JP2002360254A - 新規膜結合型−分泌型ｍｅｇｆ８遺伝子及びそれにコードされる蛋白質 - Google Patents
新規膜結合型−分泌型ｍｅｇｆ８遺伝子及びそれにコードされる蛋白質Info
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- JP2002360254A JP2002360254A JP2001151059A JP2001151059A JP2002360254A JP 2002360254 A JP2002360254 A JP 2002360254A JP 2001151059 A JP2001151059 A JP 2001151059A JP 2001151059 A JP2001151059 A JP 2001151059A JP 2002360254 A JP2002360254 A JP 2002360254A
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Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【課題】 神経細胞の軸索の誘導や、心臓や骨格の発
達、免疫反応、血管形成、がんの成長と転移に関与して
いる可能性があるプレキシンドメインをもつ分子を同定
することにより、これらの分子が原因となる病気の診
断、治療法が確立すること。 【解決手段】 以下の（ａ）又は（ｂ）の蛋白質をコー
ドする塩基配列を含むＤＮＡ： （ａ）ヒト由来の特定ポリペプチドのアミノ酸配列と同
一又は実質的に同一のアミノ酸配列から成る蛋白質、
（ｂ）上記アミノ酸配列において、一部のアミノ酸が欠
失、置換又は付加されたアミノ酸配列から成り、結合型
ＭＥＧＦ８又は分泌型ＭＥＧＦ８と実質的に同質の生物
学的活性を有する蛋白質、及び上記ＤＮＡにコードされ
る組換え蛋白質。
達、免疫反応、血管形成、がんの成長と転移に関与して
いる可能性があるプレキシンドメインをもつ分子を同定
することにより、これらの分子が原因となる病気の診
断、治療法が確立すること。 【解決手段】 以下の（ａ）又は（ｂ）の蛋白質をコー
ドする塩基配列を含むＤＮＡ： （ａ）ヒト由来の特定ポリペプチドのアミノ酸配列と同
一又は実質的に同一のアミノ酸配列から成る蛋白質、
（ｂ）上記アミノ酸配列において、一部のアミノ酸が欠
失、置換又は付加されたアミノ酸配列から成り、結合型
ＭＥＧＦ８又は分泌型ＭＥＧＦ８と実質的に同質の生物
学的活性を有する蛋白質、及び上記ＤＮＡにコードされ
る組換え蛋白質。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、本発明は、９つの
プレキシンドメインを有するヒト由来の新規蛋白質であ
るＭＥＧＦ８及びそれらをコードするDNA及び遺伝子等
に関する。
プレキシンドメインを有するヒト由来の新規蛋白質であ
るＭＥＧＦ８及びそれらをコードするDNA及び遺伝子等
に関する。
【０００２】
【従来の技術】近年のノックアウトマウスの実験結果か
ら得られた知見から、重要な遺伝子の欠失が必ずしも病
気を引き起こすものではないことが明らかになってき
た。つまり、重要な遺伝子の欠失が起こると発生段階が
進まず、妊娠のかなり初期に流産してしまったり、逆に
重要な遺伝子ほど機能的に相補するシステムができあが
って無くなっても表現型にあらわれてこなかったりする
ことがある。このことは、ヒトの病気の大部分が単なる
遺伝子の欠失によって引き起こされるのではなくて、ア
ミノ酸置換によって蛋白質の機能や活性が一部分だけ変
化することに引き起こされる事を意味する。また、蛋白
質の一部のアミノ酸を人工的に変化させても全く蛋白質
の機能や活性に変化を及ぼさない部分も多いことがわか
っている。
ら得られた知見から、重要な遺伝子の欠失が必ずしも病
気を引き起こすものではないことが明らかになってき
た。つまり、重要な遺伝子の欠失が起こると発生段階が
進まず、妊娠のかなり初期に流産してしまったり、逆に
重要な遺伝子ほど機能的に相補するシステムができあが
って無くなっても表現型にあらわれてこなかったりする
ことがある。このことは、ヒトの病気の大部分が単なる
遺伝子の欠失によって引き起こされるのではなくて、ア
ミノ酸置換によって蛋白質の機能や活性が一部分だけ変
化することに引き起こされる事を意味する。また、蛋白
質の一部のアミノ酸を人工的に変化させても全く蛋白質
の機能や活性に変化を及ぼさない部分も多いことがわか
っている。
【０００３】このような観点から、遺伝子には、ヒトの
病気を引き起こしやすい遺伝子とヒトの病気を引き起こ
しにくい遺伝子が存在することになる。Nakayama et. a
l.,1998で議論しているように、EGF様モチーフ（EGF -l
ike motif）やカドヘリンドメインなどのドメインをタ
ンデムに持つマルチドメインで構成される巨大な蛋白質
の遺伝子は、最も病気の責任遺伝子となる可能性の高い
遺伝子群の一つである。
病気を引き起こしやすい遺伝子とヒトの病気を引き起こ
しにくい遺伝子が存在することになる。Nakayama et. a
l.,1998で議論しているように、EGF様モチーフ（EGF -l
ike motif）やカドヘリンドメインなどのドメインをタ
ンデムに持つマルチドメインで構成される巨大な蛋白質
の遺伝子は、最も病気の責任遺伝子となる可能性の高い
遺伝子群の一つである。
【０００４】EGF様ドメインは特徴的な３組のジスルフ
ィド結合を含み、約５０アミノ酸からなる構造ドメイン
であり、細胞接着や受容体とリガンドの相互作用などの
細胞外の現象に深く関わっている。実際に神経系の発生
に重要な役割を果たすノッチファミリーやリーリン、ア
グリン、テネイシンなどの蛋白質は細胞外部分に複数の
EGF様ドメインをもつ200〜400 kDaの大きな蛋白質であ
ることが知られている。
ィド結合を含み、約５０アミノ酸からなる構造ドメイン
であり、細胞接着や受容体とリガンドの相互作用などの
細胞外の現象に深く関わっている。実際に神経系の発生
に重要な役割を果たすノッチファミリーやリーリン、ア
グリン、テネイシンなどの蛋白質は細胞外部分に複数の
EGF様ドメインをもつ200〜400 kDaの大きな蛋白質であ
ることが知られている。
【０００５】システイン豊富なプレキシンドメインは、
いくつかの細胞外の受容体に見られる。プレキシン(Kun
imasa Ohta et. al. 1995 Neuron Vol. 14, 1189-119
9), (Hung-Hsiang Yu et. al. 1999 Neuron Vol. 22, 1
1-14),(Luca Tamagone et. al.1999 Cell Vol. 99, 71-
80),(Takuya Takahashi et. al. 1999 Vol. 99, 59-69)
には３つ、肥満に関与する受容体マホガニー (mahogany
protein)には２つ、センチュウの関連の蛋白質にも４
つ確認されている。また、肝細胞の成長因子受容体であ
るMet 受容体も１つのプレキシンドメインが確認されて
いる。
いくつかの細胞外の受容体に見られる。プレキシン(Kun
imasa Ohta et. al. 1995 Neuron Vol. 14, 1189-119
9), (Hung-Hsiang Yu et. al. 1999 Neuron Vol. 22, 1
1-14),(Luca Tamagone et. al.1999 Cell Vol. 99, 71-
80),(Takuya Takahashi et. al. 1999 Vol. 99, 59-69)
には３つ、肥満に関与する受容体マホガニー (mahogany
protein)には２つ、センチュウの関連の蛋白質にも４
つ確認されている。また、肝細胞の成長因子受容体であ
るMet 受容体も１つのプレキシンドメインが確認されて
いる。
【０００６】プレキシンは、アフリカツメガエルのプレ
キシン-1が最初に発見され、続いて3つのマウスのプレ
キシン1,2,3、そのヒトホモログとしてNov, OCT and SE
X、またショウジョウバエでは、プレキシンA,Bがみつか
った。
キシン-1が最初に発見され、続いて3つのマウスのプレ
キシン1,2,3、そのヒトホモログとしてNov, OCT and SE
X、またショウジョウバエでは、プレキシンA,Bがみつか
った。
【０００７】プレキシンはセマホリンの受容体である。
プレキシン及びセマホリンは、ファミリーを形成しそれ
らを構成する蛋白質間で特異的な結合をする。例えば、
プレキシンAとセマホリン1a、プレキシンB1とセマホリ
ン4D、プレキシンC1とセマホリン7Aなどである。プレキ
シンとセマホリンの相互相互作用は、神経細胞の軸索の
誘導や、心臓や骨格の発達、免疫反応、血管形成、がん
の成長と転移に関与していると考えられている。
プレキシン及びセマホリンは、ファミリーを形成しそれ
らを構成する蛋白質間で特異的な結合をする。例えば、
プレキシンAとセマホリン1a、プレキシンB1とセマホリ
ン4D、プレキシンC1とセマホリン7Aなどである。プレキ
シンとセマホリンの相互相互作用は、神経細胞の軸索の
誘導や、心臓や骨格の発達、免疫反応、血管形成、がん
の成長と転移に関与していると考えられている。
【０００８】一般的にプレキシンを発現する神経細胞の
軸索は、セマホリンから反発作用を受ける。同様の作用
は、エフリンとEph受容体チロシンキナーゼ、ネトリン
とUnc5(ネトリン受容体)にも見られる。
軸索は、セマホリンから反発作用を受ける。同様の作用
は、エフリンとEph受容体チロシンキナーゼ、ネトリン
とUnc5(ネトリン受容体)にも見られる。
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】今回、本発明者は、神
経細胞の軸索の誘導や、心臓や骨格の発達、免疫反応、
血管形成、がんの成長と転移に関与している可能性があ
るプレキシンドメインをもつ分子を同定することによ
り、これらの分子が原因となる病気の診断、治療法が確
立されることを期待し、新規なプレキシン分子の探索を
行った。その結果、ヒト脳由来のcDNAライブラリーから
プレキシンドメインを有する新規な膜結合型−分泌型Ｍ
ＥＧＦ８遺伝子を同定することに成功し、本発明を完成
した。
経細胞の軸索の誘導や、心臓や骨格の発達、免疫反応、
血管形成、がんの成長と転移に関与している可能性があ
るプレキシンドメインをもつ分子を同定することによ
り、これらの分子が原因となる病気の診断、治療法が確
立されることを期待し、新規なプレキシン分子の探索を
行った。その結果、ヒト脳由来のcDNAライブラリーから
プレキシンドメインを有する新規な膜結合型−分泌型Ｍ
ＥＧＦ８遺伝子を同定することに成功し、本発明を完成
した。
【００１０】
【課題を解決するための手段】即ち、本発明は第一の態
様として、以下の（ａ）又は（ｂ）の蛋白質をコードす
るＤＮＡに係る：以下の（ａ）又は（ｂ）の蛋白質をコ
ードする塩基配列を含むＤＮＡ： （ａ）配列番号：２又は４で示されるアミノ酸配列と同
一又は実質的に同一のアミノ酸配列から成る蛋白質、
（ｂ）配列番号：２又は４で示されるアミノ酸配列にお
いて、一部のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミ
ノ酸配列から成り、結合型ＭＥＧＦ８又は分泌型ＭＥＧ
Ｆ８と実質的に同質の生物学的活性を有する蛋白質。本
発明は第二の態様として、以下の（ａ）又は（ｂ）のＤ
ＮＡに係る： （ａ）配列番号：１又は３で示される塩基配列におい
て、配列番号：２又は４で示されるアミノ酸配列をコー
ドする塩基配列を含むＤＮＡ、(ｂ）（ａ）のＤＮＡと
ストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、結合型
ＭＥＧＦ８又は分泌型ＭＥＧＦ８と実質的に同質の生物
学的活性を有する蛋白質をコードするＤＮＡ。更に、第
三の態様として、上記のＤＮＡを含む遺伝子に係る。
様として、以下の（ａ）又は（ｂ）の蛋白質をコードす
るＤＮＡに係る：以下の（ａ）又は（ｂ）の蛋白質をコ
ードする塩基配列を含むＤＮＡ： （ａ）配列番号：２又は４で示されるアミノ酸配列と同
一又は実質的に同一のアミノ酸配列から成る蛋白質、
（ｂ）配列番号：２又は４で示されるアミノ酸配列にお
いて、一部のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミ
ノ酸配列から成り、結合型ＭＥＧＦ８又は分泌型ＭＥＧ
Ｆ８と実質的に同質の生物学的活性を有する蛋白質。本
発明は第二の態様として、以下の（ａ）又は（ｂ）のＤ
ＮＡに係る： （ａ）配列番号：１又は３で示される塩基配列におい
て、配列番号：２又は４で示されるアミノ酸配列をコー
ドする塩基配列を含むＤＮＡ、(ｂ）（ａ）のＤＮＡと
ストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、結合型
ＭＥＧＦ８又は分泌型ＭＥＧＦ８と実質的に同質の生物
学的活性を有する蛋白質をコードするＤＮＡ。更に、第
三の態様として、上記のＤＮＡを含む遺伝子に係る。
【００１１】又、本発明は、第四の態様として、以下の
（ａ）又は（ｂ）の組換え蛋白質に係る： （ａ）配列番号：２又は４で示されるアミノ酸配列と同
一又は実質的に同一のアミノ酸配列から成る蛋白質、
(ｂ）配列番号：２又は４で示されるアミノ酸配列にお
いて、一部のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミ
ノ酸配列から成り、結合型ＭＥＧＦ８又は分泌型ＭＥＧ
Ｆ８と実質的に同質の生物学的活性を有する蛋白質。更
に、第五の態様として、本発明遺伝子にコードされる組
換え蛋白質に係る。
（ａ）又は（ｂ）の組換え蛋白質に係る： （ａ）配列番号：２又は４で示されるアミノ酸配列と同
一又は実質的に同一のアミノ酸配列から成る蛋白質、
(ｂ）配列番号：２又は４で示されるアミノ酸配列にお
いて、一部のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミ
ノ酸配列から成り、結合型ＭＥＧＦ８又は分泌型ＭＥＧ
Ｆ８と実質的に同質の生物学的活性を有する蛋白質。更
に、第五の態様として、本発明遺伝子にコードされる組
換え蛋白質に係る。
【００１２】本発明は、本発明に係るＤＮＡ又は遺伝子
を含有する組換えベクター、該組換えベクターを保持す
る形質転換体、該形質転換体を培養し、本発明の組換え
蛋白質（以下、単に「本発明蛋白質」ともいう）を生
成、蓄積せしめ、これを採取することを特徴とする、本
発明の組換え蛋白質、又はその塩の製造方法、及び、こ
うして得られる本発明蛋白質又はその塩を提供する。
を含有する組換えベクター、該組換えベクターを保持す
る形質転換体、該形質転換体を培養し、本発明の組換え
蛋白質（以下、単に「本発明蛋白質」ともいう）を生
成、蓄積せしめ、これを採取することを特徴とする、本
発明の組換え蛋白質、又はその塩の製造方法、及び、こ
うして得られる本発明蛋白質又はその塩を提供する。
【００１３】又、本発明は、本発明ＤＮＡ若しくは遺伝
子又はその一部を含有してなる医薬、本発明蛋白質又は
その部分ポリペプチドをコードする塩基配列を有するポ
リヌクレオチド、それら塩基配列に実質的に相補的な塩
基配列を有するアンチセンスヌクレオチド、該ポリヌク
レオチド又はアンチセンスヌクレオチドを含有してなる
医薬、本発明蛋白質の部分ポリペプチド、本発明蛋白質
又はその部分ポリペプチドを含有してなる医薬、本発明
蛋白質若しくはその部分ポリペプチド又はそれらの塩に
対する抗体、本発明蛋白質若しくはその部分ポリペプチ
ド若しくはそれらの塩又はそれらに対する抗体を用いる
ことを特徴とするそれら物質と特異的に結合する物質の
スクリーニング方法、及び、スクリーニング用キット等
も提供する。
子又はその一部を含有してなる医薬、本発明蛋白質又は
その部分ポリペプチドをコードする塩基配列を有するポ
リヌクレオチド、それら塩基配列に実質的に相補的な塩
基配列を有するアンチセンスヌクレオチド、該ポリヌク
レオチド又はアンチセンスヌクレオチドを含有してなる
医薬、本発明蛋白質の部分ポリペプチド、本発明蛋白質
又はその部分ポリペプチドを含有してなる医薬、本発明
蛋白質若しくはその部分ポリペプチド又はそれらの塩に
対する抗体、本発明蛋白質若しくはその部分ポリペプチ
ド若しくはそれらの塩又はそれらに対する抗体を用いる
ことを特徴とするそれら物質と特異的に結合する物質の
スクリーニング方法、及び、スクリーニング用キット等
も提供する。
【００１４】本発明のMEGF8をコードするDNAは、クロン
テック社から市販されているヒト大人脳又は海馬由来の
mRNAを出発材料として、本発明者が調製したcDNAライブ
ラリーから、cDNA断片として単離した後に塩基配列を決
定し、同定したものである。
テック社から市販されているヒト大人脳又は海馬由来の
mRNAを出発材料として、本発明者が調製したcDNAライブ
ラリーから、cDNA断片として単離した後に塩基配列を決
定し、同定したものである。
【００１５】本発明ＤＮＡ又は遺伝子としては、前述し
た本発明蛋白質をコードする塩基配列を含むＤＮＡであ
ればいかなるものであってもよい。また、ヒトの脳、又
は、それ以外の組織、例えば、心臓、肺、肝臓、脾臓、
腎臓、精巣、等の細胞・組織に由来するｃＤＮＡライブ
ラリー等から同定・単離されたｃＤＮＡ、又は、合成Ｄ
ＮＡのいずれでもよい。ライブラリー作成に使用するベ
クターは、バクテリオファージ、プラスミド、コスミ
ド、ファージミドなどいずれであってもよい。また、前
記した細胞・組織よりtotalＲＮＡ画分またはｍＲＮＡ
画分を調製したものを用いて、直接ReverseTranscripti
on coupled Polymerase Chain Reaction（以下、「ＲＴ
-ＰＣＲ法」と略称する）によって増幅することもでき
る。
た本発明蛋白質をコードする塩基配列を含むＤＮＡであ
ればいかなるものであってもよい。また、ヒトの脳、又
は、それ以外の組織、例えば、心臓、肺、肝臓、脾臓、
腎臓、精巣、等の細胞・組織に由来するｃＤＮＡライブ
ラリー等から同定・単離されたｃＤＮＡ、又は、合成Ｄ
ＮＡのいずれでもよい。ライブラリー作成に使用するベ
クターは、バクテリオファージ、プラスミド、コスミ
ド、ファージミドなどいずれであってもよい。また、前
記した細胞・組織よりtotalＲＮＡ画分またはｍＲＮＡ
画分を調製したものを用いて、直接ReverseTranscripti
on coupled Polymerase Chain Reaction（以下、「ＲＴ
-ＰＣＲ法」と略称する）によって増幅することもでき
る。
【００１６】配列番号：２又は４で示されるアミノ酸配
列と実質的に同一のアミノ酸配列とは、配列番号：２又
は４で示される全アミノ酸配列との相同性の程度が、全
体の平均で約８０％以上、好ましくは約９０％以上であ
るアミノ酸配列を意味する。従って、本発明の配列番
号：２又は４で示されるアミノ酸配列と実質的に同一の
アミノ酸配列から成る蛋白質としては、例えば、前記の
配列番号：２又は４で示されるアミノ酸配列に対して上
記の相同性を有し、ヒトの膜結合型MEGF8又は分泌型MEG
F8と実質的に同質の生物学的活性を有する蛋白質を挙げ
ることが出来る。ここで、実質的に同質とは、それらの
活性が性質的に同質であることを示す。又、本発明蛋白
質には、例えば、配列番号：２又は４で示されるアミノ
酸配列中の一部（好ましくは、１〜２０個程度、より好
ましくは１〜１０個程度、さらに好ましくは数個）のア
ミノ酸が欠失、置換又は付加したアミノ酸配列、或いは
それらを組み合わせたアミノ酸配列から成り、ヒトの膜
結合型MEGF8又は分泌型MEGF8と実質的に同質の生物学的
活性を有するポリペプチドも含まれる。上記の配列番
号：２又は４で示されるアミノ酸配列中の一部のアミノ
酸が欠失、置換又は付加したアミノ酸配列、或いはそれ
らを組み合わせたアミノ酸配列から成り、ヒトの膜結合
型MEGF8又は分泌型MEGF8と実質的に同質の生物学的活性
を有するポリペプチドは、例えば、部位特異的変異導入
法、遺伝子相同組換え法、プライマー伸長法、及びPCR
等の当業者に周知の方法を適宜組み合わせて容易に作成
することが出来る。尚、その際に、実質的に同質の生物
学的活性を有するためには、当該ポリペプチドを構成す
るアミノ酸のうち、同族アミノ酸（極性・非極性アミノ
酸、疎水性アミノ酸・親水性アミノ酸、陽性・陰性荷電
アミノ酸、芳香族アミノ酸等）同士の置換が可能性とし
て考えられる。又、実質的に同質の生物学的活性を維持
するためには、本発明の各ポリペプチドに含有される機
能ドメイン内のアミノ酸は保持されることが好ましい。
列と実質的に同一のアミノ酸配列とは、配列番号：２又
は４で示される全アミノ酸配列との相同性の程度が、全
体の平均で約８０％以上、好ましくは約９０％以上であ
るアミノ酸配列を意味する。従って、本発明の配列番
号：２又は４で示されるアミノ酸配列と実質的に同一の
アミノ酸配列から成る蛋白質としては、例えば、前記の
配列番号：２又は４で示されるアミノ酸配列に対して上
記の相同性を有し、ヒトの膜結合型MEGF8又は分泌型MEG
F8と実質的に同質の生物学的活性を有する蛋白質を挙げ
ることが出来る。ここで、実質的に同質とは、それらの
活性が性質的に同質であることを示す。又、本発明蛋白
質には、例えば、配列番号：２又は４で示されるアミノ
酸配列中の一部（好ましくは、１〜２０個程度、より好
ましくは１〜１０個程度、さらに好ましくは数個）のア
ミノ酸が欠失、置換又は付加したアミノ酸配列、或いは
それらを組み合わせたアミノ酸配列から成り、ヒトの膜
結合型MEGF8又は分泌型MEGF8と実質的に同質の生物学的
活性を有するポリペプチドも含まれる。上記の配列番
号：２又は４で示されるアミノ酸配列中の一部のアミノ
酸が欠失、置換又は付加したアミノ酸配列、或いはそれ
らを組み合わせたアミノ酸配列から成り、ヒトの膜結合
型MEGF8又は分泌型MEGF8と実質的に同質の生物学的活性
を有するポリペプチドは、例えば、部位特異的変異導入
法、遺伝子相同組換え法、プライマー伸長法、及びPCR
等の当業者に周知の方法を適宜組み合わせて容易に作成
することが出来る。尚、その際に、実質的に同質の生物
学的活性を有するためには、当該ポリペプチドを構成す
るアミノ酸のうち、同族アミノ酸（極性・非極性アミノ
酸、疎水性アミノ酸・親水性アミノ酸、陽性・陰性荷電
アミノ酸、芳香族アミノ酸等）同士の置換が可能性とし
て考えられる。又、実質的に同質の生物学的活性を維持
するためには、本発明の各ポリペプチドに含有される機
能ドメイン内のアミノ酸は保持されることが好ましい。
【００１７】更に、本発明ＤＮＡ又は遺伝子は、例え
ば、配列番号：１又は３で示される塩基配列において、
配列番号：２又は４で示されるアミノ酸配列をコードす
る塩基配列を含むＤＮＡ、又は、該ＤＮＡとストリンジ
ェントな条件下でハイブリダイズし、ヒトの膜結合型ME
GF8又は分泌型MEGF8と同質の生物学的活性を有する蛋白
質をコードするＤＮＡであればいずれのものでもよい。
かかる条件下で、配列番号：１又は３で示される塩基配
列において、配列番号：２又は４で示されるアミノ酸配
列をコードする塩基配列を含むＤＮＡとハイブリダイズ
できるＤＮＡとしては、例えば、該ＤＮＡの全塩基配列
との相同性の程度が、全体の平均で約８０％以上、好ま
しくは約９０％以上である塩基配列を含有するＤＮＡ等
を挙げることが出来る。ハイブリダイゼーションは、カ
レントプロトコールズ イン モレキュラークローニン
グ(Current protocols in molecular biology (edited
by FrederickM. Ausubel et al., 1987 ))に記載の方法
等、当業者で公知の方法あるいはそれに準じる方法に従
って行うことができる。また、市販のライブラリーを使
用する場合、添付の記載の方法に従って行うことができ
る。ここで「ストリンジェントな条件」とは、例えば65
℃の1mM EDTAナトリウム、0.5Mリン酸水素ナトリウム(p
H7.2)、7% SDS 溶液中でハイブリダイズさせ、65℃の1m
M EDTAナトリウム、40mMリン酸水素ナトリウム(pH7.
2)、1% SDS中でメンブレンを洗浄する条件でのサザンブ
ロットハイブリダイゼーションで本発明遺伝子プローブ
にハイブリダイズする程度の条件である。
ば、配列番号：１又は３で示される塩基配列において、
配列番号：２又は４で示されるアミノ酸配列をコードす
る塩基配列を含むＤＮＡ、又は、該ＤＮＡとストリンジ
ェントな条件下でハイブリダイズし、ヒトの膜結合型ME
GF8又は分泌型MEGF8と同質の生物学的活性を有する蛋白
質をコードするＤＮＡであればいずれのものでもよい。
かかる条件下で、配列番号：１又は３で示される塩基配
列において、配列番号：２又は４で示されるアミノ酸配
列をコードする塩基配列を含むＤＮＡとハイブリダイズ
できるＤＮＡとしては、例えば、該ＤＮＡの全塩基配列
との相同性の程度が、全体の平均で約８０％以上、好ま
しくは約９０％以上である塩基配列を含有するＤＮＡ等
を挙げることが出来る。ハイブリダイゼーションは、カ
レントプロトコールズ イン モレキュラークローニン
グ(Current protocols in molecular biology (edited
by FrederickM. Ausubel et al., 1987 ))に記載の方法
等、当業者で公知の方法あるいはそれに準じる方法に従
って行うことができる。また、市販のライブラリーを使
用する場合、添付の記載の方法に従って行うことができ
る。ここで「ストリンジェントな条件」とは、例えば65
℃の1mM EDTAナトリウム、0.5Mリン酸水素ナトリウム(p
H7.2)、7% SDS 溶液中でハイブリダイズさせ、65℃の1m
M EDTAナトリウム、40mMリン酸水素ナトリウム(pH7.
2)、1% SDS中でメンブレンを洗浄する条件でのサザンブ
ロットハイブリダイゼーションで本発明遺伝子プローブ
にハイブリダイズする程度の条件である。
【００１８】配列番号:１又は３に示された塩基配列中
の適当な塩基配列を有する合成DNAプライマーを用いたP
CR法、若しくは配列番号:１又は３に示された塩基配列
中の適当な塩基配列を有する合成DNAをプローブとした
コロニーハイブリダイゼーションなどにより、上記の小
原他の方法で調製したヒトの脳由来のcDNAライブラリー
より本発明ＤＮＡ又は遺伝子の部分若しくは全体を単離
することができる。なお、当業者であればカレントプロ
トコールズ イン モレキュラー クローニング(Curren
t protocols in molecular biology (edited by Freder
ick M. Ausubel et al., 1987 ))に記載のPCR法等を用
いて単離した本発明ＤＮＡ又は遺伝子の任意の場所に変
異を導入することもできる。クローン化されたポリペプ
チドをコードする本発明のＤＮＡは目的によりそのま
ま、または所望により制限酵素で消化したり、リンカー
を付加したりして使用することができる。該ＤＮＡはそ
の５’末端側に翻訳開始コドンとしてのＡＴＧを有し、
また３’末端側には翻訳終止コドンとしてのＴＡＡ、Ｔ
ＧＡまたはＴＡＧを有していてもよい。これらの翻訳開
始コドンや翻訳終止コドンは、適当な合成ＤＮＡアダプ
ターを用いて付加することもできる。
の適当な塩基配列を有する合成DNAプライマーを用いたP
CR法、若しくは配列番号:１又は３に示された塩基配列
中の適当な塩基配列を有する合成DNAをプローブとした
コロニーハイブリダイゼーションなどにより、上記の小
原他の方法で調製したヒトの脳由来のcDNAライブラリー
より本発明ＤＮＡ又は遺伝子の部分若しくは全体を単離
することができる。なお、当業者であればカレントプロ
トコールズ イン モレキュラー クローニング(Curren
t protocols in molecular biology (edited by Freder
ick M. Ausubel et al., 1987 ))に記載のPCR法等を用
いて単離した本発明ＤＮＡ又は遺伝子の任意の場所に変
異を導入することもできる。クローン化されたポリペプ
チドをコードする本発明のＤＮＡは目的によりそのま
ま、または所望により制限酵素で消化したり、リンカー
を付加したりして使用することができる。該ＤＮＡはそ
の５’末端側に翻訳開始コドンとしてのＡＴＧを有し、
また３’末端側には翻訳終止コドンとしてのＴＡＡ、Ｔ
ＧＡまたはＴＡＧを有していてもよい。これらの翻訳開
始コドンや翻訳終止コドンは、適当な合成ＤＮＡアダプ
ターを用いて付加することもできる。
【００１９】本発明の組換え蛋白質の発現ベクターは、
当該技術分野で公知の方法に従って作成することが出来
る。例えば、（１）本発明遺伝子を含有するＤＮＡ断片
を切り出し、（２）該ＤＮＡ断片を適当な発現ベクター
中のプロモーターの下流に連結することにより製造する
ことができる。ベクターとしては、大腸菌由来のプラス
ミド（例、ｐＢＲ３２２，ｐＢＲ３２５，ｐＵＣ１８，
ｐＵＣ１１８）、枯草菌由来のプラスミド（例、ｐＵＢ
１１０，ｐＴＰ５，ｐＣ１９４）、酵母由来プラスミド
（例、ｐＳＨ１９，ｐＳＨ１５）、λファージなどのバ
クテリオファージ、レトロウイルス，ワクシニアウイル
ス，バキュロウイルスなどの動物ウイルス等を利用する
ことが出来る。本発明で用いられるプロモーターとして
は、遺伝子の発現に用いる宿主に対応した適切なプロモ
ーターであればいかなるものでもよい。例えば、宿主が
大腸菌である場合は、ｔｒｐプロモーター、ｌａｃプロ
モーター、ｒｅｃＡプロモーター、λＰLプロモータ
ー、ｌｐｐプロモーターなどが、宿主が枯草菌である場
合は、ＳＰＯ１プロモーター、ＳＰＯ２プロモーター、
ｐｅｎＰプロモーターなど、宿主が酵母である場合は、
ＰＨＯ５プロモーター、ＰＧＫプロモーター、ＧＡＰプ
ロモーター、ＡＤＨプロモーターなどが好ましい。動物
細胞を宿主として用いる場合は、ＳＲαプロモーター、
ＳＶ４０プロモーター、ＬＴＲプロモーター、ＣＭＶプ
ロモーター、ＨＳＶ-ＴＫプロモーターなどが挙げられ
る。
当該技術分野で公知の方法に従って作成することが出来
る。例えば、（１）本発明遺伝子を含有するＤＮＡ断片
を切り出し、（２）該ＤＮＡ断片を適当な発現ベクター
中のプロモーターの下流に連結することにより製造する
ことができる。ベクターとしては、大腸菌由来のプラス
ミド（例、ｐＢＲ３２２，ｐＢＲ３２５，ｐＵＣ１８，
ｐＵＣ１１８）、枯草菌由来のプラスミド（例、ｐＵＢ
１１０，ｐＴＰ５，ｐＣ１９４）、酵母由来プラスミド
（例、ｐＳＨ１９，ｐＳＨ１５）、λファージなどのバ
クテリオファージ、レトロウイルス，ワクシニアウイル
ス，バキュロウイルスなどの動物ウイルス等を利用する
ことが出来る。本発明で用いられるプロモーターとして
は、遺伝子の発現に用いる宿主に対応した適切なプロモ
ーターであればいかなるものでもよい。例えば、宿主が
大腸菌である場合は、ｔｒｐプロモーター、ｌａｃプロ
モーター、ｒｅｃＡプロモーター、λＰLプロモータ
ー、ｌｐｐプロモーターなどが、宿主が枯草菌である場
合は、ＳＰＯ１プロモーター、ＳＰＯ２プロモーター、
ｐｅｎＰプロモーターなど、宿主が酵母である場合は、
ＰＨＯ５プロモーター、ＰＧＫプロモーター、ＧＡＰプ
ロモーター、ＡＤＨプロモーターなどが好ましい。動物
細胞を宿主として用いる場合は、ＳＲαプロモーター、
ＳＶ４０プロモーター、ＬＴＲプロモーター、ＣＭＶプ
ロモーター、ＨＳＶ-ＴＫプロモーターなどが挙げられ
る。
【００２０】発現ベクターには、以上の他に、所望によ
り当該技術分野で公知の、エンハンサー、スプライシン
グシグナル、ポリＡ付加シグナル、選択マーカー、ＳＶ
４０複製オリジン等を付加することができる。また、必
要に応じて、本発明遺伝子にコードされた蛋白質を他の
蛋白質（例えば、グルタチオンＳトランスフェラーゼ及
びプロテインＡ）との融合蛋白質として発現させること
も可能である。このような融合蛋白質は、適用なプロテ
アーゼを使用して切断し、それぞれの蛋白質に分離する
ことが出来る。
り当該技術分野で公知の、エンハンサー、スプライシン
グシグナル、ポリＡ付加シグナル、選択マーカー、ＳＶ
４０複製オリジン等を付加することができる。また、必
要に応じて、本発明遺伝子にコードされた蛋白質を他の
蛋白質（例えば、グルタチオンＳトランスフェラーゼ及
びプロテインＡ）との融合蛋白質として発現させること
も可能である。このような融合蛋白質は、適用なプロテ
アーゼを使用して切断し、それぞれの蛋白質に分離する
ことが出来る。
【００２１】宿主細胞としては、例えば、エシェリヒア
属菌、バチルス属菌、酵母、昆虫細胞、昆虫、動物細胞
などが用いられる。エシェリヒア属菌の具体例として
は、エシェリヒア・コリ（Escherichia coli）Ｋ１２・
ＤＨ１（Proc. Natl. Acad. Sci. ＵＳＡ，６０巻，１
６０(１９６８)），ＪＭ１０３（Nucleic Acids Resear
ch，９巻，３０９(１９８１)），ＪＡ２２１（Journal
of Molecular Biology，１２０巻，５１７(１９７
８)），及びＨＢ１０１（Journal of Molecular Biolog
y，４１巻，４５９(１９６９)）等が用いられる。バチ
ルス属菌としては、例えば、バチルス・サチルス（Baci
llus subtilis）ＭＩ１１４（Gene，２４巻，２５５(１
９８３)），２０７−２１〔Journal of Biochemistry，
９５巻，８７(１９８４)〕等が用いられる。酵母として
は、例えば、サッカロマイセス セレビシエ（Saccaromy
ces cerevisiae）ＡＨ２２，ＡＨ２２Ｒ-，ＮＡ８７−
１１Ａ，ＤＫＤ−５Ｄ，２０Ｂ−１２、シゾサッカロマ
イセス ポンベ（Schizosaccaromyces pombe）ＮＣＹＣ
１９１３，ＮＣＹＣ２０３６、サッカロマイセス ピキ
ア パストリス（Saccaromycespicjia pastoris）等が用
いられる。動物細胞としては、例えば、サル細胞ＣＯＳ
−７，Ｖero，チャイニーズハムスター細胞ＣＨＯ（以
下、「ＣＨＯ細胞」と略記），ｄｈｆｒ遺伝子欠損ＣＨ
Ｏ細胞，マウスＬ細胞，マウスＡｔＴ−２０，マウスミ
エローマ細胞，ラットＧＨ３，ヒトＦＬ細胞などが用い
られる。
属菌、バチルス属菌、酵母、昆虫細胞、昆虫、動物細胞
などが用いられる。エシェリヒア属菌の具体例として
は、エシェリヒア・コリ（Escherichia coli）Ｋ１２・
ＤＨ１（Proc. Natl. Acad. Sci. ＵＳＡ，６０巻，１
６０(１９６８)），ＪＭ１０３（Nucleic Acids Resear
ch，９巻，３０９(１９８１)），ＪＡ２２１（Journal
of Molecular Biology，１２０巻，５１７(１９７
８)），及びＨＢ１０１（Journal of Molecular Biolog
y，４１巻，４５９(１９６９)）等が用いられる。バチ
ルス属菌としては、例えば、バチルス・サチルス（Baci
llus subtilis）ＭＩ１１４（Gene，２４巻，２５５(１
９８３)），２０７−２１〔Journal of Biochemistry，
９５巻，８７(１９８４)〕等が用いられる。酵母として
は、例えば、サッカロマイセス セレビシエ（Saccaromy
ces cerevisiae）ＡＨ２２，ＡＨ２２Ｒ-，ＮＡ８７−
１１Ａ，ＤＫＤ−５Ｄ，２０Ｂ−１２、シゾサッカロマ
イセス ポンベ（Schizosaccaromyces pombe）ＮＣＹＣ
１９１３，ＮＣＹＣ２０３６、サッカロマイセス ピキ
ア パストリス（Saccaromycespicjia pastoris）等が用
いられる。動物細胞としては、例えば、サル細胞ＣＯＳ
−７，Ｖero，チャイニーズハムスター細胞ＣＨＯ（以
下、「ＣＨＯ細胞」と略記），ｄｈｆｒ遺伝子欠損ＣＨ
Ｏ細胞，マウスＬ細胞，マウスＡｔＴ−２０，マウスミ
エローマ細胞，ラットＧＨ３，ヒトＦＬ細胞などが用い
られる。
【００２２】これら宿主細胞の形質転換は、当該技術分
野で公知の方法に従って行うことが出来る。例えば、以
下に記載の文献を参照することが出来る。 Proc. Natl. Acad. Sci. ＵＳＡ，６９巻，２１１０(１
９７２)； Gene，１７巻，１０７(１９８２)；Molecula
r ＆ General Genetics，１６８巻，１１１(１９７
９)；Methods in Enzymology，１９４巻，１８２−１８
７（１９９１）；Proc. Natl. Acad. Sci. ＵＳＡ），
７５巻，１９２９(１９７８)；細胞工学別冊８ 新 細胞
工学実験プロトコール．２６３−２６７（１９９５）
（秀潤社発行）；及び Virology，５２巻，４５６(１９
７３)。
野で公知の方法に従って行うことが出来る。例えば、以
下に記載の文献を参照することが出来る。 Proc. Natl. Acad. Sci. ＵＳＡ，６９巻，２１１０(１
９７２)； Gene，１７巻，１０７(１９８２)；Molecula
r ＆ General Genetics，１６８巻，１１１(１９７
９)；Methods in Enzymology，１９４巻，１８２−１８
７（１９９１）；Proc. Natl. Acad. Sci. ＵＳＡ），
７５巻，１９２９(１９７８)；細胞工学別冊８ 新 細胞
工学実験プロトコール．２６３−２６７（１９９５）
（秀潤社発行）；及び Virology，５２巻，４５６(１９
７３)。
【００２３】このようにして得られた、本発明ＤＮＡ又
は遺伝子若しくはこれらを含有する発現ベクターで形質
転換された形質転換体は、当該技術分野で公知の方法に
従って培養することが出来る。例えば、以下に記載の文
献を参照することが出来る。例えば、宿主がエシェリヒ
ア属菌の場合、培養は通常約１５〜４３℃で約３〜２４
時間行ない、必要により、通気や撹拌を加えることもで
きる。宿主がバチルス属菌の場合、培養は通常、約３０
〜４０℃で約６〜２４時間行ない、必要により通気や撹
拌を加えることもできる。宿主が酵母である形質転換体
を培養する際、培養は通常、ｐＨ約５〜８に調整された
培地を用いて約２０℃〜３５℃で約２４〜７２時間行な
い、必要に応じて通気や撹拌を加えることもできる。宿
主が動物細胞である形質転換体を培養する際、ｐＨは約
６〜８に調整された培地を用いて、通常約３０℃〜４０
℃で約１５〜６０時間行ない、必要に応じて通気や撹拌
を加えることもできる。
は遺伝子若しくはこれらを含有する発現ベクターで形質
転換された形質転換体は、当該技術分野で公知の方法に
従って培養することが出来る。例えば、以下に記載の文
献を参照することが出来る。例えば、宿主がエシェリヒ
ア属菌の場合、培養は通常約１５〜４３℃で約３〜２４
時間行ない、必要により、通気や撹拌を加えることもで
きる。宿主がバチルス属菌の場合、培養は通常、約３０
〜４０℃で約６〜２４時間行ない、必要により通気や撹
拌を加えることもできる。宿主が酵母である形質転換体
を培養する際、培養は通常、ｐＨ約５〜８に調整された
培地を用いて約２０℃〜３５℃で約２４〜７２時間行な
い、必要に応じて通気や撹拌を加えることもできる。宿
主が動物細胞である形質転換体を培養する際、ｐＨは約
６〜８に調整された培地を用いて、通常約３０℃〜４０
℃で約１５〜６０時間行ない、必要に応じて通気や撹拌
を加えることもできる。
【００２４】上記培養物から本発明蛋白質を分離精製す
るには、例えば、培養後、公知の方法で菌体あるいは細
胞を集め、これを適当な緩衝液に懸濁し、超音波、リゾ
チームおよび／または凍結融解などによって菌体あるい
は細胞を破壊したのち、遠心分離やろ過により蛋白質の
粗抽出液を得る。緩衝液の中に尿素や塩酸グアニジンな
どの蛋白質変性剤や、トリトンＸ−１００TMなどの界面
活性剤が含まれていてもよい。培養液中に蛋白質が分泌
される場合には、培養終了後、公知の方法で菌体あるい
は細胞と上清とを分離し、上清を集める。このようにし
て得られた培養上清、あるいは抽出液中に含まれる蛋白
質の精製は、公知の分離・精製法を適切に組み合わせて
行なうことができる。こうして得られた本発明蛋白質
は、公知の方法あるいはそれに準じる方法によって塩に
変換することができ、逆に塩で得られた場合には公知の
方法あるいはそれに準じる方法により、遊離体または他
の塩に変換することができる。更に、組換え体が産生す
る蛋白質を、精製前または精製後に、トリプシン及びキ
モトリプシンのような適当な蛋白修飾酵素を作用させる
ことにより、任意に修飾を加えたり、ポリペプチドを部
分的に除去することもできる。本発明蛋白質又はその塩
の存在は、様々な結合アッセイ及び特異抗体を用いたエ
ンザイムイムノアッセイ等により測定することができ
る。
るには、例えば、培養後、公知の方法で菌体あるいは細
胞を集め、これを適当な緩衝液に懸濁し、超音波、リゾ
チームおよび／または凍結融解などによって菌体あるい
は細胞を破壊したのち、遠心分離やろ過により蛋白質の
粗抽出液を得る。緩衝液の中に尿素や塩酸グアニジンな
どの蛋白質変性剤や、トリトンＸ−１００TMなどの界面
活性剤が含まれていてもよい。培養液中に蛋白質が分泌
される場合には、培養終了後、公知の方法で菌体あるい
は細胞と上清とを分離し、上清を集める。このようにし
て得られた培養上清、あるいは抽出液中に含まれる蛋白
質の精製は、公知の分離・精製法を適切に組み合わせて
行なうことができる。こうして得られた本発明蛋白質
は、公知の方法あるいはそれに準じる方法によって塩に
変換することができ、逆に塩で得られた場合には公知の
方法あるいはそれに準じる方法により、遊離体または他
の塩に変換することができる。更に、組換え体が産生す
る蛋白質を、精製前または精製後に、トリプシン及びキ
モトリプシンのような適当な蛋白修飾酵素を作用させる
ことにより、任意に修飾を加えたり、ポリペプチドを部
分的に除去することもできる。本発明蛋白質又はその塩
の存在は、様々な結合アッセイ及び特異抗体を用いたエ
ンザイムイムノアッセイ等により測定することができ
る。
【００２５】本発明の組換え蛋白質は、Ｃ末端が通常カ
ルボキシル基（−ＣＯＯＨ）またはカルボキシレート
(−ＣＯＯ-）であるが、Ｃ末端がアミド（−ＣＯＮ
Ｈ2）またはエステル（−ＣＯＯＲ）であってもよい。
ここでエステルにおけるＲとしては、例えば、メチル、
エチル、ｎ−プロピル、イソプロピルもしくはｎ−ブチ
ルなどのＣ1-6アルキル基、例えば、シクロペンチル、
シクロヘキシルなどのＣ3-8シクロアルキル基、例え
ば、フェニル、α−ナフチルなどのＣ6-12アリール基、
例えば、ベンジル、フェネチルなどのフェニル−Ｃ1-2
アルキル基もしくはα−ナフチルメチルなどのα−ナフ
チル−Ｃ1-2アルキル基などのＣ7-14アラルキル基のほ
か、経口用エステルとして汎用されるピバロイルオキシ
メチルエステルなどが用いられる。
ルボキシル基（−ＣＯＯＨ）またはカルボキシレート
(−ＣＯＯ-）であるが、Ｃ末端がアミド（−ＣＯＮ
Ｈ2）またはエステル（−ＣＯＯＲ）であってもよい。
ここでエステルにおけるＲとしては、例えば、メチル、
エチル、ｎ−プロピル、イソプロピルもしくはｎ−ブチ
ルなどのＣ1-6アルキル基、例えば、シクロペンチル、
シクロヘキシルなどのＣ3-8シクロアルキル基、例え
ば、フェニル、α−ナフチルなどのＣ6-12アリール基、
例えば、ベンジル、フェネチルなどのフェニル−Ｃ1-2
アルキル基もしくはα−ナフチルメチルなどのα−ナフ
チル−Ｃ1-2アルキル基などのＣ7-14アラルキル基のほ
か、経口用エステルとして汎用されるピバロイルオキシ
メチルエステルなどが用いられる。
【００２６】本発明蛋白質がＣ末端以外にカルボキシル
基（またはカルボキシレート）を有している場合、カル
ボキシル基がアミド化またはエステル化されているもの
も本発明の組換え蛋白質に含まれる。この場合のエステ
ルとしては、例えば上記したＣ末端のエステルなどが用
いられる。さらに、本発明の組換え蛋白質には、Ｎ末端
のメチオニン残基のアミノ基が保護基（例えば、ホルミ
ル基、アセチル基などのＣ1-6アシル基など）で保護さ
れているもの、生体内で切断されて生成するＮ末端のグ
ルタミン酸残基がピログルタミン化したもの、分子内の
アミノ酸の側鎖上にある、例えばＯＨ、ＣＯＯＨ、ＮＨ
2、ＳＨなどが適当な保護基（例えば、ホルミル基、ア
セチル基などのＣ1-6アシル基など）で保護されている
もの、あるいは糖鎖が結合したいわゆる糖蛋白質などの
複合蛋白質なども含まれる。
基（またはカルボキシレート）を有している場合、カル
ボキシル基がアミド化またはエステル化されているもの
も本発明の組換え蛋白質に含まれる。この場合のエステ
ルとしては、例えば上記したＣ末端のエステルなどが用
いられる。さらに、本発明の組換え蛋白質には、Ｎ末端
のメチオニン残基のアミノ基が保護基（例えば、ホルミ
ル基、アセチル基などのＣ1-6アシル基など）で保護さ
れているもの、生体内で切断されて生成するＮ末端のグ
ルタミン酸残基がピログルタミン化したもの、分子内の
アミノ酸の側鎖上にある、例えばＯＨ、ＣＯＯＨ、ＮＨ
2、ＳＨなどが適当な保護基（例えば、ホルミル基、ア
セチル基などのＣ1-6アシル基など）で保護されている
もの、あるいは糖鎖が結合したいわゆる糖蛋白質などの
複合蛋白質なども含まれる。
【００２７】本発明の組換え蛋白質の部分ポリペプチド
としては、前記した本発明蛋白質の部分ポリペプチドで
あって、実質的に同質の活性を有するものであればいず
れのものでもよい。例えば、本発明蛋白質の構成アミノ
酸配列のうち少なくとも２０個以上、好ましくは５０個
以上、さらに好ましくは７０個以上、より好ましくは１
００個以上、最も好ましくは２００個以上を有する部分
ポリペプチドを挙げることが出来る。更に、例えば、ヒ
トの膜結合型ＭＥＧＦ８又は分泌型ＭＥＧＦ８蛋白質と
実質的に同質の生物学的活性を有するペプチドなどが用
いられる。部分ポリペプチドとしては、例えば、プレキ
シドメイン等の本発明の蛋白質における機能的ドメイン
を含むものが好ましい。又、本発明の部分ポリペプチド
はＣ末端が通常カルボキシル基（−ＣＯＯＨ）またはカ
ルボキシレート（−ＣＯＯ-）であるが、前記した本発
明の蛋白質のごとく、Ｃ末端がアミド（−ＣＯＮＨ2 ）
またはエステル（−ＣＯＯＲ）であってもよい。さら
に、本発明の部分ポリペプチドには、前記した本発明の
蛋白質と同様に、Ｎ末端のメチオニン残基のアミノ基が
保護基で保護されているもの、Ｎ端側が生体内で切断さ
れ生成したグルタミル基がピログルタミン酸化したも
の、分子内のアミノ酸の側鎖上の置換基が適当な保護基
で保護されているもの、あるいは糖鎖が結合した、いわ
ゆる糖ペプチドなどの複合ペプチドなども含まれる。
としては、前記した本発明蛋白質の部分ポリペプチドで
あって、実質的に同質の活性を有するものであればいず
れのものでもよい。例えば、本発明蛋白質の構成アミノ
酸配列のうち少なくとも２０個以上、好ましくは５０個
以上、さらに好ましくは７０個以上、より好ましくは１
００個以上、最も好ましくは２００個以上を有する部分
ポリペプチドを挙げることが出来る。更に、例えば、ヒ
トの膜結合型ＭＥＧＦ８又は分泌型ＭＥＧＦ８蛋白質と
実質的に同質の生物学的活性を有するペプチドなどが用
いられる。部分ポリペプチドとしては、例えば、プレキ
シドメイン等の本発明の蛋白質における機能的ドメイン
を含むものが好ましい。又、本発明の部分ポリペプチド
はＣ末端が通常カルボキシル基（−ＣＯＯＨ）またはカ
ルボキシレート（−ＣＯＯ-）であるが、前記した本発
明の蛋白質のごとく、Ｃ末端がアミド（−ＣＯＮＨ2 ）
またはエステル（−ＣＯＯＲ）であってもよい。さら
に、本発明の部分ポリペプチドには、前記した本発明の
蛋白質と同様に、Ｎ末端のメチオニン残基のアミノ基が
保護基で保護されているもの、Ｎ端側が生体内で切断さ
れ生成したグルタミル基がピログルタミン酸化したも
の、分子内のアミノ酸の側鎖上の置換基が適当な保護基
で保護されているもの、あるいは糖鎖が結合した、いわ
ゆる糖ペプチドなどの複合ペプチドなども含まれる。
【００２８】本発明蛋白質又はその部分ポリペプチドの
塩としては、とりわけ生理学的に許容される酸付加塩が
好ましい。この様な塩としては、例えば、無機酸（例え
ば、塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫酸）との塩、あるい
は有機酸（例えば、酢酸、ギ酸、プロピオン酸、フマル
酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、リンゴ
酸、蓚酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスル
ホン酸）との塩などが用いられる。
塩としては、とりわけ生理学的に許容される酸付加塩が
好ましい。この様な塩としては、例えば、無機酸（例え
ば、塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫酸）との塩、あるい
は有機酸（例えば、酢酸、ギ酸、プロピオン酸、フマル
酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、リンゴ
酸、蓚酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスル
ホン酸）との塩などが用いられる。
【００２９】本発明蛋白質、その部分ポリペプチドもし
くはそれらの塩またはそれらのアミド体は、当該技術分
野で公知の化学合成方法を用いて調製することも出来
る。例えば、通常市販されている蛋白質合成用樹脂を用
い、α−アミノ基と側鎖官能基を適当に保護したアミノ
酸を、目的とする蛋白質の配列通りに、当業界において
自体公知の各種縮合方法に従い、樹脂上で縮合させる。
反応の最後に樹脂から蛋白質を切り出すと同時に各種保
護基を除去し、さらに高希釈溶液中で分子内ジスルフィ
ド結合形成反応を実施し、目的の蛋白質、その部分ポリ
ペプチドまたはそれらのアミド体を取得する。上記した
保護アミノ酸の縮合に関しては、例えば、DCC、N,N'-ジ
イソプロピルカルボジイミド、及びN-エチル-N'-(3-ジ
メチルアミノプロリル）カルボジイミドのようなカルボ
ジイミド類に代表される蛋白質合成に使用できる各種活
性化試薬を用いることができる。これらによる活性化に
はラセミ化抑制添加剤（例えば、HOBt, HOOBt)とともに
保護アミノ酸を直接樹脂に添加するかまたは、対称酸無
水物またはHOBtエステルあるいはHOOBtエステルとして
あらかじめ保護アミノ酸の活性化を行なった後に樹脂に
添加することができる。
くはそれらの塩またはそれらのアミド体は、当該技術分
野で公知の化学合成方法を用いて調製することも出来
る。例えば、通常市販されている蛋白質合成用樹脂を用
い、α−アミノ基と側鎖官能基を適当に保護したアミノ
酸を、目的とする蛋白質の配列通りに、当業界において
自体公知の各種縮合方法に従い、樹脂上で縮合させる。
反応の最後に樹脂から蛋白質を切り出すと同時に各種保
護基を除去し、さらに高希釈溶液中で分子内ジスルフィ
ド結合形成反応を実施し、目的の蛋白質、その部分ポリ
ペプチドまたはそれらのアミド体を取得する。上記した
保護アミノ酸の縮合に関しては、例えば、DCC、N,N'-ジ
イソプロピルカルボジイミド、及びN-エチル-N'-(3-ジ
メチルアミノプロリル）カルボジイミドのようなカルボ
ジイミド類に代表される蛋白質合成に使用できる各種活
性化試薬を用いることができる。これらによる活性化に
はラセミ化抑制添加剤（例えば、HOBt, HOOBt)とともに
保護アミノ酸を直接樹脂に添加するかまたは、対称酸無
水物またはHOBtエステルあるいはHOOBtエステルとして
あらかじめ保護アミノ酸の活性化を行なった後に樹脂に
添加することができる。
【００３０】保護アミノ酸の活性化や樹脂との縮合に用
いられる溶媒としては、酸アミド類、ハロゲン化炭化水
素類、アルコール類、スルオキシド類、及びエーテル類
等、当業界において蛋白質縮合反応に使用しうることが
知られている溶媒から適宜選択されうる。反応温度は蛋
白質結合形成反応に使用され得ることが知られている範
囲から適宜選択される。活性化されたアミノ酸誘導体は
通常１.５〜４倍過剰で用いられる。ニンヒドリン反応
を用いたテストの結果、縮合が不十分な場合には保護基
の脱離を行うことなく縮合反応を繰り返すことにより十
分な縮合を行なうことができる。反応を繰り返しても十
分な縮合が得られないときには、無水酢酸またはアセチ
ルイミダゾールを用いて未反応アミノ酸をアセチル化し
て、後の反応に影響を及ぼさないようにすることができ
る。原料の各アミノ基、カルボキシル基、及びセリン水
酸基等の保護基としても、当該技術分野において、通常
使用される基を使用することができる。原料の反応に関
与すべきでない官能基の保護ならびに保護基、およびそ
の保護基の脱離、反応に関与する官能基の活性化などは
公知の基または公知の手段から適宜選択しうる。
いられる溶媒としては、酸アミド類、ハロゲン化炭化水
素類、アルコール類、スルオキシド類、及びエーテル類
等、当業界において蛋白質縮合反応に使用しうることが
知られている溶媒から適宜選択されうる。反応温度は蛋
白質結合形成反応に使用され得ることが知られている範
囲から適宜選択される。活性化されたアミノ酸誘導体は
通常１.５〜４倍過剰で用いられる。ニンヒドリン反応
を用いたテストの結果、縮合が不十分な場合には保護基
の脱離を行うことなく縮合反応を繰り返すことにより十
分な縮合を行なうことができる。反応を繰り返しても十
分な縮合が得られないときには、無水酢酸またはアセチ
ルイミダゾールを用いて未反応アミノ酸をアセチル化し
て、後の反応に影響を及ぼさないようにすることができ
る。原料の各アミノ基、カルボキシル基、及びセリン水
酸基等の保護基としても、当該技術分野において、通常
使用される基を使用することができる。原料の反応に関
与すべきでない官能基の保護ならびに保護基、およびそ
の保護基の脱離、反応に関与する官能基の活性化などは
公知の基または公知の手段から適宜選択しうる。
【００３１】本発明の部分ポリペプチドまたはそれらの
塩は、当該技術分野において自体公知のペプチドの合成
法に従って、あるいは本発明の組換え蛋白質を適当なペ
プチダーゼで切断することによって製造することができ
る。ペプチドの合成法としては、例えば、固相合成法、
液相合成法のいずれによっても良い。公知の縮合方法や
保護基の脱離としては、例えば、以下の（１）〜（３）
に記載された方法が挙げられる。 （１）泉屋信夫他、ペプチド合成の基礎と実験、 丸善
(株) （1975年） （２）矢島治明 および榊原俊平、生化学実験講座 1、
蛋白質の化学IV、 205、(1977年) （３）矢島治明監修、続医薬品の開発 第14巻 ペプチド
合成 広川書店 反応後の精製も自体公知の方法、例えば、溶媒抽出・蒸
留・カラムクロマトグラフィー・液体クロマトグラフィ
ー・再結晶などを組み合わせて本発明の部分ポリペプチ
ドを精製単離することができる。上記方法で得られる部
分ポリペプチドが遊離体である場合は、公知の方法によ
って適当な塩に変換することができるし、逆に塩で得ら
れた場合は、公知の方法によって遊離体に変換すること
ができる。
塩は、当該技術分野において自体公知のペプチドの合成
法に従って、あるいは本発明の組換え蛋白質を適当なペ
プチダーゼで切断することによって製造することができ
る。ペプチドの合成法としては、例えば、固相合成法、
液相合成法のいずれによっても良い。公知の縮合方法や
保護基の脱離としては、例えば、以下の（１）〜（３）
に記載された方法が挙げられる。 （１）泉屋信夫他、ペプチド合成の基礎と実験、 丸善
(株) （1975年） （２）矢島治明 および榊原俊平、生化学実験講座 1、
蛋白質の化学IV、 205、(1977年) （３）矢島治明監修、続医薬品の開発 第14巻 ペプチド
合成 広川書店 反応後の精製も自体公知の方法、例えば、溶媒抽出・蒸
留・カラムクロマトグラフィー・液体クロマトグラフィ
ー・再結晶などを組み合わせて本発明の部分ポリペプチ
ドを精製単離することができる。上記方法で得られる部
分ポリペプチドが遊離体である場合は、公知の方法によ
って適当な塩に変換することができるし、逆に塩で得ら
れた場合は、公知の方法によって遊離体に変換すること
ができる。
【００３２】本発明蛋白質、その部分ポリペプチドまた
はそれらの塩に対する抗体は、それらを認識し得るもの
であれば、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体の
何れであってもよい。本発明蛋白質、その部分ポリペプ
チドまたはそれらの塩に対する抗体は、本発明蛋白質を
抗原として用い、公知の抗体または抗血清の製造法に従
って製造することができる。本発明の抗体は、体液や組
織などの被検体中に存在するヒトの膜結合型MEGF8又は
分泌型MEGF8蛋白質等を検出する為に使用することがで
きる。又、これらを精製するために使用する抗体カラム
の作製、精製時の各分画中の該蛋白質の検出、被検細胞
内における該蛋白質の挙動の分析などのために使用する
ことができる。
はそれらの塩に対する抗体は、それらを認識し得るもの
であれば、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体の
何れであってもよい。本発明蛋白質、その部分ポリペプ
チドまたはそれらの塩に対する抗体は、本発明蛋白質を
抗原として用い、公知の抗体または抗血清の製造法に従
って製造することができる。本発明の抗体は、体液や組
織などの被検体中に存在するヒトの膜結合型MEGF8又は
分泌型MEGF8蛋白質等を検出する為に使用することがで
きる。又、これらを精製するために使用する抗体カラム
の作製、精製時の各分画中の該蛋白質の検出、被検細胞
内における該蛋白質の挙動の分析などのために使用する
ことができる。
【００３３】更に、本発明の抗体は、公知の方法による
被検液中のヒトの膜結合型MEGF8又は分泌型MEGF8蛋白質
等の定量、特に、モノクローナル抗体を使用したサンド
イッチ免疫測定法による定量、及び組織染色等による検
出などに使用することができる。それによって、例え
ば、ヒト膜結合型MEGF8又は分泌型MEGF8蛋白質等が関与
する疾病の診断を行なうことができる。これらの目的に
は、抗体分子そのものを用いてもよく、また、抗体分子
のＦ(ａｂ')2 、Ｆａｂ'、あるいはＦａｂ画分を用いて
もよい。本発明の抗体を用いる本発明の蛋白質等の定量
法は、特に制限されるべきものではなく、被測定液中の
抗原量（例えば、蛋白質量）に対応した抗体、抗原もし
くは抗体−抗原複合体の量を化学的または物理的手段に
より検出し、これを既知量の抗原を含む標準液を用いて
作製した標準曲線より算出する測定法であれば、いずれ
の測定法を用いてもよい。例えば、ネフロメトリー、競
合法、イムノメトリック法およびサンドイッチ法が好適
に用いられるが、感度、特異性の点で、後述するサンド
イッチ法を用いるのが好ましい。標識物質を用いる測定
法に用いられる標識剤としては、当該技術分野で公知
の、例えば、放射性同位元素、酵素、蛍光物質、発光物
質などを用いることが出来る。
被検液中のヒトの膜結合型MEGF8又は分泌型MEGF8蛋白質
等の定量、特に、モノクローナル抗体を使用したサンド
イッチ免疫測定法による定量、及び組織染色等による検
出などに使用することができる。それによって、例え
ば、ヒト膜結合型MEGF8又は分泌型MEGF8蛋白質等が関与
する疾病の診断を行なうことができる。これらの目的に
は、抗体分子そのものを用いてもよく、また、抗体分子
のＦ(ａｂ')2 、Ｆａｂ'、あるいはＦａｂ画分を用いて
もよい。本発明の抗体を用いる本発明の蛋白質等の定量
法は、特に制限されるべきものではなく、被測定液中の
抗原量（例えば、蛋白質量）に対応した抗体、抗原もし
くは抗体−抗原複合体の量を化学的または物理的手段に
より検出し、これを既知量の抗原を含む標準液を用いて
作製した標準曲線より算出する測定法であれば、いずれ
の測定法を用いてもよい。例えば、ネフロメトリー、競
合法、イムノメトリック法およびサンドイッチ法が好適
に用いられるが、感度、特異性の点で、後述するサンド
イッチ法を用いるのが好ましい。標識物質を用いる測定
法に用いられる標識剤としては、当該技術分野で公知
の、例えば、放射性同位元素、酵素、蛍光物質、発光物
質などを用いることが出来る。
【００３４】これらの測定・検出方法に関する一般的な
技術手段の詳細については、総説、成書などを参照する
ことができる。例えば、入江 寛編「続ラジオイムノア
ッセイ〕（講談社、昭和５４年発行）、石川栄治ら編
「酵素免疫測定法」（第３版）（医学書院、昭和６２年
発行）、「Methods in ENZYMOLOGY」Vol. 70(Immunoche
mical Techniques(Part A))、 同書 Vol. 73(Immunoche
mical Techniques(PartB))、 同書 Vol. 74(Immunochem
ical Techniques(Part C))、 同書 Vol. 84(Immunochem
ical Techniques(Part D:Selected Immunoassays))、
同書 Vol. 92(Immunochemical Techniques(Part E:Mono
clonal Antibodies and General Immunoassay Method
s))、 同書 Vol. 121(Immunochemical Techniques(Part
I:HybridomaTechnology and Monoclonal Antibodies))
(以上、アカデミックプレス社発行)などを参照すること
ができる。
技術手段の詳細については、総説、成書などを参照する
ことができる。例えば、入江 寛編「続ラジオイムノア
ッセイ〕（講談社、昭和５４年発行）、石川栄治ら編
「酵素免疫測定法」（第３版）（医学書院、昭和６２年
発行）、「Methods in ENZYMOLOGY」Vol. 70(Immunoche
mical Techniques(Part A))、 同書 Vol. 73(Immunoche
mical Techniques(PartB))、 同書 Vol. 74(Immunochem
ical Techniques(Part C))、 同書 Vol. 84(Immunochem
ical Techniques(Part D:Selected Immunoassays))、
同書 Vol. 92(Immunochemical Techniques(Part E:Mono
clonal Antibodies and General Immunoassay Method
s))、 同書 Vol. 121(Immunochemical Techniques(Part
I:HybridomaTechnology and Monoclonal Antibodies))
(以上、アカデミックプレス社発行)などを参照すること
ができる。
【００３５】本発明蛋白質又はその部分ポリペプチドを
コードする塩基配列を有するポリヌクレオチド（ＤＮ
Ａ）に実質的に相補的な塩基配列を有するアンチセンス
ヌクレオチドとしては、当該ＤＮＡの塩基配列に実質的
に相補的な塩基配列を有し、該ＤＮＡの発現を抑制し得
る作用を有するものであれば、いずれのアンチセンスヌ
クレオチドであってもよい。実質的に相補的な塩基配列
とは、例えば、本発明遺伝子に相補的な塩基配列の全塩
基配列または部分塩基配列と約９５％以上、最も好まし
くは１００％の相同性を有する塩基配列などが挙げられ
る。又、これらアンチセンスヌクレオチドと同様の作用
を有する核酸配列（ＲＮＡまたはＤＮＡの修飾体）も本
発明でいうアンチセンスヌクレオチドに含まれる。これ
らのアンチセンスヌクレオチドは、公知のＤＮＡ合成装
置などを用いて製造することができる。
コードする塩基配列を有するポリヌクレオチド（ＤＮ
Ａ）に実質的に相補的な塩基配列を有するアンチセンス
ヌクレオチドとしては、当該ＤＮＡの塩基配列に実質的
に相補的な塩基配列を有し、該ＤＮＡの発現を抑制し得
る作用を有するものであれば、いずれのアンチセンスヌ
クレオチドであってもよい。実質的に相補的な塩基配列
とは、例えば、本発明遺伝子に相補的な塩基配列の全塩
基配列または部分塩基配列と約９５％以上、最も好まし
くは１００％の相同性を有する塩基配列などが挙げられ
る。又、これらアンチセンスヌクレオチドと同様の作用
を有する核酸配列（ＲＮＡまたはＤＮＡの修飾体）も本
発明でいうアンチセンスヌクレオチドに含まれる。これ
らのアンチセンスヌクレオチドは、公知のＤＮＡ合成装
置などを用いて製造することができる。
【００３６】更に、本発明蛋白質等はこれら物質の活性
を阻害する化合物またはその塩のスクリーニングのため
の試薬として有用である。すなわち、本発明は、本発明
蛋白質、その部分ポリペプチドまたはそれらの塩を用い
ることを特徴とする、該物質又はそれらの塩の活性を阻
害する化合物（以下、「阻害剤」ともいう）のスクリー
ニング方法、及びその為のスクリーニング用キットを提
供する。本発明のスクリーニング方法またはスクリーニ
ング用キットを用いて同定される化合物またはその塩
は、上記した試験化合物から選ばれた化合物であり、本
発明ポリペプチド（蛋白質）等と相互作用し、その生物
学的活性を調節、阻害、促進、又は拮抗等する化合物で
ある。該化合物またはその塩は、本発明の蛋白質等の活
性に直接作用するものであってもよいし、本発明ポリペ
プチド（蛋白質）等の発現に作用することによって間接
的に本発明ポリペプチド（蛋白質）等の活性に作用する
ものであってもよい。該化合物の塩としては、例えば、
薬学的に許容可能な塩などが用いられる。例えば、無機
塩基との塩、有機塩基との塩、無機酸との塩、有機酸と
の塩、塩基性または酸性アミノ酸との塩などがあげられ
る。本発明蛋白質等の生物学的活性を阻害する化合物も
上記各種疾病に対する治療・予防剤などの医薬として使
用できる可能性がある。
を阻害する化合物またはその塩のスクリーニングのため
の試薬として有用である。すなわち、本発明は、本発明
蛋白質、その部分ポリペプチドまたはそれらの塩を用い
ることを特徴とする、該物質又はそれらの塩の活性を阻
害する化合物（以下、「阻害剤」ともいう）のスクリー
ニング方法、及びその為のスクリーニング用キットを提
供する。本発明のスクリーニング方法またはスクリーニ
ング用キットを用いて同定される化合物またはその塩
は、上記した試験化合物から選ばれた化合物であり、本
発明ポリペプチド（蛋白質）等と相互作用し、その生物
学的活性を調節、阻害、促進、又は拮抗等する化合物で
ある。該化合物またはその塩は、本発明の蛋白質等の活
性に直接作用するものであってもよいし、本発明ポリペ
プチド（蛋白質）等の発現に作用することによって間接
的に本発明ポリペプチド（蛋白質）等の活性に作用する
ものであってもよい。該化合物の塩としては、例えば、
薬学的に許容可能な塩などが用いられる。例えば、無機
塩基との塩、有機塩基との塩、無機酸との塩、有機酸と
の塩、塩基性または酸性アミノ酸との塩などがあげられ
る。本発明蛋白質等の生物学的活性を阻害する化合物も
上記各種疾病に対する治療・予防剤などの医薬として使
用できる可能性がある。
【００３７】本発明ＤＮＡ若しくは遺伝子又はその一部
をプローブとして使用することにより、ヒトにおける膜
結合型MEGF8若しくは分泌型MEGF8又はその部分ポリペプ
チドをコードするＤＮＡまたはｍＲＮＡの異常（遺伝子
異常）を検出することができるので、例えば、該ＤＮＡ
またはｍＲＮＡの損傷、突然変異あるいは発現低下や、
該ＤＮＡまたはｍＲＮＡの増加あるいは発現過多などの
遺伝子診断剤として有用である。本発明のＤＮＡを用い
る上記の遺伝子診断は、例えば、公知のノーザンハイブ
リダイゼーションやＰＣＲ−ＳＳＣＰ法（Genomics，第
５巻，８７４〜８７９頁（１９８９年）、Proceedings
of the National Academy of Sciencesof the United S
tates of America，第８６巻，２７６６〜２７７０頁
（１９８９年））などにより実施することができる。更
に、本発明遺伝子に異常があったり、欠損している場合
あるいは発現量が減少している場合、生体内において正
常な機能を発揮できない患者に対しては、公知手段に従
って（１）レトロウイルスベクター、アデノウイルスベ
クター、アデノウイルスアソシエーテッドウイルスベク
ターなどの適当なベクターをベヒクルとして使用する遺
伝子治療によって、本発明ＤＮＡ又は遺伝子を該患者体
内に導入し、発現させるか、又は（２）本発明の蛋白質
等を該患者に注入すること等によって、該患者において
本発明の蛋白質等の機能を発揮させることができるもの
と考えられる。本発明ＤＮＡ又は遺伝子を単独、又は、
摂取促進のための補助剤とともに、遺伝子銃やハイドロ
ゲルカテーテルのようなカテーテルによって投与するこ
とも可能である。
をプローブとして使用することにより、ヒトにおける膜
結合型MEGF8若しくは分泌型MEGF8又はその部分ポリペプ
チドをコードするＤＮＡまたはｍＲＮＡの異常（遺伝子
異常）を検出することができるので、例えば、該ＤＮＡ
またはｍＲＮＡの損傷、突然変異あるいは発現低下や、
該ＤＮＡまたはｍＲＮＡの増加あるいは発現過多などの
遺伝子診断剤として有用である。本発明のＤＮＡを用い
る上記の遺伝子診断は、例えば、公知のノーザンハイブ
リダイゼーションやＰＣＲ−ＳＳＣＰ法（Genomics，第
５巻，８７４〜８７９頁（１９８９年）、Proceedings
of the National Academy of Sciencesof the United S
tates of America，第８６巻，２７６６〜２７７０頁
（１９８９年））などにより実施することができる。更
に、本発明遺伝子に異常があったり、欠損している場合
あるいは発現量が減少している場合、生体内において正
常な機能を発揮できない患者に対しては、公知手段に従
って（１）レトロウイルスベクター、アデノウイルスベ
クター、アデノウイルスアソシエーテッドウイルスベク
ターなどの適当なベクターをベヒクルとして使用する遺
伝子治療によって、本発明ＤＮＡ又は遺伝子を該患者体
内に導入し、発現させるか、又は（２）本発明の蛋白質
等を該患者に注入すること等によって、該患者において
本発明の蛋白質等の機能を発揮させることができるもの
と考えられる。本発明ＤＮＡ又は遺伝子を単独、又は、
摂取促進のための補助剤とともに、遺伝子銃やハイドロ
ゲルカテーテルのようなカテーテルによって投与するこ
とも可能である。
【００３８】本明細書および図面において、塩基やアミ
ノ酸などを略号で表示する場合、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ C
ommision on Biochemical Nomenclature による略号あ
るいは当該分野における慣用略号に基づくものであり、
またアミノ酸に関し光学異性体があり得る場合は、特に
明示しなければＬ体を示すものとする。
ノ酸などを略号で表示する場合、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ C
ommision on Biochemical Nomenclature による略号あ
るいは当該分野における慣用略号に基づくものであり、
またアミノ酸に関し光学異性体があり得る場合は、特に
明示しなければＬ体を示すものとする。
【００３９】本願明細書の配列表の配列番号は、以下の
配列を示す。 〔配列番号：１〕配列番号：２で示されるアミノ酸配列
を有する本発明蛋白質をコードする塩基配列を含む、ヒ
ト膜結合型MEGF8遺伝子の全塩基配列（９９２１塩基
対）を示す。 〔配列番号：２〕ヒト膜結合型MEGF8蛋白質のアミノ酸
配列（アミノ酸数：２７７８）を示す。 〔配列番号：３〕配列番号：４で示されるアミノ酸配列
を有する本発明蛋白質をコードする塩基配列を含む、ヒ
ト分泌型MEGF8遺伝子の全塩基配列（８８７５塩基対）
を示す。 〔配列番号：４〕ヒト分泌型MEGF8蛋白質のアミノ酸配
列（アミノ酸数：２２７３）を示す。
配列を示す。 〔配列番号：１〕配列番号：２で示されるアミノ酸配列
を有する本発明蛋白質をコードする塩基配列を含む、ヒ
ト膜結合型MEGF8遺伝子の全塩基配列（９９２１塩基
対）を示す。 〔配列番号：２〕ヒト膜結合型MEGF8蛋白質のアミノ酸
配列（アミノ酸数：２７７８）を示す。 〔配列番号：３〕配列番号：４で示されるアミノ酸配列
を有する本発明蛋白質をコードする塩基配列を含む、ヒ
ト分泌型MEGF8遺伝子の全塩基配列（８８７５塩基対）
を示す。 〔配列番号：４〕ヒト分泌型MEGF8蛋白質のアミノ酸配
列（アミノ酸数：２２７３）を示す。
【００４０】
【実施例】以下に、実施例により本発明をさらに具体的
に説明するが、本発明はそれに限定されるものではな
い。なお、実施例における各種遺伝子操作は、上記のCu
rrent protocols in molecular biology（edited by Fr
ederick M. Ausubel et al.,1987）に記載されている方
法に従った。
に説明するが、本発明はそれに限定されるものではな
い。なお、実施例における各種遺伝子操作は、上記のCu
rrent protocols in molecular biology（edited by Fr
ederick M. Ausubel et al.,1987）に記載されている方
法に従った。
【００４１】
【実施例１】（１）ヒト脳由来ｃＤＮＡライブラリーの
構築 ＮｏｔＩ部位を有するオリゴヌクレオチド（ＧＡＣＴＡ
ＧＴＴＣＴＡＧＡＴＣＧＣＧＡＧＣＧＧＣＣＧＣＣＣ
（Ｔ）１５）（ギブコＢＲＬ社）をプライマーとして、
ヒト脳由来ｍＲＮＡ（クローンテック社）を鋳型にSupe
rScriptII逆転写酵素キット（ギブコＢＲＬ社）で２本
鎖ｃＤＮＡを合成した。ＳａｌＩ部位を有するアダプタ
ー（ギブコＢＲＬ社）をｃＤＮＡとライゲーションし
た。その後、ＮｏｔＩ消化し、１％濃度の低融解アガロ
ース電気泳動により、３ｋｂ以上のＤＮＡ断片を精製し
た。精製ｃＤＮＡ断片を、ＳａｌＩ−ＮｏｔＩ制限酵素
処理したpBluescript IISK＋ プラスミドとライゲーシ
ョンした。大腸菌 ElectroMax DH10B 株（ギブコＢＲＬ
社）にエレクトロポレーション法によりこの組換えプラ
スミドを導入した。
構築 ＮｏｔＩ部位を有するオリゴヌクレオチド（ＧＡＣＴＡ
ＧＴＴＣＴＡＧＡＴＣＧＣＧＡＧＣＧＧＣＣＧＣＣＣ
（Ｔ）１５）（ギブコＢＲＬ社）をプライマーとして、
ヒト脳由来ｍＲＮＡ（クローンテック社）を鋳型にSupe
rScriptII逆転写酵素キット（ギブコＢＲＬ社）で２本
鎖ｃＤＮＡを合成した。ＳａｌＩ部位を有するアダプタ
ー（ギブコＢＲＬ社）をｃＤＮＡとライゲーションし
た。その後、ＮｏｔＩ消化し、１％濃度の低融解アガロ
ース電気泳動により、３ｋｂ以上のＤＮＡ断片を精製し
た。精製ｃＤＮＡ断片を、ＳａｌＩ−ＮｏｔＩ制限酵素
処理したpBluescript IISK＋ プラスミドとライゲーシ
ョンした。大腸菌 ElectroMax DH10B 株（ギブコＢＲＬ
社）にエレクトロポレーション法によりこの組換えプラ
スミドを導入した。
【００４２】（２）膜結合型MEGF8をコードするDNAのク
ローニング こうして調製したヒト大人脳由来cDNAライブラリーから
重複クローンを含む8000コのクローンを無作為に選び出
し、その末端配列を決定した。次に、中山他が開発した
モチーフトラップスクリーニング法(1998 Genomics Vo
l. 51, 27-34)によりEGFモチーフをもつ14コの分子がス
クリーニングされた。次に、選択したクローンの末端塩
基配列を決定し、得られた配列をクエリーとして相同検
索プログラムBLASTN 2.0.14 (Altschul, Stephen F., T
homas L. Madden, Alejandro A. Schaffer, Jinghui Zh
ang, Zheng Zhang, Webb Miller, andDavid J. Lipman
(1997), "Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generat
ion of protein database search programs", Nucleic
Acids Res. 25:3389-3402)を用いて、nr(All GenBank+
EMBL+DDBJ+PDB sequences (but no EST, STS,GSS, orph
ase 0,1 or 2 HTGS sequences))データベースに対して
相同検索を行った。その結果、5つは既知分子であり、
残りの9つの分子は、未知であった。これらの未知のク
ローンの全塩基配列を決定した結果、プレキシンドメイ
ンを９つ有することを特徴とする、本発明の膜結合型ME
GF8をコードするDNAが得られた。尚、配列決定には、Ｐ
Ｅアプライドバイオシステム社製のＤＮＡシークエンサ
ー（ABI PRISM377）と同社製反応キットを使用した。大
部分の配列はショットガンクローンをダイターミネータ
ー法を用いて決定した。一部の塩基配列については、決
定した塩基配列を元にしてオリゴヌクレオチドを合成
し、プライマーウォーキング法で決定した。
ローニング こうして調製したヒト大人脳由来cDNAライブラリーから
重複クローンを含む8000コのクローンを無作為に選び出
し、その末端配列を決定した。次に、中山他が開発した
モチーフトラップスクリーニング法(1998 Genomics Vo
l. 51, 27-34)によりEGFモチーフをもつ14コの分子がス
クリーニングされた。次に、選択したクローンの末端塩
基配列を決定し、得られた配列をクエリーとして相同検
索プログラムBLASTN 2.0.14 (Altschul, Stephen F., T
homas L. Madden, Alejandro A. Schaffer, Jinghui Zh
ang, Zheng Zhang, Webb Miller, andDavid J. Lipman
(1997), "Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generat
ion of protein database search programs", Nucleic
Acids Res. 25:3389-3402)を用いて、nr(All GenBank+
EMBL+DDBJ+PDB sequences (but no EST, STS,GSS, orph
ase 0,1 or 2 HTGS sequences))データベースに対して
相同検索を行った。その結果、5つは既知分子であり、
残りの9つの分子は、未知であった。これらの未知のク
ローンの全塩基配列を決定した結果、プレキシンドメイ
ンを９つ有することを特徴とする、本発明の膜結合型ME
GF8をコードするDNAが得られた。尚、配列決定には、Ｐ
Ｅアプライドバイオシステム社製のＤＮＡシークエンサ
ー（ABI PRISM377）と同社製反応キットを使用した。大
部分の配列はショットガンクローンをダイターミネータ
ー法を用いて決定した。一部の塩基配列については、決
定した塩基配列を元にしてオリゴヌクレオチドを合成
し、プライマーウォーキング法で決定した。
【００４３】（３）分泌型MEGF8をコードするDNAのクロ
ーニング 又、市販されている(クロンテック社)ヒト成人海馬由来
のmRNAを出発材料として、上記（１）と同様に調製した
cDNAライブラリーから、無作為にクローンを単離し、約
6000個のcDNAの末端配列を決定した。その中から、上記
のDNA解析プログラムにより新規であることが判明した8
5コのクローンについて全塩基配列決定を行った。こう
して得られた全塩基配列に基づき、クローンのアミノ酸
配列を既知配列ライブラリーnr release Sep 12 2000に
対して解析プログラムBLASTP 2.0.14 (Altschul, Steph
en F., Thomas L. Madden, Alejandro A. Schaffer, Ji
nghui Zhang, Zheng Zhang, Webb Miller, andDavid J.
Lipman (1997), "Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new
generation of protein database search programs",
Nucleic Acids Res. 25:3389-3402)を用いてホモロジ
ーサーチした。その結果、膜結合型MEGF8の選択的スプ
ライシング分子である分泌型MEGF8をコードするDNAが得
られた。
ーニング 又、市販されている(クロンテック社)ヒト成人海馬由来
のmRNAを出発材料として、上記（１）と同様に調製した
cDNAライブラリーから、無作為にクローンを単離し、約
6000個のcDNAの末端配列を決定した。その中から、上記
のDNA解析プログラムにより新規であることが判明した8
5コのクローンについて全塩基配列決定を行った。こう
して得られた全塩基配列に基づき、クローンのアミノ酸
配列を既知配列ライブラリーnr release Sep 12 2000に
対して解析プログラムBLASTP 2.0.14 (Altschul, Steph
en F., Thomas L. Madden, Alejandro A. Schaffer, Ji
nghui Zhang, Zheng Zhang, Webb Miller, andDavid J.
Lipman (1997), "Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new
generation of protein database search programs",
Nucleic Acids Res. 25:3389-3402)を用いてホモロジ
ーサーチした。その結果、膜結合型MEGF8の選択的スプ
ライシング分子である分泌型MEGF8をコードするDNAが得
られた。
【００４４】遺伝子予測プログラムであるGenscan(Burg
e C. et. al., 1997, J. Mol. Bio.Vol. 268, 78-94)を
用いてヒトのゲノム配列から膜結合型MEGF8及び分泌型M
EGF8に欠損していたN末領域を予測した。予測された配
列をもとにオリゴプライマーを設計し、これを用いてヒ
ト胎児由来のcDNAを鋳型としたRT-PCR法によりその一部
分を分取した。それでもN末領域が欠損していたので、
5'RACE法により残りの部分を分取し、膜結合型MEGF8及
び分泌型MEGF8の完全長を単離した。
e C. et. al., 1997, J. Mol. Bio.Vol. 268, 78-94)を
用いてヒトのゲノム配列から膜結合型MEGF8及び分泌型M
EGF8に欠損していたN末領域を予測した。予測された配
列をもとにオリゴプライマーを設計し、これを用いてヒ
ト胎児由来のcDNAを鋳型としたRT-PCR法によりその一部
分を分取した。それでもN末領域が欠損していたので、
5'RACE法により残りの部分を分取し、膜結合型MEGF8及
び分泌型MEGF8の完全長を単離した。
【００４５】こうして得られたＤＮＡの塩基配列は、以
下の２点から膜結合型MEGF8及び分泌型MEGF8の完全長を
コードすると考えられる。 (i) ORFと同一フレームで開始メチオニンの上流にstop
コドンが確認できた。 (ii)N末端に膜結合蛋白質や分泌蛋白質に必要なシグナ
ル配列が確認できた。
下の２点から膜結合型MEGF8及び分泌型MEGF8の完全長を
コードすると考えられる。 (i) ORFと同一フレームで開始メチオニンの上流にstop
コドンが確認できた。 (ii)N末端に膜結合蛋白質や分泌蛋白質に必要なシグナ
ル配列が確認できた。
【００４６】（４）ドメイン検索 次に、クローンに含まれるＤＮＡがコードするアミノ酸
配列中の機能ドメインを、Pfam 5.2に含まれる検索ツー
ルPfam HMM ver 2.1 Search (HMMPFAM) (Sonnhammer EL
L, Eddy SR, Birney E, Bateman A, Durbin R (1998) P
fam: multiplesequence alignments and HMM-profiles
of protein domains, Nucleic Acids Research 26:320-
322)を用いて検索した。得られた結果は、表１及び２に
示した。
配列中の機能ドメインを、Pfam 5.2に含まれる検索ツー
ルPfam HMM ver 2.1 Search (HMMPFAM) (Sonnhammer EL
L, Eddy SR, Birney E, Bateman A, Durbin R (1998) P
fam: multiplesequence alignments and HMM-profiles
of protein domains, Nucleic Acids Research 26:320-
322)を用いて検索した。得られた結果は、表１及び２に
示した。
【００４７】
【表１】
【００４８】
【表２】
【００４９】これら表に示された結果から、本発明ＤＮ
Ａ又は遺伝子がコードする蛋白質は、９つのプレキシン
ドメインをもつ新しいタイプのプレキシン関連分子であ
ることが明らかになった。
Ａ又は遺伝子がコードする蛋白質は、９つのプレキシン
ドメインをもつ新しいタイプのプレキシン関連分子であ
ることが明らかになった。
【００５０】本発明の膜結合型MEGF8遺伝子及び分泌型M
EGF8遺伝子のクローンの構成は以下の通りである。膜結合型MEGF8 このDNAの全長は、9921bpであり、この遺伝子を構成す
る塩基配列を含むクローン構成としては、pMEGF8-1.2kb
が1bpから1244bpを含み、pMEGF8-1.5kbが1065bpから259
2bpを含み、pg01061が2457bpから3693bpを含み、hg0139
2が3694bpから9921bpを含んでいる。分泌型MEGF8 このDNAの全長は、8875bpであり、この遺伝子を構成す
る塩基配列を含むクローン構成としては、pMEGF8-1.2kb
が1bpから1244bpを含み、pMEGF8-1.5kbが1065bpから259
2bpを含み、pg01061が2457bpから8875bpを含んでいる。
EGF8遺伝子のクローンの構成は以下の通りである。膜結合型MEGF8 このDNAの全長は、9921bpであり、この遺伝子を構成す
る塩基配列を含むクローン構成としては、pMEGF8-1.2kb
が1bpから1244bpを含み、pMEGF8-1.5kbが1065bpから259
2bpを含み、pg01061が2457bpから3693bpを含み、hg0139
2が3694bpから9921bpを含んでいる。分泌型MEGF8 このDNAの全長は、8875bpであり、この遺伝子を構成す
る塩基配列を含むクローン構成としては、pMEGF8-1.2kb
が1bpから1244bpを含み、pMEGF8-1.5kbが1065bpから259
2bpを含み、pg01061が2457bpから8875bpを含んでいる。
【００５１】hg01392クローンとpg01061クローンの差異 hg01392クローンとpg01061クローンには、塩基配列に、
以下の差異がある。 1. pg01061クローンには、hg01392クローンの5548bpか
ら5715bpが欠損 2. pg01061クローンには、hg01392クローンの6149bpのA
がGに置換 3. pg01061クローンには、hg01392クローンの7508bpか
ら8384bpが欠損 4. pg01061クローンには、hg01392クローンの9596bpのT
が欠損 5. pg01061クローンには、hg01392クローンの9798bpのA
がGに置換 6. pg01061クローンには、hg01392クローンの9844bpのA
がGに置換。 このような差異が生じた原因であるが、1.及び3.は選択
スプライシングによるもの、一方、2.,4.,5.および6.は
塩基置換変異、SNPs, 人工的変異のいづれかによるもの
と考えられる。
以下の差異がある。 1. pg01061クローンには、hg01392クローンの5548bpか
ら5715bpが欠損 2. pg01061クローンには、hg01392クローンの6149bpのA
がGに置換 3. pg01061クローンには、hg01392クローンの7508bpか
ら8384bpが欠損 4. pg01061クローンには、hg01392クローンの9596bpのT
が欠損 5. pg01061クローンには、hg01392クローンの9798bpのA
がGに置換 6. pg01061クローンには、hg01392クローンの9844bpのA
がGに置換。 このような差異が生じた原因であるが、1.及び3.は選択
スプライシングによるもの、一方、2.,4.,5.および6.は
塩基置換変異、SNPs, 人工的変異のいづれかによるもの
と考えられる。
【００５２】膜結合型MEGF8と分泌型MEGF8の発現 当業者に公知のノーザンハイブリダイゼーション法によ
る分析によって、膜結合型-分泌型MEGF8のラットホモロ
グは、胎仔脳に強い発現がみらることが判明した。尚、
同ノーザンハイブリダイゼーション法により膜結合型-
分泌型MEGF8のラットホモログのmRNAサイズを推定した
ところ約10kbであった。
る分析によって、膜結合型-分泌型MEGF8のラットホモロ
グは、胎仔脳に強い発現がみらることが判明した。尚、
同ノーザンハイブリダイゼーション法により膜結合型-
分泌型MEGF8のラットホモログのmRNAサイズを推定した
ところ約10kbであった。
【００５３】
【発明の効果】膜結合型MEGF8と分泌型MEGF8遺伝子の重
要性 最近(2001年2月)、ヒトのゲノムがほぼ解読され、総遺
伝子数が推定された。おどろくべきことに、当初10万と
予想されていた遺伝子は、3万程度であることが判明し
た。線虫(18,424個)、ハエ(13,601)に比較すると予想外
に少ない遺伝子数であった。このように少ない遺伝子数
によってヒトという複雑な体を構成するための一つの手
段として、ヒトは選択的スプライシングにより単一の遺
伝子から、多種の産物を発生の段階、体の領域で巧妙に
作り分けることより、この問題を解決していることが知
られている。MEGF8も段落番号［００５１］の1,3で示し
たように、選択的スプライシングが行われる。特に3.
は、段落番号［００４８］の表２に示したドメイン表に
おいて配列番号２の2581-2603のsosuiドメイン、つま
り、膜貫通ドメインに相当する部分を含み、これが欠失
することにより、MEGF8が膜結合型から分泌型へ変換さ
れると考えられる。
要性 最近(2001年2月)、ヒトのゲノムがほぼ解読され、総遺
伝子数が推定された。おどろくべきことに、当初10万と
予想されていた遺伝子は、3万程度であることが判明し
た。線虫(18,424個)、ハエ(13,601)に比較すると予想外
に少ない遺伝子数であった。このように少ない遺伝子数
によってヒトという複雑な体を構成するための一つの手
段として、ヒトは選択的スプライシングにより単一の遺
伝子から、多種の産物を発生の段階、体の領域で巧妙に
作り分けることより、この問題を解決していることが知
られている。MEGF8も段落番号［００５１］の1,3で示し
たように、選択的スプライシングが行われる。特に3.
は、段落番号［００４８］の表２に示したドメイン表に
おいて配列番号２の2581-2603のsosuiドメイン、つま
り、膜貫通ドメインに相当する部分を含み、これが欠失
することにより、MEGF8が膜結合型から分泌型へ変換さ
れると考えられる。
【００５４】選択的スプライシングをおこなう分子で、
かつ神経細胞の軸索誘導に関わるものとしては、エフリ
ン(Regulation of repulsion versus adhesion by diff
erent splice forms of an Eph receptor., Holmberg
J, Clarke DL, Frisen J.m.,Nature 2000 Nov 9;408(68
09):203-6)、テネイシン(Tenascin-C contains domains
that independently regulate neurite outgrowth and
neurite guidance.,Meiners S, Mercado ML, Nur-e-Ka
mal MS, Geller HM., J Neurosci 1999 Oct 1;19(19):8
443-53)、NCAM(Elevated concentration of N-CAM VASE
isoforms inschizophrenia., Vawter MP, Frye MA, He
mperly JJ, VanderPutten DM, Usen N, Doherty P, Saf
fell JL, Issa F, Post RM, Wyatt RJ, Freed WJ., J P
sychiatr Res 2000 Jan-Feb;34(1):25-34)、ニューレキ
シン (Neurexins: three genesand 1001 products., Mi
ssler M, Sudhof TC., Trends Genet 1998 Jan;14(1):2
0-6)、及びDSCAM(DSCAM: a novel member of the immun
oglobulin superfamilymaps in a Down syndrome regio
n and is involved in the development of the nervou
s system., amakawa K, Huot YK, Haendelt MA, Hubert
R, Chen XN, Lyons GE, Korenberg JR., Hum Mol Gene
t 1998 Feb;7(2):227-37)等が知られている。なかで
も、イムノグロブリンスーパーファミリーの一員である
DSCAM(ダウン症候群細胞接着分子)は、MEGF8と同様に膜
結合型と分泌型の選択的スプライシングをおこなう分子
である。DSCAMは、21q22にマップされるが、この領域に
はダウン症候群の原因となる主な遺伝子が存在する。DS
CAMは、神経細胞の移動、分化、シナプス機能に関わ
り、DSCAMの異常により中枢および末梢神経の欠損にが
起こると考えられる。またDSCAMは、ダウン症候群にお
ける精神遅滞や内蔵の異常の原因遺伝子と考えられてい
る。本明細書で示したように、MEGF8は、形成途中の脳
で強く発現することから、発生段階で膜結合型-分泌型
を作り分けることにより神経発生において重要な働きを
示すだけでなく、この遺伝子の異常は重要な病気をもた
らすと考えられる。
かつ神経細胞の軸索誘導に関わるものとしては、エフリ
ン(Regulation of repulsion versus adhesion by diff
erent splice forms of an Eph receptor., Holmberg
J, Clarke DL, Frisen J.m.,Nature 2000 Nov 9;408(68
09):203-6)、テネイシン(Tenascin-C contains domains
that independently regulate neurite outgrowth and
neurite guidance.,Meiners S, Mercado ML, Nur-e-Ka
mal MS, Geller HM., J Neurosci 1999 Oct 1;19(19):8
443-53)、NCAM(Elevated concentration of N-CAM VASE
isoforms inschizophrenia., Vawter MP, Frye MA, He
mperly JJ, VanderPutten DM, Usen N, Doherty P, Saf
fell JL, Issa F, Post RM, Wyatt RJ, Freed WJ., J P
sychiatr Res 2000 Jan-Feb;34(1):25-34)、ニューレキ
シン (Neurexins: three genesand 1001 products., Mi
ssler M, Sudhof TC., Trends Genet 1998 Jan;14(1):2
0-6)、及びDSCAM(DSCAM: a novel member of the immun
oglobulin superfamilymaps in a Down syndrome regio
n and is involved in the development of the nervou
s system., amakawa K, Huot YK, Haendelt MA, Hubert
R, Chen XN, Lyons GE, Korenberg JR., Hum Mol Gene
t 1998 Feb;7(2):227-37)等が知られている。なかで
も、イムノグロブリンスーパーファミリーの一員である
DSCAM(ダウン症候群細胞接着分子)は、MEGF8と同様に膜
結合型と分泌型の選択的スプライシングをおこなう分子
である。DSCAMは、21q22にマップされるが、この領域に
はダウン症候群の原因となる主な遺伝子が存在する。DS
CAMは、神経細胞の移動、分化、シナプス機能に関わ
り、DSCAMの異常により中枢および末梢神経の欠損にが
起こると考えられる。またDSCAMは、ダウン症候群にお
ける精神遅滞や内蔵の異常の原因遺伝子と考えられてい
る。本明細書で示したように、MEGF8は、形成途中の脳
で強く発現することから、発生段階で膜結合型-分泌型
を作り分けることにより神経発生において重要な働きを
示すだけでなく、この遺伝子の異常は重要な病気をもた
らすと考えられる。
【００５５】今回、本発明者が新規なプレキシン分子で
ある、膜結合型MEGF8及び分泌型MEGF8をコードするＤＮ
Ａ又は遺伝子を見い出したことにより、これらの分子が
関与すると思われる神経細胞の軸索の誘導や、心臓や骨
格の発達、免疫反応、血管形成の異常による病気や、が
んの成長と転移の診断、治療法が確立されると期待され
る。又、本発明で得られた新規なＤＮＡ若しく遺伝子又
ははそれらの一部を所謂ＤＮＡチップ等に集積させ、こ
れに、例えば、精神病等の脳が関与する疾患の患者と対
照としての正常人の血液又は組織等から作成したプロー
ブをハイブリダイゼーションさせることによって、これ
ら疾患の診断、治療等に役立てることが出来る。又、本
発明のＤＮＡ又は遺伝子の塩基配列に基づき作成した合
成ＤＮＡプライマーを使用し、ヒトの血液又は組織から
抽出した染色体ＤＮＡを用いてＰＣＲを行い、その産物
の塩基配列を決定することにより、本発明のＤＮＡ又は
遺伝子中にある個体によって異なる一塩基の変異、即
ち、ｃＳＮＰｓを見出すことが出来る。これにより、個
体の体質等が予測され、各自に適した医薬の開発等が可
能となる。又、クロスハイブリダイゼーションにより、
マウス等のモデル生物における本発明のＤＮＡ又は遺伝
子に対するオルソログ（ホモログ、カウンターパート）
遺伝子を単離し、例えば、これら遺伝子をノックアウト
することによってヒトの疾患モデル動物を作成し、ヒト
の病因となる遺伝子を探索・同定することも可能であ
る。更に、本発明のＤＮＡ又は遺伝子に対する抗体を網
羅的に作成し、それらを集積させて所謂ＰＲＯＴＥＩＮ
チップを作成し、患者と正常人との蛋白質発現量の差異
を検出する等のプロテオーム解析から、病気の診断・治
療等に役立てることが出来る。
ある、膜結合型MEGF8及び分泌型MEGF8をコードするＤＮ
Ａ又は遺伝子を見い出したことにより、これらの分子が
関与すると思われる神経細胞の軸索の誘導や、心臓や骨
格の発達、免疫反応、血管形成の異常による病気や、が
んの成長と転移の診断、治療法が確立されると期待され
る。又、本発明で得られた新規なＤＮＡ若しく遺伝子又
ははそれらの一部を所謂ＤＮＡチップ等に集積させ、こ
れに、例えば、精神病等の脳が関与する疾患の患者と対
照としての正常人の血液又は組織等から作成したプロー
ブをハイブリダイゼーションさせることによって、これ
ら疾患の診断、治療等に役立てることが出来る。又、本
発明のＤＮＡ又は遺伝子の塩基配列に基づき作成した合
成ＤＮＡプライマーを使用し、ヒトの血液又は組織から
抽出した染色体ＤＮＡを用いてＰＣＲを行い、その産物
の塩基配列を決定することにより、本発明のＤＮＡ又は
遺伝子中にある個体によって異なる一塩基の変異、即
ち、ｃＳＮＰｓを見出すことが出来る。これにより、個
体の体質等が予測され、各自に適した医薬の開発等が可
能となる。又、クロスハイブリダイゼーションにより、
マウス等のモデル生物における本発明のＤＮＡ又は遺伝
子に対するオルソログ（ホモログ、カウンターパート）
遺伝子を単離し、例えば、これら遺伝子をノックアウト
することによってヒトの疾患モデル動物を作成し、ヒト
の病因となる遺伝子を探索・同定することも可能であ
る。更に、本発明のＤＮＡ又は遺伝子に対する抗体を網
羅的に作成し、それらを集積させて所謂ＰＲＯＴＥＩＮ
チップを作成し、患者と正常人との蛋白質発現量の差異
を検出する等のプロテオーム解析から、病気の診断・治
療等に役立てることが出来る。
【００５６】
【配列表】 SEQUENCE LISTING <110> Kazusa DNA Research Institute <120> Membrane binding type- and secreted type- MEGF8 Genes and Protein Encoded by Said Genes <130> AB01016 <160> 4 <170> PatentIn Ver. 2.1 <210> 1 <211> 9921 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (573)..(8909) <400> 1 cgagggtggg tgagcaaagg gattgggtct gtggggtcca ggcccgaacc cctgaagacg 60 ggctccgccc ccggcacccg ctcgcgcccc gcccccggct ggaggagtct ctcctggacc 120 atccgaacct agcctgtccc ggcccgcagc ctctatggag gctcctgccg ggccgtagag 180 cccttcgccc cctggggacc cacccgtcta taaggtccgt ttggcctgca gcagcctgag 240 tccgtaatgc tgggcactgt tcatgggatc ggccccctat ggagccctgt gtctataggg 300 gactcctacg gtccctaggg ttcggccccg tccataatga ctccatatac agggccttcc 360 atcgctctat agggctcagc cctcggcttc cagagcctgt cagcagtggc cgtacccttc 420 gccgggactg ccgggtctcc gggacctctt cgatctacaa ggtcatgtta tgcctataga 480 ggtcgcattt gcagggcctc accccgggta gagggtcctc tccaggtttt tacggcctgt 540 ccccgctcta agggtcagtg caggaggcgg cg atg gcc ctg ggc aag gtt ctg 593 Met Ala Leu Gly Lys Val Leu 1 5 gcc atg gca ctg gtt ttg gcc ttg gcc gtg ctg ggg tcg ctg tcc cct 641 Ala Met Ala Leu Val Leu Ala Leu Ala Val Leu Gly Ser Leu Ser Pro 10 15 20 ggg gcc cgg gcg ggg gac tgc aag ggg cag cgg cag gtg ctg cgg gag 689 Gly Ala Arg Ala Gly Asp Cys Lys Gly Gln Arg Gln Val Leu Arg Glu 25 30 35 gcg cca ggc ttc gtg acg gat ggt gcg ggc aac tac agc gtc aat ggc 737 Ala Pro Gly Phe Val Thr Asp Gly Ala Gly Asn Tyr Ser Val Asn Gly 40 45 50 55 aac tgc gag tgg ctc atc gag gcc cca agc ccc cag cac cgg atc ctg 785 Asn Cys Glu Trp Leu Ile Glu Ala Pro Ser Pro Gln His Arg Ile Leu 60 65 70 ctg gac ttc ctt ttc ctg gac aca gag tgc acg tat gac tac ctg ttc 833 Leu Asp Phe Leu Phe Leu Asp Thr Glu Cys Thr Tyr Asp Tyr Leu Phe 75 80 85 gtg tat gac ggt gac tcc ccg cga ggg ccg ctg ctt gcc agt cta agt 881 Val Tyr Asp Gly Asp Ser Pro Arg Gly Pro Leu Leu Ala Ser Leu Ser 90 95 100 ggg agc acc cga cct ccg ccc atc gaa gct tcc tca ggc aag atg ctg 929 Gly Ser Thr Arg Pro Pro Pro Ile Glu Ala Ser Ser Gly Lys Met Leu 105 110 115 ctg cac ctc ttc agt gat gcc aac tac aac ctg ctg ggc ttt aac gcc 977 Leu His Leu Phe Ser Asp Ala Asn Tyr Asn Leu Leu Gly Phe Asn Ala 120 125 130 135 tca ttc cgc ttc tcc ctg tgc ccg ggt ggc tgc cag agc cac ggg cag 1025 Ser Phe Arg Phe Ser Leu Cys Pro Gly Gly Cys Gln Ser His Gly Gln 140 145 150 tgc cag cca ccg ggt gtg tgt gcc tgc gag ccg ggc tgg ggg ggt cct 1073 Cys Gln Pro Pro Gly Val Cys Ala Cys Glu Pro Gly Trp Gly Gly Pro 155 160 165 gac tgt ggc ctg cag gag tgc tca gcc tac tgt ggc agc cac ggc acc 1121 Asp Cys Gly Leu Gln Glu Cys Ser Ala Tyr Cys Gly Ser His Gly Thr 170 175 180 tgc gcc tcg ccc ctg gga cca tgc cgc tgt gag cct ggc ttc ttg gga 1169 Cys Ala Ser Pro Leu Gly Pro Cys Arg Cys Glu Pro Gly Phe Leu Gly 185 190 195 cgt gcc tgt gac ctg cac ctg tgg gag aac cag ggg gct ggg tgg tgg 1217 Arg Ala Cys Asp Leu His Leu Trp Glu Asn Gln Gly Ala Gly Trp Trp 200 205 210 215 cac aac gtg agt gcc agg gac cct gcc ttc tct gcc cgt att ggg gca 1265 His Asn Val Ser Ala Arg Asp Pro Ala Phe Ser Ala Arg Ile Gly Ala 220 225 230 gct ggc gcc ttc ctg tcc cca cca ggg ctg ctg gca gtt ttc gga ggc 1313 Ala Gly Ala Phe Leu Ser Pro Pro Gly Leu Leu Ala Val Phe Gly Gly 235 240 245 cag gac ctc aac aat gcc ctg ggt gac ctc gtc cta tac aac ttc tcc 1361 Gln Asp Leu Asn Asn Ala Leu Gly Asp Leu Val Leu Tyr Asn Phe Ser 250 255 260 gcc aac acc tgg gag tct tgg gac ctg agt cct gcc ccg gct gcc cgt 1409 Ala Asn Thr Trp Glu Ser Trp Asp Leu Ser Pro Ala Pro Ala Ala Arg 265 270 275 cac tcc cat gtg gcc gtg gcc tgg gcc ggc tcc ctg gta ctg atg ggt 1457 His Ser His Val Ala Val Ala Trp Ala Gly Ser Leu Val Leu Met Gly 280 285 290 295 ggt gag ctg gct gac ggc tcg ctc acc aac gac gtg tgg gcc ttc agt 1505 Gly Glu Leu Ala Asp Gly Ser Leu Thr Asn Asp Val Trp Ala Phe Ser 300 305 310 cca ctg ggc agg ggc cac tgg gag ctc ctg gca cca cct gcc tcc agc 1553 Pro Leu Gly Arg Gly His Trp Glu Leu Leu Ala Pro Pro Ala Ser Ser 315 320 325 tcc tcg ggg ccc cca ggc ctg gca ggt cac gcg gct gcc ctg gtg gat 1601 Ser Ser Gly Pro Pro Gly Leu Ala Gly His Ala Ala Ala Leu Val Asp 330 335 340 gat gtc tgg cta tat gtg tct gga ggc cgc acc ccg cac gac ctc ttc 1649 Asp Val Trp Leu Tyr Val Ser Gly Gly Arg Thr Pro His Asp Leu Phe 345 350 355 tcc tct ggc ctc ttc cgt ttc cgc ctt gac agc acc agc ggg ggc tat 1697 Ser Ser Gly Leu Phe Arg Phe Arg Leu Asp Ser Thr Ser Gly Gly Tyr 360 365 370 375 tgg gag cag gtg att ccg gca ggc gga cgg ccc cct gct gcc act ggc 1745 Trp Glu Gln Val Ile Pro Ala Gly Gly Arg Pro Pro Ala Ala Thr Gly 380 385 390 cac tcc atg gtg ttc cat gcc ccc tcc cgt gcc ctg ctg gtc cat ggt 1793 His Ser Met Val Phe His Ala Pro Ser Arg Ala Leu Leu Val His Gly 395 400 405 gga cac cgg ccc tcc act gcc cgg ttc tct gtg cga gtg aac tcc act 1841 Gly His Arg Pro Ser Thr Ala Arg Phe Ser Val Arg Val Asn Ser Thr 410 415 420 gag ctt ttc cac gtg gat cgg cat gtg tgg acg acg ctg aag ggg cgg 1889 Glu Leu Phe His Val Asp Arg His Val Trp Thr Thr Leu Lys Gly Arg 425 430 435 gat ggg ctt cag ggc cca agg gag cga gcc ttc cac aca gcc agt gtt 1937 Asp Gly Leu Gln Gly Pro Arg Glu Arg Ala Phe His Thr Ala Ser Val 440 445 450 455 ctg ggc aat tac atg gtg gtc tat ggg ggc aat gtg cac acc cat tac 1985 Leu Gly Asn Tyr Met Val Val Tyr Gly Gly Asn Val His Thr His Tyr 460 465 470 cag gag gaa aag tgc tac gaa gat ggc atc ttc ttc tac cac ctt ggc 2033 Gln Glu Glu Lys Cys Tyr Glu Asp Gly Ile Phe Phe Tyr His Leu Gly 475 480 485 tgc cat caa tgg gtg tca gga gct gag ctt gcc ccg cca gga acc cct 2081 Cys His Gln Trp Val Ser Gly Ala Glu Leu Ala Pro Pro Gly Thr Pro 490 495 500 gag ggc cga gca gcg cct ccc agt ggt cgg tac tca cat gta gct gcg 2129 Glu Gly Arg Ala Ala Pro Pro Ser Gly Arg Tyr Ser His Val Ala Ala 505 510 515 gtg ctt ggt ggc agc gtc ctg ttg gtg gct ggg ggg tac agc ggc cgg 2177 Val Leu Gly Gly Ser Val Leu Leu Val Ala Gly Gly Tyr Ser Gly Arg 520 525 530 535 ccc cgt ggg gac ttg atg gcg tac aag gtg ccc ccc ttt gtg ttc cag 2225 Pro Arg Gly Asp Leu Met Ala Tyr Lys Val Pro Pro Phe Val Phe Gln 540 545 550 gca cct gcc cct gac tac cac ttg gac tac tgc tcc atg tac aca gac 2273 Ala Pro Ala Pro Asp Tyr His Leu Asp Tyr Cys Ser Met Tyr Thr Asp 555 560 565 cac agc gtc tgc tcc cgg gac ccg gaa tgc agt tgg tgc caa gga gcc 2321 His Ser Val Cys Ser Arg Asp Pro Glu Cys Ser Trp Cys Gln Gly Ala 570 575 580 tgc caa gct gca ccc cct cct ggg acc ccc ttg ggg gct tgt cca gcc 2369 Cys Gln Ala Ala Pro Pro Pro Gly Thr Pro Leu Gly Ala Cys Pro Ala 585 590 595 gcc agc tgc ctg ggc ctg ggc cgc ctc ctg ggt gac tgc cag gcc tgc 2417 Ala Ser Cys Leu Gly Leu Gly Arg Leu Leu Gly Asp Cys Gln Ala Cys 600 605 610 615 ctg gcc ttc agc agc ccc aca gcc cct cca cgg gga cct ggc acc ctg 2465 Leu Ala Phe Ser Ser Pro Thr Ala Pro Pro Arg Gly Pro Gly Thr Leu 620 625 630 ggc tgg tgc gtg cac aat gag agc tgc ctc cct agg cct gag cag gcc 2513 Gly Trp Cys Val His Asn Glu Ser Cys Leu Pro Arg Pro Glu Gln Ala 635 640 645 cgc tgc cga ggg gag cag atc tca ggc act gtg ggc tgg tgg ggg cct 2561 Arg Cys Arg Gly Glu Gln Ile Ser Gly Thr Val Gly Trp Trp Gly Pro 650 655 660 gcg cct gtc ttc gtc acg tcc ctg gag gcc tgc gtc acc cag agc ttc 2609 Ala Pro Val Phe Val Thr Ser Leu Glu Ala Cys Val Thr Gln Ser Phe 665 670 675 ctg cct ggc ctg cac ttg ctc acc ttt cag cag ccg ccc aat acc tcc 2657 Leu Pro Gly Leu His Leu Leu Thr Phe Gln Gln Pro Pro Asn Thr Ser 680 685 690 695 cag cct gac aag gag gag gtg ggg cgc tgg gtg gct cat cag gag aag 2705 Gln Pro Asp Lys Glu Glu Val Gly Arg Trp Val Ala His Gln Glu Lys 700 705 710 gag acg cgg cgg ctg cag cgc cct ggg tct gct cgc ctc ttc cct ctg 2753 Glu Thr Arg Arg Leu Gln Arg Pro Gly Ser Ala Arg Leu Phe Pro Leu 715 720 725 cct ggg cgg gac cac aag tat gca gta gag atc cag ggc cag ctc aat 2801 Pro Gly Arg Asp His Lys Tyr Ala Val Glu Ile Gln Gly Gln Leu Asn 730 735 740 ggc tcg gca ggc cct ggg cac agc gag cta act ctg ctg tgg gat cgg 2849 Gly Ser Ala Gly Pro Gly His Ser Glu Leu Thr Leu Leu Trp Asp Arg 745 750 755 act ggt gtg cca gga ggc agc gag atc tcc ttc ttc ttc ctg gag ccc 2897 Thr Gly Val Pro Gly Gly Ser Glu Ile Ser Phe Phe Phe Leu Glu Pro 760 765 770 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Leu Asp Gly Gly Gln Leu Val Trp Glu Thr Leu Met Asp Ser Arg 1420 1425 1430 ctc tca gcc gac act gcc agc cgc ttc ctg cac cgc ctg ggc cac acc 4913 Leu Ser Ala Asp Thr Ala Ser Arg Phe Leu His Arg Leu Gly His Thr 1435 1440 1445 atg gtg gat gga ccc gat gcc acc ttg tgg atg ttt ggg ggc ctg ggc 4961 Met Val Asp Gly Pro Asp Ala Thr Leu Trp Met Phe Gly Gly Leu Gly 1450 1455 1460 ctg ccc cag ggg ctg ctg gga aac ctg tac agg tac tca gtg agt gag 5009 Leu Pro Gln Gly Leu Leu Gly Asn Leu Tyr Arg Tyr Ser Val Ser Glu 1465 1470 1475 cgg cgg tgg aca cag atg ctg gcg gga gcc gag gac ggg ggc cca ggc 5057 Arg Arg Trp Thr Gln Met Leu Ala Gly Ala Glu Asp Gly Gly Pro Gly 1480 1485 1490 1495 cca tcg ccc cgc tcc ttc cat gca gcc gca tat gtg ccc gct ggc cgt 5105 Pro Ser Pro Arg Ser Phe His Ala Ala Ala Tyr Val Pro Ala Gly Arg 1500 1505 1510 ggt gcc atg tat ctg ctg ggg gga ctt acc gct gga ggc gtc acc cgt 5153 Gly Ala Met Tyr Leu Leu Gly Gly Leu Thr Ala Gly Gly Val Thr Arg 1515 1520 1525 gat ttc tgg gtc ctc aac ctc acc acc ctg caa tgg cgg cag gag aag 5201 Asp Phe Trp Val Leu Asn Leu Thr Thr Leu Gln Trp Arg Gln Glu Lys 1530 1535 1540 gcc ccc cag acc gtg gag ctg cca gcc gtt gct ggt cac acc ctt act 5249 Ala Pro Gln Thr Val Glu Leu Pro Ala Val Ala Gly His Thr Leu Thr 1545 1550 1555 gcc cgc cga ggc ctg tct ctg ctc ctg gtg ggc ggt tac tcc ccg gaa 5297 Ala Arg Arg Gly Leu Ser Leu Leu Leu Val Gly Gly Tyr Ser Pro Glu 1560 1565 1570 1575 aat ggc ttc aac cag cag ctg ctg gag tac cag ctg gca acc ggc acc 5345 Asn Gly Phe Asn Gln Gln Leu Leu Glu Tyr Gln Leu Ala Thr Gly Thr 1580 1585 1590 tgg gtg tca gga gcc cag agt ggg aca ccc ccc aca ggt ctc tat ggt 5393 Trp Val Ser Gly Ala Gln Ser Gly Thr Pro Pro Thr Gly Leu Tyr Gly 1595 1600 1605 cac tct gct gtc tac cac gag gcc acc gac tcc ctc tac gtg ttt ggg 5441 His Ser Ala Val Tyr His Glu Ala Thr Asp Ser Leu Tyr Val Phe Gly 1610 1615 1620 ggg ttc cga ttc cat gtg gag ctg gcg gcc cca tcc ccc gag ctc tac 5489 Gly Phe Arg Phe His Val Glu Leu Ala Ala Pro Ser Pro Glu Leu Tyr 1625 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Asp His Cys Arg Cys His Phe Gly Phe Val Gly Arg Asn Cys Ser 2170 2175 2180 acg gaa tgc cgc tgc aac cgc cac agt gaa tgc gct ggt gtt ggg gcg 7169 Thr Glu Cys Arg Cys Asn Arg His Ser Glu Cys Ala Gly Val Gly Ala 2185 2190 2195 cgt gac cac tgc ttg ctc tgc cgc aac cac acc aag ggc agc cac tgt 7217 Arg Asp His Cys Leu Leu Cys Arg Asn His Thr Lys Gly Ser His Cys 2200 2205 2210 2215 gag cag tgc ctc ccg ctg ttt gtg ggt tca gct gtc gga ggc ggg acc 7265 Glu Gln Cys Leu Pro Leu Phe Val Gly Ser Ala Val Gly Gly Gly Thr 2220 2225 2230 tgc cgg ccc tgc cac gcc ttt tgt cgt gga aat agc cac atc tgc atc 7313 Cys Arg Pro Cys His Ala Phe Cys Arg Gly Asn Ser His Ile Cys Ile 2235 2240 2245 tcc agg aag gag tta caa atg tcc aag gga gag cca aag aag tac tca 7361 Ser Arg Lys Glu Leu Gln Met Ser Lys Gly Glu Pro Lys Lys Tyr Ser 2250 2255 2260 ctg gac cca gag gag att gaa aac tgg gtg aca gag ggt cct agt gaa 7409 Leu Asp Pro Glu Glu Ile Glu Asn Trp Val Thr Glu Gly Pro Ser Glu 2265 2270 2275 gac gag gcc gtg tgc gtg aac tgc cag aat aac agc tat ggg gag aaa 7457 Asp Glu Ala Val Cys Val Asn Cys Gln Asn Asn Ser Tyr Gly Glu Lys 2280 2285 2290 2295 tgc gag agc tgc ctg cag ggc tac ttc ctc ctg gac ggg aag tgc acc 7505 Cys Glu Ser Cys Leu Gln Gly Tyr Phe Leu Leu Asp Gly Lys Cys Thr 2300 2305 2310 aaa tgc cag tgt aat ggc cac gcg gac aca tgt aac gag cag gat ggg 7553 Lys Cys Gln Cys Asn Gly His Ala Asp Thr Cys Asn Glu Gln Asp Gly 2315 2320 2325 acg ggc tgt cca tgt cag aat aac aca gag acg ggc aca tgc cag ggc 7601 Thr Gly Cys Pro Cys Gln Asn Asn Thr Glu Thr Gly Thr Cys Gln Gly 2330 2335 2340 agc tcc ccc agt gac cgt cga gac tgc tac aag tac cag tgc gcc aag 7649 Ser Ser Pro Ser Asp Arg Arg Asp Cys Tyr Lys Tyr Gln Cys Ala Lys 2345 2350 2355 tgc cgg gaa tca ttt cac ggg agt ccg ctg ggc ggc cag cag tgc tac 7697 Cys Arg Glu Ser Phe His Gly Ser Pro Leu Gly Gly Gln Gln Cys Tyr 2360 2365 2370 2375 cgc ctc atc tcg gtg gag cag gag tgc tgc ctg gac ccc acg tcc cag 7745 Arg Leu Ile Ser Val Glu Gln Glu Cys Cys Leu Asp Pro Thr Ser Gln 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cag gag cag 8417 Val Leu Leu Trp Lys Ala Lys Gln Ala Leu Asp Gln Arg Gln Glu Gln 2600 2605 2610 2615 cgc cgg cac ttg cag gag atg acc aag atg gcc agc cgc ccc ttc gcc 8465 Arg Arg His Leu Gln Glu Met Thr Lys Met Ala Ser Arg Pro Phe Ala 2620 2625 2630 aag gtc acc gtc tgc ttc cca cct gac cct act gcc ccg gcc tcc gcc 8513 Lys Val Thr Val Cys Phe Pro Pro Asp Pro Thr Ala Pro Ala Ser Ala 2635 2640 2645 tgg aag ccg gct ggg ctc cca cct ccc gcc ttc cgc cgc tct gag ccc 8561 Trp Lys Pro Ala Gly Leu Pro Pro Pro Ala Phe Arg Arg Ser Glu Pro 2650 2655 2660 ttc ctg gca ccc ctg ctg ctg aca ggg gcc ggt ggg ccc tgg gga ccc 8609 Phe Leu Ala Pro Leu Leu Leu Thr Gly Ala Gly Gly Pro Trp Gly Pro 2665 2670 2675 atg gga ggg ggc tgc tgc cca cca gcc atc ccc gcc acc act gct ggg 8657 Met Gly Gly Gly Cys Cys Pro Pro Ala Ile Pro Ala Thr Thr Ala Gly 2680 2685 2690 2695 ctg cga gct ggg ccc atc act ctc gag ccc aca gaa gat ggc atg gct 8705 Leu Arg Ala Gly Pro Ile Thr Leu Glu Pro Thr Glu Asp Gly Met Ala 2700 2705 2710 ggc 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gag gac aac ccc aca ctg gga cgg 3473 His Glu Cys Gly Trp Cys Gly Asn Glu Asp Asn Pro Thr Leu Gly Arg 955 960 965 tgc cta cag ggg gac ttc tca ggg ccc ctc ggt ggg ggt aac tgc tcc 3521 Cys Leu Gln Gly Asp Phe Ser Gly Pro Leu Gly Gly Gly Asn Cys Ser 970 975 980 ctg tgg gtg ggg gag ggc ctg ggg ctt ccc gtg gcc ctc cct gcc cgc 3569 Leu Trp Val Gly Glu Gly Leu Gly Leu Pro Val Ala Leu Pro Ala Arg 985 990 995 tgg gca tac gcc cgc tgt cct gac gtg gat gag tgt cgc ctg ggc ctg 3617 Trp Ala Tyr Ala Arg Cys Pro Asp Val Asp Glu Cys Arg Leu Gly Leu 1000 1005 1010 1015 gcc cgg tgc cac ccg cgg gcg acc tgc ctg aac acg ccc ctc agc tac 3665 Ala Arg Cys His Pro Arg Ala Thr Cys Leu Asn Thr Pro Leu Ser Tyr 1020 1025 1030 gag tgt cac tgc cag cgg ggc tac cag ggt gat ggc atc tca cac tgc 3713 Glu Cys His Cys Gln Arg Gly Tyr Gln Gly Asp Gly Ile Ser His Cys 1035 1040 1045 aac cgc acg tgc ttg gag gac tgt ggc cat ggt gtg tgc agt ggc ccc 3761 Asn Arg Thr Cys Leu Glu Asp Cys Gly His Gly Val Cys Ser Gly Pro 1050 1055 1060 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cac act ggg gca gga act tgt aac cag agc ctg 4769 Glu Asn Cys Asn Ala His Thr Gly Ala Gly Thr Cys Asn Gln Ser Leu 1385 1390 1395 ggt gtg tgc atc tgt gcc gag ggc ttc ggg ggc ccc gac tgc gcc acc 4817 Gly Val Cys Ile Cys Ala Glu Gly Phe Gly Gly Pro Asp Cys Ala Thr 1400 1405 1410 1415 aag ctg gat ggc ggg cag ctg gtc tgg gag acc ctc atg gac agc cgc 4865 Lys Leu Asp Gly Gly Gln Leu Val Trp Glu Thr Leu Met Asp Ser Arg 1420 1425 1430 ctc tca gcc gac act gcc agc cgc ttc ctg cac cgc ctg ggc cac acc 4913 Leu Ser Ala Asp Thr Ala Ser Arg Phe Leu His Arg Leu Gly His Thr 1435 1440 1445 atg gtg gat gga ccc gat gcc acc ttg tgg atg ttt ggg ggc ctg ggc 4961 Met Val Asp Gly Pro Asp Ala Thr Leu Trp Met Phe Gly Gly Leu Gly 1450 1455 1460 ctg ccc cag ggg ctg ctg gga aac ctg tac agg tac tca gtg agt gag 5009 Leu Pro Gln Gly Leu Leu Gly Asn Leu Tyr Arg Tyr Ser Val Ser Glu 1465 1470 1475 cgg cgg tgg aca cag atg ctg gcg gga gcc gag gac ggg ggc cca ggc 5057 Arg Arg Trp Thr Gln Met Leu Ala Gly Ala Glu Asp Gly Gly 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ccc cca atg gag gag tct gtg 5729 Asp Leu Thr Arg Ser Ala Ser Val Gly Pro Pro Met Glu Glu Ser Val 1705 1710 1715 gcc cat gct gtg gca gca gtc ggg agc cgc ctg tat atc tct ggg ggt 5777 Ala His Ala Val Ala Ala Val Gly Ser Arg Leu Tyr Ile Ser Gly Gly 1720 1725 1730 1735 ttc ggg gga gtg gcc ctg ggc cgc ctg ctg gca ctg acc ctg ccc cct 5825 Phe Gly Gly Val Ala Leu Gly Arg Leu Leu Ala Leu Thr Leu Pro Pro 1740 1745 1750 gac ccc tgc cgc ctg ctg tcc tca cct gaa gct tgt aac cag tct ggg 5873 Asp Pro Cys Arg Leu Leu Ser Ser Pro Glu Ala Cys Asn Gln Ser Gly 1755 1760 1765 gcc tgc acc tgg tgc cat ggg gcc tgc ttg tcc ggg gat cag gcc cac 5921 Ala Cys Thr Trp Cys His Gly Ala Cys Leu Ser Gly Asp Gln Ala His 1770 1775 1780 agg ctg ggc tgc ggg ggc tcc ccc tgc tcc cca atg cct cgc tcc ccg 5969 Arg Leu Gly Cys Gly Gly Ser Pro Cys Ser Pro Met Pro Arg Ser Pro 1785 1790 1795 gag gaa tgt cgg cgt ctc cgg acc tgc agt gag tgc ctg gcc cgc cat 6017 Glu Glu Cys Arg Arg Leu Arg Thr Cys Ser Glu Cys Leu Ala Arg His 1800 1805 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tgc gct ggt gtt ggg gcg cgt gac cac tgc ttg ctc tgc cgc 7025 Ser Glu Cys Ala Gly Val Gly Ala Arg Asp His Cys Leu Leu Cys Arg 2140 2145 2150 aac cac acc aag ggc agc cac tgt gag cag tgc ctc ccg ctg ttt gtg 7073 Asn His Thr Lys Gly Ser His Cys Glu Gln Cys Leu Pro Leu Phe Val 2155 2160 2165 ggt tca gct gtc gga ggc ggg acc tgc cgg ccc tgc cac gcc ttt tgt 7121 Gly Ser Ala Val Gly Gly Gly Thr Cys Arg Pro Cys His Ala Phe Cys 2170 2175 2180 cgt gga aat agc cac atc tgc atc tcc agg aag gag tta caa atg tcc 7169 Arg Gly Asn Ser His Ile Cys Ile Ser Arg Lys Glu Leu Gln Met Ser 2185 2190 2195 aag gga gag cca aag aag tac tca ctg gac cca gag gag att gaa aac 7217 Lys Gly Glu Pro Lys Lys Tyr Ser Leu Asp Pro Glu Glu Ile Glu Asn 2200 2205 2210 2215 tgg gtg aca gag ggt cct agt gaa gac gag gcc gtg tgc gtg aac tgc 7265 Trp Val Thr Glu Gly Pro Ser Glu Asp Glu Ala Val Cys Val Asn Cys 2220 2225 2230 cag aat aac agc tat ggg gag aaa tgc gag agc tgc ctg cag ggc tac 7313 Gln Asn Asn Ser Tyr Gly Glu Lys Cys Glu Ser 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cctcctttgt 8014 tctgcattca gcagctattt atcgagtacc tactctgtca ggcactgtca taggcgtggg 8074 gcaaagcagg aaccaagaga cgaggttccc tgatctcatg ggacttaggt tctggtgaag 8134 ggagacaatc agtgcacatg cacacacccc acacgcatac acacatgaac acatgcacat 8194 gtgcacacac aagtaagatg gcttcagaga gggagaagca ctgtgaggcc tccagaggat 8254 gtggcagtga gggacgatgg ggtgaagtca gctgggcatt caaagaagct agactgagaa 8314 cgcctgagaa gaaccagcta cgggaagagc tttgggaagc aaaggcagag gccctggggt 8374 gggagcaggc ttgttttatt ggaaggacca gaaaactggt aagtgtgacc cagatcaagt 8434 gtgaggagat gaggctgggg atagtcaggg gctggatcac ccagggcctt gtgggcccca 8494 catagggttt tgggttttat tctcagggca atgggaagct gttggatggt ttgatgaagg 8554 ggagtgacag gatccgatgt acctatttaa gaatttaaga gggtcgggtg cggtggctca 8614 tgcctataat cctagcactt tgagaggcca aggtgggctg atcacaaggt caagagttcg 8674 tgaccagcct ggccaatatg gtgaaacccc atgtctacta aaaatacaaa aattagctgg 8734 gcatggtggc acacacttgt ggtccgagct actcgggagg ctgaggcaga agaatcgctt 8794 gaacccggga ggcggaggtt gcagtgagct cagattgcgt cactgcactc 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Arg Phe His Val Glu Leu Ala 1620 1625 1630 Ala Pro Ser Pro Glu Leu Tyr Ser Leu His Cys Pro Asp Arg Thr Trp 1635 1640 1645 Ser Leu Leu Ala Pro Ser Gln Gly Ala Lys Pro Arg Pro Arg Leu Phe 1650 1655 1660 His Ala Ser Ala Leu Leu Gly Asp Thr Met Val Val Leu Gly Gly Arg 1665 1670 1675 1680 Ser Asp Pro Asp Glu Phe Ser Ser Asp Val Leu Leu Tyr Gln Val Asn 1685 1690 1695 Cys Asn Ala Trp Leu Leu Pro Asp Leu Thr Arg Ser Ala Ser Val Gly 1700 1705 1710 Pro Pro Met Glu Glu Ser Val Ala His Ala Val Ala Ala Val Gly Ser 1715 1720 1725 Arg Leu Tyr Ile Ser Gly Gly Phe Gly Gly Val Ala Leu Gly Arg Leu 1730 1735 1740 Leu Ala Leu Thr Leu Pro Pro Asp Pro Cys Arg Leu Leu Ser Ser Pro 1745 1750 1755 1760 Glu Ala Cys Asn Gln Ser Gly Ala Cys Thr Trp Cys His Gly Ala Cys 1765 1770 1775 Leu Ser Gly Asp Gln Ala His Arg Leu Gly Cys Gly Gly Ser Pro Cys 1780 1785 1790 Ser Pro Met Pro Arg Ser Pro Glu Glu Cys Arg Arg Leu Arg Thr Cys 1795 1800 1805 Ser Glu Cys Leu Ala Arg His Pro Arg Thr Leu Gln Pro Gly Asp Gly 1810 1815 1820 Glu Ala Ser Thr Pro Arg Cys Lys Trp Cys Thr Asn Cys Pro Glu Gly 1825 1830 1835 1840 Ala Cys Ile Gly Arg Asn Gly Ser Cys Thr Ser Glu Asn Asp Cys Arg 1845 1850 1855 Ile Asn Gln Arg Glu Val Phe Trp Ala Gly Asn Cys Ser Glu Ala Ala 1860 1865 1870 Cys Gly Ala Ala Asp Cys Glu Gln Cys Thr Arg Glu Gly Lys Cys Met 1875 1880 1885 Trp Thr Arg Gln Phe Lys Arg Thr Gly Glu Thr Arg Arg Ile Leu Ser 1890 1895 1900 Val Gln Pro Thr Tyr Asp Trp Thr Cys Phe Ser His Ser Leu Leu Asn 1905 1910 1915 1920 Val Ser Pro Met Pro Val Glu Ser Ser Pro Pro Leu Pro Cys Pro Thr 1925 1930 1935 Pro Cys His Leu Leu Pro Asn Cys Thr Ser Cys Leu Asp Ser Lys Gly 1940 1945 1950 Ala Asp Gly Gly Trp Gln His Cys Val Trp Ser Ser Ser Leu Gln Gln 1955 1960 1965 Cys Leu Ser Pro Ser Tyr Leu Pro Leu Arg Cys Met Ala Gly Gly Cys 1970 1975 1980 Gly Arg Leu Leu Arg Gly Pro Glu Ser Cys Ser Leu Gly Cys Ala Gln 1985 1990 1995 2000 Ala Thr Gln Cys Ala Leu Cys Leu Arg Arg Pro His Cys Gly Trp Cys 2005 2010 2015 Ala Trp Gly Gly Gln Asp Gly Gly Gly Arg Cys Met Glu Gly Gly Leu 2020 2025 2030 Ser Gly Pro Arg Asp Gly Leu Thr Cys Gly Arg Pro Gly Ala Ser Trp 2035 2040 2045 Ala Phe Leu Ser Cys Pro Pro Glu Asp Glu Cys Ala Asn Gly His His 2050 2055 2060 Asp Cys Asn Glu Thr Gln Asn Cys His Asp Gln Pro His Gly Tyr Glu 2065 2070 2075 2080 Cys Ser Cys Lys Thr Gly Tyr Thr Met Asp Asn Met Thr Gly Leu Cys 2085 2090 2095 Arg Pro Val Cys Ala Gln Gly Cys Val Asn Gly Ser Cys Val Glu Pro 2100 2105 2110 Asp His Cys Arg Cys His Phe Gly Phe Val Gly Arg Asn Cys Ser Thr 2115 2120 2125 Glu Cys Arg Cys Asn Arg His Ser Glu Cys Ala Gly Val Gly Ala Arg 2130 2135 2140 Asp His Cys Leu Leu Cys Arg Asn His Thr Lys Gly Ser His Cys Glu 2145 2150 2155 2160 Gln Cys Leu Pro Leu Phe Val Gly Ser Ala Val Gly Gly Gly Thr Cys 2165 2170 2175 Arg Pro Cys His Ala Phe Cys Arg Gly Asn Ser His Ile Cys Ile Ser 2180 2185 2190 Arg Lys Glu Leu Gln Met Ser Lys Gly Glu Pro Lys Lys Tyr Ser Leu 2195 2200 2205 Asp Pro Glu Glu Ile Glu Asn Trp Val Thr Glu Gly Pro Ser Glu Asp 2210 2215 2220 Glu Ala Val Cys Val Asn Cys Gln Asn Asn Ser Tyr Gly Glu Lys Cys 2225 2230 2235 2240 Glu Ser Cys Leu Gln Gly Tyr Phe Leu Leu Asp Gly Lys Cys Thr Lys 2245 2250 2255 Pro Ser Arg Leu Trp Thr Ser Gly Arg Ser Ser Ala Gly Thr Cys Arg 2260 2265 2270 Arg
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 9/00 Ａ６１Ｐ 35/00 19/00 37/00 35/00 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ 37/00 Ａ６１Ｋ 37/02 (72)発明者 長瀬 隆弘 千葉県木更津市矢那1532番３号 財団法人 かずさディー・エヌ・エー研究所内 (72)発明者 小原 收 千葉県木更津市矢那1532番３号 財団法人 かずさディー・エヌ・エー研究所内
Claims (5)
- 【請求項１】 以下の（ａ）又は（ｂ）の蛋白質をコー
ドする塩基配列を含むＤＮＡ： （ａ）配列番号：２又は４で示されるアミノ酸配列と同
一又は実質的に同一のアミノ酸配列から成る蛋白質、 （ｂ）配列番号：２又は４で示されるアミノ酸配列にお
いて、一部のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミ
ノ酸配列から成り、結合型ＭＥＧＦ８又は分泌型ＭＥＧ
Ｆ８と実質的に同質の生物学的活性を有する蛋白質。 - 【請求項２】 以下の（ａ）又は（ｂ）のＤＮＡ： （ａ）配列番号：１又は３で示される塩基配列におい
て、配列番号：２又は４で示されるアミノ酸配列をコー
ドする塩基配列を含むＤＮＡ、 (ｂ）（ａ）のＤＮＡとストリンジェントな条件下でハ
イブリダイズし、結合型ＭＥＧＦ８又は分泌型ＭＥＧＦ
８と実質的に同質の生物学的活性を有する蛋白質をコー
ドするＤＮＡ。 - 【請求項３】請求項１又は２に記載のＤＮＡを含む遺伝
子。 - 【請求項４】 以下の（ａ）又は（ｂ）の組換え蛋白
質： （ａ）配列番号：２又は４で示されるアミノ酸配列と同
一又は実質的に同一のアミノ酸配列から成る蛋白質、 (ｂ）配列番号：２又は４で示されるアミノ酸配列にお
いて、一部のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミ
ノ酸配列から成り、結合型ＭＥＧＦ８又は分泌型ＭＥＧ
Ｆ８と実質的に同質の生物学的活性を有する蛋白質。 - 【請求項５】請求項３に記載の遺伝子にコードされる組
換え蛋白質。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001151059A JP2002360254A (ja) | 2001-03-27 | 2001-05-21 | 新規膜結合型−分泌型ｍｅｇｆ８遺伝子及びそれにコードされる蛋白質 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001-90438 | 2001-03-27 | ||
| JP2001090438 | 2001-03-27 | ||
| JP2001151059A JP2002360254A (ja) | 2001-03-27 | 2001-05-21 | 新規膜結合型−分泌型ｍｅｇｆ８遺伝子及びそれにコードされる蛋白質 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2002360254A true JP2002360254A (ja) | 2002-12-17 |
Family
ID=26612217
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2001151059A Pending JP2002360254A (ja) | 2001-03-27 | 2001-05-21 | 新規膜結合型−分泌型ｍｅｇｆ８遺伝子及びそれにコードされる蛋白質 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2002360254A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2011051278A1 (en) | 2009-10-26 | 2011-05-05 | Externautics S.P.A. | Lung tumor markers and methods of use thereof |
| WO2011051276A1 (en) | 2009-10-26 | 2011-05-05 | Externautics S.P.A. | Colon and rectal tumor markers and methods of use thereof |
-
2001
- 2001-05-21 JP JP2001151059A patent/JP2002360254A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2011051278A1 (en) | 2009-10-26 | 2011-05-05 | Externautics S.P.A. | Lung tumor markers and methods of use thereof |
| WO2011051276A1 (en) | 2009-10-26 | 2011-05-05 | Externautics S.P.A. | Colon and rectal tumor markers and methods of use thereof |
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