JPH10191972A - Ａｔｐ加水分解酵素の安定化方法 - Google Patents
Ａｔｐ加水分解酵素の安定化方法Info
- Publication number
- JPH10191972A JPH10191972A JP345397A JP345397A JPH10191972A JP H10191972 A JPH10191972 A JP H10191972A JP 345397 A JP345397 A JP 345397A JP 345397 A JP345397 A JP 345397A JP H10191972 A JPH10191972 A JP H10191972A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- atp
- hydrolase
- buffer
- atp hydrolase
- stabilizing
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Abstract
(57)【要約】
【課題】 ＡＴＰの測定、血小板凝集抑制剤、生体適合
性の抗血栓材料の製造、血小板の洗浄等に不可欠なＡＴ
Ｐ加水分解酵素を安定化させる方法を提供する。 【解決手段】 ＡＴＰ加水分解酵素をｐＨ６．０〜８．
０の緩衝液中でアルブミン及び防腐剤、更にキレート
剤、タンパク質ＳＨ基保護剤等を共存させることを特徴
とするＡＴＰ加水分解酵素の安定化方法。
性の抗血栓材料の製造、血小板の洗浄等に不可欠なＡＴ
Ｐ加水分解酵素を安定化させる方法を提供する。 【解決手段】 ＡＴＰ加水分解酵素をｐＨ６．０〜８．
０の緩衝液中でアルブミン及び防腐剤、更にキレート
剤、タンパク質ＳＨ基保護剤等を共存させることを特徴
とするＡＴＰ加水分解酵素の安定化方法。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、ＡＴＰ加水分解酵
素の安定化方法に関する。更に詳しくは、ＡＴＰの測
定、血小板凝集抑制剤、生体適合性の抗血栓材料の製
造、更には血小板の洗浄等に不可欠なＡＴＰ加水分解酵
素の安定化方法に関する。
素の安定化方法に関する。更に詳しくは、ＡＴＰの測
定、血小板凝集抑制剤、生体適合性の抗血栓材料の製
造、更には血小板の洗浄等に不可欠なＡＴＰ加水分解酵
素の安定化方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】ＡＴＰ（アデノシン−５’−三リン酸）
は、アデニン、Ｄ−リボース及び３個のリン酸基からな
るヌクレオチドであり、呼吸、発酵及び光合成における
リン酸化反応によって生成される。全ての細胞はＡＴＰ
を含み、ＡＴＰは生体反応、特にエネルギー代謝には不
可欠である。従って、細胞あるいは生体組織におけるＡ
ＴＰの測定は、細胞あるいは生体組織のエネルギー代謝
活性を知る上で重要な指標となる。また、有用物質生産
のバイオリアクターに、ＡＴＰは必須である。ＡＴＰの
測定法には、イオン交換カラムでＡＴＰを分離し、核酸
に由来する２５０〜２６０ｎｍの紫外線吸収量を測定す
ることにより定量する方法、ＡＴＰがルシフェリンとホ
タルルシフェラーゼによって反応を起こし５６０〜５８
０ｎｍの光を発する生物発光法を用いて定量する方法
（M. A. DeLuca, Advances in Enzymology, 44, 37 (19
76) ）があるが、ＡＴＰをＡＴＰ加水分解酵素で加水分
解し、生じた無機リン酸を比色定量（C. H. Fiske and
Y. Subbarow, J. Biol. Chem., 66, 375 (1925) ）して
ＡＴＰ量を定量する方法、あるいは生じた水素イオンの
量を測定してＡＴＰを定量する方法（特開昭６１−１２
２５６０）も知られている。
は、アデニン、Ｄ−リボース及び３個のリン酸基からな
るヌクレオチドであり、呼吸、発酵及び光合成における
リン酸化反応によって生成される。全ての細胞はＡＴＰ
を含み、ＡＴＰは生体反応、特にエネルギー代謝には不
可欠である。従って、細胞あるいは生体組織におけるＡ
ＴＰの測定は、細胞あるいは生体組織のエネルギー代謝
活性を知る上で重要な指標となる。また、有用物質生産
のバイオリアクターに、ＡＴＰは必須である。ＡＴＰの
測定法には、イオン交換カラムでＡＴＰを分離し、核酸
に由来する２５０〜２６０ｎｍの紫外線吸収量を測定す
ることにより定量する方法、ＡＴＰがルシフェリンとホ
タルルシフェラーゼによって反応を起こし５６０〜５８
０ｎｍの光を発する生物発光法を用いて定量する方法
（M. A. DeLuca, Advances in Enzymology, 44, 37 (19
76) ）があるが、ＡＴＰをＡＴＰ加水分解酵素で加水分
解し、生じた無機リン酸を比色定量（C. H. Fiske and
Y. Subbarow, J. Biol. Chem., 66, 375 (1925) ）して
ＡＴＰ量を定量する方法、あるいは生じた水素イオンの
量を測定してＡＴＰを定量する方法（特開昭６１−１２
２５６０）も知られている。
【０００３】また、ＡＴＰ加水分解酵素のうちアピラー
ゼ（ＡＴＰ−ジホスファターゼ）は、ＡＴＰをＡＤＰ
（アデノシン−５’−二リン酸）と無機リン酸に、更に
生じたＡＤＰをＡＭＰ（アデノシン−５’−一リン酸）
と無機リン酸に加水分解する二段階の反応を触媒する酵
素であるが、これ自体、血小板凝集抑制剤として使用さ
れている（特表昭６３−５００８４２）。これは、アピ
ラーゼが血小板凝集誘発剤、つまりトロンビン形成プロ
セスの開始剤として作用するＡＤＰ（A. Gaarderand A.
Hellem, Nature, 192, 531 (1961) ）を加水分解する
ためである。更に、アピラーゼは上記の作用により、人
工臓器、血液ポンプまたは人工血行回路などの材料とし
て、あるいはこれらの器具のコーティング材料として使
用される生体適合性の抗血栓材料の製造に不可欠であ
る。
ゼ（ＡＴＰ−ジホスファターゼ）は、ＡＴＰをＡＤＰ
（アデノシン−５’−二リン酸）と無機リン酸に、更に
生じたＡＤＰをＡＭＰ（アデノシン−５’−一リン酸）
と無機リン酸に加水分解する二段階の反応を触媒する酵
素であるが、これ自体、血小板凝集抑制剤として使用さ
れている（特表昭６３−５００８４２）。これは、アピ
ラーゼが血小板凝集誘発剤、つまりトロンビン形成プロ
セスの開始剤として作用するＡＤＰ（A. Gaarderand A.
Hellem, Nature, 192, 531 (1961) ）を加水分解する
ためである。更に、アピラーゼは上記の作用により、人
工臓器、血液ポンプまたは人工血行回路などの材料とし
て、あるいはこれらの器具のコーティング材料として使
用される生体適合性の抗血栓材料の製造に不可欠であ
る。
【０００４】アピラーゼは、血小板凝集能検査において
も欠かせない酵素であることも知られている。血小板凝
集能検査は、先天性出血性疾患、特に先天性血小板機能
異常症の診断に欠くことのできない検査であり、その多
くは多血小板漿（血小板＋血漿）を用いて実施されてい
る。しかし、各種血小板機能異常を詳細に検討する場
合、血小板を洗浄し血漿成分の影響を排除することが必
要である。血小板の洗浄に用いられるＴｙｒｏｄｅ液に
は、アピラーゼが添加されており（三上ら, 室蘭製鉄所
病院医誌, 28, 70 (1990) ）、その有効性が示唆されて
いる。
も欠かせない酵素であることも知られている。血小板凝
集能検査は、先天性出血性疾患、特に先天性血小板機能
異常症の診断に欠くことのできない検査であり、その多
くは多血小板漿（血小板＋血漿）を用いて実施されてい
る。しかし、各種血小板機能異常を詳細に検討する場
合、血小板を洗浄し血漿成分の影響を排除することが必
要である。血小板の洗浄に用いられるＴｙｒｏｄｅ液に
は、アピラーゼが添加されており（三上ら, 室蘭製鉄所
病院医誌, 28, 70 (1990) ）、その有効性が示唆されて
いる。
【０００５】しかし、アピラーゼを初めとしたＡＴＰ加
水分解酵素は非常に不安定で、失活しやすいことが知ら
れている。例えば、アピラーゼはガラスビーズとの接触
で容易に失活する。このため、マレイン酸−エチレン共
重合体やポリスチレンによるマトリックスや、高分子微
粒子界面の脂質吸着層によりＡＴＰ加水分解酵素を固定
化させ、安定化を図る方法が示されている。しかし、こ
れらの固定化方法では、固定化の際の失活や基質と酵素
との結合頻度の大幅な低下が生じるため、有効な安定化
方法とはいえない。
水分解酵素は非常に不安定で、失活しやすいことが知ら
れている。例えば、アピラーゼはガラスビーズとの接触
で容易に失活する。このため、マレイン酸−エチレン共
重合体やポリスチレンによるマトリックスや、高分子微
粒子界面の脂質吸着層によりＡＴＰ加水分解酵素を固定
化させ、安定化を図る方法が示されている。しかし、こ
れらの固定化方法では、固定化の際の失活や基質と酵素
との結合頻度の大幅な低下が生じるため、有効な安定化
方法とはいえない。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】以上のような事実を鑑
み、本発明は、アピラーゼを初めとするＡＴＰ加水分解
酵素を、種々の固定化方法を用いることなく、長期間に
渡って高い活性を保持させ、しかも凍結や凍結乾燥後も
高い活性を有することのできる安定化方法を提供するこ
とにある。
み、本発明は、アピラーゼを初めとするＡＴＰ加水分解
酵素を、種々の固定化方法を用いることなく、長期間に
渡って高い活性を保持させ、しかも凍結や凍結乾燥後も
高い活性を有することのできる安定化方法を提供するこ
とにある。
【０００７】
【課題を解決するための手段】即ち本発明は、ＡＴＰ加
水分解酵素をｐＨ６．０〜８．０の緩衝液中でアルブミ
ン及び防腐剤を共存させることを特徴とするＡＴＰ加水
分解酵素の安定化方法に関する。
水分解酵素をｐＨ６．０〜８．０の緩衝液中でアルブミ
ン及び防腐剤を共存させることを特徴とするＡＴＰ加水
分解酵素の安定化方法に関する。
【０００８】更に本発明は、ＡＴＰ加水分解酵素をｐＨ
６．０〜８．０の緩衝液中でアルブミン及び防腐剤を共
存させ、更にキレート剤を共存させることを特徴とする
上記のＡＴＰ加水分解酵素の安定化方法に関する。
６．０〜８．０の緩衝液中でアルブミン及び防腐剤を共
存させ、更にキレート剤を共存させることを特徴とする
上記のＡＴＰ加水分解酵素の安定化方法に関する。
【０００９】更に本発明は、ＡＴＰ加水分解酵素をｐＨ
６．０〜８．０の緩衝液中でアルブミン及び防腐剤を共
存させ、更にタンパク質ＳＨ基保護剤を共存させること
を特徴とする上記のＡＴＰ加水分解酵素の安定化方法に
関する。
６．０〜８．０の緩衝液中でアルブミン及び防腐剤を共
存させ、更にタンパク質ＳＨ基保護剤を共存させること
を特徴とする上記のＡＴＰ加水分解酵素の安定化方法に
関する。
【００１０】更に本発明は、ＡＴＰ加水分解酵素がアピ
ラーゼである上記のＡＴＰ加水分解酵素の安定化方法に
関する。
ラーゼである上記のＡＴＰ加水分解酵素の安定化方法に
関する。
【００１１】更に本発明は、ｐＨ６．０〜８．０の緩衝
液がグッドの緩衝液で総括される緩衝液のうちの１つで
ある上記のＡＴＰ加水分解酵素の安定化方法に関する。
液がグッドの緩衝液で総括される緩衝液のうちの１つで
ある上記のＡＴＰ加水分解酵素の安定化方法に関する。
【００１２】更に本発明は、アルブミンがウシ血清アル
ブミンである上記のＡＴＰ加水分解酵素の安定化方法に
関する。
ブミンである上記のＡＴＰ加水分解酵素の安定化方法に
関する。
【００１３】
【発明の実施の形態】本発明の安定化方法は、ＡＴＰ加
水分解酵素をｐＨ６．０〜８．０の緩衝液中でアルブミ
ン及び防腐剤、更にキレート剤やタンパク質ＳＨ基安定
化剤を共存させる方法である。本発明に到達したのは、
緩衝液の作用するｐＨ領域、緩衝液の濃度、及び金属と
の結合係数等の性質を吟味し良好な緩衝液を選択したこ
と、ＡＴＰ加水分解酵素の変性防止と活性部位の保護の
作用をする添加剤を検討し、アルブミン、キレート剤、
タンパク質ＳＨ基安定化剤が有効であることを見出した
こと、及びＡＴＰ加水分解酵素の活性を阻害しない防腐
剤を見出したことによる。これにより、ＡＴＰ加水分解
酵素を、長期間に渡って高い活性を保持させ、しかも凍
結や凍結乾燥後も高い活性を有することが可能となった
水分解酵素をｐＨ６．０〜８．０の緩衝液中でアルブミ
ン及び防腐剤、更にキレート剤やタンパク質ＳＨ基安定
化剤を共存させる方法である。本発明に到達したのは、
緩衝液の作用するｐＨ領域、緩衝液の濃度、及び金属と
の結合係数等の性質を吟味し良好な緩衝液を選択したこ
と、ＡＴＰ加水分解酵素の変性防止と活性部位の保護の
作用をする添加剤を検討し、アルブミン、キレート剤、
タンパク質ＳＨ基安定化剤が有効であることを見出した
こと、及びＡＴＰ加水分解酵素の活性を阻害しない防腐
剤を見出したことによる。これにより、ＡＴＰ加水分解
酵素を、長期間に渡って高い活性を保持させ、しかも凍
結や凍結乾燥後も高い活性を有することが可能となった
【００１４】本発明のＡＴＰ加水分解酵素とは、ＡＴＰ
を加水分解しＡＤＰあるいはＡＭＰと無機リン酸に加水
分解する酵素のことであるが、ＡＴＰの分解産物である
ＡＤＰをＡＭＰと無機リン酸に加水分解する活性を有す
る酵素も含まれる。具体的には、アデノシントリホスフ
ァターゼ（酵素番号：ＥＣ３．６．１．３、ＡＴＰ＋Ｈ
2 Ｏ→ＡＤＰ＋無機リン酸の反応を触媒する）、アピラ
ーゼ（ＥＣ３．６．１．５、ＡＴＰ＋Ｈ2 Ｏ→ＡＤＰ＋
無機リン酸、ＡＤＰ＋Ｈ2 Ｏ→ＡＭＰ＋無機リン酸の反
応を触媒する）、ＡＴＰピロホスファターゼ（ＥＣ３．
６．１．８、ＡＴＰ＋Ｈ2 Ｏ→ＡＭＰ＋ピロリン酸の反
応を触媒する）が示されるが、市販品として入手が容易
なアピラーゼが頻繁に利用されている。
を加水分解しＡＤＰあるいはＡＭＰと無機リン酸に加水
分解する酵素のことであるが、ＡＴＰの分解産物である
ＡＤＰをＡＭＰと無機リン酸に加水分解する活性を有す
る酵素も含まれる。具体的には、アデノシントリホスフ
ァターゼ（酵素番号：ＥＣ３．６．１．３、ＡＴＰ＋Ｈ
2 Ｏ→ＡＤＰ＋無機リン酸の反応を触媒する）、アピラ
ーゼ（ＥＣ３．６．１．５、ＡＴＰ＋Ｈ2 Ｏ→ＡＤＰ＋
無機リン酸、ＡＤＰ＋Ｈ2 Ｏ→ＡＭＰ＋無機リン酸の反
応を触媒する）、ＡＴＰピロホスファターゼ（ＥＣ３．
６．１．８、ＡＴＰ＋Ｈ2 Ｏ→ＡＭＰ＋ピロリン酸の反
応を触媒する）が示されるが、市販品として入手が容易
なアピラーゼが頻繁に利用されている。
【００１５】上記のＡＴＰ加水分解酵素は、中性付近に
活性の至適ｐＨを有し、また中性付近のｐＨで安定であ
る。従って、ＡＴＰ加水分解酵素の安定化には、ｐＨ＝
６．０〜８．０、好ましくはｐＨ＝６．５〜７．８の緩
衝液を用いることが必要である。このための緩衝液に
は、ｐＨが中性領域を示す「蛋白質・酵素の基礎実験
法」（堀尾、山下編著：南江堂 (1981) ）４３２〜４３
５頁記載の緩衝液を用いることができる。この中でも、
１）水に溶けやすい、２）生体膜を通過しにくい、３）
イオン強度が低い、４）種々の陽イオンと錯塩形成能が
低いか形成してもその塩は水溶性である、などの特徴を
有するグッドの緩衝液で総括される以下の緩衝液、すな
わち、ＭＥＳ（２−モルホリノエタンスルホン酸）緩衝
液、Ｔｒｉｓ（トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタ
ン）系緩衝液、ＢＥＳ（Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシ
エチル）−２−アミノエタンスルホン酸）緩衝液、ＭＯ
ＰＳ（３−モルホリノプロパンスルホン酸）緩衝液、Ｈ
ＥＰＥＳ（Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ−
２−エタンスルホン酸）緩衝液、などを用いることが望
ましい。緩衝液の濃度は、２〜１００ｍＭ、好ましくは
１０〜５０ｍＭが望ましい。緩衝液濃度が２ｍＭ未満の
場合、充分な緩衝能を得ることは難しく、一方、１００
ｍＭを越える濃度の緩衝液を用いても、ＡＴＰ加水分解
酵素の安定性向上は期待できない。
活性の至適ｐＨを有し、また中性付近のｐＨで安定であ
る。従って、ＡＴＰ加水分解酵素の安定化には、ｐＨ＝
６．０〜８．０、好ましくはｐＨ＝６．５〜７．８の緩
衝液を用いることが必要である。このための緩衝液に
は、ｐＨが中性領域を示す「蛋白質・酵素の基礎実験
法」（堀尾、山下編著：南江堂 (1981) ）４３２〜４３
５頁記載の緩衝液を用いることができる。この中でも、
１）水に溶けやすい、２）生体膜を通過しにくい、３）
イオン強度が低い、４）種々の陽イオンと錯塩形成能が
低いか形成してもその塩は水溶性である、などの特徴を
有するグッドの緩衝液で総括される以下の緩衝液、すな
わち、ＭＥＳ（２−モルホリノエタンスルホン酸）緩衝
液、Ｔｒｉｓ（トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタ
ン）系緩衝液、ＢＥＳ（Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシ
エチル）−２−アミノエタンスルホン酸）緩衝液、ＭＯ
ＰＳ（３−モルホリノプロパンスルホン酸）緩衝液、Ｈ
ＥＰＥＳ（Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ−
２−エタンスルホン酸）緩衝液、などを用いることが望
ましい。緩衝液の濃度は、２〜１００ｍＭ、好ましくは
１０〜５０ｍＭが望ましい。緩衝液濃度が２ｍＭ未満の
場合、充分な緩衝能を得ることは難しく、一方、１００
ｍＭを越える濃度の緩衝液を用いても、ＡＴＰ加水分解
酵素の安定性向上は期待できない。
【００１６】ｐＨ６．０〜８．０の緩衝液中でＡＴＰ加
水分解酵素と共存するアルブミンは、ＡＴＰ加水分解酵
素と結合してＡＴＰ加水分解酵素の構造を安定させ、変
性を防止する作用を有する。パパイン、トリプシン、キ
モトリプシン等のタンパク質に認められるタンパク質分
解活性を示さない、可溶性のタンパク質であれば、上記
の目的で用いることは可能であるが、アルブミンで総称
される以下の可溶性タンパク質、即ち、オボアルブミ
ン、ラクトアルブミン、血清アルブミン、ロイコシン、
レグメリン、リシンから選ばれる一種類以上のタンパク
質を用いることが好ましく、特にウシ血清アルブミン
（ＢＳＡ）を用いることが望ましい。アルブミンの添加
量は、ＡＴＰ加水分解酵素を含む緩衝液１ｍｌ当たり
０．１〜５０ｍｇ、好ましくは０．５〜１０ｍｇが望ま
しい。
水分解酵素と共存するアルブミンは、ＡＴＰ加水分解酵
素と結合してＡＴＰ加水分解酵素の構造を安定させ、変
性を防止する作用を有する。パパイン、トリプシン、キ
モトリプシン等のタンパク質に認められるタンパク質分
解活性を示さない、可溶性のタンパク質であれば、上記
の目的で用いることは可能であるが、アルブミンで総称
される以下の可溶性タンパク質、即ち、オボアルブミ
ン、ラクトアルブミン、血清アルブミン、ロイコシン、
レグメリン、リシンから選ばれる一種類以上のタンパク
質を用いることが好ましく、特にウシ血清アルブミン
（ＢＳＡ）を用いることが望ましい。アルブミンの添加
量は、ＡＴＰ加水分解酵素を含む緩衝液１ｍｌ当たり
０．１〜５０ｍｇ、好ましくは０．５〜１０ｍｇが望ま
しい。
【００１７】本発明のＡＴＰ加水分解酵素の安定化方法
に用いられる防腐剤は、混入する微生物の影響を最小限
にするためのもので、ペニシリンＧ−Ｎａ塩、ペニシリ
ンＧ−Ｋ塩、アンピシリン、クロラムフェニコール、ス
トレプトマイシン、カナマイシン、テトラサイクリン、
オキシテロラサイクリンなどの抗生物質、アジ化ナトリ
ウムなどのアジ化物、クレゾールなどのフェノール化合
物、乳酸、クエン酸、安息香酸、プロピオン酸、デヒド
ロ酢酸、オキシ安息香酸、ソルビン酸などの酸が挙げら
れる。この中で、特にアジ化ナトリウムを用いることが
好ましい。防腐剤の添加量は、ＡＴＰ加水分解酵素を含
む緩衝液の０．０１〜５．０％、好ましくは０．０５〜
２．０％が望ましい。
に用いられる防腐剤は、混入する微生物の影響を最小限
にするためのもので、ペニシリンＧ−Ｎａ塩、ペニシリ
ンＧ−Ｋ塩、アンピシリン、クロラムフェニコール、ス
トレプトマイシン、カナマイシン、テトラサイクリン、
オキシテロラサイクリンなどの抗生物質、アジ化ナトリ
ウムなどのアジ化物、クレゾールなどのフェノール化合
物、乳酸、クエン酸、安息香酸、プロピオン酸、デヒド
ロ酢酸、オキシ安息香酸、ソルビン酸などの酸が挙げら
れる。この中で、特にアジ化ナトリウムを用いることが
好ましい。防腐剤の添加量は、ＡＴＰ加水分解酵素を含
む緩衝液の０．０１〜５．０％、好ましくは０．０５〜
２．０％が望ましい。
【００１８】ＡＴＰ加水分解酵素の安定化には、キレー
ト剤が共存することも効果のある場合がある。キレート
剤は、主に重金属の捕捉剤として作用するものである
が、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ、商品名Ｖｅｒ
ｓｅｎｅ）、ビス−（Ｏ−アミノフェノキシ）−エタン
−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸（ＢＡＰＴＡ）、エチレ
ングリコール−ビス−（β−アミノエチルエーテル）
Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸（ＥＧＴＡ）、ニトリロ三
酢酸（トリグリシン、アンモニア三酢酸塩、トリロン
Ａ）、トランス−１，２−ジアミノシクロヘキサン四酢
酸（ＣＤＴＡ）、ジエチレントリアミノペンタ酢酸（Ｄ
ＴＰＡ）、クエン酸塩、アルギニン、ハイポザンチン、
４，５−ジヒドリキシベンゼン−１，３−ジスルホン
酸、クラウンエーテルタイプ化合物およびこれら分子の
全ての誘導体および前駆体などを使用することができ
る。
ト剤が共存することも効果のある場合がある。キレート
剤は、主に重金属の捕捉剤として作用するものである
が、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ、商品名Ｖｅｒ
ｓｅｎｅ）、ビス−（Ｏ−アミノフェノキシ）−エタン
−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸（ＢＡＰＴＡ）、エチレ
ングリコール−ビス−（β−アミノエチルエーテル）
Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸（ＥＧＴＡ）、ニトリロ三
酢酸（トリグリシン、アンモニア三酢酸塩、トリロン
Ａ）、トランス−１，２−ジアミノシクロヘキサン四酢
酸（ＣＤＴＡ）、ジエチレントリアミノペンタ酢酸（Ｄ
ＴＰＡ）、クエン酸塩、アルギニン、ハイポザンチン、
４，５−ジヒドリキシベンゼン−１，３−ジスルホン
酸、クラウンエーテルタイプ化合物およびこれら分子の
全ての誘導体および前駆体などを使用することができ
る。
【００１９】また、キレート剤と同様、タンパク質ＳＨ
基保護剤が共存することもＡＴＰ加水分解酵素の安定化
に効果のある場合がある。タンパク質ＳＨ基保護剤は、
ＡＴＰ加水分解酵素の活性中心に存在するＳＨ基を保護
し安定して作用させるためのもので、グルタチオン、ジ
チオスレイトール（ＤＴＴ）、メルカプトエタノール、
エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）などを使用するこ
とができるが、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）が特に好
ましい。
基保護剤が共存することもＡＴＰ加水分解酵素の安定化
に効果のある場合がある。タンパク質ＳＨ基保護剤は、
ＡＴＰ加水分解酵素の活性中心に存在するＳＨ基を保護
し安定して作用させるためのもので、グルタチオン、ジ
チオスレイトール（ＤＴＴ）、メルカプトエタノール、
エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）などを使用するこ
とができるが、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）が特に好
ましい。
【００２０】ＡＴＰ加水分解酵素はカルシウムイオンや
マグネシウムイオンにより活性化することが認められて
おり、ＡＴＰ加水分解酵素を安定化させる目的で、これ
らのイオンが共存することが望ましい。その添加量は、
カルシウムイオンは０．１〜５０ｍＭ、好ましくは１〜
２０ｍＭであり、マグネシウムイオンはカルシウムイオ
ンの１００分の１〜１０分の１である。
マグネシウムイオンにより活性化することが認められて
おり、ＡＴＰ加水分解酵素を安定化させる目的で、これ
らのイオンが共存することが望ましい。その添加量は、
カルシウムイオンは０．１〜５０ｍＭ、好ましくは１〜
２０ｍＭであり、マグネシウムイオンはカルシウムイオ
ンの１００分の１〜１０分の１である。
【００２１】更に、ＡＴＰ加水分解酵素を安定化させる
目的で、グルコース、フルクトース、アラビノース、キ
シロース、サッカロース、トレハロース、ラクトース、
マルトース、キシロビオースなどの糖類、マンニトー
ル、キシリトール、ズルシトール、ソルビトール、リビ
トール、グルシトールなどの糖アルコール、ＰＥＧ（ポ
リエチレングリコール）＃４００、ＰＥＧ＃６００など
の水溶性高分子、グリシン、セリン、プロリン、グルタ
ミン酸、アラニンなどのアミノ酸、トリメチルアミンな
どのアミン類、グリセロールなどの多価アルコールなど
を添加することもできる。
目的で、グルコース、フルクトース、アラビノース、キ
シロース、サッカロース、トレハロース、ラクトース、
マルトース、キシロビオースなどの糖類、マンニトー
ル、キシリトール、ズルシトール、ソルビトール、リビ
トール、グルシトールなどの糖アルコール、ＰＥＧ（ポ
リエチレングリコール）＃４００、ＰＥＧ＃６００など
の水溶性高分子、グリシン、セリン、プロリン、グルタ
ミン酸、アラニンなどのアミノ酸、トリメチルアミンな
どのアミン類、グリセロールなどの多価アルコールなど
を添加することもできる。
【００２２】本発明のＡＴＰ加水分解酵素の安定化方法
は、水溶液状態でのＡＴＰ加水分解酵素の安定化を目的
としたものであるが、水溶液を凍結あるいは凍結乾燥さ
せた後、融解あるいは適当な溶液を添加して凍結乾燥品
を溶解させた場合も、長期間に渡って高い活性が保持さ
れる。
は、水溶液状態でのＡＴＰ加水分解酵素の安定化を目的
としたものであるが、水溶液を凍結あるいは凍結乾燥さ
せた後、融解あるいは適当な溶液を添加して凍結乾燥品
を溶解させた場合も、長期間に渡って高い活性が保持さ
れる。
【００２３】
【実施例】以下、実施例によって本発明を説明するが、
本発明の範囲がこれらの実施例にのみ限定されるもので
はない。
本発明の範囲がこれらの実施例にのみ限定されるもので
はない。
【００２４】（実施例１）２５ｍＭのＨＥＰＥＳ−Ｎａ
ＯＨ緩衝液（ｐＨ７．０）を用いて、以下のような組成
のＡＴＰ加水分解酵素含有水溶液を調製した。 ＡＴＰ加水分解酵素含有水溶液組成； アピラーゼ（ジャガイモ由来、Ｓｉｇｍａ社製Ｇｒａｄｅ ） ＢＳＡ（ＩＮＴＥＲＧＥＮ社製） １．０ｍｇ／ｍｌ ＮａＮ3 ０ ．１％ ＥＤＴＡ ０．１ｍＭ ＤＴＴ １．０ｍＭ ＣａＣｌ2 ２．０ｍＭ ＭｇＣｌ2 ０．０５ｍＭ なお、上記ＡＴＰ加水分解酵素含有水溶液中の酵素活性
値を、ΔｌｏｇＲＬＵ／分＝２．０となるように調製し
た。
ＯＨ緩衝液（ｐＨ７．０）を用いて、以下のような組成
のＡＴＰ加水分解酵素含有水溶液を調製した。 ＡＴＰ加水分解酵素含有水溶液組成； アピラーゼ（ジャガイモ由来、Ｓｉｇｍａ社製Ｇｒａｄｅ ） ＢＳＡ（ＩＮＴＥＲＧＥＮ社製） １．０ｍｇ／ｍｌ ＮａＮ3 ０ ．１％ ＥＤＴＡ ０．１ｍＭ ＤＴＴ １．０ｍＭ ＣａＣｌ2 ２．０ｍＭ ＭｇＣｌ2 ０．０５ｍＭ なお、上記ＡＴＰ加水分解酵素含有水溶液中の酵素活性
値を、ΔｌｏｇＲＬＵ／分＝２．０となるように調製し
た。
【００２５】本発明では、ＡＴＰ加水分解酵素の活性値
を、ＡＴＰ加水分解酵素によって基質であるＡＴＰが加
水分解される速度をもって表す。従って、酵素活性の測
定は被検液中のＡＴＰ量の減少を経時的に測定すること
で実施され、被検液中のＡＴＰ量は、ＡＴＰの鋭敏な定
量法であるホタルルシフェラーゼを用いた生物発光反応
から得られる相対発光量（ＲＬＵ；相対発光量、R elat
ive L ightU nit ）を指標として測定される。本発明で
は、非連続的に被検液より一定量を採取してＡＴＰ量を
生物発光反応（ルシフェリン／ホタルルシフェラーゼを
含有する発光試薬（東洋インキ製造（株）製 商品名：
菌士郎）を用いる）で測定し、得られた値から１分間当
たりの相対発光量の対数値の減少量（ΔｌｏｇＲＬＵ／
分）を計算し、その値をもってＡＴＰ加水分解酵素の活
性値とした。
を、ＡＴＰ加水分解酵素によって基質であるＡＴＰが加
水分解される速度をもって表す。従って、酵素活性の測
定は被検液中のＡＴＰ量の減少を経時的に測定すること
で実施され、被検液中のＡＴＰ量は、ＡＴＰの鋭敏な定
量法であるホタルルシフェラーゼを用いた生物発光反応
から得られる相対発光量（ＲＬＵ；相対発光量、R elat
ive L ightU nit ）を指標として測定される。本発明で
は、非連続的に被検液より一定量を採取してＡＴＰ量を
生物発光反応（ルシフェリン／ホタルルシフェラーゼを
含有する発光試薬（東洋インキ製造（株）製 商品名：
菌士郎）を用いる）で測定し、得られた値から１分間当
たりの相対発光量の対数値の減少量（ΔｌｏｇＲＬＵ／
分）を計算し、その値をもってＡＴＰ加水分解酵素の活
性値とした。
【００２６】（実施例２）実施例１の２５ｍＭのＨＥＰ
ＥＳ−ＮａＯＨ緩衝液（ｐＨ７．０）の代わりに２５ｍ
ＭのＭＥＳ緩衝液（ｐＨ６．５）を用いて、その他は実
施例１と全く同様の組成でＡＴＰ加水分解酵素含有水溶
液を調製した。
ＥＳ−ＮａＯＨ緩衝液（ｐＨ７．０）の代わりに２５ｍ
ＭのＭＥＳ緩衝液（ｐＨ６．５）を用いて、その他は実
施例１と全く同様の組成でＡＴＰ加水分解酵素含有水溶
液を調製した。
【００２７】（実施例３）実施例１の２５ｍＭのＨＥＰ
ＥＳ−ＮａＯＨ緩衝液（ｐＨ７．０）の代わりに１０ｍ
ＭのＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を用いて、その他
は実施例１と全く同様の組成でＡＴＰ加水分解酵素含有
水溶液を調製した。
ＥＳ−ＮａＯＨ緩衝液（ｐＨ７．０）の代わりに１０ｍ
ＭのＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を用いて、その他
は実施例１と全く同様の組成でＡＴＰ加水分解酵素含有
水溶液を調製した。
【００２８】（実施例４）実施例１のＢＳＡの代わりに
オボアルブミン（ニワトリ卵由来、Ｓｉｇｍａ社製Ｇｒ
ａｄｅ ）を用いて、その他は実施例１と全く同様の組
成でＡＴＰ加水分解酵素含有水溶液を調製した。
オボアルブミン（ニワトリ卵由来、Ｓｉｇｍａ社製Ｇｒ
ａｄｅ ）を用いて、その他は実施例１と全く同様の組
成でＡＴＰ加水分解酵素含有水溶液を調製した。
【００２９】（実施例５）実施例１のアピラーゼの代わ
りにアデノシントリホスファターゼ（カエル腎由来、Ｓ
ｉｇｍａ社製）を用いて、その他は実施例１と全く同様
の組成でＡＴＰ加水分解酵素含有水溶液を調製した。
りにアデノシントリホスファターゼ（カエル腎由来、Ｓ
ｉｇｍａ社製）を用いて、その他は実施例１と全く同様
の組成でＡＴＰ加水分解酵素含有水溶液を調製した。
【００３０】（比較例１）実施例１の２５ｍＭのＨＥＰ
ＥＳ−ＮａＯＨ緩衝液（ｐＨ７．０）の代わりに２５ｍ
Ｍのコハク酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．０）を用い
て、その他は実施例１と全く同様の組成でＡＴＰ加水分
解酵素含有水溶液を調製した。
ＥＳ−ＮａＯＨ緩衝液（ｐＨ７．０）の代わりに２５ｍ
Ｍのコハク酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．０）を用い
て、その他は実施例１と全く同様の組成でＡＴＰ加水分
解酵素含有水溶液を調製した。
【００３１】（比較例２）実施例１の２５ｍＭのＨＥＰ
ＥＳ−ＮａＯＨ緩衝液（ｐＨ７．０）の代わりに２５ｍ
ＭのＧＴＡ緩衝液（ｐＨ９．０）（「蛋白質・酵素の基
礎実験法」４３５頁記載）を用いて、その他は実施例１
と全く同様の組成でＡＴＰ加水分解酵素含有水溶液を調
製した。
ＥＳ−ＮａＯＨ緩衝液（ｐＨ７．０）の代わりに２５ｍ
ＭのＧＴＡ緩衝液（ｐＨ９．０）（「蛋白質・酵素の基
礎実験法」４３５頁記載）を用いて、その他は実施例１
と全く同様の組成でＡＴＰ加水分解酵素含有水溶液を調
製した。
【００３２】（比較例３）実施例１に示されたＡＴＰ加
水分解酵素含有水溶液より、ＢＳＡを除いた組成のＡＴ
Ｐ加水分解酵素含有水溶液を調製した。
水分解酵素含有水溶液より、ＢＳＡを除いた組成のＡＴ
Ｐ加水分解酵素含有水溶液を調製した。
【００３３】（比較例４）実施例１に示されたＡＴＰ加
水分解酵素含有水溶液より、ＮａＮ3 を除いた組成のＡ
ＴＰ加水分解酵素含有水溶液を調製した。
水分解酵素含有水溶液より、ＮａＮ3 を除いた組成のＡ
ＴＰ加水分解酵素含有水溶液を調製した。
【００３４】実施例１〜５、及び比較例１〜４に示され
たＡＴＰ加水分解酵素含有水溶液の調製直後のＡＴＰ加
水分解酵素活性値を、上記の方法で測定後、内面を撥水
処理したガラス瓶に入れ、それぞれ４℃、２５℃、３５
℃で４８時間保ち、再度ＡＴＰ加水分解酵素活性値を測
定した。（４８時間後のＡＴＰ加水分解酵素活性値／調
製直後のＡＴＰ加水分解酵素活性値）×１００の値を計
算し、これをもって酵素活性の保持率（％）とした。表
１に実施例１〜５、及び比較例１〜４の酵素活性の保持
率を示した。本発明のＡＴＰ加水分解酵素の安定化方法
の条件を満足する実施例１〜５では、４８時間後も酵素
活性は高く保持されることが認められたが、比較例１〜
４の条件では酵素活性の保持率が低く、ＡＴＰ加水分解
酵素の安定化方法としては不適切であった。
たＡＴＰ加水分解酵素含有水溶液の調製直後のＡＴＰ加
水分解酵素活性値を、上記の方法で測定後、内面を撥水
処理したガラス瓶に入れ、それぞれ４℃、２５℃、３５
℃で４８時間保ち、再度ＡＴＰ加水分解酵素活性値を測
定した。（４８時間後のＡＴＰ加水分解酵素活性値／調
製直後のＡＴＰ加水分解酵素活性値）×１００の値を計
算し、これをもって酵素活性の保持率（％）とした。表
１に実施例１〜５、及び比較例１〜４の酵素活性の保持
率を示した。本発明のＡＴＰ加水分解酵素の安定化方法
の条件を満足する実施例１〜５では、４８時間後も酵素
活性は高く保持されることが認められたが、比較例１〜
４の条件では酵素活性の保持率が低く、ＡＴＰ加水分解
酵素の安定化方法としては不適切であった。
【００３５】
【表１】
【００３６】実施例１、及び比較例１〜４に示されたＡ
ＴＰ加水分解酵素含有水溶液の、調製直後のＡＴＰ加水
分解酵素活性値を上記の方法で測定後、内面を撥水処理
したガラス瓶に入れ、−２０℃で凍結させた。１日後に
これを２５℃で融解させ、溶液を混和後ＡＴＰ加水分解
酵素活性値を測定した。再度これを−２０℃で凍結さ
せ、翌日融解後ＡＴＰ加水分解酵素活性値を測定すると
いう操作を更に二度繰り返した。それぞれのＡＴＰ加水
分解酵素活性値から、前述の計算方法と同様にして１日
目、２日目、及び３日目の酵素活性の保持率（％）を計
算した。表２に、実施例１、及び比較例１〜４の酵素活
性の保持率を示した。本発明のＡＴＰ加水分解酵素の安
定化方法では、凍結−融解を繰り返しても酵素活性は高
く保持されることが認められたが、比較例１〜４の条件
では、凍結−融解を一度行っただけで酵素活性が大きく
低下し、ＡＴＰ加水分解酵素の安定化方法としては不適
切であった。ＡＴＰ加水分解酵素を、ＡＴＰの測定や、
生体適合性の抗血栓材料の製造、血小板の洗浄等に用い
る場合、余ったＡＴＰ加水分解酵素含有水溶液を凍結保
存する方法が取られるが、本発明のＡＴＰ加水分解酵素
の安定化方法は、ＡＴＰ加水分解酵素含有水溶液の凍結
保存にも有効であることが認められた。
ＴＰ加水分解酵素含有水溶液の、調製直後のＡＴＰ加水
分解酵素活性値を上記の方法で測定後、内面を撥水処理
したガラス瓶に入れ、−２０℃で凍結させた。１日後に
これを２５℃で融解させ、溶液を混和後ＡＴＰ加水分解
酵素活性値を測定した。再度これを−２０℃で凍結さ
せ、翌日融解後ＡＴＰ加水分解酵素活性値を測定すると
いう操作を更に二度繰り返した。それぞれのＡＴＰ加水
分解酵素活性値から、前述の計算方法と同様にして１日
目、２日目、及び３日目の酵素活性の保持率（％）を計
算した。表２に、実施例１、及び比較例１〜４の酵素活
性の保持率を示した。本発明のＡＴＰ加水分解酵素の安
定化方法では、凍結−融解を繰り返しても酵素活性は高
く保持されることが認められたが、比較例１〜４の条件
では、凍結−融解を一度行っただけで酵素活性が大きく
低下し、ＡＴＰ加水分解酵素の安定化方法としては不適
切であった。ＡＴＰ加水分解酵素を、ＡＴＰの測定や、
生体適合性の抗血栓材料の製造、血小板の洗浄等に用い
る場合、余ったＡＴＰ加水分解酵素含有水溶液を凍結保
存する方法が取られるが、本発明のＡＴＰ加水分解酵素
の安定化方法は、ＡＴＰ加水分解酵素含有水溶液の凍結
保存にも有効であることが認められた。
【００３７】
【表２】
【００３８】実施例１、及び比較例１〜４に示されたＡ
ＴＰ加水分解酵素含有水溶液の、調製直後のＡＴＰ加水
分解酵素活性値を上記の方法で測定後、内面を撥水処理
したガラス瓶に入れ、ＬＡＢＣＯＮＣＯ凍結乾燥システ
ムを用いて凍結乾燥させた。これを４℃で保存し、１カ
月、３カ月、及び６カ月後に蒸留水を加えて溶解し、溶
液のＡＴＰ加水分解酵素活性値を測定した。それぞれの
ＡＴＰ加水分解酵素活性値から、前述の計算方法と同様
にして１カ月後、３カ月後、及び６カ月後の酵素活性の
保持率（％）を計算した。表３に、実施例１、及び比較
例１〜４の酵素活性の保持率を示した。本発明のＡＴＰ
加水分解酵素の安定化方法では、凍結乾燥後も酵素活性
は高く保持されることが認められたが、比較例１〜４の
条件では、凍結乾燥により酵素活性が大きく低下し、Ａ
ＴＰ加水分解酵素の安定化方法としては不適切であっ
た。本発明のＡＴＰ加水分解酵素の安定化方法は、ＡＴ
Ｐ加水分解酵素含有水溶液の凍結乾燥にも有効であるこ
とが認められた。
ＴＰ加水分解酵素含有水溶液の、調製直後のＡＴＰ加水
分解酵素活性値を上記の方法で測定後、内面を撥水処理
したガラス瓶に入れ、ＬＡＢＣＯＮＣＯ凍結乾燥システ
ムを用いて凍結乾燥させた。これを４℃で保存し、１カ
月、３カ月、及び６カ月後に蒸留水を加えて溶解し、溶
液のＡＴＰ加水分解酵素活性値を測定した。それぞれの
ＡＴＰ加水分解酵素活性値から、前述の計算方法と同様
にして１カ月後、３カ月後、及び６カ月後の酵素活性の
保持率（％）を計算した。表３に、実施例１、及び比較
例１〜４の酵素活性の保持率を示した。本発明のＡＴＰ
加水分解酵素の安定化方法では、凍結乾燥後も酵素活性
は高く保持されることが認められたが、比較例１〜４の
条件では、凍結乾燥により酵素活性が大きく低下し、Ａ
ＴＰ加水分解酵素の安定化方法としては不適切であっ
た。本発明のＡＴＰ加水分解酵素の安定化方法は、ＡＴ
Ｐ加水分解酵素含有水溶液の凍結乾燥にも有効であるこ
とが認められた。
【００３９】
【表３】
【００４０】
【発明の効果】本発明は、ＡＴＰの測定、血小板凝集抑
制剤、生体適合性の抗血栓材料の製造、血小板の洗浄等
に不可欠なＡＴＰ加水分解酵素を安定化させる方法であ
り、ＡＴＰ加水分解酵素をｐＨ６．０〜８．０の緩衝液
中でアルブミン及び防腐剤、更にキレート剤やタンパク
質ＳＨ基保護剤等を共存させることで、ＡＴＰ加水分解
酵素を安定化させることができた。本発明により、ＡＴ
Ｐ加水分解酵素を、種々の固定化方法を用いることな
く、長期間に渡って高い活性を保持させることが可能で
あった。また、本発明のＡＴＰ加水分解酵素の安定化方
法は、ＡＴＰ加水分解酵素含有水溶液の凍結、及び凍結
乾燥後の活性保持にも有効であった。
制剤、生体適合性の抗血栓材料の製造、血小板の洗浄等
に不可欠なＡＴＰ加水分解酵素を安定化させる方法であ
り、ＡＴＰ加水分解酵素をｐＨ６．０〜８．０の緩衝液
中でアルブミン及び防腐剤、更にキレート剤やタンパク
質ＳＨ基保護剤等を共存させることで、ＡＴＰ加水分解
酵素を安定化させることができた。本発明により、ＡＴ
Ｐ加水分解酵素を、種々の固定化方法を用いることな
く、長期間に渡って高い活性を保持させることが可能で
あった。また、本発明のＡＴＰ加水分解酵素の安定化方
法は、ＡＴＰ加水分解酵素含有水溶液の凍結、及び凍結
乾燥後の活性保持にも有効であった。
Claims (6)
- 【請求項１】 ＡＴＰ加水分解酵素をｐＨ６．０〜８．
０の緩衝液中でアルブミン及び防腐剤を共存させること
を特徴とするＡＴＰ加水分解酵素の安定化方法。 - 【請求項２】 ＡＴＰ加水分解酵素をｐＨ６．０〜８．
０の緩衝液中でアルブミン及び防腐剤を共存させ、更に
キレート剤を共存させることを特徴とする請求項１記載
のＡＴＰ加水分解酵素の安定化方法。 - 【請求項３】 ＡＴＰ加水分解酵素をｐＨ６．０〜８．
０の緩衝液中でアルブミン及び防腐剤を共存させ、更に
タンパク質ＳＨ基保護剤を共存させることを特徴とする
請求項１記載のＡＴＰ加水分解酵素の安定化方法。 - 【請求項４】 ＡＴＰ加水分解酵素がアピラーゼである
請求項１、請求項２または請求項３記載のＡＴＰ加水分
解酵素の安定化方法。 - 【請求項５】 ｐＨ６．０〜８．０の緩衝液がグッドの
緩衝液で総括される緩衝液のうちの１つである請求項
１、請求項２または請求項３記載のＡＴＰ加水分解酵素
の安定化方法。 - 【請求項６】 アルブミンがウシ血清アルブミンである
請求項１、請求項２または請求項３記載のＡＴＰ加水分
解酵素の安定化方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP345397A JPH10191972A (ja) | 1997-01-13 | 1997-01-13 | Ａｔｐ加水分解酵素の安定化方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP345397A JPH10191972A (ja) | 1997-01-13 | 1997-01-13 | Ａｔｐ加水分解酵素の安定化方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH10191972A true JPH10191972A (ja) | 1998-07-28 |
Family
ID=11557756
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP345397A Pending JPH10191972A (ja) | 1997-01-13 | 1997-01-13 | Ａｔｐ加水分解酵素の安定化方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH10191972A (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001044441A1 (en) * | 1999-12-14 | 2001-06-21 | Thermo Biostar, Inc. | Stabilizing diluent for polypeptides and antigens |
| WO2005061701A1 (ja) * | 2003-12-24 | 2005-07-07 | Shionogi & Co., Ltd. | タンパク質のポリマー複合体の製造方法 |
| WO2006073073A1 (ja) * | 2005-01-07 | 2006-07-13 | Yamasa Corporation | 安定化されたオルニチントランスカルバミラーゼ及びそれを用いたオルニチントランスカルバミラーゼの免疫学的測定法 |
| JP2006325547A (ja) * | 2005-05-30 | 2006-12-07 | Kikkoman Corp | フルクトシルペプチドオキシダ−ゼの安定化方法 |
| JP2017533718A (ja) * | 2014-11-13 | 2017-11-16 | スリーエム イノベイティブ プロパティズ カンパニー | 試料中の細菌ａｔｐを検出するためのａｔｐ−ジホスホヒドロラーゼを含むキット |
-
1997
- 1997-01-13 JP JP345397A patent/JPH10191972A/ja active Pending
Cited By (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001044441A1 (en) * | 1999-12-14 | 2001-06-21 | Thermo Biostar, Inc. | Stabilizing diluent for polypeptides and antigens |
| US6579688B2 (en) | 1999-12-14 | 2003-06-17 | Biostar, Inc. | Stabilizing diluent for polypeptides and antigens |
| WO2005061701A1 (ja) * | 2003-12-24 | 2005-07-07 | Shionogi & Co., Ltd. | タンパク質のポリマー複合体の製造方法 |
| JPWO2005061701A1 (ja) * | 2003-12-24 | 2007-07-19 | 塩野義製薬株式会社 | タンパク質のポリマー複合体の製造方法 |
| JP4726128B2 (ja) * | 2003-12-24 | 2011-07-20 | 塩野義製薬株式会社 | タンパク質のポリマー複合体の製造方法 |
| WO2006073073A1 (ja) * | 2005-01-07 | 2006-07-13 | Yamasa Corporation | 安定化されたオルニチントランスカルバミラーゼ及びそれを用いたオルニチントランスカルバミラーゼの免疫学的測定法 |
| JPWO2006073073A1 (ja) * | 2005-01-07 | 2008-06-12 | ヤマサ醤油株式会社 | 安定化されたオルニチントランスカルバミラーゼ及びそれを用いたオルニチントランスカルバミラーゼの免疫学的測定法 |
| JP4824581B2 (ja) * | 2005-01-07 | 2011-11-30 | ヤマサ醤油株式会社 | 安定化されたオルニチントランスカルバミラーゼ及びそれを用いたオルニチントランスカルバミラーゼの免疫学的測定法 |
| JP2006325547A (ja) * | 2005-05-30 | 2006-12-07 | Kikkoman Corp | フルクトシルペプチドオキシダ−ゼの安定化方法 |
| JP2017533718A (ja) * | 2014-11-13 | 2017-11-16 | スリーエム イノベイティブ プロパティズ カンパニー | 試料中の細菌ａｔｐを検出するためのａｔｐ−ジホスホヒドロラーゼを含むキット |
| US10415073B2 (en) * | 2014-11-13 | 2019-09-17 | 3M Innovative Properties Company | Kit comprising ATP-diphosphohydrolase for detecting bacterial ATP in a sample |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Zhang et al. | The Cys (X) 5Arg catalytic motif in phosphoester hydrolysis | |
| CN102115737B (zh) | 稳定碱性磷酸酶或其标记物的试剂和方法 | |
| JP2739050B2 (ja) | 抗血液凝固剤 | |
| JPH08187095A (ja) | コレステロールオキシダーゼの安定化法 | |
| EP2408909B1 (en) | Improved blends containing proteases | |
| JPH10191972A (ja) | Ａｔｐ加水分解酵素の安定化方法 | |
| US6387634B2 (en) | Stable composition comprising a nuclease and a phosphatase | |
| EP0726076B1 (en) | Method of stabilizing protein c or activated protein c and stabilized composition | |
| JPH07227282A (ja) | Ｌ−メチオニン γ−リアーゼの安定化法 | |
| CA1283047C (en) | Stabilized plasminogen activator precursor and method of producing the same | |
| JP5119545B2 (ja) | 蛋白質を含む液状組成物中における蛋白質の安定化方法 | |
| JP2500330B2 (ja) | 血栓溶解能を有する生体適合性材料 | |
| JP3696267B2 (ja) | 生理活性蛋白質の安定化方法 | |
| Fasco et al. | Specificity of thrombin: I. Esterolytic properties of thrombin, plasma, trypsin, and chymotrypsin with Nβ-substituted guanidino derivatives of p-nitrophenyl-p′-guanidinobenzoate | |
| Wu et al. | Rabies virus nucleoprotein is phosphorylated by cellular casein kinase II | |
| JPS5925684A (ja) | 安定なパラ−ヒドロキシ安息香酸水酸化酵素組成物 | |
| CA2616426C (en) | Enhancement of vanadium-containing phosphatase inhibitors | |
| EP0456567B1 (fr) | Procédé de détermination d'un activateur du plasminogène et de son inhibiteur | |
| JP2003043035A (ja) | 液状試薬原料の製造方法および組成物 | |
| JPS63230085A (ja) | 安定なフラクト−スデヒドロゲナ−ゼ組成物 | |
| JP2003066040A (ja) | 液状試薬原料の製造方法および組成物 | |
| Yamafuji | Presence of Deoxyribonuclease in Silk-worm Polyhedral Virus | |
| EP0857202B1 (en) | Method for inhibiting chymopapain and papain enzyme activity with polysaccharides of animal origin | |
| JP2000032980A (ja) | グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼの安定化方法およびグルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ含有組成物 | |
| JPS6255081A (ja) | 安定なキサンチン酸化酵素組成物 |