JPS59166084A - 安定な酵素試薬の製造法 - Google Patents
安定な酵素試薬の製造法Info
- Publication number
- JPS59166084A JPS59166084A JP4119283A JP4119283A JPS59166084A JP S59166084 A JPS59166084 A JP S59166084A JP 4119283 A JP4119283 A JP 4119283A JP 4119283 A JP4119283 A JP 4119283A JP S59166084 A JPS59166084 A JP S59166084A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- enzyme
- modified gelatin
- gelatin
- preparation
- containing solution
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、安定な酵素試薬の製造法に関する。
近時、生化学及び臨床化学の著しい進歩にともなって９
体液、たとえば尿や血液中の各種成分を酵素を用いて分
析する方法が繁用されている。たとえば肝機能検査にお
いて下記式（Ｉ）および（ｎ）の原理により血液中のＧ
ＰＴ（グルタミン酸−ピルピン酸トランスアミナーゼ）
やＧＯＴ（グルタミン酸−オキザル酢酸トランスアミナ
ーゼ）を測定する方法がある。
体液、たとえば尿や血液中の各種成分を酵素を用いて分
析する方法が繁用されている。たとえば肝機能検査にお
いて下記式（Ｉ）および（ｎ）の原理により血液中のＧ
ＰＴ（グルタミン酸−ピルピン酸トランスアミナーゼ）
やＧＯＴ（グルタミン酸−オキザル酢酸トランスアミナ
ーゼ）を測定する方法がある。
（ただし、ＮＡＤはニコチンアミドアデニンジヌクレオ
チドであり、ＮＡＤＨは還元型ＮＡＤである）。
チドであり、ＮＡＤＨは還元型ＮＡＤである）。
この場合、連結酵素である乳酸脱水素酵素やリンゴ酸脱
水素酵素及び補酵素ＮＡＤＨは、あらかじめ凍結乾燥し
た形態で供給されるのが一般的である。よく知られてい
るようにこれらの酵素や補酵素は不安定な物質で、凍結
乾燥時及び保存中に一部失活する。そのため酵素試薬の
凍結乾燥時に各種添加物を添加して、安定化をはかる方
法が種々提案されている。たとえば牛血清アルブミンを
はじめ、キレート試薬、チオール類、マンニット（％開
昭４９−１２７６３５号公報）などがある。
水素酵素及び補酵素ＮＡＤＨは、あらかじめ凍結乾燥し
た形態で供給されるのが一般的である。よく知られてい
るようにこれらの酵素や補酵素は不安定な物質で、凍結
乾燥時及び保存中に一部失活する。そのため酵素試薬の
凍結乾燥時に各種添加物を添加して、安定化をはかる方
法が種々提案されている。たとえば牛血清アルブミンを
はじめ、キレート試薬、チオール類、マンニット（％開
昭４９−１２７６３５号公報）などがある。
しかしながら、これら公知の安定化剤は充分な安定効果
が得られなかったり、安定化剤中に混在する不純物質の
ために測定が妨げられたり。
が得られなかったり、安定化剤中に混在する不純物質の
ために測定が妨げられたり。
溶解した際に濁りが生じる等の欠点がある。本発明は、
上記の欠点を改善するべく種々の添加剤を検討し２本発
明を完成した。
上記の欠点を改善するべく種々の添加剤を検討し２本発
明を完成した。
すなわち９本発明は、酵素含有液に変性ゼラチンを添加
して凍結乾燥することを特徴とする安定な酵素試薬の製
造法に関する。
して凍結乾燥することを特徴とする安定な酵素試薬の製
造法に関する。
本発明の酵素としては、ウレアーセ、グルタミン酸脱水
素酵素、ヘキＡ−ゼ、グルコースオキシダーゼ、グルコ
ース−６−リン酸脱水素酵素、コレステロールエステラ
ーゼ、コレステロールオキシダーゼ、リンゴ酸脱水素酵
素、乳酸脱水素酵素、リボプロティンリパーゼ、グリセ
ロキナーゼ、グリセロール−３−リン酸オキシダーゼ、
ロイシンアミノペプチダーゼ、ウリカーゼ、パーオキシ
ダーゼ等があり、これらは目的に応じ二種以上を併用す
ることができる。
素酵素、ヘキＡ−ゼ、グルコースオキシダーゼ、グルコ
ース−６−リン酸脱水素酵素、コレステロールエステラ
ーゼ、コレステロールオキシダーゼ、リンゴ酸脱水素酵
素、乳酸脱水素酵素、リボプロティンリパーゼ、グリセ
ロキナーゼ、グリセロール−３−リン酸オキシダーゼ、
ロイシンアミノペプチダーゼ、ウリカーゼ、パーオキシ
ダーゼ等があり、これらは目的に応じ二種以上を併用す
ることができる。
また、目的に応じ、補酵素が共存していてもよい。
上記酵素は一般に緩衝液に溶解して酵素含有液とされる
。緩衝液は特に制限がなく、使用する酵素に応じて適宜
選択される。例えば、リン酸塩（−水素リン酸塩と二水
素リン酸塩の組合せ、塩としてはＮａ塩、に塩等がある
）、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンと塩酸の
組合せ、ピペラジン−Ｎ 、 Ｎ’−ビス（２−エタン
スルホン酸）と水酸化ナトリウムの組合せ。
。緩衝液は特に制限がなく、使用する酵素に応じて適宜
選択される。例えば、リン酸塩（−水素リン酸塩と二水
素リン酸塩の組合せ、塩としてはＮａ塩、に塩等がある
）、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンと塩酸の
組合せ、ピペラジン−Ｎ 、 Ｎ’−ビス（２−エタン
スルホン酸）と水酸化ナトリウムの組合せ。
バルビタールとその塩（Ｎａ塩、に塩等）の組合せ等の
緩衝剤の水溶液がある。
緩衝剤の水溶液がある。
酵素含有液における酵素の濃度は任意であり。
酵素が溶解した状態が好ましい。
本発明の変性ゼラチンは、ゼラチンの水溶液を加熱処理
して変性されたものであり、この処理により、冷却して
もゲル化しない。上記加熱処理は、約８０〜１２０℃で
、５〜２０分間加熱することにより行なうことができる
。このようにして得られる変性ゼラチンは、平均分子量
が約５，０００〜１０，０００である。変性ゼラチンは
凍結乾燥後の乾燥粉末中に好ましくは５〜８０重量襲、
特に好ましくは、１０〜６０重量裂になるように使用さ
れる。変性ゼラチンが少なすぎると安定化の効果が小さ
くなり、多すぎると乾燥粉末を溶解するのに時間がかか
るようになる。変性ゼラチンは、水溶液の形で使用して
もよい。
して変性されたものであり、この処理により、冷却して
もゲル化しない。上記加熱処理は、約８０〜１２０℃で
、５〜２０分間加熱することにより行なうことができる
。このようにして得られる変性ゼラチンは、平均分子量
が約５，０００〜１０，０００である。変性ゼラチンは
凍結乾燥後の乾燥粉末中に好ましくは５〜８０重量襲、
特に好ましくは、１０〜６０重量裂になるように使用さ
れる。変性ゼラチンが少なすぎると安定化の効果が小さ
くなり、多すぎると乾燥粉末を溶解するのに時間がかか
るようになる。変性ゼラチンは、水溶液の形で使用して
もよい。
また変性ゼラチンの添加時期は酵素溶液の調合時に添加
すればよく、そののち凍結乾燥する凍結乾燥は酵素含有
液を凍結した状態で減圧下に静置すればよく、公知の方
法で実施すればよい。
すればよく、そののち凍結乾燥する凍結乾燥は酵素含有
液を凍結した状態で減圧下に静置すればよく、公知の方
法で実施すればよい。
以上２本発明により得られた酵素試薬は凍結乾燥時及び
保存中の酵素の失活が少なく長期安定性を有する。
保存中の酵素の失活が少なく長期安定性を有する。
まだ、変性ゼラチンは分析精度に影響しない。
実施例１
乳酸脱水素酵素（Ｌ’Ｄ Ｈ、豚心臓由来）６．３００
単位 リンゴ酸脱水素酵素（ＭＤＨ，豚心臓由来）６．３００
単位 ＮＡＤＨにナトリウム塩） １．２ｐ変性ゼ
ラチン（ゼラチン水溶液を１００℃で２０分間加熱処理
して得たもの） ３．０％上記材料を０．１ Ｍ
）リス（ヒドロキシメチル）アミノメタン−塩酸緩衝
液（ｐ Ｈ７，８）に溶解し。
単位 リンゴ酸脱水素酵素（ＭＤＨ，豚心臓由来）６．３００
単位 ＮＡＤＨにナトリウム塩） １．２ｐ変性ゼ
ラチン（ゼラチン水溶液を１００℃で２０分間加熱処理
して得たもの） ３．０％上記材料を０．１ Ｍ
）リス（ヒドロキシメチル）アミノメタン−塩酸緩衝
液（ｐ Ｈ７，８）に溶解し。
容量を１００ゴとした。この溶液１ゴをバイアル結乾燥
後Ｎ、ガスを充填し、ゴム栓で密封した。変性ゼラチン
の量は乾燥物中約６０重量％である。
後Ｎ、ガスを充填し、ゴム栓で密封した。変性ゼラチン
の量は乾燥物中約６０重量％である。
得られた酵素試薬の安定性を検討するため。
３７℃の恒温器に保存し、−週間ごとの酵素及び補酵素
の残存率を調べた。その結果を第１〜３図に示す。
の残存率を調べた。その結果を第１〜３図に示す。
比較例１
実施例１において、変性ゼラチンの代りに牛血清アルブ
ミン３ｚを用いて同様に製剤した酵素試薬の酵素及び補
酵素の残存率を調べた。
ミン３ｚを用いて同様に製剤した酵素試薬の酵素及び補
酵素の残存率を調べた。
第１図は、実施例１および比較例１における酵素試薬（
いずれも、ＧＯＴ測定用酵素試薬）のＬＤＨ残存率を示
し９第２図は同様のＭＤＨ残存率および第３図は同様の
Ｎ Ａ Ｄ Ｈ残存率を示す。
いずれも、ＧＯＴ測定用酵素試薬）のＬＤＨ残存率を示
し９第２図は同様のＭＤＨ残存率および第３図は同様の
Ｎ Ａ Ｄ Ｈ残存率を示す。
いずれの場合も実施例１の酵素試薬のグラフ１゜３およ
び５は、それぞれ、比較例１の酵素試薬のグラフ２，４
および６よりも上位になり９本発明により得られる酵素
試薬の安定性が優れることを示す。
び５は、それぞれ、比較例１の酵素試薬のグラフ２，４
および６よりも上位になり９本発明により得られる酵素
試薬の安定性が優れることを示す。
なお、ＬＤＨの残存率はハンス・ウルリツヒ・ベルブマ
イヤー（Ｈａｎｓ Ｕｌｒｉｃｈ Ｂｅｒｇｍｅｙｅｒ
）編。
イヤー（Ｈａｎｓ Ｕｌｒｉｃｈ Ｂｅｒｇｍｅｙｅｒ
）編。
アカデミツク・プレス（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ
）発行（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ
Ａｎａｌｙｓｉｓ ）第４８０頁に記載の方法および
ＭＤＨの残存率は同第４８５頁に記載の方法により測定
した。ＮＡＤＨの残存率は３４０μｍの吸光度により測
定した。
）発行（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ
Ａｎａｌｙｓｉｓ ）第４８０頁に記載の方法および
ＭＤＨの残存率は同第４８５頁に記載の方法により測定
した。ＮＡＤＨの残存率は３４０μｍの吸光度により測
定した。
素試薬を３７℃で保存したときの酵素試薬中の乳酸脱水
素酵素（ＬＤＨ）’の残存量、第２図は同じ酵素試薬中
のリンゴ酸脱水素酵・素（ＭＤＨ）の残存量および第３
図は同じ酵素試薬を３７℃で保存したときの酵素試薬中
のＮＡＤＨの残存量を示すグラフである。 符号の説明 １．３．５・・・実施例１の酵素試薬に関するグラフ ２．４．６・・・比較例１の酵素試薬に関するグラフ χ １ 図 ０、 ／ Ｚ ３ ４
５礒存 期間 （通） 聞 Ｚ［２１ ０／ ２３ ４５ イテト ｈ１目 μ弓 （週 ）
素酵素（ＬＤＨ）’の残存量、第２図は同じ酵素試薬中
のリンゴ酸脱水素酵・素（ＭＤＨ）の残存量および第３
図は同じ酵素試薬を３７℃で保存したときの酵素試薬中
のＮＡＤＨの残存量を示すグラフである。 符号の説明 １．３．５・・・実施例１の酵素試薬に関するグラフ ２．４．６・・・比較例１の酵素試薬に関するグラフ χ １ 図 ０、 ／ Ｚ ３ ４
５礒存 期間 （通） 聞 Ｚ［２１ ０／ ２３ ４５ イテト ｈ１目 μ弓 （週 ）
Claims (1)
- １、酵素含有液に変性ゼラチンを添加して凍結乾燥する
ことを特徴とする安定な酵素試薬の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4119283A JPS59166084A (ja) | 1983-03-11 | 1983-03-11 | 安定な酵素試薬の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4119283A JPS59166084A (ja) | 1983-03-11 | 1983-03-11 | 安定な酵素試薬の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59166084A true JPS59166084A (ja) | 1984-09-19 |
| JPH0118719B2 JPH0118719B2 (ja) | 1989-04-06 |
Family
ID=12601555
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4119283A Granted JPS59166084A (ja) | 1983-03-11 | 1983-03-11 | 安定な酵素試薬の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS59166084A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH01265032A (ja) * | 1988-01-19 | 1989-10-23 | J M L:Kk | 凍結乾燥Ｃ１ｑおよび凍結乾燥「Ｃ１ｑ・物質」結合物とそれらの製造法 |
| WO1996011264A1 (fr) * | 1994-10-11 | 1996-04-18 | Ajinomoto Co., Inc. | Transglutaminase stabilisee et preparation enzymatique contenant cette transglutaminase |
| WO2007132628A1 (ja) * | 2006-05-11 | 2007-11-22 | Panasonic Corporation | リンゴ酸デヒドロゲナーゼを基板上に固定する方法 |
| WO2008007499A1 (fr) * | 2006-07-13 | 2008-01-17 | Panasonic Corporation | Puce a dosage immunologique electrochimique |
-
1983
- 1983-03-11 JP JP4119283A patent/JPS59166084A/ja active Granted
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH01265032A (ja) * | 1988-01-19 | 1989-10-23 | J M L:Kk | 凍結乾燥Ｃ１ｑおよび凍結乾燥「Ｃ１ｑ・物質」結合物とそれらの製造法 |
| WO1996011264A1 (fr) * | 1994-10-11 | 1996-04-18 | Ajinomoto Co., Inc. | Transglutaminase stabilisee et preparation enzymatique contenant cette transglutaminase |
| JP3651003B2 (ja) * | 1994-10-11 | 2005-05-25 | 味の素株式会社 | 安定化されたトランスグルタミナーゼ及びそれを含む酵素製剤 |
| WO2007132628A1 (ja) * | 2006-05-11 | 2007-11-22 | Panasonic Corporation | リンゴ酸デヒドロゲナーゼを基板上に固定する方法 |
| US7521214B2 (en) | 2006-05-11 | 2009-04-21 | Panasonic Corporation | Method of immobilizing malate dehydrogenase on a substrate |
| WO2008007499A1 (fr) * | 2006-07-13 | 2008-01-17 | Panasonic Corporation | Puce a dosage immunologique electrochimique |
| US7585400B2 (en) | 2006-07-13 | 2009-09-08 | Panasonic Corporation | Chip for electrochemical immunoassay |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0118719B2 (ja) | 1989-04-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Holmes et al. | Human glutamine phosphoribosylpyrophosphate amidotransferase: Two molecular forms interconvertible by purine ribonucleotides and phosphoribosylpyrophosphate | |
| US4883762A (en) | Stabilized isoenzyme control products | |
| EP0049475B1 (en) | Soluble stabilized enzymes | |
| Husain et al. | [44] Reversible resolution of flavoproteins into apoproteins and free flavins | |
| US3929581A (en) | Quantitative determination of blood ammonia | |
| JP3125610B2 (ja) | Ｌ−メチオニン γ−リアーゼの安定化法 | |
| JP2999239B2 (ja) | 安定化酵素組成物およびそれを用いた酵素アッセイ用キット | |
| JPH06284886A (ja) | 酵素の溶液中での安定化方法 | |
| Shen et al. | Physicochemical properties of the diphosphopyridine nucleotide-specific isocitrate dehydrogenase of pig heart | |
| Oguchi | Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase from human erythrocytes | |
| US4339533A (en) | Stabilization of creatine kinase (CK) and its application as a reference standard | |
| JPS59166084A (ja) | 安定な酵素試薬の製造法 | |
| JP3696267B2 (ja) | 生理活性蛋白質の安定化方法 | |
| Marangos et al. | Multiple Forms of Flounder Muscle Glyceraldehyde 3-Phosphate Dehydrogenase: SUBUNIT COMPOSITION, PROPERTIES, AND TISSUE DISTRIBUTION OF THE FORMS | |
| JPH11502410A (ja) | 補酵素還元システムにより安定化されている試薬 | |
| US4684615A (en) | Stabilized isoenzyme control products | |
| JP2909316B2 (ja) | 酵素含有組成物及び酵素活性の安定化方法 | |
| WO1995022602A1 (en) | Isoenzyme calibrator/control products | |
| JP3604198B2 (ja) | 発色基質の安定化方法、試薬及び微量成分の定量法 | |
| JPH0965877A (ja) | 安定化されたグルコース６リン酸脱水素酵素 | |
| JP7446875B2 (ja) | Ｌ－カルニチン測定方法及びｌ－カルニチン測定キット | |
| JP2551923B2 (ja) | 酢酸キナーゼ組成物 | |
| JPS6255081A (ja) | 安定なキサンチン酸化酵素組成物 | |
| JPH0466087A (ja) | 安定化されたアスコルビン酸酸化酵素組成物 | |
| NO753268L (ja) |