JPH10137557A - フィルター装置および生体微細組織の分離・回収方法 - Google Patents

フィルター装置および生体微細組織の分離・回収方法

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JPH10137557A
JPH10137557A JP9057115A JP5711597A JPH10137557A JP H10137557 A JPH10137557 A JP H10137557A JP 9057115 A JP9057115 A JP 9057115A JP 5711597 A JP5711597 A JP 5711597A JP H10137557 A JPH10137557 A JP H10137557A
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    • A61M2202/0413—Blood
    • A61M2202/0439—White blood cells; Leucocytes

Abstract

(57)【要約】 【課題】操作が簡単で、目的とする生体微細組織を、品
質、特性等を低下せずに、高い収率で分離・回収するこ
と。 【解決手段】フィルター装置１Ｂは、ハウジング２と、
ハウジング２内に設置されたフィルター部材５と、その
両面に設置された流路確保部材６ａ、６ｂと、空孔率変
更手段であるネジ山部３２、ネジ谷部４４とで構成され
ている。ハウジング２は、第１のポート３１を有する第
１ハウジング部材３と、第２のポート４１を有する第２
ハウジング部材４とで構成されている。フィルター部材
５は、複数の高分子多孔質膜５１を積層してなり、好ま
しくはそれらが積層方向に物理的または化学的特性に勾
配を有する。前記空孔率変更手段の操作により、フィル
ター部材５は、圧縮状態と非圧縮状態とに設定され、圧
縮状態では目的細胞を捕捉可能な第１の空孔率となり、
非圧縮状態では第１の空孔率より大きい第２の空孔率と
なる。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、例えば細胞のよう
な生体微細組織を含む被処理液中から目的とする生体微
細組織を分離・回収するためのフィルター装置および生
体微細組織の分離・回収方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】細胞の培養や保存、または細胞を用いた
治療（骨髄、幹細胞移植、養子免疫療法、遺伝子治療
等）のように、生体外で細胞を扱う際に、例えばリンパ
球のような目的とする細胞（以下「目的細胞」と言う）
を他の成分から分離（または濃縮）することが行われて
いる。
【０００３】細胞の培養や細胞を用いた治療において
は、目的細胞以外の細胞や不要な液性成分の除去、細胞
の老廃物や産生物質の除去が、また、保存した細胞を使
用する際には、凍結保存時に使用される凍害保護液のよ
うな、細胞や生体に有害な物質の除去が非常に重要な課
題となっている。このため、種々の細胞分離やそれに応
じた回収の方法が提案されている。
【０００４】この細胞分離の方法としては、大別して、
細胞の比重差を利用した沈降法、遠心分離法、密度勾
配遠心法、細胞の表面荷電を利用した電気的分離法、
細胞表面に存在する抗原に対する抗体の特異性を利用
したアフィニティ分離法、細胞の大きさと変形能の違
いを利用した濾過分離法等が挙げられる。
【０００５】しかしながら、〜の方法には、それぞ
れ、次のような欠点がある。における細胞の密度を利
用した沈降法では、目的細胞を重力で分離するため、分
離に長時間を要し、分離効率が極めて低く、また、純度
（収率）も低いという問題がある。
【０００６】この分離効率を遠心力を利用して向上させ
た方法が遠心分離法であり、大量の細胞を処理する方法
として一般的に使用されている。しかしながら、遠心分
離法では、細胞の無菌的な処理や回収のために大がかり
で高額な装置を必要とし、また、細胞は密度の差が小さ
いことから、分離できる細胞の種類に制限がある。
【０００７】分離能を上げるためには、比重を厳密に調
整した比重媒体による密度勾配遠心法が用いられる。し
かしながら、この方法では、同時に大量の細胞が処理で
きず、密度差により形成された界面から注意深く目的細
胞を回収する必要があり、また、不要な細胞成分の除去
操作と不要な液性成分の除去操作とを別々の条件で行わ
ざるを得ないこと、クリーンベンチを使用しないと回収
操作の無菌性を保証できないこと等、操作が非常に煩雑
である。
【０００８】また、の方法では、遠心条件等によって
は、目的細胞に与えるダメージ（損傷）が大きい場合が
ある。
【０００９】の電気的分離法では、細胞間の表面荷電
の差が小さいため、分離効率に限界があり、また、大量
の細胞を迅速に処理するには不適当である。さらに、こ
の方法では、電場を印加することにより目的細胞にダメ
ージを与えることがある。
【００１０】のアフィニティ分離法は、分離方法とし
ては最も特異性が高いが、この方法で分離した細胞を回
収するためには、結合した抗体分子を解離させる酵素処
理が必要であり、酵素処理による細胞への障害の発生、
操作の煩雑さ、抗体の活性維持等の技術的問題に加え、
高価な抗体を使用するので、コストの上昇を招き、大量
の細胞を迅速に処理するには不適当である。
【００１１】の濾過分離法は、目的細胞を含む細胞懸
濁液をフィルター部材に通過させて目的細胞を濾別し、
次いで、フィルター部材に前記と逆方向から液体を通過
させてフィルター部材に捕捉されている目的細胞をフィ
ルター部材から除去し、回収する方法であり、目的細胞
を不要な細胞や液性成分から大量に迅速に分離する方法
として適しているが、目的細胞の回収率が低いという欠
点がある。この欠点は、フィルター部材の細孔の径が一
連の処理作業過程において一定であることに由来する。
【００１２】すなわち、回収時の目的細胞の離脱性を考
慮して、フィルター部材の孔径を比較的大きく設定する
と、濾過の際にフィルター部材に捕捉されずに通過する
目的細胞の量が増え、逆に、フィルター部材の孔径を比
較的小さく設定すると、濾過の際にフィルター部材を通
過する目的細胞の量は減少し、捕捉量は増えるが、目的
細胞の細孔に対する接着性が増大し、回収時において、
フィルター部材からの離脱性が低下し、高い収率で回収
することができず、また、不要な細胞の除去率も低下す
る。
【００１３】このようなことから、目的細胞の捕捉性と
離脱性とを両立し得る適度な孔径のフィルター部材を目
的に応じ選択して使用する必要があった。
【００１４】なお、濾過分離法においては、濾過の際に
細胞懸濁液の供給量を下げることにより、フィルター部
材を通過する目的細胞の量がある程度減少し、捕捉率を
増加させることもできるが、この場合には、単位時間当
たりの処理量が減少するので、大量、迅速処理に適する
という濾過分離法の利点が損なわれてしまう。
【００１５】また、目的細胞の回収の際に、回収のため
の液体の供給量を上げることにより、フィルター部材に
捕捉されている目的細胞の離脱性を向上させることも可
能であるが、この場合には、目的細胞が受けるダメージ
が大きくなり、回収された目的細胞の特性、品質が低下
する。
【００１６】このように、従来の方法には、目的細胞を
不要成分と分離する手段と、分離した細胞を回収する手
段とに、それぞれ一長一短があり、目的や要求レベルに
応じた方法を選択し、または組み合わせて行われてい
る。
【００１７】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、上記従来技
術の欠点、特に濾過分離法における欠点を解消するもの
であり、その目的は、簡便に、無菌的に処理することが
でき、大量処理に適し、目的とする生体微細組織を、品
質、特性等を低下せずに、高い収率で分離・回収するこ
とができるフィルター装置および生体微細組織の分離・
回収方法を提供することにある。
【００１８】
【課題を解決するための手段】このような目的は、下記
（１）〜（30）の本発明により達成される。
【００１９】（１） 第１のポートと第２のポートとを
有するハウジングと、前記ハウジング内に設置された多
孔質体よりなるフィルター部材とを有し、前記フィルタ
ー部材の空孔率を２以上の異なる空孔率に設定し得るよ
う構成されていることを特徴とするフィルター装置。
【００２０】（２） 第１のポートと第２のポートとを
有するハウジングと、前記ハウジング内を前記第１のポ
ートに連通する空間と前記第２のポートに連通する空間
とに区画するよう前記ハウジング内に設置された、多孔
質体よりなるフィルター部材と、前記フィルター部材の
空孔率を、少なくとも目的とする生体微細組織が捕捉可
能な第１の空孔率と、前記第１の空孔率より大きい第２
の空孔率とに設定可能な空孔率変更手段とを有すること
を特徴とするフィルター装置。
【００２１】（３） 前記第１の空孔率に対する前記
第２の空孔率の比率が、１．０５〜３倍である上記
（２）に記載のフィルター装置。
【００２２】（４） 前記フィルター部材は、通液方向
に物理的または化学的特性に勾配を有するものである上
記（１）ないし（３）のいずれかに記載のフィルター装
置。
【００２３】（５） 前記フィルター部材は、複数の膜
状多孔質体の積層体で構成され、各多孔質体のうちの全
部または一部が、物理的または化学的特性に勾配を有す
る上記（１）ないし（４）のいずれかに記載のフィルタ
ー装置。
【００２４】（６） 前記物理的または化学的特性の勾
配は、多孔質体の孔径の変化である上記（４）または
（５）に記載のフィルター装置。
【００２５】（７） 前記物理的または化学的特性の勾
配は、多孔質体の空孔率の変化である上記（４）または
（５）に記載のフィルター装置。
【００２６】（８） 前記物理的または化学的特性の勾
配は、多孔質体の親水性の変化である上記（４）または
（５）に記載のフィルター装置。
【００２７】（９） 前記物理的または化学的特性の勾
配は、多孔質体のゼータ電位の変化である上記（４）ま
たは（５）に記載のフィルター装置。
【００２８】（10） 前記フィルター部材は、弾性変形
可能なものであり、前記空孔率の設定は、前記フィルタ
ー部材の圧縮によりその空孔率を減少させ、前記圧縮の
解除または緩和によりその空孔率を増大させるようにし
て行う上記（１）ないし（９）のいずれかに記載のフィ
ルター装置。
【００２９】（11） 前記フィルター部材は、弾性変形
可能なものであり、前記空孔率の設定は、前記フィルタ
ー部材の延伸によりその空孔率を増大させ、前記延伸の
解除または緩和によりその空孔率を減少させるようにし
て行う上記（１）ないし（９）のいずれかに記載のフィ
ルター装置。
【００３０】（12） 前記フィルター部材は、空孔率の
増減と、孔径の増減とが対応するものである上記（１）
ないし（11）のいずれかに記載のフィルター装置。
【００３１】（13） 前記空孔率の設定の変更は、前記
ハウジングの容積の変更を伴って行われる上記（１）な
いし（12）のいずれかに記載のフィルター装置。
【００３２】（14） 前記ハウジングは、第１ハウジン
グ部材と、前記第１ハウジング部材に対し液密に移動可
能な第２ハウジング部材とを有し、前記第１ハウジング
部材に対し前記第２ハウジング部材が相対的に移動する
ことにより前記フィルター部材に変形を与え、その空孔
率を変更するよう構成されている上記（１）ないし（1
3）のいずれかに記載のフィルター装置。
【００３３】（15） 前記第１ハウジング部材、前記第
２ハウジング部材間の液密性を保持する少なくとも１つ
のシール部材が設置されている上記（14）に記載のフィ
ルター装置。
【００３４】（16） 前記第１のポートおよび／または
前記第２のポートから流入した液体の前記フィルター部
材への流路を確保する流路確保部材を有する上記（１）
ないし（15）のいずれかに記載のフィルター装置。
【００３５】（17） 空孔率が変更可能な多孔質体より
なるフィルター部材を用いて目的とする生体微細組織の
分離・回収を行う方法であって、前記フィルター部材の
空孔率を前記生体微細組織が捕捉可能な第１の空孔率に
設定した状態で、前記フィルター部材により前記生体微
細組織の濾過・分離を行い、前記フィルター部材の空孔
率を前記第１の空孔率より大きい第２の空孔率に設定し
た状態で、前記フィルター部材に捕捉された前記生体微
細組織の回収を行うことを特徴とする生体微細組織の分
離・回収方法。
【００３６】（18） 第１のポートと第２のポートとを
有するハウジング内に、空孔率が変更可能な多孔質体よ
りなるフィルター部材が設置されたフィルター装置を用
いて、目的とする生体微細組織の分離・回収を行う方法
であって、前記フィルター部材の空孔率を前記生体微細
組織が捕捉可能な第１の空孔率に設定した状態で、前記
生体微細組織を含む被処理液を前記第１のポートより供
給して、前記フィルター部材により前記生体微細組織の
濾過・分離を行い、その後、前記フィルター部材の空孔
率を前記第１の空孔率より大きい第２の空孔率に設定し
た状態で、前記生体微細組織を回収するための液体を前
記第２のポートより供給して、前記フィルター部材に捕
捉された前記生体微細組織の回収を行うことを特徴とす
る生体微細組織の分離・回収方法。
【００３７】（19） 第１のポートと第２のポートとを
有するハウジング内に、空孔率が変更可能な多孔質体よ
りなるフィルター部材が設置されたフィルター装置を用
いて、目的とする生体微細組織の分離・回収を行う方法
であって、前記フィルター部材の空孔率を前記生体微細
組織が捕捉可能な第１の空孔率に設定した状態で、前記
生体微細組織を含む被処理液を前記第１のポートより供
給して、前記フィルター部材により前記生体微細組織の
濾過・分離を行い、次いで、洗浄液を前記第１のポート
より供給して、前記フィルター部材を洗浄し、その後、
前記フィルター部材の空孔率を前記第１の空孔率より大
きい第２の空孔率に設定した状態で、前記生体微細組織
を回収するための液体を前記第２のポートより供給し
て、前記フィルター部材に捕捉された前記生体微細組織
の回収を行うことを特徴とする生体微細組織の分離・回
収方法。
【００３８】（20） 前記フィルター部材の洗浄は、前
記フィルター部材の空孔率を前記第１の空孔率以上、前
記第２の空孔率未満に設定した状態で行われる上記（1
9）に記載の生体微細組織の分離・回収方法。
【００３９】（21） 前記フィルター部材の洗浄は、前
記フィルター部材の空孔率を前記第１の空孔率に維持し
た状態で行われる上記（19）に記載の生体微細組織の分
離・回収方法。
【００４０】（22） 前記第１の空孔率に対する前記第
２の空孔率の比率が、１．０５〜３倍である上記（17）
ないし（21）のいずれかに記載の生体微細組織の分離・
回収方法。
【００４１】（23） 前記フィルター部材は、複数の膜
状多孔質体の積層体で構成されている上記（17）ないし
（22）のいずれかに記載の生体微細組織の分離・回収方
法。
【００４２】（24） 前記フィルター部材は、通液方向
に物理的または化学的特性に勾配を有するものである上
記（17）ないし（23）のいずれかに記載の生体微細組織
の分離・回収方法。
【００４３】（25） 前記物理的または化学的特性の勾
配は、多孔質体の孔径の変化である上記（24）に記載の
生体微細組織の分離・回収方法。
【００４４】（26） 前記物理的または化学的特性の勾
配は、多孔質体の空孔率の変化である上記（24）に記載
の生体微細組織の分離・回収方法。
【００４５】（27） 前記物理的または化学的特性の勾
配は、多孔質体の親水性の変化である上記（24）に記載
の生体微細組織の分離・回収方法。
【００４６】（28） 前記物理的または化学的特性の勾
配は、多孔質体のゼータ電位の変化である上記（24）に
記載の生体微細組織の分離・回収方法。
【００４７】（29） 前記フィルター部材は、空孔率の
増減と、孔径の増減とが対応するものである上記（17）
ないし（28）のいずれかに記載の生体微細組織の分離・
回収方法。
【００４８】（30） 前記フィルター装置は、前記第１
のポートおよび／または前記第２のポートから流入した
液体の前記フィルター部材への流路を確保する流路確保
部材を有する上記（18）ないし（21）のいずれかに記載
の生体微細組織の分離・回収方法。
【００４９】
【発明の実施の形態】本発明は、目的とする生体微細組
織（以下「細胞」で代表する）を、血液、血液成分、リ
ンパ液、尿、胆汁等の体液や、保存液、培養液、洗浄
液、凍害保護液、その他目的細胞以外の成分（細胞等）
を含む液体（被処理液）から分離、回収、または分離、
洗浄、回収するのに適用される。
【００５０】本発明では、目的細胞を濾別（捕捉）する
フィルター部材として、多孔質体、特に高分子多孔質体
を用いる。さらには、通液方向（過濾過方向）に物理的
または化学的な特性変化を有する高分子多孔質体を用い
る。また、フィルター部材としては、弾性変形可能なも
の、すなわち、圧縮または延伸に対する復元力を有する
ものを用いるのが好ましい。 このようなフィルター部
材の第１の態様は、通常の状態では、所定の第２の空孔
率（第２の孔径）を有し、圧縮された状態では、該第２
の空孔率より小さい第１の空孔率（第１の孔径）を有す
る。弾性変形可能なフィルター部材の場合には、前記圧
縮を解除すると、元の状態に復元し、ほぼ第２の空孔率
（第２の孔径）に復帰する。
【００５１】また、フィルター部材の第２の態様は、通
常の状態では、所定の第１の空孔率（第１の孔径）を有
し、延伸された状態では、該第１の空孔率より大きい第
２の空孔率（第２の孔径）を有する。弾性変形可能なフ
ィルター部材の場合には、前記延伸を解除すると、元の
状態に復元し、ほぼ第１の空孔率（第１の孔径）に復帰
する。 本発明では、目的細胞の濾別（捕捉）から回収
までの一連の操作の中で、フィルター部材に圧縮または
延伸のような外力を作用させて、その空孔率の変更を行
う。
【００５２】すなわち、目的細胞の濾過時には、フィル
ター部材の空孔率を小さい値の第１の空孔率（第１の孔
径）に設定して、目的細胞の捕捉量を十分に確保し、捕
捉された目的細胞の回収時には、フィルター部材の空孔
率を大きい値の第２の空孔率（第２の孔径）に設定し
て、目的細胞の離脱を促進させ、フィルター部材上の残
存量を減少させて回収率を向上する。 また、通液方向
に物理的または化学的特性に勾配を有するフィルター部
材を用いた場合、目的細胞の濾過時には、フィルター部
材の空孔率を小さい値の第１の空孔率（第１の孔径）に
設定し、さらに、フィルター部材の有する物理的または
化学的な特性を利用して目的細胞の捕捉量を十分に確保
し、捕捉された目的細胞の回収時には、フィルター部材
の空孔率を大きい値の第２の空孔率（第２の孔径）に設
定し、さらに、フィルター部材の有する物理的または化
学的な特性を利用して目的細胞の離脱を促進させ、フィ
ルター部材上の残存量を減少させて回収率を向上する。
【００５３】これらの場合、目的細胞の濾過時と回収時
とでは、フィルター部材に対し、好ましくは液を互いに
逆方向から流す。また、目的細胞の回収に先立ち、ハウ
ジング内の洗浄、特にフィルター部材の洗浄を行って、
不要成分を除去することもでき、これにより、回収され
た目的細胞中の不要成分の除去率が向上する。 このよ
うな本発明では、簡単な操作で、細胞の損傷、失活また
は活性化を生じることなく、迅速に大量に処理すること
ができ、目的細胞の収率が格段に向上し、また、不要成
分の除去率も向上する。 以下、本発明のフィルター装
置および生体微細組織の分離・回収方法を添付図面に示
す好適実施例に基づいて詳細に説明する。
【００５４】図１は、本発明のフィルター装置の第１実
施例を示す分解斜視図、図２、図３は、それぞれ、第１
実施例のフィルター装置の使用状態を示す断面側面図、
図４は、図２に示すフィルター装置の平面図である。
【００５５】図１〜図３に示すように、本発明のフィル
ター装置１Ａは、主に、ハウジング２と、該ハウジング
２内に設置された多孔質体よりなるフィルター部材５
と、流路確保部材６ａ、６ｂと、フィルター部材５の空
孔率を設定する空孔率変更手段７とで構成されている。
【００５６】ハウジング２は、有底筒状の第１ハウジン
グ部材３と、該第１ハウジング部材３内に挿入されるほ
ぼ円柱状の第２ハウジング部材４とで構成されている。
【００５７】第１ハウジング部材３の底部には、ハウジ
ング２内に連通する第１のポート（被処理液流入口）３
１が突出形成されている。
【００５８】第２ハウジング部材４の中心部には、内腔
４２がその軸方向に貫通して形成されており、第２ハウ
ジング部材４の先端部には、内腔４２に連通する第２の
ポート（濾過済液流出口）４１が突出形成されている。
【００５９】第２ハウジング部材４の外周部には、各種
ゴムや熱可塑性エラストマー等の弾性材料よりなるシー
ルリング（シール部材）４３が設置されている。第２ハ
ウジング部材４を第１ハウジング部材３内に挿入したと
き、このシールリング４３が第１ハウジング部材３の内
周面に密着し、ハウジング２の液密性、特に無菌性を確
保する。
【００６０】第２ハウジング部材４を第１ハウジング部
材３に対し軸方向に移動する際には、シールリング４３
が第１ハウジング部材３の内周面に密着しつつ、摺動す
る。
【００６１】フィルター部材５は、複数の高分子多孔質
膜５１を積層してなるものである。各高分子多孔質膜５
１は、好ましくは弾性材料、すなわち、圧縮や延伸等の
外力に対し塑性変形を生じ難く、その外力を除去した際
に復元力を有するもので構成されている。具体的には、
例えばポリウレタン、スチレン−ブタジエンラバー、ポ
リビニルアルコール、ポリプロピレン、ポリエーテルポ
リアミド、その他各種高分子材料からなる多孔質体が挙
げられる。
【００６２】本実施例におけるフィルター部材５の各高
分子多孔質膜５１は、図２に示すように、フィルター部
材５に所定の圧縮力（外力）が作用して圧縮された状態
では、圧密化されるので、各高分子多孔質膜５１の空孔
率は、後述する第２の空孔率より低い第１の空孔率とな
る。この第１の空孔率は、目的細胞を捕捉（濾過・分
離）するのに適した空孔率とされる。
【００６３】また、図３に示すように、圧縮力（外力）
が付与されていない状態（圧縮力が解除された状態）ま
たは圧縮力が緩和された状態では、その空孔率が、捕捉
されている目的細胞を離脱させるのに適した第２の空孔
率となっている。
【００６４】この場合、第１の空孔率に対する第２の空
孔率の比率は、目的細胞の種類や大きさ等の諸条件に応
じて適宜決定されるが、通常は、１．０５〜３倍程度で
あるのが好ましく、１．１０〜２．０倍程度であるのが
より好ましい。１．０５未満であると、目的細胞の種類
や大きさ等の条件によっては、空孔率の変更による目的
細胞の収率向上効果が十分に得られない場合があり、ま
た、３倍を超えると、第１の空孔率が３３％未満とな
り、目的細胞を含む被処理液の通過性が著しく損われる
ため不適当である。
【００６５】また、フィルター部材５の圧縮状態におけ
る平均孔径を第１の孔径、フィルター部材５の圧縮力が
解除された状態における平均孔径を第２の孔径としたと
き、これら第１の孔径、第２の孔径は、目的細胞の種類
や大きさ等の諸条件に応じて適宜決定されるが、目的細
胞がリンパ球である場合には、第１の孔径は、好ましく
は５μm 未満、より好ましくは２〜４．９μm 、第２の
孔径は、好ましくは５μm 以上、より好ましくは６μm
以上とされる。
【００６６】このようなフィルター部材５は、各高分子
多孔質膜５１が同一のものでもよいが、各高分子多孔質
膜５１が物理的または化学的特性に勾配（変化）を有す
るものであること、特に、各高分子多孔質膜５１のうち
全部または一部が異なった物理的または化学的特性を有
していることが好ましい。この物理的または化学特性の
相違により、目的細胞の捕捉性および／または回収時の
離脱性が高められる。
【００６７】勾配を設ける物理的または化学的特性とし
ては、目的細胞の種類、サイズ、特性等の条件を１つの
要因として適宜決定され、それに勾配を設けることによ
りフィルター部材による目的細胞の捕捉性または回収時
の離脱性のうちの少なくとも一方が向上するようなもの
とする。
【００６８】このような勾配を持たせる例としては、平
均孔径、ゼータ電位、または親水性のうちの少なくとも
１つが通液方向に連続的または段階的変化するように高
分子多孔質膜を積層する構成が挙げられる。
【００６９】平均孔径を変化させる積層の構成として
は、第１のポート３１側から第２のポート４１側に向け
て平均孔径が小さくなってゆくように高分子多孔質膜５
１を順に積層する方法がある。
【００７０】また、ゼータ電位を変化させる積層の構成
としては、第１のポート３１側から第２のポート４１側
に向けてゼータ電位が増加、特に負から正になるように
高分子多孔質膜５１を順に積層する方法がある。
【００７１】また、親水性を変化させる積層の構成とし
ては、第１のポート３１側から第２のポート４１側に向
けて親水性が小から大になるように高分子多孔質膜５１
を順に積層する方法がある。
【００７２】これらの勾配の方向性は、これに限定され
るものではなく、目的細胞に応じて適宜変えることがで
きる。
【００７３】このようなフィルター部材５の両面には、
それぞれ、流路確保部材６ａ、６ｂが装着され、この状
態でハウジング２内に収納される。流路確保部材６ａ、
６ｂは、それぞれ、例えばシリコーン等の柔軟性を有す
る材料で構成されたリング６１と、該リング６１の内側
に挿入されたメッシュ（拡散部材）６２とで構成されて
いる。リング６１は、例えば１〜１０mm程度の厚さを有
している。
【００７４】流路確保部材６ａの設置により、そのリン
グ６１の内側に第１のポート３１に連通する空間が形成
され、第１のポート３１から流入した液体のフィルター
部材５への流路が確保され、流路確保部材６ｂの設置に
より、そのリング６１の内側に第２のポート４１に連通
する空間が形成され、第２のポート４１から流入した液
体のフィルター部材５への流路が確保される。すなわ
ち、フィルター部材５は、第１のポート３１に連通する
空間と第２のポート４１に連通する空間とを区画するよ
うハウジング２内に設置される。
【００７５】また、流路確保部材６ａ、６ｂにおいて、
リング６１の内側にメッシュ６２を設置したことによ
り、リング６１の内側空間を液体が通過する際に、その
液体がフィルター部材５の面方向に均一に分散（拡散）
され、濾過、洗浄、目的細胞の回収等の効率が向上す
る。
【００７６】図２〜図４に示すように、空孔率変更手段
７は、一対の板材７１、７２と、板材７１、７２間の離
間距離を設定する離間距離設定手段７３とで構成されて
いる。本実施例における離間距離設定手段７３は、４組
のボルト７４およびナット７５で構成されている。
【００７７】また、板材７１、７２には、各ボルト７４
の挿通孔７６が形成されている。板材７１のほぼ中央部
には、第１のポート３１が通過する開口７７が形成さ
れ、板材７２のほぼ中央部には、第２のポート４１が通
過する開口７８が形成されている。
【００７８】フィルター部材５および流路確保部材６
ａ、６ｂを装填したハウジング２を板材７１、７２間に
挿入し、板材７１、７２に４本のボルト７４を挿通する
とともにこれらのナット７５を螺合し、各ボルト７４に
対する各ナット７５の回転量により、板材７１、７２間
の離間距離を調整し、設定する。
【００７９】ハウジング２は、第１ハウジング部材３の
底面が板材７１に、第２ハウジング部材４の先端面が板
材７２にそれぞれ当接しているため、板材７１、７２間
の離間距離に応じて、第１ハウジング部材３に対する第
２ハウジング部材４の挿入深さが調節される。この挿入
深さは、フィルター部材５に作用する圧縮力に対応し、
よって、フィルター部材５の空孔率（孔径）を調節する
ことができる。
【００８０】第１ハウジング部材３に対する第２ハウジ
ング部材４の挿入深さは、ハウジング２の容積に対応し
ている。従って、フィルター部材５の空孔率（孔径）の
増減は、ハウジング２の容積の増減を伴って行われる。
これにより、フィルター部材５への必要な流路を確保し
た上で、ハウジング２内におけるデッドスペースをでき
るだけ少なくすることができ、プライミング量の低減と
ともに目的細胞の収率向上に寄与する。
【００８１】次に、フィルター装置１Ａを用いた本発明
の生体微細組織の分離・回収方法の一例について説明す
る。
【００８２】［１−Ａ］ まず、図２に示すように、空
孔率変更手段７を前述したように操作して、ハウジング
２を挟持し、第１ハウジング部材３に対する第２ハウジ
ング部材４の挿入深さ、すなわちフィルター部材５に作
用する圧縮力を所望に調節し、フィルター部材５の孔径
を、目的細胞が捕捉可能な第１の孔径に設定する。
【００８３】［２−Ａ］ 次に、第１ハウジング部材３
の第１のポート３１より、例えば血液、血液成分（例：
バフィーコート）、髄液のような目的細胞を含む細胞懸
濁液（被処理液）をハウジング２内へ供給する。細胞懸
濁液は、流路確保部材６ａのリング６１内を通過する際
に、その流れがフィルター部材５の中央部から放射状に
均一に分散され、フィルター部材５の各高分子多孔質膜
５１を通過する。この際、目的細胞は、第１の孔径に設
定された高分子多孔質膜５１の細孔を通過できずに捕捉
され、その他の成分（不要成分）は、細孔を通過し、流
路確保部材６ｂ、第２ハウジング部材４の内腔４２を順
次経て、第２のポート４１より流出する。このようにし
て、細胞懸濁液中より目的細胞が濾過・分離される。
【００８４】［３−Ａ］ 目的細胞の濾過・分離が終了
したら、洗浄液を第１のポート３１より供給して、ハウ
ジング２内、特にフィルター部材５を洗浄する。これに
より、ハウジング２の内面やフィルター部材５等に付着
している不要成分が洗い流され、第２のポート４１より
排出される。このような洗浄を行うことにより、回収さ
れた目的細胞中の不要成分の除去率が向上する。
【００８５】洗浄液としては、例えば、リン酸緩衝液、
クエン酸緩衝液、ホウ酸緩衝液等の緩衝液や培養液、凍
害保護液、体液、生理食塩水等が挙げられる。
【００８６】この洗浄工程においては、空孔率変更手段
７により、フィルター部材５の空孔率（孔径）を第１の
空孔率（第１の孔径）以上、第２の空孔率（第２の孔
径）未満に設定した状態で行われるのが好ましく、特
に、フィルター部材５の空孔率（孔径）を第１の空孔率
（第１の孔径）に維持したまま行うのが好ましい。これ
により、フィルター部材５に捕捉されている目的細胞が
洗浄液により不要成分とともに洗い流されることが防止
され、目的細胞の回収率の低下が生じない。なお、この
ような洗浄は、任意であり、省略されてもよい。
【００８７】［４−Ａ］ 次に、図３に示すように、空
孔率変更手段７を操作して、ハウジング２の挟持を解除
または緩和し、さらに、必要に応じ、第２ハウジング部
材４を第１ハウジング部材３に対し離間する方向へ摺動
させて、ハウジング２の容積を増大させる。これによ
り、フィルター部材５に作用していた圧縮力が解除また
は緩和され、フィルター部材５は、自己の復元力により
拡張し、その孔径が第２の孔径に設定される。
【００８８】［５−Ａ］ この状態で、第２のポート４
１より、目的細胞を回収するための液体を供給する。こ
の液体は、内腔４２を経た後、流路確保部材６ｂのリン
グ６１内を通過する際に、その流れがフィルター部材５
の中央部から放射状に均一に分散され、フィルター部材
５の各高分子多孔質膜５１を通過する。この際、フィル
ター部材５に捕捉されている目的細胞は、孔径が第２の
孔径に拡大されたことによって、細孔を容易に通過する
ことが可能となり、前記液体の流れに伴って、流路確保
部材６ａを経た後、第１のポート３１より流出し、回収
される。
【００８９】なお、目的細胞を回収するための液体とし
ては、前記洗浄液と同様のものを用いることができる。
【００９０】以上のような細胞の分離・回収方法によ
り、目的細胞の回収率および目的細胞以外の物質の除去
率が格段に向上する。
【００９１】図５は、本発明のフィルター装置の第２実
施例を示す分解斜視図、図６、図７は、それぞれ第２実
施例のフィルター装置の使用状態を示す断面側面図であ
る。以下、図５〜図７に示すフィルター装置１Ｂについ
て、前記フィルター装置１Ａとの相違点を中心に説明
し、同様の事項については、その説明を省略する。
【００９２】フィルター装置１Ｂは、ハウジング２と、
該ハウジング２内に設置された前記と同様のフィルター
部材５と、流路確保部材６ａ、６ｂとを有している。
【００９３】第２ハウジング部材４の外周部には、前記
と同様のシールリング（シール部材）４３が軸方向に所
定の間隔をおいて２箇所に設置されている。第２ハウジ
ング部材４を第１ハウジング部材３内に挿入したとき、
この２箇所に設けられたシールリング４３が第１ハウジ
ング部材３の内周面に密着し、ハウジング２の液密性、
特に無菌性を確保する。
【００９４】第２ハウジング部材４を第１ハウジング部
材３に対し軸方向に移動する際には、シールリング４３
が第１ハウジング部材３の内周面に密着しつつ、摺動す
る。シーリング４３が所定間隔をおいて２箇所に設置さ
れているため、この軸方向の移動によっても、フィルタ
ー部材５が収納された処理空間の無菌性は維持される。
【００９５】フィルター装置１Ｂにおけるフィルター部
材５および流路確保部材６ａ、６ｂは、それぞれ、前記
と同様のものである。
【００９６】このようなフィルター装置１Ｂは、フィル
ター部材５の空孔率を変更する空孔率変更手段を有して
いる。この空孔率変更手段は、第１ハウジング部材３の
上部に内側に向けて突出するように形成された一対のネ
ジ山部（凸部）３２と、第２ハウジング部材４の外周面
に前記ネジ山部３２に対応するように形成された一対
（２条）の螺旋状のネジ谷部４４とで構成されている。
各ネジ山部３２は、対応するネジ谷部４４に挿入、嵌合
される。
【００９７】第２ハウジング部材４を第１ハウジング部
材３に対し相対的に回転すると、各ネジ山部３２が対応
するネジ谷部４４に沿って摺動し、第２ハウジング部材
４は、第１ハウジング部材３に対し軸方向に移動する。
【００９８】なお、ネジ山部３２の形状や形成個数は、
図示のものに限定されず、例えば連続したネジ山であっ
てもよい。また、ネジ谷部４４の形状や形成パターンに
ついても同様である。
【００９９】ハウジング２内にフィルター部材５および
流路確保部材６ａ、６ｂを装填した状態（フィルター装
置１Ａを組み立てた状態）で、第２ハウジング部材４を
第１ハウジング部材３に対し例えば左方向に回転する
と、第２ハウジング部材４が、第１ハウジング部材３の
内部により深く挿入されるように移動し、逆に、第２ハ
ウジング部材４を第１ハウジング部材３に対し右方向に
回転すると、第２ハウジング部材４が第１ハウジング部
材３から抜ける方向に移動する。このように、第２ハウ
ジング部材４の第１ハウジング部材３に対する相対回転
量、すなわちネジ山部３２のネジ谷部４４に対するねじ
込みの度合いを調整、設定することにより、第２ハウジ
ング部材４の第１ハウジング部材３に対する挿入深さが
調節される。この挿入深さは、フィルター部材５に作用
する圧縮力に対応し、よって、フィルター部材５の空孔
率（孔径）を調節することができる。
【０１００】第１ハウジング部材３に対する第２ハウジ
ング部材４の挿入深さは、ハウジング２の容積に対応し
ている。従って、フィルター部材５の空孔率（孔径）の
増減は、ハウジング２の容積の増減を伴って行われる。
これにより、フィルター部材５への必要な流路を確保し
た上で、ハウジング２内におけるデッドスペースをでき
るだけ少なくすることができ、プライミング量の低減と
ともに目的細胞の収率向上に寄与する。
【０１０１】フィルター装置１Ｂを用いた本発明の生体
微細組織の分離・回収方法は、前記工程［１−Ａ］およ
び［１−Ａ］において、空孔率変更手段の操作を、第１
ハウジング部材３に対する第２ハウジング部材４の回転
方向および回転量を調整して行う以外は、前記フィルタ
ー装置１Ａのそれと同様である。
【０１０２】この細胞の分離・回収方法によっても、目
的細胞の回収率および目的細胞以外の物質の除去率が格
段に向上する。
【０１０３】図８および図９は、それぞれ、本発明のフ
ィルター装置の第３実施例を示す部分断面側面図であ
る。以下、図８、図９に示すフィルター装置１Ｃについ
て、前記フィルター装置１Ａとの相違点を中心に説明
し、同様の事項については、その説明を省略する。
【０１０４】フィルター装置１Ｃは、ハウジング２と、
該ハウジング２内に設置された前記と同様のフィルター
部材５と、流路確保部材６ａ、６ｂとを有している。
【０１０５】ハウジング２は、有底筒状の第１ハウジン
グ部材３と、該第１ハウジング部材３内に挿入される第
２ハウジング部材４とで構成されている。
【０１０６】第１ハウジング部材３の底部には、ハウジ
ング２内に連通する第１のポート（被処理液流入口）３
１が突出形成されている。また、第１ハウジング部材３
の外周部には、雄螺子９５が形成されている。
【０１０７】第２ハウジング部材４の中心部には、内腔
４２がその軸方向に貫通して形成されており、第２ハウ
ジング部材４の先端部には、内腔４２に連通する第２の
ポート（濾過済液流出口）４１が突出形成されている。
なお、内腔４２のフィルター部材５側の端部は、通過す
る液を均一に拡散しまたは収斂するのに適するように、
テーパ状に拡開している。
【０１０８】第２ハウジング部材４の外周部には、前記
と同様のシールリング（シール部材）４３が設置されて
いる。第２ハウジング部材４を第１ハウジング部材３内
に挿入したとき、このシールリング４３が第１ハウジン
グ部材３の内周面に密着し、ハウジング２の液密性、特
に無菌性を確保する。
【０１０９】第２ハウジング部材４を第１ハウジング部
材３に対し軸方向に移動する際には、シールリング４３
が第１ハウジング部材３の内周面に密着しつつ、摺動す
る。
【０１１０】このようなハウジング２には、第１ハウジ
ング部材３と第２ハウジング部材４との軸方向の距離を
調整する調整部材９が装着されている。この調整部材９
は、中央部に第２のポートを挿通し得る開口９２が形成
された基部９１と、該基部の外周に形成された円筒部９
３とで構成され、円筒部９３の内面には、前記雄螺子９
５と螺合する雌螺子９４が形成されている。
【０１１１】フィルター装置１Ｃにおけるフィルター部
材５および流路確保部材６ａ、６ｂは、それぞれ、前記
と同様のものである。
【０１１２】フィルター装置１Ｃでは、前記調整部材９
と第１ハウジング部材３の外周部に形成された雄螺子９
５とで、フィルター部材５の空孔率を変更する空孔率変
更手段が構成される。
【０１１３】このようなフィルター装置１Ｃでは、図８
に示すようにハウジング２内にフィルター部材５および
流路確保部材６ａ、６ｂを装填した状態（フィルター装
置１Ｃを組み立てた状態）で、調整部材９を第１ハウジ
ング部材３に対し所定方向に回転すると、調整部材９の
基部９１が第２ハウジング部材４を押圧し、第２ハウジ
ング部材４が、第１ハウジング部材３の内部により深く
挿入されるように移動し、図９に示すようにフィルター
部材５が圧縮される。この状態から、調整部材９を第１
ハウジング部材３に対し前記と逆方向に回転すると、フ
ィルター部材５の復元力により、第２ハウジング部材４
が第１ハウジング部材３から抜ける方向に移動し、フィ
ルター部材の圧縮が解除される。
【０１１４】このように、調整部材９の第１ハウジング
部材３に対する相対回転量、すなわち雌螺子９４と雄螺
子９５のねじ込みの度合いを調整、設定することによ
り、第２ハウジング部材４の第１ハウジング部材３に対
する挿入深さが調節され、この挿入深さに対応してフィ
ルター部材５に作用する圧縮力、すなわち、フィルター
部材５の空孔率（孔径）を調節することができる。
【０１１５】フィルター装置１Ｃを用いた本発明の生体
微細組織の分離・回収方法も、前記工程［１−Ａ］およ
び［１−Ａ］において、空孔率変更手段の操作を、調整
部材９の第１ハウジング部材３に対する回転方向および
回転量を調整して行う以外は、前記フィルター装置１Ａ
のそれと同様である。
【０１１６】この細胞の分離・回収方法によっても、目
的細胞の回収率および目的細胞以外の物質の除去率が格
段に向上する。
【０１１７】図１０および図１１は、それぞれ、本発明
のフィルター装置の第４実施例を示す部分断面側面図で
ある。以下、図１０、図１１に示すフィルター装置１Ｄ
について、前記フィルター装置１Ａとの相違点を中心に
説明し、同様の事項については、その説明を省略する。
【０１１８】フィルター装置１Ｄは、ハウジング２と、
該ハウジング２内に設置された前記と同様のフィルター
部材５と、流路確保部材６ａ、６ｂとを有している。
【０１１９】ハウジング２は、ほぼ対象に構成される第
１ハウジング部材３および第２ハウジング部材４で構成
されている。
【０１２０】第１ハウジング部材３および第２ハウジン
グ部材４の中央部には、それぞれ、ハウジング２内に連
通する第１のポート（被処理液流入口）３１および第２
のポート（濾過済液流出口）４１が突出形成されてい
る。
【０１２１】第１ハウジング部材３および第２ハウジン
グ部材４の内側には、それぞれ、フィルター部材５を圧
縮するために流路確保部材６ａ、６ｂを押圧する板状の
リブ３７および４７が設けられている。これらのリブ３
７、４７は、それぞれ、ハウジング２の中心軸から放射
状に複数個づつ設けられている。
【０１２２】フィルター装置１Ｄにおけるフィルター部
材５および流路確保部材６ａ、６ｂは、それぞれ、前記
と同様のものである。
【０１２３】また、第１ハウジング部材３および第２ハ
ウジング部材４の外周部には、それぞれ、シール部材４
５を固定するためのシール部材固定部３８、４８が対向
するように形成されている。
【０１２４】このようなハウジング２の外周部には、円
筒状のシール部材４５が設置されている。このシール部
材４５は、各種ゴムや熱可塑性エラストマー等の弾性材
料で構成され、その軸方向両端部がそれぞれシール部材
固定部３８および４８に接着または融着されることによ
り、ハウジング２に対し液密に固着されている。
【０１２５】図１０に示すフィルター部材５の非圧縮状
態では、シール部材４５はほぼ円筒状をなしているが、
図１１に示すフィルター部材５の圧縮状態では、シール
部材４５はその軸方向中央部が外方へ突出するように変
形する。
【０１２６】このようなシール部材４５の設置により、
フィルター部材５の圧縮状態、非圧縮状態にかかわら
ず、ハウジング２の液密性、特に無菌性が確保される。
【０１２７】なお、シール部材４５の形状は、図示のも
のに限定されず、例えば蛇腹形状のものであってもよ
い。また、シール部材４５は、シール部材固定部３８、
４８の内側に固定されていてもよい。
【０１２８】このようなフィルター装置１Ｄでは、例え
ば前述した空孔率変更手段７を用いて、第１ハウジング
部材３と第２ハウジング部材４との距離を接近・離間さ
せ、フィルター部材５の空孔率（孔径）を変更、調整す
ることができる。
【０１２９】フィルター装置１Ｄを用いた本発明の生体
微細組織の分離・回収方法も、前記工程［１−Ａ］〜
［５−Ａ］とぼぼ同様にして行うことができる。
【０１３０】この細胞の分離・回収方法によっても、目
的細胞の回収率および目的細胞以外の物質の除去率が格
段に向上する。
【０１３１】図１２および図１３は、それぞれ、本発明
のフィルター装置の他の実施例を示す断面側面図であ
る。以下、これらの図に示すフィルター装置１Ｅについ
て説明するが、前記フィルター装置１Ａと同様の事項に
ついては、その説明を省略する。
【０１３２】フィルター装置１Ｅは、ハウジング２と、
該ハウジング２内に設置された前記と同様のフィルター
部材５とを有している。
【０１３３】ハウジング２は、基端に第１のポート３１
が形成された第１ハウジング部材３と、該第１ハウジン
グ部材３内に挿入され、先端に第２のポート４１が形成
されたほぼ円柱状の第２ハウジング部材４とで構成され
ている。第２のポート４１は、第２ハウジング部材４の
中心部を貫通する内腔４２を介してハウジング２内と連
通している。
【０１３４】また、第２ハウジング部材４の外周部に
は、前記と同様のシールリング４３が設置され、ハウジ
ング２の液密性、特に無菌性を確保している。
【０１３５】第１ハウジング部材３は、第１のポート３
１を有する基端側部材３５と、円筒状の先端側部材３６
とを接着または融着して構成され、基端側部材３５と先
端側部材３６との間には、フィルター部材５の外周部が
挟持されて固定されている。これにより、ハウジング２
内は、フィルター部材５により、第１のポート３１に連
通する空間２５と第２のポート４１に連通する空間２６
とに区画される。なお、フィルター部材５の外周部は、
接着剤で第１ハウジング部材３に対し接着固定されてい
てもよい。
【０１３６】フィルター部材５は、前記と同様の高分子
多孔質膜またはその積層体で構成されている。図示の例
では、フィルター部材５は、前述したような物理的また
は化学的特性に勾配を持った６層の高分子多孔質膜５１
の積層体で構成されているが、各高分子多孔質膜５１の
全部または一部が同一のものでもよく、あるいは、１枚
の高分子多孔質膜５１で構成されていてもよい。
【０１３７】第２ハウジング部材４の基端には、フィル
ター部材５を押圧して延伸させる部材として、ブリッジ
８が固定されている。このブリッジ８は、例えば放物線
状または円弧状に湾曲する複数の線材または板材をフィ
ルター部材５の方向に向けて突出するように配置したも
のであり、フィルター部材５の押圧に耐え得る所定の剛
性を有している。
【０１３８】この場合、ブリッジ８は、ハウジング２の
軸を中心として対称に形成されているので、フィルター
部材５を均一に延伸させることができ、よって、フィル
ター部材５の各所における第２の空孔率（第２の孔径）
のバラツキを抑制することができる。
【０１３９】また、ブリッジ８は、第２ハウジング部材
４の基端面とフィルター部材５とが密着するのを防止す
るスペーサーとしての機能をも有しており、よって、前
述した流路確保部材にも相当する。
【０１４０】以上のようなフィルター装置１Ｅでは、第
１ハウジング部材３に対する第２ハウジング部材４の挿
入深さを手動で調節することにより、フィルター部材５
の延伸およびその解除（または緩和）を行う。
【０１４１】すなわち、図１２に示すように、第１ハウ
ジング部材３に対する第２ハウジング部材４の挿入深さ
を、ブリッジ８がフィルター部材５に接触しない状態
（または軽度に接触した状態）に調節する。これによ
り、フィルター部材５は、張力（外力）が付与されてい
ない状態（または張力が緩和された状態）となり、その
空孔率（孔径）は、目的細胞を捕捉（濾過・分離）する
のに適した第１の空孔率（第１の孔径）に設定される。
【０１４２】また、図１３に示すように、第２ハウジン
グ部材４を第１ハウジング部材３の奥部へ挿入し、ブリ
ッジ８によりフィルター部材５を押圧する。これによ
り、フィルター部材５は、張力が作用して、所定の形状
に延伸され、その空孔率（孔径）が増大し、捕捉されて
いる目的細胞を離脱させるのに適した第２の空孔率（第
２の孔径）となる。
【０１４３】なお、図示されていないが、フィルター装
置１Ｅにおいても、シールリング４３を軸方向に沿って
複数個設けたり、前記と同様のネジ山部３２およびネジ
谷部４４あるいは調整部材９等を含む空孔率変更手段を
設けて、第２ハウジング部材４の第１ハウジング部材３
に対する挿入深さを調節し、フィルター部材５の空孔率
（孔径）の設定を行ってもよい。
【０１４４】次に、フィルター装置１Ｅを用いた本発明
の生体微細組織の分離・回収方法の一例について説明す
る。
【０１４５】［１−Ｂ］ まず、図１２に示すように、
第１ハウジング部材３に対する第２ハウジング部材４の
挿入深さを、ブリッジ８がフィルター部材５に接触しな
い状態（または軽度に接触した状態）に調節する。これ
により、フィルター部材５の孔径は、目的細胞が捕捉可
能な第１の孔径に設定される。
【０１４６】［２−Ｂ］ 次に、第１ハウジング部材３
の第１のポート３１より、目的細胞を含む細胞懸濁液
（被処理液）をハウジング２内へ供給する。細胞懸濁液
は、空間２５に流入した後、フィルター部材５を通過す
る。この際、目的細胞は、第１の孔径に設定されたフィ
ルター部材５の細孔を通過できずに捕捉され、その他の
成分（不要成分）は、細孔を通過し、空間２６、第２ハ
ウジング部材４の内腔４２を順次経て、第２のポート４
１より流出する。このようにして、細胞懸濁液中より目
的細胞が濾過・分離される。
【０１４７】［３−Ｂ］ 目的細胞の濾過・分離が終了
したら、必要に応じ、洗浄液を第１のポート３１より供
給して、ハウジング２内、特にフィルター部材５を洗浄
する。これにより、ハウジング２の内面やフィルター部
材５等に付着している不要成分が洗い流され、第２のポ
ート４１より排出される。この洗浄工程におけるフィル
ター部材５の空孔率（孔径）については、前記と同様で
ある。
【０１４８】［４−Ｂ］ 次に、図１３に示すように、
第２ハウジング部材４を第１ハウジング部材３の奥部側
へ摺動させ、ブリッジ８によりフィルター部材５を押圧
する。これにより、フィルター部材５が延伸され、その
孔径が第２の孔径に設定される。
【０１４９】［５−Ｂ］ この状態で、第２のポート４
１より、目的細胞を回収するための液体を供給する。こ
の液体は、内腔４２を経て空間２６に流入し、フィルタ
ー部材５を通過する。この際、フィルター部材５に捕捉
されている目的細胞は、前記液体の流れにより、フィル
ター部材５から離脱する。特に、孔径が第２の孔径に増
大されたことによって、細孔内に侵入していた目的細胞
までもが細孔から脱出し、フィルター部材５から離脱す
る。このようにしてフィルター部材５から離脱した目的
細胞は、前記液体の流れに伴って、空間２５を通過した
後、第１のポート３１より流出し、回収される。
【０１５０】以上のような細胞の分離・回収方法によ
り、フィルター装置１Ａを用いた場合と同様に目的細胞
の回収率および目的細胞以外の物質の除去率が格段に向
上する。
【０１５１】なお、上記フィルター装置１Ａ〜１Ｅにお
いて、フィルター部材５を、物理的または化学的特性に
勾配を有するものとする場合、図示のように複数の多孔
質体膜を積層したものを用いているが、これに限らず、
例えば、単一の多孔質膜の厚さ方向に前記と同様の物理
的または化学的特性に勾配を設けたものを用いてもよ
い。
【０１５２】
【実施例】次に、本発明の具体的実施例について説明す
る。
【０１５３】（実施例１）図１〜図４に示す構成の圧縮
−解放系のフィルター装置を製造した。
【０１５４】ハウジングの容積は、１．４〜４．０mlの
範囲とした。また、フィルター部材としては、有効径２
５mm、厚さ０．６mmのポリウレタン製多孔質体シートを
６枚積層したもの（合計厚さ３．６mm）を使用した。
【０１５５】また、フィルター部材の両面に、多孔質体
シートとほぼ同外径のシリコーンゴム製リング（内径２
５mm、厚さ１mm）と、該リング内に挿入されたポリアミ
ド製メッシュ（厚さ０．６mm）とを装着した。シールリ
ングは、シリコーンゴム製のものを用いた。
【０１５６】空孔率設定手段（圧縮装置）により、フィ
ルター部材に圧縮力を作用させない状態と、フィルター
部材を合計厚さ１．４mmに圧縮した状態とで、平均孔径
および空孔率を測定したところ、非圧縮状態では、平均
孔径：６μm 、空孔率８５％、圧縮状態では、平均孔
径：３μm 、空孔率６０％であった。
【０１５７】なお、平均孔径の測定は、パームポロメー
タ（PMI Automated Capillary FlowPorometer, PMI(ポ
ロシマテリアルス社製））により行い、空孔率は、ウレ
タンの真比重と、かさ比重とから求めた。
【０１５８】［実験１］以上のフィルター装置を用い、
ヒト全血からリンパ球（目的細胞）を分離・回収する実
験を行った。
【０１５９】まず、フィルター部材を前記圧縮状態とし
て、クエン酸で抗凝固したヒト全血２０mlを第１のポー
トより連続的に供給し（供給速度２〜４ml/min）、リン
パ球の濾別を行った。第２のポートから流出する血液成
分中にリンパ球の存在はほとんど認められず、リンパ球
はすべてフィルター部材に捕捉された。
【０１６０】次に、第１のポートよりリン酸緩衝液（以
下「ＰＢＳ」と言う）３mlを供給し（供給速度６ml/mi
n）、ハウジング内を洗浄した。
【０１６１】次に、フィルター部材の圧縮を解除し、フ
ィルター部材を元の厚さに復帰させた。この状態で、第
２のポートよりＰＢＳ２０mlを供給し（供給速度１２０
ml/min）、第１のポートより流出したリンパ球をＰＢＳ
とともに回収した。
【０１６２】回収液中の細胞数を細胞計数装置により測
定し、リンパ球の回収率を求めた。また、同様に、回収
液中の不要成分である顆粒球、単球、赤血球、血小板の
回収率も求めた。これらの結果を下記表１に示す。
【０１６３】なお、洗浄後のリンパ球の生存率、機能
は、それぞれ、洗浄前と変化がなく、リンパ球に対する
ダメージはなかったことが確認された。
【０１６４】（比較例１）実施例１と同様の装置を用
い、リンパ球の濾別から回収までの一連の操作を、フィ
ルター部材が前記と同様の圧縮状態に維持されたままと
して、前記と同様の実験１を行った。
【０１６５】前記と同様にして、リンパ球および各不要
成分の回収率を求めた。これらの結果を下記表１に示
す。
【０１６６】
【表１】
【０１６７】表１に示すように、実施例１は、比較例１
に比べ、目的細胞であるリンパ球の回収率が格段に向上
し、また、不要成分の回収率が低いことから、その除去
率も向上していることが確認された。
【０１６８】（実施例２）フィルター部材の圧縮状態に
おける平均孔径が３μm 、空孔率が５５％となるように
圧縮した以外は、実施例１と同様のフィルター装置によ
り、同様の実験１を行った。
【０１６９】（比較例２）フィコール液（比重＝１．０
７７）を用いた比重遠心法により、ヒト全血からリンパ
球の分離・回収を行った。
【０１７０】５０ml遠沈管にフィコール液２０mlを入
れ、この上からヒト全血３０mlを静かに重層し、１７５
０rpm 、３０min 遠心し、リンパ球層を分取した。
【０１７１】（比較例３）ゼラチンを用いた赤血球沈降
法により、ヒト全血からリンパ球の分離・回収を行っ
た。
【０１７２】３w/v%のゼラチンのＰＢＳ溶液にヒト全血
をＰＢＳで１／２に希釈して加え、転倒混和し、２０分
以内に赤血球が沈降したのを確認し、上清を分取した。
【０１７３】（比較例４）メチルセルロースを用いた赤
血球沈降法により、ヒト全血からリンパ球の分離・回収
を行った。
【０１７４】１w/v%のメチルセルロースのＰＢＳ溶液１
容に対し、ヒト全血５容を加え、転倒混和し、３０分静
置し、赤血球が沈降してから上清を分取した。
【０１７５】前記実施例２および比較例２〜４におい
て、リンパ球の回収率および各不要成分の除去率（＝１
００−回収率（％））を前記と同様にして求めた。これ
らの結果を下記表２に示す。
【０１７６】
【表２】
【０１７７】実施例２は、比較例２〜４のような濾過法
以外の方法に比べても、不要成分の除去率を高く維持し
つつ、目的細胞であるリンパ球の回収率が格段に優れて
いることが確認された。
【０１７８】また、実施例２は、比較例２〜４の方法に
比べ、同量の血液を、より短時間で処理することがで
き、大量の血液を迅速に処理するのに適していることが
確認された。
【０１７９】（実施例３）図５〜図７に示す構成の圧縮
−解放系のフィルター装置を製造した。
【０１８０】ハウジングの容積は、１．４〜４．０mlの
範囲とした。また、フィルター部材としては、（有効
径２５mm、厚さ０．６mm、平均孔径９μm 、空孔率８４
％）、（有効径２５mm、厚さ０．６mm、平均孔径６μ
m 、空孔率８１％）、（有効径２５mm、厚さ０．６m
m、平均孔径４μm 、空孔率８４％）の３種類のポリウ
レタン製多孔質体シートを積層したもの（合計厚さ３．
６mm）を使用した。積層は、第１のポート側から平均孔
径の大きい順に、各フィルター部材を２枚づつ（合計６
枚）重ねて構成した。また、フィルター部材の両面に、
多孔質体シートとほぼ同外径のシリコーンゴム製リング
（内径２５mm、厚さ１mm）と、該リング内に挿入された
ポリアミド製メッシュ（厚さ０．６mm）とを装着した。
シールリング（２本）は、それぞれシリコーンゴム製の
ものを用いた。
【０１８１】空孔率設定手段により、フィルター部材は
圧縮力を作用させない状態と、フィルター部材を合計厚
さ１．６mmに圧縮した状態とに設定することができる。
【０１８２】フィルター部材の圧縮状態での平均孔径
は、前記、、のそれぞれが５μm 、３μm 、２μ
m であり、空孔率は、前記、、のそれぞれが６４
％、５７％、６４％であった。なお、平均孔径の測定
は、前記と同様の装置により行った。
【０１８３】これらについて、前記実験１と同様の実験
（ただし、検体（ヒト全血）は異なる）を行い、目的細
胞であるリンパ球の回収率と、不要成分である顆粒球、
単球、赤血球、血小板の回収率とを求めた。さらに、供
給した血液の通液時間も計測した。これらの結果を下記
表３に示す。
【０１８４】なお、洗浄後のリンパ球の生存率、機能
は、それぞれ、洗浄前と変化がなく、リンパ球に対する
ダメージはなかったことが確認された。
【０１８５】
【表３】
【０１８６】（実施例４）フィルター部材として、前記
のポリウレタン製多孔質体シートを６枚積層（合計厚
さ３．６mm）して用いた以外は、実施例３と同様の装置
を作製し、同様の実験１を行った。
【０１８７】前記と同様にして、リンパ球、各不要成分
の回収率および通液時間を求めた。これらの結果を下記
表４に示す。
【０１８８】（実施例５）フィルター部材として、前記
のポリウレタン製多孔質体シートを６枚積層（合計厚
さ３．６mm）して用いた以外は、実施例３と同様の装置
を作製し、同様の実験１を行った。
【０１８９】前記と同様にして、リンパ球、各不要成分
の回収率および通液時間を求めた。これらの結果を下記
表４に示す。
【０１９０】（実施例６）フィルター部材として、前記
のポリウレタン製多孔質体シートを６枚積層（合計厚
さ３．６mm）して用いた以外は、実施例３と同様の装置
を作製し、同様の実験１を行った。
【０１９１】前記と同様にして、リンパ球、各不要成分
の回収率を求めた。これらの結果を下記表４に示す。
【０１９２】
【表４】
【０１９３】表３および表４に示すように、実施例３〜
６は、いずれも、目的細胞であるリンパ球の回収率が高
い。また、実施例３〜５は、通液速度も速く、回収処理
時間が短い。
【０１９４】特に実施例３では、孔径に勾配を有するフ
ィルター部材を用いているため、目的細胞の高い回収率
と不要成分の高い除去率とが両立している。
【０１９５】（実施例７）フィルター部材として、ゼー
タ電位の異なる２種類のポリウレタン製多孔質体シート
（有効径２５mm、厚さ０．６mm、平均孔径６μm 、空孔
率８１％）を合計６枚積層して用いた以外は、実施例３
と同様のフィルター装置を作製し、同様の実験１を行っ
た。
【０１９６】積層は、第１のポート側から順に、負のゼ
ータ電位（−４．６mV）を有する多孔質体シートを４
枚、正のゼータ電位（＋１６．３mV）を有する多孔質体
シートを２枚重ねて構成した（合計厚さ３．６mm）。
【０１９７】フィルター部材の圧縮状態での平均孔径
は、３μm であり、空孔率は、５７％であった。
【０１９８】なお、ゼータ電位の測定は、流動電位測定
装置（ＺＰ−１０Ｂ：島津製作所社製）により行った。
【０１９９】前記と同様にして、リンパ球、各不要成分
の回収率および通液時間を求めた。これらの結果を下記
表５に示す。
【０２００】（実施例８）フィルター部材として、前記
負のゼータ電位を有する多孔質体シート６枚を積層（合
計厚さ３．６mm）して用いた以外は、実施例７と同様の
装置を作製し、同様の実験１を行った。
【０２０１】前記と同様にして、リンパ球、各不要成分
の回収率および通液時間を求めた。これらの結果を下記
表５に示す。
【０２０２】
【表５】
【０２０３】表５に示すように、実施例７、８は、それ
ぞれ、目的細胞であるリンパ球の回収率が高く、不要成
分の除去率も高い。
【０２０４】特に実施例７では、ゼータ電位に勾配を有
するフィルター部材を用いているため、目的細胞の回収
率を高く維持したまま、不要成分の除去率が向上してお
り、よって、回収する目的細胞の純度をより高めること
ができ、さらに、通液速度も向上している。
【０２０５】（実施例９）フィルター部材として、親水
性の異なる３種類のポリウレタン製多孔質体シート（有
効径２５mm、厚さ０．６mm、平均孔径６μm 、空孔率８
１％）を合計６枚積層して用いた以外は、実施例３と同
様のフィルター装置を作製し、同様の実験１を行った。
【０２０６】積層は、第１のポート側から、親水性の高
い順に３種の多孔質体シート（９０、８０、６０dyn/c
m）をそれぞれ２枚づつ重ねて構成した（合計厚さ３．
６mm）。
【０２０７】フィルター部材の圧縮状態での平均孔径
は、３μm であり、空孔率は、５７％であった。
【０２０８】なお、親水性の測定は、特開平３−２７３
１７号公報記載の方法に従い、臨界表面張力（ＣＷＳ
Ｔ）として行った。
【０２０９】前記と同様にして、リンパ球、各不要成分
の回収率および通液時間を求めた。これらの結果を下記
表６に示す。
【０２１０】（実施例１０）フィルター部材として、親
水性が８０dyn/cmの前記多孔質体シート６枚を積層（合
計厚さ３．６mm）して用いた以外は、実施例９と同様の
装置を作製し、同様の実験１を行った。
【０２１１】前記と同様にして、リンパ球、各不要成分
の回収率および通液時間を求めた。これらの結果を下記
表６に示す。
【０２１２】
【表６】
【０２１３】表６に示すように、実施例９、１０は、そ
れぞれ、目的細胞であるリンパ球の回収率が高く、不要
成分の除去率も高い。
【０２１４】特に実施例９では、親水性に勾配を有する
フィルター部材を用いているため、目的細胞の回収率を
高く維持したまま、不要成分の除去率が向上しており、
よって、回収する目的細胞の純度をより高めることがで
る。
【０２１５】（実施例１１〜１８）装置の構造を図８お
よび図９に示すもの（ハウジング容積：１．３〜３．８
ml）に変えた以外は、実施例３〜１０のそれぞれと同様
の条件で実施例１１〜１８の８種のフィルター装置を作
製し、これらに対し同様の実験１を行った。
【０２１６】その結果、実施例１１〜１８は、いずれ
も、目的細胞の回収率および不要成分の除去率が高いも
のであった。また、各実施例１１〜１８間での結果は、
それぞれ、対応する実施例３〜１０と同様の傾向が認め
られた。
【０２１７】（実施例１９〜２６）装置の構造を図１０
および図１１に示すもの（ハウジング容積：１．８〜
４．８ml、スチレン系エラストマーのコンパウンド製シ
ール部材：厚さ２mm）に変え、図２〜図４に示す空孔率
変更手段を用いた以外は、実施例３〜１０のそれぞれと
同様の条件で実施例１９〜２６の８種のフィルター装置
を作製し、これらに対し同様の実験１を行った。
【０２１８】その結果、実施例１９〜２６は、いずれ
も、目的細胞の回収率および不要成分の除去率が高いも
のであった。また、各実施例１９〜２６間での結果は、
それぞれ、対応する実施例３〜１０と同様の傾向が認め
られた。
【０２１９】（実施例２７）図１２、図１３に示す構成
の延伸−解放系のフィルター装置を製造した。
【０２２０】ハウジングの容積は、１０．０〜２０．０
mlの範囲とした。また、フィルター部材としては、有効
径２５mm、厚さ１．８mmのポリウレタン製多孔質体シー
ト（１層）を使用した。
【０２２１】第２ハウジング部材の第１ハウジング部材
への挿入深さの調節により、フィルター部材に張力を作
用させない状態（非延伸状態）と、フィルター部材を延
伸した状態とで、平均孔径および空孔率を測定（測定方
法は、前記実施例１と同様）したところ、非延伸状態で
は、平均孔径：４μm 、空孔率８０％、延伸状態では、
平均孔径：６μm 、空孔率９０％であった。
【０２２２】［実験２］以上のフィルター装置を用い、
ヒト全血（ただし、前記と異なる検体）から目的細胞で
あるリンパ球を分離・回収する実験を行った。
【０２２３】まず、フィルター部材を前記非延伸状態と
して、クエン酸で抗凝固したヒト全血２０mlを第１のポ
ートより連続的に供給し（供給速度４ml/min）、リンパ
球の濾別を行った。第２のポートから流出する血液成分
中のリンパ球数は、濾過前の血液中のリンパ球数の２％
程度であり、ほとんどのリンパ球がフィルター部材に捕
捉された。
【０２２４】次に、第１のポートよりＰＢＳ２０mlを供
給し（供給速度６ml/min）、ハウジング内を洗浄した。
【０２２５】次に、フィルター部材を延伸状態とし、こ
の状態で、第２のポートよりＰＢＳ２０mlを供給し（供
給速度６０ml/min）、第１のポートより流出したリンパ
球をＰＢＳとともに回収した。
【０２２６】回収液中の細胞数を細胞計数装置により測
定し、リンパ球の回収率と不要成分である顆粒球、単
球、赤血球、血小板の回収率とを求めた。これらの結果
を下記表７に示す。
【０２２７】なお、洗浄後のリンパ球の生存率、機能
は、それぞれ、洗浄前と変化がなく、リンパ球に対する
ダメージはなかったことが確認された。
【０２２８】（比較例５）実施例２７と同様の装置を用
い、リンパ球の濾別から回収までの一連の操作を、フィ
ルター部材が非延伸状態に維持されたままとして、前記
と同様の実験２を行った。
【０２２９】前記と同様にして、リンパ球および各不要
成分の回収率を求めた。これらの結果を下記表７に示
す。
【０２３０】
【表７】
【０２３１】実施例２７は、比較例５に比べ、目的細胞
であるリンパ球の回収率が高く、また、この目的細胞の
回収率を高く維持したままた、不要成分の除去率を高く
することができることが確認された。
【０２３２】（実施例２８）図１２および図１３に示す
構成の延伸−解放系のフィルター装置を製造した。
【０２３３】ハウジングの容積は、１０．０〜２０．０
mlの範囲とした。また、フィルター部材としては、前記
、、の３種類のポリウレタン製多孔質体シートを
積層したもの（合計厚さ３．６mm）を使用した。積層
は、第１のポート側から平均孔径の大きい順に、各フィ
ルター部材を２枚づつ（合計６枚）重ねて構成した。
【０２３４】また、フィルター部材に張力を作用させな
い状態（非延伸状態）と、フィルター部材を延伸した状
態とで、平均孔径および空孔率を測定（測定方法は、前
記実施例１と同様）したところ、延伸状態では、前記多
孔質体シート、、の（平均孔径（μm ）、空孔率
（％））は、それぞれ（１２、９１）、（８、８
９）、（６、９１）であった。また、シールリング
は、シリコーンゴム製のものを用いた。
【０２３５】これらについて、前記実験２と同様の実験
（ただし、検体（ヒト全血）は異なる）を行い、目的細
胞であるリンパ球の回収率と、不要成分である顆粒球、
単球、赤血球、血小板の回収率とを求めた。さらに、供
給した血液の通液時間も計測した。これらの結果を下記
表８に示す。
【０２３６】なお、洗浄後のリンパ球の生存率、機能
は、それぞれ、洗浄前と変化がなく、リンパ球に対する
ダメージはなかったことが確認された。
【０２３７】
【表８】
【０２３８】（実施例２９）フィルター部材として、前
記のポリウレタン製多孔質体シートを６枚積層（合計
厚さ３．６mm）して用いた以外は、実施例２８と同様の
装置を作製し、同様の実験２を行った。
【０２３９】前記と同様にして、リンパ球、各不要成分
の回収率および通液時間を求めた。これらの結果を下記
表９に示す。
【０２４０】（実施例３０）フィルター部材として、前
記のポリウレタン製多孔質体シートを６枚積層（合計
厚さ３．６mm）して用いた以外は、実施例２８と同様の
装置を作製し、同様の実験２を行った。
【０２４１】前記と同様にして、リンパ球、各不要成分
の回収率および通液時間を求めた。これらの結果を下記
表９に示す。
【０２４２】（実施例３１）フィルター部材として、前
記のポリウレタン製多孔質体シートを６枚積層（合計
厚さ３．６mm）して用いた以外は、実施例２８と同様の
装置を作製し、同様の実験２を行った。
【０２４３】前記と同様にして、リンパ球、各不要成分
の回収率を求めた。これらの結果を下記表９に示す。
【０２４４】
【表９】
【０２４５】表８および表９に示すように、実施例２８
〜３１は、いずれも、目的細胞であるリンパ球の回収率
が高い。また、実施例３〜５は、通液速度も速く、回収
処理時間が短い。
【０２４６】特に実施例２８では、孔径に勾配を有する
フィルター部材を用いているため、目的細胞の高い回収
率と不要成分の高い除去率とが両立している。
【０２４７】（実施例３２）フィルター部材として、ゼ
−タ電位の異なる２種類のポリウレタン製多孔質体シー
ト（有効径２５mm、厚さ０．６mm、平均孔径４μm 、空
孔率８４％）を合計６枚積層して用いた以外は、実施例
２８と同様のフィルター装置を作製し、同様の実験２を
行った。
【０２４８】積層は、第１のポート側から順に、負のゼ
−タ電位（−４．６mV）を有する多孔質体シートを４
枚、正のゼ−タ電位（＋１６．３mV）を有する多孔質体
シートを２枚重ねて構成した（合計厚さ３．６mm）。
【０２４９】フィルター部材の延伸状態での平均孔径
は、６μm であり、空孔率は、９１％であった。
【０２５０】なお、ゼ−タ電位の測定は、前記流動電位
測定装置により行った。前記と同様にして、リンパ球、
各不要成分の回収率および通液時間を求めた。これらの
結果を下記表１０に示す。
【０２５１】（実施例３３）フィルター部材として、前
記負のゼ−タ電位を有する多孔質体シート６枚を積層
（合計厚さ３．６mm）して用いた以外は、実施例３２と
同様の装置を作製し、同様の実験２を行った。
【０２５２】前記と同様にして、リンパ球、各不要成分
の回収率および通液時間を求めた。これらの結果を下記
表１０に示す。
【０２５３】
【表１０】
【０２５４】表１０に示すように、実施例３２、３３
は、それぞれ、目的細胞であるリンパ球の回収率が高
く、不要成分の除去率も高い。さらに、通液速度も速
い。
【０２５５】特に実施例３２では、ゼータ電位に勾配を
有するフィルター部材を用いているため、目的細胞の回
収率を高く維持したまま、不要成分の除去率が向上して
おり、よって、回収する目的細胞の純度をより高めるこ
とができる。
【０２５６】（実施例３４）フィルター部材として、親
水性の異なる３種類のポリウレタン製多孔質体シート
（有効径２５mm、厚さ０．６mm、平均孔径４μm 、空孔
率８４％）を合計６枚積層して用いた以外は、実施例２
８と同様のフィルター装置を作製し、同様の実験２を行
った。
【０２５７】積層は、第１のポート側から、親水性の高
い順に３種の多孔質体シート（９０、８０、６０dyn/c
m）をそれぞれ２枚づつ重ねて構成した（合計厚さ３．
６mm）。
【０２５８】フィルター部材の延伸状態での平均孔径
は、６μm であり、空孔率は、９１％であった。
【０２５９】なお、親水性の測定は、前記と同様の方法
により行った。前記と同様にして、リンパ球、各不要成
分の回収率および通液時間を求めた。これらの結果を下
記表１１に示す。
【０２６０】（実施例３５）フィルター部材として、親
水性が８０dyn/cmの前記多孔質体シート６枚を積層（合
計厚さ３．６mm）して用いた以外は、実施例３４と同様
の装置を作製し、同様の実験２を行った。
【０２６１】前記と同様にして、リンパ球、各不要成分
の回収率および通液時間を求めた。これらの結果を下記
表１１に示す。
【０２６２】
【表１１】
【０２６３】表１１に示すように、実施例３４、３５
は、それぞれ、目的細胞であるリンパ球の回収率が高
く、不要成分の除去率も高い。
【０２６４】特に実施例３４では、親水性に勾配を有す
るフィルター部材を用いているため、目的細胞の回収率
を高く維持したまま、不要成分の除去率が向上してお
り、よって、回収する目的細胞の純度をより高めること
がでる。
【０２６５】以上、本発明のフィルター装置および生体
微細組織の分離・回収方法を図示の実施例に基づいて説
明したが、本発明は、これらに限定されるものではな
い。
【０２６６】フィルター部材としては、前記実施例で挙
げたものに限らず、例えば、メンブランフィルター、織
布または不織布のような繊維の集合体で構成されたもの
であってもよい。また、フィルター部材としては、弾性
変形可能なものに限らず、延伸により塑性変形し、その
形状を維持するようなものであってもよい。
【０２６７】また、フィルター部材は、物理的または化
学的特性に勾配を与える手段として、前述したような平
均孔径の異なる多孔質体の組み合わせによるもの、ゼー
タ電位の異なる多孔質体の組み合わせによるもの、親水
性の異なる多孔質体の組み合わせによるもの等に限ら
ず、その他の要素が異なるもの、あるいはこれらのうち
の２以上を適宜組み合わせたものであってもよい。
【０２６８】また、このような物理的または化学的特性
の勾配は、フィルター部材の圧縮時と非圧縮時のいずれ
か一方、またはフィルター部材の延伸時と非延伸時のい
ずれか一方で生じるものであってもよい。例えば、フィ
ルター部材を構成する複数の多孔質膜の厚さ（または弾
性）が異なり、非圧縮時には各多孔質膜の空孔率（第２
の空孔率）がほぼ等しいが、圧縮時には、多孔質膜の膜
厚（または弾性）の相違から、各多孔質膜の空孔率（第
１の空孔率）に差が生じるような構成、あるいはその逆
の構成が挙げられる。
【０２６９】また、空孔率の設定は、第１の空孔率およ
び第２の空孔率の２種に限らず、異なる３種以上の空孔
率（孔径）に設定可能なものであってもよい。例えば、
第１の空孔率と第２の空孔率との間の第３の空孔率に設
定可能とし、該第３の空孔率にて、前記洗浄操作を行う
ことができる。
【０２７０】前記各実施例では、フィルター部材の空孔
率（孔径）の変更は、目的細胞の分離（濾過）時と回収
時とにおいてそれぞれ適した空孔率とするために行われ
るが、本発明のフィルター装置は、これに限らず、例え
ば、フィルター部材空孔率（孔率）を変えることによ
り、それぞれの空孔率に応じた異なる目的細胞を分離す
るためのもの（多目的フィルター）としても用いること
ができる。
【０２７１】例えば、空孔率を第１の空孔率（第１の孔
径）に設定してリンパ球を分離・回収するためのフィル
ターとし、空孔率を第２の空孔率（第２の孔径）に設定
して赤血球、血小板等の他の細胞を分離・回収するため
のフィルターとすることができる。
【０２７２】また、本発明により分離・回収する生体微
細組織（目的生体微細組織）は、細胞に限らず、例え
ば、細胞核、染色体、遺伝子（ＤＮＡ）、細胞膜上構造
物、オルガネラ等であってもよい。
【０２７３】
【発明の効果】以上述べたように、本発明によれば、フ
ィルター部材をその空孔率を変化させて用いることによ
り、簡単な操作で、目的とする生体微細組織に損傷や変
質を与えず、すなわちその品質、特性等を低下すること
なく、高い収率で分離・回収することができ、また、不
要成分の除去率も高い。
【０２７４】特に、物理的または化学的特性に勾配を有
するフィルター部材を用いた場合には、その効果がより
顕著に発現する。
【０２７５】また、フィルター部材を複数の多孔質体の
積層体で構成した場合には、各多孔質体毎に物理的また
は化学的特性を設定することができるので、その勾配を
フィルター部材に対し容易に付与することができ、ま
た、その勾配の程度の調整も容易である。
【０２７６】また、フィルター部材、特に弾性を有する
フィルター部材を圧縮または延伸することによりその空
孔率を変更する場合には、簡単な構造で再現性よく空孔
率を調整、設定することができる。
【０２７７】そして、第１の空孔率と第２の空孔率との
比率を所望に設定した場合、流路確保部材を設けた場
合、洗浄を行う場合、洗浄の際のフィルター部材の空孔
率を所望に設定する場合等においては、目的とする生体
微細組織の回収率や不要成分の除去率がより向上する。
【０２７８】また、本発明では、濾過法の利点である無
菌的処理が可能であるとともに、大量で迅速な処理が可
能である。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明のフィルター装置の第１実施例を示す分
解斜視図である。
【図２】第１実施例のフィルター装置の使用状態を示す
断面側面図である。
【図３】第１実施例のフィルター装置の使用状態を示す
断面側面図である。
【図４】図２に示すフィルター装置の平面図である。
【図５】本発明のフィルター装置の第２実施例を示す分
解斜視図である。
【図６】第２実施例のフィルター装置の使用状態を示す
断面側面図である。
【図７】第２実施例のフィルター装置の使用状態を示す
断面側面図である。
【図８】本発明のフィルター装置の第３実施例を示す部
分断面側面図である。
【図９】本発明のフィルター装置の第３実施例を示す部
分断面側面図である。
【図１０】本発明のフィルター装置の第４実施例を示す
部分断面側面図である。
【図１１】本発明のフィルター装置の第４実施例を示す
部分断面側面図である。
【図１２】本発明のフィルター装置の第５実施例を示す
断面側面図である。
【図１３】本発明のフィルター装置の第５実施例を示す
断面側面図である。
【符号の説明】
１Ａ〜１Ｅ フィルター装置 ２ ハウジング ２５、２６ 空間 ３ 第１ハウジング部材 ３１ 第１のポート ３２ ネジ山部 ３５ 基端側部材 ３６ 先端側部材 ３７ リブ ３８ シール部材固定部 ４ 第２ハウジング部材 ４１ 第２のポート ４２ 内腔 ４３ シールリング ４４ ネジ谷部 ４５ シール部材 ４７ リブ ４８ シール部材固定部 ５ フィルター部材 ５１ 高分子多孔質膜 ６ａ、６ｂ 流路確保部材 ６１ リング ６２ メッシュ ７ 空孔率変更手段 ７１、７２ 板材 ７３ 離間距離設定手段 ７４ ボルト ７５ ナット ７６ 挿通孔 ７７、７８ 開口 ８ ブリッジ ９ 調整部材 ９１ 基部 ９２ 開口 ９３ 円筒部 ９４ 雌螺子 ９５ 雄螺子

Claims (30)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 第１のポートと第２のポートとを有する
    ハウジングと、 前記ハウジング内に設置された多孔質体よりなるフィル
    ター部材とを有し、 前記フィルター部材の空孔率を２以上の異なる空孔率に
    設定し得るよう構成されていることを特徴とするフィル
    ター装置。
  2. 【請求項２】 第１のポートと第２のポートとを有する
    ハウジングと、 前記ハウジング内を前記第１のポートに連通する空間と
    前記第２のポートに連通する空間とに区画するよう前記
    ハウジング内に設置された、多孔質体よりなるフィルタ
    ー部材と、 前記フィルター部材の空孔率を、少なくとも目的とする
    生体微細組織が捕捉可能な第１の空孔率と、前記第１の
    空孔率より大きい第２の空孔率とに設定可能な空孔率変
    更手段とを有することを特徴とするフィルター装置。
  3. 【請求項３】 前記第１の空孔率に対する前記第２の
    空孔率の比率が、１．０５〜３倍である請求項２に記載
    のフィルター装置。
  4. 【請求項４】 前記フィルター部材は、通液方向に物理
    的または化学的特性に勾配を有するものである請求項１
    ないし３のいずれかに記載のフィルター装置。
  5. 【請求項５】 前記フィルター部材は、複数の膜状多孔
    質体の積層体で構成され、各多孔質体のうちの全部また
    は一部が、物理的または化学的特性に勾配を有する請求
    項１ないし４のいずれかに記載のフィルター装置。
  6. 【請求項６】 前記物理的または化学的特性の勾配は、
    多孔質体の孔径の変化である請求項４または５に記載の
    フィルター装置。
  7. 【請求項７】 前記物理的または化学的特性の勾配は、
    多孔質体の空孔率の変化である請求項４または５に記載
    のフィルター装置。
  8. 【請求項８】 前記物理的または化学的特性の勾配は、
    多孔質体の親水性の変化である請求項４または５に記載
    のフィルター装置。
  9. 【請求項９】 前記物理的または化学的特性の勾配は、
    多孔質体のゼータ電位の変化である請求項４または５に
    記載のフィルター装置。
  10. 【請求項１０】 前記フィルター部材は、弾性変形可能
    なものであり、前記空孔率の設定は、前記フィルター部
    材の圧縮によりその空孔率を減少させ、前記圧縮の解除
    または緩和によりその空孔率を増大させるようにして行
    う請求項１ないし９のいずれかに記載のフィルター装
    置。
  11. 【請求項１１】 前記フィルター部材は、弾性変形可能
    なものであり、前記空孔率の設定は、前記フィルター部
    材の延伸によりその空孔率を増大させ、前記延伸の解除
    または緩和によりその空孔率を減少させるようにして行
    う請求項１ないし９のいずれかに記載のフィルター装
    置。
  12. 【請求項１２】 前記フィルター部材は、空孔率の増減
    と、孔径の増減とが対応するものである請求項１ないし
    １１のいずれかに記載のフィルター装置。
  13. 【請求項１３】 前記空孔率の設定の変更は、前記ハウ
    ジングの容積の変更を伴って行われる請求項１ないし１
    ２のいずれかに記載のフィルター装置。
  14. 【請求項１４】 前記ハウジングは、第１ハウジング部
    材と、前記第１ハウジング部材に対し液密に移動可能な
    第２ハウジング部材とを有し、前記第１ハウジング部材
    に対し前記第２ハウジング部材が相対的に移動すること
    により前記フィルター部材に変形を与え、その空孔率を
    変更するよう構成されている請求項１ないし１３のいず
    れかに記載のフィルター装置。
  15. 【請求項１５】 前記第１ハウジング部材、前記第２ハ
    ウジング部材間の液密性を保持する少なくとも１つのシ
    ール部材が設置されている請求項１４に記載のフィルタ
    ー装置。
  16. 【請求項１６】 前記第１のポートおよび／または前記
    第２のポートから流入した液体の前記フィルター部材へ
    の流路を確保する流路確保部材を有する請求項１ないし
    １５のいずれかに記載のフィルター装置。
  17. 【請求項１７】 空孔率が変更可能な多孔質体よりなる
    フィルター部材を用いて目的とする生体微細組織の分離
    ・回収を行う方法であって、 前記フィルター部材の空孔率を前記生体微細組織が捕捉
    可能な第１の空孔率に設定した状態で、前記フィルター
    部材により前記生体微細組織の濾過・分離を行い、 前記フィルター部材の空孔率を前記第１の空孔率より大
    きい第２の空孔率に設定した状態で、前記フィルター部
    材に捕捉された前記生体微細組織の回収を行うことを特
    徴とする生体微細組織の分離・回収方法。
  18. 【請求項１８】 第１のポートと第２のポートとを有す
    るハウジング内に、空孔率が変更可能な多孔質体よりな
    るフィルター部材が設置されたフィルター装置を用い
    て、目的とする生体微細組織の分離・回収を行う方法で
    あって、 前記フィルター部材の空孔率を前記生体微細組織が捕捉
    可能な第１の空孔率に設定した状態で、前記生体微細組
    織を含む被処理液を前記第１のポートより供給して、前
    記フィルター部材により前記生体微細組織の濾過・分離
    を行い、 その後、前記フィルター部材の空孔率を前記第１の空孔
    率より大きい第２の空孔率に設定した状態で、前記生体
    微細組織を回収するための液体を前記第２のポートより
    供給して、前記フィルター部材に捕捉された前記生体微
    細組織の回収を行うことを特徴とする生体微細組織の分
    離・回収方法。
  19. 【請求項１９】 第１のポートと第２のポートとを有す
    るハウジング内に、空孔率が変更可能な多孔質体よりな
    るフィルター部材が設置されたフィルター装置を用い
    て、目的とする生体微細組織の分離・回収を行う方法で
    あって、 前記フィルター部材の空孔率を前記生体微細組織が捕捉
    可能な第１の空孔率に設定した状態で、前記生体微細組
    織を含む被処理液を前記第１のポートより供給して、前
    記フィルター部材により前記生体微細組織の濾過・分離
    を行い、 次いで、洗浄液を前記第１のポートより供給して、前記
    フィルター部材を洗浄し、 その後、前記フィルター部材の空孔率を前記第１の空孔
    率より大きい第２の空孔率に設定した状態で、前記生体
    微細組織を回収するための液体を前記第２のポートより
    供給して、前記フィルター部材に捕捉された前記生体微
    細組織の回収を行うことを特徴とする生体微細組織の分
    離・回収方法。
  20. 【請求項２０】 前記フィルター部材の洗浄は、前記フ
    ィルター部材の空孔率を前記第１の空孔率以上、前記第
    ２の空孔率未満に設定した状態で行われる請求項１９に
    記載の生体微細組織の分離・回収方法。
  21. 【請求項２１】 前記フィルター部材の洗浄は、前記フ
    ィルター部材の空孔率を前記第１の空孔率に維持した状
    態で行われる請求項１９に記載の生体微細組織の分離・
    回収方法。
  22. 【請求項２２】 前記第１の空孔率に対する前記第２の
    空孔率の比率が、１．０５〜３倍である請求項１７ない
    し２１のいずれかに記載の生体微細組織の分離・回収方
    法。
  23. 【請求項２３】 前記フィルター部材は、複数の膜状多
    孔質体の積層体で構成されている請求項１７ないし２２
    のいずれかに記載の生体微細組織の分離・回収方法。
  24. 【請求項２４】 前記フィルター部材は、通液方向に物
    理的または化学的特性に勾配を有するものである請求項
    １７ないし２３のいずれかに記載の生体微細組織の分離
    ・回収方法。
  25. 【請求項２５】 前記物理的または化学的特性の勾配
    は、多孔質体の孔径の変化である請求項２４に記載の生
    体微細組織の分離・回収方法。
  26. 【請求項２６】 前記物理的または化学的特性の勾配
    は、多孔質体の空孔率の変化である請求項２４に記載の
    生体微細組織の分離・回収方法。
  27. 【請求項２７】 前記物理的または化学的特性の勾配
    は、多孔質体の親水性の変化である請求項２４に記載の
    生体微細組織の分離・回収方法。
  28. 【請求項２８】 前記物理的または化学的特性の勾配
    は、多孔質体のゼータ電位の変化である請求項２４に記
    載の生体微細組織の分離・回収方法。
  29. 【請求項２９】 前記フィルター部材は、空孔率の増減
    と、孔径の増減とが対応するものである請求項１７ない
    し２８のいずれかに記載の生体微細組織の分離・回収方
    法。
  30. 【請求項３０】 前記フィルター装置は、前記第１のポ
    ートおよび／または前記第２のポートから流入した液体
    の前記フィルター部材への流路を確保する流路確保部材
    を有する請求項１８ないし２１のいずれかに記載の生体
    微細組織の分離・回収方法。
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