JPH10248559A - 溶液中のザルコシンオキシダーゼの安定化方法 - Google Patents
溶液中のザルコシンオキシダーゼの安定化方法Info
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- JPH10248559A JPH10248559A JP6300797A JP6300797A JPH10248559A JP H10248559 A JPH10248559 A JP H10248559A JP 6300797 A JP6300797 A JP 6300797A JP 6300797 A JP6300797 A JP 6300797A JP H10248559 A JPH10248559 A JP H10248559A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 ザルコシンオキシダーゼを溶液状態で長期間
（少なくとも上限１０℃以下にて保存した場合、６ケ月
以上）安定化する方法を提供する。 【解決手段】 ザルコシンオキシダーゼを含むＧＯＯＤ
緩衝液中に、アルカリ金属イオン、アルカリ土類金属イ
オンおよびアンモニアイオンからなる群から選択された
陽イオンおよびハロゲンイオンを共存させることを特徴
とする溶液中のザルコシンオキシダーゼの安定化方法、
安定なザルコシンオキシダーゼ溶液、ならびに該溶液を
含むクレアチン測定液状試薬ならびにクレアチニン測定
液状試薬。
（少なくとも上限１０℃以下にて保存した場合、６ケ月
以上）安定化する方法を提供する。 【解決手段】 ザルコシンオキシダーゼを含むＧＯＯＤ
緩衝液中に、アルカリ金属イオン、アルカリ土類金属イ
オンおよびアンモニアイオンからなる群から選択された
陽イオンおよびハロゲンイオンを共存させることを特徴
とする溶液中のザルコシンオキシダーゼの安定化方法、
安定なザルコシンオキシダーゼ溶液、ならびに該溶液を
含むクレアチン測定液状試薬ならびにクレアチニン測定
液状試薬。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、溶液中のザルコシ
ンオキシダーゼの安定化方法および安定化されたザルコ
シンオキシダーゼ溶液ならびに該溶液を含むクレアチン
またはクレアチニン測定液状試薬に関する。
ンオキシダーゼの安定化方法および安定化されたザルコ
シンオキシダーゼ溶液ならびに該溶液を含むクレアチン
またはクレアチニン測定液状試薬に関する。
【０００２】
【従来の技術】血清、尿などの生体試料中のクレアチ
ン、クレアチニンの測定は、腎疾患の指標を与えるもの
として臨床的意義が高い。その測定方法としては、アル
カリ条件下、ピクリン酸とクレアチニンを反応させ、生
じた赤色呈色物を測定するヤッフェ（Jaffe)法が用いら
れていたが、特異性、正確性、精密性の点から、近年、
酵素比色法が用いられるようになってきている。
ン、クレアチニンの測定は、腎疾患の指標を与えるもの
として臨床的意義が高い。その測定方法としては、アル
カリ条件下、ピクリン酸とクレアチニンを反応させ、生
じた赤色呈色物を測定するヤッフェ（Jaffe)法が用いら
れていたが、特異性、正確性、精密性の点から、近年、
酵素比色法が用いられるようになってきている。
【０００３】酵素比色法としては、（１）ザルコシンオ
キシダーゼ−ペルオキシダーゼ法、（２）ザルコシンオ
キシダーゼ−ホルムアルデヒドデヒドロゲナーゼ法、
（３）クレアチニンデイミナーゼ法などが挙げられる
が、臨床検査の場では（１）ザルコシンオキシダーゼ−
ペルオキシダーゼ法 (酵素比色測定系) が、最もよく用
いられている方法である。また、最近、簡便性などの理
由から無調整液状試薬が、広く臨床検査に使用されるよ
うになってきている。
キシダーゼ−ペルオキシダーゼ法、（２）ザルコシンオ
キシダーゼ−ホルムアルデヒドデヒドロゲナーゼ法、
（３）クレアチニンデイミナーゼ法などが挙げられる
が、臨床検査の場では（１）ザルコシンオキシダーゼ−
ペルオキシダーゼ法 (酵素比色測定系) が、最もよく用
いられている方法である。また、最近、簡便性などの理
由から無調整液状試薬が、広く臨床検査に使用されるよ
うになってきている。
【０００４】このような現状において、試薬中に添加さ
れる酵素の安定性は、測定の正確さ、精密さに影響を与
えるものとして、重要視されてきている。酵素比色系に
使用されるザルコシンオキシダーゼ(EC.1.5.3.1)は、下
記反応を触媒する酵素であり、これまで、アースロバク
ター(Arthrobacter) sp 、バチルス(Bacillus) sp 、コ
リネバクテリウム(Corynebacterium) sp. などの微生物
から抽出されている。 反応： ザルコシン ＋ O2 ＋ H2O → グリシン ＋ ホルム
アルデヒド ＋ H2O2
れる酵素の安定性は、測定の正確さ、精密さに影響を与
えるものとして、重要視されてきている。酵素比色系に
使用されるザルコシンオキシダーゼ(EC.1.5.3.1)は、下
記反応を触媒する酵素であり、これまで、アースロバク
ター(Arthrobacter) sp 、バチルス(Bacillus) sp 、コ
リネバクテリウム(Corynebacterium) sp. などの微生物
から抽出されている。 反応： ザルコシン ＋ O2 ＋ H2O → グリシン ＋ ホルム
アルデヒド ＋ H2O2
【０００５】ザルコシンオキシダーゼの安定化方法とし
ては、ザルコシンオキシダーゼ含有溶液に糖類、アミノ
酸類およびキレート剤からなる群から選ばれた少なくと
も１種の安定化剤を添加する方法（特公昭57-48956号公
報) 、グルコン酸またはその塩をザルコシンオキシダー
ゼ含有溶液に添加する方法 (特開昭57-36985号公報)、
さらに水溶性多糖類に共有結合したクレアチニンアミジ
ノヒドロラーゼを試薬の１成分とする方法 (特開昭61-2
49389 号公報) も知られているが、溶液状態で長期間
(少なくとも上限１０℃以下にて保存した場合、６ケ月
以上）の安定性を確保するのに、十分なものとは言えな
いのが現状である。
ては、ザルコシンオキシダーゼ含有溶液に糖類、アミノ
酸類およびキレート剤からなる群から選ばれた少なくと
も１種の安定化剤を添加する方法（特公昭57-48956号公
報) 、グルコン酸またはその塩をザルコシンオキシダー
ゼ含有溶液に添加する方法 (特開昭57-36985号公報)、
さらに水溶性多糖類に共有結合したクレアチニンアミジ
ノヒドロラーゼを試薬の１成分とする方法 (特開昭61-2
49389 号公報) も知られているが、溶液状態で長期間
(少なくとも上限１０℃以下にて保存した場合、６ケ月
以上）の安定性を確保するのに、十分なものとは言えな
いのが現状である。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、クレ
アチンまたはクレアチニン測定の液状試薬として用いる
ザルコシンオキシダーゼの液状での長期安定化をはかる
ことにある。
アチンまたはクレアチニン測定の液状試薬として用いる
ザルコシンオキシダーゼの液状での長期安定化をはかる
ことにある。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明者らは上記現状に
鑑み、鋭意検討した結果、ＧＯＯＤ緩衝液中にアルカリ
金属イオン、アルカリ土類金属イオンまたはアンモニア
イオンおよびハロゲンイオンを共存させることによっ
て、ザルコシンオキシダーゼの溶液中の安定性が著しく
向上することを見いだし、本発明を完成するに至った。
鑑み、鋭意検討した結果、ＧＯＯＤ緩衝液中にアルカリ
金属イオン、アルカリ土類金属イオンまたはアンモニア
イオンおよびハロゲンイオンを共存させることによっ
て、ザルコシンオキシダーゼの溶液中の安定性が著しく
向上することを見いだし、本発明を完成するに至った。
【０００８】すなわち、本発明はザルコシンオキシダー
ゼを含むＧＯＯＤ緩衝液中に、アルカリ金属イオン、ア
ルカリ土類金属イオンおよびアンモニアイオンからなる
群から選択された陽イオンおよびハロゲンイオンを共存
させることを特徴とする溶液中のザルコシンオキシダー
ゼの安定化方法である。
ゼを含むＧＯＯＤ緩衝液中に、アルカリ金属イオン、ア
ルカリ土類金属イオンおよびアンモニアイオンからなる
群から選択された陽イオンおよびハロゲンイオンを共存
させることを特徴とする溶液中のザルコシンオキシダー
ゼの安定化方法である。
【０００９】また、本発明はザルコシンオキシダーゼ、
ＧＯＯＤ緩衝液、アルカリ金属イオン、アルカリ土類金
属イオンおよびアンモニアイオンからなる群から選択さ
れた陽イオンおよびハロゲンイオンを含むザルコシンオ
キシダーゼ溶液である。
ＧＯＯＤ緩衝液、アルカリ金属イオン、アルカリ土類金
属イオンおよびアンモニアイオンからなる群から選択さ
れた陽イオンおよびハロゲンイオンを含むザルコシンオ
キシダーゼ溶液である。
【００１０】本発明は上記ザルコシンオキシダーゼ溶液
を含むクレアチン測定液状試薬である。
を含むクレアチン測定液状試薬である。
【００１１】本発明は上記ザルコシンオキシダーゼ溶液
を含むクレアチニン測定液状試薬である。
を含むクレアチニン測定液状試薬である。
【００１２】
【発明の実施態様】本発明の一実施態様としては、ザル
コシンオキシダーゼを含むＧＯＯＤ緩衝液中に、アルカ
リ金属、アルカリ土類金属およびアンモニアからなる群
から選択された陽イオンのハロゲン化物を添加する溶液
中のザルコシンオキシダーゼの安定化方法がある。
コシンオキシダーゼを含むＧＯＯＤ緩衝液中に、アルカ
リ金属、アルカリ土類金属およびアンモニアからなる群
から選択された陽イオンのハロゲン化物を添加する溶液
中のザルコシンオキシダーゼの安定化方法がある。
【００１３】従来から、用いられている緩衝液にはトリ
ス緩衝液、リン酸緩衝液、ホウ酸緩衝液、ＧＯＯＤ緩衝
液などが挙げられるが、トリス緩衝液、リン酸緩衝液、
ホウ酸緩衝液は濃度、温度によってｐＨが変動しやすい
ため、近年、体外診断薬の緩衝液としては、ＧＯＯＤ緩
衝液が多く用いられるようになってきている。
ス緩衝液、リン酸緩衝液、ホウ酸緩衝液、ＧＯＯＤ緩衝
液などが挙げられるが、トリス緩衝液、リン酸緩衝液、
ホウ酸緩衝液は濃度、温度によってｐＨが変動しやすい
ため、近年、体外診断薬の緩衝液としては、ＧＯＯＤ緩
衝液が多く用いられるようになってきている。
【００１４】ＧＯＯＤ緩衝液とは、両性イオン緩衝液で
あって、その多くは緩衝剤として両性電解質のアミノ
酸、特に置換タウリン類あるいはＮ−置換グリシン類を
用いてなるが、中には、脂肪族アミンや両性イオン緩衝
液でないものも一部含まれている。これらのＧＯＯＤ緩
衝剤としては、ＭＥＳ（ｐＫａ６．１５）、Ｂｉｓ−ｔ
ｒｉｓ（ｐＫａ６．４６）、ＡＤＡ（ｐＫａ６．８
０）、ＰＩＰＥＳ（ｐＫａ６．８０）、ＡＣＥＳ（ｐＫ
ａ６．９０）、コラミンクロリド（ｐＫａ７．１０）、
ＢＥＳ（ｐＫａ７．１５）、ＭＯＰＳ（ｐＫａ７．２
０）、ＴＥＳ（ｐＫａ７．５０）、ＨＥＰＥＳ（ｐＫａ
７．５５）、ＨＥＰＰＳ（ｐＫａ８．００）、Ｔｒｉｃ
ｉｎｅ（ｐＫａ８．１５）、グリシンアミド（ｐＫａ
８．２０）、Ｂｉｃｉｎｅ（ｐＫａ８．３５）、ＴＡＰ
Ｓ（ｐＫａ８．４０）、ＣＨＥＳ（ｐＫａ９．５０）お
よびＣＡＰＳ（ｐＫａ１０．４０）などが例示される。
特にＰＩＰＥＳまたはＭＯＰＳが好ましい。
あって、その多くは緩衝剤として両性電解質のアミノ
酸、特に置換タウリン類あるいはＮ−置換グリシン類を
用いてなるが、中には、脂肪族アミンや両性イオン緩衝
液でないものも一部含まれている。これらのＧＯＯＤ緩
衝剤としては、ＭＥＳ（ｐＫａ６．１５）、Ｂｉｓ−ｔ
ｒｉｓ（ｐＫａ６．４６）、ＡＤＡ（ｐＫａ６．８
０）、ＰＩＰＥＳ（ｐＫａ６．８０）、ＡＣＥＳ（ｐＫ
ａ６．９０）、コラミンクロリド（ｐＫａ７．１０）、
ＢＥＳ（ｐＫａ７．１５）、ＭＯＰＳ（ｐＫａ７．２
０）、ＴＥＳ（ｐＫａ７．５０）、ＨＥＰＥＳ（ｐＫａ
７．５５）、ＨＥＰＰＳ（ｐＫａ８．００）、Ｔｒｉｃ
ｉｎｅ（ｐＫａ８．１５）、グリシンアミド（ｐＫａ
８．２０）、Ｂｉｃｉｎｅ（ｐＫａ８．３５）、ＴＡＰ
Ｓ（ｐＫａ８．４０）、ＣＨＥＳ（ｐＫａ９．５０）お
よびＣＡＰＳ（ｐＫａ１０．４０）などが例示される。
特にＰＩＰＥＳまたはＭＯＰＳが好ましい。
【００１５】ＧＯＯＤ緩衝液そのもの中には、金属イオ
ンあるいはハロゲンイオン、硝酸イオン等を含有するも
のではないが、ＧＯＯＤ緩衝剤を用いて所望のｐＨ緩衝
液を得る場合には、通常、水酸化ナトリウム、水酸化カ
リウムなどのアルカリ溶液を用いる。
ンあるいはハロゲンイオン、硝酸イオン等を含有するも
のではないが、ＧＯＯＤ緩衝剤を用いて所望のｐＨ緩衝
液を得る場合には、通常、水酸化ナトリウム、水酸化カ
リウムなどのアルカリ溶液を用いる。
【００１６】本発明においては、ＧＯＯＤ緩衝液中にア
ルカリ金属またはアルカリ土類金属のハロゲン化物また
はアンモニアのハロゲン化物が存在することが必須であ
り、他のイオン、例えば硝酸イオン、硫酸イオン、有機
酸では同様の効果を得ることは困難である。
ルカリ金属またはアルカリ土類金属のハロゲン化物また
はアンモニアのハロゲン化物が存在することが必須であ
り、他のイオン、例えば硝酸イオン、硫酸イオン、有機
酸では同様の効果を得ることは困難である。
【００１７】本発明に用いられるザルコシンオキシダー
ゼとは、ザルコシンおよび水の存在下に作用して、グリ
シン、ホルムアルデヒドおよび過酸化水素を生成する酵
素である。この酵素は、例えばアースロバクター(Arthr
obacter) sp 、バチルス(Bacillus) sp 、シュードモナ
ス(Pseudomonas) sp. 、コリネバクテリウム(Cortnebac
terium)sp.などの微生物から採取されるもの、または、
これらの遺伝子を大腸菌等の他の微生物に組み込ませた
遺伝子組換え法により、製造されたものなどがあり、ま
た、遺伝子的に性質を改変したものも包含する。
ゼとは、ザルコシンおよび水の存在下に作用して、グリ
シン、ホルムアルデヒドおよび過酸化水素を生成する酵
素である。この酵素は、例えばアースロバクター(Arthr
obacter) sp 、バチルス(Bacillus) sp 、シュードモナ
ス(Pseudomonas) sp. 、コリネバクテリウム(Cortnebac
terium)sp.などの微生物から採取されるもの、または、
これらの遺伝子を大腸菌等の他の微生物に組み込ませた
遺伝子組換え法により、製造されたものなどがあり、ま
た、遺伝子的に性質を改変したものも包含する。
【００１８】ザルコシンオキシダーゼを含むＧＯＯＤ緩
衝液とは、上記酵素を溶解させたＧＯＯＤ緩衝液であ
り、該緩衝液のｐＨは、約６．９〜８．５であることが
好ましい。
衝液とは、上記酵素を溶解させたＧＯＯＤ緩衝液であ
り、該緩衝液のｐＨは、約６．９〜８．５であることが
好ましい。
【００１９】ザルコシンオキシダーゼを含むＧＯＯＤ緩
衝液中のザルコシンオキシダーゼの濃度は、酵素の起源
によっても異なるが、通常、約３〜５０Ｕ／ｍｌで好適
に用いられる。
衝液中のザルコシンオキシダーゼの濃度は、酵素の起源
によっても異なるが、通常、約３〜５０Ｕ／ｍｌで好適
に用いられる。
【００２０】本発明に用いるアルカリ金属イオンとして
は、リチウムイオン、ナトリウムイオン、カリウムイオ
ンが挙げられる。また、アルカリ土類金属イオンとして
は、マグネシウムイオン、カルシウムイオンが挙げられ
る。さらに、ハロゲンイオンとしては、フッ素イオン、
塩素イオン、臭素イオン、ヨウ素イオンが挙げられる。
は、リチウムイオン、ナトリウムイオン、カリウムイオ
ンが挙げられる。また、アルカリ土類金属イオンとして
は、マグネシウムイオン、カルシウムイオンが挙げられ
る。さらに、ハロゲンイオンとしては、フッ素イオン、
塩素イオン、臭素イオン、ヨウ素イオンが挙げられる。
【００２１】本発明では、ザルコシンオキシダーゼを含
むＧＯＯＤ緩衝液中に、アルカリ金属イオンまたはアル
カリ土類金属イオンおよびハロゲンイオンを共存させる
ことを特徴であるが、具体的には、上記イオンからなる
塩、例えば塩化リチウム、塩化ナトリウム、塩化カリウ
ム、塩化マグネシウム、塩化カルシウム、フッ化リチウ
ム、フッ化ナトリウム、フッ化カリウム、フッ化マグネ
シウム、フッ化カルシウム、臭化リチウム、臭化ナトリ
ウム、臭化カリウム、臭化マグネシウム、臭化カルシウ
ム、ヨウ化リチウム、ヨウ化ナトリウム、ヨウ化カリウ
ム、ヨウ化マグネシウム、ヨウ化カルシウムなどを添加
する。特に塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化リチウ
ム、臭化カリウム、塩化マグネシウムまたは塩化カルシ
ウムが好ましい。塩化アンモニウムも使用できる。
むＧＯＯＤ緩衝液中に、アルカリ金属イオンまたはアル
カリ土類金属イオンおよびハロゲンイオンを共存させる
ことを特徴であるが、具体的には、上記イオンからなる
塩、例えば塩化リチウム、塩化ナトリウム、塩化カリウ
ム、塩化マグネシウム、塩化カルシウム、フッ化リチウ
ム、フッ化ナトリウム、フッ化カリウム、フッ化マグネ
シウム、フッ化カルシウム、臭化リチウム、臭化ナトリ
ウム、臭化カリウム、臭化マグネシウム、臭化カルシウ
ム、ヨウ化リチウム、ヨウ化ナトリウム、ヨウ化カリウ
ム、ヨウ化マグネシウム、ヨウ化カルシウムなどを添加
する。特に塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化リチウ
ム、臭化カリウム、塩化マグネシウムまたは塩化カルシ
ウムが好ましい。塩化アンモニウムも使用できる。
【００２２】ザルコシンオキシダーゼを含むＧＯＯＤ緩
衝液中の各イオンの濃度は、特に限定されるものではな
いが、好適には０．５〜１００ｍＭ、特に好ましくは
０．５〜５．０ｍＭで用いられる。
衝液中の各イオンの濃度は、特に限定されるものではな
いが、好適には０．５〜１００ｍＭ、特に好ましくは
０．５〜５．０ｍＭで用いられる。
【００２３】本発明のザルコシンオキシダーゼ溶液に
は、さらに防腐剤、界面活性剤などをザルコシンオキシ
ダーゼの反応に特に悪い影響を及ぼさない範囲で添加し
てもよい。防腐剤としてはアジ化ナトリウム、キレート
剤、抗生物質、防菌剤、防黴剤などが挙げられる。界面
活性剤としては非イオン界面活性剤、陽イオン界面活性
剤、陰イオン界面活性剤、両性イオン界面活性剤などが
挙げられる。
は、さらに防腐剤、界面活性剤などをザルコシンオキシ
ダーゼの反応に特に悪い影響を及ぼさない範囲で添加し
てもよい。防腐剤としてはアジ化ナトリウム、キレート
剤、抗生物質、防菌剤、防黴剤などが挙げられる。界面
活性剤としては非イオン界面活性剤、陽イオン界面活性
剤、陰イオン界面活性剤、両性イオン界面活性剤などが
挙げられる。
【００２４】また、該緩衝液中にはクレアチンまたはク
レアチニン測定に必要な他の試薬、例えばクレアチンア
ミジノヒドロラーゼ、クレアチニンアミドヒドロラー
ゼ、または過酸化水素測定試薬などが含まれていてもよ
い。
レアチニン測定に必要な他の試薬、例えばクレアチンア
ミジノヒドロラーゼ、クレアチニンアミドヒドロラー
ゼ、または過酸化水素測定試薬などが含まれていてもよ
い。
【００２５】過酸化水素測定試薬としては、一般的に４
−アミノアンチピリンなどのカップラーとフェノールま
たはアニリンおよびそれらの誘導体などの色原体をペル
オキシダーゼ存在下に反応させ、生成する色素の増加を
吸光度測定する方法あるいはメタノールとカラターゼを
作用させ、生成するホルムアルデヒドを化学的または酵
素的に比色定量する方法などが用いられる。
−アミノアンチピリンなどのカップラーとフェノールま
たはアニリンおよびそれらの誘導体などの色原体をペル
オキシダーゼ存在下に反応させ、生成する色素の増加を
吸光度測定する方法あるいはメタノールとカラターゼを
作用させ、生成するホルムアルデヒドを化学的または酵
素的に比色定量する方法などが用いられる。
【００２６】カップラーとしては、４−アミノアンチピ
リン、３−メチル−２−ベンドチアゾリンヒドラシゾン
等が使用される。また、色原体としてはＮ−エチル−Ｎ
−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−ｍ−トル
イジン（ＴＯＯＳ）などのアニリン誘導体、またはフェ
ノール誘導体が例示される。
リン、３−メチル−２−ベンドチアゾリンヒドラシゾン
等が使用される。また、色原体としてはＮ−エチル−Ｎ
−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−ｍ−トル
イジン（ＴＯＯＳ）などのアニリン誘導体、またはフェ
ノール誘導体が例示される。
【００２７】本発明の上記安定剤を含むザルコシンオキ
シダーゼ溶液は、従来の安定化剤である糖類、アミノ酸
類、キレート剤、グルコン酸またはその塩を添加する場
合に比べて、溶液状態での活性保持が良好である。さら
に、水溶性多糖類に共有結合したクレアチンアミジノヒ
ドロラーゼを共存させることなく、溶液状態の安定性が
良好である。
シダーゼ溶液は、従来の安定化剤である糖類、アミノ酸
類、キレート剤、グルコン酸またはその塩を添加する場
合に比べて、溶液状態での活性保持が良好である。さら
に、水溶性多糖類に共有結合したクレアチンアミジノヒ
ドロラーゼを共存させることなく、溶液状態の安定性が
良好である。
【００２８】
【実施例】以下に、本発明を実施例を用いて説明する。 ザルコシンオキシダーゼ活性測定法： 測定試薬Ａ：０．２Ｍ ザルコシン溶液： Ｂ：０．１％４−アミノアンチピリン水溶液、 Ｃ：０．１％フェノール水溶液、 Ｄ：２５Ｕ／ｍｌ ペルオキシダーゼ水溶液 Ａ液１０ｍｌに、Ｂ液２ｍｌ、Ｃ液およびＤ液各４ｍｌ
を添加し、活性測定試薬とする。上記試薬２ｍｌに対
し、酵素溶解液０．１ｍｌを添加後、３７℃でインキュ
ベートし、添加３分後から１分間当たりの波長５００ｎ
ｍにおける吸光度の増加速度から活性を算出する。 U/ml= ΔOD(ODtest-ODblank)×3.05×希釈倍率／(13.5
×0.5 ×1 ×10×0.05)
を添加し、活性測定試薬とする。上記試薬２ｍｌに対
し、酵素溶解液０．１ｍｌを添加後、３７℃でインキュ
ベートし、添加３分後から１分間当たりの波長５００ｎ
ｍにおける吸光度の増加速度から活性を算出する。 U/ml= ΔOD(ODtest-ODblank)×3.05×希釈倍率／(13.5
×0.5 ×1 ×10×0.05)
【００２９】実施例１ アースロバクター属菌由来のザルコシンオキシダーゼ１
０Ｕ／ｍｌを５０ｍＭＰＩＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．５）
に添加し、さらに、表１に示す添加剤を添加し、４０℃
にて１週間保存し、活性残存率（溶解直後の活性値に対
する活性値の割合）を調べた。緩衝液中での活性残存率
（安定性）を表１に示す。
０Ｕ／ｍｌを５０ｍＭＰＩＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．５）
に添加し、さらに、表１に示す添加剤を添加し、４０℃
にて１週間保存し、活性残存率（溶解直後の活性値に対
する活性値の割合）を調べた。緩衝液中での活性残存率
（安定性）を表１に示す。
【００３０】
【表１】
【００３１】実施例２ アースロバクター属菌由来のザルコシンオキシダーゼ１
０Ｕ／ｍｌを５０ｍＭＭＯＰＳ緩衝液（ｐＨ７．５）に
添加し、さらに、表２に示す添加剤を添加し、４０℃に
て１週間保存し、活性残存率（溶解直後の活性値に対す
る活性値の割合）を調べた。緩衝液中での活性残存率
（安定性）を表２に示す。
０Ｕ／ｍｌを５０ｍＭＭＯＰＳ緩衝液（ｐＨ７．５）に
添加し、さらに、表２に示す添加剤を添加し、４０℃に
て１週間保存し、活性残存率（溶解直後の活性値に対す
る活性値の割合）を調べた。緩衝液中での活性残存率
（安定性）を表２に示す。
【００３２】
【表２】
【００３３】実施例３ アースロバクター属菌由来のザルコシンオキシダーゼ１
０Ｕ／ｍｌを５０ｍＭＰＩＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．５）
に添加し、さらに、表３に示す種々の量の添加剤を添加
し、４０℃にて１週間保存し、活性残存率（溶解直後の
活性値に対する活性値の割合）を調べた。緩衝液中での
活性残存率（安定性）を表３に示す。
０Ｕ／ｍｌを５０ｍＭＰＩＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．５）
に添加し、さらに、表３に示す種々の量の添加剤を添加
し、４０℃にて１週間保存し、活性残存率（溶解直後の
活性値に対する活性値の割合）を調べた。緩衝液中での
活性残存率（安定性）を表３に示す。
【００３４】
【表３】
【００３５】実施例４ 実施例１における安定化剤を含むザルコシンオキシダー
ゼ緩衝液中に、さらにクレアチニンミドヒドロラーゼ、
クレアチンアミジノヒドロラーゼ、ザルコシンオキシダ
ーゼ、ペルオキシダーゼ、４−アミノアンチピリンおよ
びＮ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロ
ピル）−ｍ−トルイジン（ＴＯＯＳ）を添加して、３５
℃にて１週間保存した後、ザルコシンオキシダーゼの活
性残存率（溶解直後の活性値に対する活性値の割合）を
調べた。
ゼ緩衝液中に、さらにクレアチニンミドヒドロラーゼ、
クレアチンアミジノヒドロラーゼ、ザルコシンオキシダ
ーゼ、ペルオキシダーゼ、４−アミノアンチピリンおよ
びＮ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロ
ピル）−ｍ−トルイジン（ＴＯＯＳ）を添加して、３５
℃にて１週間保存した後、ザルコシンオキシダーゼの活
性残存率（溶解直後の活性値に対する活性値の割合）を
調べた。
【００３６】
【表４】
【００３７】
【発明の効果】本発明では、上記表１〜４から明らかな
ように、ザルコシンオキシダーゼを含むＧＯＯＤ緩衝液
中に、アルカリ金属イオン、アルカリ土類金属イオンお
よびアンモニアイオンからなる群から選択された陽イオ
ンおよびハロゲンイオンを共存させることにより、４０
℃にて１週間保存後のザルコシンオキシダーゼの残存活
性が約７０％以上であるザルコシンオキシダーゼ溶液が
得られる。また、クレアチン測定液状試薬としても、３
５℃にて１週間保存後の残存活性が、約８０％以上であ
る。したがって、本発明により、溶液状態で長期間（少
なくとも上限１０℃以下にて保存した場合、６ケ月以
上）の安定なザルコシンオキシダーゼ溶液ならびに該溶
液を含むクレアチン測定液状試薬ならびにクレアチニン
測定液状試薬が得られる。
ように、ザルコシンオキシダーゼを含むＧＯＯＤ緩衝液
中に、アルカリ金属イオン、アルカリ土類金属イオンお
よびアンモニアイオンからなる群から選択された陽イオ
ンおよびハロゲンイオンを共存させることにより、４０
℃にて１週間保存後のザルコシンオキシダーゼの残存活
性が約７０％以上であるザルコシンオキシダーゼ溶液が
得られる。また、クレアチン測定液状試薬としても、３
５℃にて１週間保存後の残存活性が、約８０％以上であ
る。したがって、本発明により、溶液状態で長期間（少
なくとも上限１０℃以下にて保存した場合、６ケ月以
上）の安定なザルコシンオキシダーゼ溶液ならびに該溶
液を含むクレアチン測定液状試薬ならびにクレアチニン
測定液状試薬が得られる。
Claims (12)
- 【請求項１】 ザルコシンオキシダーゼを含むＧＯＯＤ
緩衝液中に、アルカリ金属イオン、アルカリ土類金属イ
オンおよびアンモニアイオンからなる群から選択された
陽イオンおよびハロゲンイオンを共存させることを特徴
とする溶液中のザルコシンオキシダーゼの安定化方法。 - 【請求項２】 ザルコシンオキシダーゼを含むＧＯＯＤ
緩衝液中に、アルカリ金属、アルカリ土類金属およびア
ンモニアからなる群から選択された陽イオンのハロゲン
化物を添加することを特徴とする溶液中のザルコシンオ
キシダーゼの安定化方法。 - 【請求項３】 ザルコシンオキシダーゼを含むＧＯＯＤ
緩衝液中に、アルカリ金属、アルカリ土類金属およびア
ンモニアからなる群から選択された陽イオンのハロゲン
化物を０．５〜１００ｍＭ添加することを特徴とする溶
液中のザルコシンオキシダーゼの安定化方法。 - 【請求項４】 ＧＯＯＤ緩衝液の緩衝剤が、ＭＥＳ（ｐ
Ｋａ６．１５）、Ｂｉｓ−ｔｒｉｓ（ｐＫａ６．４
６）、ＡＤＡ（ｐＫａ６．８０）、ＰＩＰＥＳ（ｐＫａ
６．８０）、ＡＣＥＳ（ｐＫａ６．９０）、コラミンク
ロリド（ｐＫａ７．１０）、ＢＥＳ（ｐＫａ７．１
５）、ＭＯＰＳ（ｐＫａ７．２０）、ＴＥＳ（ｐＫａ
７．５０）、ＨＥＰＥＳ（ｐＫａ７．５５）、ＨＥＰＰ
Ｓ（ｐＫａ８．００）、Ｔｒｉｃｉｎｅ（ｐＫａ８．１
５）、グリシンアミド（ｐＫａ８．２０）、Ｂｉｃｉｎ
ｅ（ｐＫａ８．３５）、ＴＡＰＳ（ｐＫａ８．４０）、
ＣＨＥＳ（ｐＫａ９．５０）およびＣＡＰＳ（ｐＫａ１
０．４０）からなる群から選択された緩衝剤である請求
項１〜３のいずれか１項記載の溶液中のザルコシンオキ
シダーゼの安定化方法。 - 【請求項５】 ３〜５０Ｕ／ｍｌのザルコシンオキシダ
ーゼを含むＰＩＰＥＳ緩衝液またはＭＯＰＳ緩衝液中
に、０．５〜５．０ｍＭの塩化ナトリウム、塩化カリウ
ム、塩化リチウム、塩化マグネシウム、塩化アンモニウ
ム、塩化カルシウム、臭化カリウム、ヨウ化カリウムま
たはフッ化カリウムを共存させることを特徴とする溶液
中のザルコシンオキシダーゼの安定化方法。 - 【請求項６】 ザルコシンオキシダーゼ、ＧＯＯＤ緩衝
液、アルカリ金属イオン、アルカリ土類金属イオンおよ
びアンモニアイオンからなる群から選択された陽イオン
およびハロゲンイオンを含むザルコシンオキシダーゼ溶
液。 - 【請求項７】 ザルコシンオキシダーゼ、ＧＯＯＤ緩衝
液、アルカリ金属、アルカリ土類金属およびアンモニア
からなる群から選択された陽イオンのハロゲン化物を含
むザルコシンオキシダーゼ溶液。 - 【請求項８】 ザルコシンオキシダーゼ、ＧＯＯＤ緩衝
液、アルカリ金属、アルカリ土類金属およびアンモニア
からなる群から選択された陽イオンのハロゲン化物を
０．５〜１００ｍＭ含むザルコシンオキシダーゼ溶液。 - 【請求項９】 ＧＯＯＤ緩衝液の緩衝剤が、ＭＥＳ（ｐ
Ｋａ６．１５）、Ｂｉｓ−ｔｒｉｓ（ｐＫａ６．４
６）、ＡＤＡ（ｐＫａ６．８０）、ＰＩＰＥＳ（ｐＫａ
６．８０）、ＡＣＥＳ（ｐＫａ６．９０）、コラミンク
ロリド（ｐＫａ７．１０）、ＢＥＳ（ｐＫａ７．１
５）、ＭＯＰＳ（ｐＫａ７．２０）、ＴＥＳ（ｐＫａ
７．５０）、ＨＥＰＥＳ（ｐＫａ７．５５）、ＨＥＰＰ
Ｓ（ｐＫａ８．００）、Ｔｒｉｃｉｎｅ（ｐＫａ８．１
５）、グリシンアミド（ｐＫａ８．２０）、Ｂｉｃｉｎ
ｅ（ｐＫａ８．３５）、ＴＡＰＳ（ｐＫａ８．４０）、
ＣＨＥＳ（ｐＫａ９．５０）およびＣＡＰＳ（ｐＫａ１
０．４０）からなる群から選択された緩衝剤である請求
項６〜８のいずれか１項記載のザルコシンオキシダーゼ
溶液。 - 【請求項１０】 ３〜５０Ｕ／ｍｌザルコシンオキシダ
ーゼを含むＰＩＰＥＳ緩衝液またはＭＯＰＳ緩衝液およ
び０．５〜５．０ｍＭの塩化ナトリウム、塩化カリウ
ム、塩化リチウム、塩化マグネシウム、塩化アンモニウ
ム、塩化カルシウム、臭化カリウム、ヨウ化カリウムま
たはフッ化カリウムを含むザルコシンオキシダーゼ溶
液。 - 【請求項１１】 請求項６〜１０のいずれか１項に記載
されるザルコシンオキシダーゼ溶液を含むクレアチン測
定液状試薬。 - 【請求項１２】 請求項６〜１０のいずれか１項に記載
されるザルコシンオキシダーゼ溶液を含むクレアチニン
測定液状試薬。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9063007A JP3070726B2 (ja) | 1997-03-17 | 1997-03-17 | 溶液中のザルコシンオキシダーゼの安定化方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9063007A JP3070726B2 (ja) | 1997-03-17 | 1997-03-17 | 溶液中のザルコシンオキシダーゼの安定化方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH10248559A true JPH10248559A (ja) | 1998-09-22 |
| JP3070726B2 JP3070726B2 (ja) | 2000-07-31 |
Family
ID=13216843
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9063007A Expired - Lifetime JP3070726B2 (ja) | 1997-03-17 | 1997-03-17 | 溶液中のザルコシンオキシダーゼの安定化方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3070726B2 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2007289097A (ja) * | 2006-04-26 | 2007-11-08 | Toyobo Co Ltd | 総分岐鎖アミノ酸／チロシンモル比測定用液状試薬 |
| JP2020529212A (ja) * | 2017-08-04 | 2020-10-08 | アイピー２アイピーオー イノベーションズ リミテッドＩｐ２Ｉｐｏ Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎｓ Ｌｉｍｉｔｅｄ | 酵素組成物を用いたクレアチンレベルの検出 |
-
1997
- 1997-03-17 JP JP9063007A patent/JP3070726B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2007289097A (ja) * | 2006-04-26 | 2007-11-08 | Toyobo Co Ltd | 総分岐鎖アミノ酸／チロシンモル比測定用液状試薬 |
| JP2020529212A (ja) * | 2017-08-04 | 2020-10-08 | アイピー２アイピーオー イノベーションズ リミテッドＩｐ２Ｉｐｏ Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎｓ Ｌｉｍｉｔｅｄ | 酵素組成物を用いたクレアチンレベルの検出 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3070726B2 (ja) | 2000-07-31 |
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