JPH0961431A - ヒトヘモグロビンの安定化試薬及び安定化方法 - Google Patents
ヒトヘモグロビンの安定化試薬及び安定化方法Info
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- JPH0961431A JPH0961431A JP24233995A JP24233995A JPH0961431A JP H0961431 A JPH0961431 A JP H0961431A JP 24233995 A JP24233995 A JP 24233995A JP 24233995 A JP24233995 A JP 24233995A JP H0961431 A JPH0961431 A JP H0961431A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 ヒトヘモグロビンを凍結乾燥時及び水溶液中
で安定化し長時間保存可能にする。 【解決手段】 家兎アルブミン、グリシン、アスパラギ
ン酸塩及びグルタミン酸塩から選ばれる少なくとも一つ
の化合物からなる安定化試薬をヒトヘモグロビン含有溶
液中に添加してヒトヘモグロビンを安定化する。
で安定化し長時間保存可能にする。 【解決手段】 家兎アルブミン、グリシン、アスパラギ
ン酸塩及びグルタミン酸塩から選ばれる少なくとも一つ
の化合物からなる安定化試薬をヒトヘモグロビン含有溶
液中に添加してヒトヘモグロビンを安定化する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、家兎アルブミン、
グリシン、アスパラギン酸塩及びグルタミン酸塩から選
ばれた少なくとも一つの化合物からなるヒトヘモグロビ
ンの安定化試薬及びこの化合物をヒトヘモグロビンの含
有溶液中に添加するヒトヘモグロビンの安定化方法に関
する。
グリシン、アスパラギン酸塩及びグルタミン酸塩から選
ばれた少なくとも一つの化合物からなるヒトヘモグロビ
ンの安定化試薬及びこの化合物をヒトヘモグロビンの含
有溶液中に添加するヒトヘモグロビンの安定化方法に関
する。
【０００２】
【従来の技術】便中の潜血は潰瘍、癌腫、結核、赤痢等
の消化管の疾患により引き起こされるため、これらの疾
患の診断に潜血測定が有用である。従来この便潜血の測
定には、便中のヘモグロビンを抗ヒトヘモグロビン抗体
の結合した試薬を用い免疫反応を利用して検出する方法
が、迅速性及び簡便性で優れているため広く行われてい
た。この検出に用いる試薬には、抗ヒトヘモグロビン抗
体の結合した検出試薬とともにヒトヘモグロビンを含む
対照試薬が添付され、この抗体結合試薬の活性の確認に
用いられていた。
の消化管の疾患により引き起こされるため、これらの疾
患の診断に潜血測定が有用である。従来この便潜血の測
定には、便中のヘモグロビンを抗ヒトヘモグロビン抗体
の結合した試薬を用い免疫反応を利用して検出する方法
が、迅速性及び簡便性で優れているため広く行われてい
た。この検出に用いる試薬には、抗ヒトヘモグロビン抗
体の結合した検出試薬とともにヒトヘモグロビンを含む
対照試薬が添付され、この抗体結合試薬の活性の確認に
用いられていた。
【０００３】ヒトヘモグロビンは、α鎖及びβ鎖からな
るポリペプチドが各々２個会合して形成されているため
温度や湿度の変動により容易にこの会合が分解して変性
し、ヒトヘモグロビンの抗原活性が低下することが知ら
れている。そこで対照試薬はヒトヘモグロビンを凍結乾
燥してから保存し、使用時に復元液を添加して測定に用
いられている。この凍結乾燥時には、ヒトヘモグロビン
の変性を防ぐ保護剤として正常家兎血清（ＮＲＳ）、牛
血清アルブミン（ＢＳＡ）等の蛋白質が添加されてい
た。
るポリペプチドが各々２個会合して形成されているため
温度や湿度の変動により容易にこの会合が分解して変性
し、ヒトヘモグロビンの抗原活性が低下することが知ら
れている。そこで対照試薬はヒトヘモグロビンを凍結乾
燥してから保存し、使用時に復元液を添加して測定に用
いられている。この凍結乾燥時には、ヒトヘモグロビン
の変性を防ぐ保護剤として正常家兎血清（ＮＲＳ）、牛
血清アルブミン（ＢＳＡ）等の蛋白質が添加されてい
た。
【０００４】一方便中のヒトヘモグロビンの測定には、
採取した便検体を前記保護剤の入った緩衝液中で保存し
た後、この緩衝液に含まれるヒトヘモグロビンを測定試
薬により行っていた。
採取した便検体を前記保護剤の入った緩衝液中で保存し
た後、この緩衝液に含まれるヒトヘモグロビンを測定試
薬により行っていた。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、これら
の保護剤をヒトヘモグロビンを含む水溶液中に添加して
用いると、時間の経過とともにヒトヘモグロビンの抗原
活性低下が認められ、安定化のための試薬としては満足
することができなかった。そこで、長期間ヒトヘモグロ
ビンを安定化するための試薬が求められていた。
の保護剤をヒトヘモグロビンを含む水溶液中に添加して
用いると、時間の経過とともにヒトヘモグロビンの抗原
活性低下が認められ、安定化のための試薬としては満足
することができなかった。そこで、長期間ヒトヘモグロ
ビンを安定化するための試薬が求められていた。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明者等は鋭意研究を
行った結果、家兎アルブミン、グリシン、アスパラギン
酸塩及びグルタミン酸塩から選ばれる少なくとも一つの
化合物を添加するとヒトヘモグロビンが安定化すること
を見い出し本発明を完成した。
行った結果、家兎アルブミン、グリシン、アスパラギン
酸塩及びグルタミン酸塩から選ばれる少なくとも一つの
化合物を添加するとヒトヘモグロビンが安定化すること
を見い出し本発明を完成した。
【０００７】即ち、本発明はヒトヘモグロビンを含む溶
液中で用いる家兎アルブミン、グリシン、アスパラギン
酸塩及びグルタミン酸塩から選ばれる少なくとも一つの
化合物からなる安定化試薬である。
液中で用いる家兎アルブミン、グリシン、アスパラギン
酸塩及びグルタミン酸塩から選ばれる少なくとも一つの
化合物からなる安定化試薬である。
【０００８】この家兎アルブミンは、家兎血清から周知
の精製操作により単離精製したものが用いられるほか、
市販される各種家兎アルブミンを用いることができる。
またグリシン、アスパラギン酸塩及びグルタミン酸塩は
市販のアミノ酸を用いることができる。アスパラギン酸
塩及びグルタミン酸塩としては、例えばアスパラギン酸
ナトリウム、グルタミン酸ナトリウム等のアルカリ金属
塩を挙げることができる。これらの安定化試薬は、単独
又は混合してヒトヘモグロビンに対して０．１重量％〜
４．０重量％用いることが好ましい。
の精製操作により単離精製したものが用いられるほか、
市販される各種家兎アルブミンを用いることができる。
またグリシン、アスパラギン酸塩及びグルタミン酸塩は
市販のアミノ酸を用いることができる。アスパラギン酸
塩及びグルタミン酸塩としては、例えばアスパラギン酸
ナトリウム、グルタミン酸ナトリウム等のアルカリ金属
塩を挙げることができる。これらの安定化試薬は、単独
又は混合してヒトヘモグロビンに対して０．１重量％〜
４．０重量％用いることが好ましい。
【０００９】一方対照試薬のヒトヘモグロビンは、ヒト
赤血球を溶血しウイリアムズらの方法（Ａｎａｌｙｔｉ
ｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，５４，ｐ１３７−
１４５（１９７３））により取得したものを用いること
ができる。このヒトヘモグロビンは、安定化試薬を含む
緩衝液に分散した後、凍結乾燥することにより対照試薬
を製造することができる。この緩衝液としては、リン酸
緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）等を用いるこ
とができる。緩衝液のｐＨは通常６．０〜８．０であ
る。さらにヒトヘモグロビンを含む便検体は、前記対照
試薬と同様に安定化試薬を含む緩衝液に便等の検体を分
散して保存することができる。
赤血球を溶血しウイリアムズらの方法（Ａｎａｌｙｔｉ
ｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，５４，ｐ１３７−
１４５（１９７３））により取得したものを用いること
ができる。このヒトヘモグロビンは、安定化試薬を含む
緩衝液に分散した後、凍結乾燥することにより対照試薬
を製造することができる。この緩衝液としては、リン酸
緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）等を用いるこ
とができる。緩衝液のｐＨは通常６．０〜８．０であ
る。さらにヒトヘモグロビンを含む便検体は、前記対照
試薬と同様に安定化試薬を含む緩衝液に便等の検体を分
散して保存することができる。
【００１０】さらにこの緩衝液には、所望によりシュク
ロース、ラフィノース等の糖類、エチレンジアミン−
Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジエチレン
トリアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’Ｎ’’，Ｎ’’−五酢酸（Ｄ
ＴＰＡ）、Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）グリ
シン（ＤＨＥＧ）、トランス−１，２−ジアミノシクロ
ヘキサン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸（ＣｙＤＴＡ）
等のキレート化剤、アジ化ナトリウム等の防腐剤等を添
加することもできる。
ロース、ラフィノース等の糖類、エチレンジアミン−
Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジエチレン
トリアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’Ｎ’’，Ｎ’’−五酢酸（Ｄ
ＴＰＡ）、Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）グリ
シン（ＤＨＥＧ）、トランス−１，２−ジアミノシクロ
ヘキサン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸（ＣｙＤＴＡ）
等のキレート化剤、アジ化ナトリウム等の防腐剤等を添
加することもできる。
【００１１】以上の方法により得られたヒトヘモグロブ
リンを含む対照試薬は、抗ヒトヘモグロビン抗体結合固
相を含む間接凝集免疫測定試薬、酵素免疫測定試薬、放
射免疫測定試薬等の各種免疫測定用試薬とともにキット
を構成しヒトヘモグロビンの測定に用いることができ
る。また保存された便検体については、ヘモグロビンの
測定試験等に用いられる。
リンを含む対照試薬は、抗ヒトヘモグロビン抗体結合固
相を含む間接凝集免疫測定試薬、酵素免疫測定試薬、放
射免疫測定試薬等の各種免疫測定用試薬とともにキット
を構成しヒトヘモグロビンの測定に用いることができ
る。また保存された便検体については、ヘモグロビンの
測定試験等に用いられる。
【００１２】
【実施例】以下、実施例により本発明を更に詳細に説明
する。
する。
【００１３】実施例１ 家兎アルブミンを含むヒトヘモ
グロビン対照試薬の製造 ヒトヘモグロビン０．０１ｍｇを０．２５、０．５、
１．０又は２．０重量％の各濃度の家兎アルブミン（Ｍ
ｉｌｅｓ社製）を含む０．３ＭＰＢＳ（ｐＨ７．２）１
００ｍｌに分散し凍結乾燥することによりヒトヘモグロ
ビン対照試薬を得た。
グロビン対照試薬の製造 ヒトヘモグロビン０．０１ｍｇを０．２５、０．５、
１．０又は２．０重量％の各濃度の家兎アルブミン（Ｍ
ｉｌｅｓ社製）を含む０．３ＭＰＢＳ（ｐＨ７．２）１
００ｍｌに分散し凍結乾燥することによりヒトヘモグロ
ビン対照試薬を得た。
【００１４】実施例２ 家兎アルブミンを含むヒトヘモ
グロビン対照試薬の安定性試験 実施例１で製造した各濃度の家兎アルブミンを含むヒト
ヘモグロビン対照試薬に復元液０．５ｍｌを添加し、４
℃、室温（２５℃）又は３７℃で０〜１４日間保存した
後、ヒトヘモグロビン溶液を１００μｌとり間接凝集法
によるヘモグロビン検出試薬（イムディア−ＨｅｍＳｐ
（登録商標），富士レビオ社製）で測定した。その結果
を表１に示す。
グロビン対照試薬の安定性試験 実施例１で製造した各濃度の家兎アルブミンを含むヒト
ヘモグロビン対照試薬に復元液０．５ｍｌを添加し、４
℃、室温（２５℃）又は３７℃で０〜１４日間保存した
後、ヒトヘモグロビン溶液を１００μｌとり間接凝集法
によるヘモグロビン検出試薬（イムディア−ＨｅｍＳｐ
（登録商標），富士レビオ社製）で測定した。その結果
を表１に示す。
【００１５】 表１ ヒトヘモグロビン活性（４℃）（希釈倍率） 家兎アルブミン−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− 濃度（％） ０ １ ３ ５ ７ 10 14（日） −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− ２．０ 256 256 256 256 256 256 256 １．０ 256 256 256 256 256 256 16 ０．５ 256 256 256 256 256 256 16 ０．２５ 256 256 256 256 256 256 16 添加なし 256 256 256 256 256 256 16 −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− ヒトヘモグロビン活性（室温）（希釈倍率） 家兎アルブミン−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− 濃度（％） ０ １ ３ ５ ７ 10 14（日） −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− ２．０ 256 256 256 256 256 256 ND １．０ 256 256 256 16 16 16 ND ０．５ 256 256 16 16 16 16 ND ０．２５ 256 256 16 16 16 − ND 添加なし 256 256 16 16 16 − ND −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− ヒトヘモグロビン活性（３７℃）（希釈倍率） 家兎アルブミン−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− 濃度（％） ０ １ ３ ５ ７ 10 14（日） −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− ２．０ 256 256 256 256 256 16 16 １．０ 256 16 16 16 16 16 16 ０．５ 256 16 16 16 16 − − ０．２５ 256 16 16 − − − − 添加なし 256 16 − − − − − −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− ND：測定実施せず, −：活性なし
【００１６】また、家兎アルブミン（１．０％）、ＢＳ
Ａ（１．０％）又はＮＲＳ（１．０％）を含む緩衝液中
でのヒトヘモグロビンの安定性試験結果を表２に示す。
Ａ（１．０％）又はＮＲＳ（１．０％）を含む緩衝液中
でのヒトヘモグロビンの安定性試験結果を表２に示す。
【００１７】 表２ ヒトヘモグロビン活性（３７℃）（希釈倍率） 添加試薬（添加量） −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− ０ １ ２ ５ （日） −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− 家兎アルブミン（１．０％） ８ ８ ８ ８ ＢＳＡ （１．０％） ８ ８ ４ − ＮＲＳ（１．０％） ８ ４ − − −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− −：活性なし
【００１８】
【発明の効果】本発明は、家兎アルブミン、グリシン、
アスパラギン酸塩及びグルタミン酸塩から選ばれる少な
くとも一つの化合物からなるヒトヘモグロビンの安定化
試薬を提供する。この試薬を用いると凍結乾燥時及び溶
液中で長時間にわたりヒトヘモグロビンを保存すること
ができる。
アスパラギン酸塩及びグルタミン酸塩から選ばれる少な
くとも一つの化合物からなるヒトヘモグロビンの安定化
試薬を提供する。この試薬を用いると凍結乾燥時及び溶
液中で長時間にわたりヒトヘモグロビンを保存すること
ができる。
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成７年１２月２５日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１８
【補正方法】変更
【補正内容】
【００１８】
【発明の効果】本発明は、家兎アルブミン、グリシン、
アスパラギン酸塩及びグルタミン酸塩から選ばれる少な
くとも一つの化合物からなるヒトヘモグロビンの安定化
試薬を提供する。この試薬を用いると凍結乾燥時及び溶
液中で長時間にわたりヒトヘモグロビンを保存すること
ができる。
アスパラギン酸塩及びグルタミン酸塩から選ばれる少な
くとも一つの化合物からなるヒトヘモグロビンの安定化
試薬を提供する。この試薬を用いると凍結乾燥時及び溶
液中で長時間にわたりヒトヘモグロビンを保存すること
ができる。
Claims (6)
- 【請求項１】 家兎アルブミン、グリシン、アスパラギ
ン酸塩及びグルタミン酸塩から選ばれた少なくとも一つ
の化合物からなるヒトヘモグロビンの安定化試薬。 - 【請求項２】 アスパラギン酸塩がアスパラギン酸ナト
リウムである請求項１記載の安定化試薬。 - 【請求項３】 グルタミン酸塩がＬ−グルタミン酸ナト
リウムである請求項１記載の安定化試薬。 - 【請求項４】 家兎アルブミン、グリシン、アスパラギ
ン酸塩及びグルタミン酸塩から選ばれる少なくとも一つ
の化合物をヒトヘモグロビンの含有溶液中に添加するこ
とを特徴とするヒトヘモグロビンの安定化方法。 - 【請求項５】 アスパラギン酸塩がアスパラギン酸ナト
リウムである請求項４記載の安定化方法。 - 【請求項６】 グルタミン酸塩がＬ−グルタミン酸ナト
リウムである請求項４記載の安定化方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP24233995A JP3348573B2 (ja) | 1995-08-29 | 1995-08-29 | ヒトヘモグロビンの安定化試薬及び安定化方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP24233995A JP3348573B2 (ja) | 1995-08-29 | 1995-08-29 | ヒトヘモグロビンの安定化試薬及び安定化方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0961431A true JPH0961431A (ja) | 1997-03-07 |
| JP3348573B2 JP3348573B2 (ja) | 2002-11-20 |
Family
ID=17087731
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP24233995A Expired - Fee Related JP3348573B2 (ja) | 1995-08-29 | 1995-08-29 | ヒトヘモグロビンの安定化試薬及び安定化方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3348573B2 (ja) |
-
1995
- 1995-08-29 JP JP24233995A patent/JP3348573B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3348573B2 (ja) | 2002-11-20 |
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