JP3348573B2 - ヒトヘモグロビンの安定化試薬及び安定化方法 - Google Patents
ヒトヘモグロビンの安定化試薬及び安定化方法Info
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- JP3348573B2 JP3348573B2 JP24233995A JP24233995A JP3348573B2 JP 3348573 B2 JP3348573 B2 JP 3348573B2 JP 24233995 A JP24233995 A JP 24233995A JP 24233995 A JP24233995 A JP 24233995A JP 3348573 B2 JP3348573 B2 JP 3348573B2
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、家兎アルブミン、
グリシン、アスパラギン酸塩及びグルタミン酸塩から選
ばれた少なくとも一つの化合物を含むヒトヘモグロビン
緩衝液を凍結乾燥させた免疫測定用ヒトヘモグロビン対
照試薬、及び免疫測定用ヒトヘモグロビン対照試薬にお
いて、家兎アルブミン、グリシン、アスパラギン酸塩及
びグルタミン酸塩から選ばれた少なくとも一つの化合物
をヒトヘモグロビン緩衝液に添加し、凍結乾燥させるこ
とを特徴とするヒトヘモグロビンの安定化方法に関す
る。
グリシン、アスパラギン酸塩及びグルタミン酸塩から選
ばれた少なくとも一つの化合物を含むヒトヘモグロビン
緩衝液を凍結乾燥させた免疫測定用ヒトヘモグロビン対
照試薬、及び免疫測定用ヒトヘモグロビン対照試薬にお
いて、家兎アルブミン、グリシン、アスパラギン酸塩及
びグルタミン酸塩から選ばれた少なくとも一つの化合物
をヒトヘモグロビン緩衝液に添加し、凍結乾燥させるこ
とを特徴とするヒトヘモグロビンの安定化方法に関す
る。
【０００２】
【従来の技術】便中の潜血は潰瘍、癌腫、結核、赤痢等
の消化管の疾患により引き起こされるため、これらの疾
患の診断に潜血測定が有用である。従来この便潜血の測
定には、便中のヘモグロビンを抗ヒトヘモグロビン抗体
の結合した試薬を用い免疫反応を利用して検出する方法
が、迅速性及び簡便性で優れているため広く行われてい
た。この検出に用いる試薬には、抗ヒトヘモグロビン抗
体の結合した検出試薬とともにヒトヘモグロビンを含む
対照試薬が添付され、この抗体結合試薬の活性の確認に
用いられていた。
の消化管の疾患により引き起こされるため、これらの疾
患の診断に潜血測定が有用である。従来この便潜血の測
定には、便中のヘモグロビンを抗ヒトヘモグロビン抗体
の結合した試薬を用い免疫反応を利用して検出する方法
が、迅速性及び簡便性で優れているため広く行われてい
た。この検出に用いる試薬には、抗ヒトヘモグロビン抗
体の結合した検出試薬とともにヒトヘモグロビンを含む
対照試薬が添付され、この抗体結合試薬の活性の確認に
用いられていた。
【０００３】ヒトヘモグロビンは、α鎖及びβ鎖からな
るポリペプチドが各々２個会合して形成されているため
温度や湿度の変動により容易にこの会合が分解して変性
し、ヒトヘモグロビンの抗原活性が低下することが知ら
れている。そこで対照試薬はヒトヘモグロビンを凍結乾
燥してから保存し、使用時に復元液を添加して測定に用
いられている。この凍結乾燥時には、ヒトヘモグロビン
の変性を防ぐ保護剤として正常家兎血清（ＮＲＳ）、牛
血清アルブミン（ＢＳＡ）等の蛋白質が添加されてい
た。
るポリペプチドが各々２個会合して形成されているため
温度や湿度の変動により容易にこの会合が分解して変性
し、ヒトヘモグロビンの抗原活性が低下することが知ら
れている。そこで対照試薬はヒトヘモグロビンを凍結乾
燥してから保存し、使用時に復元液を添加して測定に用
いられている。この凍結乾燥時には、ヒトヘモグロビン
の変性を防ぐ保護剤として正常家兎血清（ＮＲＳ）、牛
血清アルブミン（ＢＳＡ）等の蛋白質が添加されてい
た。
【０００４】
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、これら
の保護剤をヒトヘモグロビンを含む水溶液中に添加して
用いると、時間の経過とともにヒトヘモグロビンの抗原
活性低下が認められ、安定化のための試薬としては満足
することができなかった。そこで、長期間ヒトヘモグロ
ビンを安定化するための試薬が求められていた。
の保護剤をヒトヘモグロビンを含む水溶液中に添加して
用いると、時間の経過とともにヒトヘモグロビンの抗原
活性低下が認められ、安定化のための試薬としては満足
することができなかった。そこで、長期間ヒトヘモグロ
ビンを安定化するための試薬が求められていた。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明者は鋭意研究を行
った結果、免疫測定用ヒトヘモグロビン対照試薬におい
て、家兎アルブミン、グリシン、アスパラギン酸塩及び
グルタミン酸塩から選ばれた少なくとも一つの化合物を
ヒトヘモグロビン緩衝液に添加し凍結乾燥させると、ヒ
トヘモグロビンが安定化することを見出し、本発明を完
成した。
った結果、免疫測定用ヒトヘモグロビン対照試薬におい
て、家兎アルブミン、グリシン、アスパラギン酸塩及び
グルタミン酸塩から選ばれた少なくとも一つの化合物を
ヒトヘモグロビン緩衝液に添加し凍結乾燥させると、ヒ
トヘモグロビンが安定化することを見出し、本発明を完
成した。
【０００７】即ち、本発明は、家兎アルブミン、グリシ
ン、アスパラギン酸塩及びグルタミン酸塩から選ばれた
少なくとも一つの化合物を含むヒトヘモグロビン緩衝液
を凍結乾燥させた免疫測定用ヒトヘモグロビン対照試薬
である。
ン、アスパラギン酸塩及びグルタミン酸塩から選ばれた
少なくとも一つの化合物を含むヒトヘモグロビン緩衝液
を凍結乾燥させた免疫測定用ヒトヘモグロビン対照試薬
である。
【０００８】この家兎アルブミンは、家兎血清から周知
の精製操作により単離精製したものが用いられるほか、
市販される各種家兎アルブミンを用いることができる。
またグリシン、アスパラギン酸塩及びグルタミン酸塩は
市販のアミノ酸を用いることができる。アスパラギン酸
塩及びグルタミン酸塩としては、例えばアスパラギン酸
ナトリウム、グルタミン酸ナトリウム等のアルカリ金属
塩を挙げることができる。これらは、単独又は混合して
ヒトヘモグロビンに対して０．１重量％〜４．０重量％
用いることが好ましい。
の精製操作により単離精製したものが用いられるほか、
市販される各種家兎アルブミンを用いることができる。
またグリシン、アスパラギン酸塩及びグルタミン酸塩は
市販のアミノ酸を用いることができる。アスパラギン酸
塩及びグルタミン酸塩としては、例えばアスパラギン酸
ナトリウム、グルタミン酸ナトリウム等のアルカリ金属
塩を挙げることができる。これらは、単独又は混合して
ヒトヘモグロビンに対して０．１重量％〜４．０重量％
用いることが好ましい。
【０００９】一方対照試薬のヒトヘモグロビンは、ヒト
赤血球を溶血しウイリアムズらの方法（Ａｎａｌｙｔｉ
ｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，５４，ｐ１３７−
１４５（１９７３））により取得したものを用いること
ができる。さらに、このヒトヘモグロビンを、家兎アル
ブミン、グリシン、アスパラギン酸塩及びグルタミン酸
塩から選ばれた少なくとも一つの化合物を含む緩衝液に
分散し、凍結乾燥することによりヒトヘモグロビン対照
試薬を製造することができる。この緩衝液としては、リ
ン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）等を用い
ることができる。緩衝液のｐＨは通常６．０〜８．０で
ある。
赤血球を溶血しウイリアムズらの方法（Ａｎａｌｙｔｉ
ｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，５４，ｐ１３７−
１４５（１９７３））により取得したものを用いること
ができる。さらに、このヒトヘモグロビンを、家兎アル
ブミン、グリシン、アスパラギン酸塩及びグルタミン酸
塩から選ばれた少なくとも一つの化合物を含む緩衝液に
分散し、凍結乾燥することによりヒトヘモグロビン対照
試薬を製造することができる。この緩衝液としては、リ
ン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）等を用い
ることができる。緩衝液のｐＨは通常６．０〜８．０で
ある。
【００１０】さらにこの緩衝液には、所望によりシュク
ロース、ラフィノース等の糖類、エチレンジアミン−
Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジエチレン
トリアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’Ｎ’’，Ｎ’’−五酢酸（Ｄ
ＴＰＡ）、Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）グリ
シン（ＤＨＥＧ）、トランス−１，２−ジアミノシクロ
ヘキサン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸（ＣｙＤＴＡ）
等のキレート化剤、アジ化ナトリウム等の防腐剤等を添
加することもできる。
ロース、ラフィノース等の糖類、エチレンジアミン−
Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジエチレン
トリアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’Ｎ’’，Ｎ’’−五酢酸（Ｄ
ＴＰＡ）、Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）グリ
シン（ＤＨＥＧ）、トランス−１，２−ジアミノシクロ
ヘキサン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸（ＣｙＤＴＡ）
等のキレート化剤、アジ化ナトリウム等の防腐剤等を添
加することもできる。
【００１１】以上の方法により得られたヒトヘモグロビ
ン対照試薬は、抗ヒトヘモグロビン抗体結合固相を含む
間接凝集免疫測定試薬、酵素免疫測定試薬、放射免疫測
定試薬等の各種免疫測定用試薬とともにキットを構成
し、ヒトヘモグロビンの測定に用いることができる。
ン対照試薬は、抗ヒトヘモグロビン抗体結合固相を含む
間接凝集免疫測定試薬、酵素免疫測定試薬、放射免疫測
定試薬等の各種免疫測定用試薬とともにキットを構成
し、ヒトヘモグロビンの測定に用いることができる。
【００１２】
【実施例】以下、実施例により本発明を更に詳細に説明
する。
する。
【００１３】実施例１ 家兎アルブミンを含むヒトヘモ
グロビン対照試薬の製造 ヒトヘモグロビン０．０１ｍｇを０．２５、０．５、
１．０又は２．０重量％の各濃度の家兎アルブミン（Ｍ
ｉｌｅｓ社製）を含む０．３ＭＰＢＳ（ｐＨ７．２）１
００ｍｌに分散し凍結乾燥することによりヒトヘモグロ
ビン対照試薬を得た。
グロビン対照試薬の製造 ヒトヘモグロビン０．０１ｍｇを０．２５、０．５、
１．０又は２．０重量％の各濃度の家兎アルブミン（Ｍ
ｉｌｅｓ社製）を含む０．３ＭＰＢＳ（ｐＨ７．２）１
００ｍｌに分散し凍結乾燥することによりヒトヘモグロ
ビン対照試薬を得た。
【００１４】実施例２ 家兎アルブミンを含むヒトヘモ
グロビン対照試薬の安定性試験 実施例１で製造した各濃度の家兎アルブミンを含むヒト
ヘモグロビン対照試薬に復元液０．５ｍｌを添加し、４
℃、室温（２５℃）又は３７℃で０〜１４日間保存した
後、ヒトヘモグロビン溶液を１００μｌとり間接凝集法
によるヘモグロビン検出試薬（イムディア−ＨｅｍＳｐ
（登録商標），富士レビオ社製）で測定した。その結果
を表１に示す。
グロビン対照試薬の安定性試験 実施例１で製造した各濃度の家兎アルブミンを含むヒト
ヘモグロビン対照試薬に復元液０．５ｍｌを添加し、４
℃、室温（２５℃）又は３７℃で０〜１４日間保存した
後、ヒトヘモグロビン溶液を１００μｌとり間接凝集法
によるヘモグロビン検出試薬（イムディア−ＨｅｍＳｐ
（登録商標），富士レビオ社製）で測定した。その結果
を表１に示す。
【００１５】 表１ ヒトヘモグロビン活性（４℃）（希釈倍率） 家兎アルブミン−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− 濃度（％） ０ １ ３ ５ ７ 10 14（日） −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− ２．０ 256 256 256 256 256 256 256 １．０ 256 256 256 256 256 256 16 ０．５ 256 256 256 256 256 256 16 ０．２５ 256 256 256 256 256 256 16 添加なし 256 256 256 256 256 256 16 −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− ヒトヘモグロビン活性（室温）（希釈倍率） 家兎アルブミン−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− 濃度（％） ０ １ ３ ５ ７ 10 14（日） −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− ２．０ 256 256 256 256 256 256 ND １．０ 256 256 256 16 16 16 ND ０．５ 256 256 16 16 16 16 ND ０．２５ 256 256 16 16 16 − ND 添加なし 256 256 16 16 16 − ND −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− ヒトヘモグロビン活性（３７℃）（希釈倍率） 家兎アルブミン−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− 濃度（％） ０ １ ３ ５ ７ 10 14（日） −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− ２．０ 256 256 256 256 256 16 16 １．０ 256 16 16 16 16 16 16 ０．５ 256 16 16 16 16 − − ０．２５ 256 16 16 − − − − 添加なし 256 16 − − − − − −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− ND：測定実施せず, −：活性なし
【００１６】また、家兎アルブミン（１．０％）、ＢＳ
Ａ（１．０％）又はＮＲＳ（１．０％）を含む緩衝液中
でのヒトヘモグロビンの安定性試験結果を表２に示す。
Ａ（１．０％）又はＮＲＳ（１．０％）を含む緩衝液中
でのヒトヘモグロビンの安定性試験結果を表２に示す。
【００１７】 表２ ヒトヘモグロビン活性（３７℃）（希釈倍率） 添加試薬（添加量） −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− ０ １ ２ ５ （日） −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− 家兎アルブミン（１．０％） ８ ８ ８ ８ ＢＳＡ （１．０％） ８ ８ ４ − ＮＲＳ（１．０％） ８ ４ − − −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− −：活性なし
【００１８】
【発明の効果】本発明は、家兎アルブミン、グリシン、
アスパラギン酸塩及びグルタミン酸塩から選ばれた少な
くとも一つの化合物を含むヒトヘモグロビン緩衝液を凍
結乾燥させた免疫測定用ヒトヘモグロビン対照試薬を提
供する。この対照試薬は、長期間にわたりヒトヘモグロ
ビンを安定に保存することができる。
アスパラギン酸塩及びグルタミン酸塩から選ばれた少な
くとも一つの化合物を含むヒトヘモグロビン緩衝液を凍
結乾燥させた免疫測定用ヒトヘモグロビン対照試薬を提
供する。この対照試薬は、長期間にわたりヒトヘモグロ
ビンを安定に保存することができる。
フロントページの続き (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) G01N 33/72 G01N 33/96 ＪＩＣＳＴファイル（ＪＯＩＳ)
Claims (6)
- 【請求項１】 家兎アルブミン、グリシン、アスパラギ
ン酸塩及びグルタミン酸塩から選ばれた少なくとも一つ
の化合物を含むヒトヘモグロビン緩衝液を凍結乾燥させ
た免疫測定用ヒトヘモグロビン対照試薬。 - 【請求項２】 アスパラギン酸塩がアスパラギン酸ナト
リウムである請求項１記載のヒトヘモグロビン対照試
薬。 - 【請求項３】 グルタミン酸塩がＬ−グルタミン酸塩ナ
トリウムである請求項１記載のヒトヘモグロビン対照試
薬。 - 【請求項４】 免疫測定用ヒトヘモグロビン対照試薬に
おいて、家兎アルブミン、グリシン、アスパラギン酸塩
及びグルタミン酸塩から選ばれた少なくとも一つの化合
物をヒトヘモグロビン緩衝液に添加し、凍結乾燥させる
ことを特徴とするヒトヘモグロビンの安定化方法。 - 【請求項５】 アスパラギン酸塩がアスパラギン酸ナト
リウムである請求項４記載の安定化方法。 - 【請求項６】 グルタミン酸塩がＬ−グルタミン酸塩ナ
トリウムである請求項４記載の安定化方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP24233995A JP3348573B2 (ja) | 1995-08-29 | 1995-08-29 | ヒトヘモグロビンの安定化試薬及び安定化方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP24233995A JP3348573B2 (ja) | 1995-08-29 | 1995-08-29 | ヒトヘモグロビンの安定化試薬及び安定化方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0961431A JPH0961431A (ja) | 1997-03-07 |
| JP3348573B2 true JP3348573B2 (ja) | 2002-11-20 |
Family
ID=17087731
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP24233995A Expired - Fee Related JP3348573B2 (ja) | 1995-08-29 | 1995-08-29 | ヒトヘモグロビンの安定化試薬及び安定化方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3348573B2 (ja) |
-
1995
- 1995-08-29 JP JP24233995A patent/JP3348573B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0961431A (ja) | 1997-03-07 |
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