JP2001258573A - 新規ファット３遺伝子及びそれにコードされる蛋白質 - Google Patents
新規ファット３遺伝子及びそれにコードされる蛋白質Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】ヒト胎児脳由来のｃＤＮＡライブラリーから、
上記のようなヒトのFAT1（ファット１）遺伝子及びMEGF
1/fat2（ファット２）遺伝子に高いホモロジーを示す遺
伝子（ＤＮＡ）をクローニングすること。 【解決手段】以下の（ａ）又は（ｂ）のポリペプチドを
コードする塩基配列から成るＤＮＡ： （ａ）配列番号：１で示されるアミノ酸配列と同一又は
実質的に同一のアミノ酸配列から成るポリペプチド、
（ｂ）配列番号：１で示されるアミノ酸配列において、
一部のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配
列から成り、（ａ）のポリペプチド、ヒトファット１蛋
白質又はヒトファット２蛋白質と実質的に同質の生物学
的活性を有するポリペプチド、該ＤＮＡにコードされる
ポリペプチド、及び該ポリペプチドを含むヒトファット
３蛋白質。
上記のようなヒトのFAT1（ファット１）遺伝子及びMEGF
1/fat2（ファット２）遺伝子に高いホモロジーを示す遺
伝子（ＤＮＡ）をクローニングすること。 【解決手段】以下の（ａ）又は（ｂ）のポリペプチドを
コードする塩基配列から成るＤＮＡ： （ａ）配列番号：１で示されるアミノ酸配列と同一又は
実質的に同一のアミノ酸配列から成るポリペプチド、
（ｂ）配列番号：１で示されるアミノ酸配列において、
一部のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配
列から成り、（ａ）のポリペプチド、ヒトファット１蛋
白質又はヒトファット２蛋白質と実質的に同質の生物学
的活性を有するポリペプチド、該ＤＮＡにコードされる
ポリペプチド、及び該ポリペプチドを含むヒトファット
３蛋白質。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、発生段階における
形態形成、組織形成過程における細胞の接着や分離に関
与するヒト及びラット由来の新規蛋白質であるファット
(fat)、及びそれをコードする遺伝子（ＤＮＡ）に関す
る。
形態形成、組織形成過程における細胞の接着や分離に関
与するヒト及びラット由来の新規蛋白質であるファット
(fat)、及びそれをコードする遺伝子（ＤＮＡ）に関す
る。
【０００２】
【従来の技術】近年のノックアウトマウスの実験結果か
ら得られた知見から、重要な遺伝子の欠失が必ずしも病
気を引き起こすものではないことが明らかになってき
た。つまり、重要な遺伝子の欠失が起こると発生段階が
進まず、妊娠のかなり初期に流産してしまったり、逆に
重要な遺伝子ほど機能的に相補するシステムができあが
って無くなっても表現型にあらわれてこなかったりする
ことがある。このことは、ヒトの病気の大部分が単なる
遺伝子の欠失によって引き起こされるのではなくて、ア
ミノ酸置換によって蛋白質の機能や活性が一部分だけ変
化することにより引き起こされる事を意味する。また、
蛋白質の一部のアミノ酸を人工的に変化させても全く蛋
白質の機能や活性に変化を及ぼさない部分も多いことが
わかっている。
ら得られた知見から、重要な遺伝子の欠失が必ずしも病
気を引き起こすものではないことが明らかになってき
た。つまり、重要な遺伝子の欠失が起こると発生段階が
進まず、妊娠のかなり初期に流産してしまったり、逆に
重要な遺伝子ほど機能的に相補するシステムができあが
って無くなっても表現型にあらわれてこなかったりする
ことがある。このことは、ヒトの病気の大部分が単なる
遺伝子の欠失によって引き起こされるのではなくて、ア
ミノ酸置換によって蛋白質の機能や活性が一部分だけ変
化することにより引き起こされる事を意味する。また、
蛋白質の一部のアミノ酸を人工的に変化させても全く蛋
白質の機能や活性に変化を及ぼさない部分も多いことが
わかっている。
【０００３】このような観点から、遺伝子には、ヒトの
病気を引き起こしやすい遺伝子とヒトの病気を引き起こ
しにくい遺伝子が存在することになる。Nakayama et. a
l.,1998で議論しているように、EGF様モチーフ（EGF -l
ike motif）やカドヘリンドメインなどのドメインをタ
ンデムに持つマルチドメインで構成される巨大な蛋白質
の遺伝子は、最も病気の責任遺伝子となる可能性の高い
遺伝子群の一つである。
病気を引き起こしやすい遺伝子とヒトの病気を引き起こ
しにくい遺伝子が存在することになる。Nakayama et. a
l.,1998で議論しているように、EGF様モチーフ（EGF -l
ike motif）やカドヘリンドメインなどのドメインをタ
ンデムに持つマルチドメインで構成される巨大な蛋白質
の遺伝子は、最も病気の責任遺伝子となる可能性の高い
遺伝子群の一つである。
【０００４】細胞の接着（結合）はヒトを含めた多細胞
生物にとっては基本的な性質である。多細胞生物は１つ
の受精卵から細胞分裂を繰り返し、細胞の分化、形態形
成を経て成体が形成される。細胞接着は単に細胞同士を
結合しているという静的な過程ではなく、特有の接着構
造を形成し、特異的な結合を担い、様々な調節を受けて
さまざまな機能を果たしていることが考えられる。ま
た、細胞接着の機構を通して正常な形態形成が行われる
ため、この細胞接着に関わる蛋白質に突然変異が起こり
活性や機能が変化すると、正しい形態形成が行われない
ので奇形が生じると考えられる。細胞接着に直接的に関
与する因子は、膜蛋白質または細胞外マトリックスであ
ると考えられている。
生物にとっては基本的な性質である。多細胞生物は１つ
の受精卵から細胞分裂を繰り返し、細胞の分化、形態形
成を経て成体が形成される。細胞接着は単に細胞同士を
結合しているという静的な過程ではなく、特有の接着構
造を形成し、特異的な結合を担い、様々な調節を受けて
さまざまな機能を果たしていることが考えられる。ま
た、細胞接着の機構を通して正常な形態形成が行われる
ため、この細胞接着に関わる蛋白質に突然変異が起こり
活性や機能が変化すると、正しい形態形成が行われない
ので奇形が生じると考えられる。細胞接着に直接的に関
与する因子は、膜蛋白質または細胞外マトリックスであ
ると考えられている。
【０００５】カドヘリンはカルシウム依存的の細胞接着
を担う分子で、組織の構築や維持に関与している。クラ
シックタイプのカドヘリンは、一回膜貫通型の膜蛋白質
で、N末端側に細胞外ドメインが、またC末端側に細胞内
ドメインが存在している。細胞外ドメインには、カドヘ
リンを特徴づける約１１０個のアミノ酸からなるカドヘ
リンドメインの繰り返し構造（クラシックタイプのカド
ヘリンは、５個である。）が存在する。カドヘリンの細
胞接着活性は同じ型の分子同士が結合するホモフィリッ
クな結合様式であることが一般的である。カドヘリンド
メインの繰り返し構造を持つものは、クラシックカドヘ
リンやプロトカドヘリンなどのサブファミリーを含む大
きなファミリーを形成しており、特にプロトカドヘリン
の仲間は、プラナリアから哺乳類に至まで多くの分子が
見つかっている。細胞内ドメインは、クラシックタイプ
のカドヘリン同士は高いホモロジーを示すが、クラシッ
クタイプの以外のプロトカドヘリンは、ホモロジーがな
くそれぞれ特有の配列を持っている。このことは細胞内
ドメインが似ていれば、同じような機能をすることを示
している。
を担う分子で、組織の構築や維持に関与している。クラ
シックタイプのカドヘリンは、一回膜貫通型の膜蛋白質
で、N末端側に細胞外ドメインが、またC末端側に細胞内
ドメインが存在している。細胞外ドメインには、カドヘ
リンを特徴づける約１１０個のアミノ酸からなるカドヘ
リンドメインの繰り返し構造（クラシックタイプのカド
ヘリンは、５個である。）が存在する。カドヘリンの細
胞接着活性は同じ型の分子同士が結合するホモフィリッ
クな結合様式であることが一般的である。カドヘリンド
メインの繰り返し構造を持つものは、クラシックカドヘ
リンやプロトカドヘリンなどのサブファミリーを含む大
きなファミリーを形成しており、特にプロトカドヘリン
の仲間は、プラナリアから哺乳類に至まで多くの分子が
見つかっている。細胞内ドメインは、クラシックタイプ
のカドヘリン同士は高いホモロジーを示すが、クラシッ
クタイプの以外のプロトカドヘリンは、ホモロジーがな
くそれぞれ特有の配列を持っている。このことは細胞内
ドメインが似ていれば、同じような機能をすることを示
している。
【０００６】カドヘリンの機能としては発生段階におけ
る形態形成、組織形成過程における細胞の接着や分離に
関与し、また成体においてはこのようにして作られた組
織の維持に関わっていることが考えられている。このこ
とから、カドヘリンスーパーファミリーの突然変異は、
先天性奇形症候群の原因となりうる。また、カドヘリン
スーパーファミリーは、癌の転移との関連でも研究が進
んでいる。癌細胞の浸潤能と細胞間接着活性との間には
強い相関があり、癌細胞の接着能の低下、喪失は癌の転
移に促進的に働くことが示されている (Birchmeier,W.
et. al. 1994 Biochem. Biophy. Acta Rev. Cancer, 11
98;11-26) 。 実際、比較的若年齢で発症する胃癌の家
系においてE-カドヘリンの遺伝子に変異のあることが明
らかになっている。(Guilford, P. et. al. 1998 Natur
e, 392:402-405)
る形態形成、組織形成過程における細胞の接着や分離に
関与し、また成体においてはこのようにして作られた組
織の維持に関わっていることが考えられている。このこ
とから、カドヘリンスーパーファミリーの突然変異は、
先天性奇形症候群の原因となりうる。また、カドヘリン
スーパーファミリーは、癌の転移との関連でも研究が進
んでいる。癌細胞の浸潤能と細胞間接着活性との間には
強い相関があり、癌細胞の接着能の低下、喪失は癌の転
移に促進的に働くことが示されている (Birchmeier,W.
et. al. 1994 Biochem. Biophy. Acta Rev. Cancer, 11
98;11-26) 。 実際、比較的若年齢で発症する胃癌の家
系においてE-カドヘリンの遺伝子に変異のあることが明
らかになっている。(Guilford, P. et. al. 1998 Natur
e, 392:402-405)
【０００７】fatと名付けられたショウジョウバエの変
異体は、幼虫の時期に将来成虫の足や羽になる予定の場
所、成虫原基（imaginal disc ）が異常に増殖する腫瘍
様の表原型を示す。このことから、fat遺伝子は増殖を
調節する腫瘍抑制遺伝子(Tumor Suppressor gene)であ
り、同時に形態形成に関与していると考えられている(M
ahoney, P. et al., 1991, Cell 67: 853-868)。その責
任遺伝子（fat）は34個のカドヘリンドメインと4個のEG
F様ドメインの繰り返し構造からなる5147アミノ酸から
なる巨大な蛋白質をコードする。ヒトのFAT1遺伝子は、
Dunne, J. らによって既に報告されている（Dunne, J.e
t. al., 1995, Genomics 30:207-223）。また、ヒトと
ラットのMEGF1/fat2遺伝子は、我々がクローニングし、
小脳特異的に発現していることを報告した(Nakayama,
M. et. al., 1998 Genomics 51: 27-34)。
異体は、幼虫の時期に将来成虫の足や羽になる予定の場
所、成虫原基（imaginal disc ）が異常に増殖する腫瘍
様の表原型を示す。このことから、fat遺伝子は増殖を
調節する腫瘍抑制遺伝子(Tumor Suppressor gene)であ
り、同時に形態形成に関与していると考えられている(M
ahoney, P. et al., 1991, Cell 67: 853-868)。その責
任遺伝子（fat）は34個のカドヘリンドメインと4個のEG
F様ドメインの繰り返し構造からなる5147アミノ酸から
なる巨大な蛋白質をコードする。ヒトのFAT1遺伝子は、
Dunne, J. らによって既に報告されている（Dunne, J.e
t. al., 1995, Genomics 30:207-223）。また、ヒトと
ラットのMEGF1/fat2遺伝子は、我々がクローニングし、
小脳特異的に発現していることを報告した(Nakayama,
M. et. al., 1998 Genomics 51: 27-34)。
【０００８】
【本発明が解決する課題】今回、本発明者は、ヒト胎児
脳由来のｃＤＮＡライブラリーから、上記のようなヒト
のFAT1（ファット１）遺伝子及びMEGF1/fat2（ファット
２）遺伝子に高いホモロジーを示す遺伝子（ＤＮＡ）を
クローニングすることに成功し、本発明を完成するに至
った。
脳由来のｃＤＮＡライブラリーから、上記のようなヒト
のFAT1（ファット１）遺伝子及びMEGF1/fat2（ファット
２）遺伝子に高いホモロジーを示す遺伝子（ＤＮＡ）を
クローニングすることに成功し、本発明を完成するに至
った。
【０００９】
【課題を解決するための手段】即ち、本発明は第一の態
様として、以下の（ａ）又は（ｂ）のポリペプチドをコ
ードする塩基配列から成るＤＮＡ： （ａ）配列番号：１で示されるアミノ酸配列と同一又は
実質的に同一のアミノ酸配列から成るポリペプチド、 （ｂ）配列番号：１で示されるアミノ酸配列において、
一部のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配
列から成り、（ａ）のポリペプチド、ヒトファット１蛋
白質又はヒトファット２蛋白質と実質的に同質の生物学
的活性を有するポリペプチド、に係る。本発明の第二の
態様として、以下の（ａ）又は（ｂ）のＤＮＡ： （ａ）配列番号：２で示される塩基配列において、配列
番号：１で示されるアミノ酸配列をコードするＤＮＡ、
(ｂ）（ａ）のＤＮＡとストリンジェントな条件下でハ
イブリダイズし、（ａ）のポリペプチド、ヒトファット
１蛋白質又はヒトファット２蛋白質と実質的に同質の生
物学的活性を有する蛋白質をコードするＤＮＡに係る。
以上の本発明の第一及び第二の態様であるＤＮＡをまと
めて、以下、「本発明ヒトＤＮＡ」ともいう。本発明ヒ
トＤＮＡは、ヒトファット３蛋白質のＣ末端側の一部分
にあたるポリペプチドをコードするものである。又、本
発明はこれらＤＮＡを含むヒトファット３遺伝子にも係
る。更に、本発明は上記ＤＮＡにコードされるポリペプ
チド（以下、「本発明ヒトポリペプチド」ともい
う。）、及び該ポリペプチドを含むヒトファット３蛋白
質に係る。
様として、以下の（ａ）又は（ｂ）のポリペプチドをコ
ードする塩基配列から成るＤＮＡ： （ａ）配列番号：１で示されるアミノ酸配列と同一又は
実質的に同一のアミノ酸配列から成るポリペプチド、 （ｂ）配列番号：１で示されるアミノ酸配列において、
一部のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配
列から成り、（ａ）のポリペプチド、ヒトファット１蛋
白質又はヒトファット２蛋白質と実質的に同質の生物学
的活性を有するポリペプチド、に係る。本発明の第二の
態様として、以下の（ａ）又は（ｂ）のＤＮＡ： （ａ）配列番号：２で示される塩基配列において、配列
番号：１で示されるアミノ酸配列をコードするＤＮＡ、
(ｂ）（ａ）のＤＮＡとストリンジェントな条件下でハ
イブリダイズし、（ａ）のポリペプチド、ヒトファット
１蛋白質又はヒトファット２蛋白質と実質的に同質の生
物学的活性を有する蛋白質をコードするＤＮＡに係る。
以上の本発明の第一及び第二の態様であるＤＮＡをまと
めて、以下、「本発明ヒトＤＮＡ」ともいう。本発明ヒ
トＤＮＡは、ヒトファット３蛋白質のＣ末端側の一部分
にあたるポリペプチドをコードするものである。又、本
発明はこれらＤＮＡを含むヒトファット３遺伝子にも係
る。更に、本発明は上記ＤＮＡにコードされるポリペプ
チド（以下、「本発明ヒトポリペプチド」ともい
う。）、及び該ポリペプチドを含むヒトファット３蛋白
質に係る。
【００１０】本発明は又、以下の（ａ）又は（ｂ）のポ
リペプチドをコードする塩基配列から成るラットファッ
ト３遺伝子： （ａ）配列番号：３で示されるアミノ酸配列と同一又は
実質的に同一のアミノ酸配列から成るポリペプチド、
（ｂ）配列番号：３で示されるアミノ酸配列において、
一部のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配
列から成り、（ａ）のポリペプチドと実質的に同質の生
物学的活性を有するポリペプチド、に係る。更に別の態
様として、以下の（ａ）又は（ｂ）のＤＮＡから成るラ
ットファット３遺伝子： （ａ）配列番号：４で示される塩基配列において、配列
番号：３で示されるアミノ酸配列をコードするＤＮＡ、
(ｂ）（ａ）のＤＮＡとストリンジェントな条件下でハ
イブリダイズし、（ａ）のポリペプチドと実質的に同質
の生物学的活性を有する蛋白質をコードするＤＮＡ、に
係る。更に、本発明は上記ＤＮＡにコードされるラット
ファット３蛋白質に係る。
リペプチドをコードする塩基配列から成るラットファッ
ト３遺伝子： （ａ）配列番号：３で示されるアミノ酸配列と同一又は
実質的に同一のアミノ酸配列から成るポリペプチド、
（ｂ）配列番号：３で示されるアミノ酸配列において、
一部のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配
列から成り、（ａ）のポリペプチドと実質的に同質の生
物学的活性を有するポリペプチド、に係る。更に別の態
様として、以下の（ａ）又は（ｂ）のＤＮＡから成るラ
ットファット３遺伝子： （ａ）配列番号：４で示される塩基配列において、配列
番号：３で示されるアミノ酸配列をコードするＤＮＡ、
(ｂ）（ａ）のＤＮＡとストリンジェントな条件下でハ
イブリダイズし、（ａ）のポリペプチドと実質的に同質
の生物学的活性を有する蛋白質をコードするＤＮＡ、に
係る。更に、本発明は上記ＤＮＡにコードされるラット
ファット３蛋白質に係る。
【００１１】本発明ヒトＤＮＡは、市販されている（ク
ロンテック社）ヒト胎児脳由来のｍＲＮＡを出発材料と
して、本発明者が調製したｃＤＮＡライブラリーから、
ｃＤＮＡ断片として単離した後に、塩基配列を決定し同
定したものである。即ち、具体的には、小原他の方法
（DNA Research Vol.4,53−59（1997））に従って調製
したヒト胎児脳由来のｃＤＮＡライブラリーから、約4
5,000個の組換え体を選択し、in vitro翻訳系を用い、5
0kDa以上の蛋白質を発現できるcDNAクローンを4,500
個、選択を行なった(Ishikawa, K. I. et. al. 1997 DN
A RES. 5:307-313 )。次に、この4,500個のクローンの
両末端DNA配列を決定した。この中から、新規遺伝子を
含む500個のクローンのcDNAに関しての全塩基配列の決
定を行なった。次に、こうして得られた全塩基配列に基
づき、DNA解析プログラム(GCG, Fasta& Blast)を用いて
ホモロジー検索を行なうとともに、PROSITE databaseを
検索するための蛋白質解析プログラムである pftools
(Bairoch A, Bucher P, Hofmann K, Nucleic Acids Re
s. 1997 Jan 1;25(1):217-21)、及びPfam databaseを検
索するための蛋白質解析プログラムhmmer 2.1(Sonnhamm
er, E. L. L., Eddy, S.R., Birney, E., Bateman, A.,
and Durbin, R., Nucleic Acids Res 1998; 26, 320-3
22）を用いてモチーフ検索を行なった (Suyama et. al.
1999 Nucleic Acids Res. 27: 338-339)。その結果、
ヒトファット１蛋白質又はヒトファット２蛋白質と有意
な相同性とドメイン構造を有する本発明ヒトＤＮＡを含
むクローンを見つけることができた。このようなスクリ
ーニングを行なうことによって、サザンハイブリダイゼ
ーションなどの従来の方法では取得することが難しいと
考えられる弱いホモロジーの遺伝子でも、クローニング
を行なうことができる。
ロンテック社）ヒト胎児脳由来のｍＲＮＡを出発材料と
して、本発明者が調製したｃＤＮＡライブラリーから、
ｃＤＮＡ断片として単離した後に、塩基配列を決定し同
定したものである。即ち、具体的には、小原他の方法
（DNA Research Vol.4,53−59（1997））に従って調製
したヒト胎児脳由来のｃＤＮＡライブラリーから、約4
5,000個の組換え体を選択し、in vitro翻訳系を用い、5
0kDa以上の蛋白質を発現できるcDNAクローンを4,500
個、選択を行なった(Ishikawa, K. I. et. al. 1997 DN
A RES. 5:307-313 )。次に、この4,500個のクローンの
両末端DNA配列を決定した。この中から、新規遺伝子を
含む500個のクローンのcDNAに関しての全塩基配列の決
定を行なった。次に、こうして得られた全塩基配列に基
づき、DNA解析プログラム(GCG, Fasta& Blast)を用いて
ホモロジー検索を行なうとともに、PROSITE databaseを
検索するための蛋白質解析プログラムである pftools
(Bairoch A, Bucher P, Hofmann K, Nucleic Acids Re
s. 1997 Jan 1;25(1):217-21)、及びPfam databaseを検
索するための蛋白質解析プログラムhmmer 2.1(Sonnhamm
er, E. L. L., Eddy, S.R., Birney, E., Bateman, A.,
and Durbin, R., Nucleic Acids Res 1998; 26, 320-3
22）を用いてモチーフ検索を行なった (Suyama et. al.
1999 Nucleic Acids Res. 27: 338-339)。その結果、
ヒトファット１蛋白質又はヒトファット２蛋白質と有意
な相同性とドメイン構造を有する本発明ヒトＤＮＡを含
むクローンを見つけることができた。このようなスクリ
ーニングを行なうことによって、サザンハイブリダイゼ
ーションなどの従来の方法では取得することが難しいと
考えられる弱いホモロジーの遺伝子でも、クローニング
を行なうことができる。
【００１２】尚、当業者であれば、本明細書によって初
めて開示された配列番号２に示した塩基配列に基づいて
クローンの5’側に適当なプライマー（例えば、5’- CA
C ATT CAG GAC ATA CTT GCC G -3’ (配列番号２の塩基
対第３６３〜３８４番目に対応する)）を調製し、プラ
イマーと上記の市販されているヒト胎児脳由来のmRNAと
ハイブリダイゼーションを行なった後に逆転反応を行な
うことにより今回のクローンの上流側（遺伝子の5’
側）の領域を含むcDNAを特異的に合成することができ
る。この遺伝子の5’側の領域を含むcDNAをプラスミド
に挿入した後、配列番号２の一部分をプローブとして、
コロニーハイブリダイゼーションのような相同性クロー
ニングによって、本発明ヒトＤＮＡを含むヒトファット
３遺伝子の全領域を調製することが可能である。配列番
号３として示してあるラットファット３の全アミノ酸配
列と比較することにより、上記の過程を経て取得された
DNAがヒトのファット３遺伝子の全領域を含むかどうか
を判別することは容易である。更に、ラットファット３
遺伝子をプローブとして用いれば、コロニーハイブリダ
イゼーションのような相同性クローニングによって、ヒ
トファット３遺伝子の全領域を調製することができる。
このように、本発明によって、ヒトファット３遺伝子の
一部分のDNA／アミノ酸配列とラットファット３の全ア
ミノ酸配列の両方が開示されている以上、当業者であれ
ば、これらの情報に基づき、ヒトファット３遺伝子の全
領域を容易に取得することが出来る。又、短い断片や得
られた配列に人工的な間違いが起こらないように十分な
注意を払いながら、ＲＡＣＥ等のＰＣＲ法を使用するこ
とによっても、本発明ヒトＤＮＡを含むヒトファット３
遺伝子の全領域を調製することが可能である。
めて開示された配列番号２に示した塩基配列に基づいて
クローンの5’側に適当なプライマー（例えば、5’- CA
C ATT CAG GAC ATA CTT GCC G -3’ (配列番号２の塩基
対第３６３〜３８４番目に対応する)）を調製し、プラ
イマーと上記の市販されているヒト胎児脳由来のmRNAと
ハイブリダイゼーションを行なった後に逆転反応を行な
うことにより今回のクローンの上流側（遺伝子の5’
側）の領域を含むcDNAを特異的に合成することができ
る。この遺伝子の5’側の領域を含むcDNAをプラスミド
に挿入した後、配列番号２の一部分をプローブとして、
コロニーハイブリダイゼーションのような相同性クロー
ニングによって、本発明ヒトＤＮＡを含むヒトファット
３遺伝子の全領域を調製することが可能である。配列番
号３として示してあるラットファット３の全アミノ酸配
列と比較することにより、上記の過程を経て取得された
DNAがヒトのファット３遺伝子の全領域を含むかどうか
を判別することは容易である。更に、ラットファット３
遺伝子をプローブとして用いれば、コロニーハイブリダ
イゼーションのような相同性クローニングによって、ヒ
トファット３遺伝子の全領域を調製することができる。
このように、本発明によって、ヒトファット３遺伝子の
一部分のDNA／アミノ酸配列とラットファット３の全ア
ミノ酸配列の両方が開示されている以上、当業者であれ
ば、これらの情報に基づき、ヒトファット３遺伝子の全
領域を容易に取得することが出来る。又、短い断片や得
られた配列に人工的な間違いが起こらないように十分な
注意を払いながら、ＲＡＣＥ等のＰＣＲ法を使用するこ
とによっても、本発明ヒトＤＮＡを含むヒトファット３
遺伝子の全領域を調製することが可能である。
【００１３】又、本発明のラットファット３遺伝子は以
下のようにして調製した。即ち、まず、胎生１５日目の
ラット胎児脳より精製を行ったＲＮＡを用いて、小原他
の方法（DNA Research Vol.4,53−59（1997））に従っ
て調製したｃＤＮＡライブラリーから、配列番号２で示
してあるヒトファット３ＤＮＡをプロ−ブとして用いて
コロニーハイブリダイゼーション法にて相同性クローニ
ングを行った。次に、ラットファット３遺伝子の全領域
を取得するために、上記の方法で得られたクローンの塩
基配列を基にプライマーを調製し、プライマーと胎生１
５日目のラット胎児脳より得られたＲＮＡとハイブリダ
イゼーションを行った後に、逆転写反応を行うことによ
り最初のクローンの上流側（遺伝子の５’側）の領域を
含むｃＤＮＡを特異的に合成した。更に、上記の方法を
繰り返すことにより、本発明のラットファット３遺伝子
の全領域を構成する、お互いに重なり合う領域を持つ３
種類のＤＮＡ断片を各々含む３種類のプラスミドが得ら
れた。これは、１４．５ｋｂｐにも及ぶ長いｃＤＮＡで
あるという本発明のラットファット３遺伝子の特殊性に
よるものである。尚、当業者であれば、当該技術分野で
周知の適当な制限酵素及びＤＮＡ組換技術によって、こ
れら３種類のＤＮＡ断片から、本発明のラットファット
３遺伝子の全領域を含む一本のｃＤＮＡを容易に調製す
ることができるので、本発明によって、実質的にラット
ファット３遺伝子の全領域を含む一本鎖ｃＤＮＡが得ら
れたものといえる。
下のようにして調製した。即ち、まず、胎生１５日目の
ラット胎児脳より精製を行ったＲＮＡを用いて、小原他
の方法（DNA Research Vol.4,53−59（1997））に従っ
て調製したｃＤＮＡライブラリーから、配列番号２で示
してあるヒトファット３ＤＮＡをプロ−ブとして用いて
コロニーハイブリダイゼーション法にて相同性クローニ
ングを行った。次に、ラットファット３遺伝子の全領域
を取得するために、上記の方法で得られたクローンの塩
基配列を基にプライマーを調製し、プライマーと胎生１
５日目のラット胎児脳より得られたＲＮＡとハイブリダ
イゼーションを行った後に、逆転写反応を行うことによ
り最初のクローンの上流側（遺伝子の５’側）の領域を
含むｃＤＮＡを特異的に合成した。更に、上記の方法を
繰り返すことにより、本発明のラットファット３遺伝子
の全領域を構成する、お互いに重なり合う領域を持つ３
種類のＤＮＡ断片を各々含む３種類のプラスミドが得ら
れた。これは、１４．５ｋｂｐにも及ぶ長いｃＤＮＡで
あるという本発明のラットファット３遺伝子の特殊性に
よるものである。尚、当業者であれば、当該技術分野で
周知の適当な制限酵素及びＤＮＡ組換技術によって、こ
れら３種類のＤＮＡ断片から、本発明のラットファット
３遺伝子の全領域を含む一本のｃＤＮＡを容易に調製す
ることができるので、本発明によって、実質的にラット
ファット３遺伝子の全領域を含む一本鎖ｃＤＮＡが得ら
れたものといえる。
【００１４】更に、本発明は、本発明ヒトＤＮＡ、本発
明ヒトＤＮＡを含むヒトファット３遺伝子又はラットフ
ァット３遺伝子を含有する組換えベクター、該組換えベ
クターを保持する形質転換体、該形質転換体を培養し、
本発明ヒトポリペプチド若しくは該ポリペプチドを含む
ヒトファット３蛋白質又はラットファット３蛋白質を生
成、蓄積せしめ、これを採取することを特徴とする、本
発明ヒトポリペプチド若しくは該ポリペプチドを含むヒ
トファット３蛋白質又はラットファット３蛋白質、又は
その塩の製造方法、及び、こうして得られる本発明ヒト
ポリペプチド若しくは該ポリペプチドを含むヒトファッ
ト３蛋白質若しくはラットファット蛋白質３又はその塩
を提供する。又、本発明は、本発明ヒトＤＮＡを含有し
てなる医薬、本発明ヒトポリペプチド若しくはその部分
ペプチド又は該ポリペプチドを含むヒトファット３蛋白
質をコードするＤＮＡに実質的に相補的な塩基配列を有
するアンチセンスヌクレオチド又はそれらを含有してな
る医薬、本発明ヒトポリペプチド若しくはその部分ペプ
チド又は該ポリペプチドを含むヒトファット３蛋白質を
含有してなる医薬、本発明ヒトポリペプチド若しくはそ
の部分ペプチド又は該ポリペプチドを含むヒトファット
３蛋白質又はそれらの塩に対する抗体、本発明ヒトポリ
ペプチド若しくはその部分ペプチド又は該ポリペプチド
を含むヒトファット３蛋白質又はそれらの塩を用いるこ
とを特徴とする、それら物質と特異的に結合する物質の
スクリーニング方法、並びにスクリーニング用キット等
も提供する。
明ヒトＤＮＡを含むヒトファット３遺伝子又はラットフ
ァット３遺伝子を含有する組換えベクター、該組換えベ
クターを保持する形質転換体、該形質転換体を培養し、
本発明ヒトポリペプチド若しくは該ポリペプチドを含む
ヒトファット３蛋白質又はラットファット３蛋白質を生
成、蓄積せしめ、これを採取することを特徴とする、本
発明ヒトポリペプチド若しくは該ポリペプチドを含むヒ
トファット３蛋白質又はラットファット３蛋白質、又は
その塩の製造方法、及び、こうして得られる本発明ヒト
ポリペプチド若しくは該ポリペプチドを含むヒトファッ
ト３蛋白質若しくはラットファット蛋白質３又はその塩
を提供する。又、本発明は、本発明ヒトＤＮＡを含有し
てなる医薬、本発明ヒトポリペプチド若しくはその部分
ペプチド又は該ポリペプチドを含むヒトファット３蛋白
質をコードするＤＮＡに実質的に相補的な塩基配列を有
するアンチセンスヌクレオチド又はそれらを含有してな
る医薬、本発明ヒトポリペプチド若しくはその部分ペプ
チド又は該ポリペプチドを含むヒトファット３蛋白質を
含有してなる医薬、本発明ヒトポリペプチド若しくはそ
の部分ペプチド又は該ポリペプチドを含むヒトファット
３蛋白質又はそれらの塩に対する抗体、本発明ヒトポリ
ペプチド若しくはその部分ペプチド又は該ポリペプチド
を含むヒトファット３蛋白質又はそれらの塩を用いるこ
とを特徴とする、それら物質と特異的に結合する物質の
スクリーニング方法、並びにスクリーニング用キット等
も提供する。
【００１５】
【発明の実施の形態】本発明ヒトＤＮＡとしては、前述
した本発明ヒトポリペプチドをコードする塩基配列から
成るものであればいかなるものであってもよい。また、
ヒトの脳、又は、それ以外の組織、例えば、心臓、肺、
肝臓、脾臓、腎臓、精巣、等の細胞・組織に由来するｃ
ＤＮＡライブラリー等から同定・単離されたｃＤＮＡ、
又は、合成ＤＮＡのいずれでもよい。ライブラリー作成
に使用するベクターは、バクテリオファージ、プラスミ
ド、コスミド、ファージミドなどいずれであってもよ
い。また、前記した細胞・組織よりtotalＲＮＡ画分ま
たはｍＲＮＡ画分を調製したものを用いて、直接Revers
eTranscriptase Polymerase Chain Reaction（以下、
「ＲＴ-ＰＣＲ法」と略称する）によって増幅すること
もできる。
した本発明ヒトポリペプチドをコードする塩基配列から
成るものであればいかなるものであってもよい。また、
ヒトの脳、又は、それ以外の組織、例えば、心臓、肺、
肝臓、脾臓、腎臓、精巣、等の細胞・組織に由来するｃ
ＤＮＡライブラリー等から同定・単離されたｃＤＮＡ、
又は、合成ＤＮＡのいずれでもよい。ライブラリー作成
に使用するベクターは、バクテリオファージ、プラスミ
ド、コスミド、ファージミドなどいずれであってもよ
い。また、前記した細胞・組織よりtotalＲＮＡ画分ま
たはｍＲＮＡ画分を調製したものを用いて、直接Revers
eTranscriptase Polymerase Chain Reaction（以下、
「ＲＴ-ＰＣＲ法」と略称する）によって増幅すること
もできる。
【００１６】配列番号：１又は３で示されるアミノ酸配
列と実質的に同一のアミノ酸配列とは、配列番号：１で
示される全アミノ酸配列との相同性の程度が、全体の平
均で約８０％以上、好ましくは約９０％以上であるアミ
ノ酸配列を意味する。従って、本発明の配列番号：１で
示されるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列か
ら成るポリペプチドとしては、例えば、前記の配列番
号：１で示されるアミノ酸配列に対して上記の相同性を
有し、配列番号：１で示されるアミノ酸配列から成るポ
リペプチド、ヒトファット１蛋白質又はヒトファット２
蛋白質と実質的に同質の生物学的活性を有するポリペプ
チドを挙げることが出来る。ここで、実質的に同質と
は、それらの活性が性質的に同質であることを示す。
又、本発明ヒトポリペプチドには、例えば、配列番号：
１で示されるアミノ酸配列中の一部（好ましくは、１〜
２０個程度、より好ましくは１〜１０個程度、さらに好
ましくは数個）のアミノ酸が欠失、置換又は付加したア
ミノ酸配列、或いはそれらを組み合わせたアミノ酸配列
から成り、配列番号：１で示されるアミノ酸配列から成
るポリペプチド、ヒトファット１蛋白質又はヒトファッ
ト２蛋白質と実質的に同質の生物学的活性を有するポリ
ペプチドも含まれる。
列と実質的に同一のアミノ酸配列とは、配列番号：１で
示される全アミノ酸配列との相同性の程度が、全体の平
均で約８０％以上、好ましくは約９０％以上であるアミ
ノ酸配列を意味する。従って、本発明の配列番号：１で
示されるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列か
ら成るポリペプチドとしては、例えば、前記の配列番
号：１で示されるアミノ酸配列に対して上記の相同性を
有し、配列番号：１で示されるアミノ酸配列から成るポ
リペプチド、ヒトファット１蛋白質又はヒトファット２
蛋白質と実質的に同質の生物学的活性を有するポリペプ
チドを挙げることが出来る。ここで、実質的に同質と
は、それらの活性が性質的に同質であることを示す。
又、本発明ヒトポリペプチドには、例えば、配列番号：
１で示されるアミノ酸配列中の一部（好ましくは、１〜
２０個程度、より好ましくは１〜１０個程度、さらに好
ましくは数個）のアミノ酸が欠失、置換又は付加したア
ミノ酸配列、或いはそれらを組み合わせたアミノ酸配列
から成り、配列番号：１で示されるアミノ酸配列から成
るポリペプチド、ヒトファット１蛋白質又はヒトファッ
ト２蛋白質と実質的に同質の生物学的活性を有するポリ
ペプチドも含まれる。
【００１７】更に、本発明ヒトＤＮＡは、例えば、配列
番号：２で示される塩基配列において、配列番号：１で
示されるアミノ酸配列をコードするＤＮＡ、又は、該Ｄ
ＮＡとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、
配列番号：１で示されるアミノ酸配列から成るポリペプ
チド、ヒトファット１蛋白質又はヒトファット２蛋白質
と同質の生物学的活性を有するポリペプチド（蛋白質）
をコードするＤＮＡであればいずれのものでもよい。か
かる条件下で、配列番号：２で示される塩基配列におい
て、配列番号：１で示されるアミノ酸配列をコードする
ＤＮＡとハイブリダイズできるＤＮＡとしては、例え
ば、該ＤＮＡの全塩基配列との相同性の程度が、全体の
平均で約８０％以上、好ましくは約９０％以上である塩
基配列を含有するＤＮＡ等を挙げることが出来る。ハイ
ブリダイゼーションは、モレキュラー・クローニング
（Molecular Cloning）２nd（J. Sambrook etal., Cold
Spring Harbor Lab. Press, 1989）に記載の方法等、
当業界で公知の方法あるいはそれに準じる方法に従って
行なうことができる。また、市販のライブラリーを使用
する場合、添付の使用説明書に記載の方法に従って行な
うことができる。ここで、「ストリンジェントな条件」
とは、例えば、DIG DNA Labeling (ベーリンガー・マン
ハイム社製 Cat No. 1175033）でプローブをラベルし
た場合に、３２℃のDIG Easy Hyb 溶液(ベーリンガー・
マンハイム社製 Cat No. 1603558）中でハイブリダイ
ズさせ、４０℃の0.1xSSC 溶液(0.1%[w/v]SDSを含む)中
でメンブレンを洗浄する条件（1xSSCは0.15Ｍ NaCl，0.
015M クエン酸ナトリウムである）でのサザンブロット
ハイブリダイゼーションで本発明ヒトＤＮＡプローブに
ハイブリダイズする程度の条件である。尚、本発明に係
るラットファット３遺伝子及びラットファット３蛋白質
に関しても、上記のヒトＤＮＡ及びヒトポリペプチドに
関する各定義は当てはまるものである。
番号：２で示される塩基配列において、配列番号：１で
示されるアミノ酸配列をコードするＤＮＡ、又は、該Ｄ
ＮＡとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、
配列番号：１で示されるアミノ酸配列から成るポリペプ
チド、ヒトファット１蛋白質又はヒトファット２蛋白質
と同質の生物学的活性を有するポリペプチド（蛋白質）
をコードするＤＮＡであればいずれのものでもよい。か
かる条件下で、配列番号：２で示される塩基配列におい
て、配列番号：１で示されるアミノ酸配列をコードする
ＤＮＡとハイブリダイズできるＤＮＡとしては、例え
ば、該ＤＮＡの全塩基配列との相同性の程度が、全体の
平均で約８０％以上、好ましくは約９０％以上である塩
基配列を含有するＤＮＡ等を挙げることが出来る。ハイ
ブリダイゼーションは、モレキュラー・クローニング
（Molecular Cloning）２nd（J. Sambrook etal., Cold
Spring Harbor Lab. Press, 1989）に記載の方法等、
当業界で公知の方法あるいはそれに準じる方法に従って
行なうことができる。また、市販のライブラリーを使用
する場合、添付の使用説明書に記載の方法に従って行な
うことができる。ここで、「ストリンジェントな条件」
とは、例えば、DIG DNA Labeling (ベーリンガー・マン
ハイム社製 Cat No. 1175033）でプローブをラベルし
た場合に、３２℃のDIG Easy Hyb 溶液(ベーリンガー・
マンハイム社製 Cat No. 1603558）中でハイブリダイ
ズさせ、４０℃の0.1xSSC 溶液(0.1%[w/v]SDSを含む)中
でメンブレンを洗浄する条件（1xSSCは0.15Ｍ NaCl，0.
015M クエン酸ナトリウムである）でのサザンブロット
ハイブリダイゼーションで本発明ヒトＤＮＡプローブに
ハイブリダイズする程度の条件である。尚、本発明に係
るラットファット３遺伝子及びラットファット３蛋白質
に関しても、上記のヒトＤＮＡ及びヒトポリペプチドに
関する各定義は当てはまるものである。
【００１８】本発明ヒトＤＮＡのクローニングの手段と
しては、本発明ヒトポリペプチドの部分等の適当な塩基
配列を有する合成ＤＮＡプライマーを用いてＰＣＲ法に
よって増幅するか、または適当なベクターに組み込んだ
ＤＮＡを本発明ヒトポリペプチドの一部あるいは全領域
をコードするＤＮＡ断片もしくは合成ＤＮＡを用いて標
識したものとのハイブリダイゼーションによって選別す
ることができる。ハイブリダイゼーションの方法は、例
えば、Molecular Cloning ２nd（J. Sambrook et al.,
Cold Spring Harbor Lab. Press, 1989）に記載の方法
などに従って行なうことができる。また、市販のライブ
ラリーを使用する場合、添付の使用説明書に記載の方法
に従って行なうことができる。ＤＮＡの塩基配列の変換
は、公知のキット、例えば、SuperScript II 逆転写酵
素キット（ギブコＢＲＬ社）等を用いて、Gapped duple
x法やKunkel法などの公知の方法あるいはそれらに準じ
る方法に従って行なうことができる。クローン化された
ポリペプチドをコードするＤＮＡは目的によりそのま
ま、または所望により制限酵素で消化したり、リンカー
を付加したりして使用することができる。該ＤＮＡはそ
の５’末端側に翻訳開始コドンとしてのＡＴＧを有し、
また３’末端側には翻訳終止コドンとしてのＴＡＡ、Ｔ
ＧＡまたはＴＡＧを有していてもよい。これらの翻訳開
始コドンや翻訳終止コドンは、適当な合成ＤＮＡアダプ
ターを用いて付加することもできる。
しては、本発明ヒトポリペプチドの部分等の適当な塩基
配列を有する合成ＤＮＡプライマーを用いてＰＣＲ法に
よって増幅するか、または適当なベクターに組み込んだ
ＤＮＡを本発明ヒトポリペプチドの一部あるいは全領域
をコードするＤＮＡ断片もしくは合成ＤＮＡを用いて標
識したものとのハイブリダイゼーションによって選別す
ることができる。ハイブリダイゼーションの方法は、例
えば、Molecular Cloning ２nd（J. Sambrook et al.,
Cold Spring Harbor Lab. Press, 1989）に記載の方法
などに従って行なうことができる。また、市販のライブ
ラリーを使用する場合、添付の使用説明書に記載の方法
に従って行なうことができる。ＤＮＡの塩基配列の変換
は、公知のキット、例えば、SuperScript II 逆転写酵
素キット（ギブコＢＲＬ社）等を用いて、Gapped duple
x法やKunkel法などの公知の方法あるいはそれらに準じ
る方法に従って行なうことができる。クローン化された
ポリペプチドをコードするＤＮＡは目的によりそのま
ま、または所望により制限酵素で消化したり、リンカー
を付加したりして使用することができる。該ＤＮＡはそ
の５’末端側に翻訳開始コドンとしてのＡＴＧを有し、
また３’末端側には翻訳終止コドンとしてのＴＡＡ、Ｔ
ＧＡまたはＴＡＧを有していてもよい。これらの翻訳開
始コドンや翻訳終止コドンは、適当な合成ＤＮＡアダプ
ターを用いて付加することもできる。
【００１９】本発明の蛋白質の発現ベクターは、当該技
術分野で公知の方法に従って作成することが出来る。例
えば、（１）本発明ヒトＤＮＡ又は本発明ヒトＤＮＡを
含むヒトファット３遺伝子を含有するＤＮＡ断片を切り
出し、（２）該ＤＮＡ断片を適当な発現ベクター中のプ
ロモーターの下流に連結することにより製造することが
できる。ベクターとしては、大腸菌由来のプラスミド
（例、ｐＢＲ３２２，ｐＢＲ３２５，ｐＵＣ１８，ｐＵ
Ｃ１１８）、枯草菌由来のプラスミド（例、ｐＵＢ１１
０，ｐＴＰ５，ｐＣ１９４）、酵母由来プラスミド
（例、ｐＳＨ１９，ｐＳＨ１５）、λファージなどのバ
クテリオファージ、レトロウイルス，ワクシニアウイル
ス，バキュロウイルスなどの動物ウイルス等を利用する
ことが出来る。本発明で用いられるプロモーターとして
は、遺伝子の発現に用いる宿主に対応した適切なプロモ
ーターであればいかなるものでもよい。例えば、宿主が
大腸菌である場合は、ｔｒｐプロモーター、ｌａｃプロ
モーター、ｒｅｃＡプロモーター、λＰLプロモータ
ー、ｌｐｐプロモーターなどが、宿主が枯草菌である場
合は、ＳＰＯ１プロモーター、ＳＰＯ２プロモーター、
ｐｅｎＰプロモーターなど、宿主が酵母である場合は、
ＰＨＯ５プロモーター、ＰＧＫプロモーター、ＧＡＰプ
ロモーター、ＡＤＨプロモーターなどが好ましい。動物
細胞を宿主として用いる場合は、ＳＲαプロモーター、
ＳＶ４０プロモーター、ＬＴＲプロモーター、ＣＭＶプ
ロモーター、ＨＳＶ-ＴＫプロモーターなどが挙げられ
る。
術分野で公知の方法に従って作成することが出来る。例
えば、（１）本発明ヒトＤＮＡ又は本発明ヒトＤＮＡを
含むヒトファット３遺伝子を含有するＤＮＡ断片を切り
出し、（２）該ＤＮＡ断片を適当な発現ベクター中のプ
ロモーターの下流に連結することにより製造することが
できる。ベクターとしては、大腸菌由来のプラスミド
（例、ｐＢＲ３２２，ｐＢＲ３２５，ｐＵＣ１８，ｐＵ
Ｃ１１８）、枯草菌由来のプラスミド（例、ｐＵＢ１１
０，ｐＴＰ５，ｐＣ１９４）、酵母由来プラスミド
（例、ｐＳＨ１９，ｐＳＨ１５）、λファージなどのバ
クテリオファージ、レトロウイルス，ワクシニアウイル
ス，バキュロウイルスなどの動物ウイルス等を利用する
ことが出来る。本発明で用いられるプロモーターとして
は、遺伝子の発現に用いる宿主に対応した適切なプロモ
ーターであればいかなるものでもよい。例えば、宿主が
大腸菌である場合は、ｔｒｐプロモーター、ｌａｃプロ
モーター、ｒｅｃＡプロモーター、λＰLプロモータ
ー、ｌｐｐプロモーターなどが、宿主が枯草菌である場
合は、ＳＰＯ１プロモーター、ＳＰＯ２プロモーター、
ｐｅｎＰプロモーターなど、宿主が酵母である場合は、
ＰＨＯ５プロモーター、ＰＧＫプロモーター、ＧＡＰプ
ロモーター、ＡＤＨプロモーターなどが好ましい。動物
細胞を宿主として用いる場合は、ＳＲαプロモーター、
ＳＶ４０プロモーター、ＬＴＲプロモーター、ＣＭＶプ
ロモーター、ＨＳＶ-ＴＫプロモーターなどが挙げられ
る。
【００２０】発現ベクターには、以上の他に、所望によ
り当該技術分野で公知の、エンハンサー、スプライシン
グシグナル、ポリＡ付加シグナル、選択マーカー、ＳＶ
４０複製オリジン（以下、ＳＶ４０ｏｒｉと略称する場
合がある）等を付加することができる。また、必要に応
じて、本発明のＤＮＡにコードされた蛋白質を他の蛋白
質（例えば、グルタチオンＳトランスフェラーゼ及びプ
ロテインＡ）との融合蛋白質として発現させることも可
能である。このような融合蛋白質は、適用名プロテアー
ゼを使用して切断し、それぞれの蛋白質に分離すること
が出来る。
り当該技術分野で公知の、エンハンサー、スプライシン
グシグナル、ポリＡ付加シグナル、選択マーカー、ＳＶ
４０複製オリジン（以下、ＳＶ４０ｏｒｉと略称する場
合がある）等を付加することができる。また、必要に応
じて、本発明のＤＮＡにコードされた蛋白質を他の蛋白
質（例えば、グルタチオンＳトランスフェラーゼ及びプ
ロテインＡ）との融合蛋白質として発現させることも可
能である。このような融合蛋白質は、適用名プロテアー
ゼを使用して切断し、それぞれの蛋白質に分離すること
が出来る。
【００２１】宿主細胞としては、例えば、エシェリヒア
属菌、バチルス属菌、酵母、昆虫細胞、昆虫、動物細胞
などが用いられる。エシェリヒア属菌の具体例として
は、エシェリヒア・コリ（Escherichia coli）Ｋ１２・
ＤＨ１（Proc. Natl. Acad. Sci. ＵＳＡ，６０巻，１
６０(１９６８)），ＪＭ１０３（Nucleic Acids Resear
ch，９巻，３０９(１９８１)），ＪＡ２２１（Journal
of Molecular Biology，１２０巻，５１７(１９７
８)），及びＨＢ１０１（Journal of Molecular Biolog
y，４１巻，４５９(１９６９)）等が用いられる。バチ
ルス属菌としては、例えば、バチルス・サチルス（Baci
llus subtilis）ＭＩ１１４（Gene，２４巻，２５５(１
９８３)），２０７−２１〔Journal of Biochemistry，
９５巻，８７(１９８４)〕等が用いられる。酵母として
は、例えば、サッカロマイセス セレビシエ（Saccaromy
ces cerevisiae）ＡＨ２２，ＡＨ２２Ｒ-，ＮＡ８７−
１１Ａ，ＤＫＤ−５Ｄ，２０Ｂ−１２、シゾサッカロマ
イセス ポンベ（Schizosaccaromyces pombe）ＮＣＹＣ
１９１３，ＮＣＹＣ２０３６、サッカロマイセス ピキ
ア パストリス（Saccaromycespicjia pastoris）等が用
いられる。動物細胞としては、例えば、サル細胞ＣＯＳ
−７，Ｖero，チャイニーズハムスター細胞ＣＨＯ（以
下、ＣＨＯ細胞と略記），ｄｈｆｒ遺伝子欠損チャイニ
ーズハムスター細胞ＣＨＯ（以下、ＣＨＯ（ｄｈｆｒ
-）細胞と略記），マウスＬ細胞，マウスＡｔＴ−２
０，マウスミエローマ細胞，ラットＧＨ３，ヒトＦＬ細
胞などが用いられる。
属菌、バチルス属菌、酵母、昆虫細胞、昆虫、動物細胞
などが用いられる。エシェリヒア属菌の具体例として
は、エシェリヒア・コリ（Escherichia coli）Ｋ１２・
ＤＨ１（Proc. Natl. Acad. Sci. ＵＳＡ，６０巻，１
６０(１９６８)），ＪＭ１０３（Nucleic Acids Resear
ch，９巻，３０９(１９８１)），ＪＡ２２１（Journal
of Molecular Biology，１２０巻，５１７(１９７
８)），及びＨＢ１０１（Journal of Molecular Biolog
y，４１巻，４５９(１９６９)）等が用いられる。バチ
ルス属菌としては、例えば、バチルス・サチルス（Baci
llus subtilis）ＭＩ１１４（Gene，２４巻，２５５(１
９８３)），２０７−２１〔Journal of Biochemistry，
９５巻，８７(１９８４)〕等が用いられる。酵母として
は、例えば、サッカロマイセス セレビシエ（Saccaromy
ces cerevisiae）ＡＨ２２，ＡＨ２２Ｒ-，ＮＡ８７−
１１Ａ，ＤＫＤ−５Ｄ，２０Ｂ−１２、シゾサッカロマ
イセス ポンベ（Schizosaccaromyces pombe）ＮＣＹＣ
１９１３，ＮＣＹＣ２０３６、サッカロマイセス ピキ
ア パストリス（Saccaromycespicjia pastoris）等が用
いられる。動物細胞としては、例えば、サル細胞ＣＯＳ
−７，Ｖero，チャイニーズハムスター細胞ＣＨＯ（以
下、ＣＨＯ細胞と略記），ｄｈｆｒ遺伝子欠損チャイニ
ーズハムスター細胞ＣＨＯ（以下、ＣＨＯ（ｄｈｆｒ
-）細胞と略記），マウスＬ細胞，マウスＡｔＴ−２
０，マウスミエローマ細胞，ラットＧＨ３，ヒトＦＬ細
胞などが用いられる。
【００２２】これら宿主細胞の形質転換は、当該技術分
野で公知の方法に従って行うことが出来る。例えば、以
下に記載の文献を参照することが出来る。Proc. Natl.
Acad. Sci. ＵＳＡ，６９巻，２１１０(１９７２)； Ge
ne，１７巻，１０７(１９８２)；Molecular ＆ General
Genetics，１６８巻，１１１(１９７９)；Methods in
Enzymology，１９４巻，１８２−１８７（１９９１）；
Proc. Natl. Acad. Sci. ＵＳＡ），７５巻，１９２９
(１９７８)；細胞工学別冊８ 新 細胞工学実験プロトコ
ール．２６３−２６７（１９９５）（秀潤社発行）；及
び Virology，５２巻，４５６(１９７３)。
野で公知の方法に従って行うことが出来る。例えば、以
下に記載の文献を参照することが出来る。Proc. Natl.
Acad. Sci. ＵＳＡ，６９巻，２１１０(１９７２)； Ge
ne，１７巻，１０７(１９８２)；Molecular ＆ General
Genetics，１６８巻，１１１(１９７９)；Methods in
Enzymology，１９４巻，１８２−１８７（１９９１）；
Proc. Natl. Acad. Sci. ＵＳＡ），７５巻，１９２９
(１９７８)；細胞工学別冊８ 新 細胞工学実験プロトコ
ール．２６３−２６７（１９９５）（秀潤社発行）；及
び Virology，５２巻，４５６(１９７３)。
【００２３】このようにして得られた、本発明ヒトＤＮ
Ａ又は本発明ヒトＤＮＡを含むヒトファット３遺伝子を
含有する発現ベクターで形質転換された形質転換体は、
当該技術分野で公知の方法に従って培養することが出来
る。例えば、以下に記載の文献を参照することが出来
る。例えば、宿主がエシェリヒア属菌の場合、培養は通
常約１５〜４３℃で約３〜２４時間行ない、必要によ
り、通気や撹拌を加えることもできる。宿主がバチルス
属菌の場合、培養は通常、約３０〜４０℃で約６〜２４
時間行ない、必要により通気や撹拌を加えることもでき
る。宿主が酵母である形質転換体を培養する際、培養は
通常、ｐＨ約５〜８に調整された培地を用いて約２０℃
〜３５℃で約２４〜７２時間行ない、必要に応じて通気
や撹拌を加えることもできる。宿主が動物細胞である形
質転換体を培養する際、ｐＨは約６〜８に調整された培
地を用いて、通常約３０℃〜４０℃で約１５〜６０時間
行ない、必要に応じて通気や撹拌を加えることもでき
る。
Ａ又は本発明ヒトＤＮＡを含むヒトファット３遺伝子を
含有する発現ベクターで形質転換された形質転換体は、
当該技術分野で公知の方法に従って培養することが出来
る。例えば、以下に記載の文献を参照することが出来
る。例えば、宿主がエシェリヒア属菌の場合、培養は通
常約１５〜４３℃で約３〜２４時間行ない、必要によ
り、通気や撹拌を加えることもできる。宿主がバチルス
属菌の場合、培養は通常、約３０〜４０℃で約６〜２４
時間行ない、必要により通気や撹拌を加えることもでき
る。宿主が酵母である形質転換体を培養する際、培養は
通常、ｐＨ約５〜８に調整された培地を用いて約２０℃
〜３５℃で約２４〜７２時間行ない、必要に応じて通気
や撹拌を加えることもできる。宿主が動物細胞である形
質転換体を培養する際、ｐＨは約６〜８に調整された培
地を用いて、通常約３０℃〜４０℃で約１５〜６０時間
行ない、必要に応じて通気や撹拌を加えることもでき
る。
【００２４】上記培養物から本発明ヒトポリペプチド又
はヒトファット３蛋白質を分離精製するには、例えば、
培養後、公知の方法で菌体あるいは細胞を集め、これを
適当な緩衝液に懸濁し、超音波、リゾチームおよび／ま
たは凍結融解などによって菌体あるいは細胞を破壊した
のち、遠心分離やろ過により蛋白質の粗抽出液を得る。
緩衝液の中に尿素や塩酸グアニジンなどの蛋白質変性剤
や、トリトンＸ−１００TMなどの界面活性剤が含まれて
いてもよい。培養液中に蛋白質が分泌される場合には、
培養終了後、公知の方法で菌体あるいは細胞と上清とを
分離し、上清を集める。このようにして得られた培養上
清、あるいは抽出液中に含まれる蛋白質の精製は、公知
の分離・精製法を適切に組み合わせて行なうことができ
る。こうして得られた本発明ヒトポリペプチド（蛋白
質）は、公知の方法あるいはそれに準じる方法によって
塩に変換することができ、逆に塩で得られた場合には公
知の方法あるいはそれに準じる方法により、遊離体また
は他の塩に変換することができる。更に、組換え体が産
生する蛋白質を、精製前または精製後に、トリプシン及
びキモトリプシンのような適当な蛋白修飾酵素を作用さ
せることにより、任意に修飾を加えたり、ポリペプチド
を部分的に除去することもできる。本発明ヒトポリペプ
チド（蛋白質）又はその塩の存在は、様々な結合アッセ
イ及び特異抗体を用いたエンザイムイムノアッセイ等に
より測定することができる。
はヒトファット３蛋白質を分離精製するには、例えば、
培養後、公知の方法で菌体あるいは細胞を集め、これを
適当な緩衝液に懸濁し、超音波、リゾチームおよび／ま
たは凍結融解などによって菌体あるいは細胞を破壊した
のち、遠心分離やろ過により蛋白質の粗抽出液を得る。
緩衝液の中に尿素や塩酸グアニジンなどの蛋白質変性剤
や、トリトンＸ−１００TMなどの界面活性剤が含まれて
いてもよい。培養液中に蛋白質が分泌される場合には、
培養終了後、公知の方法で菌体あるいは細胞と上清とを
分離し、上清を集める。このようにして得られた培養上
清、あるいは抽出液中に含まれる蛋白質の精製は、公知
の分離・精製法を適切に組み合わせて行なうことができ
る。こうして得られた本発明ヒトポリペプチド（蛋白
質）は、公知の方法あるいはそれに準じる方法によって
塩に変換することができ、逆に塩で得られた場合には公
知の方法あるいはそれに準じる方法により、遊離体また
は他の塩に変換することができる。更に、組換え体が産
生する蛋白質を、精製前または精製後に、トリプシン及
びキモトリプシンのような適当な蛋白修飾酵素を作用さ
せることにより、任意に修飾を加えたり、ポリペプチド
を部分的に除去することもできる。本発明ヒトポリペプ
チド（蛋白質）又はその塩の存在は、様々な結合アッセ
イ及び特異抗体を用いたエンザイムイムノアッセイ等に
より測定することができる。
【００２５】本発明ヒトポリペプチド（蛋白質）は、Ｃ
末端が通常カルボキシル基（−ＣＯＯＨ）またはカルボ
キシレート(−ＣＯＯ-）であるが、Ｃ末端がアミド（−
ＣＯＮＨ2）またはエステル（−ＣＯＯＲ）であっても
よい。ここでエステルにおけるＲとしては、例えば、メ
チル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピルもしくはｎ
−ブチルなどのＣ1-6アルキル基、例えば、シクロペン
チル、シクロヘキシルなどのＣ3-8シクロアルキル基、
例えば、フェニル、α−ナフチルなどのＣ6-12アリール
基、例えば、ベンジル、フェネチルなどのフェニル−Ｃ
1-2アルキル基もしくはα−ナフチルメチルなどのα−
ナフチル−Ｃ1-2アルキル基などのＣ7-14アラルキル基
のほか、経口用エステルとして汎用されるピバロイルオ
キシメチルエステルなどが用いられる。
末端が通常カルボキシル基（−ＣＯＯＨ）またはカルボ
キシレート(−ＣＯＯ-）であるが、Ｃ末端がアミド（−
ＣＯＮＨ2）またはエステル（−ＣＯＯＲ）であっても
よい。ここでエステルにおけるＲとしては、例えば、メ
チル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピルもしくはｎ
−ブチルなどのＣ1-6アルキル基、例えば、シクロペン
チル、シクロヘキシルなどのＣ3-8シクロアルキル基、
例えば、フェニル、α−ナフチルなどのＣ6-12アリール
基、例えば、ベンジル、フェネチルなどのフェニル−Ｃ
1-2アルキル基もしくはα−ナフチルメチルなどのα−
ナフチル−Ｃ1-2アルキル基などのＣ7-14アラルキル基
のほか、経口用エステルとして汎用されるピバロイルオ
キシメチルエステルなどが用いられる。
【００２６】本発明ヒトポリペプチド（蛋白質）がＣ末
端以外にカルボキシル基（またはカルボキシレート）を
有している場合、カルボキシル基がアミド化またはエス
テル化されているものも本発明の蛋白質に含まれる。こ
の場合のエステルとしては、例えば上記したＣ末端のエ
ステルなどが用いられる。さらに、本発明の蛋白質に
は、Ｎ末端のメチオニン残基のアミノ基が保護基（例え
ば、ホルミル基、アセチル基などのＣ1-6アシル基な
ど）で保護されているもの、生体内で切断されて生成す
るＮ末端のグルタミン酸残基がピログルタミン化したも
の、分子内のアミノ酸の側鎖上にある、例えばＯＨ、Ｃ
ＯＯＨ、ＮＨ2、ＳＨなどが適当な保護基（例えば、ホ
ルミル基、アセチル基などのＣ1-6アシル基など）で保
護されているもの、あるいは糖鎖が結合したいわゆる糖
蛋白質などの複合蛋白質なども含まれる。
端以外にカルボキシル基（またはカルボキシレート）を
有している場合、カルボキシル基がアミド化またはエス
テル化されているものも本発明の蛋白質に含まれる。こ
の場合のエステルとしては、例えば上記したＣ末端のエ
ステルなどが用いられる。さらに、本発明の蛋白質に
は、Ｎ末端のメチオニン残基のアミノ基が保護基（例え
ば、ホルミル基、アセチル基などのＣ1-6アシル基な
ど）で保護されているもの、生体内で切断されて生成す
るＮ末端のグルタミン酸残基がピログルタミン化したも
の、分子内のアミノ酸の側鎖上にある、例えばＯＨ、Ｃ
ＯＯＨ、ＮＨ2、ＳＨなどが適当な保護基（例えば、ホ
ルミル基、アセチル基などのＣ1-6アシル基など）で保
護されているもの、あるいは糖鎖が結合したいわゆる糖
蛋白質などの複合蛋白質なども含まれる。
【００２７】本発明の蛋白質の部分ペプチドとしては、
前記した本発明ヒトポリペプチド（蛋白質）の部分ペプ
チドであって、実質的に同質の活性を有するものであれ
ばいずれのものでもよい。例えば、本発明ヒトポリペプ
チド（蛋白質）の構成アミノ酸配列のうち少なくとも２
０個以上、好ましくは５０個以上、さらに好ましくは７
０個以上、より好ましくは１００個以上、最も好ましく
は２００個以上のアミノ酸配列を有し、例えば、ショウ
ジョウバエファット蛋白質と実質的に同質の生物学的活
性を有するするペプチドなどが用いられる。又、本発明
の部分ペプチドはＣ末端が通常カルボキシル基（−ＣＯ
ＯＨ）またはカルボキシレート（−ＣＯＯ-）である
が、前記した本発明の蛋白質のごとく、Ｃ末端がアミド
（−ＣＯＮＨ2 ）またはエステル（−ＣＯＯＲ）であっ
てもよい。さらに、本発明の部分ペプチドには、前記し
た本発明の蛋白質と同様に、Ｎ末端のメチオニン残基の
アミノ基が保護基で保護されているもの、Ｎ端側が生体
内で切断され生成したグルタミル基がピログルタミン酸
化したもの、分子内のアミノ酸の側鎖上の置換基が適当
な保護基で保護されているもの、あるいは糖鎖が結合し
たいわゆる糖ペプチドなどの複合ペプチドなども含まれ
る。
前記した本発明ヒトポリペプチド（蛋白質）の部分ペプ
チドであって、実質的に同質の活性を有するものであれ
ばいずれのものでもよい。例えば、本発明ヒトポリペプ
チド（蛋白質）の構成アミノ酸配列のうち少なくとも２
０個以上、好ましくは５０個以上、さらに好ましくは７
０個以上、より好ましくは１００個以上、最も好ましく
は２００個以上のアミノ酸配列を有し、例えば、ショウ
ジョウバエファット蛋白質と実質的に同質の生物学的活
性を有するするペプチドなどが用いられる。又、本発明
の部分ペプチドはＣ末端が通常カルボキシル基（−ＣＯ
ＯＨ）またはカルボキシレート（−ＣＯＯ-）である
が、前記した本発明の蛋白質のごとく、Ｃ末端がアミド
（−ＣＯＮＨ2 ）またはエステル（−ＣＯＯＲ）であっ
てもよい。さらに、本発明の部分ペプチドには、前記し
た本発明の蛋白質と同様に、Ｎ末端のメチオニン残基の
アミノ基が保護基で保護されているもの、Ｎ端側が生体
内で切断され生成したグルタミル基がピログルタミン酸
化したもの、分子内のアミノ酸の側鎖上の置換基が適当
な保護基で保護されているもの、あるいは糖鎖が結合し
たいわゆる糖ペプチドなどの複合ペプチドなども含まれ
る。
【００２８】本発明ヒトポリペプチド（蛋白質）又はそ
の部分ペプチドの塩としては、とりわけ生理学的に許容
される酸付加塩が好ましい。この様な塩としては、例え
ば、無機酸（例えば、塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫
酸）との塩、あるいは有機酸（例えば、酢酸、ギ酸、プ
ロピオン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酒石
酸、クエン酸、リンゴ酸、蓚酸、安息香酸、メタンスル
ホン酸、ベンゼンスルホン酸）との塩などが用いられ
る。
の部分ペプチドの塩としては、とりわけ生理学的に許容
される酸付加塩が好ましい。この様な塩としては、例え
ば、無機酸（例えば、塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫
酸）との塩、あるいは有機酸（例えば、酢酸、ギ酸、プ
ロピオン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酒石
酸、クエン酸、リンゴ酸、蓚酸、安息香酸、メタンスル
ホン酸、ベンゼンスルホン酸）との塩などが用いられ
る。
【００２９】本発明ヒトポリペプチド（蛋白質）、その
部分ペプチドもしくはそれらの塩またはそれらのアミド
体は、当該技術分野で公知の化学合成方法を用いて調製
することも出来る。例えば、通常市販されている蛋白質
合成用樹脂を用い、α−アミノ基と側鎖官能基を適当に
保護したアミノ酸を、目的とする蛋白質の配列通りに、
当業界において自体公知の各種縮合方法に従い、樹脂上
で縮合させる。反応の最後に樹脂から蛋白質を切り出す
と同時に各種保護基を除去し、さらに高希釈溶液中で分
子内ジスルフィド結合形成反応を実施し、目的の蛋白
質、その部分ペプチドまたはそれらのアミド体を取得す
る。上記した保護アミノ酸の縮合に関しては、例えば、
DCC、N,N'-ジイソプロピルカルボジイミド、及びN-エチ
ル-N'-(3-ジメチルアミノプロリル）カルボジイミドの
ようなカルボジイミド類に代表される蛋白質合成に使用
できる各種活性化試薬を用いることができる。これらに
よる活性化にはラセミ化抑制添加剤（例えば、HOBt, HO
OBt)とともに保護アミノ酸を直接樹脂に添加するかまた
は、対称酸無水物またはHOBtエステルあるいはHOOBtエ
ステルとしてあらかじめ保護アミノ酸の活性化を行なっ
た後に樹脂に添加することができる。
部分ペプチドもしくはそれらの塩またはそれらのアミド
体は、当該技術分野で公知の化学合成方法を用いて調製
することも出来る。例えば、通常市販されている蛋白質
合成用樹脂を用い、α−アミノ基と側鎖官能基を適当に
保護したアミノ酸を、目的とする蛋白質の配列通りに、
当業界において自体公知の各種縮合方法に従い、樹脂上
で縮合させる。反応の最後に樹脂から蛋白質を切り出す
と同時に各種保護基を除去し、さらに高希釈溶液中で分
子内ジスルフィド結合形成反応を実施し、目的の蛋白
質、その部分ペプチドまたはそれらのアミド体を取得す
る。上記した保護アミノ酸の縮合に関しては、例えば、
DCC、N,N'-ジイソプロピルカルボジイミド、及びN-エチ
ル-N'-(3-ジメチルアミノプロリル）カルボジイミドの
ようなカルボジイミド類に代表される蛋白質合成に使用
できる各種活性化試薬を用いることができる。これらに
よる活性化にはラセミ化抑制添加剤（例えば、HOBt, HO
OBt)とともに保護アミノ酸を直接樹脂に添加するかまた
は、対称酸無水物またはHOBtエステルあるいはHOOBtエ
ステルとしてあらかじめ保護アミノ酸の活性化を行なっ
た後に樹脂に添加することができる。
【００３０】保護アミノ酸の活性化や樹脂との縮合に用
いられる溶媒としては、酸アミド類、ハロゲン化炭化水
素類、アルコール類、スルオキシド類、及びエーテル類
等、当業界において蛋白質縮合反応に使用しうることが
知られている溶媒から適宜選択されうる。反応温度は蛋
白質結合形成反応に使用され得ることが知られている範
囲から適宜選択され、通常約−２０℃〜５０℃の範囲か
ら適宜選択される。活性化されたアミノ酸誘導体は通常
１.５〜４倍過剰で用いられる。ニンヒドリン反応を用
いたテストの結果、縮合が不十分な場合には保護基の脱
離を行うことなく縮合反応を繰り返すことにより十分な
縮合を行なうことができる。反応を繰り返しても十分な
縮合が得られないときには、無水酢酸またはアセチルイ
ミダゾールを用いて未反応アミノ酸をアセチル化して、
後の反応に影響を及ぼさないようにすることができる。
原料の各アミノ基、カルボキシル基、及びセリン水酸基
等の保護基としても、当該技術分野において、通常使用
される基を使用することができる。原料の反応に関与す
べきでない官能基の保護ならびに保護基、およびその保
護基の脱離、反応に関与する官能基の活性化などは公知
の基または公知の手段から適宜選択しうる。
いられる溶媒としては、酸アミド類、ハロゲン化炭化水
素類、アルコール類、スルオキシド類、及びエーテル類
等、当業界において蛋白質縮合反応に使用しうることが
知られている溶媒から適宜選択されうる。反応温度は蛋
白質結合形成反応に使用され得ることが知られている範
囲から適宜選択され、通常約−２０℃〜５０℃の範囲か
ら適宜選択される。活性化されたアミノ酸誘導体は通常
１.５〜４倍過剰で用いられる。ニンヒドリン反応を用
いたテストの結果、縮合が不十分な場合には保護基の脱
離を行うことなく縮合反応を繰り返すことにより十分な
縮合を行なうことができる。反応を繰り返しても十分な
縮合が得られないときには、無水酢酸またはアセチルイ
ミダゾールを用いて未反応アミノ酸をアセチル化して、
後の反応に影響を及ぼさないようにすることができる。
原料の各アミノ基、カルボキシル基、及びセリン水酸基
等の保護基としても、当該技術分野において、通常使用
される基を使用することができる。原料の反応に関与す
べきでない官能基の保護ならびに保護基、およびその保
護基の脱離、反応に関与する官能基の活性化などは公知
の基または公知の手段から適宜選択しうる。
【００３１】本発明の部分ペプチドまたはそれらの塩
は、当該技術分野において自体公知のペプチドの合成法
に従って、あるいは本発明の蛋白質を適当なペプチダー
ゼで切断することによって製造することができる。ペプ
チドの合成法としては、例えば、固相合成法、液相合成
法のいずれによっても良い。公知の縮合方法や保護基の
脱離としては、例えば、以下の（１）〜（３）に記載さ
れた方法が挙げられる。 （１）泉屋信夫他、ペプチド合成の基礎と実験、 丸善
(株) （1975年） （２）矢島治明 および榊原俊平、生化学実験講座 1、
蛋白質の化学IV、 205、(1977年) （３）矢島治明監修、続医薬品の開発 第14巻 ペプチド
合成 広川書店 反応後の精製も自体公知の方法、例えば、溶媒抽出・蒸
留・カラムクロマトグラフィー・液体クロマトグラフィ
ー・再結晶などを組み合わせて本発明の部分ペプチドを
精製単離することができる。上記方法で得られる部分ペ
プチドが遊離体である場合は、公知の方法によって適当
な塩に変換することができるし、逆に塩で得られた場合
は、公知の方法によって遊離体に変換することができ
る。
は、当該技術分野において自体公知のペプチドの合成法
に従って、あるいは本発明の蛋白質を適当なペプチダー
ゼで切断することによって製造することができる。ペプ
チドの合成法としては、例えば、固相合成法、液相合成
法のいずれによっても良い。公知の縮合方法や保護基の
脱離としては、例えば、以下の（１）〜（３）に記載さ
れた方法が挙げられる。 （１）泉屋信夫他、ペプチド合成の基礎と実験、 丸善
(株) （1975年） （２）矢島治明 および榊原俊平、生化学実験講座 1、
蛋白質の化学IV、 205、(1977年) （３）矢島治明監修、続医薬品の開発 第14巻 ペプチド
合成 広川書店 反応後の精製も自体公知の方法、例えば、溶媒抽出・蒸
留・カラムクロマトグラフィー・液体クロマトグラフィ
ー・再結晶などを組み合わせて本発明の部分ペプチドを
精製単離することができる。上記方法で得られる部分ペ
プチドが遊離体である場合は、公知の方法によって適当
な塩に変換することができるし、逆に塩で得られた場合
は、公知の方法によって遊離体に変換することができ
る。
【００３２】本発明ヒトポリペプチド（蛋白質）、その
部分ペプチドまたはそれらの塩に対する抗体は、それら
を認識し得るものであれば、ポリクローナル抗体、モノ
クローナル抗体の何れであってもよい。本発明ヒトポリ
ペプチド（蛋白質）、その部分ペプチドまたはそれらの
塩に対する抗体は、本発明ヒトポリペプチド（蛋白質）
を抗原として用い、公知の抗体または抗血清の製造法に
従って製造することができる。本発明の抗体は、体液や
組織などの被検体中に存在する本発明ヒトポリペプチド
（蛋白質）等を検出するために使用することができる。
また、これらを精製するために使用する抗体カラムの作
製、精製時の各分画中の本発明ヒトポリペプチド（蛋白
質）の検出、被検細胞内における本発明ヒトポリペプチ
ド（蛋白質）の挙動の分析などのために使用することが
できる。
部分ペプチドまたはそれらの塩に対する抗体は、それら
を認識し得るものであれば、ポリクローナル抗体、モノ
クローナル抗体の何れであってもよい。本発明ヒトポリ
ペプチド（蛋白質）、その部分ペプチドまたはそれらの
塩に対する抗体は、本発明ヒトポリペプチド（蛋白質）
を抗原として用い、公知の抗体または抗血清の製造法に
従って製造することができる。本発明の抗体は、体液や
組織などの被検体中に存在する本発明ヒトポリペプチド
（蛋白質）等を検出するために使用することができる。
また、これらを精製するために使用する抗体カラムの作
製、精製時の各分画中の本発明ヒトポリペプチド（蛋白
質）の検出、被検細胞内における本発明ヒトポリペプチ
ド（蛋白質）の挙動の分析などのために使用することが
できる。
【００３３】更に、本発明の抗体は、公知の方法による
被検液中の本発明ヒトポリペプチド（蛋白質）等の定
量、特に、モノクローナル抗体を使用したサンドイッチ
免疫測定法による定量、及び組織染色等による検出など
に使用することができる。それによって、例えば、本発
明ヒトポリペプチド（蛋白質）等が関与する疾病の診断
を行なうことができる。これらの目的には、抗体分子そ
のものを用いてもよく、また、抗体分子のＦ(ａｂ')2
、Ｆａｂ'、あるいはＦａｂ画分を用いてもよい。本発
明の抗体を用いる本発明の蛋白質等の定量法は、特に制
限されるべきものではなく、被測定液中の抗原量（例え
ば、蛋白質量）に対応した抗体、抗原もしくは抗体−抗
原複合体の量を化学的または物理的手段により検出し、
これを既知量の抗原を含む標準液を用いて作製した標準
曲線より算出する測定法であれば、いずれの測定法を用
いてもよい。例えば、ネフロメトリー、競合法、イムノ
メトリック法およびサンドイッチ法が好適に用いられる
が、感度、特異性の点で、後述するサンドイッチ法を用
いるのが好ましい。標識物質を用いる測定法に用いられ
る標識剤としては、当該技術分野で公知の、例えば、放
射性同位元素、酵素、蛍光物質、発光物質などを用いる
ことが出来る。
被検液中の本発明ヒトポリペプチド（蛋白質）等の定
量、特に、モノクローナル抗体を使用したサンドイッチ
免疫測定法による定量、及び組織染色等による検出など
に使用することができる。それによって、例えば、本発
明ヒトポリペプチド（蛋白質）等が関与する疾病の診断
を行なうことができる。これらの目的には、抗体分子そ
のものを用いてもよく、また、抗体分子のＦ(ａｂ')2
、Ｆａｂ'、あるいはＦａｂ画分を用いてもよい。本発
明の抗体を用いる本発明の蛋白質等の定量法は、特に制
限されるべきものではなく、被測定液中の抗原量（例え
ば、蛋白質量）に対応した抗体、抗原もしくは抗体−抗
原複合体の量を化学的または物理的手段により検出し、
これを既知量の抗原を含む標準液を用いて作製した標準
曲線より算出する測定法であれば、いずれの測定法を用
いてもよい。例えば、ネフロメトリー、競合法、イムノ
メトリック法およびサンドイッチ法が好適に用いられる
が、感度、特異性の点で、後述するサンドイッチ法を用
いるのが好ましい。標識物質を用いる測定法に用いられ
る標識剤としては、当該技術分野で公知の、例えば、放
射性同位元素、酵素、蛍光物質、発光物質などを用いる
ことが出来る。
【００３４】これらの測定・検出方法に関する一般的な
技術手段の詳細については、総説、成書などを参照する
ことができる。例えば、入江 寛編「続ラジオイムノア
ッセイ〕（講談社、昭和５４年発行）、石川栄治ら編
「酵素免疫測定法」（第３版）（医学書院、昭和６２年
発行）、「Methods in ENZYMOLOGY」Vol. 70(Immunoche
mical Techniques(Part A))、 同書 Vol. 73(Immunoche
mical Techniques(PartB))、 同書 Vol. 74(Immunochem
ical Techniques(Part C))、 同書 Vol. 84(Immunochem
ical Techniques(Part D:Selected Immunoassays))、
同書 Vol. 92(Immunochemical Techniques(Part E:Mono
clonal Antibodies and General Immunoassay Method
s))、 同書 Vol. 121(Immunochemical Techniques(Part
I:HybridomaTechnology and Monoclonal Antibodies))
(以上、アカデミックプレス社発行)などを参照すること
ができる。
技術手段の詳細については、総説、成書などを参照する
ことができる。例えば、入江 寛編「続ラジオイムノア
ッセイ〕（講談社、昭和５４年発行）、石川栄治ら編
「酵素免疫測定法」（第３版）（医学書院、昭和６２年
発行）、「Methods in ENZYMOLOGY」Vol. 70(Immunoche
mical Techniques(Part A))、 同書 Vol. 73(Immunoche
mical Techniques(PartB))、 同書 Vol. 74(Immunochem
ical Techniques(Part C))、 同書 Vol. 84(Immunochem
ical Techniques(Part D:Selected Immunoassays))、
同書 Vol. 92(Immunochemical Techniques(Part E:Mono
clonal Antibodies and General Immunoassay Method
s))、 同書 Vol. 121(Immunochemical Techniques(Part
I:HybridomaTechnology and Monoclonal Antibodies))
(以上、アカデミックプレス社発行)などを参照すること
ができる。
【００３５】本発明ヒトポリペプチド（蛋白質）又はそ
の部分ペプチドをコードするＤＮＡに実質的に相補的な
塩基配列を有するアンチセンスＤＮＡとしては、当該Ｄ
ＮＡの塩基配列に実質的に相補的な塩基配列を有し、該
ＤＮＡの発現を抑制し得る作用を有するものであれば、
いずれのアンチセンスＤＮＡであってもよい。実質的に
相補的な塩基配列とは、例えば、本発明ヒトＤＮＡに相
補的な塩基配列の全塩基配列または部分塩基配列と約９
５％以上、最も好ましくは１００％の相同性を有する塩
基配列などが挙げられる。又、これらアンチセンスＤＮ
Ａと同様の作用を有する核酸配列（ＲＮＡまたはＤＮＡ
の修飾体）も本発明でいうアンチセンスＤＮＡに含まれ
る。これらのアンチセンスＤＮＡは、公知のＤＮＡ合成
装置などを用いて製造することができる。
の部分ペプチドをコードするＤＮＡに実質的に相補的な
塩基配列を有するアンチセンスＤＮＡとしては、当該Ｄ
ＮＡの塩基配列に実質的に相補的な塩基配列を有し、該
ＤＮＡの発現を抑制し得る作用を有するものであれば、
いずれのアンチセンスＤＮＡであってもよい。実質的に
相補的な塩基配列とは、例えば、本発明ヒトＤＮＡに相
補的な塩基配列の全塩基配列または部分塩基配列と約９
５％以上、最も好ましくは１００％の相同性を有する塩
基配列などが挙げられる。又、これらアンチセンスＤＮ
Ａと同様の作用を有する核酸配列（ＲＮＡまたはＤＮＡ
の修飾体）も本発明でいうアンチセンスＤＮＡに含まれ
る。これらのアンチセンスＤＮＡは、公知のＤＮＡ合成
装置などを用いて製造することができる。
【００３６】更に、本発明ヒトポリペプチド（蛋白質）
等は、これら物質の活性を阻害する化合物またはその塩
のスクリーニングのための試薬として有用である。すな
わち、本発明は、本発明ヒトポリペプチド（蛋白質）、
その部分ペプチドまたはそれらの塩を用いることを特徴
とする、該物質又はそれらの塩の活性を阻害する化合物
（以下、「阻害剤」ともいう）のスクリーニング方法、
及びその為のスクリーニング用キットを提供する。本発
明のスクリーニング方法またはスクリーニング用キット
を用いて得られる化合物またはその塩は、上記した試験
化合物から選ばれた化合物であり、本発明ヒトポリペプ
チド（蛋白質）等の生物学的活性を阻害する化合物であ
る。該化合物またはその塩は、本発明の蛋白質等の活性
を直接阻害するものであってもよいし、本発明ヒトポリ
ペプチド（蛋白質）等の発現を阻害することによって間
接的に本発明ヒトポリペプチド（蛋白質）等の活性を阻
害するものであってもよい。該化合物の塩としては、例
えば、薬学的に許容可能な塩などが用いられる。例え
ば、無機塩基との塩、有機塩基との塩、無機酸との塩、
有機酸との塩、塩基性または酸性アミノ酸との塩などが
あげられる。本発明ヒトポリペプチド（蛋白質）等の生
物学的活性を阻害する化合物も上記各種疾病に対する治
療・予防剤などの医薬として使用できる可能性がある。
等は、これら物質の活性を阻害する化合物またはその塩
のスクリーニングのための試薬として有用である。すな
わち、本発明は、本発明ヒトポリペプチド（蛋白質）、
その部分ペプチドまたはそれらの塩を用いることを特徴
とする、該物質又はそれらの塩の活性を阻害する化合物
（以下、「阻害剤」ともいう）のスクリーニング方法、
及びその為のスクリーニング用キットを提供する。本発
明のスクリーニング方法またはスクリーニング用キット
を用いて得られる化合物またはその塩は、上記した試験
化合物から選ばれた化合物であり、本発明ヒトポリペプ
チド（蛋白質）等の生物学的活性を阻害する化合物であ
る。該化合物またはその塩は、本発明の蛋白質等の活性
を直接阻害するものであってもよいし、本発明ヒトポリ
ペプチド（蛋白質）等の発現を阻害することによって間
接的に本発明ヒトポリペプチド（蛋白質）等の活性を阻
害するものであってもよい。該化合物の塩としては、例
えば、薬学的に許容可能な塩などが用いられる。例え
ば、無機塩基との塩、有機塩基との塩、無機酸との塩、
有機酸との塩、塩基性または酸性アミノ酸との塩などが
あげられる。本発明ヒトポリペプチド（蛋白質）等の生
物学的活性を阻害する化合物も上記各種疾病に対する治
療・予防剤などの医薬として使用できる可能性がある。
【００３７】本発明ヒトＤＮＡ及び該ＤＮＡを含むファ
ット３遺伝子をプローブとして使用することにより、ヒ
トにおけるファット３又はその部分ペプチドをコードす
るＤＮＡまたはｍＲＮＡの異常（遺伝子異常）を検出す
ることができるので、例えば、該ＤＮＡまたはｍＲＮＡ
の損傷、突然変異あるいは発現低下や、該ＤＮＡまたは
ｍＲＮＡの増加あるいは発現過多などの遺伝子診断剤と
して有用である。本発明のＤＮＡを用いる上記の遺伝子
診断は、例えば、公知のノーザンハイブリダイゼーショ
ンやＰＣＲ−ＳＳＣＰ法（Genomics，第５巻，８７４〜
８７９頁（１９８９年）、Proceedings of the Nationa
l Academy of Sciences of the UnitedStates of Ameri
ca，第８６巻，２７６６〜２７７０頁（１９８９年））
などにより実施することができる。更に、ファット３遺
伝子に異常があったり、欠損している場合あるいは発現
量が減少している場合、生体内において正常な機能を発
揮できない患者に対しては、公知手段に従って（１）レ
トロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデ
ノウイルスアソシエーテッドウイルスベクターなどの適
当なベクターをベヒクルとして使用する遺伝子治療によ
って、本発明ヒトＤＮＡ又はファット遺伝子を該患者体
内に導入し、発現させるか、又は（２）本発明の蛋白質
等を該患者に注入すること等によって、該患者において
本発明の蛋白質等の機能を発揮させることができるもの
と考えられる。本発明ヒトＤＮＡ又はファット３遺伝子
を、該ＤＮＡを単独、又は、摂取促進のための補助剤と
ともに、遺伝子銃やハイドロゲルカテーテルのようなカ
テーテルによって投与することも可能である。
ット３遺伝子をプローブとして使用することにより、ヒ
トにおけるファット３又はその部分ペプチドをコードす
るＤＮＡまたはｍＲＮＡの異常（遺伝子異常）を検出す
ることができるので、例えば、該ＤＮＡまたはｍＲＮＡ
の損傷、突然変異あるいは発現低下や、該ＤＮＡまたは
ｍＲＮＡの増加あるいは発現過多などの遺伝子診断剤と
して有用である。本発明のＤＮＡを用いる上記の遺伝子
診断は、例えば、公知のノーザンハイブリダイゼーショ
ンやＰＣＲ−ＳＳＣＰ法（Genomics，第５巻，８７４〜
８７９頁（１９８９年）、Proceedings of the Nationa
l Academy of Sciences of the UnitedStates of Ameri
ca，第８６巻，２７６６〜２７７０頁（１９８９年））
などにより実施することができる。更に、ファット３遺
伝子に異常があったり、欠損している場合あるいは発現
量が減少している場合、生体内において正常な機能を発
揮できない患者に対しては、公知手段に従って（１）レ
トロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデ
ノウイルスアソシエーテッドウイルスベクターなどの適
当なベクターをベヒクルとして使用する遺伝子治療によ
って、本発明ヒトＤＮＡ又はファット遺伝子を該患者体
内に導入し、発現させるか、又は（２）本発明の蛋白質
等を該患者に注入すること等によって、該患者において
本発明の蛋白質等の機能を発揮させることができるもの
と考えられる。本発明ヒトＤＮＡ又はファット３遺伝子
を、該ＤＮＡを単独、又は、摂取促進のための補助剤と
ともに、遺伝子銃やハイドロゲルカテーテルのようなカ
テーテルによって投与することも可能である。
【００３８】尚、以上に述べたヒトＤＮＡ及びヒトポリ
ペプチドに関する各操作は、本発明のラットファット３
遺伝子及びラットファット３蛋白質にも同様に応用する
ことが可能である。又、本明細書および図面において、
塩基やアミノ酸などを略号で表示する場合、ＩＵＰＡＣ
−ＩＵＢ Commision on Biochemical Nomenclature に
よる略号あるいは当該分野における慣用略号に基づくも
のであり、またアミノ酸に関し光学異性体があり得る場
合は、特に明示しなければＬ体を示すものとする。
ペプチドに関する各操作は、本発明のラットファット３
遺伝子及びラットファット３蛋白質にも同様に応用する
ことが可能である。又、本明細書および図面において、
塩基やアミノ酸などを略号で表示する場合、ＩＵＰＡＣ
−ＩＵＢ Commision on Biochemical Nomenclature に
よる略号あるいは当該分野における慣用略号に基づくも
のであり、またアミノ酸に関し光学異性体があり得る場
合は、特に明示しなければＬ体を示すものとする。
【００３９】本願明細書の配列表の配列番号は、以下の
配列を示す。 〔配列番号：１〕ヒトファット３蛋白質のＣ末端側の一
部分である本発明ヒトポリペプチドのアミノ酸配列（ア
ミノ酸数：１０９７）を示す。 〔配列番号：２〕配列番号：１で示されるアミノ酸配列
を有する本発明ヒトポリペプチドをコードするＤＮＡの
塩基配列を含む、クローンfh00385の全塩基配列（５３
３９塩基対）を示す。 〔配列番号：３〕ラットファット３蛋白質のアミノ酸配
列（アミノ酸数：４５５５）を示す。 〔配列番号：４〕配列番号：クローンrFAT3F, rFAT3S
及び rFAT3T から得られた、３で示されるアミノ酸配列
を有する本発明ラットファット３蛋白質をコードするＤ
ＮＡの塩基配列を含む全塩基配列（１４５３０塩基対）
を示す。
配列を示す。 〔配列番号：１〕ヒトファット３蛋白質のＣ末端側の一
部分である本発明ヒトポリペプチドのアミノ酸配列（ア
ミノ酸数：１０９７）を示す。 〔配列番号：２〕配列番号：１で示されるアミノ酸配列
を有する本発明ヒトポリペプチドをコードするＤＮＡの
塩基配列を含む、クローンfh00385の全塩基配列（５３
３９塩基対）を示す。 〔配列番号：３〕ラットファット３蛋白質のアミノ酸配
列（アミノ酸数：４５５５）を示す。 〔配列番号：４〕配列番号：クローンrFAT3F, rFAT3S
及び rFAT3T から得られた、３で示されるアミノ酸配列
を有する本発明ラットファット３蛋白質をコードするＤ
ＮＡの塩基配列を含む全塩基配列（１４５３０塩基対）
を示す。
【００４０】
【実施例】以下に、実施例により本発明をさらに具体的
に説明するが、本発明はそれに限定されるものではな
い。なお、実施例における各種遺伝子操作は、Molecula
r cloning 2nd.ed.（Cold Spring Harbor Lab.Press，1
989）に記載されている方法に従った。
に説明するが、本発明はそれに限定されるものではな
い。なお、実施例における各種遺伝子操作は、Molecula
r cloning 2nd.ed.（Cold Spring Harbor Lab.Press，1
989）に記載されている方法に従った。
【００４１】
【実施例１】（１）ヒト胎児脳由来ｃＤＮＡライブラリ
ーの構築 ＮｏｔＩ部位を有するオリゴヌクレオチド（ＧＡＣＴＡ
ＧＴＴＣＴＡＧＡＴＣＧＣＧＡＧＣＧＧＣＣＧＣＣＣ
（Ｔ）１５）（ギブコＢＲＬ社）をプライマーとして、
ヒト脳由来ｍＲＮＡ（クローンテック社）を鋳型にSupe
rScriptII逆転写酵素キット（ギブコＢＲＬ社）で２本
鎖ｃＤＮＡを合成した。ＳａｌＩ部位を有するアダプタ
ー（ギブコＢＲＬ社）をｃＤＮＡとライゲーションし
た。その後、ＮｏｔＩ消化し、１％濃度の低融解アガロ
ース電気泳動により、３ｋｂ以上のＤＮＡ断片を精製し
た。精製ｃＤＮＡ断片を、ＳａｌＩ−ＮｏｔＩ制限酵素
処理したpBluescript IISK＋ プラスミドとライゲーシ
ョンした。大腸菌 ElectroMax DH10B 株（ギブコＢＲＬ
社）にエレクトロポレーション法によりこの組換えプラ
スミドを導入した。次いで、こうして構築したｃＤＮＡ
ライブラリーから、約45,000個の組換え体を選択し、in
vitro翻訳系を用い、50kDa以上の蛋白質を発現できるc
DNAクローンを4,500個、選択を行なった(Ishikawa, K.-
I. et. al. 1997 DNA RES. 5:307-313 )。次に、この4,
500個のクローンの両末端DNA配列を決定した。この中か
ら、新規遺伝子を含む500個のクローンのcDNAに関して
の全塩基配列の決定を行なった。配列決定には、ＰＥア
プライドバイオシステム社製のＤＮＡシークエンサー
（ABI PRISM377）と同社製反応キットを使用した。大部
分の配列はショットガンクローンをダイターミネーター
法を用いて決定した。一部の塩基配列については、決定
した塩基配列を元にしてオリゴヌクレオチドを合成し、
プライマーウォーキング法で決定した。
ーの構築 ＮｏｔＩ部位を有するオリゴヌクレオチド（ＧＡＣＴＡ
ＧＴＴＣＴＡＧＡＴＣＧＣＧＡＧＣＧＧＣＣＧＣＣＣ
（Ｔ）１５）（ギブコＢＲＬ社）をプライマーとして、
ヒト脳由来ｍＲＮＡ（クローンテック社）を鋳型にSupe
rScriptII逆転写酵素キット（ギブコＢＲＬ社）で２本
鎖ｃＤＮＡを合成した。ＳａｌＩ部位を有するアダプタ
ー（ギブコＢＲＬ社）をｃＤＮＡとライゲーションし
た。その後、ＮｏｔＩ消化し、１％濃度の低融解アガロ
ース電気泳動により、３ｋｂ以上のＤＮＡ断片を精製し
た。精製ｃＤＮＡ断片を、ＳａｌＩ−ＮｏｔＩ制限酵素
処理したpBluescript IISK＋ プラスミドとライゲーシ
ョンした。大腸菌 ElectroMax DH10B 株（ギブコＢＲＬ
社）にエレクトロポレーション法によりこの組換えプラ
スミドを導入した。次いで、こうして構築したｃＤＮＡ
ライブラリーから、約45,000個の組換え体を選択し、in
vitro翻訳系を用い、50kDa以上の蛋白質を発現できるc
DNAクローンを4,500個、選択を行なった(Ishikawa, K.-
I. et. al. 1997 DNA RES. 5:307-313 )。次に、この4,
500個のクローンの両末端DNA配列を決定した。この中か
ら、新規遺伝子を含む500個のクローンのcDNAに関して
の全塩基配列の決定を行なった。配列決定には、ＰＥア
プライドバイオシステム社製のＤＮＡシークエンサー
（ABI PRISM377）と同社製反応キットを使用した。大部
分の配列はショットガンクローンをダイターミネーター
法を用いて決定した。一部の塩基配列については、決定
した塩基配列を元にしてオリゴヌクレオチドを合成し、
プライマーウォーキング法で決定した。
【００４２】（２）ホモロジー検索による本発明ＤＮＡ
を含むクローンの決定 次に、こうして得られた全塩基配列に基づき、DNA解析
プログラム(Fasta & Blast)を用いたホモロジー検索を
実施したところ、公開されているデータベースの中のヒ
トファット１及びヒトファット２と高いホモロジーを示
す候補クローンfh00385が見出された。更に、別のDNA解
析プログラム(BESTFIT)を用いて、このクローンfh00385
とヒトファット１及びヒトファット２の塩基配列を比較
したところ、全塩基配列において、アミノ酸レベルでそ
れぞれ約４３％と約３８％のホモロジーを示し、ＤＮＡ
レベルでは約５９％と約５８％のホモロジーを示す本発
明ＤＮＡをクローンfh00385が有していることが判明し
た。因みに，ヒトファット１とヒトファット２とのホモ
ロジーは、アミノ酸レベル及びＤＮＡレベルで、夫々約
４４％及び約５６％である。
を含むクローンの決定 次に、こうして得られた全塩基配列に基づき、DNA解析
プログラム(Fasta & Blast)を用いたホモロジー検索を
実施したところ、公開されているデータベースの中のヒ
トファット１及びヒトファット２と高いホモロジーを示
す候補クローンfh00385が見出された。更に、別のDNA解
析プログラム(BESTFIT)を用いて、このクローンfh00385
とヒトファット１及びヒトファット２の塩基配列を比較
したところ、全塩基配列において、アミノ酸レベルでそ
れぞれ約４３％と約３８％のホモロジーを示し、ＤＮＡ
レベルでは約５９％と約５８％のホモロジーを示す本発
明ＤＮＡをクローンfh00385が有していることが判明し
た。因みに，ヒトファット１とヒトファット２とのホモ
ロジーは、アミノ酸レベル及びＤＮＡレベルで、夫々約
４４％及び約５６％である。
【００４３】（３）ラットファット３遺伝子 まず、胎生１５日目のラット胎児脳より精製を行ったＲ
ＮＡを用いて、小原他の方法（DNA Research Vol.4,53
−59（1997））に従って調製したｃＤＮＡライブラリー
から、配列番号２で示してあるヒトファット３ＤＮＡを
プローブとして用いてコロニーハイブリダイゼーション
法にて相同性クローニングを行ない、クローンを得た。
次に、ラットファット３遺伝子の全領域を取得するため
に、上記の方法で得られたクローンrFAT3Fの塩基配列を
基にプライマーを調製し、プライマーと胎生１５日目の
ラット胎児脳より得られたＲＮＡとハイブリダイゼーシ
ョンを行った後に、逆転写反応を行うことにより最初の
クローンrFAT3Fの上流側（遺伝子の５’側）の領域を含
むｃＤＮＡを特異的に合成した。この遺伝子の５’側領
域を含むｃＤＮＡをプラスミドに挿入した後、クローン
rFAT3Fの一部分をプローブとしてコロニーハイブリダイ
ゼーション法で相同性クローニングを行った。このよう
にして得られたクローンrFAT3S の全塩基配列を決定し
た。更に、上記方法を繰り返すことにより、クローンrF
AT3T を取得し、この全塩基配列を決定した。このよう
にして、本発明のラットファット３遺伝子の全領域を取
得した。
ＮＡを用いて、小原他の方法（DNA Research Vol.4,53
−59（1997））に従って調製したｃＤＮＡライブラリー
から、配列番号２で示してあるヒトファット３ＤＮＡを
プローブとして用いてコロニーハイブリダイゼーション
法にて相同性クローニングを行ない、クローンを得た。
次に、ラットファット３遺伝子の全領域を取得するため
に、上記の方法で得られたクローンrFAT3Fの塩基配列を
基にプライマーを調製し、プライマーと胎生１５日目の
ラット胎児脳より得られたＲＮＡとハイブリダイゼーシ
ョンを行った後に、逆転写反応を行うことにより最初の
クローンrFAT3Fの上流側（遺伝子の５’側）の領域を含
むｃＤＮＡを特異的に合成した。この遺伝子の５’側領
域を含むｃＤＮＡをプラスミドに挿入した後、クローン
rFAT3Fの一部分をプローブとしてコロニーハイブリダイ
ゼーション法で相同性クローニングを行った。このよう
にして得られたクローンrFAT3S の全塩基配列を決定し
た。更に、上記方法を繰り返すことにより、クローンrF
AT3T を取得し、この全塩基配列を決定した。このよう
にして、本発明のラットファット３遺伝子の全領域を取
得した。
【００４４】DNA／蛋白質解析プログラム(BESTFIT)を用
いて、本発明ラットファット３遺伝子とヒトファット３
遺伝子と比較したところ、アミノ酸レベル及びＤＮＡレ
ベルでそれぞれ９３％と８４％と高いホモロジーを示し
た。因みに、DNA／蛋白質解析プログラム(BESTFIT)を用
いて、本発明ラットファット３遺伝子とヒトファット１
遺伝子と比較したところ、アミノ酸レベル及びＤＮＡレ
ベルでそれぞれ５３％と６０％のホモロジーを示した。
又、本発明ラットファット３遺伝子とヒトファット２遺
伝子と比較したところ、アミノ酸レベル及びＤＮＡレベ
ルでそれぞれ４０％と５６％のホモロジーを示した。次
に、本発明ラットファット３遺伝子とラットファット１
遺伝子と比較したところ、アミノ酸レベル及びＤＮＡレ
ベルでそれぞれ５３％と６０％のホモロジーを示した。
又、本発明ラットファット３遺伝子とラットファット２
遺伝子と比較したところ、アミノ酸レベル及びＤＮＡレ
ベルでそれぞれ４４％と５５％のホモロジーを有してい
ることが判明した。因みに、ラットファット１遺伝子と
ラットファット２遺伝子とのホモロジーは、アミノ酸レ
ベル及びＤＮＡレベルで、夫々４６％及び５７％であ
る。
いて、本発明ラットファット３遺伝子とヒトファット３
遺伝子と比較したところ、アミノ酸レベル及びＤＮＡレ
ベルでそれぞれ９３％と８４％と高いホモロジーを示し
た。因みに、DNA／蛋白質解析プログラム(BESTFIT)を用
いて、本発明ラットファット３遺伝子とヒトファット１
遺伝子と比較したところ、アミノ酸レベル及びＤＮＡレ
ベルでそれぞれ５３％と６０％のホモロジーを示した。
又、本発明ラットファット３遺伝子とヒトファット２遺
伝子と比較したところ、アミノ酸レベル及びＤＮＡレベ
ルでそれぞれ４０％と５６％のホモロジーを示した。次
に、本発明ラットファット３遺伝子とラットファット１
遺伝子と比較したところ、アミノ酸レベル及びＤＮＡレ
ベルでそれぞれ５３％と６０％のホモロジーを示した。
又、本発明ラットファット３遺伝子とラットファット２
遺伝子と比較したところ、アミノ酸レベル及びＤＮＡレ
ベルでそれぞれ４４％と５５％のホモロジーを有してい
ることが判明した。因みに、ラットファット１遺伝子と
ラットファット２遺伝子とのホモロジーは、アミノ酸レ
ベル及びＤＮＡレベルで、夫々４６％及び５７％であ
る。
【００４５】（４）モチーフ検索 更に，本発明ＤＮＡに関して、PROSITE databaseを検索
するための蛋白質解析プログラムである pftools (Bair
och A, Bucher P, Hofmann K, Nucleic AcidsRes. 1997
Jan 1;25(1):217-21)、及びPfam databaseを検索する
ための蛋白質解析プログラムhmmer 2.1(Sonnhammer, E.
L. L., Eddy, S. R., Birney, E., Bateman, A., and
Durbin, R., Nucleic Acids Res 1998; 26, 320-322）
を用いてモチーフ検索を行なった (Suyama et. al. 199
9 Nucleic Acids Res. 27: 338-339)。本発明ヒトＤＮ
Ａは、５３３９塩基対あり、１０９７個のアミノ酸から
なる蛋白質をコードしている。現在、取得している本発
明ヒトポリペプチドである部分配列の分子構造は、N末
端側から１個のカドヘリンドメイン（アミノ酸配列番号
６９-１５２）、１個のEGF様モチーフ（アミノ酸配列番
号３０７-３４０）、ラミニンGドメイン（アミノ酸配列
番号３７３-５０５）、更に３つのEGF様ドメイン（アミ
ノ酸配列番号５３３-５６５、５７２-６０３、６１０-
６４１）、１つの膜貫通ドメイン（アミノ酸配列番号66
3-684）、及び細胞内ドメイン（アミノ酸配列番号685-1
097）から構成されていることが判明した。一方、上記
（３）で得られたラットの全長のcDNAをPfamで解析した
結果から、ラットファット３蛋白質は３３個のカドヘリ
ンドメイン、４個のEGF様ドメイン及び１個のラミニンG
ドメインを持つ４５５５アミノ酸からなる巨大な蛋白質
であることが判明した。既に記載したように、本発明ポ
リペプチド（ヒトファット３遺伝子）とラットファット
３遺伝子はアミノ酸及びＤＮＡレベルで高いホモロジー
を示し、更に、上記のように、それぞれのドメイン構造
も全く同じであるので、本発明ヒトＤＮＡはヒトファッ
ト３遺伝子の一部であり、そのアミノ酸配列から、互い
に同様の機能を有し、これらがコードする蛋白質はカル
シウムに結合し、カルシウムによる機能の調節が行なわ
れていることが予測される。
するための蛋白質解析プログラムである pftools (Bair
och A, Bucher P, Hofmann K, Nucleic AcidsRes. 1997
Jan 1;25(1):217-21)、及びPfam databaseを検索する
ための蛋白質解析プログラムhmmer 2.1(Sonnhammer, E.
L. L., Eddy, S. R., Birney, E., Bateman, A., and
Durbin, R., Nucleic Acids Res 1998; 26, 320-322）
を用いてモチーフ検索を行なった (Suyama et. al. 199
9 Nucleic Acids Res. 27: 338-339)。本発明ヒトＤＮ
Ａは、５３３９塩基対あり、１０９７個のアミノ酸から
なる蛋白質をコードしている。現在、取得している本発
明ヒトポリペプチドである部分配列の分子構造は、N末
端側から１個のカドヘリンドメイン（アミノ酸配列番号
６９-１５２）、１個のEGF様モチーフ（アミノ酸配列番
号３０７-３４０）、ラミニンGドメイン（アミノ酸配列
番号３７３-５０５）、更に３つのEGF様ドメイン（アミ
ノ酸配列番号５３３-５６５、５７２-６０３、６１０-
６４１）、１つの膜貫通ドメイン（アミノ酸配列番号66
3-684）、及び細胞内ドメイン（アミノ酸配列番号685-1
097）から構成されていることが判明した。一方、上記
（３）で得られたラットの全長のcDNAをPfamで解析した
結果から、ラットファット３蛋白質は３３個のカドヘリ
ンドメイン、４個のEGF様ドメイン及び１個のラミニンG
ドメインを持つ４５５５アミノ酸からなる巨大な蛋白質
であることが判明した。既に記載したように、本発明ポ
リペプチド（ヒトファット３遺伝子）とラットファット
３遺伝子はアミノ酸及びＤＮＡレベルで高いホモロジー
を示し、更に、上記のように、それぞれのドメイン構造
も全く同じであるので、本発明ヒトＤＮＡはヒトファッ
ト３遺伝子の一部であり、そのアミノ酸配列から、互い
に同様の機能を有し、これらがコードする蛋白質はカル
シウムに結合し、カルシウムによる機能の調節が行なわ
れていることが予測される。
【００４６】又、ＲＴ−ＥＬＩＳＡ方法（Nagase T, Is
hikawa K, Suyama M, Kikuno R, Miyajima N, Tanaka
A, Kotani H, Nomura N, Ohara O, DNA Res 1998 5:277
-286）により分析した結果、胎児の脳でもっとも強く多
く発現していることが明らかになった。更に、GeneBrid
ge 4 radiation hybrid panel (Research Genetics, In
c.)を使用したRHマッピング(Radiation Hybrid) (1. D.
Cox, M. Burmeister, et al.(1990). Science 250: 2
45-250; 2. M. James, C. Richard III, et al. (199
4)., Nature Genetics 8: 70-75.; 3. M. Boehnke, K.
Lange, and D. Cox (1991). Am. J. Hum. Genet. 49:
1174-1188)の結果から、本発明ＤＮＡはマーカーAFM248
MC9に最も近くマップされ、遺伝子座は、11q14であるこ
とが判明した。
hikawa K, Suyama M, Kikuno R, Miyajima N, Tanaka
A, Kotani H, Nomura N, Ohara O, DNA Res 1998 5:277
-286）により分析した結果、胎児の脳でもっとも強く多
く発現していることが明らかになった。更に、GeneBrid
ge 4 radiation hybrid panel (Research Genetics, In
c.)を使用したRHマッピング(Radiation Hybrid) (1. D.
Cox, M. Burmeister, et al.(1990). Science 250: 2
45-250; 2. M. James, C. Richard III, et al. (199
4)., Nature Genetics 8: 70-75.; 3. M. Boehnke, K.
Lange, and D. Cox (1991). Am. J. Hum. Genet. 49:
1174-1188)の結果から、本発明ＤＮＡはマーカーAFM248
MC9に最も近くマップされ、遺伝子座は、11q14であるこ
とが判明した。
【００４７】
【発明の効果】これらのことから、本発明に係る新規フ
ァット（fat）３遺伝子は、神経疾患を含めた先天性奇
形症候群を診断、治療する上で必要不可欠な役割を果た
すと考えられる。又、本発明に係るＤＮＡ配列およびそ
の遺伝子座を明らかにしたことにより、候補遺伝子解析
法(candidate gene analysis)を用いてこの遺伝子が責
任遺伝子である病気の同定は飛躍的に簡便になった。ま
た、ノーザンハイブリダイゼーションによる各組織によ
る発現のパターンの情報は、神経疾患を含めた先天性奇
形症候群を診断、治療する上で非常に有益な知見であ
る。このように、本発明ヒトＤＮＡ及び該ＤＮＡを含む
ファット３遺伝子、それらがコードするポリペプチド又
は蛋白質、該蛋白質に対する抗体、アンチセンスＤＮＡ
等は、神経疾患を含めた先天性奇形症候群を治療する為
の各種治療・予防方法に医薬として使用することが考え
られる。
ァット（fat）３遺伝子は、神経疾患を含めた先天性奇
形症候群を診断、治療する上で必要不可欠な役割を果た
すと考えられる。又、本発明に係るＤＮＡ配列およびそ
の遺伝子座を明らかにしたことにより、候補遺伝子解析
法(candidate gene analysis)を用いてこの遺伝子が責
任遺伝子である病気の同定は飛躍的に簡便になった。ま
た、ノーザンハイブリダイゼーションによる各組織によ
る発現のパターンの情報は、神経疾患を含めた先天性奇
形症候群を診断、治療する上で非常に有益な知見であ
る。このように、本発明ヒトＤＮＡ及び該ＤＮＡを含む
ファット３遺伝子、それらがコードするポリペプチド又
は蛋白質、該蛋白質に対する抗体、アンチセンスＤＮＡ
等は、神経疾患を含めた先天性奇形症候群を治療する為
の各種治療・予防方法に医薬として使用することが考え
られる。
【００４８】
【配列表】 SEQUENCE LISTING <110> Kazusa DNA Research Institute <120> Novel Fat gene and the protein encoded by said gene <160> 4 <210> 1 <211> 1097 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> Glu Glu Phe Val Leu Asp Pro His Gly Ile Leu Arg Ser Ala Val 15 5 10 15 Val Phe Gln His Thr Glu Ser Leu Glu Tyr Val Leu Cys Val Gln 30 20 25 30 Ala Lys Asp Ser Gly Lys Pro Gln Gln Val Ser His Thr Tyr Ile 45 35 40 45 Arg Val Arg Val Ile Glu Glu Ser Thr His Lys Pro Thr Ala Ile 60 50 55 60 Pro Leu Glu Ile Phe Ile Val Thr Met Glu Asp Asp Phe Pro Gly 75 65 70 75 Gly Val Ile Gly Lys Ile His Ala Thr Asp Gln Asp Met Tyr Asp 90 80 85 90 Val Leu Thr Phe Ala Leu Lys Ser Glu Gln Lys Ser Leu Phe Lys 105 95 100 105 Val Asn Ser His Asp Gly Lys Ile Ile Ala Leu Gly Gly Leu Asp 120 110 115 120 Ser Gly Lys Tyr Val Leu Asn Val Ser Val Ser Asp Gly Arg Phe 135 125 130 135 Gln Val Pro Ile Asp Val Val Val His Val Glu Gln Leu Val His 150 140 145 150 Glu Met Leu Gln Asn Thr Val Thr Ile Arg Phe Glu Asn Val Ser 165 155 160 165 Pro Glu Asp Phe Val Gly Leu His Met His Gly Phe Arg Arg Thr 180 170 175 180 Leu Arg Asn Ala Val Leu Thr Gln Lys Gln Asp Ser Leu Arg Ile 185 190 195 Ile Ser Ile Gln Pro Val Ala Gly Thr Asn Gln Leu Asp Met Leu 210 200 205 210 Phe Ala Val Glu Met His Ser Ser Glu Phe Tyr Lys Pro Ala Tyr 225 215 220 225 Leu Ile Gln Lys Leu Ser Asn Ala Arg Arg His Leu Glu Asn Ile 240 230 235 240 Met Arg Ile Ser Ala Ile Leu Glu Lys Asn Cys Ser Gly Leu Asp 255 245 250 255 Cys Gln Glu Gln His Cys Glu Gln Gly Leu Ser Leu Asp Ser His 270 260 265 270 Ala Leu Met Thr Tyr Ser Thr Ala Arg Ile Ser Phe Val Cys Pro 285 275 280 285 Arg Phe Tyr Arg Asn Val Arg Cys Thr Cys Asn Gly Gly Leu Cys 300 290 295 300 Pro Gly Ser Asn Asp Pro Cys Val Glu Lys Pro Cys Pro Gly Asp 315 305 310 315 Met Gln Cys Val Gly Tyr Glu Ala Ser Arg Arg Pro Phe Leu Cys 330 320 325 330 Gln Cys Pro Pro Gly Lys Leu Gly Glu Cys Ser Gly His Thr Ser 345 335 340 345 Leu Ser Phe Ala Gly Asn Ser Tyr Ile Lys Tyr Arg Leu Ser Glu 360 350 355 360 Asn Ser Lys Glu Glu Asp Phe Lys Leu Ala Leu Arg Leu Arg Thr 375 365 370 375 Leu Gln Ser Asn Gly Ile Ile Met Tyr Thr Arg Ala Asn Pro Cys 390 380 385 390 Ile Ile Leu Lys Ile Val Asp Gly Lys Leu Trp Phe Gln Leu Asp 405 395 400 405 Cys Gly Ser Gly Pro Gly Ile Leu Gly Ile Ser Gly Arg Ala Val 420 410 415 420 Asn Asp Gly Ser Trp His Ser Val Phe Leu Glu Leu Asn Arg Asn 435 425 430 435 Phe Thr Ser Leu Ser Leu Asp Asp Ser Tyr Val Glu Arg Arg Arg 450 440 445 450 Ala Pro Leu Tyr Phe Gln Thr Leu Ser Thr Glu Ser Ser Ile Tyr 465 455 460 465 Phe Gly Ala Leu Val Gln Ala Asp Asn Ile Arg Ser Leu Thr Asp 480 470 475 480 Thr Arg Val Thr Gln Val Leu Ser Gly Phe Gln Gly Cys Leu Asp 495 485 490 495 Ser Val Ile Leu Asn Asn Asn Glu Leu Pro Leu Gln Asn Lys Arg 510 500 505 510 Ser Ser Phe Ala Glu Val Val Gly Leu Thr Glu Leu Lys Leu Gly 525 515 520 525 Cys Val Leu Tyr Pro Asp Ala Cys Lys Arg Ser Pro Cys Gln His 540 530 535 540 Gly Gly Ser Cys Thr Gly Leu Pro Ser Gly Gly Tyr Gln Cys Thr 555 545 550 555 Cys Leu Ser Gln Phe Thr Gly Arg Asn Cys Glu Ser Glu Ile Thr 570 560 565 570 Ala Cys Phe Pro Asn Pro Cys Arg Asn Gly Gly Ser Cys Asp Pro 585 575 580 585 Ile Gly Asn Thr Phe Ile Cys Asn Cys Lys Ala Gly Leu Thr Gly 600 590 595 600 Val Thr Cys Glu Glu Asp Ile Asn Glu Cys Glu Arg Glu Glu Cys 615 605 610 615 Glu Asn Gly Gly Ser Cys Val Asn Val Phe Gly Ser Phe Leu Cys 630 620 625 630 Asn Cys Thr Pro Gly Tyr Val Gly Gln Tyr Cys Gly Leu Arg Pro 645 635 640 645 Val Val Val Pro Asn Ile Gln Ala Gly His Ser Tyr Val Gly Lys 660 650 655 660 Glu Glu Leu Ile Gly Ile Ala Val Val Leu Phe Val Ile Phe Ile 675 665 670 675 Leu Val Val Leu Phe Ile Val Phe Arg Lys Lys Val Phe Arg Lys 690 680 685 690 Asn Tyr Ser Arg Asn Asn Ile Thr Leu Val Gln Asp Pro Ala Thr 705 695 700 705 Ala Ala Leu Leu Asn Lys Ser Asn Gly Ile Pro Phe Arg Asn Leu 720 710 715 720 Arg Gly Ser Gly Asp Gly Arg Asn Val Tyr Gln Glu Val Gly Pro 735 725 730 735 Pro Gln Val Pro Val Arg Pro Met Ala Tyr Thr Pro Cys Phe Gln 750 740 745 750 Ser Asp Ser Arg Ser Asn Leu Asp Lys Ile Val Asp Gly Leu Gly 765 755 760 765 Gly Glu His Gln Glu Met Thr Thr Phe His Pro Glu Ser Pro Arg 780 770 775 780 Ile Leu Thr Ala Arg Arg Gly Val Val Val Cys Ser Val Ala Pro 795 785 790 795 Asn Leu Pro Ala Val Ser Pro Cys Arg Ser Asp Cys Asp Ser Ile 810 800 805 810 Arg Lys Asn Gly Trp Asp Ala Gly Thr Glu Asn Lys Gly Val Asp 825 815 820 825 Asp Pro Gly Glu Val Thr Cys Phe Ala Gly Ser Asn Lys Gly Ser 840 830 835 840 Asn Ser Glu Val Gln Ser Leu Ser Ser Phe Gln Ser Asp Ser Gly 855 845 850 855 Asp Asp Asn Ala Ser Ile Val Thr Val Ile Gln Leu Val Asn Asn 870 860 865 870 Val Val Asp Thr Ile Glu Asn Glu Val Ser Val Met Asp Gln Gly 885 875 880 885 Gln Asn Tyr Asn Arg Ala Tyr His Trp Asp Thr Ser Asp Trp Met 900 890 895 900 Pro Gly Ala Arg Leu Ser Asp Ile Glu Glu Val Pro Asn Tyr Glu 915 905 910 915 Asn Gln Asp Gly Gly Ser Ala His Gln Gly Ser Thr Arg Glu Leu 930 920 925 930 Glu Ser Asp Tyr Tyr Leu Gly Gly Tyr Asp Ile Asp Ser Glu Tyr 945 935 940 945 Pro Pro Pro His Glu Glu Glu Phe Leu Ser Gln Asp Gln Leu Pro 960 950 955 960 Pro Pro Leu Pro Glu Asp Phe Pro Asp Gln Tyr Glu Ala Leu Pro 975 965 970 975 Pro Ser Gln Pro Val Ser Leu Ala Ser Thr Leu Ser Pro Asp Cys 990 980 985 990 Arg Arg Arg Pro Gln Phe His Pro Ser Gln Tyr Leu Pro Pro His 1005 995 1000 1005 Pro Phe Pro Asn Glu Thr Asp Leu Val Gly Pro Pro Ala Ser Cys 1020 1010 1015 1020 Glu Phe Ser Thr Phe Ala Val Ser Met Asn Gln Gly Thr Glu Pro 1035 1025 1030 1035 Thr Gly Pro Ala Asp Ser Val Ser Leu Ser Leu His Asn Ser Arg 1050 1040 1045 1050 Gly Thr Ser Ser Ser Asp Val Ser Ala Asn Cys Gly Phe Asp Asp 1065 1055 1060 1065 Ser Glu Val Ala Met Ser Asp Tyr Glu Ser Val Gly Glu Leu Ser 1080 1070 1075 1080 Leu Ala Ser Leu His Ile Pro Phe Val Glu Thr Gln His Gln Thr 1095 1085 1090 1095 Gln Val 1097 <210> 2 <211> 5339 <212> DNA <213> Homo Sapiens <400> gag gag ttt gtg ttg gac cct cat ggg atc ttg cgg tcg gct gtg 45 Glu Glu Phe Val Leu Asp Pro His Gly Ile Leu Arg Ser Ala Val gtc ttc cag cac aca gag tct ctg gaa tac gtg ttg tgt gtc cag 90 Val Phe Gln His Thr Glu Ser Leu Glu Tyr Val Leu Cys Val Gln gca aag gat tca ggc aaa ccc cag caa gtt tct cac act tac atc 135 Ala Lys Asp Ser Gly Lys Pro Gln Gln Val Ser His Thr Tyr Ile cgc gtg cga gtc att gag gaa agc acc cac aag ccc aca gcc att 180 Arg Val Arg Val Ile Glu Glu Ser Thr His Lys Pro Thr Ala Ile ccc ctg gaa att ttc att gtc acc atg gag gat gac ttt cct ggt 225 Pro Leu Glu Ile Phe Ile Val Thr Met Glu Asp Asp Phe Pro Gly ggg gtc att ggg aag att cat gcc aca gat caa gac atg tat gat 270 Gly Val Ile Gly Lys Ile His Ala Thr Asp Gln Asp Met Tyr Asp gtg ctc aca ttt gcc ctg aaa tcg gag cag aaa agc tta ttt aaa 315 Val Leu Thr Phe Ala Leu Lys Ser Glu Gln Lys Ser Leu Phe Lys gtg aac agt cac gat ggg aaa atc atc gcc ctg gga ggc ctg gac 360 Val Asn Ser His Asp Gly Lys Ile Ile Ala Leu Gly Gly Leu Asp agc ggc aag tat gtc ctg aat gtg tct gtg agt gat ggt cgc ttc 405 Ser Gly Lys Tyr Val Leu Asn Val Ser Val Ser Asp Gly Arg Phe cag gta ccc att gat gtg gtc gtg cat gtg gag cag ttg gtg cat 450 Gln Val Pro Ile Asp Val Val Val His Val Glu Gln Leu Val His gag atg ctg cag aac act gtc acc atc cgc ttt gaa aat gtg tcc 495 Glu Met Leu Gln Asn Thr Val Thr Ile Arg Phe Glu Asn Val Ser cct gag gac ttc gtg ggg ctg cac atg cat ggg ttc cgg cgc acc 540 Pro Glu Asp Phe Val Gly Leu His Met His Gly Phe Arg Arg Thr ctg cgg aat gca gtc ctc acc cag aag cag gac agc ctg cgc atc 585 Leu Arg Asn Ala Val Leu Thr Gln Lys Gln Asp Ser Leu Arg Ile atc agc atc cag ccc gtg gca ggc acc aac caa ctg gac atg ctg 630 Ile Ser Ile Gln Pro Val Ala Gly Thr Asn Gln Leu Asp Met Leu ttt gcg gtg gag atg cac agc agc gag ttc tac aag cca gcc tac 675 Phe Ala Val Glu Met His Ser Ser Glu Phe Tyr Lys Pro Ala Tyr ctg atc cag aag ctg tcc aat gct aga aga cac ctg gag aat atc 720 Leu Ile Gln Lys Leu Ser Asn Ala Arg Arg His Leu Glu Asn Ile atg cgc atc tca gcc atc ttg gag aag aac tgc tca ggg ctg gac 765 Met Arg Ile Ser Ala Ile Leu Glu Lys Asn Cys Ser Gly Leu Asp tgt cag gaa cag cat tgt gag caa ggc ttg tca ctc gat tcc cac 810 Cys Gln Glu Gln His Cys Glu Gln Gly Leu Ser Leu Asp Ser His gcg ctc atg acc tac agc acg gct cgc atc agc ttt gtg tgt ccg 855 Ala Leu Met Thr Tyr Ser Thr Ala Arg Ile Ser Phe Val Cys Pro cgt ttc tac agg aac gtg cgt tgc acc tgc aat gga gga ctg tgt 900 Arg Phe Tyr Arg Asn Val Arg Cys Thr Cys Asn Gly Gly Leu Cys ccg ggg tcc aac gat cct tgt gtg gag aag ccg tgt cca ggg gac 945 Pro Gly Ser Asn Asp Pro Cys Val Glu Lys Pro Cys Pro Gly Asp atg cag tgt gtc ggt tat gaa gcc agc agg aga ccg ttc ctc tgc 990 Met Gln Cys Val Gly Tyr Glu Ala Ser Arg Arg Pro Phe Leu Cys cag tgt cca cca ggg aag ctc gga gag tgc tca ggg cac act tct 1035 Gln Cys Pro Pro Gly Lys Leu Gly Glu Cys Ser Gly His Thr Ser ctc agc ttt gct gga aac agt tac atc aaa tat cgg ctt tct gaa 1080 Leu Ser Phe Ala Gly Asn Ser Tyr Ile Lys Tyr Arg Leu Ser Glu aat agc aaa gaa gag gat ttc aaa cta gct ctg cgt ctt cga aca 1125 Asn Ser Lys Glu Glu Asp Phe Lys Leu Ala Leu Arg Leu Arg Thr ctg caa agc aat ggg att ata atg tac acc aga gca aat ccc tgc 1170 Leu Gln Ser Asn Gly Ile Ile Met Tyr Thr Arg Ala Asn Pro Cys ata att ctg aag att gtg gat ggc aag ctg tgg ttc cag ctg gac 1215 Ile Ile Leu Lys Ile Val Asp Gly Lys Leu Trp Phe Gln Leu Asp tgc ggc agc ggc cct gga atc ttg ggc atc tcg ggc cgt gct gtc 1260 Cys Gly Ser Gly Pro Gly Ile Leu Gly Ile Ser Gly Arg Ala Val aac gac ggg agc tgg cac tcg gtc ttc ctg gag ctc aac cgc aat 1305 Asn Asp Gly Ser Trp His Ser Val Phe Leu Glu Leu Asn Arg Asn ttc acg agc ctg tcc ctg gat gac agc tac gtg gag cgg cgc cgg 1350 Phe Thr Ser Leu Ser Leu Asp Asp Ser Tyr Val Glu Arg Arg Arg gcg ccc ctc tac ttc cag acg ctg agc act gag agt agc atc tac 1395 Ala Pro Leu Tyr Phe Gln Thr Leu Ser Thr Glu Ser Ser Ile Tyr ttc ggc gcc ctg gtg caa gcg gat aac atc cgc agc ctg act gac 1440 Phe Gly Ala Leu Val Gln Ala Asp Asn Ile Arg Ser Leu Thr Asp acg cgg gtc acg cag gtg ctc agc ggc ttc cag ggc tgc ctg gac 1485 Thr Arg Val Thr Gln Val Leu Ser Gly Phe Gln Gly Cys Leu Asp tcg gtg ata ctg aat aac aat gag ctg ccg ctg cag aac aag cgc 1530 Ser Val Ile Leu Asn Asn Asn Glu Leu Pro Leu Gln Asn Lys Arg agc agc ttc gcg gag gtg gtg ggc ctg acg gag ctg aag ctg ggc 1575 Ser Ser Phe Ala Glu Val Val Gly Leu Thr Glu Leu Lys Leu Gly tgc gtg ctc tat ccc gac gcc tgc aag cgc agc ccg tgc cag cac 1620 Cys Val Leu Tyr Pro Asp Ala Cys Lys Arg Ser Pro Cys Gln His ggg ggc agc tgc act ggc ctg cca tcg ggg ggc tat cag tgt acc 1665 Gly Gly Ser Cys Thr Gly Leu Pro Ser Gly Gly Tyr Gln Cys Thr tgt ctc tca cag ttt acg ggg aga aac tgt gaa tct gag att aca 1710 Cys Leu Ser Gln Phe Thr Gly Arg Asn Cys Glu Ser Glu Ile Thr gcc tgc ttc cca aac ccc tgc cgg aat gga gga tcc tgc gat cca 1755 Ala Cys Phe Pro Asn Pro Cys Arg Asn Gly Gly Ser Cys Asp Pro ata gga aac act ttc atc tgc aat tgt aaa gct ggg ctc act gga 1800 Ile Gly Asn Thr Phe Ile Cys Asn Cys Lys Ala Gly Leu Thr Gly gtc acg tgt gag gag gac atc aat gag tgc gaa cga gag gag tgt 1845 Val Thr Cys Glu Glu Asp Ile Asn Glu Cys Glu Arg Glu Glu Cys gag aac gga ggc tcc tgc gtg aac gtg ttc ggc tcc ttc ctc tgc 1890 Glu Asn Gly Gly Ser Cys Val Asn Val Phe Gly Ser Phe Leu Cys aac tgc acg ccg ggc tac gtg ggc cag tac tgc ggg ctg cgc ccc 1935 Asn Cys Thr Pro Gly Tyr Val Gly Gln Tyr Cys Gly Leu Arg Pro gtg gtg gta ccc aat atc cag gct ggc cac tcc tac gtg ggg aag 1980 Val Val Val Pro Asn Ile Gln Ala Gly His Ser Tyr Val Gly Lys gag gag ctc atc ggc atc gcc gtg gtc ctc ttc gtc atc ttc atc 2025 Glu Glu Leu Ile Gly Ile Ala Val Val Leu Phe Val Ile Phe Ile ctg gtg gtt ctc ttc ata gtc ttc cgc aag aag gtc ttc cgc aag 2070 Leu Val Val Leu Phe Ile Val Phe Arg Lys Lys Val Phe Arg Lys aac tac tcc cgc aac aac atc acg cta gtg cag gac ccg gcc acc 2115 Asn Tyr Ser Arg Asn Asn Ile Thr Leu Val Gln Asp Pro Ala Thr gcc gcc ctg ctt aac aag agc aat ggc atc ccg ttc cgg aac ctg 2160 Ala Ala Leu Leu Asn Lys Ser Asn Gly Ile Pro Phe Arg Asn Leu cgc ggc agt ggg gac ggc cgc aac gtc tac cag gag gtg ggg ccc 2205 Arg Gly Ser Gly Asp Gly Arg Asn Val Tyr Gln Glu Val Gly Pro ccg cag gtc ccc gtg cgc ccc atg gcc tac aca ccc tgc ttc cag 2250 Pro Gln Val Pro Val Arg Pro Met Ala Tyr Thr Pro Cys Phe Gln agt gac tcc agg agc aac ctg gat aag atc gtg gac ggg ctg gga 2295 Ser Asp Ser Arg Ser Asn Leu Asp Lys Ile Val Asp Gly Leu Gly ggc gag cac cag gaa atg acc acg ttt cac cct gag tcg ccc cgc 2340 Gly Glu His Gln Glu Met Thr Thr Phe His Pro Glu Ser Pro Arg atc ctg aca gcc cgg cgg ggc gtg gtc gtg tgc agt gtg gcc ccc 2385 Ile Leu Thr Ala Arg Arg Gly Val Val Val Cys Ser Val Ala Pro aac ctc ccc gcc gtg tca ccc tgc cgc tcc gac tgc gac tcc atc 2430 Asn Leu Pro Ala Val Ser Pro Cys Arg Ser Asp Cys Asp Ser Ile cgg aag aat ggc tgg gac gcg gga act gag aac aaa ggg gtt gat 2475 Arg Lys Asn Gly Trp Asp Ala Gly Thr Glu Asn Lys Gly Val Asp gac ccg gga gaa gtg acc tgc ttt gca ggt agt aat aaa ggc agc 2520 Asp Pro Gly Glu Val Thr Cys Phe Ala Gly Ser Asn Lys Gly Ser aac tct gaa gtt cag tcc ctc agc tcc ttc cag tca gat tct ggt 2565 Asn Ser Glu Val Gln Ser Leu Ser Ser Phe Gln Ser Asp Ser Gly gac gac aat gcc tcc ata gtg act gtc att cag ctt gtc aac aat 2610 Asp Asp Asn Ala Ser Ile Val Thr Val Ile Gln Leu Val Asn Asn gta gtt gac act ata gag aat gaa gtg tct gtc atg gac caa gga 2655 Val Val Asp Thr Ile Glu Asn Glu Val Ser Val Met Asp Gln Gly cag aac tac aac cga gcc tat cac tgg gac acc tct gat tgg atg 2700 Gln Asn Tyr Asn Arg Ala Tyr His Trp Asp Thr Ser Asp Trp Met cca ggg gcc cgc ctg tcg gac ata gag gaa gtg ccc aac tat gag 2745 Pro Gly Ala Arg Leu Ser Asp Ile Glu Glu Val Pro Asn Tyr Glu aac cag gat gga ggg tct gca cac cag ggg agc aca cgg gag ctg 2790 Asn Gln Asp Gly Gly Ser Ala His Gln Gly Ser Thr Arg Glu Leu gag agc gat tac tac ctg ggt ggt tat gac att gac agt gaa tac 2835 Glu Ser Asp Tyr Tyr Leu Gly Gly Tyr Asp Ile Asp Ser Glu Tyr cca ccc cct cat gaa gag gag ttc ttg agt cag gac cag ctg cct 2880 Pro Pro Pro His Glu Glu Glu Phe Leu Ser Gln Asp Gln Leu Pro cct cct ctc cca gag gac ttc cca gac caa tat gag gcc ctg cca 2925 Pro Pro Leu Pro Glu Asp Phe Pro Asp Gln Tyr Glu Ala Leu Pro ccc tcc cag cct gtc tcc ctg gcc agc aca ctg agc cca gac tgc 2970 Pro Ser Gln Pro Val Ser Leu Ala Ser Thr Leu Ser Pro Asp Cys agg aga agg ccc cag ttt cat cct agc cag tat ctc cct cct cac 3015 Arg Arg Arg Pro Gln Phe His Pro Ser Gln Tyr Leu Pro Pro His cca ttc ccc aac gaa acg gat ttg gtg ggc ccg cct gcc agc tgt 3060 Pro Phe Pro Asn Glu Thr Asp Leu Val Gly Pro Pro Ala Ser Cys gaa ttt agt act ttt gct gtg agc atg aac cag ggc aca gag ccc 3105 Glu Phe Ser Thr Phe Ala Val Ser Met Asn Gln Gly Thr Glu Pro aca ggc cca gca gac agc gtg tct ctg tcc ttg cac aat tcc aga 3150 Thr Gly Pro Ala Asp Ser Val Ser Leu Ser Leu His Asn Ser Arg ggc acc tca tcc tcg gat gtg tct gcc aac tgc ggc ttt gac gat 3195 Gly Thr Ser Ser Ser Asp Val Ser Ala Asn Cys Gly Phe Asp Asp tcc gaa gta gcc atg agt gac tac gag agc gtg gga gag ctc agc 3240 Ser Glu Val Ala Met Ser Asp Tyr Glu Ser Val Gly Glu Leu Ser ctc gcc agc ctt cac att ccc ttt gtg gag act cag cat cag act 3285 Leu Ala Ser Leu His Ile Pro Phe Val Glu Thr Gln His Gln Thr caa gtg 3291 Gln Val tagacatcac atcttgggta cttcaccctg tttgttacag aaaagtggaa gcagattggc 3351 tgggcttctg tcccagtgga gcattgtctg tggaatgaga agggaatact gtatttttcc 3411 actagaaact tcttcacaag tcatactgtc ccaacaagca agcttgattc cagttgggtg 3471 aaaatgaaag gctcagaaat tgtttttgag aggtgactgg taatccttga tgtaggtacc 3531 tatgttcaca gctaaaaatg caaagaggga aaaattattt cacccactaa gttatacagc 3591 cagtcttgta tggctttgtg cagtattgtg ccctggaaag tgttacagca tcagtccttg 3651 cagtattaaa aactggcaac aatcaaagag gcattgttgc atgtaatttt gagccaatga 3711 aatgaaaata gtagtaatga ttgttggaaa agttagtctc ttaggcgaaa gagaagagaa 3771 acaaatatta ttaaacaaac cagaaaatgg gctgaagcct tttaaatcaa ctctattttt 3831 ttgataagct gcccaatttt cagctataaa attaggcttg aataacatgt ttagtatgct 3891 cagttatttc tgtttgtttg tgttaagcat ccaatctaat atagttgggt tttatgatct 3951 tcaagaaagg tatcaatgaa gagcaacatg aggctttttg ggttccattt ggtgggtggg 4011 ggaggaagtt aaagttgttt gaacattaga aagaatgtga ttatctggtt ggttttgtgt 4071 tttctggtaa atattccagt tggtaaatct aacattgcta cagaagttgg ctttgttcat 4131 atagcttctc tacaattaga tatttttaga agtttaagca aaactcacaa attcaggggg 4191 gaaaaaagaa aaaaacgata ccttcaaagt ttgcggccta gataatcaca attcttcata 4251 atgcagagga aaggtgtctg ttattctaaa tcggtagcat caccattata aatacaatta 4311 tgttaagaaa agaggaaagt agactagtta ttgtgtataa attataatag tgtgtgtgtg 4371 tctgggccta tgtacaaata tgtgcttgca ctcagtaagg ctgctcttga ggaaagctaa 4431 tgtgaaggtt ttgggaaatg gaccatgttg aaaattctgc cggcgagcat ggcatacctt 4491 tcaatttctc tgatctctat ggtgttagag aaacatcaaa tgccatattt tactctggtt 4551 cagttaactt tattttggta ctgccaataa agcaaaattg tgcttttttt ttttttctca 4611 agacagagtc ttgctctgtc acccaggcta gagtgcaatg gcatgatctc agctcactgc 4671 aatctccacc tcctgggttc aagcgattct cctgcctcag cctcccaggt tgctggggtt 4731 acaggtgtgt gccaccacgc ctggctaatt ttttgtattt ttagtagaga tggggtttca 4791 ccatgttggc caggctggtc tcaaactcct gacctcgtaa tccacctgcc gtggcctccc 4851 aaagtgctgg gattacaggc atgagccacc gtgcccagcc caaaactgtg ctttttaaaa 4911 acagtatttt gttataattt tccagaactt acctctgttt taaaagtgtg taatgtttga 4971 ttacaccctg ggattccctt ctcatctgtg ggctttggcc atgatttcca aaattaacag 5031 gagaatcatt ccactggaaa tataacaatc cagtcctcaa aactgaaagt tgacaggttg 5091 agggactttc cttttttgct tcaatcagat tacggccgcc tgtgcagtgg ccatggtaaa 5151 tatatgcata tttgcactat ctgcttaatg agcaaatctg tgtccacagt ttctgatgac 5211 atatggcatt ggtgtgtaaa ttgtactgtc cctagtctgt gcattattca ctcagacata 5271 tttttagtta tttcaattgc gtttaatcca cttctttttt atgagtcagt gtttctgaat 5331 gtttatgc 5339 <210> 3 <211> 4555 <212> PRT <213> Rattus norvegicus <400> Met Gly Val Thr Met Arg His Cys Ile Asp Thr Arg Pro Pro Ser 15 5 10 15 Cys Leu Ile Phe Leu Leu Leu Lys Leu Cys Ala Thr Val Ser Gln 30 20 25 30 Gly Leu Pro Gly Thr Gly Pro Leu Gly Phe His Phe Thr His Ala 45 35 40 45 Leu Tyr Asn Ala Thr Val Tyr Glu Asn Ser Ala Ala Arg Thr Tyr 60 50 55 60 Val Asn Ser Gln Ser Arg Met Gly Ile Thr Leu Ile Asp Leu Ser 75 65 70 75 Trp Asp Ile Lys Tyr Arg Ile Val Ser Gly Asp Glu Glu Gly Phe 90 80 85 90 Phe Lys Ala Glu Glu Val Ile Ile Ala Asp Phe Cys Phe Leu Arg 105 95 100 105 Ile Arg Thr Lys Gly Gly Asn Ser Ala Ile Leu Asn Arg Glu Ile 120 110 115 120 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acg cag gtc ctc ggt ggc ttc cag ggt tgc ctg gac tcc gtg 12271 Val Thr Gln Val Leu Gly Gly Phe Gln Gly Cys Leu Asp Ser Val gtg ctc aat cac aac gag cta ccc ctc caa aac aag cgc agc agc 12316 Val Leu Asn His Asn Glu Leu Pro Leu Gln Asn Lys Arg Ser Ser ttc gcg gag gtc gtg ggt ctc acg gag ctg aag ttg ggc tgt gtg 12361 Phe Ala Glu Val Val Gly Leu Thr Glu Leu Lys Leu Gly Cys Val ctc tac ccc gac gcg tgc caa cgc agc cca tgt ctg cat ggg ggc 12406 Leu Tyr Pro Asp Ala Cys Gln Arg Ser Pro Cys Leu His Gly Gly agc tgc agc ggt ctg ccc tct ggc ggc tat cag tgt tcc tgt ctc 12451 Ser Cys Ser Gly Leu Pro Ser Gly Gly Tyr Gln Cys Ser Cys Leu tcg cag ttc acg ggg aca aac tgt gaa tca gag atc aca gcc tgc 12496 Ser Gln Phe Thr Gly Thr Asn Cys Glu Ser Glu Ile Thr Ala Cys ttc cct aac cct tgc cgg aat gga gga tcc tgt gac ccc ata gga 12541 Phe Pro Asn Pro Cys Arg Asn Gly Gly Ser Cys Asp Pro Ile Gly aac acc ttc atc tgc agc tgt aaa gcc ggc ctc aca ggt gtc acg 12586 Asn Thr Phe Ile Cys Ser Cys Lys Ala Gly Leu Thr Gly Val Thr tgc gag gat gac gtt gac gag tgt gag cga gaa gag tgt gag aac 12631 Cys Glu Asp Asp Val Asp Glu Cys Glu Arg Glu Glu Cys Glu Asn ggg ggt tcc tgt gtc aac ctg ttc ggc tcc ttc ttc tgc aac tgc 12676 Gly Gly Ser Cys Val Asn Leu Phe Gly Ser Phe Phe Cys Asn Cys acg cca ggc tat gta ggc cag tac tgt ggc ttg cgc cct gtg gtt 12721 Thr Pro Gly Tyr Val Gly Gln Tyr Cys Gly Leu Arg Pro Val Val gtg ccc aac atc caa gct ggc cac tca tac gtg gga aag gag gag 12766 Val Pro Asn Ile Gln Ala Gly His Ser Tyr Val Gly Lys Glu Glu ctg ata ggc atc gct gtg gtc ctc ttt gtc atc ttc acc ctg att 12811 Leu Ile Gly Ile Ala Val Val Leu Phe Val Ile Phe Thr Leu Ile gtg ctc ttc atc gtc ttt cgc aag aag gtc ttt cga aag aac tac 12856 Val Leu Phe Ile Val Phe Arg Lys Lys Val Phe Arg Lys Asn Tyr tct cgc aac aac atc aca tta gtg cag gac ccg gcc aca gct gcg 12901 Ser Arg Asn Asn Ile Thr Leu Val Gln Asp Pro Ala Thr Ala Ala ttg ctg cat aag agc aat ggc atc ccc ttc cgc agc ctg cgt gca 12946 Leu Leu His Lys Ser Asn Gly Ile Pro Phe Arg Ser Leu Arg Ala gga gat ggg cgc aac gtg tac cag gag gtg ggg ccc ccg cag gtg 12991 Gly Asp Gly Arg Asn Val Tyr Gln Glu Val Gly Pro Pro Gln Val ccg gtg cgc ccc atg gcc tac aca ccc tgc ttc cag agc gac tca 13036 Pro Val Arg Pro Met Ala Tyr Thr Pro Cys Phe Gln Ser Asp Ser agg agc aac ctg gac aaa ggc ctg gac gcg ctg ggt ggg gaa cca 13081 Arg Ser Asn Leu Asp Lys Gly Leu Asp Ala Leu Gly Gly Glu Pro cag gag ctg agc aca ttt cac ccg gaa tcg cca cgc atc ctc aca 13126 Gln Glu Leu Ser Thr Phe His Pro Glu Ser Pro Arg Ile Leu Thr gca agg cga ggt gtg gtg gtg tgc agc gtg gct ccc aac ctc cca 13171 Ala Arg Arg Gly Val Val Val Cys Ser Val Ala Pro Asn Leu Pro gct gtg tca ccc tgc cgc tca gac tgc gac tcc atc cgg aag aat 13216 Ala Val Ser Pro Cys Arg Ser Asp Cys Asp Ser Ile Arg Lys Asn ggc tgg gac aca gga tct gaa aac aaa ggg gct gaa gac aca gga 13261 Gly Trp Asp Thr Gly Ser Glu Asn Lys Gly Ala Glu Asp Thr Gly gaa gtg acc tgc ttc gca aac agt aat aaa ggc agc aac tca gaa 13306 Glu Val Thr Cys Phe Ala Asn Ser Asn Lys Gly Ser Asn Ser Glu gtt cag tcc ctc aac tcc ttc cag tcg gat tct ggc gat gac aac 13351 Val Gln Ser Leu Asn Ser Phe Gln Ser Asp Ser Gly Asp Asp Asn gcc tat cac tgg gac acc tct gac tgg atg cct ggg gca cgg ctg 13396 Ala Tyr His Trp Asp Thr Ser Asp Trp Met Pro Gly Ala Arg Leu tct gat att gaa gaa atg ccc aac tat gag agc caa gat gga ggg 13441 Ser Asp Ile Glu Glu Met Pro Asn Tyr Glu Ser Gln Asp Gly Gly gca gta cac cag ggt agc aca aga gag ctg gag agt gac tac tac 13486 Ala Val His Gln Gly Ser Thr Arg Glu Leu Glu Ser Asp Tyr Tyr cta ggc gga tat gac atc gat agt gaa tac ccg cca cct cat gaa 13531 Leu Gly Gly Tyr Asp Ile Asp Ser Glu Tyr Pro Pro Pro His Glu gaa gag ttc ctg agt cag gat cag cta ccc cca cca ctg cca gag 13576 Glu Glu Phe Leu Ser Gln Asp Gln Leu Pro Pro Pro Leu Pro Glu gac ttc cct gaa cag tat gag gcc ctg cct ccc tcc cag ccc acc 13621 Asp Phe Pro Glu Gln Tyr Glu Ala Leu Pro Pro Ser Gln Pro Thr tca ctc act ggc acc atg agc cca gac tgc agg aga agg ccc cgg 13666 Ser Leu Thr Gly Thr Met Ser Pro Asp Cys Arg Arg Arg Pro Arg ttt cac ccc agc cag tac ctt cct cct cac cca ctc cct ggt gaa 13711 Phe His Pro Ser Gln Tyr Leu Pro Pro His Pro Leu Pro Gly Glu aca gat ttg ggg ggc cca ccc tcc agc tgt gat ttt agt act ttt 13756 Thr Asp Leu Gly Gly Pro Pro Ser Ser Cys Asp Phe Ser Thr Phe gca gta agc atg aac cag ggc aca gag gtc atg gcc ccc aca gac 13801 Ala Val Ser Met Asn Gln Gly Thr Glu Val Met Ala Pro Thr Asp agt gtg tct ctg tcc ttg cac aat tcc aga ggc acc tca tcc tca 13846 Ser Val Ser Leu Ser Leu His Asn Ser Arg Gly Thr Ser Ser Ser gat atg tca gcc cgc tgt ggc ttt gat gat tct gag gta gcc atg 13891 Asp Met Ser Ala Arg Cys Gly Phe Asp Asp Ser Glu Val Ala Met agt gac tac gag agc gcg ggc gag ctc agc ctc acc aac ctt cac 13936 Ser Asp Tyr Glu Ser Ala Gly Glu Leu Ser Leu Thr Asn Leu His att ccc ttt gtg gaa acg cag cac cag acc cag gtg 13972 Ile Pro Phe Val Glu Thr Gln His Gln Thr Gln Val tagaggacac ccgtaggtgc tgtgcccaga ctattacagc atggaagaaa agaagctgta 14032 cttgtgttgg atggagagaa gtctgtggaa atgtggattt tctatgagga acgccttcgc 14092 aagtcttact gtcacaagca agctggactc tcagagtgac acggagaggc tcagaactgt 14152 ttcaggggga caggggagct gacagacttt gttgtgggtg ttggtggctt ggaatgcaaa 14212 ggagaagaaa tgagtttact aagttaaatg ggagatcctg aatggcattg tgtattattg 14272 tgacccggaa agtacggaac cagagatcct tacagtattt agcctgccac catcagaggg 14332 gcatcattgc atgttttttg gggccaagga agtgagaata gtagatatgt ctgtcagaaa 14392 agttagtgtt gtagatgaag gagaagtgag agctaagcac gagtgtgggc ggaagcctta 14452 gaagccaaca ctgttgtttg aaagagctgc ctaattttca gctataaaat taggtttgag 14512 taacaaaaaa aaaaaaaa 14530
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｇ０１Ｎ 33/566 33/566 Ｃ１２Ｒ 1:91） //(Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡ Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ Ｃ１２Ｒ 1:91） Ｃ１２Ｒ 1:91） (72)発明者 小原 收 千葉県木更津市矢那1532番３号 財団法人 かずさディー・エヌ・エー研究所内 Ｆターム(参考） 2G045 AA40 DA12 DA13 DA14 DA36 DA77 FB02 FB03 4B024 AA01 AA11 BA80 CA09 HA01 HA14 4H045 AA10 BA10 CA45 EA50 FA74
Claims (8)
- 【請求項１】 以下の（ａ）又は（ｂ）のポリペプチド
をコードする塩基配列から成るＤＮＡ： （ａ）配列番号：１で示されるアミノ酸配列と同一又は
実質的に同一のアミノ酸配列から成るポリペプチド、 （ｂ）配列番号：１で示されるアミノ酸配列において、
一部のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配
列から成り、（ａ）のポリペプチド、ヒトファット１蛋
白質又はヒトファット２蛋白質と実質的に同質の生物学
的活性を有するポリペプチド。 - 【請求項２】 以下の（ａ）又は（ｂ）のＤＮＡ： （ａ）配列番号：２で示される塩基配列において、配列
番号：１で示されるアミノ酸配列をコードするＤＮＡ、 (ｂ）（ａ）のＤＮＡとストリンジェントな条件下でハ
イブリダイズし、（ａ）のポリペプチド、ヒトファット
１蛋白質又はヒトファット２蛋白質と実質的に同質の生
物学的活性を有する蛋白質をコードするＤＮＡ。 - 【請求項３】 請求項１又は２記載のＤＮＡを含むヒト
ファット３遺伝子。 - 【請求項４】 以下の（ａ）又は（ｂ）のポリペプチ
ド： （ａ）配列番号：１で示されるアミノ酸配列と同一又は
実質的に同一のアミノ酸配列から成るポリペプチド、 (ｂ）配列番号：１で示されるアミノ酸配列において、
一部のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配
列から成り、（ａ）のポリペプチド、ヒトファット１蛋
白質又はヒトファット２蛋白質と実質的に同質の生物学
的活性を有するポリペプチド。 - 【請求項５】 請求項４に記載のポリペプチドを含むヒ
トファット３蛋白質。 - 【請求項６】 以下の（ａ）又は（ｂ）のポリペプチド
をコードする塩基配列から成るラットファット３遺伝
子： （ａ）配列番号：３で示されるアミノ酸配列と同一又は
実質的に同一のアミノ酸配列から成るポリペプチド、 （ｂ）配列番号：３で示されるアミノ酸配列において、
一部のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配
列から成り、（ａ）のポリペプチドと実質的に同質の生
物学的活性を有するポリペプチド。 - 【請求項７】 以下の（ａ）又は（ｂ）のＤＮＡから成
るラットファット３遺伝子： （ａ）配列番号：４で示される塩基配列において、配列
番号：３で示されるアミノ酸配列をコードするＤＮＡ、 (ｂ）（ａ）のＤＮＡとストリンジェントな条件下でハ
イブリダイズし、（ａ）のポリペプチドと実質的に同質
の生物学的活性を有する蛋白質をコードするＤＮＡ。 - 【請求項８】 以下の（ａ）又は（ｂ）のポリペプチド
から成るラットファット３蛋白質： （ａ）配列番号：１で示されるアミノ酸配列と同一又は
実質的に同一のアミノ酸配列から成るポリペプチド、 (ｂ）配列番号：１で示されるアミノ酸配列において、
一部のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配
列から成り、（ａ）のポリペプチドと実質的に同質の生
物学的活性を有するポリペプチド。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2000082725A JP2001258573A (ja) | 2000-03-23 | 2000-03-23 | 新規ファット３遺伝子及びそれにコードされる蛋白質 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2000082725A JP2001258573A (ja) | 2000-03-23 | 2000-03-23 | 新規ファット３遺伝子及びそれにコードされる蛋白質 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2001258573A true JP2001258573A (ja) | 2001-09-25 |
Family
ID=18599488
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2000082725A Pending JP2001258573A (ja) | 2000-03-23 | 2000-03-23 | 新規ファット３遺伝子及びそれにコードされる蛋白質 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2001258573A (ja) |
-
2000
- 2000-03-23 JP JP2000082725A patent/JP2001258573A/ja active Pending
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