JPH10219273A - 不飽和結合を３個有し、第１の不飽和結合が６の位置 にある高度不飽和脂肪酸の精製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 高含量、高収率で、異性体が生成せず、苦み
がなく、着色がない、不飽和結合を３個有し、第１の不
飽和結合が６の位置にある高度不飽和脂肪酸を得る製造
法を提供する。 【解決手段】 高度不飽和脂肪酸含有油脂を加水分解用
リパーゼで加水分解して脂肪酸とグリセリンとに分解し
た後、高度不飽和脂肪酸以外の脂肪酸を選択的にエステ
ル合成用リパーゼにより、炭素数６〜１８のアルコール
とエステル化させて系外へ取り出す。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、高度不飽和脂肪酸
含有油脂から、不飽和結合を３個有し、第１の不飽和結
合が６の位置にある高度不飽和脂肪酸を精製する方法に
関する。

【０００２】

【従来の技術】近年、高度不飽和脂肪酸の有する生理活
性が、注目されている。特に、不飽和結合を３個有し、
第１の不飽和結合が６の位置にある高度不飽和脂肪酸
（以下、ｎ−６系高度不飽和脂肪酸と略記する）、例え
ばγ−リノレン酸（ｃｉｓ，ｃｉｓ，ｃｉｓ−６，９，
１２−ｏｃｔａｄｅｃａｔｒｉｅｎｏｉｃ ａｃｉ
ｄ）、ジホモγ−リノレン酸（ｃｉｓ，ｃｉｓ，ｃｉｓ
−８，１１，１４−ｅｉｃｏｓａｔｒｉｅｎｏｉｃ ａ
ｃｉｄ）は、アトピー性皮膚炎、慢性関節炎リュウマ
チ、高血圧などの成人病に対する改善作用や制ガン作
用、免疫賦活作用などの多くの生理活性を有しているこ
とが知られている。

【０００３】そして、かかるｎ−６系高度不飽和脂肪酸
を油脂から精製する方法としては、例えば、ゲオトリカ
ム（Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ）属糸状菌あるいはリゾムコ
ール（Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ）属糸状菌のリパーゼを用
い、ｎ−ヘキサン中でｎ−６系高度不飽和脂肪酸以外の
脂肪酸をブチルアルコールとエステル化させてから系外
へ取り出してｎ−６系高度不飽和脂肪酸を精製する方法
（Ｊ．Ａｍ．Ｏｉｌ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｖｏｌ７１，
５６３−５６７，１９９４；Ｖｏｌ７２，４１７−４２
０，１９９５）、油脂を加水分解しγ−リノレン酸以外
の脂肪酸を低級アルカノールに溶解した尿素と混合し、
得られた複合体を分離することでγ−リノレン酸を豊富
化する方法（特開昭６１−９５０９５号公報）や逆相ク
ロマトグラフィーでγ−リノレン酸高濃度画分を分取し
て濃縮する方法（特開昭６１−１９２７９８号公報）や
超臨界液体を移動相とするクロマトグラフィーにより分
画して濃縮精製する方法（特開昭６３−１１２５３６号
公報）が知られている。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】しかしながら、Ｊ．Ａ
ｍ．Ｏｉｌ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．開示技術では、多量の
ｎ−ヘキサンを使用しなければならず、生産の際の反応
規模が巨大となり、また爆発の危険性が問題となり、工
業化は不可能であった。特開昭６１−９５０９５号公報
開示技術では、油脂を、アルカリ／エタノールでケン化
しているため、γ−リノレン酸は異性化しやすく、着色
物質の除去が困難であり、また尿素付加法では純度の高
いものが得られず、収率が悪く、苦みをもつ傾向があっ
た。特開昭６１−１９２７９８号公報開示技術でも、ア
ルカリ／エタノールでケン化しているため、異性化しや
すく、着色物質の除去が困難であり、またクロマトグラ
フィーによる精製では、処理量が少ないという欠点があ
った。特開昭６３−１１２５３６号公報開示技術では高
圧条件での運転を必要とし、設備投資に費用がかかると
いう欠点があった。

【０００５】また、高度不飽和脂肪酸含有油脂を上記の
如くアルカリ／エタノールでケン化したり、あるいは酸
で加水分解を行うと、高度不飽和脂肪酸のシス構造がト
ランス構造（トランス構造とは、例えば、上記のγ−リ
ノレン酸では、３箇所が、シス構造となっているが、そ
のうち少なくとも１箇所がトランス構造となっているも
のである）の異性体になる傾向がある。かかるトランス
構造をもつ高度不飽和脂肪酸は自然界には存在しないた
め、長期に摂取した場合の十分な安全性が確認されてお
らず、トランス構造を含まない高度不飽和脂肪酸が望ま
れるところである。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明者は、かかる課題
を解決するためにｎ−６系高度不飽和脂肪酸の精製法に
ついて鋭意研究した結果、驚くべきことに高度不飽和脂
肪酸含有油脂を加水分解用リパーゼで加水分解して脂肪
酸とグリセリンとに分解した後、副生する高度不飽和脂
肪酸以外の脂肪酸をエステル合成用リパーゼにより、選
択的に炭素数６〜１８のアルコールとエステル化させて
系外へ取り出すことにより、高収率高含量で、着色が少
なく、異性体が生成せず、尚且つ苦みのない、ｎ−６系
高度不飽和脂肪酸が得られることを見いだし本発明を完
成した。

【０００７】

【発明の実施の形態】以下、本発明について詳述する。
本発明において、高度不飽和脂肪酸含有油脂とは、構成
脂肪酸に高度不飽和脂肪酸を含有するトリグリセリドを
意味する。高度不飽和脂肪酸含有油脂としては、例え
ば、菜種油、月見草油、黒すぐり油、ボラージ油等の植
物の他、クロレラ等の藻類、モルティエラ属等の菌類か
ら抽出した油脂を挙げることができ、好ましくは、ボラ
ージ油、モルティエラ属等の菌類から抽出した油脂が用
いられる。特にボラージ油は、精製で除去しにくいエル
カ酸（ｃｉｓ−１３−ｄｏｃｏｓｅｎｏｉｃ ａｃｉ
ｄ）が含まれている。

【０００８】本発明で用いられる加水分解用リパーゼと
は、油脂を７０％以上加水分解できる（加水分解率７０
％以上の）リパーゼであり、シュードモナス（Ｐｓｅｕ
ｄｏｍｏｎａｓ）属、キャンディダ（Ｃａｎｄｉｄａ）
属、クロモバクテリウム（Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉ
ｕｍｕ）属、ゲオトリカム（Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ）属
などの微生物が生産するものが挙げられる。かかるリパ
ーゼについては、市販のものを用いることができる。例
えば、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属の
リパーゼ（昭和電工（株）製、『リポサム』）、シュー
ドモナス フルオレセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ
ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）のリパーゼ（天野製薬（株）
製、『リパーゼＡＫ』）、キャンディダ シリンドラッ
セイ（Ｃａｎｄｉｄａ ｃｉｌｉｎｄｒａｃｅａ）のリ
パーゼ（名糖産業（株）製、『リパーゼＯＦ』）、シュ
ードモナス アエルギノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ
ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）のリパーゼ（東洋紡（株）製、
『ＬＰＬ』）等が挙げられる。なお本発明の加水分解率
（％）は（反応後の油層の酸価／反応前の油脂のケン化
価）×１００で示す。

【０００９】本発明で、加水分解用リパーゼで高度不飽
和脂肪酸含有油脂を分解して得られる脂肪酸としては、
γ−リノレン酸、ジホモγ−リノレン酸等のｎ−６系高
度不飽和脂肪酸が挙げられ、該高度不飽和脂肪酸以外の
脂肪酸としては、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイ
ン酸、リノール酸、エルカ酸等が挙げられる。

【００１０】本発明に用いられるエステル合成用リパー
ゼとは、炭素数６〜１８のアルコールと高度不飽和脂肪
酸酸以外の脂肪酸のエステル合成反応に選択的に働く酵
素であり、具体的には、リゾプス（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ）
属、ペニシリウム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）属、リゾ
ムコール（Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ）属、フザリウム（Ｆ
ｕｓａｒｉｕｍ）属、フミコーラ（Ｈｕｍｉｃｏｌａ）
属などの微生物が生産するものやブタ膵臓リパーゼなど
が挙げられる。かかるリパーゼについても、市販のもの
を用いることができる。例えば、リゾプス・デレマー
（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｄｅｌｅｍａｒ）のリパーゼ（田
辺製薬（株）製、『タリパーゼ』）、リゾムコール・ミ
イヘイ（Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ ｍｉｅｈｅｉ）のリパ
ーゼ（ノボ・ノルティスク（株）製、『リポザイム』、
『ノボザイム３８８』）、フミコーラ ランギノーサ
（Ｈｕｍｉｃｏｌａ ｌａｎｇｉｎｏｓａ）のリパーゼ
（ノボ・ノルティスク（株）製、『リポラーゼ』）等が
挙げられる。

【００１１】エステル合成用に用いられる炭素数６〜１
８のアルコールとしては、ヘキサノール、オクタノー
ル、デカノール、ラウリルアルコール、オレイルアルコ
ール等が挙げられるが、好ましくはオクタノール、デカ
ノール、ラウリルアルコール、オレイルアルコール、更
に好ましくはラウリルアルコールが用いられる。

【００１２】本発明では、まず加水分解用リパーゼで高
度不飽和脂肪酸含有油脂を加水分解する。反応系中の高
度不飽和脂肪酸含有油脂の量としては１０〜９５重量
％、好ましくは３０〜７０重量％であり、水の量は５〜
９０重量％、好ましくは３０〜７０重量％である。高度
不飽和脂肪酸含有油脂／水（重量比）としては０．１〜
２０で、好ましくは０．３〜３．０である。

【００１３】加水分解用リパーゼの使用形態は特に限定
されず、セライトやイオン交換樹脂、セラミック担体な
どに固定されたリパーゼを用いてもよいが、そのまま用
いるのが好ましい。加水分解用リパーゼの添加量は反応
液１ｇに対して１０〜１００，０００ユニットが好まし
く、更には１００〜１０，０００ユニットである。ここ
での１ユニットとは、オリーブ油を基質とし、１分間に
１μｍｏｌの脂肪酸を生成するのに必要なリパーゼ量を
示す。

【００１４】加水分解反応の反応温度としては１０〜６
０℃が好ましく、更に３０〜５５℃が好ましい。反応時
間としては、１０分〜５日間が好ましく、更に１０時間
〜３日間が好ましい。上記反応条件下で油脂の加水分解
率が７０％以上になるまで静置又は撹拌し、反応を続け
て目的物を得る。

【００１５】得られた反応液から生成脂肪酸の回収は反
応液の０．５〜５．０倍量の水を加え撹拌後、脂肪酸画
分（上層）を分離して用いてもよいが、通常は更に、ヘ
キサン抽出、蒸留、膜分離などにより精製するのが好ま
しいが、その精製手段は特に限定されるものではない。

【００１６】次に、上記で得られた肪酸画分中の高度不
飽和脂肪酸以外の脂肪酸と炭素数６〜１８のアルコール
をエステル化用リパーゼでエステル化させる。反応系中
の炭素数６〜１８のアルコール／脂肪酸のモル比は１〜
１０が好ましく、更には１〜５で、水の量は５〜５０重
量％が好ましく、更には１０〜３０重量％である。

【００１７】エステル合成用リパーゼの使用形態も特に
限定されないが、セライトやイオン交換樹脂、セラミッ
ク担体などに固定されたリパーゼを用いてもよいが、そ
のまま用いるのが好ましい。エステル合成用リパーゼの
添加量は反応液１ｇに対して１０〜３０，０００ユニッ
トが好ましく、更には５０〜１０，０００ユニットであ
る。ここでの１ユニットとは、オリーブ油を基質とし、
加水分解反応によって、１分間に１μｍｏｌの脂肪酸を
遊離させるのに必要なリパーゼ量を示す。

【００１８】エステル合成反応の反応温度としては１０
〜６０℃が好ましく、更に好ましくは１５〜４５℃で、
反応時間としては、１０分〜５日間が好ましく、更に好
ましくは５〜４８時間である。

【００１９】上記反応により、遊離のｎ−６系高度不飽
和脂肪酸及びｎ−６系高度不飽和脂肪酸以外の脂肪酸と
炭素数６〜１８のアルコールとのエステル体（ワック
ス）の混合物が得られ、かかる混合物からワックスを除
去することによりｎ−６系高度不飽和脂肪酸を得ること
ができる。ワックスは溶剤抽出、蒸留、クロマログラフ
ィー等によって除去できるが、ｎ−６系高度不飽和脂肪
酸の収率を上げるために、通常はアルカリ条件下でワッ
クスをヘキサン等の溶剤で抽出し、脂肪酸を水層側に分
画する。該溶剤は、ワックスの２〜１００倍重量を加
え、１０〜３０℃、１分〜１時間撹拌して、ワックス分
を抽出除去する。次いで残った水層を酸性にし、ｎ−６
系高度不飽和脂肪酸精製画分（上層）を得る。

【００２０】また、上記エステル合成反応により、ｎ−
６系高度不飽和脂肪酸の含量を６０〜８５重量％とする
ことができるが、回収した脂肪酸を原料として再度エス
テル化を行うことにより、ｎ−６系高度不飽和脂肪酸の
含量を、９３〜９７重量％にまで高めることができる。
再度エステル化を行う場合は、１回目の反応終了後、上
記の如く溶剤抽出し、得られた高度不飽和脂肪酸精製画
分に１回目と同様の炭素数６〜１８のアルコール、水、
エステル合成用リパーゼを加えて同じ条件下で反応す
る。

【００２１】

【実施例】以下、実施例により本発明をさらに具体的に
説明する。但し、本発明は、これら実施例に限定されな
い。なお「％」とあるのは「重量％」のことである。 実施例１ （１）加水分解反応 ５００ｍｌの邪魔板付き撹拌槽に、ボラージ油（γ−リ
ノレン酸２２．２％含有）４８．０ｇに対し水３２．０
ｇ、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属のリ
パーゼ（昭和電工（株）製、『リポサム』）を８０，０
００ユニット（１０００ユニット／反応液１ｇ）添加
し、窒素気流下、５００ｒｐｍで撹拌しながら、反応温
度４０℃で、２５時間反応した（加水分解率９１．５
％）。加水分解反応後、０．５Ｎ−水酸化カリウムでア
ルカリ性にしてから、未分解のトリ（ジ、モノ）グリセ
リドをｎ−ヘキサンで抽出除去し、脂肪酸を水層画分に
回収する。得られた水層画分を４Ｎ−塩酸で酸性に戻し
てからｎ−ヘキサンで脂肪酸を抽出、回収し、３９．５
ｇの脂肪酸を得た。該脂肪酸を常法に従って、メチルエ
ステル化し、キャピラリーガスクロマトグラフィーによ
り分析したところ、そのγ−リノレン酸の含量は２２．
５％（γ−リノレン酸８．８９ｇ含有）であった。 （２）エステル化反応 （１）で得られた脂肪酸３９．５ｇに対し、ラウリルア
ルコール５６．５ｇ、水２４ｇ、リゾーパス属（Ｒｈｉ
ｚｏｐｕｓ）のリパーゼ（田辺製薬（株）製、『タリパ
ーゼ』）２４，０００ユニット（２００ユニット／反応
液１ｇ）を添加し、窒素気流下、５００ｒｐｍで撹拌し
ながら、反応温度３０℃、２０時間でエステル化を行っ
た。反応終了後、０．５Ｎ−水酸化カリウムでアルカリ
性にしてから、未分解のトリ（ジ、モノ）グリセリドを
ｎ−ヘキサンで抽出除去し、脂肪酸を水層画分に回収す
る。得られた水層画分を４Ｎ−塩酸で酸性に戻してから
ｎ−ヘキサンで脂肪酸を抽出、回収し、１１．０ｇの脂
肪酸を得た。（１）と同様に分析したところ、γ−リノ
レン酸の含量が７０．２％（γ−リノレン酸７．７２ｇ
含有）であった。更に該脂肪酸を、上記と同じリゾプス
属のリパーゼ、ラウリルアルコール、水を同じ重量比率
で添加し、窒素気流下、５００ｒｐｍで撹拌しながら、
反応温度３０℃、２０時間、エステル化を行った。反応
終了後、０．５Ｎ−水酸化カリウムでアルカリ性にして
から、未分解のトリ（ジ、モノ）グリセリドをｎ−ヘキ
サンで抽出除去し、脂肪酸を水層画分に回収する。得ら
れた水層画分を４Ｎ−塩酸で強酸性に戻してからｎ−ヘ
キサンで脂肪酸を抽出、回収し、６．８０ｇの脂肪酸を
得た。（１）と同様に分析したところ、γ−リノレン酸
の含量は９３．７％（γ−リノレン酸６．３７ｇ含有）
であった。該脂肪酸は着色がなく、トランス構造の異性
体はＩＲにより確認されなかった。また該脂肪酸は苦み
がなく、エルカ酸の含量は０．１％であった。

【００２２】実施例２ （１）加水分解反応 ボラージ油の替わりに、月見草油４８．０ｇ（γ−リノ
レン酸８．０％含有）を用いて実施例１と同様に反応さ
せ（加水分解率８８．５％）、実施例１と同様に処理し
３８．２ｇの脂肪酸を得た。実施例１と同様に分析した
ところγ−リノレン酸の含量は８．１０％（γ−リノレ
ン酸３．１０ｇ含有）であった。 （２）エステル化反応 （１）で得られた脂肪酸３８．２ｇに対し、ラウリルア
ルコール、水、リゾプス属（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ）のリパ
ーゼ（田辺製薬（株）製、『タリパーゼ』）を実施例１
と同様の重量比率で反応させ、反応終了後、実施例１と
同様に操作し、γ−リノレン酸含量６２．３％の脂肪酸
３．３７ｇ（γ−リノレン酸２．１０ｇ含有）を得た。
更に該脂肪酸に、上記と同じリゾプス属のリパーゼ、ラ
ウリルアルコール、水を同重量比率で添加し、実施例１
と同様に操作し、γ−リノレン酸含量９１．２％の脂肪
酸１．７４ｇ（γ−リノレン酸１．５９ｇ含有）を得
た。該脂肪酸は着色がなく、トランス構造の異性体はＩ
Ｒにより確認されなかった。また該脂肪酸は苦みがな
く、エルカ酸は含まなかった。

【００２３】実施例３ （１）加水分解反応 ボラージ油の替わりに、クロスグリ油４８．０ｇ（γ−
リノレン酸１６．２％含有）を用いて実施例１と同様に
反応させ（加水分解率８９．０％）、実施例１と同様に
処理し３８．４ｇの脂肪酸を得た。実施例１と同様に分
析したところγ−リノレン酸の含量は１６．４％（γ−
リノレン酸６．３０ｇ含有）であった。 （２）エステル化反応 （１）で得られた脂肪酸３８．４ｇに対し、実施例１と
同様に反応させ、反応終了後、実施例１と同様に操作
し、（１）と同様に分析したところ、γ−リノレン酸含
量６６．７％の脂肪酸６．５１ｇ（γ−リノレン酸４．
３４ｇ含有）が得られた。更に該脂肪酸に、上記と同じ
リゾーパス属のリパーゼ、ラウリルアルコール、水を同
重量比率で添加し、実施例１と同様に反応しγ−リノレ
ン酸含量９２．５％の脂肪酸３．８ｇ（γ−リノレン酸
３．５２ｇ含有）を得た。該脂肪酸は着色がなく、トラ
ンス構造の異性体はＩＲにより確認されなかった。また
該脂肪酸は苦みがなく、エルカ酸は含まなかった。

【００２４】実施例４ （１）加水分解反応 ボラージ油の替わりに、モルティエラ属抽出油４８．０
ｇ（ジホモγ−リノレン酸１６％含有）を用いて実施例
１と同様に反応させ（加水分解率９２．３％）、実施例
１と同様に処理し３９．９ｇの脂肪酸を得た。実施例１
と同様に分析したところジホモγ−リノレン酸の含量は
１６．４％（ジホモγ−リノレン酸６．５６ｇ含有）で
あった。 （２）エステル化反応 （１）で得られた脂肪酸３９．９ｇに対し、実施例１と
同様に反応させ、反応終了後、実施例１と同様に操作
し、実施例１と同様に分析したところ、ジホモγ−リノ
レン酸含量７０．０％の脂肪酸８．０ｇ（ジホモγ−リ
ノレン酸５．６０ｇ含有）が得られた。更に該脂肪酸
に、上記と同じリゾーパス属のリパーゼ、ラウリルアル
コール、水を同重量比率添加し、実施例１と同様に反応
しジホモγ−リノレン酸含量９３．０％の脂肪酸６．５
ｇを得た。該脂肪酸は着色がなく、トランス構造の異性
体はＩＲにより確認されなかった。また該脂肪酸は苦み
がなく、エルカ酸は含まなかった。

【００２５】実施例５ （１）加水分解反応 実施例１で、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａ
ｓ）属のリパーゼ（昭和電工（株）製、『リポサム』）
を８０，０００ユニット（１０００ユニット／反応液１
ｇ）用いる替わりに、キャンディダ（Ｃａｎｄｉｄａ）
属のリパーゼ（名糖産業（株）製、Ｃａｎｄｉｄａ ｃ
ｙｌｉｎｄｒａｃｅａ）８０，０００ユニットを用いて
同様に加水分解し（加水分解率８３．０％）、実施例１
と同様に処理し３５．９ｇの脂肪酸を得た。実施例１と
同様に分析したところγ−リノレン酸の含量は１６．６
％（γ−リノレン酸５．９６ｇ含有）であった。 （２）エステル化反応 （１）で得られた脂肪酸３５．９ｇに対し、実施例１と
同様に反応させ、反応終了後、実施例１と同様に操作
し、実施例１と同様に分析したところ、γ−リノレン酸
含量６７．９％の脂肪酸６．２７ｇ（γ−リノレン酸
４．２６ｇ含有）が得られた。更に該脂肪酸に、上記と
同じリゾプス属のリパーゼ、ラウリルアルコール、水を
同重量比率で添加し、実施例１と同様に反応しγ−リノ
レン酸含量９２．７％の脂肪酸３．６ｇ（γ−リノレン
酸３．３４ｇ含有）を得た。該脂肪酸は着色がなく、ト
ランス構造の異性体はＩＲにより確認されなかった。ま
た該脂肪酸は苦みがなく、エルカ酸は含まなかった。

【００２６】実施例６ 実施例１の（１）で得られた脂肪酸３９．５ｇに対し、
ラウリルアルコール５６．０ｇ、水５０４．５ｇ、リゾ
ーパス属（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ）のリパーゼ（田辺製薬
（株）製、『タリパーゼ』）１２０，０００ユニット
（２００ユニット／反応液１ｇ）を添加し、実施例１と
同様にして、４．４０ｇの脂肪酸を得た。実施例１と同
様に分析したところ、γ−リノレン酸の含量は６５．０
％（γ−リノレン酸２．８６ｇ含有）であった。更に該
脂肪酸を、上記と同じリゾプス属のリパーゼ、ラウリル
アルコール、水を同重量比率で添加し２．７０ｇの脂肪
酸を得た。実施例１と同様に分析したところ、γ−リノ
レン酸の含量は９０．０％（γ−リノレン酸２．４３ｇ
含有）であった。該脂肪酸は着色がなく、トランス構造
の異性体はＩＲにより確認されなかった。また該脂肪酸
は苦みがなく、エルカ酸の含量は０．１％であった。

【００２７】実施例７ 実施例１の（１）で得られた脂肪酸３９．５ｇに対し、
ラウリルアルコール５６．０ｇ、水０．５ｇ、リゾプス
属（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ）のリパーゼ（田辺製薬（株）
製、『タリパーゼ』）２０，０００ユニット（２０８ユ
ニット／反応液１ｇ）を添加し、実施例１と同様にし
て、６．５４ｇの脂肪酸を得た。実施例１と同様に分析
したところ、γ−リノレン酸の含量は６５．０％（γ−
リノレン酸４．２５ｇ含有）であった。更に該脂肪酸
を、上記と同じリゾーパス属のリパーゼ、ラウリルアル
コール、水を同重量比率で添加し４．００ｇの脂肪酸を
得た。実施例１と同様に分析したところ、γ−リノレン
酸の含量は９０．０％（γ−リノレン酸３．６０ｇ含
有）であった。該脂肪酸は着色がなく、トランス構造の
異性体はＩＲにより確認されなかった。また該脂肪酸は
苦みがなく、エルカ酸は０．１％であった。

【００２８】実施例８ 実施例１の（１）で得られた脂肪酸３９．５ｇに対し、
デカノール５６．５ｇ、水２４．０ｇ、リゾプス属（Ｒ
ｈｉｚｏｐｕｓ）のリパーゼ（田辺製薬（株）製、『タ
リパーゼ』）２４，０００ユニット（２００ユニット／
反応液１ｇ）を添加し、実施例１と同様にして、１１．
１ｇの脂肪酸を得た。実施例１と同様に分析したとこ
ろ、γ−リノレン酸の含量は７０．０％（γ−リノレン
酸７．７７ｇ含有）であった。更に該脂肪酸を上記と同
じリゾプス属のリパーゼ、デカノール、水を同重量比率
で添加し６．８２ｇの脂肪酸を得た。実施例１と同様に
分析したところ、γ−リノレン酸の含量は９２．３％
（γ−リノレン酸６．２９ｇ含有）であった。該脂肪酸
は着色がなく、トランス構造の異性体はＩＲにより確認
されなかった。また該脂肪酸は苦みがなく、エルカ酸の
含量は０．１％であった。

【００２９】比較例１ ボラージ油４８．０ｇを１Ｎ−水酸化カリウムエタノー
ル５００ｍｌで１時間沸騰ケン化させ、温水１ｌで容器
を洗浄して分液漏斗に移し、冷水０．５ｌを加えて冷却
した。ヘキサン１ｌで１回、０．５ｌで２回洗浄した下
層水層を分液漏斗に入れ、この中にヘキサン１ｌを加
え、４Ｎ−塩酸で酸性に戻してからよく振り混ぜた後、
下層を除去してヘキサン層の塩酸が除去されるまで０．
５ｌの水で５回洗浄した。２ｌのヘキサン層にアセトン
１００ｍｌを加えて、エバポレータで脱水と脱溶媒を行
って、脂肪酸３５．０ｇを得た。該脂肪酸中のγ−リノ
レン酸の含量は１８．５％（γ−リノレン酸６．４８ｇ
含有）であった。該脂肪酸１２．０ｇをヘキサンに溶解
し、スチレン−ジビニル共重合体により作られたハイポ
ーラスポリマーゲルＨＰ−２０（三菱化学（株）製）を
充填したカラム（内径×長さ１．９１ｃｍ×５０ｃｍ、
充填容積１５７ｃｍ³、充填量８１．６ｇ）に注入し
た。そして溶離液としてアセトニトリル／テトラヒドロ
フラン／ジクロロメタン／水（８／１／１／０．８３容
積比）を流量１．０ｍｌで流して、γ−リノレン酸画分
を屈折率検出器で検出し、脱溶媒し、１．２０ｇの脂肪
酸を得た。実施例１と同様に分析したところ、γ−リノ
レン酸の含量が７０．７％（γ−リノレン酸０．８４８
ｇ含有）であった。該脂肪酸は淡黄色に着色し、トラン
ス構造の異性体はＩＲにより確認された。また該脂肪酸
は苦みがあり、エルカ酸の含量は０．３％であった。

【００３０】比較例２ 実施例１の（１）で得られ脂肪酸１２．０ｇをヘキサン
に溶解し、スチレン−ジビニル共重合体により作られた
ハイポーラスポリマーゲルＨＰ−２０（三菱化学（株）
製）を充填したカラム（内径×長さ１．９１ｃｍ×５０
ｃｍ、充填容積１５７ｃｍ³、充填量８１．６ｇ）に注
入した。そして溶離液としてアセトニトリル／テトラヒ
ドロフラン／ジクロロメタン／水（８／１／１／０．８
３容積比）を流量１．０ｍｌで流して、γ−リノレン酸
画分を屈折率検出器で検出し、脱溶媒し、１．２０ｇの
脂肪酸を得た。実施例１と同様に分析したところ、γ−
リノレン酸の含量は７０．９％（γ−リノレン酸０．８
５１ｇ）であった。該脂肪酸は淡黄色に着色し、トラン
ス構造の異性体はＩＲにより確認された。また該脂肪酸
は苦みがあり、エルカ酸の含量は０．３％であった。

【００３１】

【発明の効果】本発明では、高度不飽和脂肪酸含有油脂
を加水分解用リパーゼで脂肪酸とグリセリンとに加水分
解した後、副生する高度不飽和脂肪酸以外の脂肪酸をエ
ステル合成用リパーゼにより、選択的に炭素数６〜１８
のアルコールとエステル化させて系外に取り出している
ため、高収率高含量で、異性体を含まないｎ−６系高度
不飽和脂肪酸が得られる。

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【手続補正書】

【提出日】平成１０年４月２８日

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０００７

【補正方法】変更

【補正内容】

【０００７】

【発明の実施の形態】以下、本発明について詳述する。
本発明において、高度不飽和脂肪酸含有油脂とは、構成
脂肪酸に高度不飽和脂肪酸を含有するトリグリセリドを
意味する。ｎ−６系高度不飽和脂肪酸含有油脂として
は、例えば、菜種油、月見草油、黒すぐり油、ボラージ
油等の植物の他、クロレラ等の藻類、モルティエラ属等
の菌類から抽出した油脂を挙げることができ、好ましく
は、ボラージ油、モルティエラ属等の菌類から抽出した
油脂が用いられる。特にボラージ油は、精製で除去しに
くいエルカ酸（ｃｉｓ−１３−ｄｏｃｏｓｅｎｏｉｃ
ａｃｉｄ）が含まれている。該油脂中の高度不飽和脂肪
酸含有率は特に規定されていないが、特に高純度（９７
％以上）のｎ−６系高度不飽和脂肪酸を得ようとする場
合は、該含有率が４０％以上が好ましく、更には４５％
以上が好ましい。該含有率を４０％以上にする方法とし
ては、該油脂中のｎ−６系高度不飽和脂肪酸以外の脂肪
酸をキャンディダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属由来のリパーゼ
で分解して、溶剤抽出、蒸留等により精製して、ｎ−６
系高度不飽和脂肪酸高含有油脂を得る方法等が挙げられ
る。

【手続補正２】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０００８

【補正方法】変更

【補正内容】

【０００８】本発明で用いられる加水分解用リパーゼと
は、油脂を７０％以上加水分解できる（加水分解率７０
％以上の）リパーゼであり、シュードモナス（Ｐｓｅｕ
ｄｏｍｏｎａｓ）属、キャンディダ（Ｃａｎｄｉｄａ）
属、クロモバクテリウム（Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉ
ｕｍｕ）属、ゲオトリカム（Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ）属
などの微生物が生産するものが挙げられる。かかるリパ
ーゼについては、市販のものを用いることができる。例
えば、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属の
リパーゼ（昭和電工（株）製、『リポサム』；天野製薬
（株）製、『リパーゼＰＳ』）、シュードモナス フル
オレセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｆｌｕｏｒｅｓｃ
ｅｎｓ）のリパーゼ（天野製薬（株）製、『リパーゼＡ
Ｋ』）、キャンディダ シリンドラッセイ（Ｃａｎｄｉ
ｄａ ｃｉｌｉｎｄｒａｃｅａ）のリパーゼ（名糖産業
（株）製、『リパーゼＯＦ』）、シュードモナス アエ
ルギノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎ
ｏｓａ）のリパーゼ（東洋紡（株）製、『ＬＰＬ』）等
が挙げられる。なお本発明の加水分解率（％）は（反応
後の油層の酸価／反応前の油脂のケン化価）×１００で
示す。

【手続補正３】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００１０

【補正方法】変更

【補正内容】

【００１０】本発明に用いられるエステル合成用リパー
ゼとは、炭素数６〜１８のアルコールと高度不飽和脂肪
酸酸以外の脂肪酸のエステル合成反応に選択的に働く酵
素であり、具体的には、リゾプス（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ）
属、ペニシリウム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）属、リゾ
ムコール（Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ）属、フザリウム（Ｆ
ｕｓａｒｉｕｍ）属、フミコーラ（Ｈｕｍｉｃｏｌａ）
属などの微生物が生産するものやブタ膵臓リパーゼなど
が挙げられる。かかるリパーゼについても、市販のもの
を用いることができる。例えば、リゾプス・デレマー
（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｄｅｌｅｍａｒ）のリパーゼ（田
辺製薬（株）製、『タリパーゼ』；天野製薬（株）製、
『リパーゼＤ』）、リゾムコール・ミイヘイ（Ｒｈｉｚ
ｏｍｕｃｏｒ ｍｉｅｈｅｉ）のリパーゼ（ノボ・ノル
ティスク（株）製、『リポザイム』、『ノボザイム３８
８』）、フミコーラ ランギノーサ（Ｈｕｍｉｃｏｌａ
ｌａｎｇｉｎｏｓａ）のリパーゼ（ノボ・ノルティス
ク（株）製、『リポラーゼ』）等が挙げられる。

【手続補正４】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００１５

【補正方法】変更

【補正内容】

【００１５】得られた反応液から生成脂肪酸の回収は反
応液の０．５〜５．０倍量の水を加え撹拌後、脂肪酸画
分（上層）を分離して用いてもよいが、通常は更に、ヘ
キサン抽出、蒸留、膜分離などにより精製するのが好ま
しい。特に高純度のｎ−６系高度不飽和脂肪酸を得よう
とする場合は、得られた反応液を蒸留し、油脂分を完全
に除去し、ｎ−６系高度不飽和脂肪酸画分のみを得るの
が好ましい。

【手続補正５】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００２０

【補正方法】変更

【補正内容】

【００２０】また、上記エステル合成反応により、ｎ−
６系高度不飽和脂肪酸の含量を６０〜８５重量％とする
ことができるが、回収した脂肪酸を原料として再度エス
テル化を行うことにより、ｎ−６系高度不飽和脂肪酸の
含量を、９３〜９７重量％にまで高めることができる。
再度エステル化を行う場合は、１回目の反応終了後、上
記の如く溶剤抽出し、得られた高度不飽和脂肪酸精製画
分に１回目と同様の炭素数６〜１８のアルコール、水、
エステル合成用リパーゼを加えて同じ条件下で反応す
る。更に高純度のｎ−６系高度不飽和脂肪酸を得たい場
合には、上記のｎ−６系高度不飽和脂肪酸精製画分を再
度該画分中に残存する高度不飽和脂肪酸以外の脂肪酸を
エステル合成用リパーゼにより、選択的に炭素数６〜１
８のアルコールとエステル化させた後、ｎ−６系高度不
飽和脂肪酸を蒸留する方法等により精製しｎ−６系高度
不飽和脂肪酸の含量を、９７重量％以上にまで高めるこ
とができる。蒸留により精製する場合は必要に応じて、
微量に残存するｎ−６系高度不飽和脂肪酸の上記アルコ
ールエステルを除去する為に、更に尿素付加法で精製し
てもよい。その場合、上記のｎ−６系高度不飽和脂肪酸
を尿素のアルコール／水溶液（１００／０．０１〜１）
に添加し析出してきた尿素を４０〜８０℃で加温溶解し
た後、０〜２５℃まで冷却し、尿素を析出させ濾過し、
濾液を濃縮して、濃縮液中のアルコールの２〜１０倍程
度の水を添加して、脂肪酸画分（上層）を得ればよい。

【手続補正６】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００３１

【補正方法】変更

【補正内容】

【００３１】実施例９ 実施例１で用いたボラージ油（γ−リノレン酸２２．２
％含有）の代わりに以下の方法で得られたγ−リノレン
酸高度含有ボラージ油（γ−リノレン酸４５．９％含
有）を用いた。 （１）γ−リノレン酸高度含有ボラージ油の製造 ２０ｌの邪魔板付き撹拌槽に上記のボラージ油（γ−リ
ノレン酸２２．２％含有）６１２０ｇ、水６１２０ｇ、
キャンディダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属のリパーゼ（名糖産
業（株）製、『リパーゼＯＦ』）を２０（ユニット／反
応液１ｇ）添加し、窒素気流下で撹拌しながら、反応温
度３５℃で、２３時間反応した（加水分解率６３．８
％）。加水分解反応後、油分を分離し、該油分を遠心式
薄膜蒸留機（日本車両（株）製、『ＭＤ−１５０』）
で、２３５℃、０．００１９Ｔｏｒｒで留出する画分を
得た後、２４０℃、０．０１５Ｔｏｒｒで留出する画分
を得た。２つの画分を併せて２０６０ｇのγ−リノレン
酸高度含有ボラージ油（γ−リノレン酸４５．９％）を
得た。 （２）加水分解反応 １０ｌの邪魔板付き撹拌槽に（１）で得られたボラージ
油１０００ｇ、水５０４０ｇ、シュードモナス（Ｐｓｅ
ｕｄｏｍｏｎａｓ）属のリパーゼ（天野製薬（株）製、
『リパーゼＰＳ』）を２７０（ユニット／反応液１ｇ）
添加し、窒素気流下、２００ｒｐｍで撹拌しながら、反
応温度３５℃で、２４時間反応した（加水分解率９６．
４％）。加水分解反応後、油分を分離し、該油分を遠心
式薄膜蒸留機（日本車両（株）製、『ＭＤ−１５０』）
で、１５０℃、０．０３Ｔｏｒｒで留出する画分を得た
後、１６０℃、０．０３Ｔｏｒｒで留出する画分を得
た。２つの画分を併せて７５０ｇの脂肪酸を得た。 （３）エステル化反応 （２）で得られた脂肪酸７４０ｇに対し、ラウリルアル
コール９７０ｇ、水４２０ｇ、リゾーパス属（Ｒｈｉｚ
ｏｐｕｓ）のリパーゼ（天野製薬（株）製、『リパーゼ
Ｄ』）を５０（ユニット／反応液１ｇ）添加し、窒素気
流下、２００ｒｐｍで撹拌しながら、反応温度３０℃、
１６時間でエステル化を行った。加水分解反応後、油分
を分離し、油分を遠心式薄膜蒸留機（日本車両（株）
製、『ＭＤ−１５０』）で、１０５℃、０．２Ｔｏｒｒ
で未反応のラウリルアルコールを除去した後、１９５
℃、０．２Ｔｏｒｒで留出する画分３６０ｇを得た。該
画分を常法に従ってメチルエステル化し、キャピラリー
ガスクロマトグラフィーにより分析したところ、γ−リ
ノレン酸の含量が９２．１％であった。該脂肪酸は着色
がなく、トランス構造の異性体はＩＲにより確認されな
かった。また該脂肪酸は苦みがなく、エルカ酸の含量は
０％であった。 （４）再エステル化反応 （３）で得られた脂肪酸３６０ｇに対し、ラウリルアル
コール３５０ｇ、水１８０ｇ、リゾーパス属（Ｒｈｉｚ
ｏｐｕｓ）のリパーゼ（天野製薬（株）製、『リパーゼ
Ｄ』）を７０（ユニット／反応液１ｇ）添加し、窒素気
流下、２００ｒｐｍで撹拌しながら、反応温度３０℃、
１６時間でエステル化を行った。加水分解反応後、油分
を分離し、該油分を遠心式薄膜蒸留機（日本車両（株）
製、『ＭＤ−１５０』）で、１０５℃、０．２Ｔｏｒｒ
で未反応のラウリルアルコールを除去した後、１９５
℃、０．２Ｔｏｒｒで留出する画分１６０ｇを得た。
（３）と同様に分析したところ、γ−リノレン酸の含量
が９９．２％（γ−リノレン酸１５９ｇ含有）であっ
た。該脂肪酸は着色がなく、トランス構造の異性体はＩ
Ｒにより確認されなかった。また該脂肪酸は苦みがな
く、エルカ酸の含量は０％であった。

【発明の効果】本発明では、高度不飽和脂肪酸含有油脂
を加水分解用リパーゼで脂肪酸とグリセリンとに加水分
解した後、副生する高度不飽和脂肪酸以外の脂肪酸をエ
ステル合成用リパーゼにより、選択的に炭素数６〜１８
のアルコールとエステル化させて系外に取り出している
ため、高収率高含量で、異性体を含まないｎ−６系高度
不飽和脂肪酸が得られる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ //(Ｃ１２Ｎ 9/20 Ｃ１２Ｒ 1:38） (Ｃ１２Ｎ 9/20 Ｃ１２Ｒ 1:72） (Ｃ１２Ｎ 9/20 Ｃ１２Ｒ 1:845） (Ｃ１２Ｎ 9/20 Ｃ１２Ｒ 1:01） (Ｃ１２Ｎ 9/20 Ｃ１２Ｒ 1:645） (72)発明者 藤田 裕之 大阪府茨木市室山２丁目13番１号 日本合 成化学工業株式会社中央研究所内 (72)発明者 福嶋 信浩 大阪府茨木市室山２丁目13番１号 日本合 成化学工業株式会社中央研究所内 (72)発明者 山上 知秀 大阪市北区野崎町９番６号 日本合成化学 工業株式会社内

Claims (7)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 高度不飽和脂肪酸含有油脂を加水分解用
   リパーゼで加水分解して脂肪酸とグリセリンとに分解し
   た後、副生する高度不飽和脂肪酸以外の脂肪酸をエステ
   ル合成用リパーゼにより、選択的に炭素数６〜１８のア
   ルコールとエステル化させて系外へ取り出すことを特徴
   とする不飽和結合を３個有し、第１の不飽和結合が６の
   位置にある高度不飽和脂肪酸の精製法。
2. 【請求項２】 高度不飽和脂肪酸が、γ−リノレン酸及
   び／またはジホモγ−リノレン酸であることを特徴とす
   る請求項１記載の不飽和結合を３個有し、第１の不飽和
   結合が６の位置にある高度不飽和脂肪酸の精製法。
3. 【請求項３】 加水分解用リパーゼがシュードモナス
   （Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属のリパーゼであることを
   特徴とする請求項１あるいは２記載の不飽和結合を３個
   有し、第１の不飽和結合が６の位置にある高度不飽和脂
   肪酸の精製法。
4. 【請求項４】 加水分解用リパーゼがキャンディダ（Ｃ
   ａｎｄｉｄａ）属のリパーゼであることを特徴とする請
   求項１あるいは２記載の不飽和結合を３個有し、第１の
   不飽和結合が６の位置にある高度不飽和脂肪酸の精製
   法。
5. 【請求項５】 エステル合成用リパーゼがリゾーパス
   （Ｒｈｉｚｏｐｕｓ）属、リゾムコール（Ｒｈｉｚｏｍ
   ｕｃｏｒ）属、フザリウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）、フミ
   コーラ（Ｈｕｍｉｃｏｌａ）属のリパーゼであることを
   特徴とする請求項１〜４いずれか記載の不飽和結合を３
   個有し、第１の不飽和結合が６の位置にある高度不飽和
   脂肪酸の精製法。
6. 【請求項６】 炭素数６〜１８のアルコールとしてラウ
   リルアルコールを用いることを特徴とする請求項１〜５
   いずれか記載の不飽和結合を３個有し、第１の不飽和結
   合が６の位置にある高度不飽和脂肪酸の精製法。
7. 【請求項７】 エステル化反応を、有機溶媒を含まず、
   水分含量０．１〜９０重量％で行うことを特徴とする請
   求項１〜６いずれか記載の不飽和結合を３個有し、第１
   の不飽和結合が６の位置にある高度不飽和脂肪酸の精製
   法。