JPH10174587A - 新規ペプチド、その製造法および用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【課題】新規生理活性ペプチドの提供。 【解決手段】コルチスタチン様活性又はソマトスタチン
様活性を有するペプチド，その前駆体又はそれらの塩、
該ペプチドをコードするＤＮＡ、組換えベクター、形質
転換体、該ペプチドの製造方法、該ペプチド又はＤＮＡ
を含有してなる医薬、該ペプチドに対する抗体、該ペプ
チドとレセプターとの結合性を変化させる化合物のスク
リーニング方法／スクリーニング用キット、及び該スク
リーニング方法又はスクリーニングキットを用いて得ら
れる化合物又はその塩。 【効果】上記ペプチド、その前駆体又はそれらの塩は、
例えば、ホルモン産生腫瘍、先端巨大症、巨人症、痴呆
症胃、潰瘍等の治療・予防剤、ホルモン分泌抑制剤、腫
瘍増殖抑制剤、神経活動もしくは睡眠の調節剤等の医薬
として有用である。上記ペプチド又はその前駆体をコー
ドするＤＮＡは、上記各種疾病の医薬及び遺伝子診断剤
として有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、新規な生理活性ペ
プチド、特にヒト由来のソマトスタチン様活性またはコ
ルチスタチン様活性を有するペプチドおよびその前駆体
に関する。

【０００２】

【従来の技術】ソマトスタチンは、成長ホルモン抑制因
子としてヒツジ視床下部から単離同定された〔Guillemi
n, R. et al.、サイエンス（Science）、179巻、77-79
頁、1973年〕。ソマトスタチンは１４個のアミノ酸から
成り、３位のＣｙｓと１４位のＣｙｓによるＳ−Ｓ結合
によって環状構造をしている（ソマトスタチン-１
４）。また、ソマトスタチン-１４のＮ端に１４個のア
ミノ酸が付加した、ソマトスタチン-２８も同定されて
いる。ソマトスタチンは、広く中枢神経系に分布し、ま
た末梢では膵臓、消化管などの臓器や末梢神経にも存在
する。現在では、成長ホルモンの分泌抑制のみならず、
甲状腺刺激ホルモン、プロラクチンなどの下垂体ホルモ
ンや、ガストリン、インシュリンなどの消化管ホルモン
分泌を抑制するほか、神経伝達物質としても作用するこ
とが知られている〔Brownstain, M. et al.、エンドク
リノロジー（Endocrinology）、96巻、1456-1461頁、19
75年〕。さらに、細胞増殖をも抑制することが明らかに
された。したがって、ホルモンの過剰分泌や腫瘍増殖を
抑制する目的で、ソマトスタチンの種々の誘導体が合成
され臨床応用が試みられてきた。スクリプス研究所のチ
ームが、ソマトスタチンに類似した構造を有する新しい
神経ペプチドについて報告している。ラットコルチスタ
チン（cortistatin）と名付けられたこのペプチド（前
駆体はプレプロコルチスタチンと呼ばれる）はソマトス
タチンとは違う遺伝子の産物であることが分かってい
る。しかし、コルチスタチンは、睡眠のうちレム睡眠の
相だけを短くする作用があり、大脳皮質に低周波数の波
を生じさせる。また、コルチスタチンは、それ自身がレ
ム睡眠の誘発物質であるアセチルコリンの効果を妨げ
る。コルチスタチンは、神経活動や睡眠の調節物質とし
て働いていると推定されている〔L. de Lecea et al.
ネイチャー(Nature) 381, 16 MAY 1996〕。

【０００３】ソマトスタチンの作用は、ソマトスタチン
が細胞膜上に存在する高親和性で特異的なレセプター
（ソマトスタチンレセプター）と結合し、ＧＴＰ結合蛋
白質を介して細胞内情報伝達系に伝わることによる。最
初に、ソマトスタチンレセプターサブタイプ１（以下、
ＳＳＴＲ１と略称する場合がある）およびサブタイプ２
（以下、ＳＳＴＲ２と略称する場合がある）の構造が決
定され、報告された〔山田ら、プロシージング・オブ・
ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンス・ユー
エスエー（Proc. Natl. Acad. Sci., USA）、89巻、251
-255頁、1992年〕。さらに、サブタイプ３（以下、ＳＳ
ＴＲ３と略称する場合がある）、サブタイプ４（以下、
ＳＳＴＲ４と略称する場合がある）およびサブタイプ５
（以下、ＳＳＴＲ５と略称する場合がある）をコードす
るＤＮＡがクローニングされた（〔ＳＳＴＲ３；山田
ら、モレキュラー・エンドクリノロジー（Molecular En
docrinology）、6巻、2136-2142頁、1992年〕および
〔ＳＳＴＲ４およびＳＳＴＲ５；山田ら、バイオケミカ
ル・アンド・バイオフィジカル・リサーチ・コミュニケ
ーションズ（Biochem. Biophys. Res. Commun.）195
巻、844-852頁、1993年〕）。これまでに知られている
５種のソマトスタチンレセプターサブタイプは、互いに
アミノ酸で４２〜６０％の相同性がある。

【０００４】コルチスタチンの作用もまた、細胞膜上に
存在する高親和性の特異的なレセプターと結合し、ＧＴ
Ｐ結合蛋白質を介して細胞内情報伝達系に伝わることに
よって発揮されると考えられている。実際、コルチスタ
チン-１４は、ラットpituitary cell ＧＨ４細胞膜上
で、〔¹²⁵Ｉ〕標識ソマトスタチンの結合に対してソマ
トスタチンと同様のdisplacementを示す〔L. de Lecea
et al. ネイチャー(Nature) 381, 16 MAY 1996〕。しか
しながら、ソマトスタチン−１４とコルチスタチン-１
４はラットの脳室内投与において睡眠等に対する効果は
異なる可能性が示唆されており、ソマトスタチンレセプ
ターサブタイプあるいはソマトスタチン類似のレセプタ
ー間に対する各々のペプチドの親和性、作用点の違いが
予想されている。さらに、コルチスタチンはソマトスタ
チンレセプター以外のレセプターについても作用する可
能性が考えられている。例えば、ソマトスタチンレセプ
ターに高いホモロジーを示すけれど、ソマトスタチンと
の結合が確認できていないレセプターとして、ＧＰＲ７
（Ｕ２２４９１）とＧＰＲ８（Ｕ２２４９２）が報告さ
れている〔Genomics 28, 84-91 (1995)〕が、コルチス
タチンはこの様なレセプターに対して作用する可能性も
考えられる。以上のように、コルチスタチンについては
生体内において特異的なレセプターを介して生理機能の
調節に重要な役割を果たしているものと考えられている
が、ヒトに関するソマトスタチン様またはコルチスタチ
ン様ペプチドについては、これまで全く知られていなか
った。ｃＤＮＡライブラリーからランダムに選んだｃＤ
ＮＡクローンの部分配列（expressed sequence tags、
ＥＳＴｓと略される）を決定することにより、その臓器
や細胞における遺伝子発現のレベルや新規遺伝子を見い
だす試みが報告されている。M. D. Adamsらは脳のｃＤ
ＮＡライブラリーから得たＥＳＴｓを多数報告している
（ネイチャージェネティクス、4巻、373-380頁、1993
年）。

【０００５】ソマトスタチン様またはコルチスタチン様
活性を有する新たな生理活性ペプチドは、急性バクテリ
ア髄膜炎，急性心筋梗塞，急性膵炎，急性ウイルス脳
炎，成人呼吸促迫症候群，アルコール性肝炎，アルツハ
イマー病，喘息，動脈硬化，アトピー性皮膚炎，バクテ
リア肺炎，膀胱がん，骨折，乳がん，過食症，多食症，
火傷治癒，子宮頸部がん，慢性リンパ性白血病，慢性骨
髄性白血病，慢性膵炎，肝硬変，大腸がん（結腸／直腸
がん），クローン病，痴呆，糖尿病性合併症，糖尿病性
腎症，糖尿病性神経障害，糖尿病性網膜症，胃炎，ヘリ
コバクター・ピロリ感染症，肝不全，Ａ型肝炎，Ｂ型肝
炎，Ｃ型肝炎，肝炎，単純ヘルペスウイルス感染症，水
痘帯状疱疹ウイルス感染症，ホジキン病，エイズ感染
症，ヒトパピローマウイルス感染症，高カルシウム血
症，高コレステロール血症，高グリセリド血症，高脂血
症，感染症，インフルエンザ感染症，インシュリン依存
性糖尿病（Ｉ型），侵襲性ブドウ状球菌感染症，悪性黒
色腫，がん転移，多発性骨髄腫，アレルギー性鼻炎，腎
炎，非ホジキン性リンパ腫，インシュリン非依存性糖尿
病（II型），非小細胞肺がん，臓器移植，骨関節炎，骨
軟化症，骨減少症，骨粗鬆症，卵巣がん，骨ペーチェッ
ト病，消化性潰瘍，末梢血管疾患，前立腺がん，逆流性
食道炎，腎不全，リウマチ関節炎，精神分裂症，敗血
症，敗血症ショック，重症全身性真菌感染症，小細胞肺
がん，脊髄損傷，胃がん，全身性エリテマトーサス，一
過性脳虚血発作，結核，心弁膜症，血管性／多発梗塞痴
呆，創傷治癒，不眠症，関節炎，神経変成疾患等の予防
や治療に役立つ新たな医薬品の開発を可能にする。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、有用な生理
活性を有する新規ペプチド、その前駆体またはそれらの
塩、該ペプチドまたはその前駆体をコードするＤＮＡ、
組換えベクター、形質転換体、該ペプチドまたはその前
駆体の製造方法、該ペプチドまたはその前駆体を含有し
てなる医薬、該ペプチドまたはその前駆体に対する抗
体、該ペプチドとレセプターとの結合性を変化させる化
合物またはその塩のスクリーニング方法並びにスクリー
ニング用キット、および該スクリーニング方法またはス
クリーニング用キットを用いて得られる化合物またはそ
の塩に関する。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記の課
題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、ＥＳＴの配
列情報を基にプライマーを作製し、ヒト脳poly(A)⁺ＲＮ
Ａを鋳型とするＲＴ−ＰＣＲにより、新規な塩基配列を
有するｃＤＮＡをクローニングすることに成功した。そ
して、本発明者らは、得られたｃＤＮＡにコードされる
タンパク質から有用なソマトスタチン様またはコルチス
タチン様生理活性ペプチドが生成することを見いだし、
これらの知見に基づいて、さらに検討を重ねた結果、本
発明を完成するに至った。

【０００８】すなわち、本発明は、 （１）配列番号：１で表わされるアミノ酸配列またはそ
のアミノ酸配列において１〜５個のアミノ酸が欠失、置
換もしくは挿入したアミノ酸配列（ただし、配列番号：
３１または配列番号：３２で表わされるアミノ酸配列を
除く）を含有するペプチド、その前駆体またはそれらの
塩、 （２）配列番号：１で表わされるアミノ酸配列またはそ
のアミノ酸配列中の１〜５個のアミノ酸が欠失もしくは
置換したアミノ酸配列を含有する第（１）項記載のペプ
チドまたはその前駆体、 （３）配列番号：１で表わされるアミノ酸配列を有する
第（１）項記載のペプチド、 （４）配列番号：２で表わされるアミノ酸配列を有する
第（１）項記載のペプチド、 （５）配列番号：３で表わされるアミノ酸配列を有する
第（１）項記載のペプチド、 （６）配列番号：３５〜配列番号：５５のいずれかの配
列番号で表わされるアミノ酸配列を有する第（１）項記
載のペプチド、 （７）配列番号：４、配列番号：５、配列番号：６また
は配列番号：７で表わされるアミノ酸配列を有する第
（１）項記載の前駆体、 （８）コルチスタチン様活性またはソマトスタチン様活
性を有する第（１）項記載のペプチドまたはその前駆
体、

【０００９】（９）第（１）項記載のペプチドまたは前
駆体をコードする塩基配列を有するＤＮＡを含有するＤ
ＮＡ、 （１０）配列番号：１３で表わされる塩基配列を有する
第（９）項記載のＤＮＡ、 （１１）配列番号：１４で表わされる塩基配列を有する
第（９）項記載のＤＮＡ、 （１２）配列番号：１５で表わされる塩基配列を有する
第（９）項記載のＤＮＡ、 （１３）配列番号：１６〜配列番号：２３のいずれかの
配列番号で表わされる塩基配列を有する第（９）項記載
のＤＮＡ、 （１４）配列番号：６２〜配列番号：８２のいずれかの
配列番号で表わされる塩基配列を有する第（９）項記載
のＤＮＡ、 （１５）第（９）項記載のＤＮＡを含有する組換えベク
ター、 （１６）第（１５）項記載の組換えベクターを保持する
形質転換体、 （１７）第（１６）項記載の形質転換体を培養し、第
（１）項記載のペプチド、その前駆体またはそれらの塩
を生成、蓄積せしめ、これを採取することを特徴とする
第（１）項記載のペプチド、その前駆体またはそれらの
塩の製造方法、 （１８）第（１）項記載のペプチド、その前駆体または
それらの塩を含有してなる医薬、 （１９）第（９）項記載のＤＮＡを含有してなる医薬、 （２０）ホルモン産生腫瘍，先端巨大症，巨人症，痴呆
症もしくは胃潰瘍の治療・予防剤、ホルモン分泌抑制
剤、腫瘍増殖抑制剤または神経活動もしくは睡眠の調節
剤である第（１８）項または第（１９）項記載の医薬、 （２１）第（１）項記載のペプチド、その前駆体または
それらの塩に対する抗体、

【００１０】（２２）第（１）項記載のペプチド、その
前駆体またはそれらの塩を用いることを特徴とする、第
（１）項記載のペプチド、その前駆体またはそれらの塩
と該ペプチド、その前駆体またはそれらの塩が結合する
レセプター、その部分ペプチドまたはそれらの塩との結
合性を変化させる化合物またはその塩のスクリーニング
方法、 （２３）第（１）項記載のペプチド、その前駆体または
それらの塩を含有することを特徴とする第（１）項記載
のペプチド、その前駆体またはそれらの塩と第（１）項
記載のペプチド，その前駆体またはそれらの塩に対する
レセプター、その部分ペプチドまたはそれらの塩との結
合性を変化させる化合物またはその塩のスクリーニング
用キット、 （２４）第（２２）項記載のスクリーニング方法または
第（２３）項記載のスクリーニング用キットを用いて得
られる、第（１）項記載のペプチド、その前駆体または
それらの塩と第（１）項記載のペプチド，その前駆体ま
たはそれらの塩に対するレセプター、その部分ペプチド
またはそれらの塩との結合性を変化させる化合物または
その塩、 （２５）第（２２）項記載のスクリーニング方法または
第（２３）項記載のスクリーニング用キットを用いて得
られる第（１）項記載のペプチド、その前駆体またはそ
れらの塩に対するレセプターに対するアゴニストを含有
してなる医薬、 （２６）ホルモン産生腫瘍，先端巨大症，巨人症，痴呆
症もしくは胃潰瘍の治療・予防剤、ホルモン分泌抑制
剤、腫瘍増殖抑制剤または神経活動もしくは睡眠の調節
剤である第（２５）項記載の医薬、 （２７）第（２２）項記載のスクリーニング方法または
第（２３）項記載のスクリーニング用キットを用いて得
られる第（１）項記載のペプチド、その前駆体またはそ
れらの塩に対するレセプターに対するアンタゴニストを
含有してなる医薬、 （２８）小人症，乳汁分泌不全もしくは糖尿病の治療・
予防剤、ホルモン分泌促進剤または消化管の機能調節剤
である第（２７）項記載の医薬、および （２９）アミノ末端側を構成するアミノ酸またはペプチ
ドとカルボキシ末端側を構成するアミノ酸またはペプチ
ドとを縮合させ、所望により、分子内にジスルフィド結
合を形成させることを特徴とする第（１）項記載のペプ
チド、その前駆体またはそれらの塩の製造法を提供す
る。

【００１１】さらに、本発明は、 （３０）式 Ｘ¹-Ｘ²-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Ｘ³-Ser-Ｘ⁴ （Ｉ） 〔Ｘ¹はAsp-Arg-Met-Pro-Cys、Arg-Met-Pro-Cys、Met-P
ro-Cys、Pro-CysまたはCysを、Ｘ²はArgまたはLysを、
Ｘ³はSerまたはThrを、Ｘ⁴はCys-LysまたはCysを示す〕
で表わされるアミノ酸配列（ただし、Ｘ¹がPro-Cys、Ｘ
²がLya、Ｘ³がSer、Ｘ⁴がCys-Lysであるアミノ酸配列で
あるアミノ酸配列を除く）を含有する請求項１記載のペ
プチド、 （３１）（ｉ）第（１）項記載のペプチド，その前駆体
もしくはそれらの塩が結合するレセプター、その部分ペ
プチドまたはそれらの塩に、第（１）項記載のペプチ
ド、その前駆体またはそれらの塩を接触させた場合と、
（ii）第（１）項記載のペプチド，その前駆体またはそ
れらの塩が結合するレセプター、その部分ペプチドまた
はそれらの塩に、第（１）項記載のペプチド、その前駆
体またはそれらの塩および試験化合物を接触させた場合
における、第（１）項記載のペプチド，その前駆体また
はそれらの塩と該レセプター、その部分ペプチドまたは
それらの塩との結合量を測定し、比較することを特徴と
する、第（１）項記載のペプチド、その前駆体またはそ
れらの塩と該レセプター、その部分ペプチドまたはそれ
らの塩との結合性を変化させる化合物またはその塩のス
クリーニング方法、 （３２）（ｉ）第（１）項記載のペプチド，その前駆体
またはそれらの塩が結合するレセプターを含有する細胞
またはその細胞膜画分に、第（１）項記載のペプチド、
その前駆体またはそれらの塩を接触させた場合と、（i
i）第（１）項記載のペプチド，その前駆体またはそれ
らの塩が結合するレセプターを含有する細胞またはその
細胞膜画分に、第（１）項記載のペプチド、その前駆体
またはそれらの塩および試験化合物を接触させた場合に
おける、（１）第（１）項記載のペプチド、その前駆体
またはそれらの塩と該レセプターを含有する細胞または
その細胞膜画分との結合量を測定するか、または（２）
該レセプターを介する細胞刺激活性を測定し、比較する
ことを特徴とする、第（１）項記載のペプチド、その前
駆体またはそれらの塩と該レセプター、その部分ペプチ
ドまたはそれらの塩との結合性を変化させる化合物また
はその塩のスクリーニング方法、

【００１２】（３３）第（２１）項記載の抗体と、第
（１）項記載のペプチド，その前駆体またはそれらの塩
とを接触させることを特徴とする第（１）項記載のペプ
チド、その前駆体またはそれらの塩の定量法、 （３４）第（２１）項記載の抗体と、被検液および標識
化された第（１）項記載のペプチド，その前駆体または
それらの塩とを競合的に反応させ、該抗体に結合した標
識化された第（１）項記載のペプチド，その前駆体また
はそれらの塩の割合を測定することを特徴とする被検液
中の第（１）項記載のペプチド、その前駆体またはそれ
らの塩の定量法、 （３５）被検液と担体上に不溶化した第（２１）項記載
の抗体および標識化された別の第（２１）項記載の抗体
とを同時あるいは連続的に反応させたのち、不溶化担体
上の標識剤の活性を測定することを特徴とする被検液中
の第（１）項記載のペプチド、その前駆体またはそれら
の塩の定量法、 （３６）第（２１）項記載の抗体（好ましくは、第
（１）項記載のペプチド，その前駆体またはそれらの塩
の活性を中和する活性を有する第（２１）項記載の抗
体）を含有してなる医薬、 （３７）小人症，乳汁分泌不全もしくは糖尿病の治療・
予防剤、ホルモン分泌促進剤または消化管の機能調節剤
である第（３６）項記載の医薬、

【００１３】（３８）第（９）項記載のＤＮＡに相補的
または実質的に相補的な塩基配列を有し、該ＤＮＡの発
現を抑制し得る作用を有するオリゴヌクレオチド誘導体
（アンチセンスＤＮＡ）またはその塩、 （３９）第（９）項記載のＤＮＡに実質的に相補的な塩
基配列が、該ＤＮＡに相補的な塩基配列の全塩基配列あ
るいは部分塩基配列と約７０％以上（好ましくは約８０
％以上、より好ましくは約９０％以上、最も好ましくは
約９５％以上）の相同性を有する塩基配列である第（３
８）項記載のオリゴヌクレオチド誘導体、 （４０）第（３８）項記載のオリゴヌクレオチド誘導体
またはその塩を含有してなる医薬、 （４１）小人症，乳汁分泌不全もしくは糖尿病の治療・
予防剤、ホルモン分泌促進剤または消化管の機能調節剤
である第（４０）項記載の医薬、 （４２）第（９）項記載のＤＮＡに相補的または実質的
に相補的な塩基配列を有し、該ＤＮＡの発現を促進し得
る作用を有するオリゴヌクレオチド誘導体またはその
塩、 （４３）第（９）項記載のＤＮＡに実質的に相補的な塩
基配列が、該ＤＮＡに相補的な塩基配列の全塩基配列あ
るいは部分塩基配列と約７０％以上（好ましくは約８０
％以上、より好ましくは約９０％以上、最も好ましくは
約９５％以上）の相同性を有する塩基配列である第（４
２）項記載のオリゴヌクレオチド誘導体、 （４４）第（４２）項記載のオリゴヌクレオチド誘導体
またはその塩を含有してなる医薬、および （４５）ホルモン産生腫瘍，先端巨大症，巨人症，痴呆
症もしくは胃潰瘍の治療・予防剤、ホルモン分泌抑制
剤、腫瘍増殖抑制剤または神経活動もしくは睡眠の調節
剤である第（４４）項記載の医薬を提供する。

【００１４】本発明のペプチドは、配列番号：１で表わ
されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミ
ノ酸配列を含有するペプチドである。本発明のペプチド
は、例えば、ヒトや温血動物（例えば、モルモット、ラ
ット、マウス、ニワトリ、ウサギ、ブタ、ヒツジ、ウ
シ、サルなど）のあらゆる細胞（例えば、脾細胞、神経
細胞、グリア細胞、膵臓β細胞、骨髄細胞、メサンギウ
ム細胞、ランゲルハンス細胞、表皮細胞、上皮細胞、内
皮細胞、繊維芽細胞、繊維細胞、筋細胞、脂肪細胞、免
疫細胞（例、マクロファージ、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュ
ラルキラー細胞、肥満細胞、好中球、好塩基球、好酸
球、単球）、巨核球、滑膜細胞、軟骨細胞、骨細胞、骨
芽細胞、破骨細胞、乳腺細胞、肝細胞もしくは間質細
胞、またはこれら細胞の前駆細胞、幹細胞もしくはガン
細胞など）、またはそれらの細胞が存在するあらゆる組
織、例えば、脳、脳の各部位（例、嗅球、扁頭核、大脳
基底球、海馬、視床、視床下部、視床下核、大脳皮質、
延髄、小脳、後頭葉、前頭葉、側頭葉、被殻、尾状核、
脳染、黒質）、脊髄、下垂体、胃、膵臓、腎臓、肝臓、
生殖腺、甲状腺、胆のう、骨髄、副腎、皮膚、筋肉、
肺、消化管（例、大腸、小腸）、血管、心臓、胸腺、脾
臓、顎下腺、末梢血、末梢血球、腸管、前立腺、睾丸、
精巣、卵巣、胎盤、子宮、骨、関節、骨格筋などに由来
するペプチドであってもよく、また合成ペプチドであっ
てもよい。

【００１５】配列番号：１で表わされるアミノ酸配列と
実質的に同一のアミノ酸配列とは、例えば、配列番号：
１で表わされるアミノ酸配列と約７０％以上、好ましく
は約８０％以上、さらに好ましくは約９０％以上、最も
好ましくは約９５％以上の相同性を有するアミノ酸配列
を示す。配列番号：１で表わされるアミノ酸配列と実質
的に同一のアミノ酸配列を有するペプチドとしては、例
えば、前記した配列番号：１で表わされるアミノ酸配列
と実質的に同一のアミノ酸配列を有し、配列番号：１で
表わされるアミノ酸配列を含有するペプチドと実質的に
同質の活性を有するペプチドなどが用いられる。すなわ
ち、本発明のペプチドは、配列番号：１で表わされるア
ミノ酸配列を含有するペプチド（以下、ｈＣＳ−１７と
略記する場合がある）のムテインであってもよい。実質
的に同質の活性としては、例えば、後述するソマトスタ
チン様活性、コルチスタチン様活性などが挙げられる。
実質的に同質とは、それらの活性が性質的に（例、生理
化学的に、薬理学的に）同質であることを示す。したが
って、ソマトスタチン様活性やコルチスタチン様活性な
どの活性が同等（例、０．１〜１００倍、好ましくは約
０．５〜１０倍、より好ましくは約０．５〜２倍）であ
ることが好ましいが、これらの活性の程度、ペプチドの
分子量などの量的要素は異なっていてもよい。ソマトス
タチン様活性またはコルチスタチン様活性は、自体公知
の方法、例えば、特開平８−１１６９７９号、ネイチャ
ー（Nature）381, 16 MAY 1996などに記載の方法あるい
はそれに準じる方法に従って測定することができる。

【００１６】本発明のペプチドのムテインとしては、例
えば、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列中の数
個（好ましくは、１〜５個程度）のアミノ酸が欠失した
アミノ酸配列、配列番号：１で表わされるアミノ酸配
列中の数個（好ましくは、１〜５個程度）のアミノ酸が
他のアミノ酸で置換されたアミノ酸配列、配列番号：
１で表わされるアミノ酸配列中に数個（好ましくは、１
〜５個程度）のアミノ酸が挿入されたアミノ酸配列、ま
たはそれらを組み合わせたアミノ酸配列を有するペプ
チドなどが用いられる。なかでも、本発明のペプチドの
ムテインとしては、例えば、配列番号：１で表わされ
るアミノ酸配列中の数個（好ましくは、１〜５個程度）
のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列、配列番号：１で
表わされるアミノ酸配列中の数個（好ましくは、１〜５
個程度）のアミノ酸が他のアミノ酸で置換されたアミノ
酸配列、またはそれらを組み合わせたアミノ酸配列を
有するペプチドなどが好ましい。本発明のペプチドとし
ては、例えば、式 Ｘ¹-Ｘ²-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Ｘ³-Ser-Ｘ⁴ （Ｉ） 〔Ｘ¹はAsp-Arg-Met-Pro-Cys、Arg-Met-Pro-Cys、Met-P
ro-Cys、Pro-CysまたはCysを、Ｘ²はArgまたはLysを、
Ｘ³はSerまたはThrを、Ｘ⁴はCys-LysまたはCysを示す〕
で表わされるアミノ酸配列（ただし、Ｘ¹がPro-Cys、Ｘ
²がLya、Ｘ³がSer、Ｘ⁴がCys-Lysであるアミノ酸配列で
あるアミノ酸配列を除く）を含有するペプチドなどが好
ましい。

【００１７】欠失型または（および）置換型ムテインと
しては、具体的には、例えば、(１)配列番号：１で表わ
されるアミノ酸配列のＮ末端から２個のアミノ酸（Asp-
Arg）が欠失したアミノ酸配列を有するペプチド（配列
番号：２）（以下、ｈＣＳ−１５と略記する場合があ
る）、(２)配列番号：１で表わされるアミノ酸配列のＮ
末端から４個のアミノ酸（Asp-Arg-Met-Pro）が欠失し
たアミノ酸配列を有するペプチド（配列番号：３）（以
下、ｈＣＳ−１３と略記する場合がある）、(３)配列番
号：１で表わされるアミノ酸配列のＣ末端から１個のア
ミノ酸（Lys）が欠失したアミノ酸配列を有するペプチ
ド（配列番号：３５）（以下、des Lys¹⁷−ｈＣＳ−１
７と略記する場合がある）、(４)配列番号：１で表わさ
れるアミノ酸配列のＮ末端から２個のアミノ酸（Asp-Ar
g）およびＣ末端から１個のアミノ酸（Lys）が欠失した
アミノ酸配列を有するペプチド（配列番号：３６）（以
下、des Lys¹⁵−ｈＣＳ−１５と略記する場合があ
る）、(５)配列番号：１で表わされるアミノ酸配列のＮ
末端から４個のアミノ酸（Asp-Arg-Met-Pro）およびＣ
末端から１個のアミノ酸（Lys）が欠失したアミノ酸配
列を有するペプチド（配列番号：３７）（以下、des Ly
s¹³−ｈＣＳ−１３と略記する場合がある）、(６)配列
番号：１で表わされるアミノ酸配列の６番目のArgがLys
で置換されたアミノ酸配列を有するペプチド（配列番
号：３８）（以下、〔Lys⁶〕ｈＣＳ−１７と略記する場
合がある）、(７)配列番号：１で表わされるアミノ酸配
列のＮ末端から２個のアミノ酸（Asp-Arg）が欠失し、
４番目のArgがLysで置換されたアミノ酸配列を有するペ
プチド（配列番号：３９）（以下、〔Lys⁴〕ｈＣＳ−１
５と略記する場合がある）、

【００１８】(８)配列番号：１で表わされるアミノ酸配
列のＮ末端から４個のアミノ酸（Asp-Arg-Met-Pro）が
欠失し、２番目のArgがLysで置換されたアミノ酸配列を
有するペプチド（配列番号：４０）（以下、〔Lys²〕ｈ
ＣＳ−１３と略記する場合がある）、(９)配列番号：１
で表わされるアミノ酸配列のＣ末端から１個のアミノ酸
（Lys）が欠失し、６番目のArgがLysで置換されたアミ
ノ酸配列を有するペプチド（配列番号：４１）（以下、
des Lys¹⁷−〔Lys⁶〕ｈＣＳ−１７と略記する場合があ
る）、(10)配列番号：１で表わされるアミノ酸配列のＮ
末端から２個のアミノ酸（Asp-Arg）およびＣ末端から
１個のアミノ酸（Lys）が欠失し、第４番目のArgがLys
で置換されたアミノ酸配列を有するペプチド（配列番
号：４２）（以下、des Lys¹⁵−〔Lys⁴〕ｈＣＳ−１５
と略記する場合がある）、(11)配列番号：１で表わされ
るアミノ酸配列のＮ末端から４個のアミノ酸（Asp-Arg-
Met-Pro）およびＣ末端から１個のアミノ酸（Lys）が欠
失し、第２番目のArgがLysで置換されたアミノ酸配列を
有するペプチド（配列番号：４３）（以下、des Lys¹³
−〔Lys²〕ｈＣＳ−１３と略記する場合がある）、(12)
配列番号：１で表わされるアミノ酸配列の１４番目のSe
rがThrで置換されたアミノ酸配列を有するペプチド（配
列番号：４４）（以下、〔Thr¹⁴〕ｈＣＳ−１７と略記
する場合がある）、(13)配列番号：１で表わされるアミ
ノ酸配列のＮ末端から２個のアミノ酸（Asp-Arg）が欠
失し、１２番目のSerがThrで置換されたアミノ酸配列を
有するペプチド（配列番号：４５）（以下、〔Thr¹²〕
ｈＣＳ−１５と略記する場合がある）、(14)配列番号：
１で表わされるアミノ酸配列のＮ末端から４個のアミノ
酸（Asp-Arg-Met-Pro）が欠失し、１０番目のSerがThr
で置換されたアミノ酸配列を有するペプチド（配列番
号：４６）（以下、〔Thr¹⁰〕ｈＣＳ−１３と略記する
場合がある）、

【００１９】(15)配列番号：１で表わされるアミノ酸配
列のＣ末端から１個のアミノ酸（Lys）が欠失し、１４
番目のSerがThrで置換されたアミノ酸配列を有するペプ
チド（配列番号：４７）（以下、des Lys¹⁷−〔Thr¹⁴〕
ｈＣＳ−１７と略記する場合がある）、(16)配列番号：
１で表わされるアミノ酸配列のＮ末端から２個のアミノ
酸（Asp-Arg）およびＣ末端から１個のアミノ酸（Lys）
が欠失し、１２番目のSerがThrで置換されたアミノ酸配
列を有するペプチド（配列番号：４８）（以下、des Ly
s¹⁵−〔Thr¹²〕ｈＣＳ−１５と略記する場合がある）、
(17)配列番号：１で表わされるアミノ酸配列のＮ末端か
ら４個のアミノ酸（Asp-Arg-Met-Pro）およびＣ末端か
ら１個のアミノ酸（Lys）が欠失し、１０番目のSerがTh
rで置換されたアミノ酸配列を有するペプチド（配列番
号：４９）（以下、des Lys¹³−〔Thr¹⁰〕ｈＣＳ−１３
と略記する場合がある）、(18)配列番号：１で表わされ
るアミノ酸配列の第６番目のArgがLysに置換され、１４
番目のSerがThrで置換されたアミノ酸配列を有するペプ
チド（配列番号：５０）（以下、〔Lys⁶，Thr¹⁴〕ｈＣ
Ｓ−１７と略記する場合がある）、(19)配列番号：１で
表わされるアミノ酸配列のＮ末端から２個のアミノ酸
（Asp-Arg）が欠失し、第４番目のArgがLysに置換さ
れ、１２番目のSerがThrで置換されたアミノ酸配列を有
するペプチド（配列番号：５１）（以下、〔Lys⁴，Thr
¹²〕ｈＣＳ−１５と略記する場合がある）、(20)配列番
号：１で表わされるアミノ酸配列のＮ末端から４個のア
ミノ酸（Asp-Arg-Met-Pro）が欠失し、第２番目のArgが
Lysに置換され、１０番目のSerがThrで置換されたアミ
ノ酸配列を有するペプチド（配列番号：５２）（以下、
〔Lys²，Thr¹⁰〕ｈＣＳ−１３と略記する場合があ
る）、(21)配列番号：１で表わされるアミノ酸配列のＣ
末端から１個のアミノ酸（Lys）が欠失し、第６番目のA
rgがLysに置換され、１４番目のSerがThrで置換された
アミノ酸配列を有するペプチド（配列番号：５３）（以
下、des Lys¹⁷−〔Lys⁶，Thr¹⁴〕ｈＣＳ−１７と略記す
る場合がある）、

【００２０】(22)配列番号：１で表わされるアミノ酸配
列のＮ末端から２個のアミノ酸（Asp-Arg）およびＣ末
端から１個のアミノ酸（Lys）が欠失し、第４番目のArg
がLysに置換され、１２番目のSerがThrで置換されたア
ミノ酸配列を有するペプチド（配列番号：５４）（以
下、des Lys¹⁵−〔Lys⁴，Thr¹²〕ｈＣＳ−１５と略記す
る場合がある）、(23)配列番号：１で表わされるアミノ
酸配列のＮ末端から４個のアミノ酸（Asp-Arg-Met-Pr
o）およびＣ末端から１個のアミノ酸（Lys）が欠失し、
第２番目のArgがLysに置換され、１０番目のSerがThrで
置換されたアミノ酸配列を有するペプチド（配列番号：
５５）（以下、des Lys¹³−〔Lys²，Thr¹⁰〕ｈＣＳ−１
３と略記する場合がある）などが用いられる。ただし、
配列番号：３１で表わされるアミノ酸配列を含有するペ
プチド（公知のラット由来コルチスタチン、図３のr co
rtistatin）および配列番号：３２で表わされるアミノ
酸配列を有するペプチド（公知のラット由来ソマトスタ
チン、図３のr somatostatin）は本発明のペプチドから
除かれる。本発明のペプチドが２個以上のシステイン残
基を有する場合、それらシステイン残基が分子内でジス
ルフィド結合を形成しているのが好ましい。例えば、ｈ
ＣＳ−１７の場合は第５番目と第１６番目のシステイン
残基、ｈＣＳ−１５の場合は第３番目と第１４番目のシ
ステイン残基、ｈＣＳ−１３の場合は第１番目と第１２
番目のシステイン残基がジスルフィド結合を形成してい
てもよい。さらに、本発明のペプチドには、上記したペ
プチドにおいて、Ｎ末端のアミノ酸残基のアミノ基が保
護基（例えば、ホルミル基、アセチル基などのＣ_1-6ア
ルカノイル基などのＣ_1-6アシル基など）で保護されて
いるもの、Ｎ端側が生体内で切断され生成したグルタミ
ル基がピログルタミル化したもの、分子内のアミノ酸の
側鎖上の置換基（例えば、−ＯＨ、−ＳＨ、アミノ基、
イミダゾール基、インドール基、グアニジノ基など）が
適当な保護基（例えば、ホルミル基、アセチル基などの
Ｃ_1-6アルカノイル基などのＣ_1-6アシル基、メチル基な
どのＣ_1-6アルキル基など）で保護されているもの、あ
るいは糖鎖が結合したいわゆる糖ペプチドなどの複合ペ
プチドなども含まれる。

【００２１】本発明の前駆体は、上記した本発明のペプ
チドを含有するものであれば何れのペプチドまたはタン
パク質であってもよい。例えば、本発明のペプチドのＮ
末端側または（および）Ｃ末端側に、１個または２個以
上（好ましくは、２〜１００個程度）のアミノ酸が付加
したペプチドまたはタンパク質などが用いられる。なか
でも、本発明のペプチドのＮ末端側に１個または２個以
上（好ましくは、２〜１００個程度）のアミノ酸が付加
したペプチドまたはタンパク質が好ましい。より具体的
には、本発明の前駆体としては、例えば、本発明のペプ
チド、好ましくは配列番号：１で表わされるアミノ酸配
列を有するペプチドのＮ末端側に、配列番号：２９で表
わされるアミノ酸配列（８８個のアミノ酸）のＣ末端側
から数えて１個または２個以上のアミノ酸が付加したペ
プチドなどが用いられる。例えば、 配列番号：４（２９アミノ酸）で表わされるアミノ酸
配列を含有する前駆体ペプチド（以下、ｈＣＳ−２９と
略記する場合がある）、 配列番号：５（６２アミノ酸）で表わされるアミノ酸
配列を含有する前駆体ペプチド（以下、ｈＣＳ−６２と
略記する場合がある）、 配列番号：６（８５アミノ酸）で表わされるアミノ酸
配列を含有する前駆体ペプチド（以下、ｈＣＳ−８５と
略記する場合がある）、 配列番号：７（１０５アミノ酸）で表わされるアミノ
酸配列を含有する前駆体ペプチド（以下、ｈＣＳ−１０
５と略記する場合がある）、または 配列番号：４、配列番号：５、配列番号：６または配
列番号：７で表わされるアミノ酸配列と実質的に同一の
アミノ酸配列を含有する前駆体ペプチドなどが用いられ
る。

【００２２】配列番号：４、配列番号：５、配列番号：
６または配列番号：７で表わされるアミノ酸配列と実質
的に同一のアミノ酸配列を含有する前駆体ペプチドとし
ては、例えば、 （１）配列番号：４で表わされるアミノ酸配列中の１
〜１０個程度のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列、配
列番号：４で表わされるアミノ酸配列に１〜１５個程度
のアミノ酸が付加したアミノ酸配列、または配列番
号：４で表わされるアミノ酸配列中の１〜８個程度のア
ミノ酸が他のアミノ酸で置換されたアミノ酸配列を含有
するペプチド、 （２）配列番号：５で表わされるアミノ酸配列中の１
〜１５個程度のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列、配
列番号：５で表わされるアミノ酸配列に１〜１０個程度
のアミノ酸が付加したアミノ酸配列、または配列番
号：５で表わされるアミノ酸配列中の１〜２０個程度の
アミノ酸が他のアミノ酸で置換されたアミノ酸配列を含
有するペプチド、 （３）配列番号：６で表わされるアミノ酸配列中の１
〜１０個程度のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列、配
列番号：６で表わされるアミノ酸配列に１〜１０個程度
のアミノ酸が付加したアミノ酸配列、または配列番
号：６で表わされるアミノ酸配列中の１〜２０個程度の
アミノ酸が他のアミノ酸で置換されたアミノ酸配列を含
有するペプチド、 （４）配列番号：７で表わされるアミノ酸配列中の１
〜１０個程度のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列、配
列番号：７で表わされるアミノ酸配列に１〜２０個程度
のアミノ酸が付加したアミノ酸配列、または配列番
号：７で表わされるアミノ酸配列中の１〜２０個程度の
アミノ酸が他のアミノ酸で置換されたアミノ酸配列を含
有するペプチドなどが用いられる。

【００２３】具体的には、 配列番号：４で表わされるアミノ酸配列の１８番目の
ArgがLysで置換されたアミノ酸配列を含有する前駆体ペ
プチド（配列番号：５６）（以下、〔Lys¹⁸〕ｈＣＳ−
２９と略記する場合がある）、 配列番号：４で表わされるアミノ酸配列の２６番目の
SerがThrで置換されたアミノ酸配列を含有する前駆体ペ
プチド（配列番号：５７）（以下、〔Thr²⁶〕ｈＣＳ−
２９と略記する場合がある）、 配列番号：４で表わされるアミノ酸配列の１８番目の
ArgがLysで置換され、２６番目のSerがThrで置換された
アミノ酸配列を含有する前駆体ペプチド（配列番号：５
８）（以下、〔Lys¹⁸，Thr²⁶〕ｈＣＳ−２９と略記する
場合がある）、 配列番号：４で表わされるアミノ酸配列の１８番目の
ArgがLysで置換され、２９番目のLysが欠失したアミノ
酸配列を含有する前駆体ペプチド（配列番号：５９）
（以下、des Lys²⁹−〔Lys¹⁸〕ｈＣＳ−２９と略記する
場合がある）、 配列番号：４で表わされるアミノ酸配列の２６番目の
SerがThrで置換され、２９番目のLysが欠失したアミノ
酸配列を含有する前駆体ペプチド（配列番号：６０）
（以下、des Lys²⁹−〔Thr²⁶〕ｈＣＳ−２９と略記する
場合がある）、 配列番号：４で表わされるアミノ酸配列の１８番目の
ArgがLysで置換され、２６番目のSerがThrで置換され、
２９番目のLysが欠失したアミノ酸配列を含有する前駆
体ペプチド（配列番号：６１）（以下、des Lys²⁹−〔L
ys¹⁸，Thr²⁶〕ｈＣＳ−２９と略記する場合がある）、 配列番号：４、配列番号：５、配列番号：６または配
列番号：７で表わされるアミノ酸配列のＣ末端のLysが
欠失したアミノ酸配列を含有する前駆体ペプチド（以
下、des Lys²⁹ ｈＣＳ−２９、des Lys⁶² ｈＣＳ−６
２、des Lys⁸⁵ ｈＣＳ−８５またはdes Lys¹⁰⁵ ｈＣＳ
−１０５と略記する場合がある）などが用いられる。

【００２４】本発明の前駆体ペプチドが２個以上のシス
テイン残基を有する場合、それらシステイン残基が分子
内でジスルフィド結合を形成しているのが好ましい。例
えば、ｈＣＳ−２９の場合、第１７番目と第２８番目の
システイン残基がジスルフィド結合を形成していてもよ
い。さらに、本発明の前駆体ペプチドには、前記した本
発明のペプチドと同様に、Ｎ末端のアミノ酸残基のアミ
ノ基が保護基で保護されているもの、Ｎ端側が生体内で
切断され生成したグルタミル基がピログルタミル化した
もの、分子内のアミノ酸の側鎖上の置換基が適当な保護
基で保護されているもの、あるいは糖鎖が結合したいわ
ゆる糖ペプチドなどの複合ペプチドなども含まれる。本
明細書におけるペプチドおよびその前駆体は、ペプチド
標記の慣例に従って左端がＮ末端（アミノ末端）、右端
がＣ末端（カルボキシル末端）である。配列番号：１で
表わされるアミノ酸配列を含有するペプチドをはじめと
する、本発明のペプチドおよびその前駆体は、Ｃ末端が
通常カルボキシル基（−ＣＯＯＨ）またはカルボキシレ
ート(−ＣＯＯ^-）であるが、Ｃ末端がアミド（−ＣＯＮ
Ｈ₂）またはエステル（−ＣＯＯＲ）であってもよい。
ここでエステル基のＲとしては、メチル、エチル、ｎ−
プロピル、イソプロピルもしくはｎ−ブチルなどのＣ
_1-6アルキル基、例えば、シクロペンチル、シクロヘキ
シルなどのＣ_3-8シクロアルキル基、例えば、フェニ
ル、α−ナフチルなどのなどのＣ_6-12アリール基、例え
ば、ベンジル、フェネチルなどのフェニル−Ｃ_1-2アル
キル基もしくはα−ナフチルメチルなどのα−ナフチル
−Ｃ_1-2アルキル基などのＣ_7-14アラルキル基のほか、
経口用エステルとして汎用されるピバロイルオキシメチ
ル基などが用いられる。本発明のペプチドまたはその前
駆体がＣ末端以外にカルボキシル基（またはカルボキシ
レート）を有している場合、カルボキシル基がアミド化
またはエステル化されているものも本発明のペプチドに
含まれる。この時のエステルとしては、例えば上記した
Ｃ末端のエステルなどが用いられる。本発明のペプチド
またはその前駆体の塩としては、とりわけ生理学的に許
容される酸付加塩が好ましい。この様な塩としては、例
えば無機酸（例えば、塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫
酸）との塩、あるいは有機酸（例えば、酢酸、ギ酸、プ
ロピオン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酒石
酸、クエン酸、リンゴ酸、蓚酸、安息香酸、メタンスル
ホン酸、ベンゼンスルホン酸）との塩などが用いられ
る。

【００２５】本発明のペプチド、その前駆体またはそれ
らの塩は、前述したヒトや温血動物の細胞または組織か
ら自体公知のペプチドの精製方法によって製造すること
もできるし、後述するペプチドをコードするＤＮＡを含
有する形質転換体を培養することによっても製造するこ
とができる。また、後述のペプチド合成法に準じて製造
することもできる。ヒトや温血動物の組織または細胞か
ら製造する場合、ヒトや温血動物の組織または細胞をホ
モジナイズした後、酸などで抽出を行ない、該抽出液を
塩析、透析、ゲル濾過、逆相クロマトグラフィー、イオ
ン交換クロマトグラフィーなどのクロマトグラフィーを
組み合わせることにより精製単離することができる。本
発明のペプチド、その前駆体またはそれらのアミド体の
合成には、通常、市販のペプチド合成用樹脂を用いるこ
とができる。そのような樹脂としては、例えばクロロメ
チル樹脂、ヒドロキシメチル樹脂、ベンズヒドリルアミ
ン樹脂、アミノメチル樹脂、４−ベンジルオキシベンジ
ルアルコール樹脂、４−メチルベンズヒドリルアミン樹
脂、PAM樹脂、４−ヒドロキシメチルメチルフェニルア
セトアミドメチル樹脂、ポリアクリルアミド樹脂、４−
（2',4'-ジメトキシフェニル−ヒドロキシメチル）フェ
ノキシ樹脂、４−（2',4'-ジメトキシフェニル−Fmocア
ミノエチル）フェノキシ樹脂などを挙げることができ
る。このような樹脂を用い、α−アミノ基と側鎖官能基
を適当に保護したアミノ酸を、目的とするペプチドの配
列通りに、自体公知の各種縮合方法に従い、樹脂上で縮
合させる。反応の最後に樹脂からペプチドを切り出すと
同時に各種保護基を除去し、さらに必要により、自体公
知の方法、例えば、ザ・ペプチド（The Peptide），Vo
l.1, 275（1965）などに記載の方法に従って、高希釈溶
液中で分子内ジスルフィド結合形成反応を実施し、目的
のペプチド、その前駆体またはそれらのアミド体を取得
する。

【００２６】上記した保護アミノ酸の縮合に関しては、
ペプチド合成に使用できる各種活性化試薬を用いること
ができるが、特に、カルボジイミド類がよい。カルボジ
イミド類としては、DCC、N,N'-ジイソプロピルカルボジ
イミド、N-エチル-N'-(3-ジメチルアミノプロリル）カ
ルボジイミドなどが用いられる。これらによる活性化に
はラセミ化抑制添加剤（例えば、HOBt, HOOBt)とともに
保護アミノ酸を直接樹脂に添加するかまたは、対称酸無
水物またはHOBtエステルあるいはHOOBtエステルとして
あらかじめ保護アミノ酸の活性化を行なった後に、樹脂
に添加することができる。保護アミノ酸の活性化や樹脂
との縮合に用いられる溶媒としては、ペプチド縮合反応
に使用しうることが知られている溶媒から適宜選択され
うる。例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ−メ
チルピロリドン、クロロホルム、トリフルオロエタノー
ル、ジメチルスルホキシド、DMF、ジメチルスルホキシ
ド、ピリジン、クロロホルム、ジオキサン、塩化メチレ
ン、テトラヒドロフラン、アセトニトリル、酢酸エチ
ル、Ｎ-メチルピロリドンあるいはこれらの適宜の混合
物などが用いられる。反応温度はペプチド結合形成反応
に使用され得ることが知られている範囲から適宜選択さ
れ、通常約−２０℃〜５０℃の範囲から適宜選択され
る。活性化されたアミノ酸誘導体は通常１.５〜４倍過
剰で用いられる。ニンヒドリン反応を用いたテストの結
果、縮合が不十分な場合には保護基の脱離を行なうこと
なく縮合反応を繰り返すことにより十分な縮合を行なう
ことができる。反応を繰り返しても十分な縮合が得られ
ないときには、無水酢酸またはアセチルイミダゾールを
用いて未反応アミノ酸をアセチル化して、後の反応に影
響を及ぼさないようにすることができる。

【００２７】原料のアミノ基の保護基としては、例え
ば、Ｚ、Boc、ｔ−アミルオキシカルボニル、イソボル
ニルオキシカルボニル、４−メトキシベンジルオキシカ
ルボニル、Cl-Z、Br-Z、アダマンチルオキシカルボニ
ル、トリフルオロアセチル、フタリル、ホルミル、２−
ニトロフェニルスルフェニル、ジフェニルホスフィノチ
オイル、Fmocなどが用いられる。カルボキシル基は、例
えば、アルキルエステル（例えば、メチル、エチル、プ
ロピル、ブチル、ｔ−ブチル、シクロペンチル、シクロ
ヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、２−アダ
マンチルなどのエステル基）、ベンジルエステル、４−
ニトロベンジルエステル、４−メトキシベンジルエステ
ル、４−クロロベンジルエステル、ベンズヒドリルエス
テル、フェナシンエステル、ベンジルオキシカルボニル
ヒドラジド、ｔ−ブトキシカルボニルヒドラジド、トリ
チルヒドラジドなどに導くことによって保護することが
できる。セリンの水酸基は、例えば、エステル化または
エーテル化によって保護することができる。このエステ
ル化に適する基としては、例えば、アセチル基などの低
級アルカノイル基、ベンゾイル基などのアロイル基、ベ
ンジルオキシカルボニル基、エトキシカルボニル基など
の炭素から誘導される基などが用いられる。また、エー
テル化に適する基としては、例えば、ベンジル基、テト
ラヒドロピラニル基、ｔ−ブチル基などである。チロシ
ンのフェノール性水酸基の保護基としては、例えば、Bz
l、Cl₂-Bzl、２−ニトロベンジル、BrZ、ｔ−ブチルな
どが用いられる。ヒスチジンのイミダゾールの保護基と
しては、Tos、４-メトキシ-2,3,6-トリメチルベンゼン
スルホニル、DNP、ベンジルオキシメチル、Bum、Boc、T
rt、Fmocなどが用いられる。

【００２８】原料のカルボキシル基の活性化されたもの
としては、例えば、対応する酸無水物、アジド、活性エ
ステル〔アルコール（例えば、ペンタクロロフェノー
ル、2,4,5-トリクロロフェノール、2,4-ジニトロフェノ
ール、シアノメチルアルコール、パラニトロフェノー
ル、HONB、N-ヒドロキシスクシミド、N-ヒドロキシフタ
ルイミド、HOBt）とのエステル〕などが用いられる。原
料のアミノ基の活性化されたものとしては、例えば、対
応するリン酸アミドが用いられる。保護基の除去（脱
離）方法としては、例えば、Pd黒あるいはPd-炭素など
の触媒の存在下での水素気流中での接触還元や、また、
無水フッ化水素、メタンスルホン酸、トリフルオロメタ
ンスルホン酸、トリフルオロ酢酸あるいはこれらの混合
液などによる酸処理や、ジイソプロピルエチルアミン、
トリエチルアミン、ピペリジン、ピペラジンなどによる
塩基処理、また液体アンモニア中ナトリウムによる還元
なども用いられる。上記酸処理による脱離反応は、一般
に約−２０℃〜４０℃の温度で行われるが、酸処理にお
いてはアニソール、フェノール、チオアニソール、メタ
クレゾール、パラクレゾール、ジメチルスルフィド、1,
4-ブタンジチオール、1,2-エタンジチオールのようなカ
チオン捕捉剤の添加が有効である。また、ヒスチジンの
イミダゾール保護基として用いられる2,4-ジニトロフェ
ニル基はチオフェノール処理により除去され、トリプト
ファンのインドール保護基として用いられるホルミル基
は上記の1,2-エタンジチオール、1,4-ブタンジチオール
などの存在下の酸処理による脱保護以外に、希水酸化ナ
トリウム、希アンモニアなどによるアルカリ処理によっ
ても除去される。原料の反応に関与すべきでない官能基
の保護および保護基、およびその保護基の脱離、反応に
関与する官能基の活性化などは、公知の基または公知の
手段から適宜選択しうる。

【００２９】ペプチドまたはその前駆体のアミド体を得
る別の方法としては、まず、カルボキシ末端アミノ酸の
α−カルボキシル基をアミド化して保護した後、アミノ
基側にペプチド鎖を所望の鎖長まで延ばした後、該ペプ
チド鎖のＮ末端のα−アミノ基の保護基のみを除いたペ
プチドとＣ末端のカルボキシル基の保護基のみを除去し
たペプチドとを製造し、この両ペプチドを上記したよう
な混合溶媒中で縮合させる。縮合反応の詳細については
上記と同様である。縮合により得られた保護ペプチドを
精製した後、上記方法によりすべての保護基を除去し、
所望の粗ペプチドを得ることができる。この粗ペプチド
は既知の各種精製手段を駆使して精製し、主要画分を凍
結乾燥することで所望のペプチドまたはその前駆体のア
ミド体を得ることができる。ペプチドまたはその前駆体
のエステル体を得るには、カルボキシ末端アミノ酸のα
−カルボキシル基を所望のアルコール類と縮合しアミノ
酸エステルとした後、ペプチドまたはその前駆体のアミ
ド体と同様にして、所望のペプチドまたはその前駆体の
エステル体を得ることができる。

【００３０】本発明のペプチド、その前駆体またはそれ
らの塩は、自体公知のペプチドの合成法に従って製造す
ることができ、また、本発明のペプチドは本発明の前駆
体を適当なペプチダーゼで切断することによって製造す
ることができる。ペプチドの合成法としては、例えば、
固相合成法、液相合成法のいずれによっても良い。すな
わち、本発明のペプチドまたは前駆体を構成し得る部分
ペプチドもしくはアミノ酸と残余部分とを縮合させ、生
成物が保護基を有する場合は保護基を脱離することによ
り目的のペプチドまたは前駆体を製造することができ
る。公知の縮合方法や保護基の脱離として、例えば、以
下の〜に記載された方法が挙げられる。 M. Bodanszky および M.A. Ondetti、ペプチド シン
セシス (Peptide Synthesis), Interscience Publisher
s, New York (1966年) SchroederおよびLuebke、ザ ペプチド(The Peptide),
Academic Press, New York (1965年) 泉屋信夫他、ペプチド合成の基礎と実験、 丸善(株)
（1975年） 矢島治明 および榊原俊平、生化学実験講座 1、 ペプ
チドまたは前駆体の化学IV、 205、(1977年) 矢島治明監修、続医薬品の開発 第14巻 ペプチド合
成、広川書店 分子内にジスルフィド結合を有するペプチドは、分子内
に２つ以上で偶数個のシステイン残基を有するペプチド
を自体公知の方法に従い、酸化することによって得るこ
とができる。酸化反応は通常、ペプチドを空気酸化また
はヨウ素酸化することにより行なうことができる。ま
た、反応後は通常の精製法、例えば、溶媒抽出・蒸留・
カラムクロマトグラフィー・液体クロマトグラフィー・
再結晶などを組み合わせて本発明のペプチドまたは前駆
体を精製単離することができる。上記方法で得られるペ
プチドまたは前駆体が遊離体である場合は、公知の方法
あるいはそれに準じる方法によって適当な塩に変換する
ことができるし、逆に塩で得られた場合は、公知の方法
あるいはそれに準じる方法によって遊離体または他の塩
に変換することができる。

【００３１】本発明の前駆体は、本発明のペプチドを製
造するための中間体として有用である。さらに、本発明
の前駆体は本発明のペプチドと実質的に同質の活性、す
なわち、ソマトスタチン様活性、コルチスタチン様活性
を有しており、本発明のペプチドと同様の有用性を有し
ている。また、本発明の前駆体が切断され成熟体である
本発明のペプチドが生成される際に生じるペプチド断片
またはその塩も、生理学上、有用なペプチドである。こ
のようなペプチド断片としては、例えば、配列番号：
８、配列番号：９、配列番号：１０、配列番号：１１ま
たは配列番号：１２で表わされるアミノ酸配列を有する
ペプチドなどが用いられる。これらペプチド断片の塩と
しては、上記した本発明のペプチド等の塩と同様のもの
が用いられる。これらペプチド断片またはそれらの塩
は、前述した本発明の前駆体を適当なペプチダーゼを用
いて切断することによって製造することもできるし、後
述のペプチド合成法に準じて製造することもできる。こ
れらペプチド断片またはそれらの塩は、例えば、本発明
の前駆体に対する抗体を製造する際に用いる抗原として
も有用である。また、これらペプチド断片またはそれら
の塩は、生体内における本発明のペプチドの生成機構の
解明にも重要であり、さらには、中枢神経または生殖機
能を調節する作用を有しており、中枢神経または生殖機
能の調節剤としても有用である。

【００３２】本発明のペプチドまたは前駆体をコードす
るＤＮＡとしては、前述した本発明のペプチドまたは前
駆体をコードする塩基配列を含有するものであればいか
なるものであってもよい。また、ゲノムＤＮＡ、ゲノム
ＤＮＡライブラリー、前記した細胞・組織由来のｃＤＮ
Ａ、前記した細胞・組織由来のｃＤＮＡライブラリー、
合成ＤＮＡのいずれでもよい。ライブラリーに使用する
ベクターは、バクテリオファージ、プラスミド、コスミ
ド、ファージミドなどいずれであってもよい。また、前
記した細胞・組織よりtotalＲＮＡまたはｍＲＮＡ画分
を調製したものを用いて直接Reverse Transcriptase Po
lymerase Chain Reaction（以下、ＲＴ-ＰＣＲ法と略称
する）によって増幅することもできる。具体的には、本
発明の配列番号：１で表わされるアミノ酸配列と同一も
しくは実質的に同一のアミノ酸配列を有するペプチドを
コードするＤＮＡとしては、例えば、配列番号：１３
で表わされる塩基配列を含有するＤＮＡ、または配列
番号：１３で表わされる塩基配列とハイストリンジェン
トな条件下でハイブリダイズする塩基配列を有し、配列
番号：１で表わされるアミノ酸配列を有するペプチドと
同質の活性（例、ソマトスタチン様活性、コルチスタチ
ン様活性）を有するペプチドをコードするＤＮＡであれ
ば何れのものでもよい。配列番号：１３で表わされる塩
基配列とハイブリダイズするＤＮＡとしては、例えば、
配列番号：１３で表わされる塩基配列と約７０％以上、
好ましくは約８０％以上、より好ましくは約９０％以
上、さらに好ましくは約９５％以上の相同性を有する塩
基配列を含有するＤＮＡなどが用いられる。より具体的
には、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列を含有す
るペプチドをコードするＤＮＡとしては、配列番号：１
３で表わされる塩基配列を有するＤＮＡなどが用いられ
る。

【００３３】また、配列番号：２で表わされるアミノ酸
配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有
する本発明のペプチドの欠失型ムテインをコードするＤ
ＮＡとしては、例えば、配列番号：１４で表わされる
塩基配列を含有するＤＮＡ、または配列番号：１４で
表わされる塩基配列とハイストリンジェントな条件下で
ハイブリダイズする塩基配列を有し、配列番号：２で表
わされるアミノ酸配列を有するペプチドと同一の活性
（例、ソマトスタチン様活性、コルチスタチン様活性）
を有するペプチドをコードするＤＮＡであれば何れのも
のでもよい。配列番号：１４で表わされる塩基配列とハ
イブリダイズできるＤＮＡとしては、例えば、配列番
号：１４で表わされる塩基配列と約７０％以上、好まし
くは約８０％以上、より好ましくは約９０％以上、さら
に好ましくは約９５％以上の相同性を有する塩基配列を
含有するＤＮＡなどが用いられる。配列番号：３で表わ
されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミ
ノ酸配列を含有する本発明のペプチドの欠失型ムテイン
をコードするＤＮＡとしては、例えば、配列番号：１
５で表わされる塩基配列を含有するＤＮＡ、または配
列番号：１５で表わされる塩基配列とハイストリンジェ
ントな条件下でハイブリダイズする塩基配列を有し、配
列番号：３で表わされるアミノ酸配列を有するペプチド
と同一の活性（例、ソマトスタチン様活性、コルチスタ
チン様活性）を有するペプチドをコードするＤＮＡであ
れば何れのものでもよい。配列番号：１５で表わされる
塩基配列とハイブリダイズするＤＮＡとしては、例え
ば、配列番号：１５で表わされる塩基配列と約７０％以
上、好ましくは約８０％以上、より好ましくは約９０％
以上、さらに好ましくは約９５％以上の相同性を有する
塩基配列を含有するＤＮＡなどが用いられる。

【００３４】ハイブリダイゼーションは、自体公知の方
法あるいはそれに準じる方法、例えば、モレキュラー・
クローニング（Molecular Cloning）２nd（J. Sambrook
etal., Cold Spring Harbor Lab. Press, 1989）に記
載の方法などに従って行なうことができる。また、市販
のライブラリーを使用する場合、添付の使用説明書に記
載の方法に従って行なうことができる。より好ましく
は、ハイストリンジェントな条件に従って行なうことが
できる。ハイストリンジェントな条件とは、例えば、ナ
トリウム濃度が約１９〜４０ｍＭ、好ましくは約１９〜
２０ｍＭで、温度が約５０〜７０℃、好ましくは約６０
〜６５℃の条件を示す。特に、ナトリウム濃度が約１９
ｍＭで温度が約６５℃の場合が最も好ましい。ただし、
配列番号：３１で表わされるアミノ酸配列を有するラッ
トコルチスタチンをコードする塩基配列（例、配列番
号：３３で表わされる塩基配列）を含有するＤＮＡ、お
よび配列番号：３２で表わされるアミノ酸配列を有する
ラットソマトスタチンをコードする塩基配列（例、配列
番号：３４で表わされる塩基配列）を含有するＤＮＡ
は、本発明のペプチドをコードするＤＮＡから除かれ
る。

【００３５】より具体的には、(１)配列番号：２で表わ
されるアミノ酸配列を含有する欠失型ムテインをコード
するＤＮＡとしては、配列番号：１４で表わされる塩基
配列を有するＤＮＡ（配列番号：１４）、(２)配列番
号：３で表わされるアミノ酸配列を含有する欠失型ムテ
インをコードするＤＮＡとしては、配列番号：１５で表
わされる塩基配列を有するＤＮＡ（配列番号：１５）、
(３)配列番号：３５で表わされるアミノ酸配列を含有す
る欠失型ムテインをコードするＤＮＡとしては、配列番
号：１３で表わされる塩基配列の３'末端から３塩基（A
AA）を欠失した塩基配列を有するＤＮＡ（配列番号：６
２）、(４)配列番号：３６で表わされるアミノ酸配列を
含有する欠失型ムテインをコードするＤＮＡとしては、
配列番号：１４で表わされる塩基配列の３'末端から３
塩基（AAA）を欠失した塩基配列を有するＤＮＡ（配列
番号：６３）、(５)配列番号：３７で表わされるアミノ
酸配列を含有する欠失型ムテインをコードするＤＮＡと
しては、配列番号：１５で表わされる塩基配列の３'末
端から３塩基（AAA）を欠失した塩基配列を有するＤＮ
Ａ（配列番号：６４）、(６)配列番号：３８で表わされ
るアミノ酸配列を含有する置換型ムテインをコードする
ＤＮＡとしては、配列番号：１３で表わされる塩基配列
の第１６〜１８番目のＡＧＧがＡＡＲ（ＲはＧまたはＡ
を示す）に置換された塩基配列を有するＤＮＡ（配列番
号：６５）、(７)配列番号：３９で表わされるアミノ酸
配列を含有する置換型ムテインをコードするＤＮＡとし
ては、配列番号：１４で表わされる塩基配列の第１０〜
１２番目のＡＧＧがＡＡＲ（ＲはＧまたはＡを示す）に
置換された塩基配列を有するＤＮＡ（配列番号：６
６）、(８)配列番号：４０で表わされるアミノ酸配列を
含有する置換型ムテインをコードするＤＮＡとしては、
配列番号：１５で表わされる塩基配列の第４〜６番目の
ＡＧＧがＡＡＲ（ＲはＧまたはＡを示す）に置換された
塩基配列を有するＤＮＡ（配列番号：６７）、

【００３６】(９)配列番号：４１で表わされるアミノ酸
配列を含有する欠失・置換型ムテインをコードするＤＮ
Ａとしては、配列番号：１３で表わされる塩基配列の
３'末端から３塩基（AAA）を欠失し、第１６〜１８番目
のＡＧＧがＡＡＲ（ＲはＧまたはＡを示す）に置換され
た塩基配列を有するＤＮＡ（配列番号：６８）、(10)配
列番号：４２で表わされるアミノ酸配列を含有する欠失
・置換型ムテインをコードするＤＮＡとしては、配列番
号：１４で表わされる塩基配列の３'末端から３塩基（A
AA）を欠失し、第１０〜１２番目のＡＧＧがＡＡＲ（Ｒ
はＧまたはＡを示す）に置換された塩基配列を有するＤ
ＮＡ（配列番号：６９）、(11)配列番号：４３で表わさ
れるアミノ酸配列を含有する欠失・置換型ムテインをコ
ードするＤＮＡとしては、配列番号：１５で表わされる
塩基配列の３'末端から３塩基（AAA）を欠失し、第４〜
６番目のＡＧＧがＡＡＲ（ＲはＧまたはＡを示す）に置
換された塩基配列を有するＤＮＡ（配列番号：７０）、
(12)配列番号：４４で表わされるアミノ酸配列を含有す
る置換型ムテインをコードするＤＮＡとしては、配列番
号：１３で表わされる塩基配列の第４０〜４２番目のＴ
ＣＣがＡＣＮ（ＮはＡ、Ｃ、ＧまたはＴを示す）に置換
された塩基配列を有するＤＮＡ（配列番号：７１）、(1
3)配列番号：４５で表わされるアミノ酸配列を含有する
置換型ムテインをコードするＤＮＡとしては、配列番
号：１４で表わされる塩基配列の第３４〜３６番目のＴ
ＣＣがＡＣＮ（ＮはＡ、Ｃ、ＧまたはＴを示す）に置換
された塩基配列を有するＤＮＡ（配列番号：７２）、(1
4)配列番号：４６で表わされるアミノ酸配列を含有する
置換型ムテインをコードするＤＮＡとしては、配列番
号：１５で表わされる塩基配列の第２８〜３０番目のＴ
ＣＣがＡＣＮ（ＮはＡ、Ｃ、ＧまたはＴを示す）に置換
された塩基配列を有するＤＮＡ（配列番号：７３）、

【００３７】(15)配列番号：４７で表わされるアミノ酸
配列を含有する欠失・置換型ムテインをコードするＤＮ
Ａとしては、配列番号：１３で表わされる塩基配列の
３'末端から３塩基（AAA）を欠失し、第４０〜４２番目
のＴＣＣがＡＣＮ（ＮはＡ、Ｃ、ＧまたはＴを示す）に
置換された塩基配列を有するＤＮＡ（配列番号：７
４）、(16)配列番号：４８で表わされるアミノ酸配列を
含有する欠失・置換型ムテインをコードするＤＮＡとし
ては、配列番号：１４で表わされる塩基配列の３'末端
から３塩基（AAA）を欠失し、第３４〜３６番目のＴＣ
ＣがＡＣＮ（ＮはＡ、Ｃ、ＧまたはＴを示す）に置換さ
れた塩基配列を有するＤＮＡ（配列番号：７５）、(17)
配列番号：４９で表わされるアミノ酸配列を含有する欠
失・置換型ムテインをコードするＤＮＡとしては、配列
番号：１５で表わされる塩基配列の３'末端から３塩基
（AAA）を欠失し、第２８〜３０番目のＴＣＣがＡＣＮ
（ＮはＡ、Ｃ、ＧまたはＴを示す）に置換された塩基配
列を有するＤＮＡ（配列番号：７６）、(18)配列番号：
５０で表わされるアミノ酸配列を含有する置換型ムテイ
ンをコードするＤＮＡとしては、配列番号：１３で表わ
される塩基配列の第１６〜１８番目のＡＧＧがＡＡＲ
（ＲはＧまたはＡを示す）に、第４０〜４２番目のＴＣ
ＣがＡＣＮ（ＮはＡ、Ｃ、ＧまたはＴを示す）に置換さ
れた塩基配列を有するＤＮＡ（配列番号：７７）、(19)
配列番号：５１で表わされるアミノ酸配列を含有する置
換型ムテインをコードするＤＮＡとしては、配列番号：
１４で表わされる塩基配列の第１０〜１２番目のＡＧＧ
がＡＡＲ（ＲはＧまたはＡを示す）に、第３４〜３６番
目のＴＣＣがＡＣＮ（ＮはＡ、Ｃ、ＧまたはＴを示す）
に置換された塩基配列を有するＤＮＡ（配列番号：７
８）、

【００３８】(20)配列番号：５２で表わされるアミノ酸
配列を含有する置換型ムテインをコードするＤＮＡとし
ては、配列番号：１５で表わされる塩基配列の第４〜６
番目のＡＧＧがＡＡＲ（ＲはＧまたはＡを示す）に、第
２８〜３０番目のＴＣＣがＡＣＮ（ＮはＡ、Ｃ、Ｇまた
はＴを示す）に置換された塩基配列を有するＤＮＡ（配
列番号：７９）、(21)配列番号：５３で表わされるアミ
ノ酸配列を含有する欠失・置換型ムテインをコードする
ＤＮＡとしては、配列番号：１３で表わされる塩基配列
の３'末端から３塩基（AAA）を欠失し、第１６〜１８番
目のＡＧＧがＡＡＲ（ＲはＧまたはＡを示す）に、第４
０〜４２番目のＴＣＣがＡＣＮ（ＮはＡ、Ｃ、Ｇまたは
Ｔを示す）に置換された塩基配列を有するＤＮＡ（配列
番号：８０）、(22)配列番号：５４で表わされるアミノ
酸配列を含有する欠失・置換型ムテインをコードするＤ
ＮＡとしては、配列番号：１４で表わされる塩基配列の
３'末端から３塩基（AAA）を欠失し、第１０〜１２番目
のＡＧＧがＡＡＲ（ＲはＧまたはＡを示す）に、第３４
〜３６番目のＴＣＣがＡＣＮ（ＮはＡ、Ｃ、ＧまたはＴ
を示す）に置換された塩基配列を有するＤＮＡ（配列番
号：８１）、(23)配列番号：５５で表わされるアミノ酸
配列を含有する欠失・置換型ムテインをコードするＤＮ
Ａとしては、配列番号：１５で表わされる塩基配列の
３'末端から３塩基（AAA）を欠失し、第４〜６番目のＡ
ＧＧがＡＡＲ（ＲはＧまたはＡを示す）に、第２８〜３
０番目のＴＣＣがＡＣＮ（ＮはＡ、Ｃ、ＧまたはＴを示
す）に置換された塩基配列を有するＤＮＡ（配列番号：
８２）などが用いられる。

【００３９】本発明の配列番号：４で表わされるアミノ
酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を有
する本発明の前駆体ペプチドをコードするＤＮＡとして
は、例えば、配列番号：１６または配列番号：１７で
表わされる塩基配列を含有するＤＮＡ、または配列番
号：１６または配列番号：１７で表わされる塩基配列と
ハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩
基配列を有し、前記した本発明のペプチドを生成し得る
前駆体ペプチドをコードするＤＮＡであれば何れのもの
でもよい。配列番号：１６または配列番号：１７で表わ
される塩基配列とハイブリダイズするＤＮＡとしては、
例えば、配列番号：１６または配列番号：１７で表わさ
れる塩基配列と約７０％以上、好ましくは約８０％以
上、より好ましくは約９０％以上、さらに好ましくは約
９５％以上の相同性を有する塩基配列を含有するＤＮＡ
などが用いられる。より具体的には、配列番号：４のア
ミノ酸配列を含有する前駆体ペプチドをコードするＤＮ
Ａとしては、配列番号：１６または配列番号：１７で表
わされる塩基配列を有するＤＮＡなどが用いられる。本
発明の配列番号：５で表わされるアミノ酸配列と同一も
しくは実質的に同一のアミノ酸配列を有する前駆体ペプ
チドをコードするＤＮＡとしては、例えば、配列番
号：１８または配列番号：１９で表わされる塩基配列を
含有するＤＮＡ、または配列番号：１８または配列番
号：１９で表わされる塩基配列とハイストリンジェント
な条件下でハイブリダイズする塩基配列を有し、前記し
た本発明のペプチドを生成し得る前駆体ペプチドをコー
ドするＤＮＡであれば何れのものでもよい。配列番号：
１８または配列番号：１９で表わされる塩基配列とハイ
ブリダイズできるＤＮＡとしては、例えば、配列番号：
１８または配列番号：１９で表わされる塩基配列と約７
０％以上、好ましくは約８０％以上、より好ましくは約
９０％以上、さらに好ましくは約９５％以上の相同性を
有する塩基配列を含有するＤＮＡなどが用いられる。よ
り具体的には、配列番号：５のアミノ酸配列を含有する
前駆体ペプチドをコードするＤＮＡとしては、配列番
号：１８または配列番号：１９で表わされる塩基配列を
有するＤＮＡなどが用いられる。

【００４０】本発明の配列番号：６で表わされるアミノ
酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を有
する本発明の前駆体ペプチドをコードするＤＮＡとして
は、例えば、配列番号：２０または配列番号：２１で
表わされる塩基配列を含有するＤＮＡ、または配列番
号：２０または配列番号：２１で表わされる塩基配列と
ハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩
基配列を有し、前記した本発明のペプチドを生成し得る
前駆体ペプチドをコードするＤＮＡであれば何れのもの
でもよい。配列番号：２０または配列番号：２１で表わ
される塩基配列ハイブリダイズできるＤＮＡとしては、
例えば、配列番号：２０または配列番号：２１で表わさ
れる塩基配列と約７０％以上、好ましくは約８０％以
上、より好ましくは約９０％以上、さらに好ましくは約
９５％以上の相同性を有する塩基配列を含有するＤＮＡ
などが用いられる。より具体的には、配列番号：６のア
ミノ酸配列を含有する前駆体ペプチドをコードするＤＮ
Ａとしては、配列番号：２０または配列番号：２１で表
わされる塩基配列を有するＤＮＡなどが用いられる。本
発明の配列番号：７で表わされるアミノ酸配列と同一も
しくは実質的に同一のアミノ酸配列を有する前駆体ペプ
チドをコードするＤＮＡとしては、例えば、配列番
号：２２または配列番号：２３で表わされる塩基配列を
含有するＤＮＡ、または配列番号：２２または配列番
号：２３で表わされる塩基配列とハイストリンジェント
な条件下でハイブリダイズする塩基配列を有し、前記し
た本発明のペプチドを生成し得る前駆体ペプチドをコー
ドするＤＮＡであれば何れのものでもよい。配列番号：
２２または配列番号：２３で表わされる塩基配列とハイ
ブリダイズできるＤＮＡとしては、例えば、配列番号：
２２または配列番号：２３で表わされる塩基配列と約７
０％以上、好ましくは約８０％以上、より好ましくは約
９０％以上、さらに好ましくは約９５％以上の相同性を
有する塩基配列を含有するＤＮＡなどが用いられる。よ
り具体的には、配列番号：７のアミノ酸配列を含有する
前駆体ペプチドをコードするＤＮＡとしては、配列番
号：２２または配列番号：２３で表わされる塩基配列を
有するＤＮＡなどが用いられる。ハイブリダイゼーショ
ンの方法およびハイストリンジェントな条件は、前記と
同様のものが用いられる。

【００４１】さらに、(１)配列番号：５６で表わされる
アミノ酸配列を有する前駆体ペプチドをコードするＤＮ
Ａとしては、配列番号：１６または配列番号：１７で表
わされる塩基配列の第５２〜５４番目のＡＧＧがＡＡＲ
（ＲはＧまたはＡを示す）に置換された塩基配列を有す
るＤＮＡ（配列番号：８３または配列番号：８４）、
(２)配列番号：５７で表わされるアミノ酸配列を有する
前駆体ペプチドをコードするＤＮＡとしては、配列番
号：１６または配列番号：１７で表わされる塩基配列の
第７６〜７８番目のＴＣＣがＡＣＮ（ＮはＡ、Ｃ、Ｇま
たはＴを示す）に置換された塩基配列を有するＤＮＡ
（配列番号：８５または配列番号：８６）、(３)配列番
号：５８で表わされるアミノ酸配列を有する前駆体ペプ
チドをコードするＤＮＡとしては、配列番号：１６また
は配列番号：１７で表わされる塩基配列の第５２〜５４
番目のＡＧＧがＡＡＲ（ＲはＧまたはＡを示す）に置換
さ、第７６〜７８番目のＴＣＣがＡＣＮ（ＮはＡ、Ｃ、
ＧまたはＴを示す）に置換された塩基配列を有するＤＮ
Ａ（配列番号：８７または配列番号：８８）、(４)配列
番号：５９で表わされるアミノ酸配列を有する前駆体ペ
プチドをコードするＤＮＡとしては、配列番号：１６ま
たは配列番号：１７で表わされる塩基配列の３'末端か
ら３塩基（AAA）を欠失し、第５２〜５４番目のＡＧＧ
がＡＡＲ（ＲはＧまたはＡを示す）に置換された塩基配
列を有するＤＮＡ（配列番号：８９または配列番号：９
０）、

【００４２】(５)配列番号：６０で表わされるアミノ酸
配列を有する前駆体ペプチドをコードするＤＮＡとして
は、配列番号：１６または配列番号：１７で表わされる
塩基配列の３'末端から３塩基（AAA）を欠失し、第７６
〜７８番目のＴＣＣがＡＣＮ（ＮはＡ、Ｃ、ＧまたはＴ
を示す）に置換された塩基配列を有するＤＮＡ（配列番
号：９１または配列番号：９２）、(６)配列番号：６１
で表わされるアミノ酸配列を有する前駆体ペプチドをコ
ードするＤＮＡとしては、配列番号：１６または配列番
号：１７で表わされる塩基配列の３'末端から３塩基（A
AA）を欠失し、第５２〜５４番目のＡＧＧがＡＡＲ（Ｒ
はＧまたはＡを示す）に置換さ、第７６〜７８番目のＴ
ＣＣがＡＣＮ（ＮはＡ、Ｃ、ＧまたはＴを示す）に置換
された塩基配列を有するＤＮＡ（配列番号：９３または
配列番号：９４）、(７)配列番号：４、配列番号：５、
配列番号：６または配列番号：７で表わされるアミノ酸
配列のＣ末端のLysが欠失した前駆体ペプチドをコード
するＤＮＡとしては、配列番号：１６〜配列番号：２３
のいずれかの塩基配列で表わされる塩基配列の３'末端
から３塩基（AAA）が欠失した塩基配列を有するＤＮＡ
などが用いられる。

【００４３】上記した本発明の前駆体から成熟体ペプチ
ドが生成される際に生ずるペプチド断片をコードするＤ
ＮＡとしては、前述した該ペプチド断片をコードする塩
基配列を含有するものであればいかなるものであっても
よい。また、ゲノムＤＮＡ、ゲノムＤＮＡライブラリ
ー、前記した細胞・組織由来のｃＤＮＡ、前記した細胞
・組織由来のｃＤＮＡライブラリー、合成ＤＮＡのいず
れでもよい。例えば、配列番号：８で表わされるアミノ
酸配列を有するペプチド断片をコードするＤＮＡとして
は、例えば、配列番号：２４または配列番号：２５で表
わされる塩基配列を有するＤＮＡが、配列番号：９で表
わされるアミノ酸配列を有するペプチド断片をコードす
るＤＮＡとしては、例えば、配列番号：２６で表わされ
る塩基配列を有するＤＮＡが、配列番号：１０で表わさ
れるアミノ酸配列を有するペプチド断片をコードするＤ
ＮＡとしては、例えば、配列番号：２７で表わされる塩
基配列を有するＤＮＡが、配列番号：１１で表わされる
アミノ酸配列を有するペプチド断片をコードするＤＮＡ
としては、例えば、配列番号：２８で表わされる塩基配
列を有するＤＮＡが、配列番号：１２で表わされるアミ
ノ酸配列を有するペプチド断片をコードするＤＮＡとし
ては、例えば、配列番号：２９または配列番号：３０で
表わされる塩基配列を有するＤＮＡが用いられる。

【００４４】

【発明の実施の形態】本発明のペプチドまたは前駆体を
コードするＤＮＡのクローニングの手段としては、
（１）本発明のペプチドまたは前駆体をコードするＤＮ
Ａの部分塩基配列を有する合成ＤＮＡプライマーを用い
て、ＰＣＲ法によって前記ＤＮＡライブラリー等から目
的とするＤＮＡを増幅するか、または（２）適当なベク
ターに組み込んだＤＮＡと、本発明のペプチドまたは前
駆体の一部あるいは全領域をコードするＤＮＡ断片もし
くは合成ＤＮＡを標識したものとのハイブリダイゼーシ
ョンによって選別すること、などが挙げられる。ハイブ
リダイゼーションの方法は、前記と同様のものが用いら
れる。また、市販のライブラリーを使用する場合、添付
の使用説明書に記載の方法に従って行なうことができ
る。また、ＤＮＡの塩基配列の変換（欠失・付加・置
換）は、公知のキット、例えば、Mutan^TM−Ｇ（宝酒造
（株））、Mutan^TM−Ｋ（宝酒造（株））などを用い
て、Gapped duplex法やKunkel法などの自体公知の方法
あるいはそれに準じる方法に従って行なうことができ
る。クローン化された本発明のペプチドまたは前駆体を
コードするＤＮＡは、目的によりそのまま、または所望
により制限酵素で消化したり、リンカーを付加したりし
て使用することができる。該ＤＮＡはその５'末端側に
翻訳開始コドンとしてのＡＴＧを有し、また３'末端側
には翻訳終止コドンとしてのＴＡＡ、ＴＧＡまたはＴＡ
Ｇを有していてもよい。これらの翻訳開始コドンや翻訳
終止コドンは、適当な合成ＤＮＡアダプターを用いて付
加することもできる。本発明のペプチドまたは前駆体を
コードするＤＮＡの発現ベクターは、例えば、（イ）本
発明のペプチドまたは前駆体をコードするＤＮＡから目
的とするＤＮＡ断片を切り出し、（ロ）該ＤＮＡ断片を
適当な発現ベクター中のプロモーターの下流に連結する
ことにより製造することができる。

【００４５】ベクターとしては、大腸菌由来のプラスミ
ド（例、ｐＢＲ３２２，ｐＢＲ３２５，ｐＵＣ１２，ｐ
ＵＣ１３）、枯草菌由来のプラスミド（例、ｐＵＢ１１
０，ｐＴＰ５，ｐＣ１９４）、酵母由来プラスミド
（例、ｐＳＨ１９，ｐＳＨ１５）、λファージなどのバ
クテリオファージ、レトロウイルス，ワクシニアウイル
ス，バキュロウイルスなどの動物ウイルスなどの他、ｐ
Ａ１−１１、ｐＸＴ１、ｐＲｃ／ＣＭＶ、ｐＲｃ／ＲＳ
Ｖ、ｐｃＤＮＡＩ／Ｎｅｏなどが用いられる。本発明で
用いられるプロモーターとしては、遺伝子の発現に用い
る宿主に対応して適切なプロモーターであればいかなる
ものでもよい。例えば、動物細胞を宿主として用いる場
合は、ＳＲαプロモーター、ＳＶ４０プロモーター、Ｌ
ＴＲプロモーター、ＣＭＶ（サイトメガロウイルス）プ
ロモーター、ＨＳＶ-ＴＫプロモーターなどが挙げられ
る。これらのうち、ＣＭＶプロモーター、ＳＲαプロモ
ーターなどを用いるのが好ましい。宿主がエシェリヒア
属菌である場合は、ｔｒｐプロモーター、ｌａｃプロモ
ーター、ｒｅｃＡプロモーター、λＰ_Lプロモーター、
ｌｐｐプロモーター、Ｔ７プロモーターなどが、宿主が
バチルス属菌である場合は、ＳＰＯ１プロモーター、Ｓ
ＰＯ２プロモーター、ｐｅｎＰプロモーターなど、宿主
が酵母である場合は、ＰＨＯ５プロモーター、ＰＧＫプ
ロモーター、ＧＡＰプロモーター、ＡＤＨプロモーター
などが好ましい。宿主が昆虫細胞である場合は、ポリヘ
ドリンプロモーター、Ｐ１０プロモーターなどが好まし
い。

【００４６】発現ベクターには、以上の他に、所望によ
りエンハンサー、スプライシングシグナル、ポリＡ付加
シグナル、選択マーカー、ＳＶ４０複製オリジン（以
下、ＳＶ４０ｏｒｉと略称する場合がある）などを含有
しているものを用いることができる。選択マーカーとし
ては、例えば、ジヒドロ葉酸還元酵素（以下、ｄｈｆｒ
と略称する場合がある）遺伝子、アンピシリン耐性遺伝
子（以下、Ａｍｐ^rと略称する場合がある）、ネオマイ
シン耐性遺伝子（以下、Ｎｅｏと略称する場合がある）
などが用いられる。ｄｈｆｒ遺伝子はメソトレキセート
（ＭＴＸ）耐性を、ＮｅｏはＧ４１８耐性を付与する。
特に、ｄｈｆｒ遺伝子欠損チャイニーズハムスター細胞
ＣＨＯを用いてｄｈｆｒ遺伝子を選択マーカーとして使
用する場合、チミジンを含まない培地によっても選択で
きる。また、必要に応じて、宿主に合ったシグナル配列
を、ペプチドまたは前駆体のＮ端末側に付加する。宿主
がエシェリヒア属菌である場合は、PhoＡ・シグナル配
列、ＯmpＡ・シグナル配列などが、宿主がバチルス属菌
である場合は、α−アミラーゼ・シグナル配列、サブチ
リシン・シグナル配列などが、宿主が酵母である場合
は、ＭＦα・シグナル配列、ＳＵＣ２・シグナル配列な
ど、宿主が動物細胞である場合には、例えばインシュリ
ン・シグナル配列、α−インターフェロン・シグナル配
列、抗体分子・シグナル配列などがそれぞれ利用でき
る。このようにして構築された本発明のペプチドまたは
前駆体をコードするＤＮＡを含有するベクターを細胞に
導入することによって形質転換体を製造することができ
る。

【００４７】宿主としては、例えばエシェリヒア属菌、
バチルス属菌、酵母、昆虫細胞、昆虫、動物細胞などが
用いられる。エシェリヒア属菌の具体例としては、エシ
ェリヒア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）
Ｋ１２・ＤＨ１〔プロシージングズ・オブ・ザ・ナショ
ナル・アカデミー・オブ・サイエンシイズ・オブ・ザ・
ユーエスエー（Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ．
Ｓｃｉ． ＵＳＡ），６０巻，１６０(１９６８)〕，Ｊ
Ｍ１０３〔ヌクイレック・アシッズ・リサーチ，（Nucl
eic Acids Research），９巻，３０９(１９８１)〕，Ｊ
Ａ２２１〔ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロ
ジー（Journal of Molecular Biology）〕，１２０巻，
５１７(１９７８)〕，ＨＢ１０１〔ジャーナル・オブ・
モレキュラー・バイオロジー，４１巻，４５９(１９６
９)〕，Ｃ６００〔ジェネティックス（Genetics），３
９巻，４４０(１９５４)〕などが用いられる。バチルス
属菌としては、例えばバチルス・サチルス（Bacillus s
ubtilis）ＭＩ１１４〔ジーン，２４巻，２５５(１９８
３)〕，２０７−２１〔ジャーナル・オブ・バイオケミ
ストリー（Journal of Biochemistry），９５巻，８７
(１９８４)〕などが用いられる。酵母としては、例え
ば、サッカロマイセス セレビシエ（Saccharomyces ce
revisiae）ＡＨ２２，ＡＨ２２Ｒ^-，ＮＡ８７−１１
Ａ，ＤＫＤ−５Ｄ，２０Ｂ−１２、シゾサッカロマイセ
ス ポンベ（Shizosaccharomyces pombe）ＮＣＹＣ１９
１３，ＮＣＹＣ２０３６、ピキア パストリス（Pichia
pastoris）などが用いられる。昆虫細胞としては、例
えば、ウイルスがＡｃＮＰＶの場合は、夜盗蛾の幼虫由
来株化細胞（Spodoptera frugiperda cell；Ｓｆ細
胞）、Trichoplusia niの中腸由来のＭＧ１細胞、Trich
oplusia niの卵由来のHigh Five^TM細胞、Mamestra bras
sicae由来の細胞またはEstigmena acrea由来の細胞など
が用いられる。ウイルスがＢｍＮＰＶの場合は、蚕由来
株化細胞（Bombyx mori N；ＢｍＮ細胞）などが用いら
れる。該Ｓｆ細胞としては、例えば、Ｓｆ９細胞（ATCC
CRL1711）、Ｓｆ２１細胞（以上、Vaughn, J.L.ら、イ
ン・ヴィボ（in Vivo）,13, 213-217,(1977)）などが用
いられる。昆虫としては、例えばカイコの幼虫などが用
いられる〔前田ら、ネイチャー（Nature），３１５巻，
５９２(１９８５)〕。

【００４８】動物細胞としては、例えば、マウスＡｔＴ
−２０，ラットＧＨ１，ラットＧＨ３，ラットＧＨ３，
ラットＭｔＴ，マウスＭＩＮ６，サル細胞ＣＯＳ−７，
Ｖｅｒｏ細胞，チャイニーズハムスター細胞ＣＨＯ（以
下、ＣＨＯ細胞と略記），ｄｈｆｒ遺伝子欠損チャイニ
ーズハムスター細胞ＣＨＯ（以下、ＣＨＯ（ｄｈｆ
ｒ^-）細胞と略記），Ｌ細胞，ミエローマ細胞，ヒトＦ
Ｌ細胞，２９３細胞，Ｃ１２７細胞，ＢＡＬＢ３Ｔ３細
胞，Ｓｐ-２／Ｏ細胞などが用いられる。これらの中で
も、ＡｔＴ−２０，マウスＭＩＮ６，ＣＨＯ細胞、ＣＨ
Ｏ（ｄｈｆｒ^-）細胞、２９３細胞などが好ましい。エ
シェリヒア属菌を形質転換するには、例えば、プロシー
ジングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・
サイエンジイズ・オブ・ザ・ユーエスエー（Proc. Nat
l. Acad. Sci. ＵＳＡ），６９巻，２１１０(１９７２)
やジーン（Gene），１７巻，１０７(１９８２)などに記
載の方法に従って行なうことができる。バチルス属菌を
形質転換するには、例えば、モレキュラー・アンド・ジ
ェネラル・ジェネティックス（Molecular ＆ General G
enetics），１６８巻，１１１(１９７９)などに記載の
方法に従って行なうことができる。酵母を形質転換する
には、例えば、メソッズ・イン・エンザイモロジー（Bi
o/Technology）,6, 47-55(1988)），１９４巻，１８２
−１８７（１９９１）、プロシージングズ・オブ・ザ・
ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシイズ・オブ
・ザ・ユーエスエー（Proc. Natl. Acad. Sci. ＵＳ
Ａ），７５巻，１９２９(１９７８)に記載の方法に従っ
て行なうことができる。昆虫細胞または昆虫を形質転換
するには、例えば、バイオ／テクノロジー（Bio/Techno
logy）,6, 47-55(1988)）などに記載の方法に従って行
なうことができる。動物細胞を形質転換するには、例え
ば、細胞工学別冊８ 新細胞工学実験プロトコール，２
６３−２６７（１９９５）（秀潤社発行）、ヴィロロジ
ー（Virology），５２巻，４５６(１９７３)に記載の方
法に従って行なうことができる。

【００４９】発現ベクターの細胞への導入方法として
は、例えば、リン酸カルシウム法〔Graham, F. L. and
van der Eb, A. J.ヴィロロジー（Virology） 52, 456-
467（1973）〕、電気穿孔法〔Neumann, E. et al. エン
ボ・ジャーナル（EMBO J.） 1,841-845（1982）〕など
が挙げられる。このようにして、本発明のペプチドまた
は前駆体をコードするＤＮＡを含有する発現ベクターで
形質転換された形質転換体が得られる。なお、動物細胞
を用いて、本発明のペプチドまたは前駆体を安定に発現
させる方法としては、上記の動物細胞に導入された発現
ベクターが染色体に組み込まれた細胞をクローン選択に
よって選択する方法がある。具体的には、上記の選択マ
ーカーを指標にして形質転換体を選択する。さらに、こ
のように選択マーカーを用いて得られた動物細胞に対し
て、繰り返しクローン選択を行なうことにより本発明の
ペプチドまたは前駆体の高発現能を有する安定な動物細
胞株を得ることができる。また、ｄｈｆｒ遺伝子を選択
マーカーとして用いた場合、ＭＴＸ濃度を徐々に上げて
培養し、耐性株を選択することにより、ｄｈｆｒ遺伝子
とともに、本発明のペプチドまたは前駆体をコードする
ＤＮＡを細胞内で増幅させて、さらに高発現の動物細胞
株を得ることもできる。上記の形質転換体を本発明のペ
プチドまたは前駆体をコードするＤＮＡが発現可能な条
件下で培養し、本発明のペプチドまたは前駆体を生成、
蓄積せしめることによって、本発明のペプチドまたは前
駆体またはその塩を製造することができる。

【００５０】宿主がエシェリヒア属菌、バチルス属菌で
ある形質転換体を培養する際、培養に使用される培地と
しては液体培地が適当であり、その中には該形質転換体
の生育に必要な炭素源、窒素源、無機物その他が含有せ
しめられる。炭素源としては、例えばグルコース、デキ
ストリン、可溶性澱粉、ショ糖など、窒素源としては、
例えばアンモニウム塩類、硝酸塩類、コーンスチープ・
リカー、ペプトン、カゼイン、肉エキス、大豆粕、バレ
イショ抽出液などの無機または有機物質、無機物として
は例えば塩化カルシウム、リン酸二水素ナトリウム、塩
化マグネシウムなどが挙げられる。また、酵母エキス、
ビタミン類、生長促進因子などを添加してもよい。培地
のｐＨは約５〜８が望ましい。エシェリヒア属菌を培養
する際の培地としては、例えば、グルコース、カザミノ
酸を含むＭ９培地〔ミラー（Miller），ジャーナル・オ
ブ・エクスペリメンツ・イン・モレキュラー・ジェネテ
ィックス（Journal of Experiments in Molecular Gene
tics），４３１−４３３，Cold Spring Harbor Laborat
ory, New York１９７２〕が好ましい。ここに必要によ
りプロモーターを効率よく働かせるために、例えば、３
β−インドリルアクリル酸のような薬剤を加えることが
できる。宿主がエシェリヒア属菌の場合、培養は通常約
１５〜４３℃で約３〜２４時間行い、必要により、通気
や撹拌を加えることもできる。宿主がバチルス属菌の場
合、培養は通常約３０〜４０℃で約６〜２４時間行な
い、必要により通気や撹拌を加えることもできる。

【００５１】宿主が酵母である形質転換体を培養する
際、培地としては、例えば、バークホールダー（Burkho
lder）最小培地〔Bostian, K. L. ら、プロシージング
ズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエ
ンシイズ・オブ・ザ・ユーエスエー（Proc. Natl. Aca
d. Sci. ＵＳＡ），７７巻，４５０５(１９８０)〕や
０.５％カザミノ酸を含有するＳＤ培地〔Bitter, G. A.
ら、プロシージングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカ
デミー・オブ・サイエンシイズ・オブ・ザ・ユーエスエ
ー（Proc. Natl. Acad. Sci. ＵＳＡ），８１巻，５３
３０（１９８４）〕が挙げられる。培地のｐＨは約５〜
８に調整するのが好ましい。培養は通常約２０℃〜３５
℃で約２４〜７２時間行い、必要に応じて通気や撹拌を
加える。宿主が昆虫細胞である形質転換体を培養する
際、培地としては、Grace's Insect Medium（Grace, T.
C.C.,ネイチャー（Nature）,195,788(1962)）に非動化
した１０％ウシ血清等の添加物を適宜加えたものなどが
用いられる。培地のｐＨは、約６．２〜６．４に調整す
るのが好ましい。培養は通常約２７℃で約３〜５日間行
ない、必要に応じて通気や撹拌を加える。宿主が動物細
胞である形質転換体を培養する際、培地としては、例え
ば、約５〜２０％の胎児牛血清を含むＭＥＭ培地〔サイ
エンス（Seience），１２２巻，５０１(１９５２)〕，
ＤＭＥＭ培地〔ヴィロロジー（Virology），８巻，３９
６(１９５９)〕，ＲＰＭＩ １６４０培地〔ジャーナル
・オブ・ザ・アメリカン・メディカル・アソシエーショ
ン（The Jounal of the American Medical Associatio
n）１９９巻，５１９(１９６７)〕，１９９培地〔プロ
シージング・オブ・ザ・ソサイエティ・フォー・ザ・バ
イオロジカル・メディスン（Proceeding of the Societ
y for the Biological Medicine），７３巻，１(１９５
０)〕などが用いられる。ｐＨは約６〜８であるのが好
ましい。培養は通常約３０℃〜４０℃で約１５〜７２時
間行ない、必要に応じて通気や撹拌を加える。特に、Ｃ
ＨＯ（ｄｈｆｒ^-）細胞およびｄｈｆｒ遺伝子を選択マ
ーカーとして用いる場合、チミジンをほとんど含まない
透析ウシ胎児血清を含むＤＭＥＭ培地を用いるのが好ま
しい。

【００５２】上記培養物から本発明のペプチドまたは前
駆体を分離精製するには、例えば、下記の方法により行
なうことができる。本発明のペプチドまたは前駆体を培
養菌体あるいは細胞から抽出するに際しては、培養後、
公知の方法で菌体あるいは細胞を集め、これを適当な緩
衝液に懸濁し、超音波、リゾチームおよび／または凍結
融解などによって菌体あるいは細胞を破壊したのち、遠
心分離やろ過により本発明のペプチドまたは前駆体の粗
抽出液を得る方法などが適宜用い得る。緩衝液の中に尿
素や塩酸グアニジンなどのたんぱく変性剤や、トリトン
Ｘ−１００^TMなどの界面活性剤が含まれていてもよい。
培養液中にペプチドまたは前駆体が分泌される場合に
は、培養終了後、それ自体公知の方法で菌体あるいは細
胞と上清とを分離し、上清を集める。このようにして得
られた培養上清、あるいは抽出液中に含まれる本発明の
ペプチドまたは前駆体の精製は、自体公知の分離・精製
法を適切に組み合わせて行なうことができる。これらの
公知の分離、精製法としては、塩析や溶媒沈澱法などの
溶解度を利用する方法、透析法、限外ろ過法、ゲルろ過
法、およびＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動法
などの主として分子量の差を利用する方法、イオン交換
クロマトグラフィーなどの荷電の差を利用する方法、ア
フィニティークロマトグラフィーなどの特異的親和性を
利用する方法、逆相高速液体クロマトグラフィーなどの
疎水性の差を利用する方法、等電点電気泳動法などの等
電点の差を利用する方法などが用いられる。かくして得
られる本発明のペプチドまたは前駆体が遊離体で得られ
た場合には、自体公知の方法あるいはそれに準じる方法
によって塩に変換することができ、逆に塩で得られた場
合には自体公知の方法あるいはそれに準じる方法によ
り、遊離体または他の塩に変換することができる。な
お、組換え体が産生する本発明のペプチドまたは前駆体
を、精製前または精製後に適当な蛋白修飾酵素を作用さ
せることにより、任意に修飾を加えたり、ポリペプチド
を部分的に除去することもできる。蛋白修飾酵素として
は、例えば、トリプシン、キモトリプシン、アルギニル
エンドペプチダーゼ、プロテインキナーゼ、グリコシダ
ーゼなどが用いられる。かくして生成する本発明のペプ
チドまたは前駆体の存在は、特異抗体を用いたエンザイ
ムイムノアッセイなどにより測定することができる。

【００５３】本発明のペプチド、その前駆体またはそれ
らの塩に対する抗体は、本発明のペプチド、その前駆体
またはそれらの塩を認識し得る抗体であれば、ポリクロ
ーナル抗体、モノクローナル抗体の何れであってもよ
い。該抗体は、本発明のペプチドまたはその前駆体のい
かなる部位を認識するものであってよい。また、該抗体
としては、本発明のペプチド、その前駆体またはそれら
の塩の活性を中和するものが好ましい。本発明のペプチ
ド、その前駆体またはそれらの塩（以下、抗体の説明の
項において、本発明のペプチドと略記する）に対する抗
体は、本発明のペプチド等を抗原として用い、自体公知
の抗体または抗血清の製造法に従って製造することがで
きる。

【００５４】〔モノクローナル抗体の作製〕 （ａ）モノクロナール抗体産生細胞の作製 本発明のペプチドは、温血動物に対して投与により抗体
産生が可能な部位にそれ自体あるいは担体、希釈剤とと
もに投与される。投与に際して抗体産生能を高めるた
め、完全フロイントアジュバントや不完全フロイントア
ジュバントを投与してもよい。投与は通常２〜６週毎に
１回ずつ、計２〜１０回程度行われる。用いられる温血
動物としては、例えば、サル、ウサギ、イヌ、モルモッ
ト、マウス、ラット、ヒツジ、ヤギ、ニワトリが用いら
れるが、マウスおよびラットが好ましく用いられる。モ
ノクローナル抗体産生細胞の作製に際しては、抗原を免
疫された温血動物、例えば、マウスから抗体価の認めら
れた個体を選択し最終免疫の２〜５日後に脾臓またはリ
ンパ節を採取し、それらに含まれる抗体産生細胞を骨髄
腫細胞と融合させることにより、モノクローナル抗体産
生ハイブリドーマを調製することができる。抗血清中の
抗体価の測定は、例えば、後記の標識化ペプチド等と抗
血清とを反応させたのち、抗体に結合した標識剤の活性
を測定することにより行なうことができる。融合操作
は、既知の方法、例えば、ケーラーとミルスタインの方
法〔ネイチャー（Nature)、256、495 (1975)〕に従い実
施することができる。融合促進剤としては、例えば、ポ
リエチレングリコール（ＰＥＧ）やセンダイウィルスな
どが用いられるが、好ましくはＰＥＧが用いられる。骨
髄腫細胞としては、例えば、ＮＳ−１、Ｐ３Ｕ１、ＳＰ
２／０、ＡＰ−１などがあげられるが、Ｐ３Ｕ１が好ま
しく用いられる。用いられる抗体産生細胞（脾臓細胞）
数と骨髄腫細胞数との好ましい比率は１：１〜２０：１
程度であり、ＰＥＧ（好ましくはＰＥＧ１０００〜ＰＥ
Ｇ６０００）が１０〜８０％程度の濃度で添加され、２
０〜４０℃、好ましくは３０〜３７℃で１〜１０分間イ
ンキュベートすることにより効率よく細胞融合を実施す
ることができる。

【００５５】モノクローナル抗体産生ハイブリドーマの
スクリーニングには種々の方法が使用できるが、例え
ば、ペプチド抗原を直接あるいは担体とともに吸着させ
た固相（例、マイクロプレート）にハイブリドーマ培養
上清を添加し、次に放射性物質や酵素などで標識した抗
免疫グロブリン抗体（細胞融合に用いられる細胞がマウ
スの場合、抗マウス免疫グロブリン抗体が用いられる）
またはプロテインＡを加え、固相に結合した抗ペプチド
等抗体を検出する方法、抗免疫グロブリン抗体またはプ
ロテインＡを吸着させた固相にハイブリドーマ培養上清
を添加し、放射性物質や酵素などで標識したペプチド等
を加え、固相に結合したモノクローナル抗体を検出する
方法などが用いられる。モノクローナル抗体の選別は、
自体公知あるいはそれに準じる方法に従って行なうこと
ができるが、通常、ＨＡＴ（ヒポキサンチン、アミノプ
テリン、チミジン）を添加した動物細胞用培地で行なう
ことができる。選別および育種用培地としては、ハイブ
リドーマが生育できるものならばどのような培地を用い
ても良い。例えば、１〜２０％、好ましくは１０〜２０
％の牛胎児血清を含むＲＰＭＩ１６４０培地、１〜１０
％の牛胎児血清を含むＧＩＴ培地（和光純薬工業
（株））あるいはハイブリドーマ培養用無血清培地（Ｓ
ＦＭ−１０１、日水製薬（株））などを用いることがで
きる。培養温度は、通常２０〜４０℃、好ましくは約３
７℃である。培養時間は、通常５日〜３週間、好ましく
は１週間〜２週間である。培養は、通常５％炭酸ガス下
で行なうことができる。ハイブリドーマ培養上清の抗体
価は、上記の抗血清中の抗体価の測定と同様にして測定
できる。

【００５６】（ｂ）モノクロナール抗体の精製 モノクローナル抗体の分離精製は、自体公知の方法、例
えが、免疫グロブリンの分離精製法〔例、塩析法、アル
コール沈殿法、等電点沈殿法、電気泳動法、イオン交換
体（例、ＤＥＡＥ）による吸脱着法、超遠心法、ゲルろ
過法、抗原結合固相あるいはプロテインＡあるいはプロ
テインＧなどの活性吸着剤により抗体のみを採取し、結
合を解離させて抗体を得る特異的精製法〕に従って行な
うことができる。

【００５７】〔ポリクローナル抗体の作製〕本発明のポ
リクローナル抗体は、それ自体公知あるいはそれに準じ
る方法にしたがって製造することができる。例えば、免
疫抗原（ペプチド抗原）とキャリアー蛋白質との複合体
をつくり、上記のモノクローナル抗体の製造法と同様に
温血動物に免疫を行ない、該免疫動物から本発明のペプ
チド等に対する抗体含有物を採取して、抗体の分離精製
を行なうことにより製造できる。温血動物を免疫するた
めに用いられる免疫抗原とキャリアー蛋白質との複合体
に関し、キャリアー蛋白質の種類およびキャリアーとハ
プテンとの混合比は、キャリアーに架橋させて免疫した
ハプテンに対して抗体が効率良くできれば、どの様なも
のをどの様な比率で架橋させてもよいが、例えば、ウシ
血清アルブミンやウシサイログロブリン、ヘモシアニン
等を重量比でハプテン１に対し、約０．１〜２０、好ま
しくは約１〜５の割合でカップルさせる方法が用いられ
る。また、ハプテンとキャリアーのカプリングには、種
々の縮合剤を用いることができるが、グルタルアルデヒ
ドやカルボジイミド、マレイミド活性エステル、チオー
ル基、ジチオビリジル基を含有する活性エステル試薬等
が用いられる。縮合生成物は、温血動物に対して、抗体
産生が可能な部位にそれ自体あるいは担体、希釈剤とと
もに投与される。投与に際して抗体産生能を高めるた
め、完全フロイントアジュバントや不完全フロイントア
ジュバントを投与してもよい。投与は、通常約２〜６週
毎に１回ずつ、計約３〜１０回程度行なわれる。ポリク
ローナル抗体は、上記の方法で免疫された温血動物の血
液、腹水など、好ましくは血液から採取される。抗血清
中のポリクローナル抗体価の測定は、上記の血清中の抗
体価の測定と同様にして測定できる。ポリクローナル抗
体の分離精製は、上記のモノクローナル抗体の分離精製
と同様の免疫グロブリンの分離精製法に従って行なうこ
とができる。本発明の前駆体が切断され本発明のペプチ
ドが生成する際に生じる前記の断片ペプチドに対する抗
体も上記と同様に製造し、使用することができる。

【００５８】本発明のペプチドまたはその前駆体をコー
ドする塩基配列に実質的に相補的な塩基配列を有するオ
リゴヌクレオチド誘導体またはその塩としては、本発明
のＤＮＡに実質的に相補的な塩基配列を有し、該ＤＮＡ
に結合し得るものであれば、いずれのオリゴヌクレオチ
ド誘導体またはその塩であってもよい。本発明のペプチ
ドまたはその前駆体をコードする塩基配列に実質的に相
補的な塩基配列とは、例えば、本発明のＤＮＡに相補的
な塩基配列（すなわち、本発明のＤＮＡの相補鎖）の全
塩基配列あるいは部分塩基配列と約７０％以上、好まし
くは約８０％以上、より好ましくは約９０％以上、最も
好ましくは約９５％以上の相同性を有する塩基配列など
が挙げられる。特に、本発明のＤＮＡの相補鎖の全塩基
配列うち、本発明のペプチド等のＮ末端部位をコードす
る部分の塩基配列（例えば、開始コドン付近の塩基配列
など）の相補鎖と約７０％以上、好ましくは約８０％以
上、より好ましくは約９０％以上、最も好ましくは約９
５％以上の相同性を有するオリゴヌクレオリド誘導体ま
たはその塩が好適である。これらのオリゴヌクレオチド
誘導体またはその塩は、公知のＤＮＡ合成装置などを用
いて製造することができる。

【００５９】本発明のペプチド、その前駆体またはそれ
らの塩は、例えば、ソマトスタチ様活性、コルスタチン
様活性などの有用な生理活性を有しているペプチドであ
る。具体的には、（ｉ）成長ホルモンの分泌抑制作用、
（ii）甲状腺刺激ホルモン、プロラクチンなどの下垂体
ホルモンの分泌抑制作用、（ii）ガストリン、インシュ
リンなどの消化管ホルモンの分泌抑制作用、（iv）神経
伝達作用、（ｖ）細胞増殖作用、（vi）レム睡眠の誘発
物質であるアセチルコリン作用の抑制作用、（vii）平
滑筋の収縮の抑制作用などを有している。したがって、
本発明のペプチド、その前駆体またはそれらの塩は、さ
まざまな用途に用いることができる。以下に、本発明の
ペプチド、その前駆体またはそれらの塩（以下、本発明
のペプチド等と略記する場合がある）、本発明のペプチ
ドまたはその前駆体をコードするＤＮＡ（以下、本発明
のＤＮＡと略記する場合がある）、本発明のペプチド、
その前駆体またはそれらの塩に対する抗体（以下、本発
明の抗体と略記する場合がある）およびオリゴヌクレオ
チド誘導体またはその塩の用途を説明する。

【００６０】（１）各種疾病の治療・予防剤などの医薬 本発明のペプチド等は、上記したとおり、（ｉ）成長ホ
ルモンの分泌抑制作用、（ii）甲状腺刺激ホルモン、プ
ロラクチンなどの下垂体ホルモンの分泌抑制作用、（ii
i）ガストリン、インシュリンなどの消化管ホルモンの
分泌抑制作用、（iv）神経伝達作用、（ｖ）細胞増殖作
用、（vi）レム睡眠の誘発物質であるアセチルコリン作
用の抑制作用、（vii）平滑筋の収縮の抑制作用などを
有している。したがって、本発明のペプチド等または本
発明のＤＮＡは、生体内におけるコルチスタチンまたは
ソマトスタチンの欠失・損傷や、コルチスタチンまたは
ソマトスタチンをコードするＤＮＡの発現低下などに起
因する種々の疾病の治療・予防剤などの医薬として有用
である。具体的には、本発明のペプチド等または本発明
のＤＮＡは、例えば、ホルモン産生腫瘍、先端巨大症、
巨人症、痴呆症、糖尿病、胃潰瘍などの治療・予防剤、
ホルモン分泌抑制剤、腫瘍増殖抑制剤、神経活動もしく
は睡眠の調節剤などの医薬として有用である。

【００６１】さらには、本発明のペプチド等または本発
明のＤＮＡは、例えば、急性バクテリア髄膜炎，急性心
筋梗塞，急性膵炎，急性ウイルス脳炎，成人呼吸促迫症
候群，アルコール性肝炎，アルツハイマー病，喘息，動
脈硬化，アトピー性皮膚炎，バクテリア肺炎，膀胱が
ん，骨折，乳がん，過食症，多食症，火傷治癒，子宮頸
部がん，慢性リンパ性白血病，慢性骨髄性白血病，慢性
膵炎，肝硬変，大腸がん（結腸／直腸がん），クローン
病，痴呆，糖尿病性合併症，糖尿病性腎症，糖尿病性神
経障害，糖尿病性網膜症，胃炎，ヘリコバクター・ピロ
リ感染症，肝不全，Ａ型肝炎，Ｂ型肝炎，Ｃ型肝炎，肝
炎，単純ヘルペスウイルス感染症，水痘帯状疱疹ウイル
ス感染症，ホジキン病，エイズ感染症，ヒトパピローマ
ウイルス感染症，高カルシウム血症，高コレステロール
血症，高グリセリド血症，高脂血症，感染症，インフル
エンザ感染症，インシュリン依存性糖尿病（Ｉ型），侵
襲性ブドウ状球菌感染症，悪性黒色腫，がん転移，多発
性骨髄腫，アレルギー性鼻炎，腎炎，非ホジキン性リン
パ腫，インシュリン非依存性糖尿病（II型），非小細胞
肺がん，臓器移植，骨関節炎，骨軟化症，骨減少症，骨
粗鬆症，卵巣がん，骨ペーチェット病，消化性潰瘍，末
梢血管疾患，前立腺がん，逆流性食道炎，腎不全，リウ
マチ関節炎，精神分裂症，敗血症，敗血症ショック，重
症全身性真菌感染症，小細胞肺がん，脊髄損傷，胃が
ん，全身性エリテマトーサス，一過性脳虚血発作，結
核，心弁膜症，血管性／多発梗塞痴呆，創傷治癒，不眠
症，関節炎，神経変成疾患などの各種疾病の治療・予防
剤などの医薬としても有用である。特に、本発明のペプ
チド等または本発明のＤＮＡは、不眠症の治療・予防剤
として有用である。

【００６２】本発明のペプチド等を上記の医薬として使
用する場合は、例えば、必要に応じて糖衣を施した錠
剤、カプセル剤、エリキシル剤、マイクロカプセル剤な
どとして経口的に、あるいは水もしくはそれ以外の薬学
的に許容し得る液との無菌性溶液、または懸濁液剤など
の注射剤の形で非経口的に使用できる。例えば、本発明
のペプチド等を生理学的に認められる担体、香味剤、賦
形剤、ベヒクル、防腐剤、安定剤、結合剤などとともに
一般に認められた製剤実施に要求される単位用量形態で
混和することによって製造することができる。これら製
剤における有効成分量は指示された範囲の適当な容量が
得られるようにするものである。本発明のペプチド等を
上記の治療・予防剤として使用する場合は、少なくとも
９０％、好ましくは９５％以上、より好ましくは９８％
以上、さらに好ましくは９９％以上に精製されたものを
使用するのが好ましい。本発明のＤＮＡを上記の治療・
予防剤として使用する場合は、該ＤＮＡを単独あるいは
レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、ア
デノウイルスアソシエーテッドウイルスベクターなどの
適当なベクターに挿入した後、常套手段に従ってヒトま
たは温血動物に投与することができる。本発明のＤＮＡ
は、そのままで、あるいは摂取促進のために補助剤など
の生理学的に認められる担体とともに製剤化し、遺伝子
銃やハイドロゲルカテーテルのようなカテーテルによっ
て投与できる。

【００６３】錠剤、カプセル剤などに混和することがで
きる添加剤としては、例えば、ゼラチン、コーンスター
チ、トラガント、アラビアゴムのような結合剤、結晶性
セルロースのような賦形剤、コーンスターチ、ゼラチ
ン、アルギン酸などのような膨化剤、ステアリン酸マグ
ネシウムのような潤滑剤、ショ糖、乳糖またはサッカリ
ンのような甘味剤、ペパーミント、アカモノ油またはチ
ェリーのような香味剤などが用いられる。調剤単位形態
がカプセルである場合には、前記タイプの材料にさらに
油脂のような液状担体を含有することができる。注射の
ための無菌組成物は注射用水のようなベヒクル中の活性
物質、胡麻油、椰子油などのような天然産出植物油など
を溶解または懸濁させるなどの通常の製剤実施に従って
処方することができる。注射用の水性液としては、例え
ば、生理食塩水、ブドウ糖やその他の補助薬を含む等張
液（例えば、Ｄ−ソルビトール、Ｄ−マンニトール、塩
化ナトリウムなど）などが用いられ、適当な溶解補助
剤、例えば、アルコール（例えば、エタノール）、ポリ
アルコール（例えば、プロピレングリコール、ポリエチ
レングリコール）、非イオン性界面活性剤（例えば、ポ
リソルベート８０^TM、ＨＣＯ−５０）などと併用しても
よい。油性液としては、例えば、ゴマ油、大豆油などが
用いられ、溶解補助剤として安息香酸ベンジル、ベンジ
ルアルコールなどと併用してもよい。また、緩衝剤（例
えば、リン酸塩緩衝液、酢酸ナトリウム緩衝液）、無痛
化剤（例えば、塩化ベンザルコニウム、塩酸プロカイン
など）、安定剤（例えば、ヒト血清アルブミン、ポリエ
チレングリコールなど）、保存剤（例えば、ベンジルア
ルコール、フェノールなど）、酸化防止剤などと配合し
てもよい。調整された注射液は、通常、適当なアンプル
に充填される。

【００６４】このようにして得られる製剤は、安全で低
毒性であるので、例えば、ヒトまたは温血動物（例え
ば、ラット、マウス、モルモット、ウサギ、トリ、ヒツ
ジ、ブタ、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、サルなど）に対し
て投与することができる。本発明のペプチド等の投与量
は、対象疾患、投与対象、投与ルートなどにより差異は
あるが、例えば、不眠症治療の目的で本発明のペプチド
等を経口投与する場合、一般的に該ペプチド等を成人
（６０ｋｇとして）においては、一日につき約０.１ｍ
ｇ〜１００ｍｇ、好ましくは約１．０〜５０ｍｇ、より
好ましくは約１．０〜２０ｍｇ投与する。非経口的に投
与する場合、本発明のペプチド等の１回投与量は投与対
象、対象疾患などによっても異なるが、例えば、不眠症
治療の目的で本発明のペプチド等を注射剤の形で通常成
人（体重６０ｋｇとして）に投与する場合は、一日につ
き該ペプチド等を約０．０１〜３０ｍｇ程度、好ましく
は約０．１〜２０ｍｇ程度、より好ましくは約０．１〜
１０ｍｇ程度を静脈注射するのが好都合である。他の動
物の場合も、６０ｋｇ当たりに換算した量を投与するこ
とができる。本発明のＤＮＡが挿入されたベクターも上
記と同様に製剤化され、通常、非経口的に使用される。

【００６５】（２）遺伝子診断剤 本発明のＤＮＡは、プローブとして使用することによ
り、ヒトまたは温血動物（例えば、ラット、マウス、モ
ルモット、ウサギ、トリ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、
ネコ、イヌ、サルなど）における本発明のペプチドまた
はその前駆体をコードするＤＮＡまたはｍＲＮＡの異常
（遺伝子異常）を検出することができるので、例えば、
該ＤＮＡまたはｍＲＮＡの損傷、突然変異あるいは発現
低下や、該ＤＮＡまたはｍＲＮＡの増加あるいは発現過
多などに起因する各種疾病を診断するための遺伝子診断
剤として有用である。本発明のＤＮＡを用いる上記の遺
伝子診断は、例えば、自体公知のノーザンハイブリダイ
ゼーションやＰＣＲ−ＳＳＣＰ法（ゲノミックス（Geno
mics），第５巻，８７４〜８７９頁（１９８９年）、プ
ロシージングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・
オブ・サイエンシイズ・オブ・ユーエスエー（Proceedi
ngs ofthe Natinal Academy of Sciences of the Unite
d States of America），第８６巻，２７６６〜２７７
０頁（１９８９年））などにより実施することができ
る。 すなわち、本発明のＤＮＡは、例えば、ホルモン
産生腫瘍、先端巨大症、巨人症、痴呆症、糖尿病、胃潰
瘍、小人症、乳汁分泌不全などの他、アルツハイマー
病，喘息，動脈硬化，アトピー性皮膚炎，過食症，多食
症，慢性リンパ性白血病，慢性骨髄性白血病，クローン
病，糖尿病性合併症，ホジキン病，高カルシウム血症，
高コレステロール血症，高グリセリド血症，高脂血症，
インシュリン依存性糖尿病（Ｉ型），アレルギー性鼻
炎，精神分裂症，不眠症などの疾病の遺伝子診断剤とし
て有用である。特に、不眠症の遺伝子診断剤として有用
である。

【００６６】例えば、ノーザンハイブリダイゼーション
により該ｍＲＮＡの発現低下が検出された場合は、例え
ば、ホルモン産生腫瘍、先端巨大症、巨人症、痴呆症、
糖尿病、胃潰瘍、不眠症などの疾病である、または将来
罹患する可能性が高いと診断することができる。一方、
ノーザンハイブリダイゼーションにより該ｍＲＮＡの発
現過多が検出された場合は、例えば、小人症、乳汁分泌
不全、糖尿病などの疾患である、または将来罹患する可
能性が高いと診断することができる。また、ＰＣＲ−Ｓ
ＳＣＰ法によりＤＮＡの突然変異が検出された場合、例
えば、ホルモン産生腫瘍、先端巨大症、巨人症、痴呆
症、糖尿病、胃潰瘍、小人症、乳汁分泌不全などの他、
アルツハイマー病，喘息，動脈硬化，アトピー性皮膚
炎，過食症，多食症，慢性リンパ性白血病，慢性骨髄性
白血病，クローン病，糖尿病性合併症，ホジキン病，高
カルシウム血症，高コレステロール血症，高グリセリド
血症，高脂血症，インシュリン依存性糖尿病（Ｉ型），
アレルギー性鼻炎，精神分裂症，不眠症などの疾病であ
る、または将来罹患する可能性が高いと診断することが
できる。

【００６７】（３）本発明のペプチド、その前駆体また
はそれらの塩の定量 本発明の抗体は、本発明のペプチド等を特異的に認識す
ることができるので、被検液中の本発明のペプチド等の
定量、特にサンドイッチ免疫測定法による定量などに使
用することができる。すなわち、本発明は、（ｉ）本発
明のペプチド等に対する抗体と、被検液および標識化さ
れた本発明のペプチド等とを競合的に反応させ、該抗体
に結合した標識化された本発明のペプチド等の割合を測
定することを特徴とする被検液中の本発明のペプチド等
の定量法、および（ii）被検液と担体上に不溶化した本
発明の抗体および標識化された別の本発明の抗体とを同
時あるいは連続的に反応させたのち、不溶化担体上の標
識剤の活性を測定することを特徴とする被検液中の本発
明のペプチド等の定量法を提供する。上記（ii）の定量
法においては、一方の抗体が本発明のペプチド等のＮ端
部を認識する抗体で、他方の抗体が本発明のペプチド等
のＣ端部に反応する抗体であることが望ましい。

【００６８】また、本発明のペプチド等に対するモノク
ローナル抗体（以下、本発明のモノクローナル抗体と略
記する）を用いて本発明のペプチド等の定量を行なえる
ほか、組織染色等による検出を行なうこともできる。こ
れらの目的には、抗体分子そのものを用いてもよく、ま
た、抗体分子のＦ(ａｂ')₂ 、Ｆａｂ'、あるいはＦａｂ
画分を用いてもよい。本発明の抗体を用いる本発明のペ
プチド等の定量法は、 特に制限されるべきものではな
く、被測定液中の抗原量（例えば、ペプチド量）に対応
した抗体、抗原もしくは抗体−抗原複合体の量を化学的
または物理的手段により検出し、これを既知量の抗原を
含む標準液を用いて作製した標準曲線より算出する測定
法であれば、いずれの測定法を用いてもよい。例えば、
ネフロメトリー、競合法、イムノメトリック法およびサ
ンドイッチ法が好適に用いられるが、感度、特異性の点
で、後述するサンドイッチ法を用いるのが特に好まし
い。標識物質を用いる測定法に用いられる標識剤として
は、放射性同位元素、酵素、蛍光物質、発光物質などが
挙げられる。放射性同位元素としては、例えば
〔¹²⁵Ｉ〕、〔¹³¹Ｉ〕、〔³Ｈ〕、〔¹⁴Ｃ〕などが、上
記酵素としては、安定で比活性の大きなものが好まし
く、例えば、β−ガラクトシダーゼ、β−グルコシダー
ゼ、アルカリフォスファターゼ、パーオキシダーゼ、リ
ンゴ酸脱水素酵素等が、蛍光物質としては、フルオレス
カミン、フルオレッセンイソチオシアネートなどが、発
光物質としては、ルミノール、ルミノール誘導体、ルシ
フェリン、ルシゲニンなどがそれぞれ挙げられる。さら
に、抗体あるいは抗原と標識剤との結合にビオチン−ア
ビジン系を用いることもできる。

【００６９】抗原あるいは抗体の不溶化に当っては、物
理吸着を用いてもよく、また通常ペプチドあるいは酵素
等を不溶化、固定化するのに用いられる化学結合を用い
る方法でもよい。担体としては、アガロース、デキスト
ラン、セルロースなどの不溶性多糖類、ポリスチレン、
ポリアクリルアミド、シリコン等の合成樹脂、あるいは
ガラス等が挙げられる。サンドイッチ法においては不溶
化した本発明のモノクローナル抗体に被検液を反応させ
（１次反応）、さらに標識化した別の本発明のモノクロ
ーナル抗体を反応させ（２次反応）た後、不溶化担体上
の標識剤の活性を測定することにより被検液中の本発明
のペプチド量等を定量することができる。１次反応と２
次反応は逆の順序に行なっても、また、同時に行なって
もよいし時間をずらして行なってもよい。標識化剤およ
び不溶化の方法は前記のそれらに準じることができる。
また、サンドイッチ法による免疫測定法において、固相
用抗体あるいは標識用抗体に用いられる抗体は必ずしも
１種類である必要はなく、測定感度を向上させる等の目
的で２種類以上の抗体の混合物を用いてもよい。本発明
のサンドイッチ法による本発明のペプチド等の測定法に
おいては、１次反応と２次反応に用いられる本発明のモ
ノクローナル抗体は、本発明のペプチド等の結合する部
位が相異なる抗体が好ましく用いられる。すなわち、１
次反応および２次反応に用いられる抗体は、例えば、２
次反応で用いられる抗体が、本発明のペプチド等のＣ端
部を認識する場合、１次反応で用いられる抗体は、好ま
しくはＣ端部以外、例えばＮ端部を認識する抗体が用い
られる。

【００７０】本発明のモノクローナル抗体をサンドイッ
チ法以外の測定システム、例えば、競合法、イムノメト
リック法あるいはネフロメトリーなどに用いることがで
きる。競合法では、被検液中の抗原と標識抗原とを抗体
に対して競合的に反応させたのち、未反応の標識抗原
(Ｆ）と、抗体と結合した標識抗原（Ｂ）とを分離し
（Ｂ／Ｆ分離）、Ｂ，Ｆいずれかの標識量を測定し、被
検液中の抗原量を定量する。本反応法には、抗体として
可溶性抗体を用い、Ｂ／Ｆ分離をポリエチレングリコー
ル、前記抗体に対する第２抗体などを用いる液相法、お
よび、第１抗体として固相化抗体を用いるか、あるい
は、第１抗体は可溶性のものを用い第２抗体として固相
化抗体を用いる固相化法とが用いられる。イムノメトリ
ック法では、被検液中の抗原と固相化抗原とを一定量の
標識化抗体に対して競合反応させた後固相と液相を分離
するか、あるいは、被検液中の抗原と過剰量の標識化抗
体とを反応させ、次に固相化抗原を加え未反応の標識化
抗体を固相に結合させたのち、固相と液相を分離する。
次に、いずれかの相の標識量を測定し被検液中の抗原量
を定量する。また、ネフロメトリーでは、ゲル内あるい
は溶液中で抗原抗体反応の結果生じた不溶性の沈降物の
量を測定する。被検液中の抗原量僅かであり、少量の沈
降物しか得られない場合にもレーザーの散乱を利用する
レーザーネフロメトリーなどが好適に用いられる。

【００７１】これら個々の免疫学的測定法を本発明の定
量方法に適用するにあたっては、特別の条件、操作等の
設定は必要とされない。それぞれの方法における通常の
条件、操作法に当業者の通常の技術的配慮を加えて本発
明のペプチド等の測定系を構築すればよい。これらの一
般的な技術手段の詳細については、総説、成書などを参
照することができる。例えば、入江 寛編「ラジオイム
ノアッセイ〕（講談社、昭和４９年発行）、入江 寛編
「続ラジオイムノアッセイ〕（講談社、昭和５４年発
行）、石川栄治ら編「酵素免疫測定法」（医学書院、昭
和５３年発行）、石川栄治ら編「酵素免疫測定法」（第
２版）（医学書院、昭和５７年発行）、石川栄治ら編
「酵素免疫測定法」（第３版）（医学書院、昭和６２年
発行）、「Methods in ENZYMOLOGY」Vol. 70(Immunochem
ical Techniques(Part A))、 同書 Vol. 73(Immunochem
ical Techniques(Part B))、 同書 Vol. 74(Immunochem
ical Techniques(Part C))、 同書 Vol. 84(Immunochem
ical Techniques(Part D:Selected Immunoassays))、
同書 Vol. 92(Immunochemical Techniques(Part E:Mono
clonal Antibodies and General Immunoassay Method
s))、 同書 Vol. 121(Immunochemical Techniques(Part
I:Hybridoma Technology and Monoclonal Antibodie
s))(以上、アカデミックプレス社発行)などを参照する
ことができる。以上のようにして、本発明の抗体を用い
ることによって、本発明のペプチド等を感度良く定量す
ることができる。

【００７２】さらには、本発明の抗体を用いて本発明の
ペプチド等の濃度を定量することによって、本発明のペ
プチド等が関与する種々の疾病の診断をすることができ
る。具体的には、本発明のペプチド等の濃度の減少が検
出された場合は、例えば、ホルモン産生腫瘍、先端巨大
症、巨人症、痴呆症、糖尿病、胃潰瘍、不眠症などの疾
病である、または将来罹患する可能性が高いと診断する
ことができる。一方、本発明のペプチド等の濃度の増加
が検出された場合は、、例えば、小人症、乳汁分泌不
全、糖尿病などの疾患である、または将来罹患する可能
性が高いと診断することができる。その他、本発明のペ
プチドの濃度の異常が検出された場合、例えば、急性バ
クテリア髄膜炎，急性心筋梗塞，急性膵炎，急性ウイル
ス脳炎，成人呼吸促迫症候群，アルコール性肝炎，アル
ツハイマー病，喘息，動脈硬化，アトピー性皮膚炎，バ
クテリア肺炎，膀胱がん，骨折，乳がん，過食症，多食
症，火傷治癒，子宮頸部がん，慢性リンパ性白血病，慢
性骨髄性白血病，慢性膵炎，肝硬変，大腸がん（結腸／
直腸がん），クローン病，糖尿病性合併症，糖尿病性腎
症，糖尿病性神経障害，糖尿病性網膜症，胃炎，ヘリコ
バクター・ピロリ感染症，肝不全，Ａ型肝炎，Ｂ型肝
炎，Ｃ型肝炎，肝炎，単純ヘルペスウイルス感染症，水
痘帯状疱疹ウイルス感染症，ホジキン病，エイズ感染
症，ヒトパピローマウイルス感染症，高カルシウム血
症，高コレステロール血症，高グリセリド血症，高脂血
症，感染症，インフルエンザ感染症，インシュリン依存
性糖尿病（Ｉ型），侵襲性ブドウ状球菌感染症，悪性黒
色腫，がん転移，多発性骨髄腫，アレルギー性鼻炎，腎
炎，非ホジキン性リンパ腫，インシュリン非依存性糖尿
病（II型），非小細胞肺がん，臓器移植，骨関節炎，骨
軟化症，骨減少症（骨粗鬆症），骨粗鬆症，卵巣がん，
骨ペーチェット病，消化性潰瘍，末梢血管疾患，前立腺
がん，逆流性食道炎，腎不全，リウマチ関節炎，精神分
裂症，敗血症，敗血症ショック，重症全身性真菌感染
症，小細胞肺がん，脊髄損傷，胃がん，全身性エリテマ
トーサス，一過性脳虚血発作，結核，心弁膜症，血管性
／多発梗塞痴呆，創傷治癒，関節炎，神経変成疾患など
の疾病である、または将来罹患する可能性が高いと診断
することができる。また、本発明の抗体は、体液や組織
などの被検体中に存在する本発明のペプチド等を検出す
るために使用することができる。また、本発明のペプチ
ド等を精製するために使用する抗体カラムの作製、精製
時の各分画中の本発明のペプチド等の検出、被検細胞に
おける本発明のペプチド等の挙動の分析などのために使
用することができる。

【００７３】（４）医薬候補化合物のスクリーニング 本発明のペプチド等は、ソマトスタチンレセプター、本
発明のペプチド等に対するレセプター、ＧＰＲ７、ＧＰ
Ｒ８などの本発明のペプチド等が結合するレセプター
（以下、単にレセプターと略称する）に特異的に結合す
ることができるので、本発明のペプチド等と該レセプタ
ーを用いたリガンド・レセプター結合アッセイ系を構築
することによって、ソマトスタチン様活性またはコルチ
スタチン様活性を有する医薬候補化合物のスクリーニン
グや、本発明のペプチド等，ソマトスタチンもしくはコ
ルチスタチンの作用を促進または抑制する医薬候補化合
物のスクリーニングを行なうことができる。すなわち、
本発明は、本発明のペプチド等を用いることを特徴とす
る、本発明のペプチド等と該レセプターとの結合性を変
化させる化合物またはその塩のスクリーニング方法を提
供する。

【００７４】より具体的には、本発明は、 （Ｉ）（ｉ）レセプター、その部分ペプチドまたはそれ
らの塩に、本発明のペプチド等を接触させた場合と（i
i）レセプター、その部分ペプチドまたはそれらの塩
に、本発明のペプチド等および試験化合物を接触させた
場合との比較を行なうことを特徴とする本発明のペプチ
ド等とレセプターとの結合性を変化させる化合物または
その塩のスクリーニング方法、および （II）（ｉ）レセプターを含有する細胞またはその細胞
膜画分に、本発明のペプチド等を接触させた場合と（i
i）レセプターを含有する細胞またはその細胞膜画分
に、本発明のペプチド等および試験化合物を接触させた
場合との比較を行なうことを特徴とする本発明のペプチ
ド等とレセプターとの結合性を変化させる化合物または
その塩のスクリーニング方法を提供する。具体的には、
本発明のスクリーニング方法においては、（ｉ）と（i
i）の場合における、例えば、レセプターまたはレセプ
ターを含有する細胞に対する本発明のペプチド等の結合
量、細胞刺激活性などを測定して、比較することを特徴
とするものである。

【００７５】本発明のペプチド等とレセプターとの結合
性を変化させる化合物には、レセプターと結合して、
細胞刺激活性を示す化合物（いわゆる、レセプターアゴ
ニスト）、レセプターと結合して、アゴニストによる
細胞刺激活性を阻害する化合物（いわゆる、レセプター
アンタゴニスト）、本発明のペプチド等とレセプター
との結合力を増強する化合物、または本発明のペプチ
ド等とレセプターとの結合力を減少させる化合物などが
含まれる。より具体的には、本発明は、 （Ｉａ）（ｉ）標識した本発明のぺプチド等を、レセプ
ター，その部分ペプチドまたはそれらの塩に接触させた
場合と、（ii）標識した本発明のペプチド等および試験
化合物を、レセプター，その部分ペプチドまたはそれら
の塩に接触させた場合における、標識した本発明のペプ
チド等の該レセプター，その部分ペプチドまたはそれら
の塩に対する結合量を測定し、比較することを特徴とす
る本発明のペプチド等とレセプターとの結合性を変化さ
せる化合物またはその塩のスクリーニング方法、 （IIａ）（ｉ）標識した本発明のペプチド等を、レセプ
ターを含有する細胞またはその細胞膜画分に接触させた
場合と、（ii）標識した本発明のペプチド等および試験
化合物を、レセプターを含有する細胞またはその細胞膜
画分に接触させた場合における、標識した本発明のペプ
チド等の該細胞またはその細胞膜画分に対する結合量を
測定し、比較することを特徴とする本発明のペプチド等
とレセプターとの結合性を変化させる化合物またはその
塩のスクリーニング方法、 （IIｂ）本発明のペプチド等を、レセプターを含有する
細胞に接触させた場合における、レセプターを介した細
胞刺激活性（例えば、アラキドン酸遊離、アセチルコリ
ン遊離、細胞内Ｃａ²⁺濃度の変動、細胞内ｃＡＭＰ生
成、細胞内ｃＧＭＰ生成、イノシトールリン酸産生、細
胞膜電位変動、細胞内蛋白質のリン酸化、ｃ−ｆｏｓの
活性化、ｐＨの低下、細胞の遊走活性などを促進する活
性または抑制する活性など、特に、細胞内ｃＡＭＰ生成
を促進する活性または抑制する活性）を測定し、比較す
ることを特徴とするレセプターアゴニストのスクリーニ
ング方法、および （IIｃ）（ｉ）本発明のペプチド等を、レセプターを含
有する細胞に接触させた場合と、（ii）本発明のペプチ
ドおよび試験化合物を、レセプターを含有する細胞に接
触させた場合における、レセプターを介した細胞刺激活
性（例えば、アラキドン酸遊離、アセチルコリン遊離、
細胞内Ｃａ²⁺濃度の変動、細胞内ｃＡＭＰ生成、細胞内
ｃＧＭＰ生成、イノシトールリン酸産生、細胞膜電位変
動、細胞内蛋白質のリン酸化、ｃ−ｆｏｓの活性化、ｐ
Ｈの低下、細胞の遊走活性などを促進する活性または抑
制する活性など、特に、細胞内ｃＡＭＰ生成を促進する
活性または抑制する活性）を測定し、比較することを特
徴とするレセプターアンタゴニストのスクリーニング方
法を提供する。

【００７６】上記の（Ｉａ）または（IIａ）のスクリー
ニング方法において、レセプターに結合して、本発明の
ペプチド等とレセプターとの結合を変化させる（または
該結合を阻害する）化合物を、レセプターアゴニストま
たはレセプターアンタゴニストとして選択できる。上記
の（Ｉａ）または（IIａ）のスクリーニング方法におい
て、レセプターとは結合しないが、本発明のペプチド等
とレセプターとの結合力を増強する化合物を、本発明の
ペプチド等とレセプターとの結合力を増強する化合物と
して選択できる。上記の（Ｉａ）または（IIａ）のスク
リーニング方法において、レセプターとは結合しない
が、本発明のペプチド等とレセプターとの結合力を減少
させる化合物を、本発明のペプチド等とレセプターとの
結合力を減少させる化合物として選択できる。上記（II
ｂ）のスクリーニング方法において、レセプターに結合
し、該レセプターを介して細胞刺激活性（例えば、アラ
キドン酸遊離、アセチルコリン遊離、細胞内Ｃａ²⁺濃度
の変動、細胞内ｃＡＭＰ生成、細胞内ｃＧＭＰ生成、イ
ノシトールリン酸産生、細胞膜電位変動、細胞内蛋白質
のリン酸化、ｃ−ｆｏｓの活性化、ｐＨの低下、細胞の
遊走活性などを促進する活性または抑制する活性な
ど）、特に、細胞内ｃＡＭＰ生成を抑制する活性を有す
る化合物をレセプターアゴニストとして選択することが
できる。上記（IIｃ）のスクリーニング方法において、
レセプターに結合し、本発明のペプチド等の細胞刺激活
性を阻害する活性を有する化合物をレセプターアンタゴ
ニストとして選択することができる。特に、本発明のス
クリーニング方法においては、上記（Ｉａ）または（II
ａ）のスクリーニングを行ない、本発明のペプチド等と
レセプターとの結合を阻害する活性を有する化合物を選
択した後、得られた化合物を用いて上記の（IIｂ）また
は（IIｃ）のスクリーニングを実施することによって、
上記細胞刺激活性を有する化合物をレセプターアゴニス
トとして選択し、一方、本発明のペプチド等の細胞刺激
活性を阻害する化合物をレセプターアンタゴニストとし
て選択することが望ましい。

【００７７】本発明のスクリーニング方法に用いられる
レセプターのうち、ソマトスタチンレセプターとして
は、例えば、ソマトスタチンレセプターサブタイプ１
（ＳＳＴＲ１）もしくはサブタイプ２（ＳＳＴＲ２）
〔山田ら、プロシージング・オブ・ザ・ナショナル・ア
カデミー・オブ・サイエンス・ユーエスエー（Proc. Na
tl.Acad. Sci., USA）、89巻、251-255頁、1992年〕、
サブタイプ３（ＳＳＴＲ３）〔ＳＳＴＲ３；山田ら、モ
レキュラー・エンドクリノロジー（Molecular Endocrin
ology）、6巻、2136-2142頁、1992年〕、サブタイプ４
（ＳＳＴＲ４）もしくはサブタイプ５（ＳＳＴＲ５）
〔山田ら、バイオケミカル・アンド・バイオフィジカル
・リサーチ・コミュニケーションズ（Biochem. Biophy
s. Res. Commun.）195巻、844-852頁、1993年〕などを
用いることができる。ＧＰＲ７またはＧＰＲ８として
は、ゲノミックス（Genomics）,28,84-91(1995)に記載
のものを用いることができる。本発明のペプチド等に対
するレセプターは自体公知のタンパク質の精製方法に従
って入手することができるし、また、自体公知の遺伝子
工学的手法に従って該レセプターをコードするＤＮＡを
クローニングした後、前記した本発明のペプチド等の発
現方法に従って目的とするレセプターを入手することも
できる。該レセプターの部分ペプチドとしては、全長レ
セプターを適当に切断して得られる部分ペプチドを用い
ることができる。

【００７８】レセプターを含有する細胞としては、前記
した本発明のペプチド等を発現させるために用いる宿主
細胞として列記したものと同様のものを用いることがで
きるが、なかでも、ＣＨＯ細胞などが好ましい。レセプ
ターを含有する細胞は、レセプターをコードするＤＮＡ
を用いて、自体公知の方法、例えば、前記した本発明の
ペプチドの発現方法などに従って製造することができ
る。レセプターをコードするＤＮＡは、自体公知の遺伝
子工学的手法に従って入手することができるが、例えば
ソマトスタチンレセプターサブタイプ１〜５、ＧＰＲ７
またはＧＰＲ８は、上記の文献に従って入手することが
できる。本発明のスクリーニング方法において、レセプ
ターを含有する細胞を用いる場合、該細胞をグルタルア
ルデヒド、ホルマリンなどで固定化することができる。
固定化方法は、それ自体公知の方法に従って行うことが
できる。また、レセプターを含有する組織として、各種
動物の脳、下垂体、肺等またはそれらの膜画分を用いる
ことができる。標識した本発明のペプチド等としては、
例えば、〔³Ｈ〕、〔¹²⁵Ｉ〕、〔¹⁴Ｃ〕、〔³⁵Ｓ〕など
で標識した本発明のペプチド等などを用いることができ
る。試験化合物としては、例えばペプチド、タンパク、
非ペプチド性化合物、合成化合物、発酵生産物、細胞抽
出液、植物抽出液、動物組織抽出液などが挙げられ、こ
れら化合物は新規な化合物であってもよいし、公知の化
合物であってもよい。

【００７９】具体的には、上記の（Ｉａ）または（II
ａ）のスクリーニング方法を実施するには、まず、本発
明のレセプターを含有する細胞またはその細胞膜画分、
あるいはレセプターまたはその部分ペプチドを、スクリ
ーニングに適したバッファーに懸濁することによりレセ
プター標品を調製する。バッファーには、ｐＨ約４〜１
０（望ましくは、ｐＨ約６〜８）のリン酸バッファー、
トリス−塩酸バッファーなどの、本発明のペプチド等と
レセプターとの結合を阻害しないバッファーであればい
ずれでもよい。また、非特異的結合を低減させる目的
で、ＣＨＡＰＳ、Ｔｗｅｅｎ−８０^TM（花王−アトラス
社）、ジギトニン、デオキシコレートなどの界面活性剤
をバッファーに加えることもできる。さらに、プロテア
ーゼによるレセプターやリガンドの分解を抑える目的
で、ＰＭＳＦ、ロイペプチン、バシトラシン、アプロチ
ニン、Ｅ−６４（ペプチド研究所製）、ペプスタチンな
どのプロテアーゼ阻害剤を添加することもできる。一
方、細胞が固定化細胞の場合、培養器に固定化させたま
ま、つまり細胞を生育させた状態で、あるいはグルタル
アルデヒドやパラホルムアルデヒドで固定した細胞を用
いて、本発明のペプチド等とレセプターを結合させるこ
とができる。この場合、該緩衝液は培地やハンクス液な
どが用いられる。そして、０.０１ｍｌ〜１０ｍｌの該
レセプター溶液に、一定量（例えば、２０００Ｃｉ／ｍ
ｍｏｌの場合、約１００００ｃｐｍ〜１００００００ｃ
ｐｍ）の標識した本発明のペプチド等（例えば、〔¹²⁵
Ｉ〕で標識した本発明のペプチド等）を添加し、同時に
１０^-4Ｍ〜１０^-10Ｍの試験化合物を共存させる。非特
異的結合量（ＮＳＢ）を知るために大過剰の未標識の本
発明のペプチド等を加えた反応チューブも用意する。反
応は約０℃〜５０℃、望ましくは約４℃〜３７℃で、約
２０分〜２４時間、望ましくは約３０分〜３時間行な
う。反応後、ガラス繊維濾紙等で濾過し、適量の同バッ
ファーで洗浄した後、ガラス繊維濾紙に残存する放射活
性（例えば、〔¹²⁵Ｉ〕の量）を液体シンチレーション
カウンターまたはγ−カウンターで測定する。濾過に
は、マニホールドやセルハーベスターを用いることがで
きるが、セルハーベスターを用いることが効率を上げる
ために望ましい。拮抗する物質がない場合のカウント
(Ｂ₀）から非特異的結合量（ＮＳＢ）を引いたカウント
（Ｂ₀−ＮＳＢ）を１００％とした時、特異的結合量
（Ｂ−ＮＳＢ）が、例えばカウント（Ｂ₀−ＮＳＢ）の
５０％以下になる試験化合物をアゴニストまたはアンタ
ゴニスト候補化合物として選択することができる。

【００８０】また、上記（IIｂ）または（IIｃ）のスク
リーニング方法を実施するためには、レセプターを介す
る細胞刺激活性（例えば、アラキドン酸遊離、アセチル
コリン遊離、細胞内Ｃａ²⁺濃度の変動、細胞内ｃＡＭＰ
生成、細胞内ｃＧＭＰ生成、イノシトールリン酸産生、
細胞膜電位変動、細胞内蛋白質のリン酸化、ｃ−ｆｏｓ
活性化、ｐＨの低下、細胞の遊走活性などを促進する活
性または抑制する活性など）を公知の方法または市販の
測定用キットを用いて測定することができる。具体的に
は、まず、レセプターを含有する細胞をマルチウェルプ
レート等に培養する。スクリーニングを行なうにあたっ
ては前もって新鮮な培地あるいは細胞に毒性を示さない
適当なバッファーに交換し、試験化合物などを添加して
一定時間インキュベートした後、細胞を抽出あるいは上
清液を回収して、生成した産物をそれぞれの方法に従っ
て定量する。細胞刺激活性の指標とする物質（例えば、
アラキドン酸など）の生成が、細胞が含有する分解酵素
によって検定困難な場合は、該分解酵素に対する阻害剤
を添加してアッセイを行なってもよい。また、ｃＡＭＰ
産生抑制などの活性については、フォルスコリンなどで
細胞の基礎的産生量を増大させておいた細胞に対する産
生抑制作用として検出することができる。

【００８１】本発明のスクリーニング用キットは、本発
明のペプチド等、好ましくはさらに、レセプターを含有
する細胞またはその細胞膜画分、あるいはレセプターま
たはその部分ペプチドを含有するものである。本発明の
スクリーニング用キットの例としては、次のものが挙げ
られる。 〔スクリーニング用試薬〕 測定用緩衝液および洗浄用緩衝液 Hanks' Balanced Salt Solution（ギブコ社製）に、０.
０５％のウシ血清アルブミン（シグマ社製）を加えたも
の。孔径０.４５μｍのフィルターで濾過滅菌し、４℃
で保存するか、あるいは用時調製しても良い。 ソマトスタチンレセプター標品 ソマトスタチンレセプターを含有するＣＨＯ細胞を、１
２穴プレートに５×１０⁵個／穴で継代し、３７℃、５
％ＣＯ₂、９５％ａｉｒで２日間培養したもの。 標識した本発明のペプチド等 市販の〔³Ｈ〕、〔¹²⁵Ｉ〕、〔¹⁴Ｃ〕、〔³⁵Ｓ〕などで
標識した本発明のペプチド（例、〔¹²⁵Ｉ〕ｈＣＳ−１
７など） 溶液の状態のものを４℃あるいは−２０℃にて保存し、
用時に測定用緩衝液にて１μＭに希釈する。 本発明のペプチド等標準液 本発明のペプチド等を０.１％ウシ血清アルブミン（シ
グマ社製）を含むＰＢＳで０.１ｍＭとなるように溶解
し、−２０℃で保存する。

【００８２】〔測定法〕 １２穴組織培養用プレートにて培養した組換え型ソマ
トスタチンレセプターを含有するＣＨＯ細胞を、測定用
緩衝液１ｍｌで２回洗浄した後、４９０μｌの測定用緩
衝液を各穴に加える。 １０^-3〜１０^-10Ｍの試験化合物溶液を５μｌ加えた
後、５ｎＭの標識した本発明のペプチド等を５μｌ加
え、室温にて１時間反応させる。非特異的結合量を知る
ためには試験化合物のかわりに１０^-4Ｍの本発明のペプ
チド等を５μｌ加えておく。 反応液を除去し、１ｍｌの洗浄用緩衝液で３回洗浄す
る。細胞に結合した標識した本発明のペプチド等を０．
５ｍｌの０.２Ｎ ＮａＯＨ−１％ＳＤＳで溶解し、４
ｍｌの液体シンチレーターＡ（和光純薬製）と混合す
る。 液体シンチレーションカウンター（ベックマン社製）
を用いて放射活性を測定し、Percent Maximum Binding
（ＰＭＢ）を次の式〔数１〕で求める。なお、
〔¹²⁵Ｉ〕で標識されている場合は、液体シンチレータ
ーと混合することなしに直接ガンマーカウンターで測定
できる。

【００８３】〔数１〕ＰＢＭ＝〔（Ｂ−ＮＳＢ）／（Ｂ
₀−ＮＳＢ）〕×１００ ＰＭＢ：Percent Maximum Binding Ｂ ：検体を加えた時の値 ＮＳＢ：Non-specific Binding（非特異的結合量） Ｂ₀ ：最大結合量

【００８４】以上のとおり、本発明のペプチド等は、本
発明のペプチド等とレセプターとの結合性を変化させる
化合物をスクリーニングするための試薬として有用であ
る。本発明のスクリーニング方法またはスクリーニング
用キットを用いて得られる化合物またはその塩は、本発
明のペプチド等とレセプターとの結合性を変化させる化
合物であり、具体的には、レセプターと結合し、細胞
刺激活性を示す化合物（いわゆる、レセプターアゴニス
ト）、レセプターと結合し、アゴニストによる細胞刺
激活性を阻害する化合物（いわゆる、レセプターアンタ
ゴニスト）、本発明のペプチド等とレセプターとの結
合力を増強する化合物、または本発明のペプチド等と
レセプターとの結合力を減少させる化合物である。レセ
プターアゴニストは、本発明のペプチド等あるいはソマ
トスタチンが有する生理活性の全部または一部を有して
いるので、該生理活性に応じて安全で低毒性な医薬とし
て有用である。例えば、成長ホルモン、下垂体ホルモン
（例えば、甲状腺刺激ホルモン、プロラクチンなど）、
消化管ホルモン（例えば、ガストリン、インシュリンな
ど）などのホルモンの分泌抑制剤などとして有用であ
り、さらにはホルモン産生腫瘍、先端巨大症、巨人症、
痴呆症、糖尿病、胃潰瘍などの治療・予防治療剤、ホル
モン分泌抑制剤、腫瘍増殖抑制剤、神経活動もしくは睡
眠の調節剤などとして有用である。

【００８５】一方、レセプターアンタゴニストは、本発
明のペプチド等あるいはソマトスタチンが有する生理活
性の全部または一部を抑制することができるので、該生
理活性を抑制する安全で低毒性な医薬として有用であ
る。例えば、成長ホルモン、下垂体ホルモン（例えば、
甲状腺刺激ホルモン、プロラクチンなど）、消化管ホル
モン（例えば、ガストリン、インシュリンなど）などの
ホルモンの分泌促進剤などとして有用であり、さらには
小人症、乳汁分泌不全、糖尿病などの治療・予防剤、あ
るいは消化管諸臓器の機能調節剤（例えば、胃、小腸、
膵臓、肝臓などの臓器の機能調節剤）などとして有用で
ある。本発明のペプチド等とレセプターとの結合力を増
強する化合物は、本発明のペプチド等あるいはソマトス
タチンが有する生理活性を増強することができるので、
前記したレセプターアゴニストと同様な医薬として有用
である。本発明のペプチド等とレセプターとの結合力を
減少させる化合物は、本発明のペプチド等あるいはソマ
トスタチンが有する生理活性を減少させることができる
ので、前記したレセプターアンタゴニトと同様な医薬と
して有用である。

【００８６】本発明のスクリーニング方法またはスクリ
ーニング用キットを用いて得られる化合物を上述の治療
・予防剤として使用する場合、常套手段に従って実施す
ることができる。例えば、前記した本発明のペプチド等
を含有する医薬と同様にして、錠剤、カプセル剤、エリ
キシル剤、マイクロカプセル剤、無菌性溶液、懸濁液剤
などに製剤化し、ヒトまたは温血動物に投与することが
できる。このようにして得られる製剤は安全で低毒性で
あるので、例えば、ヒトまたは温血動物（例えば、マウ
ス、ラット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、ト
リ、ネコ、イヌ、サル、チンパンジーなど）に対して投
与することができる。該化合物の投与量は、対象疾患、
投与対象、投与ルートなどにより差異はあるが、例え
ば、不眠症治療の目的でレセプターアゴニストを経口投
与する場合、一般的に該レセプターアゴニストを成人
（６０ｋｇとして）においては、一日につき約０.１ｍ
ｇ〜１００ｍｇ、好ましくは約１．０〜５０ｍｇ、より
好ましくは約１．０〜２０ｍｇ投与する。非経口的に投
与する場合、該レセプターアゴニストの１回投与量は投
与対象、対象疾患などによっても異なるが、例えば、不
眠症治療の目的で該レセプターアゴニストを注射剤の形
で通常成人（体重６０ｋｇとして）に投与する場合は、
一日につき該レセプターアゴニストを約０．０１〜３０
ｍｇ程度、好ましくは約０．１〜２０ｍｇ程度、より好
ましくは約０．１〜１０ｍｇ程度を静脈注射するが好都
合である。他の動物の場合も、６０ｋｇ当たりに換算し
た量を投与することができる。一方、小人症治療の目的
でレセプターアンタゴニストを経口投与する場合、一般
的に該レセプターアンタゴニストを成人（６０ｋｇとし
て）においては、一日につき約０.１ｍｇ〜１００ｍ
ｇ、好ましくは約１．０〜５０ｍｇ、より好ましくは約
１．０〜２０ｍｇ投与する。非経口的に投与する場合、
該レセプターアンタゴニストの１回投与量は投与対象、
対象疾患などによっても異なるが、例えば、小人症治療
の目的で該レセプターアンタゴニストを注射剤の形で通
常成人（体重６０ｋｇとして）に投与する場合は、一日
につき該レセプターアンタゴニストを約０．０１〜３０
ｍｇ程度、好ましくは約０．１〜２０ｍｇ程度、より好
ましくは約０．１〜１０ｍｇ程度を静脈注射するが好都
合である。他の動物の場合も、６０ｋｇ当たりに換算し
た量を投与することができる。

【００８７】（５）オリゴヌクレオチド誘導体またはそ
の塩を含有する医薬 オリゴヌクレオチド誘導体またはその塩は、本発明のＤ
ＮＡに結合して本発明のＤＮＡもしくは本発明のペプチ
ド等の発現を促進することができるオリゴヌクレオチド
誘導体またはその塩（以下、オリゴヌクレオチド誘導体
Ａと略記する）と、本発明のＤＮＡに結合して本発明の
ＤＮＡもしくは本発明のペプチド等の発現を抑制するこ
とができるオリゴヌクレオチド誘導体またはその塩（ア
ンチセンスＤＮＡ、以下、オリゴヌクレオチド誘導体Ｂ
と略記する）に分類される。前記のとおり、本発明のペ
プチド等は、（１）成長ホルモンの分泌抑制作用、
（２）甲状腺刺激ホルモン、プロラクチンなどの下垂体
ホルモンの分泌抑制作用、（３）ガストリン、インシュ
リンなどの消化管ホルモンの分泌抑制作用、（４）神経
伝達作用、（５）細胞増殖作用、（６）レム睡眠の誘発
物質であるアセチルコリン作用の抑制作用、（７）平滑
筋の収縮の抑制作用などを有している。したがって、オ
リゴヌクレオチド誘導体Ａは、生体内において上記の作
用を発揮する本発明のペプチド等またはそれらをコード
するＤＮＡの機能を促進することができるので、例え
ば、成長ホルモン、下垂体ホルモン（例えば、甲状腺刺
激ホルモン、プロラクチンなど）、消化管ホルモン（例
えば、ガストリン、インシュリンなど）などのホルモン
の分泌抑制剤などとして有用であり、さらにはホルモン
産生腫瘍、先端巨大症、巨人症、痴呆症、糖尿病、胃潰
瘍などの治療・予防治療剤、ホルモン分泌抑制剤、腫瘍
増殖抑制剤、神経活動もしくは睡眠の調節剤などの医薬
として使用することができる。

【００８８】一方、オリゴヌクレオチド誘導体Ｂ（アン
チセンスＤＮＡ）は、生体内において上記の作用を発揮
する本発明のペプチド等またはそれらをコードするＤＮ
Ａの機能を抑制することができるので、例えば、成長ホ
ルモン、下垂体ホルモン（例えば、甲状腺刺激ホルモ
ン、プロラクチンなど）、消化管ホルモン（例えば、ガ
ストリン、インシュリンなど）などのホルモンの分泌促
進剤などとして有用であり、さらには小人症、乳汁分泌
不全、糖尿病などの治療・予防剤、あるいは消化管諸臓
器の機能調節剤（例えば、胃、小腸、膵臓、肝臓などの
臓器の機能調節剤）などの医薬として使用することがで
きる。上記オリゴヌクレオチド誘導体またはその塩を上
記の医薬として使用する場合、前記した本発明のＤＮＡ
を含有する医薬と同様にして製剤化し、ヒトまたは温血
動物に投与することができる。例えば、該オリゴヌクレ
オチド誘導体またはその塩を単独あるいはレトロウイル
スベクター、アデノウイルスベクター、アデノウイルス
アソシエーテッドウイルスベクターなどの適当なベクタ
ーに挿入した後、常套手段に従ってヒトまたは温血動物
に投与することができる。該オリゴヌクレオチド誘導体
またはその塩は、そのままで、あるいは摂取促進のため
に補助剤などの生理学的に認められる担体とともに製剤
化し、遺伝子銃やハイドロゲルカテーテルのようなカテ
ーテルによって投与できる。

【００８９】（６）本発明の抗体を含有する医薬 本発明のペプチド等の活性を中和する活性を有する本発
明の抗体は、本発明のペプチド等、ソマトスタチンある
いはコルチスタチンが有する生理活性の全部または一部
を抑制することができるので、例えば、成長ホルモン、
下垂体ホルモン（例えば、甲状腺刺激ホルモン、プロラ
クチンなど）、消化管ホルモン（例えば、ガストリン、
インシュリンなど）などのホルモンの分泌促進剤などの
医薬として、さらには小人症、乳汁分泌不全、糖尿病な
どの治療・予防剤、あるいは消化管諸臓器の機能調節剤
（例えば、胃、小腸、膵臓、肝臓などの臓器の機能調節
剤）などの医薬として使用することができる。本発明の
抗体を含有する上記疾患の治療・予防剤は、そのまま液
剤として、または適当な剤型の医薬組成物として、ヒト
または哺乳動物（例、ラット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、
ウシ、ネコ、イヌ、サルなど）に対して経口的または非
経口的に投与することができる。投与量は、投与対象、
対象疾患、症状、投与ルートなどによっても異なるが、
例えば、成人の小人症の治療・予防のために使用する場
合には、該抗体を１回量として、通常０.０１〜２０ｍ
ｇ／ｋｇ体重程度、好ましくは０.１〜１０ｍｇ／ｋｇ
体重程度、さらに好ましくは０.１〜５ｍｇ／ｋｇ体重
程度を、１日１〜５回程度、好ましくは１日１〜３回程
度、静脈注射により投与するのが好都合である。他の非
経口投与および経口投与の場合もこれに準ずる量を投与
することができる。症状が特に重い場合には、その症状
に応じて増量してもよい。該抗体は、それ自体または適
当な医薬組成物として投与することができる。上記投与
に用いられる医薬組成物は、上記またはその塩と薬理学
的に許容され得る担体、希釈剤もしくは賦形剤とを含む
ものである。かかる組成物は、経口または非経口投与に
適する剤形として提供される。すなわち、例えば、経口
投与のための組成物としては、固体または液体の剤形、
具体的には錠剤（糖衣錠、フィルムコーティング錠を含
む）、丸剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤（ソフトカプセ
ル剤を含む）、シロップ剤、乳剤、懸濁剤などがあげら
れる。かかる組成物は自体公知の方法によって製造さ
れ、製剤分野において通常用いられる担体、希釈剤もし
くは賦形剤を含有するものである。例えば、錠剤用の担
体、賦形剤としては、乳糖、でんぷん、蔗糖、ステアリ
ン酸マグネシウムなどが用いられる。

【００９０】非経口投与のための組成物としては、例え
ば、注射剤、坐剤などが用いられ、注射剤は静脈注射
剤、皮下注射剤、皮内注射剤、筋肉注射剤、点滴注射剤
などの剤形を包含する。かかる注射剤は、自体公知の方
法に従って、例えば、上記抗体またはその塩を通常注射
剤に用いられる無菌の水性もしくは油性液に溶解、懸濁
または乳化することによって調製する。注射用の水性液
としては、例えば、生理食塩水、ブドウ糖やその他の補
助薬を含む等張液などが用いられ、適当な溶解補助剤、
例えば、アルコール（例、エタノール）、ポリアルコー
ル（例、プロピレングリコール、ポリエチレングリコー
ル）、非イオン界面活性剤〔例、ポリソルベート８０、
ＨＣＯ−５０（polyoxyethylene（５０mol）adduct of
hydrogenated castor oil）〕などと併用してもよい。
油性液としては、例えば、ゴマ油、大豆油などが用いら
れ、溶解補助剤として安息香酸ベンジル、ベンジルアル
コールなどを併用してもよい。調製された注射液は、通
常、適当なアンプルに充填される。直腸投与に用いられ
る坐剤は、上記抗体またはその塩を通常の坐薬用基剤に
混合することによって調製される。上記の経口用または
非経口用医薬組成物は、活性成分の投与量に適合するよ
うな投薬単位の剤形に調製されることが好都合である。
かかる投薬単位の剤形としては、錠剤、丸剤、カプセル
剤、注射剤（アンプル）、坐剤などが例示され、それぞ
れの投薬単位剤形当たり通常５〜５００ｍｇ、とりわけ
注射剤では５〜１００ｍｇ、その他の剤形では１０〜２
５０ｍｇの上記抗体が含有されていることが好ましい。
なお前記した各組成物は、上記抗体との配合により好ま
しくない相互作用を生じない限り他の活性成分を含有し
てもよい。

【００９１】（７）本発明のＤＮＡを有する非ヒト動物
の作製 本発明のＤＮＡを用いて、本発明のペプチド等を発現す
るトランスジェニック非ヒト動物を作製することができ
る。非ヒト動物としては、哺乳動物（例えば、ラット、
マウス、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サ
ルなど）など（以下、動物と略記する）が挙げれるが、
特に、マウス、ラット、ウサギなどが好適である。本発
明のＤＮＡを対象動物に転移させるにあたっては、該Ｄ
ＮＡを動物細胞で発現させうるプロモーターの下流に結
合した遺伝子コンストラクトとして用いるのが一般に有
利である。例えば、ウサギ由来の本発明のＤＮＡを転移
させる場合、これと相同性が高い動物由来のプロモータ
ーであって、本発明のＤＮＡを動物細胞で発現させうる
各種プロモーターの下流に結合した遺伝子コンストラク
トを、例えば、ウサギ受精卵へマイクロインジェクショ
ンすることによって本発明のペプチド等を高産生するＤ
ＮＡ転移動物を作出できる。このプロモーターとして
は、例えば、ウイルス由来プロモーター、メタロチオネ
イン等のユビキタスな発現プロモーターも使用しうる。

【００９２】受精卵細胞段階における本発明のＤＮＡの
転移は、対象動物の胚芽細胞および体細胞の全てに存在
するように確保される。ＤＮＡ転移後の作出動物の胚芽
細胞において本発明のペプチド等が存在することは、作
出動物の子孫が全てその胚芽細胞及び体細胞の全てに本
発明のペプチド等を有することを意味する。遺伝子を受
け継いだこの種の動物の子孫はその胚芽細胞および体細
胞の全てに本発明のペプチド等を有する。本発明のＤＮ
Ａ転移動物は、交配により遺伝子を安定に保持すること
を確認して、該ＤＮＡ保有動物として通常の飼育環境で
飼育継代を行うことができる。さらに、目的ＤＮＡを保
有する雌雄の動物を交配することにより、導入遺伝子を
相同染色体の両方に持つホモザイゴート動物を取得し、
この雌雄の動物を交配することによりすべての子孫が該
ＤＮＡを有するように繁殖継代することができる。本発
明のＤＮＡが転移された動物は、本発明のペプチド等が
高発現させられているので、本発明のペプチド等の発現
過多などに起因する疾病の治療・予防剤のスクリーニン
グ用の動物などとして有用である。本発明のＤＮＡ転移
動物を、組織培養のための細胞源として使用することも
できる。例えば、本発明のＤＮＡ転移マウスの組織中の
ＤＮＡもしくはＲＮＡを直接分析するか、または遺伝子
により発現された本発明のペプチドが存在する組織を分
析することにより、本発明のペプチド等について分析す
ることができる。本発明のペプチド等を有する組織の細
胞を標準組織培養技術により培養し、これらを使用し
て、例えば、脳や末梢組織由来のような一般に培養困難
な組織からの細胞の機能を研究することができる。ま
た、その細胞を用いることにより、例えば、各種組織の
機能を高めるような医薬の選択も可能である。また、高
発現細胞株があれば、そこから、本発明のペプチド等を
単離精製することも可能である。

【００９３】本明細書および図面において、塩基やアミ
ノ酸などを略号で表示する場合、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ
Commision on Biochemical Nomenclature による略号あ
るいは当該分野における慣用略号に基づくものであり、
その例を下記する。またアミノ酸に関し光学異性体があ
り得る場合は、特に明示しなければＬ体を示すものとす
る。 ＤＮＡ ：デオキシリボ核酸 ｃＤＮＡ ：相補的デオキシリボ核酸 Ａ ：アデニン Ｔ ：チミン Ｇ ：グアニン Ｃ ：シトシン ＲＮＡ ：リボ核酸 ｍＲＮＡ ：メッセンジャーリボ核酸 ｄＡＴＰ ：デオキシアデノシン三リン酸 ｄＴＴＰ ：デオキシチミジン三リン酸 ｄＧＴＰ ：デオキシグアノシン三リン酸 ｄＣＴＰ ：デオキシシチジン三リン酸 ｄＮＴＰｓ ：ｄＡＴＰ，ｄＴＴＰ，ｄＧＴＰおよ
びｄＣＴＰの混合物 ＡＴＰ ：アデノシン三リン酸 ＥＤＴＡ ：エチレンジアミン四酢酸 ＳＤＳ ：ドデシル硫酸ナトリウム ＥＩＡ ：エンザイムイムノアッセイ

【００９４】 Ｇｌｙ ：グリシン Ａｌａ ：アラニン Ｖａｌ ：バリン Ｌｅｕ ：ロイシン Ｉｌｅ ：イソロイシン Ｓｅｒ ：セリン Ｔｈｒ ：スレオニン Ｃｙｓ ：システイン Ｍｅｔ ：メチオニン Ｇｌｕ ：グルタミン酸 Ａｓｐ ：アスパラギン酸 Ｌｙｓ ：リジン Ａｒｇ ：アルギニン Ｈｉｓ ：ヒスチジン Ｐｈｅ ：フェニルアラニン Ｔｙｒ ：チロシン Ｔｒｐ ：トリプトファン Ｐｒｏ ：プロリン Ａｓｎ ：アスパラギン Ｇｌｎ ：グルタミン ｐＧｌｕ ：ピログルタミン酸

【００９５】また、本明細書中で繁用される置換基、保
護基および試薬を下記の記号で表記する。 Ｍｅ ：メチル基 Ｅｔ ：エチル基 Ｂｕ ：ブチル基 Ｐｈ ：フェニル基 ＴＣ ：チアゾリジン−４（Ｒ）−カルボキ
サミド基 ＢＨＡ ：ベンズヒドリルアミン ｐＭＢＨＡ ：ｐ−メチルベンズヒドリルアミン Ｔｏｓ ：ｐ−トルエンスルホニル ＣＨＯ ：ホルミル ｃＨｅｘ ：シクロヘキシル ＯｃＨｅｘ ：シクロヘキシルエステル Ｂｚｌ ：ベンジル Ｂｏｍ ：ベンジルオキシメチル Ｚ ：ベンジルオキシカルボニル Ｂｒ−Ｚ ：２−ブロモベンジルオキシカルボニ
ル Ｂｏｃ ：ｔ−ブチルオキシカルボニル ＤＮＰ ：ジニトロフェニル Ｔｒｔ ：トリチル Ｂｕｍ ：ｔ−ブトキシメチル ＤＣＭ ：ジクロロメタン Ｆｍｏｃ ：Ｎ−９−フルオレニルメトキシカル
ボニル ＨＯＢｔ ：１−ヒドロキシベンズトリアゾール ＨＯＯＢｔ ：３,４−ジヒドロ−３−ヒドロキシ
−４−オキソ−１,２,３−ベンゾトリアゾール ＤＣＣ ：Ｎ、Ｎ‘−ジシクロヘキシルカルボ
ジイミド ＴＦＡ ：トリフルオロ酢酸 ＤＩＥＡ ：ジイソプロピルエチルアミン ＰＡＭ ：フェニルアセトアミドメチル ＭｅＢｚｌ ：４−メチルベンジル Ｃｌ−Ｚ ：２−クロロベンジルオキシカルボニ
ル ＤＣＣ ：Ｎ,Ｎ'−ジシクロヘキシルカルボジ
イミド ＤＭＦ ：Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド ＮＭＰ ：Ｎ−メチル−２−ピロリドン ＥＤＴＡ ：エチレンジアミン四酢酸 ＳＤＳ ：ドデシル硫酸ナトリウム

【００９６】本明細書の配列表の配列番号は、以下の配
列を示す。 〔配列番号：１〕本発明の成熟体ペプチド（図２のアミ
ノ酸配列の第８９番目〜１０５番目、ｈＣＳ−１７）の
アミノ酸配列を示す。 〔配列番号：２〕配列番号：１で表わされるアミノ酸配
列を有する成熟体ペプチドのＮ末端から２個のアミノ酸
（Asp-Arg）が欠失したペプチド（図２のアミノ酸配列
の第９１番目〜１０５番目、ｈＣＳ−１５）のアミノ酸
配列を示す。 〔配列番号：３〕配列番号：１で表わされるアミノ酸配
列を有する成熟体ペプチドのＮ末端から４個のアミノ酸
（Asp-Arg-Met-Pro）が欠失したペプチド（図２のアミ
ノ酸配列の第９３番目〜１０５番目、ｈＣＳ−１３）の
アミノ酸配列を示す。 〔配列番号：４〕本発明の前駆体（図２のアミノ酸配列
の第７７番目〜１０５番目）のアミノ酸配列を示す（ｈ
ＣＳ−２９）。 〔配列番号：５〕本発明の前駆体（図２のアミノ酸配列
の第４４番目〜１０５番目）のアミノ酸配列を示す（ｈ
ＣＳ−６２）。 〔配列番号：６〕本発明の前駆体（図２のアミノ酸配列
の第２１番目〜１０５番目）のアミノ酸配列を示す（ｈ
ＣＳ−８５）。 〔配列番号：７〕本発明の前駆体（図２のアミノ酸配列
の第１番目〜１０５番目）のアミノ酸配列を示す（ｈＣ
Ｓ−１０５）。

【００９７】〔配列番号：８〕断片ペプチド（図２のア
ミノ酸配列の第７７番目〜８８番目）のアミノ酸配列を
示す。 〔配列番号：９〕断片ペプチド（図２のアミノ酸配列の
第４４番目〜７６番目）のアミノ酸配列を示す。 〔配列番号：１０〕断片ペプチド（図２のアミノ酸配列
の第２１番目〜４３番目）のアミノ酸配列を示す。 〔配列番号：１１〕断片ペプチド（図２のアミノ酸配列
の第１番目〜２０番目）のアミノ酸配列を示す。 〔配列番号：１２〕断片ペプチド（図２のアミノ酸配列
の第１番目〜８８番目）のアミノ酸配列を示す。 〔配列番号：１３〕配列番号：１で表わされるアミノ酸
配列をコードする（図２の塩基配列の２６８番目〜３１
８番目）塩基配列を示す。 〔配列番号：１４〕配列番号：２で表わされるアミノ酸
配列をコードする（図２の塩基配列の２７４番目〜３１
８番目）塩基配列を示す。

【００９８】〔配列番号：１５〕配列番号：３で表わさ
れるアミノ酸配列をコードする（図２の塩基配列の２８
０番目〜３１８番目）塩基配列を示す。 〔配列番号：１６〕配列番号：４で表わされるアミノ酸
配列をコードする（図２の塩基配列の２３２番目〜３１
８番目）塩基配列を示す。 〔配列番号：１７〕配列番号：４で表わされるアミノ酸
配列をコードする（図３の塩基配列の２２９番目〜３１
５番目）塩基配列を示す。 〔配列番号：１８〕配列番号：５で表わされるアミノ酸
配列をコードする（図２の塩基配列の１３３番目〜３１
８番目）塩基配列を示す。 〔配列番号：１９〕配列番号：５で表わされるアミノ酸
配列をコードする（図３の塩基配列の１３０番目〜３１
５番目）塩基配列を示す。 〔配列番号：２０〕配列番号：６で表わされるアミノ酸
配列をコードする（図２の塩基配列の６４番目〜３１８
番目）塩基配列を示す。 〔配列番号：２１〕配列番号：６で表わされるアミノ酸
配列をコードする（図３の塩基配列の６１番目〜３１５
番目）塩基配列を示す。

【００９９】〔配列番号：２２〕配列番号：７で表わさ
れるアミノ酸配列をコードする（図２の塩基配列の４番
目〜３１８番目）塩基配列を示す。 〔配列番号：２３〕配列番号：７で表わされるアミノ酸
配列をコードする（図３の塩基配列の１番目〜３１５番
目）塩基配列を示す。 〔配列番号：２４〕配列番号：８で表わされるアミノ酸
配列をコードする（図２の塩基配列の２３２番目〜２６
７番目）塩基配列を示す。 〔配列番号：２５〕配列番号：８で表わされるアミノ酸
配列をコードする（図３の塩基配列の２２９番目〜２６
４番目）塩基配列を示す。 〔配列番号：２６〕配列番号：９で表わされるアミノ酸
配列をコードする（図２の塩基配列の１３３番目〜２３
１番目）塩基配列を示す。 〔配列番号：２７〕配列番号：１０で表わされるアミノ
酸配列をコードする（図２の塩基配列の６４番目〜１３
２番目）塩基配列を示す。 〔配列番号：２８〕配列番号：１１で表わされるアミノ
酸配列をコードする（図２の塩基配列の４番目〜６３番
目）塩基配列を示す。 〔配列番号：２９〕配列番号：１２で表わされるアミノ
酸配列をコードする（図２の塩基配列の４番目〜２６７
番目）塩基配列を示す。 〔配列番号：３０〕配列番号：１２で表わされるアミノ
酸配列をコードする（図３の塩基配列の１番目〜２６４
番目）塩基配列を示す。

【０１００】〔配列番号：３１〕公知のラット由来コル
チスタチンのアミノ酸配列を示す。 〔配列番号：３２〕公知のラット由来ソマトスタチンの
アミノ酸配列を示す。 〔配列番号：３３〕配列番号：３１で表わされる公知の
ラット由来コルチスタチンのアミノ酸配列をコードする
塩基配列を示す。 〔配列番号：３４〕配列番号：３２で表わされる公知の
ラット由来ソマトスタチンのアミノ酸配列をコードする
塩基配列を示す。 〔配列番号：３５〕欠失型ペプチドのアミノ酸配列（１
６アミノ酸）を示す。 〔配列番号：３６〕欠失型ペプチドのアミノ酸配列（１
４アミノ酸）を示す。 〔配列番号：３７〕欠失型ペプチドのアミノ酸配列（１
２アミノ酸）を示す。

【０１０１】〔配列番号：３５〕配列番号：１で表わさ
れるアミノ酸配列を有するペプチドノＣ末端から１個の
アミノ酸（Lys）が欠失したペプチドのアミノ酸配列を
示す（des Lys¹⁷ ｈＣＳ−１７）。 〔配列番号：３６〕配列番号：１で表わされるアミノ酸
配列を有するペプチドのＮ末端から２個のアミノ酸（As
p-Arg）およびＣ末端から１個のアミノ酸（Lys）が欠失
したペプチドのアミノ酸配列を示す（des Lys¹⁵ ｈＣＳ
−１５）。 〔配列番号：３７〕配列番号：１で表わされるアミノ酸
配列を有するペプチドのＮ末端から４個のアミノ酸（As
p-Arg-Met-Pro）およびＣ末端から１個のアミノ酸（Ly
s）が欠失したペプチドのアミノ酸配列を示す（des Lys
¹³ ｈＣＳ−１３）。 〔配列番号：３８〕配列番号：１で表わされるアミノ酸
配列を有するペプチドの６番目のArgがＬｙｓで置換さ
れたペプチドのアミノ酸配列を示す（〔Ｌｙｓ^６〕ｈＣ
Ｓ−１７）。 〔配列番号：３９〕配列番号：１で表わされるアミノ酸
配列を有するペプチドのＮ末端から２個のアミノ酸（As
p-Arg）が欠失し、４番目のArgがLysで置換されたペプ
チドのアミノ酸配列を示す（〔Lys⁴〕ｈＣＳ−１５）。 〔配列番号：４０〕配列番号：１で表わされるアミノ酸
配列を有するペプチドのＮ末端から４個のアミノ酸（As
p-Arg-Met-Pro）が欠失し、２番目のArgがLysで置換さ
れたペプチドのアミノ酸配列を示す（〔Lys²〕ｈＣＳ−
１３）。

【０１０２】〔配列番号：４１〕配列番号：１で表わさ
れるアミノ酸配列を有するペプチドのＣ末端から１個の
アミノ酸（Lys）が欠失し、６番目のArgがLysで置換さ
れたペプチドのアミノ酸配列を示す（des Lys¹⁷ 〔Ly
s⁶〕ｈＣＳ−１７）。 〔配列番号：４２〕配列番号：１で表わされるアミノ酸
配列を有するペプチドのＮ末端から２個のアミノ酸（As
p-Arg）およびＣ末端から１個のアミノ酸（Lys）が欠失
し、第４番目のArgがLysで置換されたペプチドのアミノ
酸配列を示す（des Lys¹⁵ 〔Lys⁴〕ｈＣＳ−１５）。 〔配列番号：４３〕配列番号：１で表わされるアミノ酸
配列を有するペプチドのＮ末端から４個のアミノ酸（As
p-Arg-Met-Pro）およびＣ末端から１個のアミノ酸（Ly
s）が欠失し、第２番目のArgがLysで置換されたペプチ
ドのアミノ酸配列を示す（des Lys¹³〔Lys²〕ｈＣＳ−
１３）。 〔配列番号：４４〕配列番号：１で表わされるアミノ酸
配列を有するペプチドの１４番目のSerがThrで置換され
たペプチドのアミノ酸配列を示す（〔Thr¹⁴〕ｈＣＳ−
１７）。 〔配列番号：４５〕配列番号：１で表わされるアミノ酸
配列を有するペプチドのＮ末端から２個のアミノ酸（As
p-Arg）が欠失し、１２番目のSerがThrで置換されたペ
プチドのアミノ酸配列を示す（〔Thr¹²〕ｈＣＳ−１
５）。

【０１０３】〔配列番号：４６〕配列番号：１で表わさ
れるアミノ酸配列を有するペプチドのＮ末端から４個の
アミノ酸（Asp-Arg-Met-Pro）が欠失し、１０番目のSer
がThrで置換されたペプチドのアミノ酸配列を示す（〔T
hr¹⁰〕ｈＣＳ−１３）。 〔配列番号：４７〕配列番号：１で表わされるアミノ酸
配列を有するペプチドのＣ末端から１個のアミノ酸（Ly
s）が欠失し、１４番目のSerがThrで置換されたペプチ
ドのアミノ酸配列を示す（des Lys¹⁷ 〔Thr¹⁴〕ｈＣＳ
−１７）。 〔配列番号：４８〕配列番号：１で表わされるアミノ酸
配列を有するペプチドのＮ末端から２個のアミノ酸（As
p-Arg）およびＣ末端から１個のアミノ酸（Lys）が欠失
し、１２番目のSerがThrで置換されたペプチドのアミノ
酸配列を示す（des Lys¹⁵ 〔Thr¹²〕ｈＣＳ−１５）。 〔配列番号：４９〕配列番号：１で表わされるアミノ酸
配列を有するペプチドのＮ末端から４個のアミノ酸（As
p-Arg-Met-Pro）およびＣ末端から１個のアミノ酸（Ly
s）が欠失し、１０番目のSerがThrで置換されたペプチ
ドのアミノ酸配列を示す（des Lys¹³〔Thr¹⁰〕ｈＣＳ−
１３）。 〔配列番号：５０〕配列番号：１で表わされるアミノ酸
配列を有するペプチドの第６番目のArgがLysに置換さ
れ、１４番目のSerがThrで置換されたペプチドのアミノ
酸配列を示す（〔Lys⁶，Thr¹⁴〕ｈＣＳ−１７）。

【０１０４】〔配列番号：５１〕配列番号：１で表わさ
れるアミノ酸配列を有するペプチドのＮ末端から２個の
アミノ酸（Asp-Arg）が欠失し、第４番目のArgがLysに
置換され、１２番目のＳｅｒがＴｈｒで置換されたペプ
チドのアミノ酸配列を示す（〔Lys⁴，Thr¹²〕ｈＣＳ−
１５）。 〔配列番号：５２〕配列番号：１で表わされるアミノ酸
配列を有するペプチドのＮ末端から４個のアミノ酸（As
p-Arg-Met-Pro）が欠失し、第２番目のArgがLysに置換
され、１０番目のSerがThrで置換されたペプチドのアミ
ノ酸配列を示す（〔Lys²，Thr¹⁰〕ｈＣＳ−１３）。 〔配列番号：５３〕配列番号：１で表わされるアミノ酸
配列を有するペプチドのＣ末端から１個のアミノ酸（Ly
s）が欠失し、第６番目のArgがLysに置換され、１４番
目のSerがThrで置換されたペプチドのアミノ酸配列を示
す（des Lys¹⁷ 〔Lys⁶，Thr¹⁴〕ｈＣＳ−１７）。 〔配列番号：５４〕配列番号：１で表わされるアミノ酸
配列を有するペプチドのＮ末端から２個のアミノ酸（As
p-Arg）およびＣ末端から１個のアミノ酸（Lys）が欠失
し、第４番目のArgがLysに置換され、１２番目のSerがT
hrで置換されたペプチドのアミノ酸配列を示す（des Ly
s¹⁵ 〔Lys⁴，Thr¹²〕ｈＣＳ−１５）。 〔配列番号：５５〕配列番号：１で表わされるアミノ酸
配列を有するペプチドのＮ末端から４個のアミノ酸（As
p-Arg-Met-Pro）およびＣ末端から１個のアミノ酸（Ly
s）が欠失し、第２番目のArgがLysに置換され、１０番
目のSerがThrで置換されたペプチドのアミノ酸配列を示
す（des Lys¹³ 〔Lys²，Thr¹⁰〕ｈＣＳ−１３）。

【０１０５】〔配列番号：５６〕配列番号：４で表わさ
れるアミノ酸配列を有する前駆体ペプチドの１８番目の
ArgがLysで置換された前駆体ペプチドのアミノ酸配列を
示す（〔Lys¹⁸〕ｈＣＳ−２９）。 〔配列番号：５７〕配列番号：４で表わされるアミノ酸
配列を有する前駆体ペプチドの２６番目のSerがThrで置
換された前駆体ペプチドのアミノ酸配列を示す（〔Thr
²⁶〕ｈＣＳ−２９）。 〔配列番号：５８〕配列番号：４で表わされるアミノ酸
配列を有する前駆体ペプチドの１８番目のArgがLysで置
換され、２６番目のSerがThrで置換された前駆体ペプチ
ドのアミノ酸配列を示す（〔Lys¹⁸，Thr²⁶〕ｈＣＳ−２
９）。 〔配列番号：５９〕配列番号：４で表わされるアミノ酸
配列を有する前駆体ペプチドの１８番目のArgがLysで置
換され、２９番目のLysが欠失した前駆体ペプチドのア
ミノ酸配列を示す（des Lys²⁹〔Lys¹⁸〕ｈＣＳ−２
９）。 〔配列番号：６０〕配列番号：４で表わされるアミノ酸
配列を有する前駆体ペプチドの２６番目のSerがThrで置
換され、２９番目のLysが欠失した前駆体ペプチドのア
ミノ酸配列を示す（des Lys²⁹〔Thr²⁶〕ｈＣＳ−２
９）。 〔配列番号：６１〕配列番号：４で表わされるアミノ酸
配列を有する前駆体ペプチドの１８番目のArgがLysで置
換され、２６番目のSerがThrで置換された前駆体ペプチ
ドのアミノ酸配列を示す（des Lys²⁹〔Lys¹⁸，Thr²⁶〕
ｈＣＳ−２９）。

【０１０６】〔配列番号：６２〕配列番号：３５で表わ
されるアミノ酸配列を含有する欠失型ムテインをコード
するＤＮＡの塩基配列を示す。 〔配列番号：６３〕配列番号：３６で表わされるアミノ
酸配列を含有する欠失型ムテインをコードするＤＮＡの
塩基配列を示す。 〔配列番号：６４〕配列番号：３７で表わされるアミノ
酸配列を含有する欠失型ムテインをコードするＤＮＡの
塩基配列を示す。 〔配列番号：６５〕配列番号：３８で表わされるアミノ
酸配列を含有する欠失型ムテインをコードするＤＮＡの
塩基配列を示す。 〔配列番号：６６〕配列番号：３９で表わされるアミノ
酸配列を含有する欠失型ムテインをコードするＤＮＡの
塩基配列を示す。 〔配列番号：６７〕配列番号：４０で表わされるアミノ
酸配列を含有する欠失型ムテインをコードするＤＮＡの
塩基配列を示す。 〔配列番号：６８〕配列番号：４１で表わされるアミノ
酸配列を含有する欠失型ムテインをコードするＤＮＡの
塩基配列を示す。

【０１０７】〔配列番号：６９〕配列番号：４２で表わ
されるアミノ酸配列を含有する欠失型ムテインをコード
するＤＮＡの塩基配列を示す。 〔配列番号：７０〕配列番号：４３で表わされるアミノ
酸配列を含有する欠失型ムテインをコードするＤＮＡの
塩基配列を示す。 〔配列番号：７１〕配列番号：４４で表わされるアミノ
酸配列を含有する欠失型ムテインをコードするＤＮＡの
塩基配列を示す。 〔配列番号：７２〕配列番号：４５で表わされるアミノ
酸配列を含有する欠失型ムテインをコードするＤＮＡの
塩基配列を示す。 〔配列番号：７３〕配列番号：４６で表わされるアミノ
酸配列を含有する欠失型ムテインをコードするＤＮＡの
塩基配列を示す。 〔配列番号：７４〕配列番号：４７で表わされるアミノ
酸配列を含有する欠失型ムテインをコードするＤＮＡの
塩基配列を示す。 〔配列番号：７５〕配列番号：４８で表わされるアミノ
酸配列を含有する欠失型ムテインをコードするＤＮＡの
塩基配列を示す。

【０１０８】〔配列番号：７６〕配列番号：４９で表わ
されるアミノ酸配列を含有する欠失型ムテインをコード
するＤＮＡの塩基配列を示す。 〔配列番号：７７〕配列番号：５０で表わされるアミノ
酸配列を含有する欠失型ムテインをコードするＤＮＡの
塩基配列を示す。 〔配列番号：７８〕配列番号：５１で表わされるアミノ
酸配列を含有する欠失型ムテインをコードするＤＮＡの
塩基配列を示す。 〔配列番号：７９〕配列番号：５２で表わされるアミノ
酸配列を含有する欠失型ムテインをコードするＤＮＡの
塩基配列を示す。 〔配列番号：８０〕配列番号：５３で表わされるアミノ
酸配列を含有する欠失型ムテインをコードするＤＮＡの
塩基配列を示す。 〔配列番号：８１〕配列番号：５４で表わされるアミノ
酸配列を含有する欠失型ムテインをコードするＤＮＡの
塩基配列を示す。 〔配列番号：８２〕配列番号：５５で表わされるアミノ
酸配列を含有する欠失型ムテインをコードするＤＮＡの
塩基配列を示す。 〔配列番号：８３〕配列番号：５６で表わされるアミノ
酸配列を有する前駆体ペプチドをコードするＤＮＡの塩
基配列を示す。 〔配列番号：８４〕配列番号：５６で表わされるアミノ
酸配列を有する前駆体ペプチドをコードするＤＮＡの塩
基配列を示す。

【０１０９】〔配列番号：８５〕配列番号：５７で表わ
されるアミノ酸配列を有する前駆体ペプチドをコードす
るＤＮＡの塩基配列を示す。 〔配列番号：８６〕配列番号：５７で表わされるアミノ
酸配列を有する前駆体ペプチドをコードするＤＮＡの塩
基配列を示す。 〔配列番号：８７〕配列番号：５８で表わされるアミノ
酸配列を有する前駆体ペプチドをコードするＤＮＡの塩
基配列を示す。 〔配列番号：８８〕配列番号：５８で表わされるアミノ
酸配列を有する前駆体ペプチドをコードするＤＮＡの塩
基配列を示す。 〔配列番号：８９〕配列番号：５９で表わされるアミノ
酸配列を有する前駆体ペプチドをコードするＤＮＡの塩
基配列を示す。 〔配列番号：９０〕配列番号：５９で表わされるアミノ
酸配列を有する前駆体ペプチドをコードするＤＮＡの塩
基配列を示す。 〔配列番号：９１〕配列番号：６０で表わされるアミノ
酸配列を有する前駆体ペプチドをコードするＤＮＡの塩
基配列を示す。 〔配列番号：９２〕配列番号：６０で表わされるアミノ
酸配列を有する前駆体ペプチドをコードするＤＮＡの塩
基配列を示す。 〔配列番号：９３〕配列番号：６１で表わされるアミノ
酸配列を有する前駆体ペプチドをコードするＤＮＡの塩
基配列を示す。 〔配列番号：９４〕配列番号：６１で表わされるアミノ
酸配列を有する前駆体ペプチドをコードするＤＮＡの塩
基配列を示す。

【０１１０】〔配列番号：９５〕ヒト・ソマトスタチン
レセプタータンパク質サブタイプ１（ＳＳＴＲ１）をコ
ードするｃＤＮＡのクローニングに用いたプライマーの
塩基配列を示す。 〔配列番号：９６〕ヒト・ソマトスタチンレセプタータ
ンパク質サブタイプ１（ＳＳＴＲ１）をコードするｃＤ
ＮＡのクローニングに用いたプライマーの塩基配列を示
す。 〔配列番号：９７〕ヒト・ソマトスタチンレセプタータ
ンパク質サブタイプ２（ＳＳＴＲ２）をコードするｃＤ
ＮＡのクローニングに用いたプライマーの塩基配列を示
す。 〔配列番号：９８〕ヒト・ソマトスタチンレセプタータ
ンパク質サブタイプ２（ＳＳＴＲ２）をコードするｃＤ
ＮＡのクローニングに用いたプライマーの塩基配列を示
す。 〔配列番号：９９〕ヒト・ソマトスタチンレセプタータ
ンパク質サブタイプ３（ＳＳＴＲ３）をコードするｃＤ
ＮＡのクローニングに用いたプライマーの塩基配列を示
す。 〔配列番号：１００〕ヒト・ソマトスタチンレセプター
タンパク質サブタイプ３（ＳＳＴＲ３）をコードするｃ
ＤＮＡのクローニングに用いたプライマーの塩基配列を
示す。

【０１１１】〔配列番号：１０１〕ヒト・ソマトスタチ
ンレセプタータンパク質サブタイプ４（ＳＳＴＲ４）を
コードするｃＤＮＡのクローニングに用いたプライマー
の塩基配列を示す。 〔配列番号：１０２〕ヒト・ソマトスタチンレセプター
タンパク質サブタイプ４（ＳＳＴＲ４）をコードするｃ
ＤＮＡのクローニングに用いたプライマーの塩基配列を
示す。 〔配列番号：１０３〕ヒト・ソマトスタチンレセプター
タンパク質サブタイプ５（ＳＳＴＲ５）をコードするｃ
ＤＮＡのクローニングに用いたプライマーの塩基配列を
示す。 〔配列番号：１０４〕ヒト・ソマトスタチンレセプター
タンパク質サブタイプ５（ＳＳＴＲ５）をコードするｃ
ＤＮＡのクローニングに用いたプライマーの塩基配列を
示す。 〔配列番号：１０５〕本発明のペプチドをコードするＤ
ＮＡをクローニングするために使用したプライマーの塩
基配列を示す。 〔配列番号：１０６〕本発明のペプチドをコードするＤ
ＮＡをクローニングするために使用したプライマーの塩
基配列を示す。

【０１１２】後述の実施例２で得られた形質転換体エシ
ェリヒア コリ（Escherichia coli)ＪＭ１０９／ｐｈ
ＣＳＰ６は、平成８年６月６日から通商産業省工業技術
院生命工学工業技術研究所（ＮＩＢＨ）に寄託番号ＦＥ
ＲＭ ＢＰ−５５６４として、平成８年６月５日から財
団法人・発酵研究所（ＩＦＯ）に寄託番号ＩＦＯ １５
９６７として寄託されている。

【０１１３】

【実施例】以下に、参考例および実施例を挙げて本発明
をさらに具体的に説明するが、本発明はそれらに限定さ
れるものではない。なお、大腸菌を用いての遺伝子操作
法はモレキュラー・クローニング（Molecular clonin
g）に記載されている方法に従った。

【０１１４】

【参考例１】ヒト・ソマトスタチンレセプター蛋白質サ
ブタイプ１（ＳＳＴＲ１）発現細胞の作製 （１）ヒト・ソマトスタチンレセプター蛋白質サブタイ
プ１（ＳＳＴＲ１）ＤＮＡのクローニング 報告されたヒト・ＳＳＴＲ１ｃＤＮＡの塩基配列〔山田
ら、プロシージング・オブ・ザ・ナショナル・アカデミ
ー・オブ・サイエンス・ユーエスエー（Proc.Natl. Aca
d. Sci., USA）、89巻、251-255頁、1992年〕に基づ
き、ＤＮＡオリゴマーＳ１−１およびＳ１−２を合成し
た。Ｓ１−１の配列は、５'−ＧＧＴＣＧＡＣＣＴＣＡ
ＧＣＴＡＧＧＡＴＧＴＴＣＣＣＣＡＡＴＧ−３'（配列
番号：９５）であり、Ｓ１−２の配列は、５'−ＧＧＴ
ＣＧＡＣＣＣＧＧＧＣＴＣＡＧＡＧＣＧＴＣＧＴＧＡＴ
−３'（配列番号：９６）であった。鋳型としては、ヒ
ト染色体ＤＮＡ（クロンテック社、カタログ番号ＣＬ６
５５０−１）を用いた。該ＤＮＡ ０.５ｎｇに上記ＤＮ
Ａオリゴマーをそれぞれ２５ｐｍｏｌずつ加え、Ｐｆｕ
ＤＮＡポリメラーゼ（スタラタジーン（株））２.５単
位を用いてポリメラーゼ連鎖反応を行なった。反応液組
成は、ＰｆｕＤＮＡポリメラーゼに添付された指示書に
従った。反応は、９４℃で１分間、６３℃で１分間、７
５℃で２分間を１サイクルとして、３５サイクル繰り返
した。反応液を１％アガロースゲルで電気泳動したとこ
ろ、目的とするサイズ（約１.２ｋｂ）のＤＮＡ断片が
特異的に増幅されていた。該ＤＮＡ断片をアガロースゲ
ルから常法にしたがって回収し、ＨｉｎｃIIサイトで開
裂したｐＵＣ１１８に接続し、コンピテントセルである
エシェリヒア コリ（Escherichia coli）ＪＭ１０９に
導入した。該ＤＮＡ断片を含むプラスミドを有する形質
転換体を選抜し、蛍光色素を用いた自動塩基配列解析装
置ＡＬＦＤＮＡシーケンサー（ファルマシア社製）で挿
入ＤＮＡ断片の塩基配列を確認したところ、塩基配列か
ら予想されるアミノ酸配列は、前記の山田らの報告に記
載された配列と完全に一致した。

【０１１５】（２）ヒト・ソマトスタチンレセプター蛋
白質サブタイプ１（ＳＳＴＲ１）ＤＮＡの発現プラスミ
ドの構築 ＣＨＯ細胞での発現ベクターとしては、ｐＡＫＫＯ−１
１１を用いた。ｐＡＫＫＯ−１１１は次のようにして構
築した。特開平５−０７６３８５公報に記載のｐＴＢ１
４１７からＨｉｎｄIIIおよびＣｌａＩ処理によってＳ
ＲαプロモーターおよびｐｏｌｙＡ付加シグナルを含む
１.４ｋｂのＤＮＡ断片を得た。また、ｐＴＢ３４８〔N
aruo, K. et al．バイオケミカル・アンド・バイオフィ
ジカル・リサーチ・コミュニケーションズ（Biochem. B
iophys. Res. Commun.）128, 256-264 (1985)〕からＣ
ｌａＩおよびＳａｌＩ処理によりジヒドロ葉酸還元酵素
（ＤＨＦＲ）遺伝子を含む４.５ｋｂのＤＮＡ断片を得
た。これらのＤＮＡ断片をＴ４ポリメラーゼ処理により
末端を平滑末端にした後、Ｔ４リガーゼにより連結し、
ｐＡＫＫＯ−１１１プラスミドを構築した。次に、
（１）で得られたヒト・ＳＳＴＲ１ ＤＮＡ断片を有す
るプラスミド ５μｇを制限酵素ＳａｌＩで消化した
後、１％アガロースゲル電気泳動を行ない、ヒト・ＳＳ
ＴＲ１をコードする１.２ｋｂのＤＮＡ断片を回収し
た。そして、上記の発現ベクターｐＡＫＫＯ−１１１
（５.５ｋｂ）１μｇをＳａｌＩで消化し、ヒト・ＳＳ
ＴＲ１ ＤＮＡ断片を挿入するためのクローニング部位
を作製した。該発現ベクター断片と１.２ｋｂのＤＮＡ
断片をＴ４ＤＮＡリガーゼを用いて結合し、反応液を塩
化カルシウム法にて大腸菌ＪＭ１０９に導入し、形質転
換体の中からヒト・ＳＳＴＲ１ ＤＮＡ断片がプロモー
ターに対して順方向に挿入された発現プラスミドｐＡ１
−１１−ＳＳＴＲ１を得た。このプラスミドを保持する
形質転換体をエシェリヒア コリ（Escherichia coli）
ＪＭ１０９／ｐＡ−１−１１−ＳＳＴＲ１と表示する。

【０１１６】（３）ヒト・ソマトスタチンレセプター蛋
白質サブタイプ１（ＳＳＴＲ１）ＤＮＡのＣＨＯ（ｄｈ
ｆｒ^-）細胞への導入と発現 ＣＨＯ（ｄｈｆｒ^-）１×１０⁶細胞を、直径８ｃｍのシ
ャーレを用いて、１０％ウシ胎児血清を含むハムＦ１２
培地で２４時間培養し、この細胞に（２）で得たヒト・
ＳＳＴＲ１ ｃＤＮＡ発現プラスミドｐＡ−１−１１−
ＳＳＴＲ１、１０μｇをリン酸カルシウム法（Cell Phe
ct Transfection Kit；Pharmacia）で導入した。導入２
４時間後、培地を１０％透析ウシ胎児血清を含むダルベ
ッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）に換えて、本培地で
コロニーを形成する細胞（すなわち、ＤＨＦＲ⁺細胞）
を選択した。さらに、選択された細胞を限界希釈法によ
って単一細胞からクローニングし、ソマトスタチンレセ
プター蛋白質活性を以下の方法で測定した。ヒト・ＳＳ
ＴＲ１ ｃＤＮＡ発現細胞株を測定用緩衝液〔５０ｍＭ
トリス−塩酸、１ｍＭ ＥＤＴＡ、５ｍＭ 塩化マグネシ
ウム、０.１％ 牛血清アルブミン（ＢＳＡ）、０.２ｍ
ｇ／ｍｌ バシトラシン、１０μｇ／ｍｌロイペプチ
ン、１μｇ／ｍｌ ペプスタチン、２００units／ｍｌ
アプロチニン（ｐＨ７.５）〕で希釈し、細胞数を２０
０μｌあたり２×１０⁴個に調整した。２００μｌをチ
ューブに分注し、５ｎＭ〔¹²⁵Ｉ〕−ソマトスタチン−
１４（２０００Ｃｉ／ｍｍｏｌ，Amersham）２μｌを添
加し、２５℃、６０分間インキュベーションした。ま
た、非特異的結合量（ＮＳＢ）を測定するために、ソマ
トスタチン−１４（１０^-4Ｍ）２μｌを加えたチューブ
もインキュベーションした。洗浄用緩衝液〔５０ｍＭ
トリス−塩酸、１ｍＭ ＥＤＴＡ、５ｍＭ 塩化マグネシ
ウム（ｐＨ７.５）〕（１.５ｍｌ）を添加し、ＧＦ／Ｆ
ガラス繊維濾紙（ワットマン社）で濾過、さらに同緩衝
液（１.５ｍｌ）で洗浄した。濾紙の〔¹²⁵Ｉ〕をγ−カ
ウンターで測定した。このようにして、ソマトスタチン
結合活性の高い細胞株、ＳＳＴＲ１−８−３を選択し
た。

【０１１７】

【参考例２】ヒト・ソマトスタチンレセプター蛋白質サ
ブタイプ２（ＳＳＴＲ２）発現細胞の作製 （１）ヒト・ソマトスタチンレセプター蛋白質サブタイ
プ２（ＳＳＴＲ２）ｃＤＮＡのクローニング 報告されたヒト・ＳＳＴＲ２ｃＤＮＡの塩基配列〔山田
ら、プロシージング・オブ・ザ・ナショナル・アカデミ
ー・オブ・サイエンス・ユーエスエー（Proc.Natl. Aca
d. Sci., USA）、89巻、251-255頁、1992年〕に基づ
き、ＤＮＡオリゴマーＰＴ−１およびＰＴ−２を合成し
た。ＰＴ−１は、５'−ＧＧＴＣＧＡＣＡＣＣＡＴＧＧ
ＡＣＡＴＧＧＣＧＧＡＴＧＡＧ−３'（配列番号：９
７）で表わされる配列を有し、５'末端に制限酵素Ｓａ
ｌＩの認識配列と−２〜＋１８（翻訳開始部位を＋１と
する）のセンス配列を含むオリゴマーであった。ＰＴ−
２は、５'−ＧＧＴＣＧＡＣＡＧＴＴＣＡＧＡＴＡＣＴ
ＧＧＴＴＴＧＧ−３'（配列表の配列番号：９８）で表
わされる配列を有し、５'末端に制限酵素ＳａｌＩの認
識配列と＋１０９５〜＋１１１４のアンチセンス配列を
含むオリゴマーであった。ヒト下垂体ｃＤＮＡ（クロン
テック社、カタログ番号7173-1）を鋳型として用いた。
該ｃＤＮＡ１ｎｇに上記ＤＮＡオリゴマーをそれぞれ２
５pmolずつ加え、ＴａｑＤＮＡポリメラーゼ（宝酒造
（株））２.５単位を用いてポリメラーゼ連鎖反応を行
なった。反応液組成は、ＴａｑＤＮＡポリメラーゼに添
付された指示書に従った。

【０１１８】反応は、９４℃で３０秒間、５２℃で２０
秒間、７２℃で６０秒間を１サイクルとして、３０サイ
クル繰り返した。反応液を１％アガロースゲルで電気泳
動したところ、目的とするサイズ（約１.１ｋｂ）のＤ
ＮＡ断片が特異的に増幅されていた。該ＤＮＡ断片をア
ガロースゲルから常法にしたがって回収し、ＨｉｎｃII
サイトで開裂したｐＵＣ１１８に接続し、コンピテント
セルであるエシェリヒア コリ（Escherichia coli）Ｊ
Ｍ１０９に導入した。該ＤＮＡ断片を含むプラスミドを
有する形質転換体を２株（Ｎｏ.５およびＮｏ.７）選抜
し、蛍光色素を用いた自動塩基配列解析装置３７３Ａ
（アプライドバイオシステムズ社）で挿入ＤＮＡ断片の
塩基配列を確認したところ、Ｎｏ.５株のＳａｌＩ-Ｂｓ
ｔＰＩ間の７７０ベース断片の配列中に点変異が一カ所
確認され、Ｎｏ.７株のＢｓｔＰＩ-ＳａｌＩ間の３６０
ベース断片の配列中に点変異が一カ所確認された。そこ
で、Ｎｏ．５株のＢｓｔＰＩ-ＳａｌＩ断片およびＮ
ｏ．７株のＢｓｔＰＩ-ＳａｌＩを除いた残りの断片
を、アガロースゲル電気泳動で精製し、これらをライゲ
ーション反応で繋げたプラスミドを構築した。本プラス
ミドの挿入ＤＮＡ断片の塩基配列を確認したところ、前
記の山田らの報告に記載されたヒト・ＳＳＴＲ２ｃＤＮ
Ａの塩基配列と完全に一致した。

【０１１９】（２）ヒト・ソマトスタチンレセプター蛋
白質サブタイプ２（ＳＳＴＲ２）ｃＤＮＡの発現プラス
ミドの構築 ＣＨＯ細胞の発現ベクターとしては、参考例１（１）記
載のｐＡＫＫＯ−１１１を用いた。（１）で得られたヒ
ト・ＳＳＴＲ２ｃＤＮＡ断片を有するプラスミド ５μ
ｇを制限酵素ＳａｌＩで消化した後、１％アガロースゲ
ル電気泳動を行ない、ヒト・ＳＳＴＲ２をコードする
１．１ｋｂのＤＮＡ断片を回収した。そして、上記の発
現ベクターｐＡＫＫＯ１．１１（５．５ｋｂ）１μｇを
ＳａｌＩで消化し、ヒト・ＳＳＴＲ２ｃＤＮＡ断片を挿
入するためのクローニング部位を作製した。該発現ベク
ター断片と１．１ｋｂのＤＮＡ断片をＴ４ＤＮＡリガー
ゼを用いて結合し、反応液を塩化カルシウム法にて大腸
菌ＪＭ１０９に導入し、形質転換体の中からヒト・ＳＳ
ＴＲ２ｃＤＮＡ断片がプロモーターに対して順方向に挿
入された発現プラスミドｐＡＣ０１を得た。このプラス
ミドｐＡＣ０１を保持する形質転換体をエシェリヒア
コリ（Escherichia coli）ＪＭ１０９／ｐＡＣ０１と表
示する。

【０１２０】（３）ヒト・ソマトスタチンレセプター蛋
白質サブタイプ２（ＳＳＴＲ２）ｃＤＮＡのＣＨＯ（ｄ
ｈｆｒ^-）細胞への導入と発現 ＣＨＯ（ｄｈｆｒ^-）細胞１×１０⁶細胞を、直径８cmの
シャーレを用いて、１０％ウシ胎児血清を含むハムＦ１
２培地で２４時間培養し、この細胞に実施例１で得たヒ
ト・ＳＳＴＲ２ｃＤＮＡ発現プラスミドｐＡＣ０１ １
０μｇをリン酸カルシウム法（Cell Phect Transfectio
n Kit；Pharmacia）で導入した。導入２４時間後、培地
を１０％透析ウシ胎児血清を含むＤＭＥＭ培地に換え
て、本培地でコロニーを形成する細胞（すなわち、ＤＨ
ＦＲ⁺細胞）を選択した。さらに、選択された細胞を限
界希釈法によって単一細胞からクローニングし、ヒト・
ＳＳＴＲ２を高発現する細胞株ＳＳＴＲ２−ＨＳ５−９
を選択した。

【０１２１】

【参考例３】ヒト・ソマトスタチンレセプター蛋白質サ
ブタイプ３（ＳＳＴＲ３）発現細胞の作製 （１）ヒト・ソマトスタチンレセプター蛋白質サブタイ
プ３（ＳＳＴＲ３）ＤＮＡのクローニング 報告されたヒト・ＳＳＴＲ３ ｃＤＮＡの塩基配列〔山
田ら、モレキュラー・エンドクリノロジー（Molecular
Endocrinology）、6巻、2136-2142頁、1992年〕に基づ
き、ＤＮＡオリゴマー、Ｓ３−１およびＳ３−２を合成
した。Ｓ３−１の配列は、５'−ＧＧＴＣＧＡＣＣＴＣ
ＡＡＣＣＡＴＧＧＡＣＡＴＧＣＴＴＣＡＴＣ−３'（配
列番号：９９）であり、Ｓ３−２の配列は、５'−ＧＧ
ＴＣＧＡＣＴＴＴＣＣＣＣＡＧＧＣＣＣＣＴＡＣＡＧＧ
ＴＡ−３'（配列番号：１００）であった。鋳型として
は、ヒト染色体ＤＮＡ（クロンテック社、カタログ番号
ＣＬ６５５０−１）を用いた。該ＤＮＡ ０.５ｎｇに上
記ＤＮＡオリゴマーをそれぞれ２５ｐｍｏｌずつ加え、
ＰｆｕＤＮＡポリメラーゼ（スタラタジーン（株））
２.５単位を用いてポリメラーゼ連鎖反応を行なった。
反応液組成は、ＰｆｕＤＮＡポリメラーゼに添付された
指示書に従った。反応は、９４℃で１分間、６３℃で１
分間、７５℃で２分間を１サイクルとして、３５サイク
ル繰り返した。反応液を１％アガロースゲルで電気泳動
したところ、目的とするサイズ（約１.３ｋｂ）のＤＮ
Ａ断片が特異的に増幅されていた。参考例１（１）記載
の方法により該ＤＮＡ断片の塩基配列を確認したとこ
ろ、塩基配列から予想されるアミノ酸配列は、前記の山
田らの報告に記載された配列と完全に一致した。

【０１２２】（２）ヒト・ソマトスタチンレセプター蛋
白質サブタイプ３（ＳＳＴＲ３）ＤＮＡの発現プラスミ
ドの構築 ＣＨＯ細胞での発現ベクターとしては、参考例１（２）
記載のｐＡＫＫＯ−１１１を用いた。（１）で得られた
ヒト・ＳＳＴＲ３ ＤＮＡ断片を有するプラスミド ５μ
ｇを制限酵素ＳａｌＩで消化した後、１％アガロースゲ
ル電気泳動を行ない、ヒト・ＳＳＴＲ３をコードする
１.３ｋｂのＤＮＡ断片を回収した。そして、上記の発
現ベクターｐＡＫＫＯ−１１１（５.５ｋｂ）１μｇを
ＳａｌＩで消化し、ヒト・ＳＳＴＲ３ ＤＮＡ断片を挿
入するためにクローニング部位を作製した。該発現ベク
ター断片と１.３ｋｂのＤＮＡ断片をＴ４ＤＮＡリガー
ゼを用いて結合し、反応液を塩化カルシウム法にて大腸
菌ＪＭ１０９に導入し、形質転換体の中からヒト・ＳＳ
ＴＲ３ ＤＮＡ断片がプロモーターに対して順方向に挿
入された発現プラスミドｐＡ１−１１−ＳＳＴＲ３を得
た。このプラスミドｐＡ１−１１−ＳＳＴＲ３を保持す
る形質転換体をエシェリヒア コリ（Escherichia col
i）ＪＭ１０９／ｐＡ−１−１１−ＳＳＴＲ３と表示す
る。

【０１２３】（３）ヒト・ソマトスタチンレセプター蛋
白質サブタイプ３（ＳＳＴＲ３）ＤＮＡのＣＨＯ（ｄｈ
ｆｒ^-）細胞への導入と発現 ＣＨＯ（ｄｈｆｒ^-）１×１０⁶細胞を、直径８ｃｍのシ
ャーレを用いて、１０％ウシ胎児血清を含むハムＦ１２
培地で２４時間培養し、この細胞に（２）で得たヒト・
ＳＳＴＲ３ ＤＮＡ発現プラスミドｐＡ−１−１１−Ｓ
ＳＴＲ３、１０μｇをリン酸カルシウム法（Cell Phect
Transfection Kit；Pharmacia）で導入した。導入２４
時間後、培地を１０％透析ウシ胎児血清を含むＤＭＥＭ
培地に換えて、本培地でコロニーを形成する細胞（すな
わち、ＤＨＦＲ⁺細胞）を選択した。さらに、選択され
た細胞を限界希釈法によって単一細胞からクローニング
し、これらの細胞のソマトスタチンレセプター蛋白質発
現能を参考例１（３）記載のバインディングアッセイに
より測定した。このようにして、ソマトスタチン結合活
性の高い細胞株、ＳＳＴＲ３−１５−１９を選択した。

【０１２４】

【参考例４】ヒト・ソマトスタチンレセプター蛋白質サ
ブタイプ４（ＳＳＴＲ４）発現細胞の作製 （１）ヒト・ソマトスタチンレセプター蛋白質サブタイ
プ４（ＳＳＴＲ４）ＤＮＡのクローニング 報告されたヒト・ＳＳＴＲ４ ＤＮＡの塩基配列〔Rohre
rら、プロシージング・オブ・ザ・ナショナル・アカデ
ミー・オブ・サイエンス・ユーエスエー（Proc. Natl.
Acad. Sci., USA）、90巻、4196-4200頁、1993年〕に基
づき、ＤＮＡオリゴマー、Ｓ４−１およびＳ４−２を合
成した。Ｓ４−１の配列は、５'−ＧＧＣＴＣＧＡＧＴ
ＣＡＣＣＡＴＧＡＧＣＧＣＣＣＣＣＴＣＧ−３'（配列
番号：１０１）であり、Ｓ４−２の配列は、５'−ＧＧ
ＧＣＴＣＧＡＧＣＴＣＣＴＣＡＧＡＡＧＧＴＧＧＴＧＧ
−３'（配列番号：１０２）であった。鋳型としては、
ヒト染色体ＤＮＡ（クロンテック社、カタログ番号ＣＬ
６５５０−１）を用いた。該ＤＮＡ ０.５ｎｇに上記Ｄ
ＮＡオリゴマーをそれぞれ２５ｐｍｏｌずつ加え、Ｐｆ
ｕＤＮＡポリメラーゼ（スタラタジーン（株））２.５
単位を用いてポリメラーゼ連鎖反応を行なった。反応液
組成は、ＰｆｕＤＮＡポリメラーゼに添付された指示書
に従った。反応は、９４℃で１分間、６３℃で１分間、
７５℃で２分間を１サイクルとして、３５サイクル繰り
返した。反応液を１％アガロースゲルで電気泳動したと
ころ、目的とするサイズ（約１.２ｋｂ）のＤＮＡ断片
が特異的に増幅されていた。参考例１（１）記載の方法
により該ＤＮＡ断片の塩基配列を確認したところ、塩基
配列から予想されるアミノ酸配列は、前記のRohrerらの
報告に記載された配列と完全に一致した。

【０１２５】（２）ヒト・ソマトスタチンレセプター蛋
白質サブタイプ４（ＳＳＴＲ４）ＤＮＡの発現プラスミ
ドの構築 ＣＨＯ細胞での発現ベクターとしては、参考例１（２）
記載のｐＡＫＫＯ−１１１を用いた。（１）で得られた
ヒト・ＳＳＴＲ４ ＤＮＡ断片を有するプラスミド ５μ
ｇを制限酵素ＸｈｏＩで消化した後、１％アガロースゲ
ル電気泳動を行ない、ヒト・ＳＳＴＲ４をコードする
１.２ｋｂのＤＮＡ断片を回収した。そして、上記の発
現ベクターｐＡＫＫＯ−１１１（５.５ｋｂ）１μｇを
ＳａｌＩで消化し、ヒト・ＳＳＴＲ４ ＤＮＡ断片を挿
入するためのクローニング部位を作製した。該発現ベク
ター断片と１.２ｋｂのＤＮＡ断片をＴ４ＤＮＡリガー
ゼを用いて結合し、反応液を塩化カルシウム法にて大腸
菌ＪＭ１０９に導入し、形質転換体の中からヒト・ＳＳ
ＴＲ４ ＤＮＡ断片がプロモーターに対して順方向に挿
入された発現プラスミドｐＡ１−１１−ＳＳＴＲ４を得
た。このプラスミドを保持する形質転換体をエシェリヒ
ア コリ（Escherichia coli）ＪＭ１０９／ｐＡ−１−
１１−ＳＳＴＲ４と表示する。

【０１２６】（３）ヒト・ソマトスタチンレセプター蛋
白質サブタイプ４（ＳＳＴＲ４）ＤＮＡのＣＨＯ（ｄｈ
ｆｒ^-）細胞への導入と発現 ＣＨＯ（ｄｈｆｒ^-）１×１０⁶細胞を、直径８ｃｍのシ
ャーレを用いて、１０％ウシ胎児血清を含むハムＦ１２
培地で２４時間培養し、この細胞に（２）で得たヒト・
ＳＳＴＲ４ ＤＮＡ発現プラスミドｐＡ−１−１１−Ｓ
ＳＴＲ４、１０μｇをリン酸カルシウム法（Cell Phect
Transfection Kit；Pharmacia）で導入した。導入２４
時間後、培地を１０％透析ウシ胎児血清を含むＤＭＥＭ
培地に換えて、本培地でコロニーを形成する細胞（すな
わち、ＤＨＦＲ⁺細胞）を選択した。さらに、選択され
た細胞を限界希釈法によって単一細胞からクローニング
し、これらの細胞のソマトスタチンレセプター蛋白質発
現能を参考例１（３）記載のバインディングアッセイに
より測定した。このようにして、ソマトスタチン結合活
性の高い細胞株、ＳＳＴＲ４−１−２を選択した。

【０１２７】

【参考例５】ヒト・ソマトスタチンレセプター蛋白質サ
ブタイプ５（ＳＳＴＲ５）発現細胞の作製 （１）ヒト・ソマトスタチンレセプター蛋白質サブタイ
プ５（ＳＳＴＲ５）ＤＮＡのクローニング 報告されたヒト・ＳＳＴＲ５ ｃＤＮＡの塩基配列〔山
田ら、バイオケミカル・アンド・バイオフィジカル・リ
サーチ・コミュニケーションズ（Biochem. Biophys. Re
s. Commun.）195巻、844-852頁、1993年〕に基づき、Ｄ
ＮＡオリゴマー、Ｓ５−１およびＳ５−２を合成した。
Ｓ５−１の配列は、５'−ＧＧＴＣＧＡＣＣＡＣＣＡＴ
ＧＧＡＧＣＣＣＣＴＧＴＴＣＣＣ−３'（配列番号：１
０３）であり、Ｓ５−２の配列は、５'−ＣＣＧＴＣＧ
ＡＣＡＣＴＣＴＣＡＣＡＧＣＴＴＧＣＴＧＧ−３'（配
列番号：１０４）であった。鋳型としては、ヒト染色体
ＤＮＡ（クロンテック社、カタログ番号ＣＬ６５５０−
１）を用いた。該ＤＮＡ ０.５ｎｇに上記ＤＮＡオリゴ
マーをそれぞれ２５ｐｍｏｌずつ加え、ＰｆｕＤＮＡポ
リメラーゼ（スタラタジーン（株））２.５単位を用い
てポリメラーゼ連鎖反応を行なった。反応液組成は、Ｐ
ｆｕＤＮＡポリメラーゼに添付された指示書に従った。
反応は、９４℃で１分間、６６℃で１分間、７５℃で２
分間を１サイクルとして、３５サイクル繰り返した。反
応液を１％アガロースゲルで電気泳動したところ、目的
とするサイズ（約１.１ｋｂ）のＤＮＡ断片が特異的に
増幅されていた。参考例１（１）記載の方法により該Ｄ
ＮＡ断片の塩基配列を確認したところ、塩基配列から予
想されるアミノ酸配列は、前記の山田らの報告に記載さ
れた配列と完全に一致した。

【０１２８】（２）ヒト・ソマトスタチンレセプター蛋
白質サブタイプ５（ＳＳＴＲ５）ＤＮＡの発現プラスミ
ドの構築 ＣＨＯ細胞での発現ベクターとしては、参考例１（２）
記載のｐＡＫＫＯ−１１１を用いた。（１）で得られた
ヒト・ＳＳＴＲ５ ＤＮＡ断片を有するプラスミド ５μ
ｇを制限酵素ＳａｌＩで消化した後、１％アガロースゲ
ル電気泳動を行ない、ヒト・ＳＳＴＲ５をコードする
１.１ｋｂのＤＮＡ断片を回収した。そして、上記の発
現ベクターｐＡＫＫＯ−１１１（５.５ｋｂ）１μｇを
ＳａｌＩで消化し、ヒト・ＳＳＴＲ５ ＤＮＡ断片を挿
入するためのクローニング部位を作製した。該発現ベク
ター断片と１.１ｋｂのＤＮＡ断片をＴ４ＤＮＡリガー
ゼを用いて結合し、反応液を塩化カルシウム法にて大腸
菌ＪＭ１０９に導入し、形質転換体の中からヒト・ＳＳ
ＴＲ５ ＤＮＡ断片がプロモーターに対して順方向に挿
入された発現プラスミドｐＡ１−１１−ＳＳＴＲ５を得
た。このプラスミドｐＡ１−１１−ＳＳＴＲ５を保持す
る形質転換体をエシェリヒア コリ（Escherichia col
i）ＪＭ１０９／ｐＡ−１−１１−ＳＳＴＲ５と表示す
る。

【０１２９】（３）ヒト・ソマトスタチンレセプター蛋
白質サブタイプ５（ＳＳＴＲ５）ＤＮＡのＣＨＯ（ｄｈ
ｆｒ^-）細胞への導入と発現 ＣＨＯ（ｄｈｆｒ^-）１×１０⁶細胞を、直径８ｃｍのシ
ャーレを用いて、１０％ウシ胎児血清を含むハムＦ１２
培地で２４時間培養し、この細胞に（２）で得たヒト・
ＳＳＴＲ５ ｃＤＮＡ発現プラスミドｐＡ−１−１１−
ＳＳＴＲ５、１０μｇをリン酸カルシウム法（Cell Phe
ct Transfection Kit；Pharmacia）で導入した。導入２
４時間後、培地を１０％透析ウシ胎児血清を含むＤＭＥ
Ｍ培地に換えて、本培地でコロニーを形成する細胞（す
なわち、ＤＨＦＲ⁺細胞）を選択した。さらに、選択さ
れた細胞を限界希釈法によって単一細胞からクローニン
グし、これらの細胞のソマトスタチンレセプター蛋白質
発現能を参考例１（３）記載のバインディングアッセイ
により測定した。このようにして、ソマトスタチン結合
活性の高い細胞株、ＳＳＴＲ５−３２−４を選択した。

【０１３０】

【参考例６】ヒト・ソマトスタチンレセプターを含有す
るＣＨＯ細胞膜画分の調製 ヒト・ソマトスタチンレセプター発現ＣＨＯ細胞株、Ｓ
ＳＴＲ１−８−３、ＳＳＴＲ２−ＨＳ５−９、ＳＳＴＲ
３−１５−１９、ＳＳＴＲ４−１−２およびＳＳＴＲ５
−３２−４（１０⁹個）をそれぞれ５ｍＭ ＥＤＴＡを添
加したリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ−ＥＤＴＡ）に浮
遊させ遠心した。細胞のペレットに細胞用ホモジネート
バッファー（１０ｍＭ ＮａＨＣＯ₃、５ｍＭ ＥＤＴ
Ａ、ｐＨ＝７.５）を１０ｍｌ加え、ポリトロンホモジ
ナイザーを用いてホモジネートした。４００×ｇで１５
分遠心して得られた上清をさらに１００,０００×ｇで
１時間遠心し、膜画分の沈殿物を得た。この沈殿物を２
ｍｌのアッセイバッファー（２５ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣ
ｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、０.１％ ＢＳＡ、０.２５ｍＭフ
ェニルメタンスルホニルフルオライド（ＰＭＳＦ）、１
μｇ／ｍｌ ペプスタチン、２０μｇ／ｍｌ ロイペプチ
ン、１０μｇ／ｍｌ フォスフォラミドン、ｐＨ＝７.
５）に懸濁し、１００,０００×ｇで１時間遠心した。
沈殿物として回収された膜画分を再び２０ｍｌのアッセ
イバッファーに懸濁し、分注して、−８０℃で保存し、
使用の都度、解凍して用いた。

【０１３１】

【実施例１】ヒト脳 poly(Ａ)⁺ＲＮＡ画分からのｃＤＮ
Ａの合成とＲＴ-ＰＣＲ法による生理活性ペプチドｃＤ
ＮＡの増幅 クローンテック社より購入したヒト脳 poly(Ａ)⁺ＲＮＡ
画分５μｇにプライマーとしてランダムＤＮＡヘキサマ
ー（ＢＲＬ社）を加え、モロニイマウス白血病ウイルス
の逆転写酵素（ＢＲＬ社）により、添付バッファーを用
いて相補ＤＮＡを合成した。反応後の産物はフェノー
ル：クロロホルム（１：１）で抽出し、エタノール沈殿
を行なった後、３０μｌのＴＥ（１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−
ＨＣｌ（ｐＨ７.５）、１ｍＭ ＥＤＴＡ）に溶解した。
調製したｃＤＮＡ １μｌを鋳型として、次の２つのプ
ライマーを用いて、ＰＣＲによる増幅を行なった。 ５'−ＡＣＡＡＧＡＴＧＣＣＡＴＴＧＴＣＣＣＣＣＧＧ
ＣＣＴＣＣＴ−３'（配列番号：１０５） ５'−ＴＴＣＡＧＧＴＣＴＧＴＡＡＴＴＡＡＡＣＴＴＧ
ＣＧＴＧＡ−３'（配列番号：１０６） 反応液の組成は、合成ＤＮＡプライマー（５'プライマ
ー配列および３'プライマー配列）各２０ｐＭ、０.２５
ｍＭ ｄＮＴＰｓ、Ｅｘ Ｔａｑ ＤＮＡ polymerase ０.
５μｌおよび酵素に付属のバッファー１０μｌで、総反
応溶液量は１００μｌとした。増幅はサーマルサイクラ
ー（パーキン・エルマー社）を用い、９５℃・３０秒、
６５℃・１分、７２℃・３０秒のサイクルを３５回繰り
返した。増幅産物の確認は１.２％アガロース電気泳動
およびエチジウムブロミド染色によって行なった。

【０１３２】

【実施例２】ＰＣＲ産物のプラスミドベクターへのサブ
クローニングおよび挿入ｃＤＮＡ部分の塩基配列の解読
による新規生理活性ペプチド候補クローンの選択 実施例１で行なったＰＣＲ後の反応産物は１.２％のア
ガロースゲルを用いて分離し、バンドの部分をカミソリ
で切り出した後、ＳＵＰＲＥＣＯＩ^TM（タカラ）、フェ
ノール抽出、エタノール沈殿を行なってＤＮＡを回収し
た。ＴＡクローニングキット（インビトロゲン社）の処
方に従い、回収したＤＮＡをプラスミドベクターｐＣＲ
^TMIIへサブクローニングした。これを大腸菌ＪＭ１０９
competent cell（宝酒造（株））に導入したのち、ｃ
ＤＮＡ挿入断片を持つクローンをアンピシリン、ＩＰＴ
ＧおよびＸ−ｇａｌを含むＬＢ寒天培地中で選択し、白
色を呈するクローンのみを滅菌した爪楊枝を用いて分離
し、形質転換体エシェリヒア コリ（Escherichia col
i）ＪＭ１０９／ｐｈＣＳＰ６を得た。このクローンを
アンピシリンを含むＬＢ培地で一晩培養し、自動プラス
ミド抽出装置（クラボウ）を用いてプラスミドＤＮＡを
調製した。調製したＤＮＡの一部を用いてＥｃｏＲＩに
よる切断を行ない、挿入されているｃＤＮＡ断片の大き
さを確認した。残りのＤＮＡの一部をさらにＲＮａｓｅ
処理、フェノール・クロロホルム抽出し、エタノール沈
殿によって濃縮した。塩基配列の決定のための反応はDy
eDeoxy Terminator Cycle Sequencing Kit（ＡＢＩ社）
を用いて行ない、蛍光式自動シーケンサーを用いて解読
した。得られた塩基配列の情報は、ＤＮＡＳＩＳ（日立
システムエンジニアリング社）を用いて行なった。決定
した塩基配列を〔図１〕に示した。決定した塩基配列
〔図１〕をもとにホモロジー検索を行なった結果、形質
転換体E. coli ＪＭ１０９／ｐｈＣＳＰ６の保有するプ
ラスミドに挿入されたｃＤＮＡ断片は、新規生理活性ペ
プチドをコードすることが分かった。さらに、それを確
認するために、ＤＮＡＳＩＳ（日立システムエンジニア
リング社）を用い、塩基配列をアミノ酸配列に変換後
〔図２〕、疎水性プロット〔図４〕およびアミノ酸配列
に基づくホモロジー検索を行ない、ラットコルチスタチ
ン（Ｕ５１９１９）、ラットソマトスタチン（Ｊ００７
８８）との相同性を見いだした〔図５〕。上記の（ ）
内の略語は、ＮＢＲＦ−ＰＩＲにデータとして登録され
る際の整理番号であり、通常Accession Numberと呼ばれ
るものである。

【０１３３】

【実施例３】ヒト・ペプチドｈＣＳ−１７（配列番号：
１）：

【化１】 の合成

【０１３４】１）Boc-Asp(OcHex)-Arg(Tos)-Met-Pro-Cy
s(MeBzl)-Arg(Tos)-Asn-Phe-Phe-Trp(CHO)-Lys(Cl-Z)-T
hr(Bzl)-Phe-Ser(Bzl)-Ser(Bzl)-Cys(MeBzl)-Lys(Cl-Z)
-OCH₂-PAM 樹脂の合成 市販のBoc-Lys(Cl-Z)-OCH₂-PAM 樹脂（０.６５m mole/g
ram）をペプチド合成機ＡＢＩ−４１０Ａの反応容器に
入れ、Ｂｏｃ／ＨＯＢＴ／ＮＭＰ方式でBoc-Cys(MeBz
l), Boc-Ser(Bzl), Boc-Phe, Boc-Thr(Bzl), Boc-Lys(C
l-Z), Boc-Trp(CHO), Boc-Asn, Boc-Arg(Tos), Boc-Pr
o, Boc-Met, Boc-Asp(OcHex)をヒト型コルチスタチン様
ペプチド（配列番号：１）のＣ末端からのアミノ酸配列
順序通りに縮合した。縮合反応をニンヒドリンテストで
点検し、未反応アミノ基がある場合には十分な縮合が得
られるまで再縮合を実施して配列通りの全アミノ酸を樹
脂に導入し、０.９２３５ｇの保護ペプチド樹脂を得
た。 ２）１）で得た樹脂０.１５ｇをパラ−クレゾール １.
７ｇ、１,４−ブタンジチオール ２.５ｍｌ、弗化水素
２５ｍｌで０℃／１時間処理した。弗化水素、１,４−
ブタンジチオールを減圧留去し、残留物にジエチルエー
テル１００ｍｌを加え撹拌後、グラスフィルター上に濾
取し、乾燥した。これを５０％（v/v、以下同様）酢酸
水溶液 ５０ｍｌ中に懸濁、撹拌し、ペプチドを抽出し
た後、樹脂と分離し減圧下に約５ｍｌまでに濃縮した
後、セファデックスＧ−２５（２×９０ｃｍ）のカラム
に付し５０％酢酸水で展開し１２０〜１７０ｍｌの部分
を集め溶媒を留去した。これを２Ｍ−酢酸アンモニウム
水溶液２ｍｌに溶解しさらに脱気した蒸留水を加え４０
０ｍｌに希釈した後、希アンモニア水を加えてｐＨ８と
し、室温下に空気をゆるく吹き込み酸化した。ＨＰＬＣ
で原料ペプチドピークが消失したことを確認後酢酸を加
えｐＨ４以下としてペプチドを逆相カラム（LiChroprep
RP-18、２.６×１０ｃｍ；E. MERCK）にかけ、０.１％
−トリフルオロ酢酸水と０.１％−トリフルオロ酢酸含
有５０％−アセトニトリル水溶液との間のグラジエント
溶出を行ない３０〜３５％の溶出部分を集め凍結乾燥
し、白色粉末３８ｍｇを得た。次に、この白色粉末を弱
酸性イオン交換クロマトカラム（Cellulofine C-500、
２.６×５ｃｍ；生化学工業（株））にかけ、酢酸アン
モニウム水のグラジエント溶出を行ない、０.３Ｍ前後
に溶出する画分を集め、凍結乾燥して１８.８ｍｇを得
た。さらに、得られた標品を５０％−酢酸水でセファデ
ックスＧ−２５のゲル濾過クロマトカラム（２×９０ｃ
ｍ）に付し同溶媒で溶出し、１８３〜２２５ｍｌの画分
を集め凍結乾燥し、ヒト・ペプチドｈＣＳ−１７を１
８.２４ｍｇ得た。

【０１３５】 質量分析による（Ｍ＋Ｈ）⁺ ２１５０.９４６０（計算値２１５０.９７３０) ＨＰＬＣ溶出時間 １９.３分 カラム条件 カラム：Wakosil^TM ５Ｃ１８（４.６×１００ｍｍ） 溶離液：Ａ液（０.１％ ＴＦＡ水） Ｂ液（０.１％ ＴＦＡ含有５０％アセトニトリル水）を用い Ａ液からＢ液へ直線型濃度勾配溶出（２５分） 流速：１.０ｍｌ／分

【０１３６】

【実施例４】欠失型ヒト・ペプチドｈＣＳ−１５（配列
番号：２）：

【化２】 の合成

【０１３７】１）Boc-Met-Pro-Cys(MeBzl)-Arg(Tos)-As
n-Phe-Phe-Trp(CHO)-Lys(Cl-Z)-Thr(Bzl)-Phe-Ser(Bzl)
-Ser(Bzl)-Cys(MeBzl)-Lys(Cl-Z)-OCH₂-PAM 樹脂の合成 実施例３と同様にして配列通りの全アミノ酸を樹脂に導
入し、０.４７７ｇの保護ペプチド樹脂を得た。 ２）１）で得た樹脂０.２０ｇを実施例３と同様に弗化
水素処理、空気酸化によるＳ−Ｓ結合形成、クロマト精
製を行ない、欠失型ヒト・ペプチドｈＣＳ−１５１７.
７ｍｇを得た。 質量分析による（Ｍ＋Ｈ）⁺ １８７９.７６１０（計算値１８７９.７８５０) ＨＰＬＣ溶出時間 １９.６分 カラム条件 カラム：Wakosil^TM ５Ｃ１８（４.６×１００ｍｍ） 溶離液：Ａ液（０.１％ ＴＦＡ水） Ｂ液（０.１％ ＴＦＡ含有５０％アセトニトリル水）を用い Ａ液からＢ液へ直線型濃度勾配溶出（２５分） 流速：１.０ｍｌ／分

【０１３８】

【実施例５】欠失型ヒト・ペプチドｈＣＳ−１３（配列
番号：３）：

【化３】 の合成

【０１３９】１）Boc-Cys(MeBzl)-Arg(Tos)-Asn-Phe-Ph
e-Trp(CHO)-Lys(Cl-Z)-Thr(Bzl)-Phe-Ser(Bzl)-Ser(Bz
l)-Cys(MeBzl)-Lys(Cl-Z)-OCH₂-PAM 樹脂の合成 実施例３と同様にして配列通りの全アミノ酸を樹脂に導
入し、０.６０３ｇの保護ペプチド樹脂を得た。 ２）１）で得た樹脂０.１４ｇを実施例３と同様に弗化
水素処理、空気酸化によるＳ−Ｓ結合形成、クロマト精
製を行ない、欠失型ヒト・ペプチドｈＣＳ−１３１７.
０ｍｇを得た。 質量分析による（Ｍ＋Ｈ）⁺ １６５１.５８３０（計算値１６５１.７５１０) ＨＰＬＣ溶出時間 １９.０分 カラム条件 カラム：Wakosil^TM ５Ｃ１８（４.６×１００ｍｍ） 溶離液：Ａ液（０.１％ ＴＦＡ水） Ｂ液（０.１％ ＴＦＡ含有５０％アセトニトリル水）を用い Ａ液からＢ液へ直線型濃度勾配溶出（２５分） 流速：１.０ｍｌ／分

【０１４０】

【実施例６】欠失型ヒト・des Lys¹⁷ ｈＣＳ−１７（配
列番号：３５）：

【化４】 の合成 実施例３のBoc-Lys(Cl-Z)-OCH₂-PAM 樹脂をBoc-Cys(MeB
zl)-OCH₂-PAM 樹脂に変え、同様の操作を行ない合成す
ることができる。

【０１４１】

【実施例７】欠失型ヒト・ペプチドdes Lys¹⁵ ｈＣＳ−
１５（配列番号：３６）：

【化５】 の合成 実施例４で用いるBoc-Lys(Cl-Z)-OCH₂-PAM 樹脂をBoc-C
ys(MeBzl)-OCH₂-PAM樹脂に変え、同様の操作を行ない合
成することができる。

【０１４２】

【実施例８】欠失型ヒト・ペプチドdes Lys¹³ ｈＣＳ−
１３（配列番号：３７）：

【化６】 の合成 実施例５で用いるBoc-Lys(Cl-Z)-OCH₂-PAM 樹脂をBoc-C
ys(MeBzl)-OCH₂-PAM樹脂に変え、同様の操作を行ない合
成することができる。

【０１４３】

【実施例９】ｐｈＣＳＰ６のノーザンハイブリダイゼー
ション ｐｈＣＳＰ６にコードされるヒト新規生理活性ペプチド
のヒトの臓器での発現をｍＲＮＡレベルで検出するた
め、ノーザンハイブリダイゼーションを行なった。ノー
ザンブロット用のフィルターは、Human Multiple tissu
e Northern Blot,II, Human Brain Multiple tissue No
rthern Blot II, III, （ＣＬ ７７６０−１，ＣＬ ７
７５９−１，ＣＬ ７７５５−１，ＣＬ ７７５０−１）
クローンテック社を用いた。ハイブリダイゼーション
は、上に述べたフィルターとｐｈＣＳＰ６をＥｃｏＲＩ
で切断して切り出される約３００ｂｐの断片を回収後、
ランダムプライムＤＮＡラベリングキット（アマシャム
社）を用いて〔³²Ｐ〕ｄＣＴＰ（デュポン社）を取り込
ませることによって標識したプローブを、Express Hybr
i solution（クローンテック社）中で６８℃、１時間イ
ンキュベートすることによって行なった。フィルターの
洗浄は０.１×ＳＳＣ，０.１％ ＳＤＳで５０℃にて行
ない、風乾後１８日間−８０℃でＸ線フィルム（ＸＡＲ
５、コダック）に感光させた。その結果を〔図６〕に示
す。また、Internal controlとしてＧ３ＰＤＨ（グリセ
ルアルデヒド−３−リン酸デヒドロゲナーゼ）のノーザ
ンブロットの結果を〔図６〕に示す。これらの結果か
ら、ｐｈＣＳＰ６がコードする新規生理活性ペプチド遺
伝子は、精巣、尾状核、脊髄、大脳皮質、扁頭核、海馬
などで発現していることが分かった。

【０１４４】

【実施例１０】〔¹²⁵Ｉ〕−ソマトスタチン結合阻害率
の測定 参考例６で調製した膜画分をアッセイバッファーで希釈
して、３μｇ／ｍｌとし、チューブに１７３μｌずつ分
注した。ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解した
化合物２μｌと、２００ｐＭの放射標識化ソマトスタチ
ン（〔¹²⁵Ｉ〕−ソマトスタチン：アマシャム社製）２
５μｌとを同時に添加した。最大結合量を測定するため
に、ＤＭＳＯ ２μｌと、２００ｐＭの〔¹²⁵Ｉ〕−ソマ
トスタチン ２５μｌとを添加した反応液を調製した。
また、非特異的結合を測定するために、ＤＭＳＯに溶解
した１００μＭのソマトスタチン ２μｌと、２００ｐ
Ｍの〔¹²⁵Ｉ〕−ソマトスタチン ２５μｌとを添加した
反応液も同時に調製した。２５℃で６０分反応させた
後、ポリエチレンイミン処理したワットマングラスフィ
ルター（ＧＦ−Ｂ）を用いて反応液を吸引濾過した。濾
過後、γ−カウンターを用いて濾紙上に残った
〔¹²⁵Ｉ〕−ソマトスタチンの放射活性を測定した。式 ＰＢＭ＝（Ｂ−ＮＳＢ）／（Ｂ₀−ＮＳＢ）×１００ （ＰＢＭ：Percent Maximun Binding、Ｂ：検体を加え
たときの放射活性、Ｂ₀：最大結合放射活性、ＮＳＢ：
非特異結合放射活性）によって各被検物質の結合阻害率
（％）を求めた。また、被検物質の濃度変化させて阻害
率を求め、５０％結合を阻害する被検物質の濃度（ＩＣ
₅₀値）をＨｉｌｌプロットより算出した。上記の方法で
ｈＣＳ−１３、ｈＣＳ−１５、ｈＣＳ−１７を測定した
ときのＩＣ₅₀値を〔表１〕に示す。〔表１〕から、ｈＣ
Ｓ−１３、ｈＣＳ−１５、ｈＣＳ−１７はＳＳＴＲ１、
ＳＳＴＲ２、ＳＳＴＲ３、ＳＳＴＲ４およびＳＳＴＲ５
のすべてのレセプターに対して〔¹²⁵Ｉ〕−ソマトスタ
チンの結合を強く阻害することが明らかになった。

【０１４５】

【表１】

【０１４６】

【実施例１１】ｈＣＳ１５、ｈＣＳ１７のヒトソマトス
タチンレセプター発現ＣＨＯ細胞に対するｃＡＭＰ蓄積
阻害作用 細胞内サイクリック アデノシン３',５'−１リン酸（ｃ
ＡＭＰ）蓄積量を測定するため、参考例２（３）、参考
例３（３）、参考例４（３）および参考例５（３）に記
載のヒト・ソマトスタチンレセプター発現細胞株、それ
ぞれＳＳＴＲ２−ＨＳ５−９、ＳＳＴＲ３−１５−１
９、ＳＳＴＲ４−１−２およびＳＳＴＲ５−３２−４を
２４穴プレートにコンフルエントになるまで増殖させ
た。該細胞を１ｍｌの培地Ａ〔ダルベッコ改変イーグル
培地（ＤＭＥＭ）、２０ｍＭ ２−[４−(２−ヒドロキ
シエチル)−１−ピペラジニル〕エタンスルホン酸（Ｈ
ＥＰＥＳ）（ｐＨ７.５）、０.２％ ＢＳＡ、０.２ｍＭ
３−イソブチル−１−メチルキサンチン（ＩＢＭ
Ｘ）〕で２回洗浄した後、４００μｌの培地Ａを各穴に
加え、３７℃で１時間インキュベートした。５０μｌの
ｈＣＳ−１５またはｈＣＳ−１７溶液（いずれも終濃度
の１０倍濃度になるように培地Ａで希釈したもの）と５
０μｌのフォルスコリン溶液（終濃度１０μＭ）を各穴
に加え、３７℃で３０分間インキュベートした。細胞を
１ｍｌの培地Ａで２回洗浄した後、５００μｌの培地Ａ
と１００μｌの２０％過塩素酸水溶液を各穴に加え、２
０分間４℃で静置することにより細胞を溶解した。この
溶解液をエッペンドルフチューブに移し、遠心分離（１
５,０００ｒｐｍ、１０分間）し、上清液５００μｌを
別のエッペンドルフチューブに移して１.５Ｍ 塩化カリ
ウムを含む６０ｍＭ ＨＥＰＥＳ水溶液で中和した。こ
の抽出液中に含まれるｃＡＭＰの量をアマシャム社製の
キット（ｃＡＭＰ ＥＩＡシステム）を用いて測定し
た。その結果、各サブタイプのヒトソマトスタチンレセ
プターを単独で発現させたＣＨＯ細胞におけるフォルス
コリン（１０μＭ）刺激時の細胞内ｃＡＭＰ蓄積量は、
ｈＣＳ−１５およびｈＣＳ−１７の添加濃度に依存して
減少した。そのときのＥＤ₅₀値を〔表２〕に示す。この
ように、ｈＣＳ１５およびｈＣＳ−１７は、ＳＳＴＲ
２、ＳＳＴＲ３、ＳＳＴＲ４、およびＳＳＴＲ５発現Ｃ
ＨＯ細胞のアデニレートシクラーゼ活性を阻害すること
から、これらのレセプターに対し、アゴニスト作用を有
することが明らかとなった。

【０１４７】

【表２】

【０１４８】

【実施例１２】ｈＣＳ−１７のラット脳波に対する作用 雄性Ｊｃｌ：Ｗｉｓｔａｒ（体重約３００〜３５０ｇ）
を用い、ペントバルビタール（５０ｍｇ／ｋｇ、ｉ.
ｐ.）麻酔下、ラット用脳定位固定装置に頭部を固定し
た。ラットの頭蓋に穿孔し、大脳皮質脳波誘導電極用ネ
ジ電極、海馬脳波誘導用ステンレススチール製双極電極
（Ａ：−２.６，Ｌ：２.５，Ｈ：３.５ ，Pellegrino a
nd Cushman Brain Atlas）を埋め込んだ。また、筋電図
記録用の双極性ステンレススチール線を背側の頸部筋肉
層に埋め込んだ。すべての電極は頭蓋上のソケットに接
続し歯科用セメントを用いて固定した。側脳室内薬液注
入のために、２７ゲージのステンレススチール製ガイド
カニューレを先端の座標がＡ：−０.４，Ｌ：１.７，
Ｈ：１.７になるように埋め込みを脳電図用電極と共に
歯科用セメントで固定した。ガイドカニューレはスタイ
レットを挿入し、組織や血液による管腔の閉塞を阻止し
た。術後の回復をまって実験に供した。ラットは実験環
境に１時間以上馴化させたのち、リン酸緩衝生理食塩液
（ＰＢＳ）に溶解したｈＣＳ−１７またはＰＢＳを３０
ゲージの注入用カニューレを用いて側脳室内投与した。
脳波測定は薬物投与後４時間にわたり行なった。投与容
量は５μｌとし、注入量は０.１または１ｎｍｏｌとし
た。対照群には同様にＰＢＳを投与した。すべての電気
情報はポリグラフを通して脳波解析装置を用いてアナロ
グおよびデジタル表示した。

【０１４９】睡眠覚醒判定は、得られたポリグラムを目
で判読すると同時に周波数解析およびパワー解析より次
の４段階に分類した。 （１）Wakefulness（覚醒）：大脳皮質脳波はα波（低
振幅速波）を、海馬脳波はθ波（律動波）を示し、筋電
図活性が高い時を示す。 （２）ＳＷＳ１（浅徐波睡眠）およびＳＷＳ２（深徐波
睡眠）：ラットは睡眠時の姿勢をとり、大脳皮質にδ波
（紡錘波）または高振幅徐波が発現し、海馬脳波につい
ても高振幅徐波が認められ、筋電図活性が低下（ＳＷＳ
１）または消失（ＳＷＳ２）している時を示す。 （３）ＰＳ（逆説睡眠）：大脳皮質にα波（低振幅速
波）が、海馬脳波にθ波（律動波）が認められ、筋電図
活性が消失している時を示す。一群５〜６匹のラットを
用い、同一ラットにｈＣＳ−１７およびＰＢＳの注入を
行ない、睡眠覚醒に及ぼす作用を検討した。有意差の検
定にはPaired t-testを用いた。ｈＣＳ−１７ １ｎｍｏ
ｌ注入直後の典型的な脳波パターンを〔図７〕に示す。
ｈＣＳ−１７投与直後から皮質および海馬における脳波
の平坦化が認められ、３〜５分間持続した。この脳波平
坦化は０.１ｎｍｏｌ投与群では５例中２例に、１ｎｍ
ｏｌ投与群では６例中４例に認められた。４時間の総測
定時間の各脳波パターンにおける占有時間を〔図８〕〜
〔図１１〕に示す。ｈＣＳ−１７ ０.１ｎｍｏｌ投与群
は覚醒時間においてはＰＢＳ投与対照群と差はなかった
が、ＳＷＳ１の減少およびＳＷＳ２の増加傾向を示し
た。また、ＰＳは有意に減少した。１ｎｍｏｌ投与群で
は有意なＳＷＳ１の減少とＳＷＳ２の増加およびＰＳの
減少が認められた。以上の結果から、本発明の成熟体ペ
プチドｈＣＳ−１７が睡眠調節作用を有することが分か
った。

【０１５０】

【発明の効果】本発明のペプチド、その前駆体またはそ
れらの塩は、（ｉ）成長ホルモンの分泌抑制作用、（i
i）甲状腺刺激ホルモン、プロラクチンなどの下垂体ホ
ルモンの分泌抑制作用、（iii）ガストリン、インシュ
リンなどの消化管ホルモンの分泌抑制作用、（iv）神経
伝達作用、（ｖ）細胞増殖作用、（vi）レム睡眠の誘発
物質であるアセチルコリン作用の抑制作用、（vii）平
滑筋の収縮の抑制作用などのソマトスタチン様活性もし
くはコルスタチン様活性を有している。したがって、本
発明のペプチド、その前駆体またはそれらの塩は、例え
ば、ホルモン産生腫瘍、先端巨大症、巨人症、痴呆症、
糖尿病、胃潰瘍などの治療・予防剤、ホルモン分泌抑制
剤、腫瘍増殖抑制剤、神経活動もしくは睡眠の調節剤な
どの医薬として有用である。本発明のペプチドまたはそ
の前駆体をコードするＤＮＡは、例えば、ホルモン産生
腫瘍、先端巨大症、巨人症、痴呆症、糖尿病、胃潰瘍な
どの遺伝子治療・予防剤、ホルモン分泌抑制剤、腫瘍増
殖抑制剤、神経活動もしくは睡眠の調節剤などの医薬と
して有用である。さらに、本発明のＤＮＡは、例えば、
ホルモン産生腫瘍、先端巨大症、巨人症、痴呆症、糖尿
病、胃潰瘍などの疾病の遺伝子診断剤として有用であ
る。本発明のペプチド、その前駆体またはそれらの塩に
対する抗体は、本発明のペプチド、その前駆体またはそ
れらの塩を特異的に認識することができるので、被検液
中の本発明のペプチド等の定量などに使用することがで
きる。本発明のペプチド、その前駆体またはそれらの塩
は、本発明のペプチド、その前駆体またはそれらの塩と
レセプターとの結合性を変化させる化合物またはその塩
をスクリーニングするための試薬として有用である。該
スクリーニングで得られる化合物またはその塩は、種々
の疾病の治療・予防剤などの医薬として有用である。

【０１５１】

【配列表】

【配列番号：１】 配列の長さ：１７ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Asp Arg Met Pro Cys Arg Asn Phe Phe Trp Lys Thr Phe Ser Ser Cys 1 5 10 15 Lys

【０１５２】

【配列番号：２】 配列の長さ：１５ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Met Pro Cys Arg Asn Phe Phe Trp Lys Thr Phe Ser Ser Cys Lys 1 5 10 15

【０１５３】

【配列番号：３】 配列の長さ：１３ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Cys Arg Asn Phe Phe Trp Lys Thr Phe Ser Ser Cys Lys 1 5 10

【０１５４】

【配列番号：４】 配列の長さ：２９ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Gln Glu Gly Ala Pro Pro Gln Gln Ser Ala Arg Arg Asp Arg Met Pro 1 5 10 15 Cys Arg Asn Phe Phe Trp Lys Thr Phe Ser Ser Cys Lys 20 25

【０１５５】

【配列番号：５】 配列の長さ：６２ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Ser Ser Leu Leu Thr Phe Leu Ala Trp Trp Phe Glu Trp Thr Ser Gln 1 5 10 15 Ala Ser Ala Gly Pro Leu Ile Gly Glu Glu Ala Arg Glu Val Ala Arg 20 25 30 Arg Gln Glu Gly Ala Pro Pro Gln Gln Ser Ala Arg Arg Asp Arg Met 35 40 45 Pro Cys Arg Asn Phe Phe Trp Lys Thr Phe Ser Ser Cys Lys 50 55 60

【０１５６】

【配列番号：６】 配列の長さ：８５ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Leu Pro Leu Glu Gly Gly Pro Thr Gly Arg Asp Ser Glu His Met Gln 1 5 10 15 Glu Ala Ala Gly Ile Arg Lys Ser Ser Leu Leu Thr Phe Leu Ala Trp 20 25 30 Trp Phe Glu Trp Thr Ser Gln Ala Ser Ala Gly Pro Leu Ile Gly Glu 35 40 45 Glu Ala Arg Glu Val Ala Arg Arg Gln Glu Gly Ala Pro Pro Gln Gln 50 55 60 Ser Ala Arg Arg Asp Arg Met Pro Cys Arg Asn Phe Phe Trp Lys Thr 65 70 75 80 Phe Ser Ser Cys Lys 85

【０１５７】

【配列番号：７】 配列の長さ：１０５ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Met Pro Leu Ser Pro Gly Leu Leu Leu Leu Leu Leu Ser Gly Ala Thr 1 5 10 15 Ala Thr Ala Ala Leu Pro Leu Glu Gly Gly Pro Thr Gly Arg Asp Ser 20 25 30 Glu His Met Gln Glu Ala Ala Gly Ile Arg Lys Ser Ser Leu Leu Thr 35 40 45 Phe Leu Ala Trp Trp Phe Glu Trp Thr Ser Gln Ala Ser Ala Gly Pro 50 55 60 Leu Ile Gly Glu Glu Ala Arg Glu Val Ala Arg Arg Gln Glu Gly Ala 65 70 75 80 Pro Pro Gln Gln Ser Ala Arg Arg Asp Arg Met Pro Cys Arg Asn Phe 85 90 95 Phe Trp Lys Thr Phe Ser Ser Cys Lys 100 105

【０１５８】

【配列番号：８】 配列の長さ：１２ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド

【０１５９】

【配列番号：９】 配列の長さ：３３ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Ser Ser Leu Leu Thr Phe Leu Ala Trp Trp Phe Glu Trp Thr Ser Gln 1 5 10 15 Ala Ser Ala Gly Pro Leu Ile Gly Glu Glu Ala Arg Glu Val Ala Arg 20 25 30 Arg

【０１６０】

【配列番号：１０】 配列の長さ：２３ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Leu Pro Leu Glu Gly Gly Pro Thr Gly Arg Asp Ser Glu His Met Gln 1 5 10 15 Glu Ala Ala Gly Ile Arg Lys 20

【０１６１】

【配列番号：１１】 配列の長さ：２０ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Met Pro Leu Ser Pro Gly Leu Leu Leu Leu Leu Leu Ser Gly Ala Thr 1 5 10 15 Ala Thr Ala Ala 20

【０１６２】

【配列番号：１２】 配列の長さ：８８ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Met Pro Leu Ser Pro Gly Leu Leu Leu Leu Leu Leu Ser Gly Ala Thr 1 5 10 15 Ala Thr Ala Ala Leu Pro Leu Glu Gly Gly Pro Thr Gly Arg Asp Ser 20 25 30 Glu His Met Gln Glu Ala Ala Gly Ile Arg Lys Ser Ser Leu Leu Thr 35 40 45 Phe Leu Ala Trp Trp Phe Glu Trp Thr Ser Gln Ala Ser Ala Gly Pro 50 55 60 Leu Ile Gly Glu Glu Ala Arg Glu Val Ala Arg Arg Gln Glu Gly Ala 65 70 75 80 Pro Pro Gln Gln Ser Ala Arg Arg 85

【０１６３】

【配列番号：１３】 配列の長さ：５１ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 GACAGAATGC CCTGCAGGAA CTTCTTCTGG AAGACCTTCT CCTCCTGCAA A 51

【０１６４】

【配列番号：１４】 配列の長さ：４５ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 ATGCCCTGCA GGAACTTCTT CTGGAAGACC TTCTCCTCCT GCAAA 45

【０１６５】

【配列番号：１５】 配列の長さ：３９ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 TGCAGGAACT TCTTCTGGAA GACCTTCTCC TCCTGCAAA 39

【０１６６】

【配列番号：１６】 配列の長さ：８７ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 CAGGAAGGCG CACCCCCCCA GCAATCCGCG CGCCGGGACA GAATGCCCTG CAGGAACTTC 60 TTCTGGAAGA CCTTCTCCTC CTGCAAA 87

【０１６７】

【配列番号：１７】 配列の長さ：８７ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 CAGGAAGGCG CACCCCCCCA GCAATCTGCG CGCCGGGACA GAATGCCCTG CAGGAACTTC 60 TTCTGGAAGA CCTTCTCCTC CTGCAAA 87

【０１６８】

【配列番号：１８】 配列の長さ： 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 ＡＧＣＡＧＣＣＴＣＣ ＴＧＡＣＴＴＴＣＣＴ ＣＧＣＴＴＧＧＴＧＧ ＴＴＴ
ＧＡＧＴＧＧＡ ＣＣＴＣＣＣＡＧＧＣ ＣＡＧＴＧＣＣＧＧＧ ６０ ＣＣＣＣＴＣＡＴＡＧ ＧＡＧＡＧＧＡＡＧＣ ＴＣＧＧＧＡＧＧＴＧ ＧＣＣ
ＡＧＧＣＧＧＣ ＡＧＧＡＡＧＧＣＧＣ ＡＣＣＣＣＣＣＣＡＧ １２０ ＣＡＡＴＣＣＧＣＧＣ ＧＣＣＧＧＧＡＣＡＧ ＡＡＴＧＣＣＣＴＧＣ ＡＧＧ
ＡＡＣＴＴＣＴ ＴＣＴＧＧＡＡＧＡＣ ＣＴＴＣＴＣＣＴＣＣ １８０ ＴＧＣＡＡＡ
１８６

【０１６９】

【配列番号：１９】 配列の長さ： 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 ＡＧＣＡＧＣＣＴＣＣ ＴＧＡＣＴＴＴＣＣＴ ＣＧＣＴＴＧＧＴＧＧ ＴＴＴ
ＧＡＧＴＧＧＡ ＣＣＴＣＣＣＡＧＧＣ ＣＡＧＴＧＣＣＧＧＧ ６０ ＣＣＣＣＴＣＡＴＡＧ ＧＡＧＡＧＧＡＡＧＣ ＴＣＧＧＧＡＧＧＴＧ ＧＣＣ
ＡＧＧＣＧＧＣ ＡＧＧＡＡＧＧＣＧＣ ＡＣＣＣＣＣＣＣＡＧ １２０ ＣＡＡＴＣＴＧＣＧＣ ＧＣＣＧＧＧＡＣＡＧ ＡＡＴＧＣＣＣＴＧＣ ＡＧＧ
ＡＡＣＴＴＣＴ ＴＣＴＧＧＡＡＧＡＣ ＣＴＴＣＴＣＣＴＣＣ １８０ ＴＧＣＡＡＡ
１８６

【０１７０】

【配列番号：２０】 配列の長さ：２５５ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 CTGCCCCTGG AGGGTGGCCC CACCGGCCGA GACAGCGAGC ATATGCAGGA AGCGGCAGGA 60 ATAAGGAAAA GCAGCCTCCT GACTTTCCTC GCTTGGTGGT TTGAGTGGAC CTCCCAGGCC 120 AGTGCCGGGC CCCTCATAGG AGAGGAAGCT CGGGAGGTGG CCAGGCGGCA GGAAGGCGCA 180 CCCCCCCAGC AATCCGCGCG CCGGGACAGA ATGCCCTGCA GGAACTTCTT CTGGAAGACC 240 TTCTCCTCCT GCAAA 255

【０１７１】

【配列番号：２１】 配列の長さ：２５５ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 CTGCCCCTGG AGGGTGGCCC CACCGGCCGA GACAGCGAGC ATATGCAGGA AGCGGCAGGA 60 ATAAGGAAAA GCAGCCTCCT GACTTTCCTC GCTTGGTGGT TTGAGTGGAC CTCCCAGGCC 120 AGTGCCGGGC CCCTCATAGG AGAGGAAGCT CGGGAGGTGG CCAGGCGGCA GGAAGGCGCA 180 CCCCCCCAGC AATCTGCGCG CCGGGACAGA ATGCCCTGCA GGAACTTCTT CTGGAAGACC 240 TTCTCCTCCT GCAAA 255

【０１７２】

【配列番号：２２】 配列の長さ：３１５ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 ATGCCATTGT CCCCCGGCCT CCTGCTGCTG CTGCTCTCCG GGGCCACGGC CACCGCTGCC 60 CTGCCCCTGG AGGGTGGCCC CACCGGCCGA GACAGCGAGC ATATGCAGGA AGCGGCAGGA 120 ATAAGGAAAA GCAGCCTCCT GACTTTCCTC GCTTGGTGGT TTGAGTGGAC CTCCCAGGCC 180 AGTGCCGGGC CCCTCATAGG AGAGGAAGCT CGGGAGGTGG CCAGGCGGCA GGAAGGCGCA 240 CCCCCCCAGC AATCCGCGCG CCGGGACAGA ATGCCCTGCA GGAACTTCTT CTGGAAGACC 300 TTCTCCTCCT GCAAA 315

【０１７３】

【配列番号：２３】 配列の長さ：３１５ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 ATGCCATTGT CCCCCGGCCT CCTGCTGCTG CTGCTCTCCG GGGCCACGGC CACCGCTGCC 60 CTGCCCCTGG AGGGTGGCCC CACCGGCCGA GACAGCGAGC ATATGCAGGA AGCGGCAGGA 120 ATAAGGAAAA GCAGCCTCCT GACTTTCCTC GCTTGGTGGT TTGAGTGGAC CTCCCAGGCC 180 AGTGCCGGGC CCCTCATAGG AGAGGAAGCT CGGGAGGTGG CCAGGCGGCA GGAAGGCGCA 240 CCCCCCCAGC AATCTGCGCG CCGGGACAGA ATGCCCTGCA GGAACTTCTT CTGGAAGACC 300 TTCTCCTCCT GCAAA 315

【０１７４】

【配列番号：２４】 配列の長さ：３６ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 CAGGAAGGCG CACCCCCCCA GCAATCCGCG CGCCGG 36

【０１７５】

【配列番号：２５】 配列の長さ：３６ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 CAGGAAGGCG CACCCCCCCA GCAATCTGCG CGCCGG 36

【０１７６】

【配列番号：２６】 配列の長さ：９９ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 AGCAGCCTCC TGACTTTCCT CGCTTGGTGG TTTGAGTGGA CCTCCCAGGC CAGTGCCGGG 60 CCCCTCATAG GAGAGGAAGC TCGGGAGGTG GCCAGGCGG 99

【０１７７】

【配列番号：２７】 配列の長さ：６９ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 CTGCCCCTGG AGGGTGGCCC CACCGGCCGA GACAGCGAGC ATATGCAGGA AGCGGCAGGA 60 ATAAGGAAA 69

【０１７８】

【配列番号：２８】 配列の長さ：６０ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 ATGCCATTGT CCCCCGGCCT CCTGCTGCTG CTGCTCTCCG GGGCCACGGC CACCGCTGCC 60

【０１７９】

【配列番号：２９】 配列の長さ：２６４ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 ATGCCATTGT CCCCCGGCCT CCTGCTGCTG CTGCTCTCCG GGGCCACGGC CACCGCTGCC 60 CTGCCCCTGG AGGGTGGCCC CACCGGCCGA GACAGCGAGC ATATGCAGGA AGCGGCAGGA 120 ATAAGGAAAA GCAGCCTCCT GACTTTCCTC GCTTGGTGGT TTGAGTGGAC CTCCCAGGCC 180 AGTGCCGGGC CCCTCATAGG AGAGGAAGCT CGGGAGGTGG CCAGGCGGCA GGAAGGCGCA 240 CCCCCCCAGC AATCCGCGCG CCGG 264

【０１８０】

【配列番号：３０】 配列の長さ：２６４ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 ATGCCATTGT CCCCCGGCCT CCTGCTGCTG CTGCTCTCCG GGGCCACGGC CACCGCTGCC 60 CTGCCCCTGG AGGGTGGCCC CACCGGCCGA GACAGCGAGC ATATGCAGGA AGCGGCAGGA 120 ATAAGGAAAA GCAGCCTCCT GACTTTCCTC GCTTGGTGGT TTGAGTGGAC CTCCCAGGCC 180 AGTGCCGGGC CCCTCATAGG AGAGGAAGCT CGGGAGGTGG CCAGGCGGCA GGAAGGCGCA 240 CCCCCCCAGC AATCTGCGCG CCGG 264

【０１８１】

【配列番号：３１】 配列の長さ：１４ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Pro Cys Lys Asn Phe Phe Trp Lys Thr Phe Ser Ser Cys Lys 1 5 10

【０１８２】

【配列番号：３２】 配列の長さ：１４ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Ala Gly Cys Lys Asn Phe Phe Trp Lys Thr Phe Thr Ser Cys 1 5 10

【０１８３】

【配列番号：３３】 配列の長さ：４２ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 CCCTGCAAGA ACTTCTTCTG GAAAACCTTC TCCTCGTGCA AG 42

【０１８４】

【配列番号：３４】 配列の長さ：４２ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 GCTGGCTGCA AGAACTTCTT CTGGAAGACA TTCACATCCT GT 42

【０１８５】

【配列番号：３５】 配列の長さ：１６ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Asp Arg Met Pro Cys Arg Asn Phe Phe Trp Lys Thr Phe Ser Ser Cys 1 5 10 15

【０１８６】

【配列番号：３６】 配列の長さ：１４ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Met Pro Cys Arg Asn Phe Phe Trp Lys Thr Phe Ser Ser Cys 1 5 10

【０１８７】

【配列番号：３７】 配列の長さ：１２ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド

【０１８８】

【配列番号：３８】 配列の長さ：１７ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Ａｓｐ Ａｒｇ Ｍｅｔ Ｐｒｏ Ｃｙｓ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｐｈｅ Ｐｈｅ
Ｔｒｐ Ｌｙｓ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｃｙｓ １ ５
１０ １５ Ｌｙｓ

【０１８９】

【配列番号：３９】 配列の長さ：１５ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Met Pro Cys Lys Asn Phe Phe Trp Lys Thr Phe Ser Ser Cys Lys 1 5 10 15

【０１９０】

【配列番号：４０】 配列の長さ：１３ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Ｃｙｓ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｐｈｅ Ｐｈｅ Ｔｒｐ Ｌｙｓ Ｔｈｒ Ｐｈｅ
Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｃｙｓ Ｌｙｓ １ ５
１０

【０１９１】

【配列番号：４１】 配列の長さ：１６ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Ａｓｐ Ａｒｇ Ｍｅｔ Ｐｒｏ Ｃｙｓ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｐｈｅ Ｐｈｅ
Ｔｒｐ Ｌｙｓ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｃｙｓ １ ５
１０ １５

【０１９２】

【配列番号：４２】 配列の長さ：１４ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Met Pro Cys Lys Asn Phe Phe Trp Lys Thr Phe Ser Ser Cys 1 5 10

【０１９３】

【配列番号：４３】 配列の長さ：１２ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド

【０１９４】

【配列番号：４４】 配列の長さ：１７ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Ａｓｐ Ａｒｇ Ｍｅｔ Ｐｒｏ Ｃｙｓ Ａｒｇ Ａｓｎ Ｐｈｅ Ｐｈｅ
Ｔｒｐ Ｌｙｓ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｃｙｓ Ｌｙｓ １ ５
１０ １５

【０１９５】

【配列番号：４５】 配列の長さ：１５ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Met Pro Cys Arg Asn Phe Phe Trp Lys Thr Phe Thr Ser Cys Lys 1 5 10

【０１９６】

【配列番号：４６】 配列の長さ：１３ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Ｃｙｓ Ａｒｇ Ａｓｎ Ｐｈｅ Ｐｈｅ Ｔｒｐ Ｌｙｓ Ｔｈｒ Ｐｈｅ
Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｃｙｓ Ｌｙｓ １ ５
１０

【０１９７】

【配列番号：４７】 配列の長さ：１６ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Ａｓｐ Ａｒｇ Ｍｅｔ Ｐｒｏ Ｃｙｓ Ａｒｇ Ａｓｎ Ｐｈｅ Ｐｈｅ
Ｔｒｐ Ｌｙｓ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｃｙｓ １ ５
１０ １５

【０１９８】

【配列番号：４８】 配列の長さ：１４ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Met Pro Cys Arg Asn Phe Phe Trp Lys Thr Phe Thr Ser Cys 1 5 10

【０１９９】

【配列番号：４９】 配列の長さ：１２ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド

【０２００】

【配列番号：５０】 配列の長さ：１７ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Ａｓｐ Ａｒｇ Ｍｅｔ Ｐｒｏ Ｃｙｓ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｐｈｅ Ｐｈｅ
Ｔｒｐ Ｌｙｓ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｃｙｓ Ｌｙｓ １ ５
１０ １５

【０２０１】

【配列番号：５１】 配列の長さ：１５ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Met Pro Cys Lys Asn Phe Phe Trp Lys Thr Phe Thr Ser Cys Lys 1 5 10

【０２０２】

【配列番号：５２】 配列の長さ：１３ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Ｃｙｓ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｐｈｅ Ｐｈｅ Ｔｒｐ Ｌｙｓ Ｔｈｒ Ｐｈｅ
Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｃｙｓ Ｌｙｓ １ ５
１０

【０２０３】

【配列番号：５３】 配列の長さ：１６ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Ａｓｐ Ａｒｇ Ｍｅｔ Ｐｒｏ Ｃｙｓ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｐｈｅ Ｐｈｅ
Ｔｒｐ Ｌｙｓ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｃｙｓ １ ５
１０ １５

【０２０４】

【配列番号：５４】 配列の長さ：１４ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Met Pro Cys Lys Asn Phe Phe Trp Lys Thr Phe Thr Ser Cys 1 5 10

【０２０５】

【配列番号：５５】 配列の長さ：１２ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド

【０２０６】

【配列番号：５６】 配列の長さ：２９ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Ｇｌｎ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｐｒｏ Ｐｒｏ Ｇｌｎ Ｇｌｎ Ｓｅｒ
Ａｌａ Ａｒｇ Ａｒｇ Ａｓｐ Ａｒｇ Ｍｅｔ Ｐｒｏ １ ５
１０ １５ Ｃｙｓ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｐｈｅ Ｐｈｅ Ｔｒｐ Ｌｙｓ Ｔｈｒ Ｐｈｅ
Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｃｙｓ Ｌｙｓ ２０ ２５

【０２０７】

【配列番号：５７】 配列の長さ：２９ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Gln Glu Gly Ala Pro Pro Gln Gln Ser Ala Arg Arg Asp Arg Met Pro 1 5 10 15 Cys Arg Asn Phe Phe Trp Lys Thr Phe Thr Ser Cys Lys 20 25

【０２０８】

【配列番号：５８】 配列の長さ：２９ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Gln Glu Gly Ala Pro Pro Gln Gln Ser Ala Arg Arg Asp Arg Met Pro 1 5 10 15 Cys Lys Asn Phe Phe Trp Lys Thr Phe Thr Ser Cys Lys 20 25

【０２０９】

【配列番号：５９】 配列の長さ：２８ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Gln Glu Gly Ala Pro Pro Gln Gln Ser Ala Arg Arg Asp Arg Met Pro 1 5 10 15 Cys Lys Asn Phe Phe Trp Lys Thr Phe Ser Ser Cys 20 25

【０２１０】

【配列番号：６０】 配列の長さ：２８ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Gln Glu Gly Ala Pro Pro Gln Gln Ser Ala Arg Arg Asp Arg Met Pro 1 5 10 15 Cys Arg Asn Phe Phe Trp Lys Thr Phe Thr Ser Cys 20 25

【０２１１】

【配列番号：６１】 配列の長さ：２８ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Gln Glu Gly Ala Pro Pro Gln Gln Ser Ala Arg Arg Asp Arg Met Pro 1 5 10 15 Cys Lys Asn Phe Phe Trp Lys Thr Phe Thr Ser Cys 20 25

【０２１２】

【配列番号：６２】 配列の長さ：４８ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 GACAGAATGC CCTGCAGGAA CTTCTTCTGG AAGACCTTCT CCTCCTGC 48

【０２１３】

【配列番号：６３】 配列の長さ：４２ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 ATGCCCTGCA GGAACTTCTT CTGGAAGACC TTCTCCTCCT GC 42

【０２１４】

【配列番号：６４】 配列の長さ：３６ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 TGCAGGAACT TCTTCTGGAA GACCTTCTCC TCCTGC 36

【０２１５】

【配列番号：６５】 配列の長さ：５１ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 GACAGAATGC CCTGCAARAA CTTCTTCTGG AAGACCTTCT CCTCCTGCAA A 51

【０２１６】

【配列番号：６６】 配列の長さ：４５ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 ATGCCCTGCA ARAACTTCTT CTGGAAGACC TTCTCCTCCT GCAAA 45

【０２１７】

【配列番号：６７】 配列の長さ：３９ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 TGCAARAACT TCTTCTGGAA GACCTTCTCC TCCTGCAAA 39

【０２１８】

【配列番号：６８】 配列の長さ：４８ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 GACAGAATGC CCTGCAARAA CTTCTTCTGG AAGACCTTCT CCTCCTGCAA A 48

【０２１９】

【配列番号：６９】 配列の長さ：４２ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 ATGCCCTGCA ARAACTTCTT CTGGAAGACC TTCTCCTCCT GCAAA 42

【０２２０】

【配列番号：７０】 配列の長さ：３６ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 TGCAARAACT TCTTCTGGAA GACCTTCTCC TCCTGCAAA 36

【０２２１】

【配列番号：７１】 配列の長さ：５１ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 GACAGAATGC CCTGCAGGAA CTTCTTCTGG AAGACCTTCT CCACNTGCAA A 51

【０２２２】

【配列番号：７２】 配列の長さ：４５ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 ATGCCCTGCA GGAACTTCTT CTGGAAGACC TTCACNTCCT GCAAA 45

【０２２３】

【配列番号：７３】 配列の長さ：３９ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 ＴＧＣＡＧＧＡＡＣＴ ＴＣＴＴＣＴＧＧＡＡ ＧＡＣＣＴＴＣＡＣＮ ＴＣＣ
ＴＧＣＡＡＡ ３９

【０２２４】

【配列番号：７４】 配列の長さ：４８ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 ＧＡＣＡＧＡＡＴＧＣ ＣＣＴＧＣＡＧＧＡＡ ＣＴＴＣＴＴＣＴＧＧ ＡＡＧ
ＡＣＣＴＴＣＴ ＣＣＡＣＮＴＧＣ ４８

【０２２５】

【配列番号：７５】 配列の長さ：４２ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 ATGCCCTGCA GGAACTTCTT CTGGAAGACC TTCACNTCCT GC 42

【０２２６】

【配列番号：７６】 配列の長さ：３６ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 ＴＧＣＡＧＧＡＡＣＴ ＴＣＴＴＣＴＧＧＡＡ ＧＡＣＣＴＴＣＡＣＮ ＴＣＣ
ＴＧＣ ３６

【０２２７】

【配列番号：７７】 配列の長さ：５１ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 ＧＡＣＡＧＡＡＴＧＣ ＣＣＴＧＣＡＡＲＡＡ ＣＴＴＣＴＴＣＴＧＧ ＡＡＧ
ＡＣＣＴＴＣＴ ＣＣＡＣＮＴＧＣＡＡ Ａ ５１

【０２２８】

【配列番号：７８】 配列の長さ：４５ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 ATGCCCTGCA ARAACTTCTT CTGGAAGACC TTCACNTCCT GCAAA 45

【０２２９】

【配列番号：７９】 配列の長さ：３９ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 ＴＧＣＡＡＲＡＡＣＴ ＴＣＴＴＣＴＧＧＡＡ ＧＡＣＣＴＴＣＡＣＮ ＴＣＣ
ＴＧＣＡＡＡ ３９

【０２３０】

【配列番号：８０】 配列の長さ：４８ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 ＧＡＣＡＧＡＡＴＧＣ ＣＣＴＧＣＡＡＲＡＡ ＣＴＴＣＴＴＣＴＧＧ ＡＡＧ
ＡＣＣＴＴＣＴ ＣＣＡＣＮＴＧＣＡＡ Ａ ４８

【０２３１】

【配列番号：８１】 配列の長さ：４２ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 ATGCCCTGCA ARAACTTCTT CTGGAAGACC TTCACNTCCT GCAAA 42

【０２３２】

【配列番号：８２】 配列の長さ：３６ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 ＴＧＣＡＡＲＡＡＣＴ ＴＣＴＴＣＴＧＧＡＡ ＧＡＣＣＴＴＣＡＣＮ ＴＣＣ
ＴＧＣ ３６

【０２３３】

【配列番号：８３】 配列の長さ：８７ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 ＣＡＧＧＡＡＧＧＣＧ ＣＡＣＣＣＣＣＣＣＡ ＧＣＡＡＴＣＣＧＣＧ ＣＧＣ
ＣＧＧＧＡＣＡ ＧＡＡＴＧＣＣＣＴＧ ＣＡＡＲＡＡＣＴＴＣ ６０ ＴＴＣＴＧＧＡＡＧＡ ＣＣＴＴＣＴＣＣＴＣ ＣＴＧＣＡＡＡ
８７

【０２３４】

【配列番号：８４】 配列の長さ：８７ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 CAGGAAGGCG CACCCCCCCA GCAATCTGCG CGCCGGGACA GAATGCCCTG CAARAACTTC 60 TTCTGGAAGA CCTTCTCCTC CTGCAAA 87

【０２３５】

【配列番号：８５】 配列の長さ：８７ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 CAGGAAGGCG CACCCCCCCA GCAATCCGCG CGCCGGGACA GAATGCCCTG CAGGAACTTC 60 TTCTGGAAGA CCTTCACNTC CTGCAAA 87

【０２３６】

【配列番号：８６】 配列の長さ：８７ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 CAGGAAGGCG CACCCCCCCA GCAATCTGCG CGCCGGGACA GAATGCCCTG CAGGAACTTC 60 TTCTGGAAGA CCTTCACNTC CTGCAAA 87

【０２３７】

【配列番号：８７】 配列の長さ：８７ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 CAGGAAGGCG CACCCCCCCA GCAATCCGCG CGCCGGGACA GAATGCCCTG CAARAACTTC 60 TTCTGGAAGA CCTTCACNTC CTGCAAA 87

【０２３８】

【配列番号：８８】 配列の長さ：８７ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 CAGGAAGGCG CACCCCCCCA GCAATCTGCG CGCCGGGACA GAATGCCCTG CAARAACTTC 60 TTCTGGAAGA CCTTCACNTC CTGCAAA 87

【０２３９】

【配列番号：８９】 配列の長さ：８４ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 CAGGAAGGCG CACCCCCCCA GCAATCCGCG CGCCGGGACA GAATGCCCTG CAARAACTTC 60 TTCTGGAAGA CCTTCTCCTC CTGC 84

【０２４０】

【配列番号：９０】 配列の長さ：８４ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 CAGGAAGGCG CACCCCCCCA GCAATCTGCG CGCCGGGACA GAATGCCCTG CAARAACTTC 60 TTCTGGAAGA CCTTCTCCTC CTGC 84

【０２４１】

【配列番号：９１】 配列の長さ：８４ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 CAGGAAGGCG CACCCCCCCA GCAATCCGCG CGCCGGGACA GAATGCCCTG CAGGAACTTC 60 TTCTGGAAGA CCTTCACNTC CTGC 84

【０２４２】

【配列番号：９２】 配列の長さ：８４ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 CAGGAAGGCG CACCCCCCCA GCAATCTGCG CGCCGGGACA GAATGCCCTG CAGGAACTTC 60 TTCTGGAAGA CCTTCACNTC CTGC 84

【０２４３】

【配列番号：９３】 配列の長さ：８４ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 CAGGAAGGCG CACCCCCCCA GCAATCCGCG CGCCGGGACA GAATGCCCTG CAARAACTTC 60 TTCTGGAAGA CCTTCACNTC CTGC 84

【０２４４】

【配列番号：９４】 配列の長さ：８４ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 CAGGAAGGCG CACCCCCCCA GCAATCTGCG CGCCGGGACA GAATGCCCTG CAARAACTTC 60 TTCTGGAAGA CCTTCACNTC CTGC 84

【０２４５】

【配列番号：９５】 配列の長さ：３０ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：合成ＤＮＡ 配列 GGTCGACCTC AGCTAGGATG TTCCCCAATG 30

【０２４６】

【配列番号：９６】 配列の長さ：２８ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：合成ＤＮＡ 配列 GGTCGACCCG GGCTCAGAGC GTCGTGAT 28

【０２４７】

【配列番号：９７】 配列の長さ：２８ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：合成ＤＮＡ 配列 GGTCGACACC ATGGACATGG CGGATGAG

【０２４８】

【配列番号：９８】 配列の長さ：２６ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：合成ＤＮＡ 配列 GGTCGACAGT TCAGATACTG GTTTGG

【０２４９】

【配列番号：９９】 配列の長さ：３０ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：合成ＤＮＡ 配列 GGTCGACCTC AACCATGGAC ATGCTTCATC 30

【０２５０】

【配列番号：１００】 配列の長さ：２９ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：合成ＤＮＡ 配列 ＧＧＴＣＧＡＣＴＴＴ ＣＣＣＣＡＧＧＣＣＣ ＣＴＡ
ＣＡＧＧＴＡ ２９

【０２５１】

【配列番号：１０１】 配列の長さ：２８ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：合成ＤＮＡ 配列 ＧＧＣＴＣＧＡＧＴＣ ＡＣＣＡＴＧＡＧＣＧ ＣＣＣ
ＣＣＴＣＧ ２８

【０２５２】

【配列番号：１０２】 配列の長さ：２７ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：合成ＤＮＡ 配列 GGGCTCGAGC TCCTCAGAAG GTGGTGG 27

【０２５３】

【配列番号：１０３】 配列の長さ：２８ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：合成ＤＮＡ 配列 ＧＧＴＣＧＡＣＣＡＣ ＣＡＴＧＧＡＧＣＣＣ ＣＴＧ
ＴＴＣＣＣ ２８

【０２５４】

【配列番号：１０４】 配列の長さ：２６ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：合成ＤＮＡ 配列 ＣＣＧＴＣＧＡＣＡＣ ＴＣＴＣＡＣＡＧＣＴ ＴＧＣ
ＴＧＧ ２６

【０２５５】

【配列番号：１０５】 配列の長さ：２８ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：合成ＤＮＡ 配列 ACAAGATGCC ATTGTCCCCC GGCCTCCT 28

【０２５６】

【配列番号：１０６】 配列の長さ：２７ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：合成ＤＮＡ 配列 ＴＴＣＡＧＧＴＣＴＧ ＴＡＡＴＴＡＡＡＣＴ ＴＧＣ
ＧＴＧＡ ２７

【０２５７】

【図面の簡単な説明】

【図１】実施例２で得られた本発明のペプチドｈＣＳ−
１７およびその前駆体をコードするＤＮＡの塩基配列を
示す。

【図２】実施例２で得られた本発明のペプチドｈＣＳ−
１７およびその前駆体をコードするＤＮＡの塩基配列、
およびそれから推定されるアミノ酸配列を示す。

【図３】本発明のペプチドｈＣＳ−１７およびその前駆
体をコードするＤＮＡの塩基配列、およびそれから推定
されるアミノ酸配列を示す。図２の第８５番目のアミノ
酸Ｓｅｒをコードするコドンが、図２ではＴＣＣである
のに対して、図３ではＴＣＴである。

【図４】図２に示される本発明の前駆体のアミノ酸配列
の疎水性プロット分析の結果を示す。

【図５】図２に示される本発明の前駆体（ｐｈＣＳＰ
６）と、ラットコルチスタチン（r cortistatin；Ｕ５
１９１９）およびラットソマトスタチン（r somatoatat
in；Ｊ００７８８）とのアミノ酸配列を比較した結果を
示す。

【図６】本発明のペプチドｈＣＳ−１７をコードするｍ
ＲＮＡのヒトの各組織における発現量をノーザンハイブ
リダイゼーションで調べた結果を示す。Testisは精巣
を、Cerebral Cortexは大脳皮質を、Spinal Cordは脊髄
を、Amygdalaは扁頭核を、Caudate Nucleusは尾状核
を、Hippocampusは海馬を示す。左側の数字（ｋｂ）は
ＲＮＡ分子量マーカーの大きさを示す。上段はプラスミ
ドｐｈＣＳＰ６に含まれる本発明のペプチドｈＣＳ−１
７をコードするＤＮＡをプローブとして用いた結果を示
す。下段はグリセルアルデヒド３−リン酸デヒドロゲナ
ーゼ（Ｇ３ＰＤＨ）をコードするＤＮＡをプローブとし
て用いた結果を示す。

【図７】ラットの脳波に対する本発明のペプチドｈＣＳ
−１７の効果を調べた結果を示す。ＰＢＳはリン酸緩衝
生理食塩液を投与した時の脳波のパターンを、ｈＣＳ−
１７は本発明のペプチドｈＣＳ−１７ １ｎｍｏｌをラ
ットに投与した時の脳波のパターを示す。ＣＣはCerebr
al Cortex（大脳皮質）の脳波を示す。ＨＩＰはHippoca
mpus（海馬）の脳波を示す。ＥＭＧはElectromyogram
（筋電図）を示す。ＰＲＥは投与前を示す。ｍｉｎは分
を示す。

【図８】本発明のペプチドｈＣＳ−１７をラットに投与
した後、４時間の総測定時間の覚醒の脳波パターンの占
有時間を示す。縦軸は総測定時間に対する占有％を示
す。横軸のVehicleはＰＢＳを投与した時の結果を、ｈ
ＣＳ−１７は本発明の成熟ペプチドを投与した時の結果
を、数字は投与濃度を示す。

【図９】本発明のペプチドｈＣＳ−１７をラットに投与
した後、４時間の総測定時間の浅徐波睡眠の脳波パター
ンの占有時間を示す。縦軸は総測定時間に対する占有％
を示す。横軸のVehicleはＰＢＳを投与した時の結果
を、ｈＣＳ−１７は本発明の成熟ペプチドを投与した時
の結果を、数字は投与濃度を示す。

【図１０】本発明のペプチドｈＣＳ−１７をラットに投
与した後、４時間の総測定時間の深徐波睡眠の脳波パタ
ーンの占有時間を示す。縦軸は総測定時間に対する占有
％を示す。横軸のVehicleはＰＢＳを投与した時の結果
を、ｈＣＳ−１７は本発明の成熟ペプチドを投与した時
の結果を、数字は投与濃度を示す。

【図１１】本発明のペプチドｈＣＳ−１７をラットに投
与した後、４時間の総測定時間の逆説睡眠の脳波パター
ンの占有時間を示す。縦軸は総測定時間に対する占有％
を示す。横軸のVehicleはＰＢＳを投与した時の結果
を、ｈＣＳ−１７は本発明の成熟ペプチドを投与した時
の結果を、数字は投与濃度を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ Ａ６１Ｋ 48/00 ＡＣＬ Ｃ０７Ｈ 21/04 Ｂ ＡＤＰ Ｃ０７Ｋ 14/655 Ｃ０７Ｈ 21/04 Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ０７Ｋ 14/655 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ Ｃ１２Ｎ 1/21 Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＤＵ Ｃ１２Ｐ 21/02 37/43 ＡＡＭ //(Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｒ 1:19） (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:19）

Claims (29)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】配列番号：１で表わされるアミノ酸配列ま
   たはそのアミノ酸配列において１〜５個のアミノ酸が欠
   失、置換もしくは挿入したアミノ酸配列（ただし、配列
   番号：３１または配列番号：３２で表わされるアミノ酸
   配列を除く）を含有するペプチド、その前駆体またはそ
   れらの塩。
2. 【請求項２】配列番号：１で表わされるアミノ酸配列ま
   たはそのアミノ酸配列中の１〜５個のアミノ酸が欠失も
   しくは置換したアミノ酸配列を含有する請求項１記載の
   ペプチドまたはその前駆体。
3. 【請求項３】配列番号：１で表わされるアミノ酸配列を
   有する請求項１記載のペプチド。
4. 【請求項４】配列番号：２で表わされるアミノ酸配列を
   有する請求項１記載のペプチド。
5. 【請求項５】配列番号：３で表わされるアミノ酸配列を
   有する請求項１記載のペプチド。
6. 【請求項６】配列番号：３５〜配列番号：５５のいずれ
   かの配列番号で表わされるアミノ酸配列を有する請求項
   １記載のペプチド。
7. 【請求項７】配列番号：４、配列番号：５、配列番号：
   ６または配列番号：７で表わされるアミノ酸配列を有す
   る請求項１記載の前駆体。
8. 【請求項８】コルチスタチン様活性またはソマトスタチ
   ン様活性を有する請求項１記載のペプチドまたはその前
   駆体。
9. 【請求項９】請求項１記載のペプチドまたは前駆体をコ
   ードする塩基配列を有するＤＮＡを含有するＤＮＡ。
10. 【請求項１０】配列番号：１３で表わされる塩基配列を
    有する請求項９記載のＤＮＡ。
11. 【請求項１１】配列番号：１４で表わされる塩基配列を
    有する請求項９記載のＤＮＡ。
12. 【請求項１２】配列番号：１５で表わされる塩基配列を
    有する請求項９記載のＤＮＡ。
13. 【請求項１３】配列番号：１６〜配列番号：２３のいず
    れかの配列番号で表わされる塩基配列を有する請求項９
    記載のＤＮＡ。
14. 【請求項１４】配列番号：６２〜配列番号：８２のいず
    れかの配列番号で表わされる塩基配列を有する請求項９
    記載のＤＮＡ。
15. 【請求項１５】請求項９記載のＤＮＡを含有する組換え
    ベクター。
16. 【請求項１６】請求項１５記載の組換えベクターを保持
    する形質転換体。
17. 【請求項１７】請求項１６記載の形質転換体を培養し、
    請求項１記載のペプチド、その前駆体またはそれらの塩
    を生成、蓄積せしめ、これを採取することを特徴とする
    請求項１記載のペプチド、その前駆体またはそれらの塩
    の製造方法。
18. 【請求項１８】請求項１記載のペプチド、その前駆体ま
    たはそれらの塩を含有してなる医薬。
19. 【請求項１９】請求項９記載のＤＮＡを含有してなる医
    薬。
20. 【請求項２０】ホルモン産生腫瘍，先端巨大症，巨人
    症，痴呆症もしくは胃潰瘍の治療・予防剤、ホルモン分
    泌抑制剤、腫瘍増殖抑制剤または神経活動もしくは睡眠
    の調節剤である請求項１８または１９記載の医薬。
21. 【請求項２１】請求項１記載のペプチド、その前駆体ま
    たはそれらの塩に対する抗体。
22. 【請求項２２】請求項１記載のペプチド、その前駆体ま
    たはそれらの塩を用いることを特徴とする、請求項１記
    載のペプチド、その前駆体またはそれらの塩と該ペプチ
    ド、その前駆体またはそれらの塩が結合するレセプタ
    ー、その部分ペプチドまたはそれらの塩との結合性を変
    化させる化合物またはその塩のスクリーニング方法。
23. 【請求項２３】請求項１記載のペプチド、その前駆体ま
    たはそれらの塩を含有することを特徴とする請求項１記
    載のペプチド、その前駆体またはそれらの塩と請求項１
    記載のペプチド，その前駆体またはそれらの塩に対する
    レセプター、その部分ペプチドまたはそれらの塩との結
    合性を変化させる化合物またはその塩のスクリーニング
    用キット。
24. 【請求項２４】請求項２２記載のスクリーニング方法ま
    たは請求項２３記載のスクリーニング用キットを用いて
    得られる、請求項１記載のペプチド、その前駆体または
    それらの塩と請求項１記載のペプチド，その前駆体また
    はそれらの塩に対するレセプター、その部分ペプチドま
    たはそれらの塩との結合性を変化させる化合物またはそ
    の塩。
25. 【請求項２５】請求項２２記載のスクリーニング方法ま
    たは請求項２３記載のスクリーニング用キットを用いて
    得られる請求項１記載のペプチド、その前駆体またはそ
    れらの塩に対するレセプターに対するアゴニストを含有
    してなる医薬。
26. 【請求項２６】ホルモン産生腫瘍，先端巨大症，巨人
    症，痴呆症もしくは胃潰瘍の治療・予防剤、ホルモン分
    泌抑制剤、腫瘍増殖抑制剤または神経活動もしくは睡眠
    の調節剤である請求項２５記載の医薬。
27. 【請求項２７】請求項２２記載のスクリーニング方法ま
    たは請求項２３記載のスクリーニング用キットを用いて
    得られる請求項１記載のペプチド、その前駆体またはそ
    れらの塩に対するレセプターに対するアンタゴニストを
    含有してなる医薬。
28. 【請求項２８】小人症，乳汁分泌不全もしくは糖尿病の
    治療・予防剤、ホルモン分泌促進剤または消化管の機能
    調節剤である請求項２７記載の医薬。
29. 【請求項２９】アミノ末端側を構成するアミノ酸または
    ペプチドとカルボキシ末端側を構成するアミノ酸または
    ペプチドとを縮合させ、所望により、分子内にジスルフ
    ィド結合を形成させることを特徴とする請求項１記載の
    ペプチド、その前駆体またはそれらの塩の製造法。