 전골수세포 백혈병 세포주인 HL-60, HeLa 자궁암 세포주, 만성 골수 백혈병 세포주인 K-562, 임파아구 백혈병 세포주인 MOLT-4, 버키트(Burkitt) 림프종 세포주인 Raji, 대장암세포주 SW480, 폐암세포주 A549, 및 피부암세포주 G361 들에서는 발현이 강하였다. 동시에 약 5.0 kb의 PIG44 mRNA도 발현이 되고 있다.
도 2p는 정상 간조직, 간암조직 및 간암 세포주(HepG2)들에서 PIG54 원암 유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸다. 도 2p에서 알 수 있는 바와 같이, 간암 조직 및 간암 세포주인 HepG2 세포주들에서는 현저한 유전자 발현이 관찰되었으나, 정상조직에서는 발현이 되지 않거나 약하였다. 도 2p 하단은 동일한 시료를 β-액틴 프로브로 하이브리드시켜 mRNA의 존재를 확인한 것이다.
도 3p는 정상 인간 12-열 다중 조직(Clontech), 뇌, 심장, 횡문근, 대장, 흉선, 비장, 신장, 간, 소장, 태반, 폐 및 말초 혈액 백혈구 조직에서 PIG54 원암 유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸 것이다. 도 3p 하단은 동일한 시료를 β-액틴 프로브로 하이브리드시켜 mRNA의 존재를 확인한 것이다. 도 3p에서 알 수 있는 바와 같이, PIG54 mRNA(약 7.0 kb)는 정상 간조직에서와 같이 여러 다른 정상조직들에서 발현이 되지 않거나 발현이 약하였다. 또한 정상 조직들에서는 약 9.0 kb의 PIG54 mRNA도 아주 약하게 발현이 되고 있다. 도 4p는 인간 암 세포주, HL-60, HeLa, K-562, MOLT-4, Raji. SW480, A549 및 G361 (Clontech)에서 PIG38 원암 유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸 것이다. 도 4p 하단은 동일한 시료를 β-액틴 프로브로 하이브리드시켜 mRNA의 존재를 확인한 것이다. 도 4p에서 알 수 있는 바와 같이, PIG54는 전골수세포 백혈병 세포주인 HL-60, HeLa 자궁암 세포주, 만성 골수 백혈병 세포주인 K-562, 임파아구 백혈병 세포주인 MOLT-4, 버키트(Burkitt) 림프종 세포주인 Raji, 대장암세포주 SW480, 폐암세포주 A549, 및 피부암세포주 G361 들에서는 발현이 강하였다. 동시에 약 9.0 kb 와 3.0 kb의 PIG54 mRNA도 발현이 강하게 되고 있다.
도 2t는 정상 간조직, 간암조직 및 간암 세포주(HepG2)들에서 GIG18 원암 유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸다. 도 2t에서 알 수 있는 바와 같이, 간암 조직 및 간암 세포주인 HepG2 세포주들에서는 현저한 유전자 발현이 관찰되었으나, 정상조직에서는 발현이 약하였다. 도 2t 하단은 동일한 시료를 β-액틴 프로브로 하이브리드시켜 mRNA의 존재를 확인한 것이다.
도 3t는 정상 인간 12-열 다중 조직(Clontech), 뇌, 심장, 횡문근, 대장, 흉선, 비장, 신장, 간, 소장, 태반, 폐 및 말초 혈액 백혈구 조직에서 GIG18 원암 유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸 것이다. 도 3t 하단은 동일한 시료를 β-액틴 프로브로 하이브리드시켜 mRNA의 존재를 확인한 것이다. 도 3t에서 알 수 있는 바와 같이, GIG18 mRNA(약 2.2 kb)는 정상 간조직에서와 같이 여러 다른 정상조직들에서도 발현이 되지 않거나 발현이 약하였다. 또한 정상조직들에서는 GIG18 mRNA의 또다른 전사물인 2.0 kb 전사물도 발현이 약하게 확인되었다. 도 4t는 인간 암 세포주, HL-60, HeLa, K-562, MOLT-4, Raji. SW480, A549 및 G361 (Clontech)에서 GIG18 원암 유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸 것이다. 도 4t 하단은 동일한 시료를 β-액틴 프로브로 하이브리드시켜 mRNA의 존재를 확인한 것이다. 도 4t에서 알 수 있는 바와 같이, GIG18 mRNA(약 2.2 kb)는 전골수세포 백혈병 세포주인 HL-60, HeLa 자궁암 세포주, 만성 골수 백혈병 세포주인 K-562, 임파아구 백혈병 세포주인 MOLT-4, 버키트(Burkitt) 림프종 세포주인 Raji, 대장암세포주 SW480, 폐암세포주 A549, 및 피부암세포주 G361 들에서는 발현이 강하였다. 또한 암세포주들에서는 GIG18 mRNA의 또다른 전사물인 2.0 kb 전사물도 발현이 강하게 확인되었다.
7-4;
PIG40
실시예 1-4에서와 같이, 정상 말초혈액 조직, 백혈병 조직 및 K-562 세포로 부터 총 RNA를 추출하였다.
PIG40 유전자 발현 정도를 결정하기 위하여, 각각의 조직 및 세포주로부터 추출한 변성된 총 RNA 20 ㎍씩을 1% 포름알데히드 아가로즈 겔에서 전기영동한 후 나일론 막 (Boehringer-Mannheim, 독일)으로 옮겼다. 레디프라임 II (Rediprime II) 무작위 프라임 표지 시스템 (Amersham, 영국)을 사용하여 제조한 32P-표지된 무작위 프라임된 PIG40 전체 cDNA 프로브로 블롯을 혼성화시켰다. 노던 블롯 분석 을 2회 반복 실시하였으며, 그 결과는 농도계 (densitometry)를 사용하여 정량화하였고, β-액틴 (actin)으로 표준화시켰다.
도 2i는 정상 말초혈액 조직, 백혈병 조직 및 K-562 세포들에서 PIG40 원암유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸 것이다. 도 2i에서 알 수 있는 바와 같이, PIG40 원암유전자는 백혈병 조직 및 K-562 세포주들에서는 유전자 발현이 증가되었으며 즉 약 2.5 kb의 우점(dominant) PIG40 mRNA 전사물이 과발현되었다, 도 2에서, 정상 (Normal)열은 정상 말초혈액 조직을, 암 (Cancer)열은 백혈병 조직을, 그리고 K562열은 각각 백혈병 세포주를 나타낸다. 도 2i 하단은 동일한 시료를 β-액틴 프로브로 혼성화시켜 mRNA의 존재를 확인한 것이다.
도 3i는 정상 인간 12-열 다중 조직 (Clontech), 뇌, 심장, 횡문근, 대장, 흉선, 비장, 신장, 간, 소장, 태반, 폐 및 말초 혈액 백혈구 조직에서 PIG40 원암유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸 것이다. 도 3i 하단은 동일한 시료를 β-액틴 프로브로 혼성화시켜 mRNA의 존재를 확인한 것이다. 도 3i에서 알 수 있는 바와 같이, PIG40 mRNA (약 2.5 kb의 우점(dominant) PIG40 mRNA 전사물)는 정상 뇌, 심장과 정상근육, 대장, 흉선, 비장, 콩팥, 간, 소장, 태반, 폐 및 말초 혈액 백혈구 조직들에서는 아주 약하게 발현이 되거나 발현이 없었다.
도 4i는 인간 암 세포주, HL-60, HeLa, K-562, MOLT-4, Raji, SW480, A549 및 G361 (Clontech)에서 PIG40 원암유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸 것이다. 도 4i 하단은 동일한 시료를 β-액틴 프로브로 혼성화시켜 mRNA의 존재를 확인한 것이다. 도 4i에서 알 수 있는 바와 같이, PIG40 mRNA (약 2.5 kb의 우점(dominant) PIG40 mRNA 전사물)는 HeLa 자궁암 세포주, 만성 골수 백혈병 세포주 K-562, 임파구 백혈병 세포주 MOLT-4, 버키트 (Burkitt) 림프종 세포주 Raji, 대장암 세포주 SW480, 폐암세포주 A549 및 피부암세포주 G361 들에서 매우 증가된 수준으로 발현되었다. 또한 동시에 약 2.0 kb의 PIG40 mRNA 전사물들도 전골수세포 백혈병 세포주인 HL-60, HeLa 자궁암 세포주, 만성 골수 백혈병 세포주 K-562, 임파구 백혈병 세포주 MOLT-4, 버키트 (Burkitt) 림프종 세포주 Raji, 대장암 세포주 SW480, 폐암세포주 A549 및 피부암세포주 G361 들에서 증가된 수준으로 발현되었다.
7-5;HLC-9,MIG22
실시예 1에서와 같이, 정상 폐조직, 좌측 폐암 조직, 좌측 폐에서 우측폐로 전이된 전이 폐암조직, A549, NCI-H2009 (American Type Culture Collection; ATCC Number CRL-5911), NCI-H441 (American Type Culture Collection; ATCC Number HTB-174) 폐암세포주들부터 총 RNA를 추출하였다.
HLC9 또는 MIG22 유전자 발현 정도를 결정하기 위하여, 각각의 조직 및 세포주로부터 추출한 변성된 총 RNA 20 ㎍씩을 1% 포름알데히드 아가로즈 겔에서 전기영동한 후 나일론 막(Boehringer-Mannheim, 독일)으로 옮겼다. 레디프라임 II(Rediprime II) 무작위 프라임 표지 시스템(Amersham, 영국)을 사용하여 제조한 32P-표지된 무작위 프라임된 L738;또는 L690 부분 cDNA 프로브로 블롯을 하이브리드시켰다. 노던 블롯 분석을 2회 반복 실시하였으며, 그 결과는 농도계(densitometry)를 사용하여 정량화하였고, β-액틴(actin)으로 표준화시켰다.
도 2s는 정상 폐조직, 폐암조직, 폐암 전이조직 및 폐암 세포주 (A549, NCI-H2009, 및 NCI-H441)들에서 HLC9 원암 유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸다. 도 2s에서 알 수 있는 바와 같이, 폐암 조직, 폐암 전이조직 및 폐암 세포주인 A549, NCI-H2009, NCI-H441 폐암세포주들에서는 현저한 유전자 발현이 관찰되었으나, 정상 폐조직에서는 발현 정도가 매우 낮거나 관찰되지 않았다. 도 2s에서, 정상(Normal)열은 정상 폐조직을, 암(Cancer)열은 폐암 조직을, 전이 (metastasis)열은 폐암 전이조직 그리고 A549열, NCI-H2009열 및 NCI-H441열은 폐암 세포주를 각각 나타낸다. 도 2s 하단은 동일한 시료를 β-액틴 프로브로 하이브리드시켜 mRNA의 존재를 확인한 것이다.
도 3s는 정상 인간 12-열 다중 조직(Clontech), 뇌, 심장, 횡문근, 대장, 흉선, 비장, 신장, 간, 소장, 태반, 폐 및 말초 혈액 백혈구 조직에서 HLC9 원암 유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸 것이다. 도 3s 하단은는 동일한 시료를 β-액틴 프로브로 하이브리드시켜 mRNA의 존재를 확인한 것이다. 도 3s에서 알 수 있는 바와 같이, HLC9 mRNA(약 2.5 kb)은 근육, 심장조직 및 태반조직들에서만 발현되고 있으며 다른 정상조직들에서는 발현이 매우 약하거나 없었다. 동시에 LC9 mRNA의 또다른 전사물인 약 4.4 kb도 정상조직들에서는 발현이 매우 약하거나 없었다.
도 4s는 인간 암 세포주, HL-60, HeLa, K-562, MOLT-4, Raji. SW480, A549 및 G361 (Clontech)에서 HLC9 원암 유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸 것이다. 도 4s 하단은 동일한 시료를 β-액틴 프로브로 하이브리드시 켜 mRNA의 존재를 확인한 것이다. 도 4s에서 알 수 있는 바와 같이, HLC9은 전골수세포 백혈병 세포주인 HL-60, HeLa 자궁암 세포주, 만성 골수 백혈병 세포주인 K-562, 임파아구 백혈병 세포주인 MOLT-4, 버키트(Burkitt) 림프종 세포주인 Raji, 대장암세포주 SW480, 폐암세포주 A549 및 피부암세포주 G361들에서 높은 수준으로 발현되었다. 또한 LC9 mRNA의 또다른 전사물인 약 4.4 kb도 암세포주들에서 발현이 강하였다.
도 2u는 정상 폐조직, 폐암조직, 폐암 전이조직 및 폐암 세포주 (A549 및 NCI-H358)들에서 MIG22 원암유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸 것이다. 도 2u에서 알 수 있는 바와 같이, MIG22 원암유전자는 폐암조직, 폐암 전이조직 및 A549와 NCI-H358 폐암 세포주들에서는 현저하게 유전자 발현이 증가되었으나, 정상 폐조직에서는 발현 정도가 매우 낮거나 관찰되지 않았다. 도 2u에서, 정상 (Normal)열은 정상 폐조직을, 암 (Cancer)열은 폐암조직을, 전이 (metastasis)열은 폐암 전이조직, 그리고 A549열 및 NCI-H358열은 폐암 세포주를 각각 나타낸다. 도 2u 하단은 동일한 시료를 β-액틴 프로브로 혼성화시켜 mRNA의 존재를 확인한 것이다.
도 3u는 정상 인간 12-열 다중 조직 (Clontech), 뇌, 심장, 횡문근, 대장, 흉선, 비장, 신장, 간, 소장, 태반, 폐 및 말초 혈액 백혈구 조직에서 MIG22 원암유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸 것이다. 도 3u 하단은 동일한 시료를 β-액틴 프로브로 혼성화시켜 mRNA의 존재를 확인한 것이다. 도 3u에서 알 수 있는 바와 같이, MIG22 mRNA (약 1.0 kb 의 전사물)는 정상조직들에서 는 매우 약하게 발현되거나 발현이 없었다.
도 4u는 인간 암 세포주, HL-60, HeLa, K-562, MOLT-4, Raji, SW480, A549 및 G361 (Clontech)에서 MIG22 원암유전자의 발현여부를 확인한 노던 블롯 분석 결과를 나타낸 것이다. 도 4u 하단은 동일한 시료를 β-액틴 프로브로 혼성화시켜 mRNA의 존재를 확인한 것이다. 도 4u에서 알 수 있는 바와 같이, MIG22 mRNA (약 1.0 kb 의 우점전사물과 약 5.0 및 8.0 kb의 전사물)는 전골수세포 백혈병 세포주인 HL-60, HeLa 자궁암 세포주, 만성 골수 백혈병 세포주인 K-562, 임파아구 백혈병 세포주인 MOLT-4, 버키트 (Burkitt) 림프종 세포주인 Raji, 대장암 세포주 SW480, 폐암 세포주 A549 및 피부암 세포주 G361들에서 매우 높은 수준으로 발현되었다.
실시예 8: 원암유전자를 대장균에 형질감염시킨 후 발현되는 단백질의 크기결정
서열번호: 1의 PIG12 원암유전자; 서열번호: 5의 PIG18 원암유전자;서열번호: 9의 PIG23 원암유전자; 서열번호: 13의 PIG27 원암유전자; 서열번호: 17의 PIG28 원암유전자; 서열번호: 21의 PIG30 원암유전자; 서열번호: 25의 PIG31 원암유전자 ; 서열번호: 29의 PIG38 원암유전자; 서열번호: 33의 PIG40 원암유전자; 서열번호: 37의 PIG43 원암유전자; 서열번호: 41의 PIG44 원암유전자; 서열번호: 45의 PIG46 원암유전자 ; 서열번호: 49의 PIG47 원암유전자; 서열번호: 53의 PIG48 원암유전자; 서열번호: 57의 PIG50 원암유전자; 서열번호: 61의 PIG54 원암유전자;서열번호: 65의 PIG55 원암유전자; 서열번호: 69의 GIG9 원암유전자 ; 서열번호: 73의 HLC-9 원암유전자; 서열번호: 77의 GIG18 원암유전자; 또는 서열번호: 81의 MIG22 원암유전자;전체를 pBAD/Thio-TOPO 벡터(Invitrogen)의 다중 클로닝 부위에 삽입한 후, 대장균에 형질감염시켰다. 형질감염된 대장균을 LB 브로쓰에서 진탕 배양한 후, 이를 1/100로 희석시켜 다시 3시간동안 배양하였다. 여기에 1 mM의 이소프로필 β-D-티오갈락토피라노즈 (Isopropyl beta-D-thiogalacto-pyranoside(IPTG), Sigma)를 첨가하여 단백질 생산을 유도하였다. IPTG 유도 전후의 배양액 중의 대장균 세포를 초음파분쇄한 후, 12% 나트륨 도데실설페이트(SDS)-폴리아크릴아미드 겔에서 전기영동하였다(SDS-PAGE). 이 배양액으로부터 문헌(Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))의 방법에 따라 단백질 시료를 얻어 SDS-PAGE를 실시하였다.
도 5a는 PIG12 단백질의 SDS-PAGE 분석 결과를 보여주는 사진이다. 도 6에서 제1열은 IPTG에 의한 유도 전의 단백질 시료이고, 제2열은 IPTG에 의해 PIG12 유전자의 발현을 유도한 후의 단백질 시료이다. 도 5a에서 보듯이, 발현된 PIG12 단백질의 크기는 약 46 kDa으로서 이는 염기서열로부터 유추된 것과 일치한다.
도 5b는 pBAD/thio-Topo/PIG18 벡터로 형질감염된 대장균 Top10 균주의 단백질의 발현 양상을 SDS-PAGE로 확인한 결과로서, 엘 아라비노즈 유도 후에 약 22 kDa의 융합 단백질 밴드가 뚜렷하게 관찰되었다. 이 15 kDa 융합단백질은 pBAD/thio-Topo/PIG18 벡터에 삽입되어 있는 약 15 kDa 크기의 HT-thioredoxin 단백질과 약 7 kDa의 PIG18 단백질을 함유하고 있는 것이다.
도 5c는 pBAD/thio-Topo/PIG28 벡터로 형질감염된 대장균 Top10 균주의 단백질의 발현 양상을 SDS-PAGE로 확인한 결과로서, 엘 아라비노즈 유도 후에 약 85 kDa의 융합 단백질 밴드가 뚜렷하게 관찰되었다. 이 85 kDa 융합단백질은 pBAD/thio-Topo/PIG23 벡터에 삽입되어 있는 약 15 kDa 크기의 HT-thioredoxin 단백질과 약 70 kDa의 PIG23 단백질을 함유하고 있는 것이다.
도 5d는 pBAD/thio-Topo/PIG27 벡터로 형질감염된 대장균 Top10 균주의 단백질의 발현 양상을 SDS-PAGE로 확인한 결과로서, 엘 아라비노즈 유도 후에 약 27 kDa의 융합 단백질 밴드가 뚜렷하게 관찰되었다. 이 27 kDa 융합단백질은 pBAD/thio-Topo/PIG27 벡터에 삽입되어 있는 약 15 kDa 크기의 HT-thioredoxin 단백질과 약 12 kDa의 PIG27 단백질을 함유하고 있는 것이다.
도 5e는 pBAD/thio-Topo/PIG28 벡터로 형질감염된 대장균 Top10 균주의 단백질의 발현 양상을 SDS-PAGE로 확인한 결과로서, 엘 아라비노즈 유도 후에 약 51 kDa의 융합 단백질 밴드가 뚜렷하게 관찰되었다. 이 51 kDa 융합단백질은 pBAD/thio-Topo/PIG28 벡터에 삽입되어 있는 약 15 kDa 크기의 HT-thioredoxin 단백질과 약 36 kDa의 PIG28 단백질을 함유하고 있는 것이다.
도 5f는 PIG30 단백질의 SDS-PAGE 분석 결과를 보여주는 사진이다. 도5f는 제1열은 IPTG에 의한 유도 전의 단백질 시료이고, 제2열은 IPTG에 의해 PIG30 유전자의 발현을 유도한 후의 단백질 시료이다. 도 5f에서 보듯이, 발현된 PIG30 단백 질의 크기는 약 82 kDa으로서 이는 염기서열로부터 유추된 것과 일치한다.
도 5g는 PIG31 단백질의 SDS-PAGE 분석 결과를 보여주는 사진이다. 도 5g에서 제1열은 IPTG에 의한 유도 전의 단백질 시료이고, 제2열은 IPTG에 의해 PIG31 유전자의 발현을 유도한 후의 단백질 시료이다. 도 5g에서 보듯이, 발현된 PIG31 단백질의 크기는 약 83 kDa으로서 이는 염기서열로부터 유추된 것과 일치한다.
도 5h는 pBAD/thio-Topo/PIG38 벡터로 형질감염된 대장균 Top10 균주의 단백질의 발현 양상을 SDS-PAGE로 확인한 결과로서, 엘 아라비노즈 유도 후에 약 88 kDa의 융합 단백질 밴드가 뚜렷하게 관찰되었다. 이 88 kDa 융합단백질은 pBAD/thio-Topo/PIG38 벡터에 삽입되어 있는 약 15 kDa 크기의 HT-thioredoxin 단백질과 약 73 kDa의 PIG38 단백질을 함유하고 있는 것이다.
도 5i는 pBAD/thio-Topo/PIG40 벡터로 형질감염된 대장균 Top10 균주의 단백질의 발현 양상을 SDS-PAGE로 확인한 결과로서, 엘 아라비노즈 유도 후에 약 72 kDa의 융합 단백질 밴드가 뚜렷하게 관찰되었다. 이 72 kDa 융합단백질은 pBAD/thio-Topo/PIG40 벡터에 삽입되어 있는 약 15 kDa 크기의 HT-thioredoxin 단백질과 약 57 kDa의 PIG40 단백질을 함유하고 있는 것이다.
도 5j는 pBAD/thio-Topo/PIG43 벡터로 형질감염된 대장균 Top10 균주의 단백질의 발현 양상을 SDS-PAGE로 확인한 결과로서, 엘 아라비노즈 유도 후에 약 41 kDa의 융합 단백질 밴드가 뚜렷하게 관찰되었다. 이 41 kDa 융합단백질은 pBAD/thio-Topo/PIG43 벡터에 삽입되어 있는 약 15 kDa 크기의 HT-thioredoxin 단백질과 약 26 kDa의 PIG43 단백질을 함유하고 있는 것이다.
도 5k는 pBAD/thio-Topo/PIG44 벡터로 형질감염된 대장균 Top10 균주의 단백질의 발현 양상을 SDS-PAGE로 확인한 결과로서, 엘 아라비노즈 유도 후에 약 70 kDa의 융합 단백질 밴드가 뚜렷하게 관찰되었다. 이 70 kDa 융합단백질은 pBAD/thio-Topo/PIG44 벡터에 삽입되어 있는 약 15 kDa 크기의 HT-thioredoxin 단백질과 약 55 kDa의 PIG44 단백질을 함유하고 있는 것이다.
도 5(l)은 PIG46 단백질의 SDS-PAGE 분석 결과를 보여주는 사진이다. 도 5(l)에서 제1열은 IPTG에 의한 유도 전의 단백질 시료이고, 제2열은 IPTG에 의해 PIG46 유전자의 발현을 유도한 후의 단백질 시료이다. 도5에서 보듯이, 발현된 PIG46 단백질의 크기는 약 48 kDa으로서 이는 염기서열로부터 유추된 것과 일치한다.
도 5m은 PIG47 단백질의 SDS-PAGE 분석 결과를 보여주는 사진이다. 도5m에서 제1열은 IPTG에 의한 유도 전의 단백질 시료이고, 제2열은 IPTG에 의해 PIG47 유전자의 발현을 유도한 후의 단백질 시료이다. 도5에서 보듯이, 발현된 PIG47 단백질의 크기는 약 29 kDa으로서 이는 염기서열로부터 유추된 것과 일치한다.
도 5n은 PIG48 단백질의 SDS-PAGE 분석 결과를 보여주는 사진이다. 도5n에서 제1열은 IPTG에 의한 유도 전의 단백질 시료이고, 제2열은 IPTG에 의해 PIG48 유전자의 발현을 유도한 후의 단백질 시료이다. 도5에서 보듯이, 발현된 PIG48 단백질의 크기는 약 60 kDa으로서 이는 염기서열로부터 유추된 것과 일치한다.
도 5(o)는 PIG50 단백질의 SDS-PAGE 분석 결과를 보여주는 사진이다. 도5에서 제1열은 IPTG에 의한 유도 전의 단백질 시료이고, 제2열은 IPTG에 의해 PIG50 유전자의 발현을 유도한 후의 단백질 시료이다. 도5에서 보듯이, 발현된 PIG50 단백질의 크기는 약 22 kDa으로서 이는 염기서열로부터 유추된 것과 일치한다.
도 5p는 pBAD/thio-Topo/PIG54 벡터로 형질감염된 대장균 Top10 균주의 단백질의 발현 양상을 SDS-PAGE로 확인한 결과로서, 엘 아라비노즈 유도 후에 약 84 kDa의 융합 단백질 밴드가 뚜렷하게 관찰되었다. 이 84 kDa 융합단백질은 pBAD/thio-Topo/PIG54 벡터에 삽입되어 있는 약 15 kDa 크기의 HT-thioredoxin 단백질과 약 69 kDa의 PIG54 단백질을 함유하고 있는 것이다.
도 5q는 PIG55 단백질의 SDS-PAGE 분석 결과를 보여주는 사진이다. 도5q에서 제1열은 IPTG에 의한 유도 전의 단백질 시료이고, 제2열은 IPTG에 의해 PIG55 유전자의 발현을 유도한 후의 단백질 시료이다. 도5q에서 보듯이, 발현된 PIG55 단백질의 크기는 약 18 kDa으로서 이는 염기서열로부터 유추된 것과 일치한다.
도 5r은 pBAD/thio-Topo/GIG9 벡터로 형질감염된 대장균 Top10 균주의 단백질의 발현 양상을 SDS-PAGE로 확인한 결과로서, 엘 아라비노즈 유도 후에 약 53 kDa의 융합 단백질 밴드가 뚜렷하게 관찰되었다. 이 53 kDa 융합단백질은 pBAD/thio-Topo/GIG9 벡터에 삽입되어 있는 약 15 kDa 크기의 HT-thioredoxin 단백질과 약 38 kDa의 GIG9 단백질을 함유하고 있는 것이다.
도 5s는 pBAD/thio-Topo/HLC9벡터로 형질감염된 대장균 Top10 균주의 단백질의 발현 양상을 SDS-PAGE로 확인한 결과로서, 엘 아라비노즈 유도 후에 약 66 kDa의 융합 단백질 밴드가 뚜렷하게 관찰되었다. 이 66 kDa 융합단백질은 pBAD/thio-Topo/HLC9 벡터에 삽입되어 있는 약 15 kDa 크기의 HT-thioredoxin 단백질과 약 51 kDa의 HLC9 단백질을 함유하고 있는 것이다.
도 5t는 pBAD/thio-Topo/GIG18 벡터로 형질감염된 대장균 Top10 균주의 단백질의 발현 양상을 SDS-PAGE로 확인한 결과로서, 엘 아라비노즈 유도 후에 약 61 kDa의 융합 단백질 밴드가 뚜렷하게 관찰되었다. 이 61 kDa 융합단백질은 pBAD/thio-Topo/GIG18 벡터에 삽입되어 있는 약 15 kDa 크기의 HT-thioredoxin 단백질과 약 46 kDa의 GIG18 단백질을 함유하고 있는 것이다.
도 5u는 pBAD/thio-Topo/MIG22벡터로 형질감염된 대장균 Top10 균주의 단백질의 발현 양상을 SDS-PAGE로 확인한 결과로서, 엘 아라비노즈 유도 후에 약 42 kDa의 융합 단백질 밴드가 뚜렷하게 관찰되었다. 이 42 kDa 융합단백질은 pBAD/thio-Topo/MIG22 벡터에 삽입되어 있는 약 15 kDa 크기의 HT-thioredoxin 단백질과 약 27 kDa의 MIG22 단백질을 함유하고 있는 것이다.
본 발명의 원암 유전자는 유방암, 백혈병, 자궁암, 폐암 및 악성림프종등을 비롯한 암의 진단 등에 효과적으로 이용될 수 있다.
<110> KIM, HYUN-KEE
<120> HUMAN PROTOONCOGENE AND PROTEIN ENCODED BY SAME
<160> 84
<170> KopatentIn 1.71
<210> 1
<211> 1258
<212> DNA
<213> Homo sapiens
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gcctccaagg tttgtcttga agcatagctc cagctggagg gtacctttta agctgttcaa 60
ggtcaagatg aatacaaact caaaggaggt tttatccctg ggtgttcaag ttcccgaggc 120
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gtgctaccaa gagacccctg gaccaaggga ggctcttact cgactccagg aactttgcta 300
ccagtggttg aggccacatg tgagcacaaa ggagcagatt ttggatctgc tggtgctgga 360
gcagtttcta tccattctgc ccaaggagct ccagggctgg gtgagggaac actgtccaga 420
gagtggagaa gaggctgtga ttttgctgga ggatctggag agagagctcg atgaaccaca 480
acatgagatg gtggcccaca gacacagaca agaagtcctc tgtaaagaga tggtgcctct 540
agcagagcag acaccactga cccttcagtc ccagcctaag gagccacagc tcacatgtga 600
ctctgctcag aagtgccatt ctattggaga gacagatgaa gtaaccaaga ctgaggacag 660
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tgagcagacc tgggaggtat cacagcagga tccctcacat ggagaagttg gtgaacataa 780
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<212> PRT
<213> Homo sapiens
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Leu Gln Trp Gln Glu Ser Arg Leu Lys Arg Ser Asn Pro Leu Ala Arg
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<212> DNA
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<212> DNA
<213> Homo sapiens
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gagcctcaca gcagtgagac tggggccact acatttgctc catcctcctg ggattggctg 1020
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aggttttctt ttaagaatca atcatgtcag tctgcttaga aataacagaa gaaaatagaa 1560
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ctttaaaagc attttttaac ctcctaagta tcaagtatag aaaatcttca tggaattcac 1680
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actggcgtga acccaggagg cggaccttgt agtgagccga gatcgcgcca ctgtgctcca 2040
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aaa 2403
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<213> Homo sapiens
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<223> anchored primer for PIG18
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<211> 13
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H-AP11 primer for PIG18
<400> 8
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<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 9
gcggacagtg cggaactaaa gcaaatggtt atgagcctta gagtttctga actccaagta 60
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ctgcatttgc taaaggctgg ctgtagtcct gctgtgcaaa tgaaaattaa ggaactctat 180
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tcaagtccta tgccagcaac tttgtctcca tctaccattc cacaactcac ttacgatggt 300
caccctgcat catcgccatt actccctgtt tctcttctgg gacctaaaca tgaactggaa 360
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ccattttatg atttactgga tgaactgata aaacccacca gtctagcatc agacaacagt 480
cagcgctttc gagaaacctg ttttgcattt gccttgacac cacaacaagt gcagcaaatc 540
agtagttcca tggatatttc tgggaccaaa tgtgacttca cagtacaggt ccagttaagg 600
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gaaccaaagc gacccagccg accaattaat atcacctcac ttgtccgact gtccacaaca 780
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115 120 125
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Ala Phe Ala Leu Thr Pro Gln Gln Val Gln Gln Ile Ser Ser Ser Met
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Asp Ile Ser Gly Thr Lys Cys Asp Phe Thr Val Gln Val Gln Leu Arg
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Phe Cys Leu Ser Glu Thr Ser Cys Pro Gln Glu Asp His Phe Pro Pro
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Gln His Tyr Asn Thr Ser Leu Leu Ala Ala Ala Ala Ala Ala Val Ser
545 550 555 560
Asp Asp Gln Asp Leu Leu His Ser Ser Arg Phe Phe Pro Tyr Thr Ser
565 570 575
Ser Gln Met Phe Leu Asp Gln Leu Ser Ala Gly Gly Ser Thr Ser Leu
580 585 590
Pro Thr Thr Asn Gly Ser Ser Ser Gly Ser Asn Ser Ser Leu Val Ser
595 600 605
Ser Asn Ser Leu Arg Glu Ser His Ser His Thr Val Thr Asn Arg Ser
610 615 620
Ser Thr Asp Thr Ala Ser Ile Phe Gly Ile Ile Pro Asp Ile Ile Ser
625 630 635 640
Leu Asp
<210> 11
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anchored primer for PIG23
<400> 11
aagctttttt tttttc 16
<210> 12
<211> 13
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H-AP33 primer for PIG23
<400> 12
aagcttgctg ctc 13
<210> 13
<211> 446
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 13
tggtcacagt ggaaggatca tgggagaaac agaagggaag aaagatgagg ctgattataa 60
gcgactgcag accttccctc tggtcaggca ctcggacatg ccagaggaga tgcgcgtgga 120
gaccatggag ctatgtgtca cagcctgtga gaaattctcc aacaacaacg agagcgccgc 180
caagatgatc aaagagacaa tggacaagaa gttcggctcc tcctggcacg tggtgatcgg 240
cgagggcttt gggtttgaga tcacccacga ggtgaagaac ctcctctacc tgtacttcgg 300
gggcaccctg gctgtgtgcg tctggaagtg ctcctgacac tctgccccta tttaaaagcc 360
tgttgattca agaactttct aaagtatttc cggaagacat ggctaagtat cgaagcatcc 420
ggggggagga tcacccgcct tcttaa 446
<210> 14
<211> 105
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 14
Met Gly Glu Thr Glu Gly Lys Lys Asp Glu Ala Asp Tyr Lys Arg Leu
1 5 10 15
Gln Thr Phe Pro Leu Val Arg His Ser Asp Met Pro Glu Glu Met Arg
20 25 30
Val Glu Thr Met Glu Leu Cys Val Thr Ala Cys Glu Lys Phe Ser Asn
35 40 45
Asn Asn Glu Ser Ala Ala Lys Met Ile Lys Glu Thr Met Asp Lys Lys
50 55 60
Phe Gly Ser Ser Trp His Val Val Ile Gly Glu Gly Phe Gly Phe Glu
65 70 75 80
Ile Thr His Glu Val Lys Asn Leu Leu Tyr Leu Tyr Phe Gly Gly Thr
85 90 95
Leu Ala Val Cys Val Trp Lys Cys Ser
100 105
<210> 15
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anchored primer for PIG27
<400> 15
aagctttttt ttttta 16
<210> 16
<211> 13
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H-AP12 primer for PIG27
<400> 16
aagcttgagt gct 13
<210> 17
<211> 1024
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 17
gggtggctga actctgatct tgacctagag tcatggccat ggcaaccaaa ggaggtactg 60
tcaaagctgc ttcaggattc aatgccatgg aagatgccca gaccctgagg aaggccatga 120
aagggctcgg caccgatgaa gacgccatta ttagcgtcct tgcctaccgc aacaccgccc 180
agcgccagga gatcaggaca gcctacaaga gcaccatcgg cagggacttg atagacgacc 240
tgaagtcaga actgagtggc aacttcgagc aggtgattgt ggggatgatg acgcccacgg 300
tgctgtatga cgtgcaagag ctgcgaaggg ccatgaaggg agccggcact gatgagggct 360
gcctaattga gatcctggcc tcccggaccc ctgaggagat ccggcgcata agccaaacct 420
accagcagca atatggacgg agccttgaag atgacattcg ctctgacaca tcgttcatgt 480
tccagcgagt gctggtgtct ctgtcagctg gtgggaggga tgaaggaaat tatctggacg 540
atgctctcgt gagacaggat gcccaggacc tgtatgaggc tggagagaag aaatggggga 600
cagatgaggt gaaatttcta actgttctct gttcccggaa ccgaaatcac ctgttgcatg 660
tgtttgatga atacaaaagg atatcacaga aggatattga acagagtatt aaatctgaaa 720
catctggtag ctttgaagat gctctgctgg ctatagtaaa gtgcatgagg aacaaatctg 780
catattttgc tgaaaagctc tataaatcga tgaagggctt gggcaccgat gataacaccc 840
tcatcagagt gatggtttct cgagcagaaa ttgacatgtt ggatatccgg gcacacttca 900
agagactcta tggaaagtct ctgtactcgt tcatcaaggg tgacacatct ggagactaca 960
ggaaagtact gcttgttctc tgtggaggag atgattaaaa taaaaatccc agaaggacag 1020
gagg 1024
<210> 18
<211> 321
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 18
Met Ala Met Ala Thr Lys Gly Gly Thr Val Lys Ala Ala Ser Gly Phe
1 5 10 15
Asn Ala Met Glu Asp Ala Gln Thr Leu Arg Lys Ala Met Lys Gly Leu
20 25 30
Gly Thr Asp Glu Asp Ala Ile Ile Ser Val Leu Ala Tyr Arg Asn Thr
35 40 45
Ala Gln Arg Gln Glu Ile Arg Thr Ala Tyr Lys Ser Thr Ile Gly Arg
50 55 60
Asp Leu Ile Asp Asp Leu Lys Ser Glu Leu Ser Gly Asn Phe Glu Gln
65 70 75 80
Val Ile Val Gly Met Met Thr Pro Thr Val Leu Tyr Asp Val Gln Glu
85 90 95
Leu Arg Arg Ala Met Lys Gly Ala Gly Thr Asp Glu Gly Cys Leu Ile
100 105 110
Glu Ile Leu Ala Ser Arg Thr Pro Glu Glu Ile Arg Arg Ile Ser Gln
115 120 125
Thr Tyr Gln Gln Gln Tyr Gly Arg Ser Leu Glu Asp Asp Ile Arg Ser
130 135 140
Asp Thr Ser Phe Met Phe Gln Arg Val Leu Val Ser Leu Ser Ala Gly
145 150 155 160
Gly Arg Asp Glu Gly Asn Tyr Leu Asp Asp Ala Leu Val Arg Gln Asp
165 170 175
Ala Gln Asp Leu Tyr Glu Ala Gly Glu Lys Lys Trp Gly Thr Asp Glu
180 185 190
Val Lys Phe Leu Thr Val Leu Cys Ser Arg Asn Arg Asn His Leu Leu
195 200 205
His Val Phe Asp Glu Tyr Lys Arg Ile Ser Gln Lys Asp Ile Glu Gln
210 215 220
Ser Ile Lys Ser Glu Thr Ser Gly Ser Phe Glu Asp Ala Leu Leu Ala
225 230 235 240
Ile Val Lys Cys Met Arg Asn Lys Ser Ala Tyr Phe Ala Glu Lys Leu
245 250 255
Tyr Lys Ser Met Lys Gly Leu Gly Thr Asp Asp Asn Thr Leu Ile Arg
260 265 270
Val Met Val Ser Arg Ala Glu Ile Asp Met Leu Asp Ile Arg Ala His
275 280 285
Phe Lys Arg Leu Tyr Gly Lys Ser Leu Tyr Ser Phe Ile Lys Gly Asp
290 295 300
Thr Ser Gly Asp Tyr Arg Lys Val Leu Leu Val Leu Cys Gly Gly Asp
305 310 315 320
Asp
<210> 19
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anchored primer for PIG28
<400> 19
aagctttttt tttttc 16
<210> 20
<211> 13
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H-AP12 primer for PIG28
<400> 20
aagcttgagt gct 13
<210> 21
<211> 2152
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 21
ccaggatgtc ggaggagatc atcacgccgg tgtactgcac tggggtgtca gcccaagtgc 60
agaagcagcg ggccagggag ctgggcctgg gccgccatga gaatgccatc aagtacctgg 120
gccaggatta tgagcagctg cgggtgcgat gcctgcagag tgggaccctc ttccgtgatg 180
aggccttccc cccggtaccc cagagcctgg gttacaagga cctgggtccc aattcctcca 240
agacctatgg catcaagtgg aagcgtccca cggaactgct gtcaaacccc cagttcattg 300
tggatggagc tacccgcaca gacatctgcc agggagcact gggggactgc tggctcttgg 360
cggccattgc ctccctcact ctcaacgaca ccctcctgca ccgagtggtt ccgcacggcc 420
agagcttcca gaatggctat gccggcatct tccatttcca gctgtggcaa tttggggagt 480
gggtggacgt ggtcgtggat gacctgctgc ccatcaagga cgggaagcta gtgttcgtgc 540
actctgccga aggcaacgag ttctggagcg ccctgcttga gaaggcctat gccaaggtaa 600
atggcagcta cgaggccctg tcagggggca gcacctcaga gggctttgag gacttcacag 660
gcggggttac cgagtggtac gagttgcgca aggctcccag tgacctctac cagatcatcc 720
tcaaggcgct ggagcggggc tccctgctgg gctgctccat agacatctcc agcgttctag 780
acatggaggc catcactttc aagaagttgg tgaagggcca tgcctactct gtgaccgggg 840
ccaagcaggt gaactaccga ggccaggtgg tgagcctgat ccggatgcgg aacccctggg 900
gcgaggtgga gtggacggga gcctggagcg acagctcctc agagtggaac aacgtggacc 960
catatgaacg ggaccagctc cgggtcaaga tggaggacgg ggagttctgg atgtcattcc 1020
gagacttcat gcgggagttc acccgcctgg agatctgcaa cctcacaccc gacgccctca 1080
agagccggac catccgcaaa tggaacacca cactctacga aggcacctgg cggcggggga 1140
gcaccgcggg gggctgccga aactacccag ccaccttctg ggtgaaccct cagttcaaga 1200
tccggctgga tgagacggat gacccggacg actacgggga ccgcgagtca ggctgcagct 1260
tcgtgctcgc ccttatgcag aagcaccgtc gccgcgagcg ccgcttcggc cgcgacatgg 1320
agactattgg cttcgcggtc tacgaggtcc ctccggagct ggtgggccag ccggccgtac 1380
acttgaagcg tgacttcttc ctggccaatg cgtctcgggc gcgctcagag cagttcatca 1440
acctgcgaga ggtcagcacc cgcttccgcc tgccacccgg ggagtatgtg gtggtgccct 1500
ccaccttcga gcccaacaag gagggcgact tcgtgctgcg cttcttctca gagaagagtg 1560
ctgggactgt ggagctggat gaccagatcc aggccaatct ccccgatgag caagtgctct 1620
cagaagagga gattgacgag aacttcaagg ccctcttcag gcagctggca ggggaggaca 1680
tggagatcag cgtgaaggag ttgcggacaa tcctcaatag gatcatcagc aaacacaaag 1740
acctgcggac caagggcttc agcctagagt cgtgccgcag catggtgaac ctcatggatc 1800
gtgatggcaa tgggaagctg ggcctggtgg agttcaacat cctgtggaac cgcatccgga 1860
attacctgtc catcttccgg aagtttgacc tggacaagtc gggcagcatg agtgcctacg 1920
agatgcggat ggccattgag tcggcaggct tcaagctcaa caagaagctg tacgagctca 1980
tcatcacccg ctactcggag cccgacctgg cggtcgactt tgacaatttc gtttgctgcc 2040
tggtgcggct agagaccatg ttccgatttt tcaaaactct ggacacagat ctggatggag 2100
ttgtgacctt tgacttgttt aagtggttgc agctgaccat gtttgcatga gg 2152
<210> 22
<211> 714
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 22
Met Ser Glu Glu Ile Ile Thr Pro Val Tyr Cys Thr Gly Val Ser Ala
1 5 10 15
Gln Val Gln Lys Gln Arg Ala Arg Glu Leu Gly Leu Gly Arg His Glu
20 25 30
Asn Ala Ile Lys Tyr Leu Gly Gln Asp Tyr Glu Gln Leu Arg Val Arg
35 40 45
Cys Leu Gln Ser Gly Thr Leu Phe Arg Asp Glu Ala Phe Pro Pro Val
50 55 60
Pro Gln Ser Leu Gly Tyr Lys Asp Leu Gly Pro Asn Ser Ser Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Gly Ile Lys Trp Lys Arg Pro Thr Glu Leu Leu Ser Asn Pro Gln
85 90 95
Phe Ile Val Asp Gly Ala Thr Arg Thr Asp Ile Cys Gln Gly Ala Leu
100 105 110
Gly Asp Cys Trp Leu Leu Ala Ala Ile Ala Ser Leu Thr Leu Asn Asp
115 120 125
Thr Leu Leu His Arg Val Val Pro His Gly Gln Ser Phe Gln Asn Gly
130 135 140
Tyr Ala Gly Ile Phe His Phe Gln Leu Trp Gln Phe Gly Glu Trp Val
145 150 155 160
Asp Val Val Val Asp Asp Leu Leu Pro Ile Lys Asp Gly Lys Leu Val
165 170 175
Phe Val His Ser Ala Glu Gly Asn Glu Phe Trp Ser Ala Leu Leu Glu
180 185 190
Lys Ala Tyr Ala Lys Val Asn Gly Ser Tyr Glu Ala Leu Ser Gly Gly
195 200 205
Ser Thr Ser Glu Gly Phe Glu Asp Phe Thr Gly Gly Val Thr Glu Trp
210 215 220
Tyr Glu Leu Arg Lys Ala Pro Ser Asp Leu Tyr Gln Ile Ile Leu Lys
225 230 235 240
Ala Leu Glu Arg Gly Ser Leu Leu Gly Cys Ser Ile Asp Ile Ser Ser
245 250 255
Val Leu Asp Met Glu Ala Ile Thr Phe Lys Lys Leu Val Lys Gly His
260 265 270
Ala Tyr Ser Val Thr Gly Ala Lys Gln Val Asn Tyr Arg Gly Gln Val
275 280 285
Val Ser Leu Ile Arg Met Arg Asn Pro Trp Gly Glu Val Glu Trp Thr
290 295 300
Gly Ala Trp Ser Asp Ser Ser Ser Glu Trp Asn Asn Val Asp Pro Tyr
305 310 315 320
Glu Arg Asp Gln Leu Arg Val Lys Met Glu Asp Gly Glu Phe Trp Met
325 330 335
Ser Phe Arg Asp Phe Met Arg Glu Phe Thr Arg Leu Glu Ile Cys Asn
340 345 350
Leu Thr Pro Asp Ala Leu Lys Ser Arg Thr Ile Arg Lys Trp Asn Thr
355 360 365
Thr Leu Tyr Glu Gly Thr Trp Arg Arg Gly Ser Thr Ala Gly Gly Cys
370 375 380
Arg Asn Tyr Pro Ala Thr Phe Trp Val Asn Pro Gln Phe Lys Ile Arg
385 390 395 400
Leu Asp Glu Thr Asp Asp Pro Asp Asp Tyr Gly Asp Arg Glu Ser Gly
405 410 415
Cys Ser Phe Val Leu Ala Leu Met Gln Lys His Arg Arg Arg Glu Arg
420 425 430
Arg Phe Gly Arg Asp Met Glu Thr Ile Gly Phe Ala Val Tyr Glu Val
435 440 445
Pro Pro Glu Leu Val Gly Gln Pro Ala Val His Leu Lys Arg Asp Phe
450 455 460
Phe Leu Ala Asn Ala Ser Arg Ala Arg Ser Glu Gln Phe Ile Asn Leu
465 470 475 480
Arg Glu Val Ser Thr Arg Phe Arg Leu Pro Pro Gly Glu Tyr Val Val
485 490 495
Val Pro Ser Thr Phe Glu Pro Asn Lys Glu Gly Asp Phe Val Leu Arg
500 505 510
Phe Phe Ser Glu Lys Ser Ala Gly Thr Val Glu Leu Asp Asp Gln Ile
515 520 525
Gln Ala Asn Leu Pro Asp Glu Gln Val Leu Ser Glu Glu Glu Ile Asp
530 535 540
Glu Asn Phe Lys Ala Leu Phe Arg Gln Leu Ala Gly Glu Asp Met Glu
545 550 555 560
Ile Ser Val Lys Glu Leu Arg Thr Ile Leu Asn Arg Ile Ile Ser Lys
565 570 575
His Lys Asp Leu Arg Thr Lys Gly Phe Ser Leu Glu Ser Cys Arg Ser
580 585 590
Met Val Asn Leu Met Asp Arg Asp Gly Asn Gly Lys Leu Gly Leu Val
595 600 605
Glu Phe Asn Ile Leu Trp Asn Arg Ile Arg Asn Tyr Leu Ser Ile Phe
610 615 620
Arg Lys Phe Asp Leu Asp Lys Ser Gly Ser Met Ser Ala Tyr Glu Met
625 630 635 640
Arg Met Ala Ile Glu Ser Ala Gly Phe Lys Leu Asn Lys Lys Leu Tyr
645 650 655
Glu Leu Ile Ile Thr Arg Tyr Ser Glu Pro Asp Leu Ala Val Asp Phe
660 665 670
Asp Asn Phe Val Cys Cys Leu Val Arg Leu Glu Thr Met Phe Arg Phe
675 680 685
Phe Lys Thr Leu Asp Thr Asp Leu Asp Gly Val Val Thr Phe Asp Leu
690 695 700
Phe Lys Trp Leu Gln Leu Thr Met Phe Ala
705 710
<210> 23
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anchored primer for PIG30
<400> 23
aagctttttt tttttc 16
<210> 24
<211> 13
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H-AP33 primer for PIG30
<400> 24
aagcttgctg ctc 13
<210> 25
<211> 2246
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 25
cctcaggttt gccaatagga ttatcctgct gccatcatgt cttggtttgt tgatcttgct 60
ggaaaggcag aagatctttt aaaccgagtt gatcaagggg ctgcaacagc tctcagtagg 120
aaagacaatg ccagcaacat atatagcaaa aatactgact atactgaact tcaccagcaa 180
aatacagatt tgatatatca gactggacct aaatctacgt atatttcatc agcagctgat 240
aacattcgaa atcaaaaagc caccatctta gctggcactg caaatgtgaa agtaggatct 300
cggacaccag tagaggcctc tcatcctgtt gaaaatgcat ctgttcctag gccttcatcc 360
cattttgtgc gaagaaaaaa gtcagaacct gatgatgagc tgctgtttga ttttcttaat 420
agttcacaga aggagcctac cgggagggtg gaaatcagaa aggaaaaagg caagacacct 480
gtctttcaga gctctcagac atcaagtgtc agttctgtga accccagtgt aaccaccatc 540
aaaaccattg aagaaaattc ttttgggagc caaacccacg aagctgccag taactcagat 600
tctagccatg aaggtcaaga ggaatcttca aaggaaaatg tgtcatcaaa tgctgcctgc 660
cctgaccaca ccccaacacc taatgatgat ggcaaatcac atgaactgtc taaccttcga 720
ctggagaatc agctgctgag gaatgaagtt cagtctttaa atcaagaaat ggcctcgtta 780
ctccaaagat ccaaagagac tcaagaagaa ttaaacaaag caagagcaag agttgaaaag 840
tggaatgctg accattcaaa gagtgatcga atgactcgag gactccgagc ccaagtagat 900
gacctgactg aagctgtggc tgcaaaggat tcccagctgg ctgtactgaa agtgagactc 960
caggaagctg accagctact gagtactcgc acagaagcat tagaagcctt acagagtgaa 1020
aaatcacgaa taatgcagga tcaaagtgaa ggtaacagcc tgcagaatca agctctgcag 1080
actcttcagg agagactgca tgaagcggat gccactctga agagagagca ggagagctat 1140
aaacagatgc agagcgagtt tgctgcacgc cttaataaag tggaaatgga acgtcagaat 1200
ttagcagaag caattacact ggccgaaaga aaatactcag atgagaagaa gagggttgat 1260
gaactgcagc agcaagtcaa gctgtataag ttgaacttgg agtcctctaa gcaggaatta 1320
attgactaca agcaaaaagc tactagaata ctgcaatcta aggaaaaatt gattaacagc 1380
ttgaaagaag gctctggttt tgaaggccta gatagcagca ctgccagtag catggagctg 1440
gaagaacttc ggcatgagaa agagatgcag agggaggaaa tacagaagct gatgggccag 1500
atacatcagc tcagatccga attacaggat atggaggcac agcaagttaa tgaagcagaa 1560
tcagcaagag aacagttaca ggatctgcat gaccaaatag ctgggcagaa agcatccaaa 1620
caagaactag agacagaact ggagcgactg aagcaggagt tccactatat agaagaagat 1680
ctttatcgaa caaagaacac attgcaaagc agaattaaag atcgagacga agaaattcaa 1740
aaactcagga atcagcttac caataaaact ttaagcaata gcagtcagtc tgagttagaa 1800
aatcgactcc atcagctaac agagactctc atccagaaac agaccatgct ggagagtctc 1860
agcacagaaa agaactccct ggtctttcaa ctggagcgcc tcgaacagca gatgaactcc 1920
gcctctggaa gtagtagtaa tgggtcttcg attaatatgt ctggaattga caatggtgaa 1980
ggcactcgtc tgcgaaatgt tcctgttctt tttaatgaca cagaaactaa tctggcagga 2040
atgtacggaa aagttcgcaa agctgctagt tcaattgatc agtttagtat tcgcctggga 2100
atttttctcc gaagataccc catagcgcga gtttttgtaa ttatatatat ggctttgctt 2160
cacctctggg tcatgattgt tctgttgact tacacaccag aaatgcacca cgaccaacca 2220
tatggcaaat gaaccaagcc cagttg 2246
<210> 26
<211> 731
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 26
Met Ser Trp Phe Val Asp Leu Ala Gly Lys Ala Glu Asp Leu Leu Asn
1 5 10 15
Arg Val Asp Gln Gly Ala Ala Thr Ala Leu Ser Arg Lys Asp Asn Ala
20 25 30
Ser Asn Ile Tyr Ser Lys Asn Thr Asp Tyr Thr Glu Leu His Gln Gln
35 40 45
Asn Thr Asp Leu Ile Tyr Gln Thr Gly Pro Lys Ser Thr Tyr Ile Ser
50 55 60
Ser Ala Ala Asp Asn Ile Arg Asn Gln Lys Ala Thr Ile Leu Ala Gly
65 70 75 80
Thr Ala Asn Val Lys Val Gly Ser Arg Thr Pro Val Glu Ala Ser His
85 90 95
Pro Val Glu Asn Ala Ser Val Pro Arg Pro Ser Ser His Phe Val Arg
100 105 110
Arg Lys Lys Ser Glu Pro Asp Asp Glu Leu Leu Phe Asp Phe Leu Asn
115 120 125
Ser Ser Gln Lys Glu Pro Thr Gly Arg Val Glu Ile Arg Lys Glu Lys
130 135 140
Gly Lys Thr Pro Val Phe Gln Ser Ser Gln Thr Ser Ser Val Ser Ser
145 150 155 160
Val Asn Pro Ser Val Thr Thr Ile Lys Thr Ile Glu Glu Asn Ser Phe
165 170 175
Gly Ser Gln Thr His Glu Ala Ala Ser Asn Ser Asp Ser Ser His Glu
180 185 190
Gly Gln Glu Glu Ser Ser Lys Glu Asn Val Ser Ser Asn Ala Ala Cys
195 200 205
Pro Asp His Thr Pro Thr Pro Asn Asp Asp Gly Lys Ser His Glu Leu
210 215 220
Ser Asn Leu Arg Leu Glu Asn Gln Leu Leu Arg Asn Glu Val Gln Ser
225 230 235 240
Leu Asn Gln Glu Met Ala Ser Leu Leu Gln Arg Ser Lys Glu Thr Gln
245 250 255
Glu Glu Leu Asn Lys Ala Arg Ala Arg Val Glu Lys Trp Asn Ala Asp
260 265 270
His Ser Lys Ser Asp Arg Met Thr Arg Gly Leu Arg Ala Gln Val Asp
275 280 285
Asp Leu Thr Glu Ala Val Ala Ala Lys Asp Ser Gln Leu Ala Val Leu
290 295 300
Lys Val Arg Leu Gln Glu Ala Asp Gln Leu Leu Ser Thr Arg Thr Glu
305 310 315 320
Ala Leu Glu Ala Leu Gln Ser Glu Lys Ser Arg Ile Met Gln Asp Gln
325 330 335
Ser Glu Gly Asn Ser Leu Gln Asn Gln Ala Leu Gln Thr Leu Gln Glu
340 345 350
Arg Leu His Glu Ala Asp Ala Thr Leu Lys Arg Glu Gln Glu Ser Tyr
355 360 365
Lys Gln Met Gln Ser Glu Phe Ala Ala Arg Leu Asn Lys Val Glu Met
370 375 380
Glu Arg Gln Asn Leu Ala Glu Ala Ile Thr Leu Ala Glu Arg Lys Tyr
385 390 395 400
Ser Asp Glu Lys Lys Arg Val Asp Glu Leu Gln Gln Gln Val Lys Leu
405 410 415
Tyr Lys Leu Asn Leu Glu Ser Ser Lys Gln Glu Leu Ile Asp Tyr Lys
420 425 430
Gln Lys Ala Thr Arg Ile Leu Gln Ser Lys Glu Lys Leu Ile Asn Ser
435 440 445
Leu Lys Glu Gly Ser Gly Phe Glu Gly Leu Asp Ser Ser Thr Ala Ser
450 455 460
Ser Met Glu Leu Glu Glu Leu Arg His Glu Lys Glu Met Gln Arg Glu
465 470 475 480
Glu Ile Gln Lys Leu Met Gly Gln Ile His Gln Leu Arg Ser Glu Leu
485 490 495
Gln Asp Met Glu Ala Gln Gln Val Asn Glu Ala Glu Ser Ala Arg Glu
500 505 510
Gln Leu Gln Asp Leu His Asp Gln Ile Ala Gly Gln Lys Ala Ser Lys
515 520 525
Gln Glu Leu Glu Thr Glu Leu Glu Arg Leu Lys Gln Glu Phe His Tyr
530 535 540
Ile Glu Glu Asp Leu Tyr Arg Thr Lys Asn Thr Leu Gln Ser Arg Ile
545 550 555 560
Lys Asp Arg Asp Glu Glu Ile Gln Lys Leu Arg Asn Gln Leu Thr Asn
565 570 575
Lys Thr Leu Ser Asn Ser Ser Gln Ser Glu Leu Glu Asn Arg Leu His
580 585 590
Gln Leu Thr Glu Thr Leu Ile Gln Lys Gln Thr Met Leu Glu Ser Leu
595 600 605
Ser Thr Glu Lys Asn Ser Leu Val Phe Gln Leu Glu Arg Leu Glu Gln
610 615 620
Gln Met Asn Ser Ala Ser Gly Ser Ser Ser Asn Gly Ser Ser Ile Asn
625 630 635 640
Met Ser Gly Ile Asp Asn Gly Glu Gly Thr Arg Leu Arg Asn Val Pro
645 650 655
Val Leu Phe Asn Asp Thr Glu Thr Asn Leu Ala Gly Met Tyr Gly Lys
660 665 670
Val Arg Lys Ala Ala Ser Ser Ile Asp Gln Phe Ser Ile Arg Leu Gly
675 680 685
Ile Phe Leu Arg Arg Tyr Pro Ile Ala Arg Val Phe Val Ile Ile Tyr
690 695 700
Met Ala Leu Leu His Leu Trp Val Met Ile Val Leu Leu Thr Tyr Thr
705 710 715 720
Pro Glu Met His His Asp Gln Pro Tyr Gly Lys
725 730
<210> 27
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anchored primer for PIG31
<400> 27
aagctttttt tttttg 16
<210> 28
<211> 13
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H-AP34 primer for PIG31
<400> 28
aagcttcagc agc 13
<210> 29
<211> 1973
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 29
gcccctctgg acactcataa ttcaatggta gatgcaggtg gagttgagaa catcacccag 60
cttccccagg agcttcctca gatgatggct gcagcagccg atggtttggg gagtatagcg 120
atagacacga cccagctcaa catgtccgtg acagatccca cagcctgggc tacagccatg 180
aataacctgg gcatggttcc cgtagggtcg cctggacagc agctcgtgtc tgactcaatc 240
tgtgtcccag gctttgatcc aagcctcaac atgatgactg gaatcacccc cattaaccca 300
atgataccag gccttggact ggtacctccc ccaccaccaa cagaagtggc tgttgtcaaa 360
gaaataatcc actgcaaaag ctgtactctt tttcctcaaa atccaaatct tccacctcct 420
tccacaagag aacgacctcc tgggtgtaag accgtgtttg tcggaggatt accagaaaat 480
gctactgagg aaattattca agaagtcttt gaacagtgcg gtgatattac agcaattcgg 540
aaaagcaaga agaatttttg tcacattcgc tttgcagagg aattcatggt tgataaagcc 600
atttaccttt ctggttatag gatgcgatta gggtctagca ccgacaaaaa ggattcaggc 660
cgccttcatg tggactttgc ccaggccagg gatgacttct atgagtggga atgcaagcag 720
aggatgcgtg cccgggagga gcggcaccgg cgcaagctgg aggaggaccg gctcaggccc 780
ccatccccgc ctgccataat gcactactcg gagcacgaag ccgctctgct ggctgaaaag 840
ctgaaagatg atagcaagtc ttcagaggct atcacagtgc tgctttcctg gattgaacga 900
ggggaagtga atcggcgctc tgcaaaccag ttctattcca tggtgcagtc ggccaacagc 960
cacgtccgcc ggctaatgaa tgaaaaagcc acccatgagc aagagatgga ggaagccaag 1020
gagaatttta aaaatgcctt aactgggatt ctcactcaat ttgagcagat tgtggccgtt 1080
ttcaacgctt ctaccagaca aaaagcttgg gaccatttct cgaaagccca gcgcaagaac 1140
atagacattt ggcgaaagca ttctgaggag ctccggaatg ctcaaagtga gcagctcatg 1200
ggcatccgcc gcgaagaaga aatggaaatg tctgatgatg agaactgtga cagccctaca 1260
aagaaaatga gagtcgatga atcagccctg gctgcccagg cctacgctct gaaagaggag 1320
aatgacagtc tccgctggca gctggatgcc tacaggaatg aggtggagct gctgaaacaa 1380
gaaaaagaac agcttttccg aacagaagaa aacctcacca aggaccagca actgcagttt 1440
ctgcagcaaa ccatgcaagg catgcagcag caattgctaa ccatccagga ggagttaaac 1500
aacaaaaagt cagaattgga acaagcaaag gaagagcagt cccatacaca agcgttacta 1560
aaagtcctgc aggaacaatt aaaaggtacc aaggaattgg tcgagaccaa tggccacagc 1620
catgaggatt caaatgaaat caatgtgttg acagttgcat tagtcaacca agaccgagag 1680
aacaatattg agaaaagaag ccaaggctta aaatcagaga aagaagctct actaataggt 1740
atcatatcaa cgtttcttca cgtccatcct tttggagcca acatagaata tctttggtca 1800
tacatgcagc agctggactc caagatatct gcaaatgaaa tagaaatgct tttgatgagg 1860
ctgccacgca tgttcaaaca ggaattcacg ggtgtgggag ccacgctgga aaaaagatgg 1920
aagctgtgtg cctttgaagg aattaaaact acctaactgc gaagagcaaa gca 1973
<210> 30
<211> 643
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 30
Met Val Asp Ala Gly Gly Val Glu Asn Ile Thr Gln Leu Pro Gln Glu
1 5 10 15
Leu Pro Gln Met Met Ala Ala Ala Ala Asp Gly Leu Gly Ser Ile Ala
20 25 30
Ile Asp Thr Thr Gln Leu Asn Met Ser Val Thr Asp Pro Thr Ala Trp
35 40 45
Ala Thr Ala Met Asn Asn Leu Gly Met Val Pro Val Gly Ser Pro Gly
50 55 60
Gln Gln Leu Val Ser Asp Ser Ile Cys Val Pro Gly Phe Asp Pro Ser
65 70 75 80
Leu Asn Met Met Thr Gly Ile Thr Pro Ile Asn Pro Met Ile Pro Gly
85 90 95
Leu Gly Leu Val Pro Pro Pro Pro Pro Thr Glu Val Ala Val Val Lys
100 105 110
Glu Ile Ile His Cys Lys Ser Cys Thr Leu Phe Pro Gln Asn Pro Asn
115 120 125
Leu Pro Pro Pro Ser Thr Arg Glu Arg Pro Pro Gly Cys Lys Thr Val
130 135 140
Phe Val Gly Gly Leu Pro Glu Asn Ala Thr Glu Glu Ile Ile Gln Glu
145 150 155 160
Val Phe Glu Gln Cys Gly Asp Ile Thr Ala Ile Arg Lys Ser Lys Lys
165 170 175
Asn Phe Cys His Ile Arg Phe Ala Glu Glu Phe Met Val Asp Lys Ala
180 185 190
Ile Tyr Leu Ser Gly Tyr Arg Met Arg Leu Gly Ser Ser Thr Asp Lys
195 200 205
Lys Asp Ser Gly Arg Leu His Val Asp Phe Ala Gln Ala Arg Asp Asp
210 215 220
Phe Tyr Glu Trp Glu Cys Lys Gln Arg Met Arg Ala Arg Glu Glu Arg
225 230 235 240
His Arg Arg Lys Leu Glu Glu Asp Arg Leu Arg Pro Pro Ser Pro Pro
245 250 255
Ala Ile Met His Tyr Ser Glu His Glu Ala Ala Leu Leu Ala Glu Lys
260 265 270
Leu Lys Asp Asp Ser Lys Ser Ser Glu Ala Ile Thr Val Leu Leu Ser
275 280 285
Trp Ile Glu Arg Gly Glu Val Asn Arg Arg Ser Ala Asn Gln Phe Tyr
290 295 300
Ser Met Val Gln Ser Ala Asn Ser His Val Arg Arg Leu Met Asn Glu
305 310 315 320
Lys Ala Thr His Glu Gln Glu Met Glu Glu Ala Lys Glu Asn Phe Lys
325 330 335
Asn Ala Leu Thr Gly Ile Leu Thr Gln Phe Glu Gln Ile Val Ala Val
340 345 350
Phe Asn Ala Ser Thr Arg Gln Lys Ala Trp Asp His Phe Ser Lys Ala
355 360 365
Gln Arg Lys Asn Ile Asp Ile Trp Arg Lys His Ser Glu Glu Leu Arg
370 375 380
Asn Ala Gln Ser Glu Gln Leu Met Gly Ile Arg Arg Glu Glu Glu Met
385 390 395 400
Glu Met Ser Asp Asp Glu Asn Cys Asp Ser Pro Thr Lys Lys Met Arg
405 410 415
Val Asp Glu Ser Ala Leu Ala Ala Gln Ala Tyr Ala Leu Lys Glu Glu
420 425 430
Asn Asp Ser Leu Arg Trp Gln Leu Asp Ala Tyr Arg Asn Glu Val Glu
435 440 445
Leu Leu Lys Gln Glu Lys Glu Gln Leu Phe Arg Thr Glu Glu Asn Leu
450 455 460
Thr Lys Asp Gln Gln Leu Gln Phe Leu Gln Gln Thr Met Gln Gly Met
465 470 475 480
Gln Gln Gln Leu Leu Thr Ile Gln Glu Glu Leu Asn Asn Lys Lys Ser
485 490 495
Glu Leu Glu Gln Ala Lys Glu Glu Gln Ser His Thr Gln Ala Leu Leu
500 505 510
Lys Val Leu Gln Glu Gln Leu Lys Gly Thr Lys Glu Leu Val Glu Thr
515 520 525
Asn Gly His Ser His Glu Asp Ser Asn Glu Ile Asn Val Leu Thr Val
530 535 540
Ala Leu Val Asn Gln Asp Arg Glu Asn Asn Ile Glu Lys Arg Ser Gln
545 550 555 560
Gly Leu Lys Ser Glu Lys Glu Ala Leu Leu Ile Gly Ile Ile Ser Thr
565 570 575
Phe Leu His Val His Pro Phe Gly Ala Asn Ile Glu Tyr Leu Trp Ser
580 585 590
Tyr Met Gln Gln Leu Asp Ser Lys Ile Ser Ala Asn Glu Ile Glu Met
595 600 605
Leu Leu Met Arg Leu Pro Arg Met Phe Lys Gln Glu Phe Thr Gly Val
610 615 620
Gly Ala Thr Leu Glu Lys Arg Trp Lys Leu Cys Ala Phe Glu Gly Ile
625 630 635 640
Lys Thr Thr
<210> 31
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anchored primer for PIG38
<400> 31
aagctttttt tttttc 16
<210> 32
<211> 13
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H-AP10 primer for PIG38
<400> 32
aagcttccac gta 13
<210> 33
<211> 1586
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 33
ggagggtggt gtccactgcc cagttccgtg tcccgatgcc cagcgccagc gccagccgca 60
agagtcagga gaagccgcgg gagatcatgg acgcggcgga agattatgct aaagagagat 120
atggaatatc ttcaatgata caatcacaag aaaaaccaga tcgagttttg gttcgggtta 180
gagacttgac aatacaaaaa gctgatgaag ttgtttgggt acgtgcaaga gttcatacaa 240
gcagagctaa agggaaacag tgcttcttag tcctacgtca gcagcagttt aatgtccagg 300
ctcttgtggc ggtgggagac catgcaagca agcagatggt taaatttgct gccaacatca 360
acaaagagag cattgtggat gtagaaggtg ttgtgagaaa agtgaatcag aaaattggaa 420
gctgtacaca gcaagacgtt gagttacatg ttcagaagat ttatgtgatc agtttggctg 480
aaccccgtct gcccctgcag ctggatgatg ctgttcggcc tgaggcagaa ggagaagagg 540
aaggaagagc tactgttaac caggatacaa gattagacaa cagagtcatt gatcttagga 600
catcaactag tcaggcagtc ttccgtctcc agtctggcat ctgccatctc ttccgagaaa 660
ctttaattaa caaaggtttt gtggaaatcc aaactcctaa aattatttca gctgccagtg 720
aaggaggagc caatgttttt actgtgtcat attttaaaaa taatgcatac ctggctcagt 780
ccccacagct atataagcaa atgtgcattt gtgctgattt tgagaaggtt ttctctattg 840
gaccagtatt cagagcggaa gactctaata cccatagaca tctaactgag tttgttggtt 900
tggacattga aatggctttt aattaccatt accacgaagt tatggaagaa attgctgaca 960
ccatggtaca catattcaaa ggacttcaag aaaggtttca gactgaaatt caaacagtga 1020
ataaacagtt cccatgtgag ccattcaaat ttttggagcc aactctaaga ctagaatatt 1080
gtgaagcatt ggctatgctt agggaagctg gagtcgaaat gggagatgaa gacgatctga 1140
gcacaccaaa tgaaaagctg ttgggtcatt tggtaaagga aaagtatgat acagattttt 1200
atattcttga taaatatcca ttggctgtaa gacctttcta taccatgcct gacccaagaa 1260
atcccaaaca gtccaactct tacgatatgt tcatgagagg agaagaaata ttgtcaggag 1320
ctcaaagaat acatgatcct caactgctaa cagagagagc tttacatcat ggaattgatt 1380
tggagaaaat taaggcttac attgattcct tccgctttgg agcccctcct catgctggtg 1440
gaggcattgg attggaacga gttactatgc tgtttctggg attgcataat gttcgtcaga 1500
cctccatgtt ccctcgtgat cccaaacgac tcactcctta aattcacact ttgccactta 1560
actccagtgt ggatgacaga gcgaga 1586
<210> 34
<211> 501
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 34
Met Pro Ser Ala Ser Ala Ser Arg Lys Ser Gln Glu Lys Pro Arg Glu
1 5 10 15
Ile Met Asp Ala Ala Glu Asp Tyr Ala Lys Glu Arg Tyr Gly Ile Ser
20 25 30
Ser Met Ile Gln Ser Gln Glu Lys Pro Asp Arg Val Leu Val Arg Val
35 40 45
Arg Asp Leu Thr Ile Gln Lys Ala Asp Glu Val Val Trp Val Arg Ala
50 55 60
Arg Val His Thr Ser Arg Ala Lys Gly Lys Gln Cys Phe Leu Val Leu
65 70 75 80
Arg Gln Gln Gln Phe Asn Val Gln Ala Leu Val Ala Val Gly Asp His
85 90 95
Ala Ser Lys Gln Met Val Lys Phe Ala Ala Asn Ile Asn Lys Glu Ser
100 105 110
Ile Val Asp Val Glu Gly Val Val Arg Lys Val Asn Gln Lys Ile Gly
115 120 125
Ser Cys Thr Gln Gln Asp Val Glu Leu His Val Gln Lys Ile Tyr Val
130 135 140
Ile Ser Leu Ala Glu Pro Arg Leu Pro Leu Gln Leu Asp Asp Ala Val
145 150 155 160
Arg Pro Glu Ala Glu Gly Glu Glu Glu Gly Arg Ala Thr Val Asn Gln
165 170 175
Asp Thr Arg Leu Asp Asn Arg Val Ile Asp Leu Arg Thr Ser Thr Ser
180 185 190
Gln Ala Val Phe Arg Leu Gln Ser Gly Ile Cys His Leu Phe Arg Glu
195 200 205
Thr Leu Ile Asn Lys Gly Phe Val Glu Ile Gln Thr Pro Lys Ile Ile
210 215 220
Ser Ala Ala Ser Glu Gly Gly Ala Asn Val Phe Thr Val Ser Tyr Phe
225 230 235 240
Lys Asn Asn Ala Tyr Leu Ala Gln Ser Pro Gln Leu Tyr Lys Gln Met
245 250 255
Cys Ile Cys Ala Asp Phe Glu Lys Val Phe Ser Ile Gly Pro Val Phe
260 265 270
Arg Ala Glu Asp Ser Asn Thr His Arg His Leu Thr Glu Phe Val Gly
275 280 285
Leu Asp Ile Glu Met Ala Phe Asn Tyr His Tyr His Glu Val Met Glu
290 295 300
Glu Ile Ala Asp Thr Met Val His Ile Phe Lys Gly Leu Gln Glu Arg
305 310 315 320
Phe Gln Thr Glu Ile Gln Thr Val Asn Lys Gln Phe Pro Cys Glu Pro
325 330 335
Phe Lys Phe Leu Glu Pro Thr Leu Arg Leu Glu Tyr Cys Glu Ala Leu
340 345 350
Ala Met Leu Arg Glu Ala Gly Val Glu Met Gly Asp Glu Asp Asp Leu
355 360 365
Ser Thr Pro Asn Glu Lys Leu Leu Gly His Leu Val Lys Glu Lys Tyr
370 375 380
Asp Thr Asp Phe Tyr Ile Leu Asp Lys Tyr Pro Leu Ala Val Arg Pro
385 390 395 400
Phe Tyr Thr Met Pro Asp Pro Arg Asn Pro Lys Gln Ser Asn Ser Tyr
405 410 415
Asp Met Phe Met Arg Gly Glu Glu Ile Leu Ser Gly Ala Gln Arg Ile
420 425 430
His Asp Pro Gln Leu Leu Thr Glu Arg Ala Leu His His Gly Ile Asp
435 440 445
Leu Glu Lys Ile Lys Ala Tyr Ile Asp Ser Phe Arg Phe Gly Ala Pro
450 455 460
Pro His Ala Gly Gly Gly Ile Gly Leu Glu Arg Val Thr Met Leu Phe
465 470 475 480
Leu Gly Leu His Asn Val Arg Gln Thr Ser Met Phe Pro Arg Asp Pro
485 490 495
Lys Arg Leu Thr Pro
500
<210> 35
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anchored primer for PIG40
<400> 35
aagctttttt tttttc 16
<210> 36
<211> 13
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H-AP11 primer for PIG40
<400> 36
aagcttcggg taa 13
<210> 37
<211> 1245
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 37
aagagggcaa ccctaacgat acgcttgact ttctgtggct gggaacacct tccaccatga 60
ccacctcagc aagttcccac ttaaataaag gcatcaagca ggtgtacatg tccctgcctc 120
agggtgagaa agtccaggcc atgtatatct ggatcgatgg tactggagaa ggactgcgct 180
gcaagacccg gaccctggac agtgagccca agtgtgtgga agagttgcct gagtggaatt 240
tcgatggctc cagtacttta cagtctgagg gttccaacag tgacatgtat ctcgtgcctg 300
ctgccatgtt tcgggacccc ttccgtaagg accctaacaa gctggtgtta tgtgaagttt 360
tcaagtacaa tcgaaggcct gcagagacca atttgaggca cacctgtaaa cggataatag 420
acatggtgag caaccagcac ccctggtttg gcatggagca ggagtatacc ctcatgggga 480
cagatgggca cccctttggt tggccttcca acggcttcca gggccccagg gtccatatta 540
ctgtggtgtg ggagcagaca gagcctatgg cagggacatc gtggaggccc attaccgggc 600
ctgcttgtat gctggagtca agattgcggg gactaatgcc gaggtcatgc ctgcccagtg 660
ggaatttcag attggacctt gtgaaggaat cagcatggga gatcatctct gggtggcccg 720
tttcatcttg catcgtgtgt gtgaagactt tggagtgata gcaacctttg atcctaagcc 780
cattcctggg aactggaatg gtgcaggctg ccataccaac ttcagcacca aggccatgcg 840
ggaggagaat ggtctgaagt acatcgagga ggccattgag aaactaagca agcggcacca 900
gtaccacatc cgtgcctatg atcccaaggg aggcctggac aatgcccgac gtctaactgg 960
attccatgaa acctccaaca tcaacgactt ttctgctggt gtagccaatc gtagcgccag 1020
catacgcatt ccccggactg ttggccagga gaagaagggt tactttgaag atcgtcgccc 1080
ctctgccaac tgcgacccct tttcggtgac agaagccctc atccgcacgt gtcttctcaa 1140
tgaaaccggc gatgagccct tccagtacaa aaattaagtg gactagacct ccagctgttg 1200
agcccctcct agttcttcat cccactccaa ctcttccccc tctca 1245
<210> 38
<211> 233
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 38
Met Thr Thr Ser Ala Ser Ser His Leu Asn Lys Gly Ile Lys Gln Val
1 5 10 15
Tyr Met Ser Leu Pro Gln Gly Glu Lys Val Gln Ala Met Tyr Ile Trp
20 25 30
Ile Asp Gly Thr Gly Glu Gly Leu Arg Cys Lys Thr Arg Thr Leu Asp
35 40 45
Ser Glu Pro Lys Cys Val Glu Glu Leu Pro Glu Trp Asn Phe Asp Gly
50 55 60
Ser Ser Thr Leu Gln Ser Glu Gly Ser Asn Ser Asp Met Tyr Leu Val
65 70 75 80
Pro Ala Ala Met Phe Arg Asp Pro Phe Arg Lys Asp Pro Asn Lys Leu
85 90 95
Val Leu Cys Glu Val Phe Lys Tyr Asn Arg Arg Pro Ala Glu Thr Asn
100 105 110
Leu Arg His Thr Cys Lys Arg Ile Ile Asp Met Val Ser Asn Gln His
115 120 125
Pro Trp Phe Gly Met Glu Gln Glu Tyr Thr Leu Met Gly Thr Asp Gly
130 135 140
His Pro Phe Gly Trp Pro Ser Asn Gly Phe Gln Gly Pro Arg Val His
145 150 155 160
Ile Thr Val Val Trp Glu Gln Thr Glu Pro Met Ala Gly Thr Ser Trp
165 170 175
Arg Pro Ile Thr Gly Pro Ala Cys Met Leu Glu Ser Arg Leu Arg Gly
180 185 190
Leu Met Pro Arg Ser Cys Leu Pro Ser Gly Asn Phe Arg Leu Asp Leu
195 200 205
Val Lys Glu Ser Ala Trp Glu Ile Ile Ser Gly Trp Pro Val Ser Ser
210 215 220
Cys Ile Val Cys Val Lys Thr Leu Glu
225 230
<210> 39
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anchored primer for PIG43
<400> 39
aagctttttt tttttg 16
<210> 40
<211> 13
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H-AP11 primer for PIG43
<400> 40
aagcttcggg taa 13
<210> 41
<211> 1721
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 41
ggcaaggatc ttgttccaaa tcatctttca tattaccttt ataatcatgt ggctatgtgg 60
ccggaacaaa gtgacaaatg gcctacagct gtgagagcaa atggacatct cctcctgaac 120
tctgagaaga tgtcaaaatc cacaggcaac ttcctcactt tgacccaagc tattgacaaa 180
ttttcagcag atggaatgcg tttggctctg gctgatgctg gtgacactgt agaagatgcc 240
aactttgtgg aagccatggc agatgcaggt attctccgtc tgtacacctg ggtagagtgg 300
gtgaaagaaa tggttgccaa ctgggacagc ctaagaagtg gtcctgccag cactttcaat 360
gatagagttt ttgccagtga attgaatgca ggaattataa aaacagatca aaactatgaa 420
aagatgatgt ttaaagaagc tttgaaaaca gggttttttg agtttcaggc cgcaaaagat 480
aagtaccgtg aattggctgt ggaagggatg cacagagaac ttgtgttccg gtttattgaa 540
gttcagacac ttctcctcgc tccattctgt ccacatttgt gtgagcacat ctggacactc 600
ctgggaaagc ctgactcaat tatgaatgct tcatggcctg tggcaggtcc tgttaatgaa 660
gttttaatac actcctcaca gtatcttatg gaagtaacac atgaccttag actacgactc 720
aagaactata tgatgccagc taaagggaag aagactgaca aacaacccct gcagaagccc 780
tcacattgca ccatctatgt ggcaaagaac tatccacctt ggcaacatac caccctgtct 840
gttctacgta aacactttga ggccaataac ggaaaactgc ctgacaacaa agtcattgct 900
agtgaactag gcagtatgcc agaactgaag aaatacatga agaaagtcat gccatttgtt 960
gccatgatta aggaaaatct ggagaagatg gggcctcgta ttctggattt gcaattagaa 1020
tttgatgaaa aggctgtgct tatggagaat atagtctatc tgactaattc gcttgagcta 1080
gaacacatag aagtcaagtt tgcctccgaa gcagaagata aaatcaggga agactgctgt 1140
cctgggaaac cacttaatgt ttttagaata gaacctggtg tgtccgtttc tctggtgaat 1200
ccccagccat ccaatggcca cttctcaacc aaaattgaaa tcaggcaagg agataactgt 1260
gattccataa tcaggcgttt aatgaaaatg aatcgaggaa ttaaagacct ttccaaagtg 1320
aaactgatga gatttgatga tccactgttg gggcctcgac gagttcctgt cctgggaaag 1380
gagtacaccg agaagacccc catttctgag catgctgttt tcaatgtgga cctcatgagc 1440
aagaaaattc atctgactga gaatgggata agggtggata ttggcgatac aataatctat 1500
ctggttcatt aaactcatgc acattggaga tttatcctgg tttcttagga atactactac 1560
tctgattgtg tctactgatt ggctatcaga accttaggct ggacctaaat agattgattt 1620
catttctaac catccaattc tgcatgtatt cataattcta tcaagtcatc tttgattcct 1680
ggacctaata aatttttttt ccctttcttt gggtgtccaa g 1721
<210> 42
<211> 485
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 42
Met Trp Pro Glu Gln Ser Asp Lys Trp Pro Thr Ala Val Arg Ala Asn
1 5 10 15
Gly His Leu Leu Leu Asn Ser Glu Lys Met Ser Lys Ser Thr Gly Asn
20 25 30
Phe Leu Thr Leu Thr Gln Ala Ile Asp Lys Phe Ser Ala Asp Gly Met
35 40 45
Arg Leu Ala Leu Ala Asp Ala Gly Asp Thr Val Glu Asp Ala Asn Phe
50 55 60
Val Glu Ala Met Ala Asp Ala Gly Ile Leu Arg Leu Tyr Thr Trp Val
65 70 75 80
Glu Trp Val Lys Glu Met Val Ala Asn Trp Asp Ser Leu Arg Ser Gly
85 90 95
Pro Ala Ser Thr Phe Asn Asp Arg Val Phe Ala Ser Glu Leu Asn Ala
100 105 110
Gly Ile Ile Lys Thr Asp Gln Asn Tyr Glu Lys Met Met Phe Lys Glu
115 120 125
Ala Leu Lys Thr Gly Phe Phe Glu Phe Gln Ala Ala Lys Asp Lys Tyr
130 135 140
Arg Glu Leu Ala Val Glu Gly Met His Arg Glu Leu Val Phe Arg Phe
145 150 155 160
Ile Glu Val Gln Thr Leu Leu Leu Ala Pro Phe Cys Pro His Leu Cys
165 170 175
Glu His Ile Trp Thr Leu Leu Gly Lys Pro Asp Ser Ile Met Asn Ala
180 185 190
Ser Trp Pro Val Ala Gly Pro Val Asn Glu Val Leu Ile His Ser Ser
195 200 205
Gln Tyr Leu Met Glu Val Thr His Asp Leu Arg Leu Arg Leu Lys Asn
210 215 220
Tyr Met Met Pro Ala Lys Gly Lys Lys Thr Asp Lys Gln Pro Leu Gln
225 230 235 240
Lys Pro Ser His Cys Thr Ile Tyr Val Ala Lys Asn Tyr Pro Pro Trp
245 250 255
Gln His Thr Thr Leu Ser Val Leu Arg Lys His Phe Glu Ala Asn Asn
260 265 270
Gly Lys Leu Pro Asp Asn Lys Val Ile Ala Ser Glu Leu Gly Ser Met
275 280 285
Pro Glu Leu Lys Lys Tyr Met Lys Lys Val Met Pro Phe Val Ala Met
290 295 300
Ile Lys Glu Asn Leu Glu Lys Met Gly Pro Arg Ile Leu Asp Leu Gln
305 310 315 320
Leu Glu Phe Asp Glu Lys Ala Val Leu Met Glu Asn Ile Val Tyr Leu
325 330 335
Thr Asn Ser Leu Glu Leu Glu His Ile Glu Val Lys Phe Ala Ser Glu
340 345 350
Ala Glu Asp Lys Ile Arg Glu Asp Cys Cys Pro Gly Lys Pro Leu Asn
355 360 365
Val Phe Arg Ile Glu Pro Gly Val Ser Val Ser Leu Val Asn Pro Gln
370 375 380
Pro Ser Asn Gly His Phe Ser Thr Lys Ile Glu Ile Arg Gln Gly Asp
385 390 395 400
Asn Cys Asp Ser Ile Ile Arg Arg Leu Met Lys Met Asn Arg Gly Ile
405 410 415
Lys Asp Leu Ser Lys Val Lys Leu Met Arg Phe Asp Asp Pro Leu Leu
420 425 430
Gly Pro Arg Arg Val Pro Val Leu Gly Lys Glu Tyr Thr Glu Lys Thr
435 440 445
Pro Ile Ser Glu His Ala Val Phe Asn Val Asp Leu Met Ser Lys Lys
450 455 460
Ile His Leu Thr Glu Asn Gly Ile Arg Val Asp Ile Gly Asp Thr Ile
465 470 475 480
Ile Tyr Leu Val His
485
<210> 43
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anchored primer for PIG44
<400> 43
aagctttttt tttttc 16
<210> 44
<211> 13
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H-AP23 primer for PIG44
<400> 44
aagcttggct atg 13
<210> 45
<211> 1312
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 45
cagcatgagc ttcaccactc gctccacctt ctccaccaac taccggtccc tgggctctgt 60
ccaggcgccc agctacggcg cccggccggt cagcagcgcg gccagcgtct atgcaggcgc 120
tgggggctct ggttcccgga tctccgtgtc ccgctccacc agcttcaggg gcggcatggg 180
gtccgggggc ctggccaccg ggatagccgg gggtctggca ggaatgggag gcatccagaa 240
cgagaaggag accatgcaaa gcctgaacga ccgcctggcc tcttacctgg acagagtgag 300
gagcctggag accgagaacc ggaggctgga gagcaaaatc cgggagcact tggagaagaa 360
gggaccccag gtcagagact ggagccatta cttcaagatc atcgaggacc tgagggctca 420
gatcttcgca aatactgtgg acaatgcccg catcgttctg cagattgaca atgcccgtct 480
tgctgctgat gactttagag tcaagtatga gacagagctg gccatgcgcc agtctgtgga 540
gaacgacatc catgggctcc gcaaggtcat tgatgacacc aatatcacac gactgcagct 600
ggagacagag atcgaggctc tcaaggagga gctgctcttc atgaagaaga accacgaaga 660
ggaagtaaaa ggcctacaag cccagattgc cagctctggg ttgaccgtgg aggtagatgc 720
ccccaaatct caggacctcg ccaagatcat ggcagacatc cgggcccaat atgacgagct 780
ggctcggaag aaccgagagg agctagacaa gtactggtct cagcagattg aggagagcac 840
cacagtggtc accacacagt ctgctgaggt tggagctgct gagacgacgc tcacagagct 900
gagacgtaca gtccagtcct tggagatcga cctggactcc atgagaaatc tgaaggccag 960
cttggagaac agcctgaggg aggtggaggc ccgctacgcc ctacagatgg agcagctcaa 1020
cgggatcctg ctgcaccttg agtcagagct ggcacagacc cgggcagagg gacagcgcca 1080
ggcccaggag tatgaggccc tgctgaacat caaggtcaag ctggaggctg agatcgccac 1140
ctaccgccgc ctgctggaag atggcgagga ctttaatctt ggtgatgcct tggacagcag 1200
caactccatg caaaccatcc aaaagaccac cacccgccgg atagtggatg gcaaagtggt 1260
gtctgagacc aatgacacca aagttctgag gcattaagcc agcagaagca gg 1312
<210> 46
<211> 430
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 46
Met Ser Phe Thr Thr Arg Ser Thr Phe Ser Thr Asn Tyr Arg Ser Leu
1 5 10 15
Gly Ser Val Gln Ala Pro Ser Tyr Gly Ala Arg Pro Val Ser Ser Ala
20 25 30
Ala Ser Val Tyr Ala Gly Ala Gly Gly Ser Gly Ser Arg Ile Ser Val
35 40 45
Ser Arg Ser Thr Ser Phe Arg Gly Gly Met Gly Ser Gly Gly Leu Ala
50 55 60
Thr Gly Ile Ala Gly Gly Leu Ala Gly Met Gly Gly Ile Gln Asn Glu
65 70 75 80
Lys Glu Thr Met Gln Ser Leu Asn Asp Arg Leu Ala Ser Tyr Leu Asp
85 90 95
Arg Val Arg Ser Leu Glu Thr Glu Asn Arg Arg Leu Glu Ser Lys Ile
100 105 110
Arg Glu His Leu Glu Lys Lys Gly Pro Gln Val Arg Asp Trp Ser His
115 120 125
Tyr Phe Lys Ile Ile Glu Asp Leu Arg Ala Gln Ile Phe Ala Asn Thr
130 135 140
Val Asp Asn Ala Arg Ile Val Leu Gln Ile Asp Asn Ala Arg Leu Ala
145 150 155 160
Ala Asp Asp Phe Arg Val Lys Tyr Glu Thr Glu Leu Ala Met Arg Gln
165 170 175
Ser Val Glu Asn Asp Ile His Gly Leu Arg Lys Val Ile Asp Asp Thr
180 185 190
Asn Ile Thr Arg Leu Gln Leu Glu Thr Glu Ile Glu Ala Leu Lys Glu
195 200 205
Glu Leu Leu Phe Met Lys Lys Asn His Glu Glu Glu Val Lys Gly Leu
210 215 220
Gln Ala Gln Ile Ala Ser Ser Gly Leu Thr Val Glu Val Asp Ala Pro
225 230 235 240
Lys Ser Gln Asp Leu Ala Lys Ile Met Ala Asp Ile Arg Ala Gln Tyr
245 250 255
Asp Glu Leu Ala Arg Lys Asn Arg Glu Glu Leu Asp Lys Tyr Trp Ser
260 265 270
Gln Gln Ile Glu Glu Ser Thr Thr Val Val Thr Thr Gln Ser Ala Glu
275 280 285
Val Gly Ala Ala Glu Thr Thr Leu Thr Glu Leu Arg Arg Thr Val Gln
290 295 300
Ser Leu Glu Ile Asp Leu Asp Ser Met Arg Asn Leu Lys Ala Ser Leu
305 310 315 320
Glu Asn Ser Leu Arg Glu Val Glu Ala Arg Tyr Ala Leu Gln Met Glu
325 330 335
Gln Leu Asn Gly Ile Leu Leu His Leu Glu Ser Glu Leu Ala Gln Thr
340 345 350
Arg Ala Glu Gly Gln Arg Gln Ala Gln Glu Tyr Glu Ala Leu Leu Asn
355 360 365
Ile Lys Val Lys Leu Glu Ala Glu Ile Ala Thr Tyr Arg Arg Leu Leu
370 375 380
Glu Asp Gly Glu Asp Phe Asn Leu Gly Asp Ala Leu Asp Ser Ser Asn
385 390 395 400
Ser Met Gln Thr Ile Gln Lys Thr Thr Thr Arg Arg Ile Val Asp Gly
405 410 415
Lys Val Val Ser Glu Thr Asn Asp Thr Lys Val Leu Arg His
420 425 430
<210> 47
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anchored primer for PIG46
<400> 47
aagctttttt ttttta 16
<210> 48
<211> 13
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H-AP24 primer for PIG46
<400> 48
aagcttcact agc 13
<210> 49
<211> 827
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 49
ttctcctatc ggggtcacag ggacgctaag attgctacct ggactttcgt tgaccatgct 60
gtcccgggtg gtactttccg ccgccgccac agcggccccc tctctgaaga atgcagcctt 120
cctaggtcca ggggtattgc aggcaacaag gacctttcat acagggcagc cacaccttgt 180
ccctgtacca cctcttcctg aatacggagg aaaagttcgt tatggactga tccctgagga 240
attcttccag tttctttatc ctaaaactgg tgtaacagga ccctatgtac tcggaactgg 300
gcttatcttg tacgctttat ccaaagaaat atatgtgatt agcgcagaga ccttcactgc 360
cctatcagta ctaggtgtaa tggtctatgg aattaaaaaa tatggtccct ttgttgcaga 420
ctttgctgat aaactcaatg agcaaaaact tgcccaacta gaagaggcga agcaggcttc 480
catccaacac atccagaatg caattgatac ggagaagtca caacaggcac tggttcagaa 540
gcgccattac ctttttgatg tgcaaaggaa taacattgct atggctttgg aagttactta 600
ccgggaacga ctgtatagag tatataagga agtaaagaat cgcctggact atcatatatc 660
tgtgcagaac atgatgcgtc gaaaggaaca agaacacatg ataaattggg tggagaagca 720
cgtggtgcaa agcatctcca cacagcagga aaaggagaca attgccaagt gcattgcgga 780
cctaaagctg ctggcaaaga aggctcaagc acagccagtt atgtaaa 827
<210> 50
<211> 256
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 50
Met Leu Ser Arg Val Val Leu Ser Ala Ala Ala Thr Ala Ala Pro Ser
1 5 10 15
Leu Lys Asn Ala Ala Phe Leu Gly Pro Gly Val Leu Gln Ala Thr Arg
20 25 30
Thr Phe His Thr Gly Gln Pro His Leu Val Pro Val Pro Pro Leu Pro
35 40 45
Glu Tyr Gly Gly Lys Val Arg Tyr Gly Leu Ile Pro Glu Glu Phe Phe
50 55 60
Gln Phe Leu Tyr Pro Lys Thr Gly Val Thr Gly Pro Tyr Val Leu Gly
65 70 75 80
Thr Gly Leu Ile Leu Tyr Ala Leu Ser Lys Glu Ile Tyr Val Ile Ser
85 90 95
Ala Glu Thr Phe Thr Ala Leu Ser Val Leu Gly Val Met Val Tyr Gly
100 105 110
Ile Lys Lys Tyr Gly Pro Phe Val Ala Asp Phe Ala Asp Lys Leu Asn
115 120 125
Glu Gln Lys Leu Ala Gln Leu Glu Glu Ala Lys Gln Ala Ser Ile Gln
130 135 140
His Ile Gln Asn Ala Ile Asp Thr Glu Lys Ser Gln Gln Ala Leu Val
145 150 155 160
Gln Lys Arg His Tyr Leu Phe Asp Val Gln Arg Asn Asn Ile Ala Met
165 170 175
Ala Leu Glu Val Thr Tyr Arg Glu Arg Leu Tyr Arg Val Tyr Lys Glu
180 185 190
Val Lys Asn Arg Leu Asp Tyr His Ile Ser Val Gln Asn Met Met Arg
195 200 205
Arg Lys Glu Gln Glu His Met Ile Asn Trp Val Glu Lys His Val Val
210 215 220
Gln Ser Ile Ser Thr Gln Gln Glu Lys Glu Thr Ile Ala Lys Cys Ile
225 230 235 240
Ala Asp Leu Lys Leu Leu Ala Lys Lys Ala Gln Ala Gln Pro Val Met
245 250 255
<210> 51
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anchored primer for PIG47
<400> 51
aagctttttt tttttc 16
<210> 52
<211> 13
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H-AP5 primer for PIG47
<400> 52
aagcttagta ggc 13
<210> 53
<211> 1707
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 53
cagaaggttc tgccggttcc cccagctctg ggtacccggc tctgcatcgc gtcgccatga 60
tgggccatcg tccagtgctc gtgctcagcc agaacacaaa gcgtgaatcc ggaagaaaag 120
ttcaatctgg aaacatcaat gctgccaaga ctattgcaga tatcatccga acatgtttgg 180
gacccaagtc catgatgaag atgcttttgg acccaatggg aggcaatgtg atgaccaatg 240
atggcaatgc cattcttcga gagattcaag tccagcatcc agcggccaag tccatgatcg 300
aaattagccg gacccaggat gaagaggttg gagatgggac cacatcagta attattcttg 360
caggggaaat gctgtctgta gctgagcact tcctggagca gcagatgcac ccaacagtgg 420
tgatcagtgc ttaccgcaag gcattggatg atatgatcag caccctaaag aaaataagta 480
tcccagtcga catcagtgac agtgatatga tgctgaacat catcaacagc tctattacta 540
ccaaagccat cagtcggtgg tcatctttgg cttgcaacat tgccctggat gctgtcaaga 600
tggtacagtt tgaggagaat ggtcggaaag agattgacat aaaaaaatat gcaagagtgg 660
aaaagatacc tggaggcatc attgaagact cctgtgtctt gcgtggagtc atgattaaca 720
aggacgtgac ccatccacgt atgtggcgct atatcaagaa ccctcgcatt gtgctgctgg 780
attcttctct ggagtacaag aaaggagaaa gccagactga cattgagatt acacgagagg 840
aggacttcac ccgaattctc cagatggagg aagagtacat ccagcagctc tgtgaggaca 900
ttatccaact gaagcccgat gtggtcatca ctgaaaaggg catctcagat ttagctcagc 960
actaccttat gcgggccaat atcacagcca tccgcagagt ccggaagaca gacaataatc 1020
gcattgctag agcctgtggg gcccggatag tcagccgacc agaggaactg agagaagatg 1080
atattggaac aggagcaggc ctgttggaaa tcaagaaaat tggagatgaa tactttactt 1140
tcatcactga ctgcaaagac cccaaggcct gcaccattct cctccggggg gctagcaaag 1200
agattctctc ggaagtagaa cgcaacctcc aggatgccat gcaagtgtgt cgcaatgttc 1260
tcctggaccc tcagctggtg ccagggggtg gggcctccga gatggctgtg gcccatgcct 1320
tgacagaaaa atccaaggcc atgactggtg tggaacaatg gccatacagg gctgttgccc 1380
aggccctaga ggtcattcct cgtaccctga tccagaactg tggggccagc accatccgtc 1440
tacttacctc ccttcgggcc aagcacaccc aggagaactg tgagacctgg ggtgtaaatg 1500
gtgagacggg tactttggtg gacatgaagg aactgggcat atgggagcca ttggctgtga 1560
agctgcagac ttataagaca gcagtggaga cggcagttct gctactgcga attgatgaca 1620
tcgtttcagg ccacaaaaag aaaggcgatg accagagccg gcaaggcggg gctcctgatg 1680
ctggccagga gtgagtgcta ggcaagg 1707
<210> 54
<211> 545
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 54
Met Met Gly His Arg Pro Val Leu Val Leu Ser Gln Asn Thr Lys Arg
1 5 10 15
Glu Ser Gly Arg Lys Val Gln Ser Gly Asn Ile Asn Ala Ala Lys Thr
20 25 30
Ile Ala Asp Ile Ile Arg Thr Cys Leu Gly Pro Lys Ser Met Met Lys
35 40 45
Met Leu Leu Asp Pro Met Gly Gly Asn Val Met Thr Asn Asp Gly Asn
50 55 60
Ala Ile Leu Arg Glu Ile Gln Val Gln His Pro Ala Ala Lys Ser Met
65 70 75 80
Ile Glu Ile Ser Arg Thr Gln Asp Glu Glu Val Gly Asp Gly Thr Thr
85 90 95
Ser Val Ile Ile Leu Ala Gly Glu Met Leu Ser Val Ala Glu His Phe
100 105 110
Leu Glu Gln Gln Met His Pro Thr Val Val Ile Ser Ala Tyr Arg Lys
115 120 125
Ala Leu Asp Asp Met Ile Ser Thr Leu Lys Lys Ile Ser Ile Pro Val
130 135 140
Asp Ile Ser Asp Ser Asp Met Met Leu Asn Ile Ile Asn Ser Ser Ile
145 150 155 160
Thr Thr Lys Ala Ile Ser Arg Trp Ser Ser Leu Ala Cys Asn Ile Ala
165 170 175
Leu Asp Ala Val Lys Met Val Gln Phe Glu Glu Asn Gly Arg Lys Glu
180 185 190
Ile Asp Ile Lys Lys Tyr Ala Arg Val Glu Lys Ile Pro Gly Gly Ile
195 200 205
Ile Glu Asp Ser Cys Val Leu Arg Gly Val Met Ile Asn Lys Asp Val
210 215 220
Thr His Pro Arg Met Trp Arg Tyr Ile Lys Asn Pro Arg Ile Val Leu
225 230 235 240
Leu Asp Ser Ser Leu Glu Tyr Lys Lys Gly Glu Ser Gln Thr Asp Ile
245 250 255
Glu Ile Thr Arg Glu Glu Asp Phe Thr Arg Ile Leu Gln Met Glu Glu
260 265 270
Glu Tyr Ile Gln Gln Leu Cys Glu Asp Ile Ile Gln Leu Lys Pro Asp
275 280 285
Val Val Ile Thr Glu Lys Gly Ile Ser Asp Leu Ala Gln His Tyr Leu
290 295 300
Met Arg Ala Asn Ile Thr Ala Ile Arg Arg Val Arg Lys Thr Asp Asn
305 310 315 320
Asn Arg Ile Ala Arg Ala Cys Gly Ala Arg Ile Val Ser Arg Pro Glu
325 330 335
Glu Leu Arg Glu Asp Asp Ile Gly Thr Gly Ala Gly Leu Leu Glu Ile
340 345 350
Lys Lys Ile Gly Asp Glu Tyr Phe Thr Phe Ile Thr Asp Cys Lys Asp
355 360 365
Pro Lys Ala Cys Thr Ile Leu Leu Arg Gly Ala Ser Lys Glu Ile Leu
370 375 380
Ser Glu Val Glu Arg Asn Leu Gln Asp Ala Met Gln Val Cys Arg Asn
385 390 395 400
Val Leu Leu Asp Pro Gln Leu Val Pro Gly Gly Gly Ala Ser Glu Met
405 410 415
Ala Val Ala His Ala Leu Thr Glu Lys Ser Lys Ala Met Thr Gly Val
420 425 430
Glu Gln Trp Pro Tyr Arg Ala Val Ala Gln Ala Leu Glu Val Ile Pro
435 440 445
Arg Thr Leu Ile Gln Asn Cys Gly Ala Ser Thr Ile Arg Leu Leu Thr
450 455 460
Ser Leu Arg Ala Lys His Thr Gln Glu Asn Cys Glu Thr Trp Gly Val
465 470 475 480
Asn Gly Glu Thr Gly Thr Leu Val Asp Met Lys Glu Leu Gly Ile Trp
485 490 495
Glu Pro Leu Ala Val Lys Leu Gln Thr Tyr Lys Thr Ala Val Glu Thr
500 505 510
Ala Val Leu Leu Leu Arg Ile Asp Asp Ile Val Ser Gly His Lys Lys
515 520 525
Lys Gly Asp Asp Gln Ser Arg Gln Gly Gly Ala Pro Asp Ala Gly Gln
530 535 540
Glu
545
<210> 55
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anchored primer for PIG48
<400> 55
aagctttttt ttttta 16
<210> 56
<211> 13
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H-AP7 primer for PIG48
<400> 56
aagcttaacg agg 13
<210> 57
<211> 643
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 57
catgcagaga gcttcacgtc tgaagagaga gctgcacatg ttagccacag agccaccccc 60
aggcatcaca tgttggcaag ataaagacca aatggatgac ctgcgagctc aaatattagg 120
tggagccaac acaccttatg agaaaggtgt ttttaagcta gaagttatca ttcctgagag 180
gtacccattt gaacctcctc agatccgatt tctcactcca atttatcatc caaacattga 240
ttctgctgga aggatttgtc tggatgttct caaattgcca ccaaaaggtg cttggagacc 300
atccctcaac atcgcaactg tgttgacctc tattcagctg ctcatgtcag aacccaaccc 360
tgatgacccg ctcatggctg acatatcctc agaatttaaa tataataagc cagccttcct 420
caagaatgcc agacagtgga cagagaagca tgcaagacag aaacaaaagg ctgatgagga 480
agagatgctt gataatctac cagaggctgg tgactccaga gtacacaact caacacagaa 540
aaggaaggcc agtcagctag taggcataga aaagaaattt catcctgatg tttaggggac 600
ttgtcctggt tcatcttagt taatgtgttc tttgccaagg tga 643
<210> 58
<211> 197
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 58
Met Gln Arg Ala Ser Arg Leu Lys Arg Glu Leu His Met Leu Ala Thr
1 5 10 15
Glu Pro Pro Pro Gly Ile Thr Cys Trp Gln Asp Lys Asp Gln Met Asp
20 25 30
Asp Leu Arg Ala Gln Ile Leu Gly Gly Ala Asn Thr Pro Tyr Glu Lys
35 40 45
Gly Val Phe Lys Leu Glu Val Ile Ile Pro Glu Arg Tyr Pro Phe Glu
50 55 60
Pro Pro Gln Ile Arg Phe Leu Thr Pro Ile Tyr His Pro Asn Ile Asp
65 70 75 80
Ser Ala Gly Arg Ile Cys Leu Asp Val Leu Lys Leu Pro Pro Lys Gly
85 90 95
Ala Trp Arg Pro Ser Leu Asn Ile Ala Thr Val Leu Thr Ser Ile Gln
100 105 110
Leu Leu Met Ser Glu Pro Asn Pro Asp Asp Pro Leu Met Ala Asp Ile
115 120 125
Ser Ser Glu Phe Lys Tyr Asn Lys Pro Ala Phe Leu Lys Asn Ala Arg
130 135 140
Gln Trp Thr Glu Lys His Ala Arg Gln Lys Gln Lys Ala Asp Glu Glu
145 150 155 160
Glu Met Leu Asp Asn Leu Pro Glu Ala Gly Asp Ser Arg Val His Asn
165 170 175
Ser Thr Gln Lys Arg Lys Ala Ser Gln Leu Val Gly Ile Glu Lys Lys
180 185 190
Phe His Pro Asp Val
195
<210> 59
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anchored primer for PIG50
<400> 59
aagctttttt tttttc 16
<210> 60
<211> 13
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H-AP5 primer for PIG50
<400> 60
aagcttagta ggc 13
<210> 61
<211> 1936
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 61
ccggtagagg actgtgaacc aaaagttgtc ccccaggatg gacttcaccg cgcagcccaa 60
gcctgccact gccctctgtg gcgtcgtgag tgccgacggg aagatcgctt accctccggg 120
ggtaaaagag atcaccgaca agatcaccac ggacgagatg atcaaacgcc tgaagatggt 180
agtgaaaacc tttatggata tggatcagga ctcagaagat gaaaaacagc agtatctccc 240
actagccttg catcttgcat ctgaattctt cctcaggaac cccaataaag atgtgcgtct 300
ccttgtagca tgttgtttgg ctgatatctt tcgtatctat gccccagaag ctccatatac 360
ttcccatgat aaacttaagg acatattttt gtttattacc agacaattaa aaggtttgga 420
ggatacaaag agtccacagt ttaatagata cttttattta ttagagaatt tagcttgggt 480
taaatcatat aacatctgct ttgaattgga agattgcaat gaaattttta ttcagctttt 540
tagaactctc ttctcagtga tcaacaatag ccacaataag aaggtacaaa tgcacatgct 600
agatttgatg agttctatca tcatggaagg tgatggagtt actcaagaat tattggactc 660
cattcttatt aacctcattc ctgcacataa gaacttaaat aaacagtcct ttgaccttgc 720
aaaagtgcta ttgaaaagaa cagtccagac tattgaggca tgcattgcta attttttcaa 780
tcaagtcctg gtgctgggaa gatcatcagt aagtgatttg tcagaacatg tatttgatct 840
gattcaggaa ctttttgcta tagatcctca tttattatta tccgtcatgc cacagcttga 900
attcaaacta aagagcaatg atggagaaga gcgattagct gttgttcgac ttctagctaa 960
attgtttggc tccaaagatt ctgatttggc aacacagaat cgtcctcttt ggcaatgttt 1020
tcttggacga tttaatgata ttcatgttcc tgtgagatta gaaagtgtga aatttgccag 1080
tcattgttta atgaatcacc cagatttagc gaaggatctc acagaatatt taaaggttag 1140
atcacatgat ccagaagaag ctattcgtca tgatgtcatt gttactataa taacagctgc 1200
caagagggac ctggccttag taaatgatca gctgcttggc tttgtaaggg aaagaacact 1260
ggataaacgg tggcgagtaa gaaaagaagc tatgatgggt ctggctcagc tttataagaa 1320
atactgtctt catggtgaag caggaaagga agctgcagag aaagtcagct ggataaagga 1380
caaacttctg catatttatt atcagaacag cattgacgac aaactgttgg tagagaaaat 1440
ctttgctcgg tatcttgtcc cccacaacct ggaaacagaa gagagaatga aatgcttata 1500
ttacttatat gctagtttgg atccaaatgc tgtaaaagct ctcaacgaaa tgtggaagtg 1560
tcagaacatg cttcggagcc atgtacgcga actattggat ttgcacaagc agcctacatc 1620
agaggctaac tgttctgcca tgtttggaaa actgatgacc atagcaaaga atttgcctga 1680
ccccgggaag gcacaagatt ttgtgaagaa atttaaccag gttctcggcg atgatgagaa 1740
acttcggtct cagttggagt tattaattag cccaacctgt tcttgcaaac aagcagatat 1800
ttgtgtggtt agtaaatcat acttcacact ttttctctag ctttacttac agaaatatgt 1860
attttattaa agcctgtttt acatacagtg atttgtgtaa atgtaacaat attgtgagct 1920
ctgaattact ttggag 1936
<210> 62
<211> 600
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 62
Met Asp Phe Thr Ala Gln Pro Lys Pro Ala Thr Ala Leu Cys Gly Val
1 5 10 15
Val Ser Ala Asp Gly Lys Ile Ala Tyr Pro Pro Gly Val Lys Glu Ile
20 25 30
Thr Asp Lys Ile Thr Thr Asp Glu Met Ile Lys Arg Leu Lys Met Val
35 40 45
Val Lys Thr Phe Met Asp Met Asp Gln Asp Ser Glu Asp Glu Lys Gln
50 55 60
Gln Tyr Leu Pro Leu Ala Leu His Leu Ala Ser Glu Phe Phe Leu Arg
65 70 75 80
Asn Pro Asn Lys Asp Val Arg Leu Leu Val Ala Cys Cys Leu Ala Asp
85 90 95
Ile Phe Arg Ile Tyr Ala Pro Glu Ala Pro Tyr Thr Ser His Asp Lys
100 105 110
Leu Lys Asp Ile Phe Leu Phe Ile Thr Arg Gln Leu Lys Gly Leu Glu
115 120 125
Asp Thr Lys Ser Pro Gln Phe Asn Arg Tyr Phe Tyr Leu Leu Glu Asn
130 135 140
Leu Ala Trp Val Lys Ser Tyr Asn Ile Cys Phe Glu Leu Glu Asp Cys
145 150 155 160
Asn Glu Ile Phe Ile Gln Leu Phe Arg Thr Leu Phe Ser Val Ile Asn
165 170 175
Asn Ser His Asn Lys Lys Val Gln Met His Met Leu Asp Leu Met Ser
180 185 190
Ser Ile Ile Met Glu Gly Asp Gly Val Thr Gln Glu Leu Leu Asp Ser
195 200 205
Ile Leu Ile Asn Leu Ile Pro Ala His Lys Asn Leu Asn Lys Gln Ser
210 215 220
Phe Asp Leu Ala Lys Val Leu Leu Lys Arg Thr Val Gln Thr Ile Glu
225 230 235 240
Ala Cys Ile Ala Asn Phe Phe Asn Gln Val Leu Val Leu Gly Arg Ser
245 250 255
Ser Val Ser Asp Leu Ser Glu His Val Phe Asp Leu Ile Gln Glu Leu
260 265 270
Phe Ala Ile Asp Pro His Leu Leu Leu Ser Val Met Pro Gln Leu Glu
275 280 285
Phe Lys Leu Lys Ser Asn Asp Gly Glu Glu Arg Leu Ala Val Val Arg
290 295 300
Leu Leu Ala Lys Leu Phe Gly Ser Lys Asp Ser Asp Leu Ala Thr Gln
305 310 315 320
Asn Arg Pro Leu Trp Gln Cys Phe Leu Gly Arg Phe Asn Asp Ile His
325 330 335
Val Pro Val Arg Leu Glu Ser Val Lys Phe Ala Ser His Cys Leu Met
340 345 350
Asn His Pro Asp Leu Ala Lys Asp Leu Thr Glu Tyr Leu Lys Val Arg
355 360 365
Ser His Asp Pro Glu Glu Ala Ile Arg His Asp Val Ile Val Thr Ile
370 375 380
Ile Thr Ala Ala Lys Arg Asp Leu Ala Leu Val Asn Asp Gln Leu Leu
385 390 395 400
Gly Phe Val Arg Glu Arg Thr Leu Asp Lys Arg Trp Arg Val Arg Lys
405 410 415
Glu Ala Met Met Gly Leu Ala Gln Leu Tyr Lys Lys Tyr Cys Leu His
420 425 430
Gly Glu Ala Gly Lys Glu Ala Ala Glu Lys Val Ser Trp Ile Lys Asp
435 440 445
Lys Leu Leu His Ile Tyr Tyr Gln Asn Ser Ile Asp Asp Lys Leu Leu
450 455 460
Val Glu Lys Ile Phe Ala Arg Tyr Leu Val Pro His Asn Leu Glu Thr
465 470 475 480
Glu Glu Arg Met Lys Cys Leu Tyr Tyr Leu Tyr Ala Ser Leu Asp Pro
485 490 495
Asn Ala Val Lys Ala Leu Asn Glu Met Trp Lys Cys Gln Asn Met Leu
500 505 510
Arg Ser His Val Arg Glu Leu Leu Asp Leu His Lys Gln Pro Thr Ser
515 520 525
Glu Ala Asn Cys Ser Ala Met Phe Gly Lys Leu Met Thr Ile Ala Lys
530 535 540
Asn Leu Pro Asp Pro Gly Lys Ala Gln Asp Phe Val Lys Lys Phe Asn
545 550 555 560
Gln Val Leu Gly Asp Asp Glu Lys Leu Arg Ser Gln Leu Glu Leu Leu
565 570 575
Ile Ser Pro Thr Cys Ser Cys Lys Gln Ala Asp Ile Cys Val Val Ser
580 585 590
Lys Ser Tyr Phe Thr Leu Phe Leu
595 600
<210> 63
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anchored primer for PIG54
<400> 63
aagctttttt ttttta 16
<210> 64
<211> 13
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H-AP15 primer for PIG54
<400> 64
aagcttacgc aac 13
<210> 65
<211> 526
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 65
cgcttctctg cactatgtcg ggtggcctcc tgaaggcgct gcgcagcgac tcctacgtgg 60
agctgagcca gtaccgggac cagcacttcc ggggtgacaa tgaagaacaa gaaaaattac 120
tgaagaaaag ctgtacgtta tatgttggaa atctttcttt ttacacaact gaagaacaaa 180
tctatgaact cttcagcaaa agtggtgaca taaagaaaat cattatgggt ctggataaaa 240
tgaagaaaac agcatgtgga ttctgttttg tggaatatta ctcacgcgca gatgcggaaa 300
acgccatgcg gtacataaat gggacgcgtc tggatgaccg aatcattcgc acagactggg 360
acgcaggctt taaggagggc aggcaatacg gccgtgggcg atctgggggc caggttcggg 420
atgagtatcg gcaggactac gatgctggga gaggaggcta tggaaaactg gcacagaacc 480
agtgagtggt gagagctctg tcagtgacaa acactccttt ggcctg 526
<210> 66
<211> 156
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 66
Met Ser Gly Gly Leu Leu Lys Ala Leu Arg Ser Asp Ser Tyr Val Glu
1 5 10 15
Leu Ser Gln Tyr Arg Asp Gln His Phe Arg Gly Asp Asn Glu Glu Gln
20 25 30
Glu Lys Leu Leu Lys Lys Ser Cys Thr Leu Tyr Val Gly Asn Leu Ser
35 40 45
Phe Tyr Thr Thr Glu Glu Gln Ile Tyr Glu Leu Phe Ser Lys Ser Gly
50 55 60
Asp Ile Lys Lys Ile Ile Met Gly Leu Asp Lys Met Lys Lys Thr Ala
65 70 75 80
Cys Gly Phe Cys Phe Val Glu Tyr Tyr Ser Arg Ala Asp Ala Glu Asn
85 90 95
Ala Met Arg Tyr Ile Asn Gly Thr Arg Leu Asp Asp Arg Ile Ile Arg
100 105 110
Thr Asp Trp Asp Ala Gly Phe Lys Glu Gly Arg Gln Tyr Gly Arg Gly
115 120 125
Arg Ser Gly Gly Gln Val Arg Asp Glu Tyr Arg Gln Asp Tyr Asp Ala
130 135 140
Gly Arg Gly Gly Tyr Gly Lys Leu Ala Gln Asn Gln
145 150 155
<210> 67
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anchored primer for PIG55
<400> 67
aagctttttt tttttg 16
<210> 68
<211> 13
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H-AP4 primer for PIG55
<400> 68
aagcttctca acg 13
<210> 69
<211> 1008
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 69
atggcggtgg acatcacgct gctattccgg gccagcgtca agaccgtgaa gacgcggaac 60
aaggcgctgg gagtggcggt gggcggcggg gtcgatggca gccgggacga gctgttccgc 120
cggagccccc ggcccaaggg cgacttctcc agccgggccc gcgaagtgat ttctcacatt 180
ggcaaactga gagattttct tctggaacac aggaaagatt atattaatgc ttatagccat 240
accatgtctg aatatgggag gatgacagac acagaacgag accagataga ccaggatgcc 300
cagatattca tgaggacctg ttcagaagca attcagcaac tacgaacaga agctcacaag 360
gagatacatt cccagcaagt gaaggagcac aggaccgctg ttttggattt cattgaagat 420
tacttgaaaa gagtatgtaa actttactca gaacagagag ccatccgagt taaaagagtg 480
gtggataaga aaagattatc taagctggaa ccagaaccaa atacaaagac aagagaatcc 540
acatcttctg agaaagtttc acagagtcct tcaaaagact ctgaagaaaa ccctgccact 600
gaagaacgtc cagaaaaaat tttggctgaa acacaacctg aattgggaac gtggggagat 660
ggcaaaggcg aagatgagtt atccccagaa gaaatacaaa tgtttgaaca ggaaaatcag 720
cgactaattg gtgaaatgaa cagcttgttt gatgaagtga ggcaaatcga agggagagtg 780
gttgagattt ccagactcca agagatattc acggaaaagg ttttgcaaca ggaagctgag 840
attgacagca ttcaccagtt agttgtgggg gcaactgaaa atatcaagga aggcaacgaa 900
gacataagag aggccattaa agacaacgct ggcttccgcg tgtggatcct cttcttcctc 960
gtgatgtgct ccttctcctt gctcttcctc gactggtacg acagctag 1008
<210> 70
<211> 335
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 70
Met Ala Val Asp Ile Thr Leu Leu Phe Arg Ala Ser Val Lys Thr Val
1 5 10 15
Lys Thr Arg Asn Lys Ala Leu Gly Val Ala Val Gly Gly Gly Val Asp
20 25 30
Gly Ser Arg Asp Glu Leu Phe Arg Arg Ser Pro Arg Pro Lys Gly Asp
35 40 45
Phe Ser Ser Arg Ala Arg Glu Val Ile Ser His Ile Gly Lys Leu Arg
50 55 60
Asp Phe Leu Leu Glu His Arg Lys Asp Tyr Ile Asn Ala Tyr Ser His
65 70 75 80
Thr Met Ser Glu Tyr Gly Arg Met Thr Asp Thr Glu Arg Asp Gln Ile
85 90 95
Asp Gln Asp Ala Gln Ile Phe Met Arg Thr Cys Ser Glu Ala Ile Gln
100 105 110
Gln Leu Arg Thr Glu Ala His Lys Glu Ile His Ser Gln Gln Val Lys
115 120 125
Glu His Arg Thr Ala Val Leu Asp Phe Ile Glu Asp Tyr Leu Lys Arg
130 135 140
Val Cys Lys Leu Tyr Ser Glu Gln Arg Ala Ile Arg Val Lys Arg Val
145 150 155 160
Val Asp Lys Lys Arg Leu Ser Lys Leu Glu Pro Glu Pro Asn Thr Lys
165 170 175
Thr Arg Glu Ser Thr Ser Ser Glu Lys Val Ser Gln Ser Pro Ser Lys
180 185 190
Asp Ser Glu Glu Asn Pro Ala Thr Glu Glu Arg Pro Glu Lys Ile Leu
195 200 205
Ala Glu Thr Gln Pro Glu Leu Gly Thr Trp Gly Asp Gly Lys Gly Glu
210 215 220
Asp Glu Leu Ser Pro Glu Glu Ile Gln Met Phe Glu Gln Glu Asn Gln
225 230 235 240
Arg Leu Ile Gly Glu Met Asn Ser Leu Phe Asp Glu Val Arg Gln Ile
245 250 255
Glu Gly Arg Val Val Glu Ile Ser Arg Leu Gln Glu Ile Phe Thr Glu
260 265 270
Lys Val Leu Gln Gln Glu Ala Glu Ile Asp Ser Ile His Gln Leu Val
275 280 285
Val Gly Ala Thr Glu Asn Ile Lys Glu Gly Asn Glu Asp Ile Arg Glu
290 295 300
Ala Ile Lys Asp Asn Ala Gly Phe Arg Val Trp Ile Leu Phe Phe Leu
305 310 315 320
Val Met Cys Ser Phe Ser Leu Leu Phe Leu Asp Trp Tyr Asp Ser
325 330 335
<210> 71
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anchored primer for GIG9
<400> 71
aagctttttt ttttta 16
<210> 72
<211> 13
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H-AP14 primer for GIG9
<400> 72
aagcttggag ctt 13
<210> 73
<211> 1382
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 73
agcagggtca ccatttgcag cgcaacatgg caggagctgg aggagggaat gatattcagt 60
ggtgtttttc tcaggtgaaa ggagcagtag atgatgatgt agcagaagca gatataattt 120
ctacagtaga atttaatcat tctggagaat tactagcaac aggagataaa ggtggtagag 180
ttgtcatctt tcaacaggag caggagaaca aaatccagtc tcatagcaga ggagaatata 240
atgtttacag caccttccag agccatgaac cagagtttga ctacttgaaa agtttagaaa 300
tagaagaaaa gatcaacaaa attaggtggt taccccagaa aaatgctgct cagtttttat 360
tgtctaccaa tgataaaaca ataaaattat ggaaaatcag tgaaagggac aaaagaccag 420
aagggtataa cttgaaagag gaggatggaa ggtatagaga tcctactaca gttactacac 480
tacgagtgcc agtctgtagg cctatggatc taatggttga ggccagtcca cgaagaatat 540
ttgccaatgc tcatacatat cacatcaact caatttctat taatagtgat tatgaaacat 600
atttatctgc agatgatttg cggattaatc tttggcatct ggaaattaca gacaggagtt 660
ttaacattgt ggatatcaag cctgccaata tggaagagct aacagaggtg attacagcag 720
cagaatttca tccaaacagc tgtaacacat ttgtatacag cagcagtaaa ggaactattc 780
ggctatgtga catgagggca tctgccctct gtgatagaca ttctaaattg tttgaagaac 840
ctgaagatcc cagtaacagg tcattttttt ccgaaatcat ctcctctatt tcggatgtaa 900
aattcagcca tagtggtcga tacatgatga ctagagacta tttgtcagtc aaaatttggg 960
acttaaatat ggaaaacagg cctgtggaaa cataccaggt gcatgaatac ctcagaagta 1020
aactctgttc actgtacgaa aatgactgca tatttgacaa atttgaatgt tgttggaatg 1080
gatctgacag tgttgtcatg actggatctt acaataattt cttcagaatg tttgacagaa 1140
acacaaagcg agacataacc ctagaagcat cgcgggaaaa caataagcct cgcacagttc 1200
tgaagcctcg caaagtctgt gcaagtggca agcgaaagaa agatgaaata agtgttgaca 1260
gcctagactt caataagaaa atccttcaca cagcctggca ccccaaggaa aatatcattg 1320
ccgtagctac tacaaacaat ctgtatatat ttcaagacaa agtgaattag ggttggcatt 1380
cc 1382
<210> 74
<211> 447
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 74
Met Ala Gly Ala Gly Gly Gly Asn Asp Ile Gln Trp Cys Phe Ser Gln
1 5 10 15
Val Lys Gly Ala Val Asp Asp Asp Val Ala Glu Ala Asp Ile Ile Ser
20 25 30
Thr Val Glu Phe Asn His Ser Gly Glu Leu Leu Ala Thr Gly Asp Lys
35 40 45
Gly Gly Arg Val Val Ile Phe Gln Gln Glu Gln Glu Asn Lys Ile Gln
50 55 60
Ser His Ser Arg Gly Glu Tyr Asn Val Tyr Ser Thr Phe Gln Ser His
65 70 75 80
Glu Pro Glu Phe Asp Tyr Leu Lys Ser Leu Glu Ile Glu Glu Lys Ile
85 90 95
Asn Lys Ile Arg Trp Leu Pro Gln Lys Asn Ala Ala Gln Phe Leu Leu
100 105 110
Ser Thr Asn Asp Lys Thr Ile Lys Leu Trp Lys Ile Ser Glu Arg Asp
115 120 125
Lys Arg Pro Glu Gly Tyr Asn Leu Lys Glu Glu Asp Gly Arg Tyr Arg
130 135 140
Asp Pro Thr Thr Val Thr Thr Leu Arg Val Pro Val Cys Arg Pro Met
145 150 155 160
Asp Leu Met Val Glu Ala Ser Pro Arg Arg Ile Phe Ala Asn Ala His
165 170 175
Thr Tyr His Ile Asn Ser Ile Ser Ile Asn Ser Asp Tyr Glu Thr Tyr
180 185 190
Leu Ser Ala Asp Asp Leu Arg Ile Asn Leu Trp His Leu Glu Ile Thr
195 200 205
Asp Arg Ser Phe Asn Ile Val Asp Ile Lys Pro Ala Asn Met Glu Glu
210 215 220
Leu Thr Glu Val Ile Thr Ala Ala Glu Phe His Pro Asn Ser Cys Asn
225 230 235 240
Thr Phe Val Tyr Ser Ser Ser Lys Gly Thr Ile Arg Leu Cys Asp Met
245 250 255
Arg Ala Ser Ala Leu Cys Asp Arg His Ser Lys Leu Phe Glu Glu Pro
260 265 270
Glu Asp Pro Ser Asn Arg Ser Phe Phe Ser Glu Ile Ile Ser Ser Ile
275 280 285
Ser Asp Val Lys Phe Ser His Ser Gly Arg Tyr Met Met Thr Arg Asp
290 295 300
Tyr Leu Ser Val Lys Ile Trp Asp Leu Asn Met Glu Asn Arg Pro Val
305 310 315 320
Glu Thr Tyr Gln Val His Glu Tyr Leu Arg Ser Lys Leu Cys Ser Leu
325 330 335
Tyr Glu Asn Asp Cys Ile Phe Asp Lys Phe Glu Cys Cys Trp Asn Gly
340 345 350
Ser Asp Ser Val Val Met Thr Gly Ser Tyr Asn Asn Phe Phe Arg Met
355 360 365
Phe Asp Arg Asn Thr Lys Arg Asp Ile Thr Leu Glu Ala Ser Arg Glu
370 375 380
Asn Asn Lys Pro Arg Thr Val Leu Lys Pro Arg Lys Val Cys Ala Ser
385 390 395 400
Gly Lys Arg Lys Lys Asp Glu Ile Ser Val Asp Ser Leu Asp Phe Asn
405 410 415
Lys Lys Ile Leu His Thr Ala Trp His Pro Lys Glu Asn Ile Ile Ala
420 425 430
Val Ala Thr Thr Asn Asn Leu Tyr Ile Phe Gln Asp Lys Val Asn
435 440 445
<210> 75
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anchored primer for HLC-9
<400> 75
aagctttttt tttttg 16
<210> 76
<211> 13
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H-AP7 primer for HLC-9
<400> 76
aagcttaacg agg 13
<210> 77
<211> 1301
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 77
atatggcacc tccgtcagtc tttgccgagg ttccgcaggc ccagcctgtc ctggtcttca 60
agctcactgc cgacttcagg gaggatccgg acccccgcaa ggtcaacctg ggagtgggag 120
catatcgcac ggatgactgc catccctggg ttttgccagt agtgaagaaa gtggagcaga 180
agattgctaa tgacaatagc ctaaatcacg agtatctgcc aatcctgggc ctggctgagt 240
tccggagctg tgcttctcgt cttgcccttg aggatgacag cccagcactc aaggagaagc 300
gggtaggagg tgtgcaatct ttggggggaa caggtgcact tcgaattgga gctgatttct 360
tagcgcgttg gtacaatgga acaaacaaca agaacacacc tgtctatgtg tcctcaccaa 420
cctgggagaa tcacaatgct gtgttttccg ctgctggttt taaagacatt cggtcctatc 480
gctactggga tgcagagaag agaggattgg acctccaggg cttcctgaat gatctggaga 540
atgctcctga gttctccatt gttgtcctcc acgcctgtgc acacaaccca actgggattg 600
acccaactcc ggagcagtgg aagcagattg cttctgtcat gaagcaccgg tttctgttcc 660
ccttctttga ctcagcctat cagggcttcg catctggaaa cctggagaga gatgcctggg 720
ccattcgcta ttttgtgtct gaaggcttcg agttcttctg tgcccagtcc ttctccaaga 780
acttcgggct ctacaatgag agagtcggga atctgactgt ggttggaaaa gaacctgaga 840
gcatcctgca agtcctttcc cagatggaga agatcgtgcg gattacttgg tccaatcccc 900
ccgcccaggg agcacgaatt gtggccagca ccctctctaa ccctgagctc tttgaggaat 960
ggacaggtaa tgtgaagaca atggctgacc ggattctgac catgagatct gaactcaggg 1020
cacgactaga agccctcaaa acccctggga cctggaacca catcactgat caaattggca 1080
tgttcagctt cactgggttg aaccccaagc aggttgagta tctggtcaat gaaaagcaca 1140
tctacctgct gccaagtggt cgaatcaacg tgagtggctt aaccaccaaa aatctagatt 1200
acgtggccac ctccatccat gaagcagtca ccaaaatcca gtgaagaaac accacccgtc 1260
cagtaccacc aaagtagttc tctgtcatgt gtgttccctg c 1301
<210> 78
<211> 413
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 78
Met Ala Pro Pro Ser Val Phe Ala Glu Val Pro Gln Ala Gln Pro Val
1 5 10 15
Leu Val Phe Lys Leu Thr Ala Asp Phe Arg Glu Asp Pro Asp Pro Arg
20 25 30
Lys Val Asn Leu Gly Val Gly Ala Tyr Arg Thr Asp Asp Cys His Pro
35 40 45
Trp Val Leu Pro Val Val Lys Lys Val Glu Gln Lys Ile Ala Asn Asp
50 55 60
Asn Ser Leu Asn His Glu Tyr Leu Pro Ile Leu Gly Leu Ala Glu Phe
65 70 75 80
Arg Ser Cys Ala Ser Arg Leu Ala Leu Glu Asp Asp Ser Pro Ala Leu
85 90 95
Lys Glu Lys Arg Val Gly Gly Val Gln Ser Leu Gly Gly Thr Gly Ala
100 105 110
Leu Arg Ile Gly Ala Asp Phe Leu Ala Arg Trp Tyr Asn Gly Thr Asn
115 120 125
Asn Lys Asn Thr Pro Val Tyr Val Ser Ser Pro Thr Trp Glu Asn His
130 135 140
Asn Ala Val Phe Ser Ala Ala Gly Phe Lys Asp Ile Arg Ser Tyr Arg
145 150 155 160
Tyr Trp Asp Ala Glu Lys Arg Gly Leu Asp Leu Gln Gly Phe Leu Asn
165 170 175
Asp Leu Glu Asn Ala Pro Glu Phe Ser Ile Val Val Leu His Ala Cys
180 185 190
Ala His Asn Pro Thr Gly Ile Asp Pro Thr Pro Glu Gln Trp Lys Gln
195 200 205
Ile Ala Ser Val Met Lys His Arg Phe Leu Phe Pro Phe Phe Asp Ser
210 215 220
Ala Tyr Gln Gly Phe Ala Ser Gly Asn Leu Glu Arg Asp Ala Trp Ala
225 230 235 240
Ile Arg Tyr Phe Val Ser Glu Gly Phe Glu Phe Phe Cys Ala Gln Ser
245 250 255
Phe Ser Lys Asn Phe Gly Leu Tyr Asn Glu Arg Val Gly Asn Leu Thr
260 265 270
Val Val Gly Lys Glu Pro Glu Ser Ile Leu Gln Val Leu Ser Gln Met
275 280 285
Glu Lys Ile Val Arg Ile Thr Trp Ser Asn Pro Pro Ala Gln Gly Ala
290 295 300
Arg Ile Val Ala Ser Thr Leu Ser Asn Pro Glu Leu Phe Glu Glu Trp
305 310 315 320
Thr Gly Asn Val Lys Thr Met Ala Asp Arg Ile Leu Thr Met Arg Ser
325 330 335
Glu Leu Arg Ala Arg Leu Glu Ala Leu Lys Thr Pro Gly Thr Trp Asn
340 345 350
His Ile Thr Asp Gln Ile Gly Met Phe Ser Phe Thr Gly Leu Asn Pro
355 360 365
Lys Gln Val Glu Tyr Leu Val Asn Glu Lys His Ile Tyr Leu Leu Pro
370 375 380
Ser Gly Arg Ile Asn Val Ser Gly Leu Thr Thr Lys Asn Leu Asp Tyr
385 390 395 400
Val Ala Thr Ser Ile His Glu Ala Val Thr Lys Ile Gln
405 410
<210> 79
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anchored primer for GIG18
<400> 79
aagctttttt tttttc 16
<210> 80
<211> 13
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H-AP4 primer for GIG18
<400> 80
aagcttctca acg 13
<210> 81
<211> 749
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 81
gcgactgaag cagcatggcc aagccgtgtg gggtgcgcct gagcggggaa gcccgcaaac 60
aggtggaggt cttcaggcag aatcttttcc aggaggctga ggaattcctc tacagattct 120
tgccacagaa aatcatatac ctgaatcagc tcttgcaaga ggactccctc aatgtggctg 180
acttgacttc cctccgggcc ccactggaca tccccatccc agaccctcca cccaaggatg 240
atgagatgga aacagataag caggagaaga aagaagtccc taagtgtgga tttctccctg 300
ggaatgagaa agtcctgtcc ctgcttgccc tggttaagcc agaagtctgg actctcaaag 360
agaaatgcat tctggtgatt acatggatcc aacacctgat ccccaagatt gaagatggaa 420
atgattttgg ggtagcaatc caggagaagg tgctggagag ggtgaatgcc gtcaagacca 480
aagtggaagc tttccagaca accatttcca agtacttctc agaacgtggg gatgctgtgg 540
ccaaggcctc caaggagacc catgtaatgg attaccgggc cttggtgcat gagcgagatg 600
aggcagccta tggggagctc agggccatgg tgctggacct gagggccttc tatgctgagc 660
tttatcatat catcagcagc aacctggaga aaattgtcac cccaaagggt gaagaaaagc 720
catctatgta ctgaacccgg gactagaag 749
<210> 82
<211> 239
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 82
Met Ala Lys Pro Cys Gly Val Arg Leu Ser Gly Glu Ala Arg Lys Gln
1 5 10 15
Val Glu Val Phe Arg Gln Asn Leu Phe Gln Glu Ala Glu Glu Phe Leu
20 25 30
Tyr Arg Phe Leu Pro Gln Lys Ile Ile Tyr Leu Asn Gln Leu Leu Gln
35 40 45
Glu Asp Ser Leu Asn Val Ala Asp Leu Thr Ser Leu Arg Ala Pro Leu
50 55 60
Asp Ile Pro Ile Pro Asp Pro Pro Pro Lys Asp Asp Glu Met Glu Thr
65 70 75 80
Asp Lys Gln Glu Lys Lys Glu Val Pro Lys Cys Gly Phe Leu Pro Gly
85 90 95
Asn Glu Lys Val Leu Ser Leu Leu Ala Leu Val Lys Pro Glu Val Trp
100 105 110
Thr Leu Lys Glu Lys Cys Ile Leu Val Ile Thr Trp Ile Gln His Leu
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165 170 175
Lys Ala Ser Lys Glu Thr His Val Met Asp Tyr Arg Ala Leu Val His
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- 서열 번호: 2; 서열 번호: 6; 서열 번호: 10; 서열 번호: 14; 서열 번호: 18; 서열 번호: 22; 서열 번호: 26;서열 번호: 30; 서열 번호: 34; 서열 번호: 38; 서열 번호: 42; 서열 번호: 46;서열 번호: 50; 서열 번호: 54; 서열 번호: 58; 서열 번호: 62의 아미노산 서열;서열번호: 66; 서열번호: 70; 서열번호: 74; 서열번호: 78; 또는 서열번호: 82를 갖는 원암 단백질
- 제1항의 단백질을 각각 코팅하는 서열번호: 1의 염기 번호 68 내지 1252에 해당하는 염기서열;서열번호: 5의 염기 번호 875 내지 1063에 해당하는 염기서열;서열번호: 9의 염기 번호 25 내지 1953에 해당하는 염기서열;서열번호: 13의 염기 번호 20 내지 337에 해당하는 염기서열;서열번호: 17의 염기 번호 33 내지 998에 해당하는 염기서열;서열번호: 21의 염기 번호 6 내지 2150에 해당하는 염기서열;서열번호: 25의 염기 번호 37 내지 2232에 해당하는 염기서열;서열번호: 29의 염기 번호 25 내지 1956에 해당하는 염기서열;서열번호: 33의 염기 번호 36 내지 1541에 해당하는 염기서열;서열번호: 37의 염기 번호 57 내지 758에 해당하는 염기서열;서열번호: 41의 염기 번호 55 내지 1512에 해당하는 염기서열;서열번호: 45의 염기 번호 5 내지 1297에 해당하는 염기서열;서열번호: 49의 염기 번호 56 내지 826에 해당하는 염기서열;서열번호: 53의 염기 번호 57 내지 1694에 해당하는 염기서열;서열번호: 57의 염기 번호 2 내지 595에 해당하는 염기서열;서열번호: 61의 염기 번호 38 내지 1840에 해당하는 염기서열;서열번호: 65의 염기 번호 15 내지 485에 해당하는 염기서열;서열번호: 69의 염기 번호 1 내지 1008에 해당하는 염기서열;서열번호: 73의 염기 번호 27 내지 1370에 해당하는 염기서열;서열번호: 77의 염기 번호 3 내지 1244에 해당하는 염기서열;또는 서열번호: 81의 염기 번호 15 내지 734에 해당하는 염기서열을 지닌 인간 원암 유전자
- 제 1 항의 원암 단백질을 포함하는 암 진단용 키트.
- 제2항의 원암 유전자를 포함하는 암 진단용 키트.
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