JPH0987168A - リポソーム用混合脂質及びリポソーム分散液 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 水分散性、均一性等に優れ、これを水に分散
させることによって品質の良いリポソームが得られ、押
出し法によってもフィルターの目詰まりを起こすことな
く高い取り込み率でヘモグロビン等の内包物質を取り込
むことができるリポソーム製造用中間原料である混合脂
質及びこれを用いたリポソーム分散液の提供。 【解決手段】 リン脂質成分、ステロール類、荷電物質
等からなるリポソーム膜構成物質を、水不溶性揮発性有
機溶媒を含む均一溶媒中に溶解せしめ、これに水または
水溶液を加えた後、撹はんしながら有機溶媒を留去し、
残留するリポソーム膜構成物質混合分散水相を凍結乾燥
させてリポソーム用混合脂質を製造する。得られたリポ
ソーム用混合脂質を水性溶液に分散させリポソーム分散
液から押出し法によってフィルターの目詰まりを起こさ
ずリポソームが得られる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明はリポソーム製造用中
間原料であるリポソーム用混合脂質及びこれを用いたリ
ポソーム分散液に関する。リポソームは化粧品成分や薬
物を体内に送り込むキャリアーとして利用され、ＤＤＳ
（薬物送達システム）や人工血液、ワクチン等に利用さ
れる他、分散液としてバイオ素子や人工細胞、マイクロ
セルリアクターとして利用できる。

【０００２】

【従来の技術】天然リン脂質などにより構成された二分
子膜小胞体であるリポソームは、化粧品や医薬品などの
ファインケミカルの分野において広く用いられ、特に医
薬用ＤＤＳの用途に好適な素材として注目されている。
しかし、一度に大量のリポソームを作るのは容易ではな
く、通常、リポソーム膜構成物質となる各成分を別々に
水に投入するだけではリポソームは形成できない。この
為、リポソームを工業規模で調製するには、リポソーム
の中間原料となるリポソーム用混合脂質を、工業生産に
利用しやすい様に均一化し、水に分散しやすい形態に、
何らかの方法によって加工する事が重要となる。

【０００３】一般に、この様な用途に用いられるリポソ
ーム用混合脂質の製造方法について幾つかの手段が知ら
れている。また、適切なリポソーム用混合脂質がない為
に、脂質原料成分を水中に均一分散させる工夫をしたリ
ポソームの製造方法などについても、様々な方法が提案
されている。これらのリポソーム用混合脂質の製造方法
及びリポソームの製造方法として例えば下記のごとき方
法が知られている。

【０００４】特開昭６０−１２１２７の方法。リポソ
ーム膜構成物質を少量の有機溶媒に膨潤せしめた後、撹
拌、練合しながら有機溶媒を除去し均一なリポソーム用
混合脂質を得る。これを水に撹拌することによりリポソ
ームが得られる。

【０００５】特開平２−１６７２１８の方法。リン脂
質原料を有機溶媒に均一溶解させ、その後、瞬間真空乾
燥によって有機溶媒を揮散させることによってリポソー
ム用混合脂質を得る。これを水に撹拌することによりリ
ポソームが得られる。

【０００６】特開平４−２９９２５の方法。リポソー
ム形成脂質を水に投入し、これを高圧蒸気にさらした
後、薬剤溶液と混ぜ撹拌することでリポソームを得る。

【０００７】特開平１−１１７８２４の方法。リポソ
ーム膜構成物質を揮発性有機溶媒に溶解し、得られた溶
液に水和物の形成に必要な量の水を加え、撹拌しながら
有機溶媒を除去して膜構成物質水和物を作り、これに生
理活性物質を含有する水溶液を加えて分散させることに
よりリポソームを得る。

【０００８】逆相蒸発法（リポソーム、南江堂、１９
８８年発行、ｐ３４）。リポソーム膜構成物質を揮発性
有機溶媒に溶解させ少量の水溶液を加えてＷ／Ｏエマル
ジョンを形成させた後、エバポレーターにて有機溶媒を
留去することによりゼリー状にゲル化したリポソーム用
混合脂質が得られる。これをボルテックスミキサーにて
撹拌するか、もしくは多量の水中に分散させることによ
りリポソームが得られる。

【０００９】薄膜法（リポソーム、南江堂、１９８８
年発行、ｐ２６）。リポソーム膜構成物質を揮発性有機
溶媒に溶解させた後、エバポレーターにて有機溶媒を留
去することにより茄子型フラスコの壁面に脂質薄膜を形
成させ、これに水溶液を加えてボルテックスミキサーで
撹拌することによりリポソームが得られる。

【００１０】特開昭６０−５８９１５の方法。有機溶
媒に溶解していない親油性界面活性剤を含有するリン脂
質と水溶液を混合撹拌しリポソームを形成する。また、
このものを凍結乾燥、または噴霧乾燥することによりリ
ポソーム製剤が得られ、これを水に再分散させてリポソ
ームを形成させることもできる。

【００１１】特開昭５７−８２３１０の方法。リン脂
質を水性媒体中に分散させた後、この分散液に薬剤を溶
解させ、このものを凍結乾燥することによりリポソーム
製剤が得られ、これを水に再分散させてリポソームを形
成できる。

【００１２】

【発明が解決しようとする課題】上記、従来のリポソー
ム用混合脂質及びリポソーム製造方法のうち、、及
びは、リポソーム膜構成物質を有機溶媒に溶解させる
ことにより均一化させ、その後、有機溶媒を除き、リポ
ソーム用混合脂質を得る方法である。この方法では、見
かけ上均一な脂質混合物が得られるが、有機溶媒中では
脂質分子がランダムな配向をとっており、親水基の向き
がバラバラで、そのままの状態で凍結乾燥しても得られ
る乾燥物は水になじみ難いという欠点を持っている。例
えば、このリポソーム用混合脂質を水に分散させ、押出
し法によってリポソームを作製する場合、分散性の悪い
部分の影響により、フィルターの目詰まりが頻繁に生じ
る。

【００１３】それに対し、及びは一度水に分散させ
てから、凍結乾燥させているので、脂質が親水基を配向
しており、、やの製法で作るより水になじみ易い
混合物が製造できる。しかし、もともと水に均一分散さ
せにくい脂質を水に分散しやすくするための工夫が必要
であり、均一分散させる媒体として最初から水を用いて
も、その目的を達するのは困難であり、見かけ上均一な
粉末が得られても、微小な未分散の原料が混入する。特
に、脂質成分に混合添加されるステロールや脂肪酸な
ど、水難溶性の物質を成分として多量に混ぜた場合、こ
の方法でリポソーム用混合脂質を作るのは困難である。
この方法で得られたリポソーム用混合脂質を水に分散さ
せ、押出し法によってリポソームを作製する場合も、未
分散原料の影響により、フィルターの目詰まりが頻繁に
生じる。

【００１４】の方法も、均一分散させる媒体として水
を用いているので、基本的にはと同様の欠点を持っ
ている。但し、の方法では、未分散原料が均一化しな
い欠点を緩和する為に、高圧蒸気滅菌をかけ、高圧と高
熱により脂質類を水中で強制的に融和させている。しか
し、この方法では、高熱による脂質類の変成が避けられ
ない。特に一部のリン脂質は加水分解して、リゾ体を生
じる。リゾ体は体内に投与された場合、溶血などの原因
となり毒性がある事から、医薬品として使用する場合に
は問題となる。また不飽和成分を含む場合、加熱による
過酸化の問題もある。また、この方法では、粉末化して
いないのでリポソーム形成前の脂質混合物の状態で保存
すると、相分離などを生じ保存安定性も良くない。

【００１５】これらに対し、及びでは、最初に有機
溶媒中に脂質成分を溶解させることにより、まず脂質を
均一化させ、ここにごく少量の水を加えることによりエ
マルジョン、もしくは均一な外観を呈する糊状物を形成
させる。ここから有機溶媒を除くことで、親水基を配向
させた水に分散しやすいリポソーム用混合脂質を得てい
る。しかし、これらの方法では、有機溶媒と水との混合
物から、水を除去せず有機溶媒のみを除去しているの
で、得られたものは少量の水を含有しており、と同様
に保存安定性が良くない。またの方法では、リポソー
ムに内包させたい薬液と混合する前に、すでにリポソー
ム用混合脂質に水を含有しているので、混合する薬液を
希釈してしまう。その為、高濃度に薬剤を内包させたい
と考える場合には不利になる。また水を除去せず有機溶
媒のみを除去しているため、エバポレーターやバブリン
グ操作などの方法で水中に分散溶解している有機溶媒を
完全に留去するのは困難であり、微量の有機溶媒が水を
含んだ脂質混合物中に残留する事は避けられない。この
ようなものを化粧品や医薬品の中間原料として用いるに
は品質が不適切であった。

【００１６】以上のようにこれまでに知られている〜
の製造方法には、いずれも欠点があり、これらの方法
により得られたリポソーム用混合脂質及びリポソームは
水分散性、均一性、保存安定性、少量の有機溶媒の残留
による安全性、品質などそれぞれに問題を抱えている。
従来、これらの問題すべてを一度に解決した高品質のリ
ポソーム用混合脂質は製造が困難であった。

【００１７】

【課題を解決するための手段】本発明の発明者らは、前
記従来の方法の問題点を解決した理想的なリポソーム用
混合脂質、並びにこれを用いたリポソームの製造方法の
提供を目的として、水分散性、均一性、品質等に優れる
リポソーム用混合脂質及びこれからリポソームを製造す
る方法について検討を重ねた結果、リポソーム膜構成物
質を、水不溶性の揮発性有機溶媒を含む溶媒中に溶解せ
しめ、この有機溶媒溶液に対して、水もしくは水溶液を
加えた後、撹拌しながら有機溶媒を留去し、脂質分散水
相を形成後、これを凍結乾燥させることにより、医薬用
素材としても利用できる均一で分散性の良い理想的なリ
ポソーム用混合脂質が得られることを見出した。また、
この脂質混合物を水に分散させ、押出し法によってリポ
ソームの製造を行うと、従来、押出し法の欠点であった
フィルターの目詰まりを著しく軽減できることを見いだ
し、本発明を完成するに至った。

【００１８】すなわち本発明は、リポソーム膜構成物質
を、水不溶性揮発性有機溶媒を含む均一溶媒中に溶解せ
しめ、これに水または水溶液を加えた後、撹はんしなが
ら有機溶媒を留去し、残留するリポソーム膜構成物質混
合分散水相を凍結乾燥させて得られたリポソーム用混合
脂質である。

【００１９】

【発明の実施の形態】本発明で使用されるリポソーム膜
構成物質には、膜構成物質として一般に使用されるもの
であれば特に限定されないが、リポソーム形成能を有す
る脂質成分を必須成分とし、膜安定化剤としてのステロ
ール類、荷電物質としての脂肪酸または脂肪酸塩、酸化
防止剤等を任意成分とするものである。リポソーム形成
能を有する脂質としては特にリン脂質が好ましい。

【００２０】リン脂質はホスファチジルコリン、ホスフ
ァチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホ
スファチジルグリセロールなどに代表される物質で、卵
黄、大豆、その他天然原料に由来するものあるいは合成
によって得られるものでも良く、これらの混合物もしく
は単体いずれでもかまわない。これらに修飾を施したリ
ン脂質誘導体も使用してよい。また１，２−ジ（オクタ
デカ−２，４−ジエノイル）−ｓｎ−グリセロ−３−ホ
スホコリンなどに代表される各種の重合性リン脂質もこ
れらのリン脂質に含まれる。これらのリン脂質の中では
特にホスファチジルコリンを用いるのが好ましい。

【００２１】ステロールはコレステロールを始めとし
て、コレステロールアセテート、ジヒドロコレステロー
ルフィトステロール、シトステロール、スチグマステロ
ール、カンペステロールなどを代表とする多くのステロ
ール類が膜安定化剤として使用できるが、特にコレステ
ロールが好ましい。

【００２２】荷電物質として、ラウリン酸、ミリスチン
酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、エライ
ジン酸、エレオステアリン酸、２，４−オクタデカジエ
ン酸などを代表とする脂肪酸やこれらのナトリウム塩、
カリウム塩、カルシウム塩、アンモニウム塩など各種の
脂肪酸塩が好適に用いられる。またホスファチジン酸や
ジセチルホスフェートなども荷電物質として好適であ
り、更にリン脂質成分としてホスファチジルグリセロー
ルをまたはその塩を用いた場合、それ自身が荷電物質と
しても作用する。

【００２３】また酸化防止剤としてトコフェロール等を
本発明の効果を損なわない範囲で加えて良い。さらに、
特種な安定化効果、生理活性などを付与する目的で、糖
脂質やカルジオリピンなど特異な構造の脂質を含有させ
ることも可能である。この他、生理活性を持つ物質を少
量混合しておくことも行って良い。

【００２４】リポソーム膜構成物質として、上記の成分
を任意に混合して用いることができるが、特に下記の成
分の組み合わせを用い、本発明によりリポソーム用混合
脂質とする場合に優れた均一性や水分散性を示す。 Ａ：リン脂質とステロール。 上記Ａの配合のうち、特に好ましくは下記の成分の組み
合わせである。 Ｂ：ホスファチジルグリセロールを必須成分とするリン
脂質成分とステロール。 Ｃ：リン脂質成分とステロール及び脂肪酸塩。

【００２５】リポソーム膜構成物質としてリン脂質とス
テロールとを含んでいると、得られるリポソーム用混合
脂質を水に分散させる際、混合脂質の分散性が向上す
る。またホスファチジルグリセロールまたは脂肪酸塩を
含んでいると、水への分散性はさらに向上する。

【００２６】Ｂの処方における組成は、ホスファチジル
グリセロールを含むリン脂質全体の量を１とした場合、
ステロールはモル比で０．０５〜２の割合で含有するの
が好ましい。リン脂質中のホスファチジルグリセロール
と他のリン脂質の比はモル比で０．００５：１〜１：
０、更に好ましくは０．０５：１〜１：０の範囲で選択
される。Ｃの場合、リン脂質１に対してステロールはモ
ル比で０．０５〜２、脂肪酸塩は０．００１〜２、更に
好ましくは０．０１〜１．５の範囲で選択されるのが好
ましい。

【００２７】本発明においては、まず上記リポソーム膜
構成物質を、水不溶性揮発性有機溶媒を含む均一溶媒中
に溶解させる。水不溶性揮発性有機溶媒としてはクロロ
ホルム、ベンゼン、ジクロロメタン、ヘキサン等が挙げ
られる。またこれらの有機溶媒は混合して用いてもよ
く、その溶解性を上げる目的で、エタノールやメタノー
ルなど水溶性の有機溶媒や、これと合わせて可溶化させ
た少量の水などを混合して、水不溶性の揮発性有機溶を
含む均一溶媒を調製して使用してもよい。そのような目
的に好適な混合溶媒組成の例としてはクロロホルム，メ
タノール，水の６５：２５：４の組成や、あるいは８
０：１８：２の組成などが適当であるが、均一な外観で
あれば必ずしもこの組成や比率に限定する必要はない。

【００２８】膜構成物質を溶解した水不溶性の揮発性有
機溶媒を含む均一溶媒に加える水または水溶液として
は、蒸留水、イオン交換水、局方注射用水などが好まし
く使用され、糖などを含有した水溶液や緩衝液等を加え
ても良い。あるいは生理活性物質を含ませておいても良
い。

【００２９】本発明のリポソーム用混合脂質の製造方法
は次に示す手順で実施される。まず、水不溶性の揮発性
有機溶を含む均一溶媒にリポソーム膜構成物質を溶解さ
せる。これらの溶媒の使用量は、膜構成物質を完全に溶
解する量ならば特に制限はないが、操作性などの条件か
らリポソーム膜構成物質１ｇあたり０．０５〜２０ｍｌ
程度が適当である。

【００３０】次に、かくして得られたリポソーム膜構成
物質の溶液に対し、水もしくは水溶液を加える。加える
水または水溶液の使用量は、膜構成物質１ｇあたり４〜
１００ｍｌ程度が適当である。この時、水不溶性の揮発
性有機溶媒を含む均一溶媒に対する水もしくは水溶液の
量は、体積比で少なくとも０．５倍程度あるのが良い。
より好ましくは１．５倍〜５０倍の範囲で選択するのが
適当である。これらの水を、水不溶性の揮発性有機溶を
含む均一溶媒に添加したときに均一相を形成せず、相分
離を生じていると好ましい。

【００３１】次に揮発性有機溶媒の除去を行うが、有機
溶媒の除去はエバポレーターを用いて、揮発性有機溶媒
を留去しながら水相中にリポソーム膜構成物質を分散す
る方法が好適であるが、他にも不活性ガス（窒素、アル
ゴン等）の吹き付けや、バブリング、トラップを付けた
減圧装置等、既知の方法が利用できる。いずれの場合も
撹拌しながら有機溶媒を除去することが必要である。こ
の工程で十分に有機溶媒を除く必要があるが、微量の残
留ならばリポソーム膜構成物質が均一に水相中に分散し
たことが確認できれば許容できる。

【００３２】次に有機溶媒の除去により生成した混合脂
質分散水相を液体窒素もしくはドライアイス- メタノー
ル等を用いて凍結後、凍結乾燥機に取り付け凍結乾燥す
る。本発明においてはリポソーム膜構成物質を有機溶媒
で溶解させた後、これに水性溶液を相当量加えているの
で凍結乾燥することが重要であり、これによって水及び
残留する微量の有機溶媒を除去することができる。この
ようにしてリポソーム膜構成物質から、リポソーム製造
に適する均一なリポソーム用混合脂質を得ることができ
る。

【００３３】リポソーム用混合脂質からリポソームの製
造は、次のようにして行われる。まずリポソーム膜構成
物質１ｇに対して、１〜１０００ｍｌの水性溶媒を準備
する。水性溶媒としては単なる水を用いても良いし、少
量のメタノールなどを含む水性混合溶媒であってもよい
が、好ましくは局方注射用水や蒸留水などが用いられ
る。この時、また水性溶媒に生理活性物質や、蛋白質、
緩衝物質や各種の塩、血漿などを溶解させ、溶液状とし
たのものであってもよい。リポソーム形成溶脂質混合物
をこれらの水性溶媒に懸濁させる。これを、マントンガ
ウリンやマイクロフルイダイザーなどの乳化機やワーリ
ングブレンダーなどの高速撹拌機などを用いて物理的な
力を加え、分散液とすることによりリポソームが形成さ
れる。

【００３４】また本発明によるリポソーム用混合脂質を
用い、簡単な分散処理をした分散液を各種の静圧式押出
し装置、例えば”ＥＸＴＲＵＤＥＲ”（商品名、日油リ
ポソーム製）や”リポナイザー”（商品名、野村マイク
ロサイエンス製）等によって市販のフィルターを強制的
に通過させることにより、フィルターの目詰まりを生じ
ることなく、粒径の揃ったリポソームを簡単に製造する
ことができる。

【００３５】このようにして得られたリポソームは、限
外濾過、遠心分離、ゲル濾過等の方法によって未保持の
薬物を除いても良いし、濃縮や希釈等の操作を自由に行
って良い。

【００３６】次に実施例を示して、本発明を更に詳しく
説明する。

【実施例】

［実施例１］（ホスファチジルコリン／コレステロール
／脂肪酸Ｎａ） リポソーム膜構成物質として、ジミリストイルホスファ
チジルコリン２．８９ｇ（４．２６ｍｍｏｌ）、ジパル
ミトイルホスファチジルコリン３．１３ｇ（４．２６ｍ
ｍｏｌ）、コレステロール３．３０ｇ（８．５３ｍｍｏ
ｌ）、パルミチン酸ナトリウム０．６８ｇ（２．４４ｍ
ｍｏｌ）を秤量し、２リットルのナス型フラスコに加え
た。ここにクロロホルム、メタノール、水からなる均一
系混合溶媒（混合比率（容量比）８０：１８：２）の１
００ｍｌを加え加温しながら完全溶解させた。これに注
射用水２００ｍｌを添加して、エバポレーターに取り付
け、回転させつつ突沸に注意しながら有機溶媒を取り除
いた。途中、透明な糊状の相を経て、膜構成物質は均一
に水相に分散し、最終的には粘性のある白色の液体を形
成した。このものを液体窒素で凍結後、凍結乾燥器に装
着し、３０時間凍結乾燥して白色粉末状のリポソーム用
混合脂質を得た。

【００３７】得られたリポソーム用混合脂質について、
他の実施例、比較例とともに、クロロホルム臭官能試
験、リポソーム形成試験、押出し法によるリポソーム形
成試験及び内包物取り込み度評価を行った。評価方法は
下記〜のとおりである。評価結果を表１に示す。

【００３８】クロロホルム臭官能試験 実施例、比較例で得られたリポソーム用混合脂質５ｇ
（液体の場合は計算上５ｇを含む体積を計量して５ｇを
とる）をビーカーに秤量し、成人男子３名、成人女子２
名の被験者を対象として、リポソーム用混合脂質のクロ
ロホルム臭の有無を判断させ、下記２段階により判定し
た。 ×：被験者のうち２名以上がクロロホルム臭を感じたも
の。 ○：クロロホルム臭を感じた被験者が１名以下の場合。

【００３９】リポソーム用混合脂質のリポソーム分散
液の作製（リポソーム形成試験） 実施例、比較例で得られたリポソーム用混合脂質１ｇ
（液体の場合は計算上１ｇを含む体積を計量して１ｇを
とる）をビーカーに秤量し、生理食塩水１０ｍｌを加え
たのち、ホモミキサーで激しく撹拌した。これを口径２
５φのＥＸＴＲＵＤＥＲに加え、約３ｋｇ／ｃｍ² の圧
力を加えながら２０℃で孔径３．０μｍの混合セルロー
スフィルター（日本ミリポア製）を通過させた。リポソ
ーム形成能の評価は、１０ｍｌが通過し終わる時間を測
定し、下記の３段階で評価した。 ○：１８０秒以内に通過するもの 小粒径のリポソームが良好に形成されていると考えられ
る。 △：通過時間が１８０秒以上、３００秒未満のもの。軽
度な不良と考えられる。 ×：通過時間が３００秒以上かかるもの これはフィルターにおいて目詰まりが生じているためで
あり、孔径３．０μｍ以上の粗大なリポソームもしくは
凝集物が生じており、リポソーム形成能不良のものであ
る。

【００４０】押出し法によるＨｂ内包リポソーム分散
液の作製（押出し法によるリポソーム形成試験） リポソーム用混合脂質１ｇ（液体の場合は計算上１ｇを
含む体積を計量して１ｇをとる）をビーカーに秤量し、
濃度３０ｇ／ｄｌのヘモグロビン溶液１０ｍｌを加えた
のち、マグネットスターラーを用いて１２時間緩やかに
撹拌した。これを口径２５φのＥＸＴＲＵＤＥＲに加
え、加圧（１〜３０ｋｇ／ｃｍ² ）しながら１０℃で孔
径３．０μｍ、１．２μｍ、０．８μｍ、０．６μｍ、
０．４５μｍ、０．３μｍ、０．２２μｍの混合セルロ
ースフィルター（日本ミリポア製）まで順に通過させ
た。フィルターでの目詰まりの状況を観察し、下記２段
階により、押出し法によるリポソーム形成能を判定し
た。 ○：フィルター通過の際、途中で目詰まりする事なく
０．２２μｍまで１０ｍｌ全量通過したもので、押出し
法によりリポソーム形成容易と考えられる。 ×：途中で目詰まりしたもので、押出し法では小粒径リ
ポソームは形成困難と考えられる。

【００４１】内包物質取り込み度測定 また、この試験で０．２２μｍを全量通過させたサンプ
ルについてのみ、内包物質取り込み度測定を行った。作
製したサンプルを生理食塩水で置換したセファロース４
Ｂ（ファルマシア製）カラムにチャージして、内包され
なかったヘモグロビンを除去した。こうして得たヘモグ
ロビン内包リポソームについて市販のリン定量キットお
よびヘモグロビン定量キットを用いて、リン定量、ヘモ
グロビン定量を行った。リン定量から総脂質重量を求
め、ヘモグロビン重量を総脂重質量で除してヘモグロビ
ン／総脂質比を算出した。この時のヘモグロビン／総脂
質比をリポソーム内包物質取り込み度とした。

【００４２】［実施例２］（ホスファチジルコリン／コ
レステロール／脂肪酸Ｎａ） 実施例１においてクロロホルム、メタノール、水からな
る均一系混合溶媒（混合比率 ８０：１８：２）の量を
２０ｍｌに、注射用水添加量を１５ｍｌにした以外は実
施例１と同様にして操作をし、白色粉末状のリポソーム
用混合脂質を得た。得られたリポソーム用混合脂質につ
いて、実施例１と同様に〜の項目について評価を行
った。結果を表１に合わせて示す。

【００４３】［実施例３］（ホスファチジルコリン／コ
レステロール／脂肪酸Ｎａ） 実施例１においてクロロホルム、メタノール、水からな
る均一系混合溶媒（混合比率 ８０：１８：２）の量を
２０ｍｌに、注射用水添加量を２００ｍｌにした以外は
実施例１と同様にして操作をし、白色粉末状のリポソー
ム用混合脂質を得た。得られたリポソーム用混合脂質に
ついて、実施例１と同様に〜の項目について評価を
行った。結果を表１に合わせて示す。

【００４４】［実施例４］（ホスファチジルコリン／コ
レステロール／ホスファチジルグリセロール塩） リポソーム膜構成物質をジミリストイルホスファチジル
コリン２．６３ｇ（３．８７ｍｍｏｌ）、ジパルミトイ
ルホスファチジルコリン２．８５ｇ（３．８８ｍｍｏ
ｌ）、コレステロール３．００ｇ（７．７６ｍｍｏ
ｌ）、ジミリストイルホスファチジルグリセロールアン
モニウム塩１．５２ｇ（２．２２ｍｍｏｌ）とした以外
は実施例１と同様にして白色粉末状のリポソーム用混合
脂質を得た。得られたリポソーム用混合脂質について、
実施例１と同様に〜の項目について評価を行った。
結果を表１に合わせて示す。

【００４５】［実施例５］（ホスファチジルコリン／コ
レステロール／脂肪酸） リポソーム膜構成物質として、ジミリストイルホスファ
チジルコリン２．９１ｇ（４．２９ｍｍｏｌ）、ジパル
ミトイルホスファチジルコリン３．１５ｇ（４．２９ｍ
ｍｏｌ）、コレステロール３．３１ｇ（８．５６ｍｍｏ
ｌ）、パルミチン酸０．６３ｇ（２．４６ｍｍｏｌ）と
した以外は実施例１と同様にして白色粉末状のリポソー
ム用混合脂質を得た。得られたリポソーム用混合脂質に
ついて、実施例１と同様に〜の項目について評価を
行った。結果を表１に合わせて示す。

【００４６】上記実施例で得られたリポソーム用混合脂
質はいずれもクロロホルム臭がなく、水に分散させるこ
とにより小粒径の良好なリポソームが形成され、ヘモグ
ロビンと混合して押出し法によるリポソーム形成におい
ても目詰まりを生ずることなく高い取り込み度でヘモグ
ロビンを内包することができた。

【００４７】［比較例１］（凍結乾燥なし） リポソーム膜構成物質として、実施例１と同様の処方
で、ジミリストイルホスファチジルコリン２．８９ｇ
（４．２６ｍｍｏｌ）、ジパルミトイルホスファチジル
コリン３．１３ｇ（４．２６ｍｍｏｌ）、コレステロー
ル３．３０ｇ（８．５３ｍｍｏｌ）、パルミチン酸ナト
リウム０．６８ｇ（２．４４ｍｍｏｌ）を秤量し、２リ
ットルのナス型フラスコに加えた。ここにクロロホルム
１００ｍｌを加え加温しながら完全溶解させた。ここに
注射用水３０ｍｌを添加して、エバポレーターに取り付
け、回転させつつ突沸に注意しながら有機溶媒を取り除
いた。膜構成物質は水相に分散し、凍結乾燥を行わずに
最終的に粘性のある全量４０ｍｌの白色のクリームを形
成した。

【００４８】この生成物について、実施例１と同様に、
〜の項目について評価を行った。評価結果を表２に
示した。凍結乾燥していないので、クロロホルム臭が残
っていた。また３０ｇ／ｄｌのヘモグロビンと混合して
押出し法によってリポソームを形成した結果、内包物質
取り込み率が０．６と低かった。

【００４９】［比較例２］（有機溶媒溶液に水添加せず
溶媒除去、荷電物質：脂肪酸） リポソーム膜構成物質として、ジミリストイルホスファ
チジルコリン２．９１ｇ（４．２９ｍｍｏｌ）、ジパル
ミトイルホスファチジルコリン３．１５ｇ（４．２９ｍ
ｍｏｌ）、コレステロール３．３１ｇ（８．５６ｍｍｏ
ｌ）、パルミチン酸０．６３ｇ（２．４６ｍｍｏｌ）を
秤量し、２リットルのナス型フラスコに加えた。ここに
クロロホルム１００ｍｌを加え加温しながら完全溶解さ
せた。これをそのままエバポレーターに取り付け、回転
させつつ有機溶媒を取り除き固形物を形成させた。ここ
に水２００ｍｌを添加し撹拌によって分散させ、さらさ
らした微粒子を含む白色の液体を形成した。これを液体
窒素により凍結させ、凍結乾燥器に装着し、３０時間凍
結乾燥して白色粉末を得た。

【００５０】生成物について〜の項目について評価
を行い、結果を表２に示した。有機溶媒に溶解させたの
ち水添加をしなかったため、リポソーム分散性は悪く、
また３０ｇ／ｄｌのヘモグロビンと混合して押出し法に
よるリポソーム形成試験を試みたが目詰まりを生じ、内
包物質取り込み度の測定はできなかったた。

【００５１】［比較例３］（有機溶媒溶液に水添加せず
溶媒除去、荷電物質：脂肪酸Ｎａ） リポソーム膜構成物質として、ジミリストイルホスファ
チジルコリン２．８９ｇ（４．２６ｍｍｏｌ）、ジパル
ミトイルホスファチジルコリン３．１３ｇ（４．２６ｍ
ｍｏｌ）、コレステロール３．３０ｇ（８．５３ｍｍｏ
ｌ）、パルミチン酸ナトリウム０．６８ｇ（２．４４ｍ
ｍｏｌ）を秤量し、２リットルのナス型フラスコに加え
た。ここにクロロホルム、メタノールからなる比率が
１：２の均一系混合溶媒１００ｍｌを加え加温しながら
完全溶解させた。エバポレーターに取り付け、回転させ
つつ有機溶媒を取り除き固形物を形成した。ここに水２
００ｍｌを添加し撹拌によって分散後、このものを液体
窒素で凍結した。凍結乾燥器に装着し、３０時間凍結乾
燥して白色粉末を得た。

【００５２】生成物について実施例１と同様の評価をし
結果を表２に示した。有機溶媒に溶解させた後、水添加
をしなかったので、混合脂質成分に脂肪酸ナトリウムを
含んでいても、リポソーム分散性は悪く、３０ｇ／ｄｌ
のヘモグロビンと混合して押出し法によるリポソーム形
成試験で目詰まりを生じた。

【００５３】［比較例４］（有機溶媒溶液に水添加せず
溶媒除去、凍結乾燥なし） リポソーム膜構成物質として、ジミリストイルホスファ
チジルコリン２．８９ｇ（４．２６ｍｍｏｌ）、ジパル
ミトイルホスファチジルコリン３．１３ｇ（４．２６ｍ
ｍｏｌ）、コレステロール３．３０ｇ（８．５３ｍｍｏ
ｌ）、パルミチン酸ナトリウム０．６８ｇ（２．４４ｍ
ｍｏｌ）を秤量し、２リットルのナス型フラスコに加え
た。ここにクロロホルム、メタノールからなる比率が
１：２の均一系混合溶媒１００ｍｌを加え加温しながら
完全溶解させた。エバポレーターに取り付け、回転させ
つつ有機溶媒を取り除き固形物を形成した。

【００５４】生成物について〜の項目について評価
を行い、結果を表２に示した。リポソーム分散性は悪
く、３０ｇ／ｄｌのヘモグロビンと混合して押出し法に
よるリポソーム形成試験で目詰まりを生じた。

【００５５】

【表１】

【００５６】

【表２】

【００５７】

【発明の効果】本発明により得られるリポソーム用混合
脂質は水分散性、均一性、品質等に優れ、この混合脂質
を水に分散させることによって品質の良いリポソームが
得られ、押出し法によってもフィルターの目詰まりを起
こすことなく高い取り込み率でヘモグロビン等の内包物
質を取り込むことができるので、ＤＤＳや人工血液等に
広く応用することができる。

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 リポソーム膜構成物質を、水不溶性揮発
   性有機溶媒を含む均一溶媒中に溶解せしめ、これに水ま
   たは水溶液を加えた後、撹はんしながら有機溶媒を留去
   し、残留するリポソーム膜構成物質混合分散水相を凍結
   乾燥させて得られたリポソーム用混合脂質。
2. 【請求項２】 リポソーム膜構成物質がリン脂質成分と
   ステロールとを含むことを特徴とする請求項１記載のリ
   ポソーム用混合脂質。
3. 【請求項３】 リン脂質成分がホスファチジルグリセロ
   ールを含むことを特徴とする請求項２記載のリポソーム
   用混合脂質。
4. 【請求項４】 リポソーム膜構成物質が脂肪酸塩を含む
   ことを特徴とする請求項２記載のリポソーム用混合脂
   質。
5. 【請求項５】 請求項１〜４のいずれかに記載のリポソ
   ーム用混合脂質を水性溶液に分散させてなるリポソーム
   分散液。