JPS63230085A - 安定なフラクト−スデヒドロゲナ−ゼ組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、安定なりラフトースデヒドロゲ＋−ゼ（以下
ＦＤＨ）組成物、特にＦＤＨの凍結乾燥物に関するもの
である。ここでいうＦＤＨは酵素番号（ＥＣ，１１，９
９，１１）であって、現在までのところ、細菌に存在す
るものが知られている。

ＦＤＨの反応は以下の通りである。

■■ Ｄ−クラフトスス＋受容体−−→５−ケト−Ｄ−乃りド
ース＋還元型受容体ＦＤＨは基質特異性がすぐれており
、Ｄ−フラクトース以外の糖、糖アルコール等には作用
しない〔給出、定立の報告（ジャーナル　オブ　バクテ
リオロリーＶｏ１．１４５．ｍ２１９８１）参照〕。し
たがって、ＦＤＨを用いれば生体中又は食品中あるいは
、農産物中のフラクトース量を正確に測定することがで
き、農業、食品業あるいは臨床検査等の分野への利用が
期待されている。

（従来の技術） ＦＤＨは、細菌の膜画分に存在するため、例えば非界面
活性剤トリトンＸ−１００により可溶化され、精製され
る。精製されたＦＤＨは、溶液状態では２５℃以上の高
温になると活性の低下が著しく、また低温でも、長期間
保存すると活性の低乍がみられる。

また、トリトンＸ−１００，ツイーン２０等の液状の非
界面活性剤は、凍結乾燥に不適であり、それ故、トリト
ンＸ−１００等の非存在下では、活性を保持できない。

ＦＤＨの凍結乾燥は令名成功していなかった。

（発明の解決しようとする問題点） このように、ＦＤＨはハンドリングの良い状咀での長期
保存が困難であり、産業上利用するためには、非常に不
適な酵素形態であった。そのためハンドリングの良い安
定な酵素形態を創出することが必要であり、この事は、
安定なＦＤ）Ｉの凍結乾燥物を創出することにより解決
される。

（問題を解決するための手段） 本発明者は、ＦＤＨの凍結乾燥物について、種々鋭意研
究した結果本発明に到達した。すなわち、本発明はＦＤ
Ｈ，（ｉ）蛋白質、糖、糖アルコールおよびアミノ酸も
しくはその塩からなる群がら選ばれた１種又は２種以上
の化合物およびθ０し非イオン界面活性剤を含有するこ
とを特徴とする安定なフラクトースデヒドロゲナーゼ組
成物である。

一般にトリトンＸ−１００，ツイーン２０等の液状の非
界面活性剤は凍結乾燥に適さないとされている。しかし
、本発明者等は凍結乾燥に供する酵素液中の蛋白質濃度
、安定剤の種類、安定化剤のＣ度を調整することにより
、液状非界面活性剤の存在下でも安定なＦＤＨの凍結乾
燥物を創出することに成功し、本発明に到達した。

本発明のＦＤＨは、酵素番号（ＥＣ，１，１，９９，１
１）であって、細菌の膜画分にその活性が認められ、例
えばトリトンＸ−１００によって可溶化し、精製される
。このＦＤＨは、活性保持のため、例えばトリトンＸ−
１００を常時添加しておく必要があり、そのため、ＦＤ
Ｈの凍結乾燥物は令名創出されていなかった。しかし、
本発明では、蛋白質、糖、糖アルコール、アミノ酸又は
その塩を添加し、かつ、トリトンＸ−１００等の非イオ
ン界面活性剤の存在下、安定なＦＤＨの凍結乾燥物を創
出することに成功し、本発明に到達した。

本発明に用いる蛋白質としては、牛血清アルブミン等が
ある。

蛋白質の添加量は凍結乾燥前の酵素液中濃度０．１％以
上が好ましい。

本発明に用いる糖としては、ブドウ糖、ガラクトース、
キシロース、フラクトース等の単糖類、乳糖、マルトー
スの二糖類があるが、特にシロ糖、フラクトースが好ま
しい。糖アルコールトシテは、マンニトール、ソルビト
ール、キシリトール等があるが、特にマンニトール、ソ
ルビトールが好ましい。糖、糖アルコールの添加量は凍
結乾燥前の酵素液中濃度０．１％以上が好ましく、０．
１％以下では効果が期待されない。

本発明に用いるアミノ酸もしくはその塩としては、グリ
シン、アルギニン等の親水性のアミノ酸もしくはそのナ
トリウム、カリウム、アンモニウム等の塩または塩酸塩
などがある。アミノ酸としてはアルギニン−塩酸塩が好
ましい。アミノ臭酸またはその塩の添加量は、凍結乾燥
前の酵素液中濃度０．１％以上が好ましく、０．１％以
下では効果が期待されない。

本発明に用いる非イオン界面活性剤としては、ポリエチ
レングリコールエーテル型非イオン界面活性剤（例えば
トリトンＸ−１００）、ソルビタンエステル型エチレン
オキサイド非イオン界面活性剤（例えばツイーン２０）
などが挙げられる。

本発明に用いる非イオン界面活性剤の濃度は、ＦＤＨの
活性の保持のため凍結乾燥前の酵素液中濃度０．０１％
以上であることが望ましい。

本発明の安定化剤の配合法は、特に制限はない。例えば
ＦＤＨを含む緩衝液に安定化剤を配合する方法、安定化
剤を含む緩衝液にＦＤＨを配合する方法、あるいはＦＤ
Ｈと安定化剤を緩衝液に同時に配合する方法などがある
。

緩衝液としては、マツキルパイン緩衝液、酢酸緩衝液、
その他生化学で用いられる緩衝液なら何れでも良いが、
ｐＨは４．０〜７．０望ましくはｐ　Ｈ４，５〜６．０
である。

また、凍結乾燥前の酵素液中に、安定化剤、ＦＤＨの他
に他の酵素を含んでもよく、またこの他の酵素は１種で
はなく多種混合してもよい。

凍結乾燥法は特に制限はなく、常法に従う。本発明の組
成物は凍結乾燥物に限られず、溶液状態であってもよい
。

（発明の効果） 本発明ではＦＤＨに蛋白質、糖、糖アルコールおよびそ
の塩からなる群から選ばれた１種又は２種以上の化合物
を配合し、かつ非イオン界面活性剤の存在下凍結乾燥し
て、安定でしかもハンドリングのよいＦＤＨ凍結乾燥物
として長期保存することが可能になった。

（実施例） 以下本発明を実施例を用いて説明する。

実施例中、ＦＤＨ活性測定は、以下の方法に従った。

下記測定試薬混合液０．９ｍｆｆ１を２５℃で５分加温
し、試料（ＦＤＨ酵素力価１〜４単位／　ｍ　を程度）
を０　、１　ｍ　Ｑ加え撹伴し、正確に５分後、Ｆｅｗ
　（ＳＯ４）３　”デュパノール液を０．５ｍｆｆ１加
え、２０分静置後、３．５　ｍ　ｆｌの蒸留水を加えた
後、８８０ｍｍにおける吸光度を測定した。Ｆ’ＤＨの
力価は、下記式に従って算出する。

測定試薬混合液 マツキルパイン緩衝液ｐＨ４，５０，７ｍｅ１Ｍフラク
トース溶液　　　　　　　　　０．１０．１Ｍフェリシ
アン化カリ溶液０．１０．９ｍＮ Ｆｅ、　　（ＳＯ４）ｓ　　・デュパノール溶液ＳＯＳ
　（ソディウムドデシルサルフエイト）３ｇＦｅｗ　　
（ＳＯ４）３　　’ＩＸＨＩ　０　　　　　　　　　　
　５ｇ８５％　リン酸　　　　　　　　　　　　　　　
　　　９５ｍＱを蒸留水に溶解し１ｇにする。

実施例１ 下記第１表に示される添加剤を溶解したマツキルパイン
ｆＩｉ衝液に０．１％トリトンＸ−１００を含むＦＤＨ
溶液を混合して凍結乾燥を行った。得られた凍結乾燥物
を３７℃、３週間保存した後、再溶解して、酵素活性を
測定した。凍結乾燥前の酵素活性に対する凍結乾燥後の
酵素活性を残存活性（％）として第１表に示す。

参考のため０．１％トリトンＸ−１００を含むＦＤ）Ｉ
溶液を本発明の添加剤を溶解した、マツキルパイン緩衝
液に代えて添加剤を加えないマツチルパイン緩衝液に混
合した場合を第１表に示す。

添加剤を加えない場合、３７℃、３週間後のＦＤＨの残
存活性は、４２．０％であるのに対し、本発明の添加剤
を加えた場合では、３７℃、３週間後でも、ＦＤＨの残
存活性は、良好である。

（以　　下　　余　　白） 第　　　　１　　　　表

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. フラクトースデヒドロゲナーゼ、（ｉ）蛋白質、糖、糖
   アルコールおよびアミノ酸もしくはその塩からなる群か
   ら選ばれた１種又は２種以上の化合物および（ｉｉ）非
   イオン界面活性剤を含有することを特徴とする安定なフ
   ラクトースデヒドロゲナーゼ組成物。