JPH09505282A

JPH09505282A - レトロウイルススーパー抗原、スーパー抗原ペプチド及び使用方法

Info

Publication number: JPH09505282A
Application number: JP7512888A
Authority: JP
Inventors: ハワードエム．ジョンソン; バーバラエー．トレス; ジャネットケー．ヤマモト
Original assignee: University of Florida
Current assignee: University of Florida
Priority date: 1993-10-29
Filing date: 1994-10-31
Publication date: 1997-05-27
Also published as: CA2175255A1; WO1995011975A2; WO1995011975A3; US5968514A; EP0730650A1; US5519114A; AU1085595A; KR960705928A

Abstract

(57)【要約】本発明は、新規なスーパー抗原タンパク質、ペプチド及び該スーパー抗原の使用方法に関する。特に、マウス乳癌ウイルス、ネコ免疫不全ウイルス及びヒト免疫不全ウイルス由来のスーパー抗原タンパク質またはペプチドからなるアンタゴニストまたはアゴニストが例示される。該タンパク質またはペプチドはまた、スーパー抗原と結合する抗体を産生し、精製し、検出するのに用いられる。該スーパー抗原及びそれらの対応するペプチドは、分析用途にも治療用途にも適用可能である。

Description

【発明の詳細な説明】レトロウイルススーパー抗原、スーパー抗原ペプチド及び使用方法本発明は、グラント番号AI25904号の国立衛生研究所（National Institute of Health）からの政府支援を受けてなされたものである。政府は、この発明における一定の権利を有している。関連する出願への相互参照本出願は、１９９３年１０月２９日に出願された、現在係属中の出願（出願番号08/145708号）の一部継続出願である。発明の背景通常、ヒトの免疫システムがウィルスや他の微生物によって作られるタンパク質と出会ったとき、Ｔリンパ球として知られる白血球細胞の10,000個のうち多くても一つしか反応しない。しかし、数は少なくても、これらのＴリンパ球は、外部蛋白質又は抗原を、健康な組織を傷つけることなく特異的にターゲットにして攻撃するように編成される。それとは対照的に、スーパー抗原(superantigen)と呼ばれるタンパク質は免疫システムを強く活性化し、非生産的な、もしくは破壊的な免疫反応を起こさせる。スーパー抗原は、知られている中でＴ細胞に対するもっとも強い分裂誘起物質である(Johnson,H.M.,H.I．Magazine［1998］Int．Arch Allergy Appl.Immunol. 87:87-90)。下記のように、これらの独自の抗原が、クラスII主要組織適合抗原（ＭＨＣ）の分子(Carlsonn,R.，H.Fisher，H.O.Sjogren［1988］J.Immunol．14 0:2484-2488; Fleischer,B.,H.Schrezenmeier[1988]J.Exp．Med．167:1697-1707 ; Mollick,J.A.,R.G.Cook,R.R.Rich[1989]Science 244:817-820)に最初に結合して、Ｔ細胞抗原レセプター（ＴＣＲ）にＶ_βに特異的な様式で結合するバイナリー複合体（binary complex）を形成し、Ｔ細胞を刺激する（Janeway,C.A.,J.Y agi,P.J.Conrad,M.E.Katz,B.Jones,S.Vroegop,S.Buxser[1989]Immunol.Rev.107: 61-88;White,J.,A.Herman,A.M.Pullen,R.Kubo,J.W.Kappler,P.Marrack[1989]Cel l56:27-35)。スーパー抗原は、ほとんど現在の感染に対する抵抗には役に立たないが、５つに１つ程度のＴ細胞は活性化することができる。最悪なのは、活性化された細胞のうちのあるものは、宿主の組織をターゲットとした自己免疫反応を起こすことである。時には、スーパー抗原は逆の効果ももたらす。何らかの機構でそれらは活性化した細胞を死ぬように導くのである。研究者達は、最新の公知例(ブドウ球菌エンテロトキシン（ＳＥ_S）と呼ばれる構造的に関連のある蛋白質)のグループから、スーパー抗原に関する多くの知識を集めた。ブドウ球菌エンテロトキシンは、食中毒の４５％ほどの原因とされている。スタフィロコッカスアウレウス(Staphylococcus aureus)なるバクテリアの種が食物にコロニーを作ると、それらはアルファベットでA,B,C,D,Eと現在名付けられている一つかそれ以上のエンテロトキシンを分泌する。ひどく汚染された有毒の食物を摂取した人間は、数時間で、気分が悪くなり、発熱し、吐き気を催す。興味深いのは、感染した患者の腸の組織は、顕微鏡下では実質上普通に見える。唯一の明白な異常は、組織内の白血球の存在である。現在は、エンテロトキシンを血液にさらすことにより、リンパ球の増殖を起こすことが見いだされている。ほんの数百分子の毒素が、通常の億単位の抗原が起こさせる増幅の度合いを越えることができる。その例として、インフルエンザウィルス上の蛋白質がある。より進んだ研究によって、少量のエンテロトキシンは、Tリンパ細胞の一種のヘルパー細胞によって産生されるサイトカインとして知られる化学シグナルを極めて大量に生産することができることが明らかになった。これらのヘルパーＴ細胞は、免疫反応を管理する。ヘルパーＴ細胞は、直接微生物を攻撃することはない。そのかわりに、感染した細胞を殺す細胞傷害性Ｔ細胞と抗原に対して抗体を分泌するＢ細胞との両者を活性化するサイトカインの働きに依存している。１９８０年代半ばまでには、少量のエンテロトキシンＡがTリンパ細胞と混合されると、多くの細胞がインターロイキン-２（IL-2）として知られるサイトカインを大量に産生することは知られていた。また、大量のIL-2を癌の患者に(臨床実験の一環として)投与すると、食中毒と同じ症状を起こしたことが確定された。これらのデータは、エンテロトキシンが、大量のIL-2の生産を刺激することによって人々を病気にさせるということを示唆している。ヘルパーＴ細胞が通常の蛋白質抗原を感知する前に、蛋白質はマクロファージか、他の抗原提示細胞（ＡＰＣ）によって処置されなければならない。これらの細胞は、抗原を取り込み、蛋白質をペプチド鎖にする。提示細胞は、その後ペプチド鎖をクラスII主要組織適合抗原（ＭＨＣ）の分子とともに、細胞表面に並べる。ペプチドは、ＭＨＣ分子の割れ目にはまる。一旦抗原が並べられると、体内にあるいくつかのペプチドと結合可能なレセプターを有するヘルパー細胞が結合する。それぞれのＴ細胞は、一つのペプチド抗原に特異的である。通常の毒素のように、エンテロトキシンスーパー抗原は、ＡＰＣが蛋白質を並べた時だけ、ヘルパーＴ細胞を活性化することができる。その上、提示をするのは、ＭＨＣクラスII分子である。しかし、通常の抗体と異なり、エンテロトキシンはＭＨＣ分子と直接結合する。それらは、ＡＰＣによる吸収と処置を必要としない。また、エンテロトキシンは、ＭＨＣ分子のペプチド感知ポケットの内部の表面と結合せず、その代わりに外部表面に結合する。その後ＭＨＣ分子スーパー抗原複合体は、通常の抗原を包む表面とは異なる部分のＴ細胞受容体と結合する。詳細に述べると、Ｔ細胞受容体は、αとβとの二つの蛋白質鎖から成る。両方の鎖が通常の抗原と結合するときに機能する、構造的にみて不可変な部分と可変な部分とを含む。エンテロトキシンは、可変部のベータ鎖、即ちV-beta(Ｖ_β)領域の中で、通常の抗原に結合するときに機能しない部分と結合すると考えられる。それぞれのエンテロトキシンは、特定のＶ_βのタイプと作用する。例えばあるエンテロトキシンは、５番、12番と番号づけられた複数のものに認知され、他のものは、12、15及び18に認知される。例えば、ＳＥＢはマウスの７や8.1-8.3というＶ_βエレメントを持つＴ細胞に特異的であると証明されていた(Herman,A.,J .W.Kappler,P.Marrack,A.M.Pullen[1991]Ann.Rev.Immunol．9:745-772)。研究者は、特定のタイプを有しているヘルパーＴ細胞の割合はヒトによって異なっていても、それぞれのヒトは３０以下のＶ_βのタイプを有していると推測した。通常の抗原は、その抗原に特異的な限定された数のヘルパー細胞しか活性化することはできない。しかし、あるエンテロトキシンは、Ｔ細胞が選択されたＶ_βタイプを有する限り、多くの（広範な抗原特異性を有する）ヘルパー細胞を何回も活性化することができる。スーパー抗原は時に、免疫システムの過剰を起こすと考えられているが、スーパー抗原が免疫システムを抑制することを示唆するいくつかの証拠がある。スーパー抗原によって活性化されたＴ細胞のクローンは、刺激された後、頻繁に消滅する（枯渇）か、不活性になる（アネルギー）。スーパー抗原のプロトタイプであるブドウ球菌エンテロトキシンは、特定のＴ細胞抗原レセプターＶ_βエレメントを有するＴ細胞を活性化する。それらのＶ_β特異性は、免疫的な病気における、種々のＴ細胞の数の急激な増加、アネルギー、及び消滅と深く関係している。最初の分裂促進の効果がin vivoでブドウ球菌エンテロトキシンＢ(SEB)の投与の後観察されたが、最終的にはＶ_βに特異的な末梢のＴ細胞のクローン全体のアネルギーと消滅とがみられた(Kawake,Y.,A.Ochi[1991]Nature 349:245-248;Kawake ,Y.,A.Ochi[1990]J.Exp.Med.172;1065-1070;Rellahan,B.L.,L.A.Jones,A.M.Krui sbeek,A.M.Fry,L.A.Matis[1990]J.Exp.Med.172:1092-1100)。これまで、スーパー抗原とヘルパーＴ細胞の活動との相互作用が主に注目されてきた。しかし、スーパー抗原がＢ細胞作用を乱すことがある可能性を無視することはできない。ブドウ球菌エンテロトキシンは、当初の免疫の活性の状態によって、時にＢ細胞による抗体産生を促進させ、時には阻害する。促進も抑制も、破壊的でありうる。抗体産生の阻害は、免疫機能を低下させることができる。過剰な産生は、抗体が健康な組織に免疫システムの様々な成分を引き寄せてそれらを結合させ通常の機能を妨げる、免疫複合体の異常を引き起こすことができる。ブドウ球菌エンテロトキシンとクラスII分子との相互作用は、単球によるサイトカイン腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）とインターロイキン１(IL-1)との産生を誘導する(Fisher,H.,M.Dohlsten,U.Andersson,G.Hedlund,P.Ericsson,J.Hansson,H . 137:61)。ＳＥＡとそれと関連のあるＴＳＳＴ−１（toxic shock syndrome toxi n one)とがＴＮＦαとＩＬ−１の強力なインデューサーとなる。これらのスーパー抗原のＭＨＣへの結合は、チロシンキナーゼの活性化と多様な細胞質性蛋白質のリン酸化とモノカイン遺伝子の誘導とを促す単球の膜を通るシグナルを変質させる(Scholl,P.R.,N.Trede,T.A.Chatila,R.S.Geha[1992]J.Immunol．148:2237) 。その後に、モノカインはＴ細胞に作用することができる。例えばＴＮＦαは、ヒトのＴ細胞の増殖をより促進させることができる(Yokota,S.,T.D.Geppert,P.E .Lipsky[1988]J.Immunol．140:531)。IL-2分泌及びIL-2レセプターの発現を増加することにより、IL-1は付加的な促進物質となる。IL-1とＴＮＦαとの両方の分泌に、Ｔ細胞、特にＣＤ４⁺４５ＲＯ⁺メモリーＴ細胞、の存在が要求される可能性がある（Fischer et al.,supra,Gjorloff et al.,supra）。クラスIIＭＨＣ分子と結合する際に作用するスーパー抗原であるＳＥＡの多様なペプチド配列が以前から研究されていた(Pontzer,C.H.,J.K.Russell,H.M.Johnson[1989]J.Immunol ．143:280;Pontzer,C.,J.K.Russell,M.A.Jarpe,H.M.Johnson[1990]Int.Arch.All ergy Appl.Immunol．93:107;Griggs,N.D.,C.H.Pontzer,M.A.Jarpe,H.M.Johnson[ 1992]J.Immunol．148:2516;Grossman,D.,R.G.Cook,J.T,Sparrow,J.A.Mollick,R. R.Rich[1990]J.Exp.Med.172:1831;Grossman,D.,M.Van,J.A.Mollick,S.K.Highlan der,R.R.Rich[1991]J.Immunol．147:3274)。スーパー抗原は、数多くの病理学的な状態と関連性があると推測されてきた。例えば、スーパー抗原によるT細胞のレパートリーの変更は、免疫疾患や自己免疫に大きな影響がある。ある種のＶ_βを有するＴ細胞は、関節炎、狼そう(Iupus )、多発性硬化症など様々な自己免疫状態に於いて関連している。確定はされていないが、スーパー抗原によるＴ細胞の過剰な活性化は、特定の自己免疫疾患に関与すると想像できる。多数のＶ_βに特異的なＴ細胞の集団が関与していることは、自己免疫症の特定の動物モデルを示唆するものである。例えば、実験的アレルギー性脳脊髄炎（ＥＡＥ）は、多発性硬化症の動物モデルである。多発性硬化症（ＭＳ）は、慢性的で、通常障害性の病気で、中枢神経系が攻撃され、神経繊維を包み込んでいる保護的な被覆が害されるものである。ミエリン塩基性蛋白質（ＭＢＰ）とともに注入された後、ＥＡＥは、ＰＬ／ＪマウスのＶ_β8.2⁺，ＣＤ４⁺Ｔ細胞によって引き起こされる。この、ＴＣＲの出現頻度の限られた多様性は、ラットのミエリン塩基性蛋白質で免疫されたＰＬ／ＪマウスのＥＡＥのＶ_β8.2⁺，ＣＤ４⁺Ｔ細胞の関与に影響を与えるものである(Acha-Orbea,H.,D.J.Mitchell,L.Timmerman,D. C.Wraith,G.S.Taush,M.K.Waldon,S.S.Zamvil,H.O.McDevitt,L.Steinman[1988]Ce ll 54:263-273)。近ごろ幾通りもの斬新な免疫学的アプローチで、マウスやラットのＥＡＥや、ＭＲＬ/lprマウスの腎炎性狼そう(lupus nephritis)などの自己免疫症に関連性のあるものの研究がされた。多くは、ＥＡＥに於いてＶ_βのアイソタイプの制限を示したとされるエフェクターＣＤ４⁺Ｔ細胞の機能を阻害する方向に向かっていた。これらのアプローチは、抗ＴＣＲ抗体(Acha-Orbea et al.,supra)、合成ＴＣＲペプチド(Offner,H.,G.A.Hashim,A.A.Vandenbark[1991]Science 251:430- 432)、スーパー抗原処置(Kim,C.,K.A.Siminovitch,A.Ochi[1991]J.Exp.Med.174: 1431-1437)の使用も含んでいる。スーパー抗原は、マウス乳癌ウィルス（ＭＭＴＶ）やエイズを起こ可能性があるヒト免疫不全ウィルス（ＨＩＶ）などのレトロウィルスと関連している。最近ＭＭＴＶの２つの外来系統が、ウィルスのゲノムのスーパー抗原の読み枠（ＯＲＦｓ）の３’ＬＴＲをコードすることが報告された(Pullen,A.M.,Y.Choi,E.Kushni r,J.Kappler,P.Marrack[1992]J.Exp.Med.175:41-47;Choi,Y.,P.Marrack,J.Kappl er[1992]J.Exp.Med 175:847-851)。ＨＩＶゲノムがスーパー抗原をコードする可能性があるとする準備段階の証拠もある。それは、ＨＩＶスーパー抗原が、ＨＩＶウィルスの増殖のためにＣＤ４⁺Ｔ細胞の副次集団をターゲットにする可能性があることを示唆している(Laurence,J.,A.S.Hodtsev,D.N.Posnett[1992]Nature 358:255-259)。ＨＩＶの感染は、in vitro及びin vivoの両方で、スーパー抗原の性質を有する可能性のあるＨＩＶ蛋白質の作用によって、ＣＤ４⁺Ｔ細胞のプログラムされた細胞死(apotosis)のような結果ももたらす(Gougeon,M-L.,L.Mont agnier[1993]Science 260:1269-1270)。ネコ免疫不全ウィルスは、文献の中で多く記述されたレンチウィルスである。例えば「"Identification of Feline Immun odeficiency Virus rev Gene Activity"Kiyomasu,Takahiroら(1991)Journal of Virology 65(8):4539-4542」および、その中で引用されている文献を参照されたい。そこにもヒトスプマレトロウィルス（ＨＳＲＶ）がスーパー抗原を発現するとする推測がなされている(Human Retrovirusの中の“Molecular Biology of th e Spumavirus,”B.R.Cullen,ed,Oxford University Press,Oxford and New York ,1993,pp.205-206)。ＭＭＴＶやＦＩＶを含む多くのウィルスのように、ＨＩＶゲノムは３’ＬＴＲがある。最初の研究では、３’ＬＴＲにあるＯＲＦによってコードされる蛋白質は、ＨＩＶの増殖に負の効果があることを示しており、それ故ネガティブファクター（ＮｅＦ）と名付けられた。ＮｅＦは、25-29ｋＤの蛋白質で、ＨＩＶに感染された細胞の細胞質に位置しているが、細胞膜とも結合している(Allan,J.S., J.E.Coligan,T-H.Lee,M.F.McLane,P.J.Kanki,J.E.Groopman,M.Essex[1985]Scien ce 230:810-813)。レトロウィルスの病原に関して、ＮｅＦの機能について研究がなされた(Laurent,A.G.,A.G.Hovanessian,Y.Riviere,b.Krust,A.Regnault,L.Monta gnier,A.Findeli,M.P.Kieny,B.Guy[1990]J.Gen.Virol.71:2273-2281)。ＮｅＦがスーパー抗原であるということを示す論文はない。発明の概要本発明は、特定のスーパー抗原の蛋白質とペプチドを見出したこと、及び検査試薬としてのこれらの蛋白質とペプチドを使用すること及び免疫反応を調節する方法に関する。詳しくは、本発明は、レトロウィルスのＬＴＲ領域のＯＲＦでコードされるスーパー抗原のに関する。詳細に述べると、ここに例示してあるのは、マウス乳癌ウィルス（ＭＭＴＶ）、ネコ免疫不全ウィルス（ＦＩＶ）、ヒト免疫不全ウィルス−１（ＨＩＶ−１）からのスーパー抗原蛋白質である。発明のさらなる局面は、レトロウィルス由来のスーパー抗原の、特定のスーパー抗原のペプチドの断片の発見である。これらのペプチドのスーパー抗原的な性質は既知のスーパー抗原のレセプター部位に結合可能であること、それらの抗体との反応性がスーパー抗原の程度まで上げられること、またはそれら自身のスーパー抗原の性質である免疫反応を引き出す能力により明示される。例えば、本発明におけるＭＭＴＶ及びＨＩＶから誘導されたスーパー抗原のペプチドは、¹²⁵ Ｉでラベルされたブドウ球菌エンテロトキシンＡ（ＳＥＡ）のクラスIIＭＨＣを有する細胞への結合を、ＭＨＣ分子上のＳＥＡが通常結合する領域に結合することにより、阻害する。ＦＩＶのスーパー抗原のペプチドも、ＦＩＶ感染に関わることで知られる抗体と結合することが見いだされている。本発明の一つの態様として、本発明者らは、本明細書においてＭＭＴＶＯＲＦ(76-119)[配列番号１]と示される、ＭＭＴＶ３’ＬＴＲＯＲＦスーパー抗原から誘導されたスーパー抗原のペプチドを同定した。我々は、ＳＥＡスーパー抗原と同じように、クラスIIＭＨＣ分子のβ鎖の同じ領域にこのペプチドが結合することを見いだした。本明細書に記載されているように、ＭＭＴＶＯＲＦスーパー抗原のペプチドは、in vitroであれそのような反応の必要なときには動物にであれ、免疫反応を誘発するのに有効である。本発明のもう１つの局面は、以前は単離も性質の決定もされていなかったＦＩＶスーパー抗原の発見である。このスーパー抗原は、ＦＩＶウィルスのゲノムの３’ＬＴＲＯＲＦの配列によってコードされる。本発明者らはまた、ＦＩＶワクチンを投与したネコ及びＦＩＶに感染したネコの両者の坑血清と認められる、ＦＩＶの３’ＬＴＲＯＲＦ４から誘導されたＦＩＶＯＲＦ４(1-30)[配列番号10]とＦＩＶＯＲＦ４(21-55)[配列番号11 ]との２つのペプチドを同定した。加えて、ＦＩＶＯＲＦ４(1-30)[配列番号10] ペプチドは、ＦＩＶに感染したネコの血清からウィルス性の中和抗体を純化することのできる、イムノアフィニティー試薬として使用することができる。このように、この発明でのＦＩＶＯＲＦ４スーパー抗原ペプチドは、ＦＩＶを誘発する抗体の発見や、抗ＦＩＶ抗体として使用することができる。これらのペプチドは、免疫反応を強める働きも可能である。本発明におけるＨＩＶ−１スーパー抗原は、スーパー抗原の性質を有すると認識されていなかったＨＩＶ−１ネガティブファクター（ＮｅＦ）蛋白質に相当する。本発明者らは、ＨＩＶ−１ＮｅＦ蛋白質は、ヒトの末梢の単核細胞の速い増殖を誘発し、Ｔ細胞はＮｅＦによってサイトカインを産生するように活性化されることを発見した。また、ヒトのクラスIIＭＨＣに結合する、ここではＨＩＶ− １ＮｅＦ(123-160)[配列番号18]として示されるＨＩＶ−１ＮｅＦ蛋白質のペプチドの断片を同定した。このように、本発明の一態様として、ＮｅＦ蛋白質及びペプチドは、そのような反応の必要なときに動物の免疫反応を活性化させるのに有効である。ペプチドスーパー抗原アゴニストの、Ｔ細胞レパートリーを変化させる能力は、免疫疾患及び自己免疫のような多様な免疫性の病状の治療と関連がある。スーパー抗原の分子全体を使用する免疫療法によって、特定できない効果と好ましくない副作用が生じる可能性がある場合には、スーパー抗原作用に対するペプチドアゴニストやアンタゴニストが、免疫システムの成分をターゲットとし、機能を変化させ、最終的には治療学的な目的を達成できる可能性がある。また、ペプチドはスーパー抗原やスーパー抗原と免疫反応をする抗体の存在を感知する診断の手順の中で使用することができる。図面の簡単な説明図１．MMTV ORFペプチドのマウスA20細胞への競合的結合。競合ペプチドは最終濃度200 μMで用いた。¹²⁵I-SEAは、最終濃度2.5 nMで加えた。競合物質がなければ、¹²⁵I-SEAの結合力は、6,384±400 CPMである。示されているデータは、各回２回反復で３回の独立した実験値のコントロールに対する割合の平均を表したものである。各棒は、SEAのコントロール結合値に対するORFペプチド存在下での結合低減率±標準偏差値を示している。図２．FIV ORF4ペプチドの免疫アフィニティーカラムを用いて精製した抗ペプチド反応抗体による、FIVの中和。FIVをワクチン接種したネコの血清を集めたものから単離した抗体のウイルス中和力価(VN)を、それぞれのFIVペプチド免疫カラムからの流下物と溶出物について示した。図３．FIV（ペタルマ(Petaluma)株）に感染したネコから、感染経過時間(pi) 別に採集された血清プールに対する、異なったFIV ORF4ペプチドのELISA反応性。図４．NeFとSEAに応答したヒト単核細胞の増殖。レプリジェン（Repligen）社とNIHエイズ研究および対照試薬計画（NIH AIDS Research and Reference Reage nt Program)から入手したNeFを、様々な濃度で検定した。すなわち、■30 ng/ml 培養細胞は、培養開始後96時間で採集した。刺激を与えないときの細胞増殖は、 1331±167であった。図５．HIV-1 NeFペプチドによる、¹²⁵I-SEAのRaji細胞またはDRI感染L細胞への結合の阻害。HIV-1 NeFペプチドは最終濃度300 μMで用いられた。¹²⁵I-SEAは、最終濃度2 nMで用いられた。一本の試験管に付き、10⁵個のRaji細胞およびDRI感染 L細胞が用いられた。競合物質がないときの¹²⁵I-SEAのRaji細胞およびDRI感染L 細胞への結合力はそれぞれ31,469±2292と5,708±41 CPMであった。示されているデータは、各回２回反復で３回の独立した実験値のコントロールに対する割合の平均を表したものである。棒は、NeFペプチド±SD存在下でのRaji細胞（■）とDR1感染L細胞（□）への結合を示している。配列の簡単な説明配列番号１は、MMTV ORF(76-119)と命名されたMMTV ORFペプチドのアミノ酸配列である。配列番号２は、MMTV ORF(117-147)と命名されたMMTV ORFペプチドのアミノ酸配列である。配列番号３は、MMTV ORF(142-172)と命名されたMMTV ORFペプチドのアミノ酸配列である。配列番号４は、MMTV ORF(166-195)と命名されたMMTV ORFペプチドのアミノ酸配列である。配列番号５は、MMTV ORF(190-222)と命名されたMMTV ORFペプチドのアミノ酸配列である。配列番号６は、MMTV ORF(220-250)と命名されたMMTV ORFペプチドのアミノ酸配列である。配列番号７は、MMTV ORF(245-276)と命名されたMMTV ORFペプチドのアミノ酸配列である。配列番号８は、MMTV ORF(274-313)と命名されたMMTV ORFペプチドのアミノ酸配列である。配列番号９は、MMTV ORF(76-119)混合体と命名されたMMTV ORF(76-119)［配列番号１］の分断されたアミノ酸配列である。配列番号１０は、FIV ORF4(l-30)と命名されたFIV ORF4ペプチドのアミノ酸配列である。配列番号１１は、FIV ORF4(21-55)と命名されたFIV ORF4ペプチドのアミノ酸配列である。配列番号１２は、FIV ORF4(31-65)と命名されたFIV ORF4ペプチドのアミノ酸配列である。配列番号１３は、FIV ORF4(51-71)と命名されたFIV ORF4ペプチドのアミノ酸配列である。配列番号１４は、HIV-1 NeF(l-38)と命名されたHIV-1 NeFペプチドのアミノ酸配列である。配列番号１５は、HIV-1 NeF(31-65)と命名されたHIV-1 NeFペプチドのアミノ酸配列である。配列番号１６は、HIV-1 NeF(62-99)と命名されたHIV-1 NeFペプチドのアミノ酸配列である。配列番号１７は、HIV-1 NeF(93-132)と命名されたHIV-1 NeFペプチドのアミノ酸配列である。配列番号１８は、HIV-1 NeF(123-160)と命名されたHIV-1 NeFペプチドのアミノ酸配列である。配列番号１９は、HIV-1 NeF(156-186)と命名されたHIV-1 NeFペプチドのアミノ酸配列である。配列番号２０は、HIV-1 NeF(182-206)と命名されたHIV-1 NeFペプチドのアミノ酸配列である。発明の詳細な説明本発明は、ウイルスのスーパー抗原とスーパー抗原ペプチドの新しい組成物とその利用方法に関する。特に、これらのスーパー抗原およびスーパー抗原ペプチドは、いくつかのレトロウイルスの３'端側の末端反復配列(LTR)の中で見つけられてきた。本発明の特異的な態様において、発明者らは、マウス乳癌ウイルス(M MTV)、ネコ免疫不全ウイルス(FIV)およびヒト免疫不全ウイルス(HIV)からスーパー抗原とスーパー抗原ペプチドを発見した。 FIVとHIVからの特異的なスーパー抗原の配列を報告するのは、本発明が初めてである。そして、レトロウイルスからのスーパー抗原ペプチドアンタゴニストとアゴニストが報告されるのも初めてである。ここで説明されるペプチドは、免疫機構の働きを促進するので、特に有用である。糖尿病や多発性硬化症、狼瘡、慢性関節リウマチなどの様々な疾病状態における自己免疫作用に関わるため、本発明のペプチドは、有用な治療剤を提供する。これらのペプチドはまた、自己免疫疾患およびレトロウイルスが誘発する様々な疾患を診断し、治療するのに用いることができる。このペプチドはまた、スーパー抗原活性をもつ蛋白質に対するアンタゴニストを産生するために用いたり、ペプチドが由来したスーパー抗原に特異的に結合するポリクローナル抗体やモノクローナル抗体を作製するのに用いたりできる。本明細書において、「スーパー抗原」という語は、典型的には以下の性質を持った分子を意味するのに用いられる。すなわち、(1)抗原提示細胞(APC)上のクラスIIMHCにMHC分子の抗原結合溝の外側の領域で直接結合する分子で、(2)そこにおいて、スーパー抗原はAPCによる抗原処理を必要とせず、(3)二元複合体としてＴ細胞の抗原受容体にVβ特異的方法で結合し、(4)こうして特異的VβをもつＴ細胞を活性化する。典型的には、スーパー抗原は、クラスIIMHC分子への結合に関して、ブドウ球菌エンテロトキシンと効果的に競合する。本明細書で用いられる場合、「アネルギー」という語は、スーパー抗原に刺激された後、細胞が不活化することをいう。 MMTVスーパー抗原は、MMTVウイルスゲノムの3'末端反復配列(LTR)のオープン・リーディングフレーム(ORF)のなかにコードされている。MMTVスーパー抗原は、４５kDのII型膜内在性蛋白質で、グリコシル化された細胞外Ｃ末端と細胞内Ｎ末端を持つと考えられている(choi,Y.,P.Marrack，J.W.Kappler[1992]J.Exp.Med．17 5:847-851)。後により詳細に説明するように、MMTV ORFスーパー抗原の細胞外部ドメインと推定されるアミノ酸配列に対応するペプチドで、部分的に一致するものが合成された（ここではMMTV ORFと命名する）：MMTV ORF(76-119)[配列番号1 ]、MMTV ORF(117-147)[配列番号2]、MMTV ORF(142-172)[配列番号3]、MMTV ORF( 166-195)[配列番号4]、MMTV ORF(199-222)[配列番号5]、MMTV ORF(220-250)[配列番号6]、MMTV ORF(245-276)[配列番号7]、MMTV ORF(274-313)[配列番号8]。これらのペプチドは表１に示されている。表１に示したペプチドの、200 μMの濃度におけるA20細胞への結合に関して、¹²⁵ I-SEAと競合する能力を測定した。A20細胞は、I-A^dとI-E^dを発現している細胞系である。MMTV ORF(76-119)[配列番号1]は¹²⁵I-SEAの結合を63%ほど減少させる（図１）。その他のMMTV ORFはどれも、測定された濃度では¹²⁵I-SEAの結合を減少させることはできなかった。用量応答を調べると、MMTV ORF(76-119)[配列番号1]ペプチドは、¹²⁵I-SEAのA20細胞への結合を20 μMの低濃度でも約50％減少させた。さらに、MMTV ORF(76-119)[配列番号1]で見られた競合が、ペプチドがA20細胞に直接結合するために起こることを確認するために、放射線免疫アッセイを実施した。¹²⁵I-MMTV ORF(76-119)[配列番号1]は、実際、A20細胞に結合して、標識していないSEAおよびMMTV ORF(76-119)[配列番号1]によって効率よく阻害された。同様に、標識していないSEAおよびMMTV ORF(76-119)[配列番号1]も、¹²⁵I-MMTV ORF(76-119)[配列番号1]と競合し、SEAの方が、より効果的な競合物質であった。SEAは、1.8 μMの濃度で¹²⁵I-MMTV ORF(76-119)[配列番号1]の結合を50％減少させた。これと同じ効果を示すのに、標識していないMMTV ORF(76- 119)[配列番号1]の濃度は25 μMであった。MMTV ORF(76-119)をばらばらにした[ 配列番号9]ペプチドは競合しなかったため、MMTV ORF(76-119)[配列番号1]のA20 細胞への結合が配列特異的であることが示された。毒性ショック症候毒素１(tox in-1)(TSST-1)は¹²⁵I-MMTV ORF(76-119)[配列番号1]と競合せず、ブドウ球菌エンテロトキシンB(SEB)は、SEAより競合効果が低かった。これらのことから、MMT V ORF(76-119)[配列番号1]が、マウスクラスII分子のSEAが結合する領域に結合することが示された。クラスII陽性(A20細胞)とクラスII陰性(L細胞)の細胞系を用いた結合実験から、MMTV ORF(76-119)[配列番号1]ペプチドのクラスII陰性L細胞系への結合は、MM TV ORF(76-119)[配列番号1]のA20細胞への結合に較べると僅かしかないことが分かった。さらに、クラスII抗原に特異的に結合する抗体は、MMTV ORF(76-119)[ 配列番号1]ペプチドがA20細胞に結合するのをかなり強く妨害するが、クラスI M HCに特異的な抗体は、このペプチドの結合を妨害しなかった。ポリクローナルI- A^dおよびIa7抗体を組み合わせて用いると、MMTV ORF(76-119)[配列番号1]のA20細胞への結合は73％減少した。これらの抗体はNIHから入手した。クラスIIMHCのβ鎖の60-90番目のアミノ酸残基に一致するペプチドを用いた競合的放射線免疫アッセイを行なって、MMTV ORF(76-119)[配列番号1]がI-A分子の β1ヘリクス、すなわち、分子上のSEAが結合するのと同じ領域に結合するか否かを直接的に調べた。SEAもMMTV ORF(76-119)[配列番号1]も、全細胞で観察された競合と同じように、I-Aβ^b(60-90)ペプチドへの結合において、¹²⁵I-SEAと¹²⁵I- MMTV ORF(76-119)[配列番号1]の両方と競合した。つまり、これらのデータから、SEAとMMTVのスーパー抗原は起源が異なっているにも関わらず、SEA蛋白もMMTV ORF(76-119)[配列番号1]ペプチドも、マウスクラスIIMHC分子のβ鎖の同一領域に結合することが示され、したがって、MMTV ORFペプチドは免疫反応を調節するための強力な道具であることが示された。本発明はさらに、ネコ免疫不全症ウイルス(FIV)から得たスーパー抗原およびスーパー抗原ペプチドの発見に関する。FIV ORF4は、71アミノ酸残基からなる蛋白質をコードしている。しかし、この遺伝子の蛋白生成物が発現していることは、今まで明らかではなかった。FIVの3’末端反復配列中に見出されたFIV ORF4の全配列に対応する４つの部分一致ペプチドを合成した（本明細書ではFIV ORF4と名付ける）:FIV ORF4(1-30)[配列番号10]、FIV ORF4(21-55)[配列番号11]、FIV ORF4(31-65)[配列番号12]およびFIV ORF4(51-71)[配列番号13]。これらのペプチドを表２に示す。本発明にかかる、各FIV ORF4ペプチドについてELISA法で検定を行い、FIVを接種して、高いウイルス中和力価を持つネコの血清が、ORF4ペプチドの何れかと反応するかを見ようとした。ウイルス接種されたネコの血清は、FIV ORF4(1-30)[ 配列番号10]に高い反応性を示し、FIV ORF4(21-55)[配列番号11]にかなり低い反応を示した。Ｃ末側のペプチドでは、いずれに対しても反応しなかった。同様の反応パターンが、細胞接種されたネコの血清にも見られたが、その反応はウイルス接種されたネコの血清に較べて弱かった。コントロール用のネコのプール血清は、いずれのORF4ペプチドにも反応しなかった。 FIV(ペタルマ株)に感染したネコから、いろいろな感染後経過時間のものを集めたプール血清の反応性を、FIV ORF4ペプチドに関して調べた。４つのFIV ORF4 ペプチドすべてが、この抗血清と反応した。すべてのペプチドに対して感染後10 週間経過したときに、血清の反応はピークを示してから、次第に低下して一定のレベルに落ち着いた。ただし、感染後220週間経過した血清との反応で、FIV ORF 4(1-30)[配列番号10]以外の３つのORF4ペプチドが２次的なピークを示すのが観察された（図３）。本発明は、さらに、ヒト免疫不全ウイルス(HIV-1)のスーパー抗原およびスーパー抗原ペプチドの発見に関する。詳しくは、HIV-1のネガティブ因子(NeF)が、スーパー抗原であることが発見された。HIV-1のNeF蛋白は、ウイルス複製過程の最も初期に合成される蛋白質である。増殖アッセイ法によって、ヒトの末梢性単核細胞(PMNC's)に与える影響を測定するために、HIV-1のNeF蛋白をさまざまな濃度で調べた。細胞培養開始後96時間で測定してみると、細胞の増殖は、基本的なレベルの数倍高くなった（図４）。 MMTVおよびFIVで用いられたのと同じ方法で、HIV-1のNeF蛋白の配列に一致する部分一致ペプチドを合成した（本明細書ではHIV-1 NeFと命名した)。HIV-1 Ne F(1-38)[配列番号14]、HIV-1 NeF(31-65)[配列番号15]、HIV-1 NeF(62-99)[配列番号16]、HIV-1 NeF(93-132)[配列番号17]、HIV-1 NeF(123-160)[配列番号18]、 HI V-1 NeF(156-186)[配列番号19]、HIV-l NeF(182-206)[配列番号20]。これらのペプチドを表３に示す。 HIV-1 NeF(123-160)[配列番号18]ペプチドは、その表面でクラスII MHC分子を発現しているヒト細胞系Raji細胞に対して、¹²⁵I-SEAが結合するのを妨害することが分かった（図５）。検査に蛋白質最高濃度である300 μMで、HIV-1 NeF(123 -160)[配列番号18]ペプチドは、¹²⁵I-SEAがRaji細胞に結合するのを約40％減少させ、SEAと用量依存的に競合した。HIV-1 NeF(1-38)[配列番号14]およびHIV-1 NeF(31-65)[配列番号15]は、ペプチド濃度が300 μMのとき、¹²⁵I-SEAの結合に対して僅かに阻害的効果をもつ。非標識のSEAが、0.2 μMの濃度で¹²⁵I-SEAの結合を50％減少させるが、この減少率はHLA細胞について報告されているSEAのKd値に適合する。 HIV-1 NeF(123-160)[配列番号18]ペプチドについても、Raji細胞に直接結合するか否かについて調査した。非標識のHIV-1 NeF(123-160)[配列番号18]は、30 μMの濃度で¹²⁵I-HIV-1 NeF(123-160)[配列番号18]の結合を50％減少させ、非標識のSEEは、２ μMの濃度で¹²⁵I-HIV-1 NeF(123-160)[配列番号18]の結合を50％減少させる。非標識のSEAは、SEEほどには¹²⁵I-HIV-1 NeF(123-160)[配列番号18 ]の結合を阻害しないが、SEC₁やSEBよりは効果がある。このデータは、HIV-1 Ne F(123-160)[配列番号18]ペプチドが、他のSE結合部位よりも、SEEがクラスII分子に結合する部位に密接した部位で、クラスIIMHC分子に結合するために競合することを示している。¹²⁵I-HIV-1 NeF(123-160)[配列番号18]ペプチドが、Raji 細胞のどのレセプターに結合するのかを判定するために、クラスIとクラスII抗原に特異的なモノクローナル抗体を用いた。HLA-DRに特異的なモノクローナル抗体クローンL243は、¹²⁵I-HIV-1 NeF(123-160)[配列番号18]の結合を35％減少させる。クローンL227から得た抗HLA-DRモノクローナル抗体は、ペプチドの結合を減少させるが、クローンL243ほど有効ではない。クラスI抗原に対する抗体は、¹ ²⁵ I-HIV-1 NeF(123-160)[配列番号18]の結合に影響しなかった。これらの抗体は、ベクトン・ディキンソン社(Moutain View，CA)から入手可能である。これらのデータは、HIV-1 NeF(123-160)[配列番号18]ペプチドが、抗原提示細胞上のスーパー抗原のレセプターとして知られるクラスIIMHC分子に直接結合することを示している。すでに検討したように、NeF蛋白質はPMNC's中で増殖性応答を誘導する。同じ細胞の増殖アッセイ法によって、スーパー抗原が誘導する細胞増殖に対する影響を確かめるために、NeF蛋白質を調べた。NeF(123-160)[配列番号18]とHIV-1 NeF (156-186)[配列番号19]のペプチドが、NeF、SEA、抗IgMおよびConAについて測定された（表４）。 NeF(123-160)[配列番号18]ペプチドは、NeF蛋白質およびSEAで誘導されるPMNC 細胞の増殖を阻害する。しかし、NeF(156-186)[配列番号19]]ペプチドは、NeFや SEAに誘導される細胞増殖をあまり阻害しなかった。どちらのペプチドも、非スーパー抗原試薬の抗IgMやConAで誘導される細胞増殖をほとんど阻害しなかった。これらの結果から、NeFおよびSEAで誘導されるPMNCの増殖は、NeF(123-160)[ 配列番号18]ペプチドを用いて特異的に阻害できることが明らかになった。 NeF蛋白質が細胞増殖を誘導する能力を全ヒトPMNCと分両PMNCについて調べた。ヒトPMNCを精製して抗原提示細胞(APC)とＴ細胞に分画した。APCは抗原処理能を消失させるために、パラホルムアルデヒドで活性化した。そして、NeF蛋白質、ＳEAおよびConAを全PMNC、APCのみ、Ｔ細胞のみ、またはＡPCとＴ細胞の混合液に関して調べた（表５）。 NeF蛋白質、SEAおよびConAはすべて、全PMNC細胞の増殖応答を誘導した。NeF とSEAは、分画精製したＴ細胞の増殖をほどんど誘導しなかった。ConAは分画精製したＴ細胞の増殖を全く誘導しなかった。 APCとＴ細胞を再び混ぜ合わせると、NeFとSEAともに細胞の増殖を誘導する。S EAに較べると、NeFの増殖性のレベルは低いが、全PMNC細胞対再生APC/Ｔ細胞の刺激効果を示す指数の比率は、NeFもSEAもほぼ等しい（それぞれ6.94と6.78）。これらのデータは、SEAなどの他のスーパー抗原と同じように、NeF蛋白質もAPC 存在か下で培養したＴ細胞の増殖を誘導することができ、APCによる抗原処理は必要でないことを明らかにしている。Ｔ細胞の増殖を誘導するのに加えて、スーパー抗原はＴ細胞がインターフェロン・ガンマ(IFNγ)やインターロイキン-２(IL-2)などのリンフォカイン産生するのを誘導する。全PMNCを、NeF蛋白質とSEA、ConAの何れかて処理してから、その培養上清を処理後24時間、48時間、72時間、96時間目に、INFの産生を見るために調査した（表６）。 SEAは72時間後に最大量のIFNを誘導した。NeF蛋白は96時間後に最大量のIFNを誘導した。ConAによる細胞の活性化もIFNγの産生を誘導したが、NeFやSEAの場合よりずっと低いレベルに止まった。 IFNαまたはIFNγ特異的な抗体を用いて、NeFN SEAまたはConAで処理した後のPMNCで誘導されるIFNの型を確認した。誘導を受けた培養上清を抗IFNα抗体で処理しても、サンプルのIFN力価に影響しなかった。一方、抗IFNγ抗体で処理したときは、サンプルのIFN力価はかなり低下した。したがって、NeFとSEAによって誘導される主なIFN活性はIFNγである。Ｔ細胞産物のIFNγが誘導されることで、NeF蛋白のスーパー抗原特性がさらに明らかになる。ペプチドアンタゴニストとアゴニストの発見は、特にＴ細胞の機能にとって、予想外のことであった。作用する条件として、ペプチドはMHCおよびTcRに結合しなければならないため、結合に関して、本来のスーパー抗原分子と競合することになる。全スーパー抗原分子を使うのに較べて、合成ペプチドアゴニストとアンタゴニストを用いることは、副作用がないことや免疫系の構成要素を狙えることなどの利点がある。また、特定のアミノ酸残基を迅速容易に改変して、より効果的なアゴニストとアンタゴニストを作製できる。当業者が容易に認識できるように、レトロウイルスの配列には非常に多数の天然の変異体があり、さらに研究室において当業者によって人工的に作出できる。自然発生した変異体の配列は、ヒトレトロウイルスに関するロスアラモスデータベース(Los Alamos Database on Human Retroviruses)から容易に入手できる。本発明にかかる蛋白質とペプチドは、本明細書で特に例示されなものを包含し、さらにそのあらゆる天然の変異体、および人工的に作出されたあらゆる変異体を含む。特に権利の対象となるのは、レトロウイルスのスーパー抗原配列の保存領域である。本発明にしたがって請求の対象となるペプチドは、本明細書で特に例示されたものの他、本明細書で例示されているペプチドよりも、例えば幾分長かったり短かったりするかもしれないが等価なペプチドを含む。例えば、本明細書の指示に従えば、当業者は容易に、開示したペプチドのどちらかの端に１個から15個以上アミノ酸を加えたり除いたりしたペプチドを作製できるであろう。好ましくは、つけ加えられるアミノ酸は、レトロウイルス蛋白質の本来のアミノ酸と同じである。このような延長したり短縮したペプチドも、当該ペプチドがレトロウイルス蛋白質の全長よりも短いもので、本明細書に例示されたペプチドの生物学的活性と同じように関連した活性を実質的に保持していれば、本発明の範囲に含まれるものとする。例えば、HIV-1 NeF(123-160)[配列番号18]ペプチドを長くするか短くした変異体は、当該変異体が、SEAスーパー抗原がクラスIIMHC分子に結合するのを妨げることができる限り、本発明の範囲内に含まれるものとする。また、本発明の範囲には、アミノ酸置換、付加、欠失された以外には、本明細書に例示されたペプチドと同じアミノ酸配列をもつペプチドで、本明細書で特に例示されているペプチドと同じ関連の生物学的活性を保持している変異体ペプチドが含まれる。例えば、ペプチド中のアミノ酸の保存的置換で、例えば、SEAがクラスIIMHC 分子に結合するのを妨げる能力に影響しないものは、本発明の範囲に含まれるものとする。本明細書において、「ウイルスペプチド」命名法によって名付けられたペプチド、例えば、MMTV ORF(76-119)、FIV ORF(1-30)、HIV-1 NeF(123-160)などは、すでに検討したところにしたがって、特に例示された配列の変異体や断片を含むものと理解さるべきである。本発明はさらに、本明細書で開示されたスーパー抗原およびペプチドをコードする塩基配列を含む。これらの塩基配列は、本明細書に示したペプチド配列を知っていれば、当業者によって容易に構築することができる。当業者には知られているように、遺伝子記号の縮退によって、ある特定のペプチドや蛋白質をコードするさまざまな塩基配列を構築することができる。特定の塩基配列の選択は、例えば、特定の発現系におけるコドン利用に依存して決められる。本発明のNeF蛋白質は、インビトロ(in vitro)またはインビボ(in vivo)でリンパ球増殖応答を誘導することができる。NeF蛋白質はまた、IFNγやIL-2などの医療上重要なサイトカインを産生するリンパ球を活性化するために用いることができる。さらに、本発明のNeFペプチドは、スーパー抗原に対する応答を変更するために用いることができる。好ましい態様において、NeF(123-160)[配列番号18] ペプチドは、リンパ球の活性化を阻害したり、NeFやSEAなどのスーパー抗原によって誘導された細胞増殖を阻害するために用いることができる。NeF(123-160)[ 配列番号18]ペプチドは、また、スーパー抗原によって誘導されるサイトカインやリンフォカインの産生を阻害するために用いるこができる。このように、本発明にかかるNeF蛋白質とペプチドは、動物や人間の医療上重要な状態を扱うときに用いることができる。本明細書で説明された知見を利用すれば、熟練した当業者は、免疫応答を上昇制御したり、抑制制御したりするのに本発明を用いることができる。本明細書で説明されているように、本発明のペプチド配列は、ペプチドアンタゴニストを作製するための基礎になる。これらのアンタゴニストも本発明の範囲に含まれる。レトロウイルスのスーパー抗原の機能を、アゴニスト活性なしに阻害ないし拮抗するには、抗ペプチド抗体またはペプチド自体のアミノ酸残基を改変したものを用いる。特に、ペプチドアンタゴニストを生成させるための生産的な方法は、L-アミノ酸をD-アミノ酸で置換することであった。この方法の有効性は、L-アミノ酸をD-アミノ酸で適当に置換して、特に抗利尿拮抗作用が強くなったアルギニンバソプレシン類似体を生成したときに、特徴的に示された(Manning ,M.,W.H.Sawyer[1985]In: Vasopressin，Schrier,R.W.,ed.,Raven Press，New Y Ork，pp131-144)。さらには、D-アミノ酸置換によって、アンタゴニストを作出するだけでなく、このアンタゴニストを特定の機能だけに向けて設計できる。このターゲッティングの方法は、スーパー抗原が多くの活性をもつため、スーパー抗原拮抗作用に関しては望ましい。アゴニストとアンタゴニストペプチドの結合親和性および特異的活性は、スーパー抗原活性をもつアゴニストおよび/またアンタゴニストペプチドを多価的な形態に化学的合成することで、さらに促進することができる。アンタゴニストになりうるペプチドを作出することは、免疫機能を特異的に操作し、スーパー抗原によって誘発される疾病を予防する上で価値がある。請求の対象となっている発明のさらなる局面は、請求のペプチドを用いて抗体を作製することである。これらの抗体は、当業者に公知の標準的な方法を用いて産生することができる。これらの抗体は、診断用または治療用試薬として用いることができる。例えば、HIV-1 NeF蛋白に結合する抗体は、NeF蛋白の有害な効果を阻害するアンタゴニストとして用いることができる。本発明のスーパー抗原蛋白質と反応する抗体は、粗製混合物から蛋白質を精製するために用いることもできる。本発明はまた、クラスII MHC分子に結合して、レトロウイルスのスーパー抗原またはそのペプチド断片がクラスII MHC分子に結合するのを阻害する抗体を含む。これらの抗体は当業者が普通に用いる方法によって作製することができる。このペプチドは、レトロウイルス感染を防止するためのワクチンとして、非感染の個体に対して役立ち、また、すでにレトロウイルスに感染した者には、レトロウイルス病原の制御に有用な免疫治療用の薬剤として役に立つ。例えば、HIV- 1 NeFスーパー抗原が感染と病態の進行に必要とされる範囲では、NeF活性をもつアンタゴニストは、感染を防ぐだけでなくAIDSの進行の制御に役立つよう利用することができる。このペプチドは、さまざまな病態の治療に用いるだけでなく、血清や他の体液サンプルの中の、レトロウイルスのスーパー抗原蛋白と反応する抗体の存在を検出するのに用いることもできる。例えば、NeFペプチドを、サンプル中にある抗N eF抗体の存在を検出するための標準的なELISAやRIAアッセイで用いることができる。本発明にかかるスーパー抗原蛋白質およびペプチドは、末梢性単核細胞をインビトロで刺激するのに役立つ。これは、例えば、さまざまな診断法において重要なことになりうる。本明細書で提供された知見は、当業者が、他のレトロウイルスのスーパー抗原からアゴニストおよびアンタゴニストペプチドの位置を見つけ出すために用いることができる。材料と方法 NeF蛋白精製NeF蛋白は、三法により得られた。NeF蛋白は、レプリジェン(Cambridge,M A)が９５％以上の精製を達成し、NIH AIDSリサーチ、又はリファレンスリージェントプログラム（Rockville,MD）によって、９０％以上の精製が達成された。 NeF蛋白は、当業者においても組み換え体の産物として得られ、９５％をはるかに上回る精度に精製された。三法からのすべてのNeF蛋白は同等の活性を有していた。試薬 B細胞にEBVを形質転換したラージ（Raji）細胞はDR3,Dw10,DQw1,及びDQw2を発現する。L細胞及び、マウスのA20細胞は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ATCC,Rockville,MD）から得た。 SEAは、トキシンテクノロジー（Sarasota,FL）から得た。ポリミキシンＢは、シグマケミカル社（St.Louis,MO）から得た。精製組み換えNeF蛋白は、リプリゲン社（Cambridge,MA）から得た。ペプチド合成 MMTVスーパー抗原領域と一致する部分のアミノ酸、７６−１１９、１１７−１４７、１４２−１７２、１６６−１９５、１９０−２２２、２２０−２５０、２４５−２７６、及び２７４−３１３を合成した。MMTVのORFのアミノ酸配列は、P ullen,A.M.,Y.Choi,E.Kushnir,J.Kappler,P.Marrack,rらによって決定された[19 92]J.Exp.Med.175:41-47。加えて、アミノ酸７６−１１９の配列の混合物を合成した。MMTVのORF（７６−１９９）[配列番号１]の混合ペプチド配列は、Deverea x,J.,P.Haeberli,O.Smithiesら[1984]Nucleic Acids Res.12:387-395、の一般的に用いられている配列編集プログラムを用いた。 FIV のORF４領域全体と一致する部分のペプチド、アミノ酸１−３０、２１− ５５、３１−６５、及び５１−７１を合成した。FIV ORF4のペプチドのアミノ酸配列は、Olmstead,R.A.,V.M.Hirsch,R.H.Purcell,P.R.Johnsonらによって得られた。[1989]Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86:8088-8092. HIV-1 Nef蛋白全体と一致する部分のペプチド、アミノ酸配列１−３８、３１ −６５、６２−９９、９３−１３２、１２３−１６０、１５６−１８６、及び１８２−２０６を合成した。Nefペプチドのアミノ酸配列はHIV-1のLAV株（この株はHIV LAI 株としてロスアラモスデータベースに登録されている）を基にして、Wain-Hobson,S.,P.Sonigo,O.Danos,S.Cole,M.Alizon によって得られた[198 5]Cell 40:9-17。HIV-1株のNeF蛋白の配列は、ヒトレトロウイルスのロスアラモスデーターベースから得ることができる。すべてのペプチドは、N-(9)フルオレニルメトキシ（Chang,C.D.,J.Meienhofer [1978]Int.J.Peptaide Protein Res.11:246）を用いた、バイオサーチ９５００A T自動ペプチド合成機を用いて合成した。ペプチドを樹脂から解離させるため、トリフルオロ酢酸／エタンジチオール／チオアニソール／アニソールを、９０／３／５／２の割合で用いた。解離させたペプチドは、エーテル及び、酢酸エチル中に溶出し、次いで水に溶出し凍結乾燥した。残った断片化したペプチドを取り除くために水に対して大量に透析した。粗精ペプチドの逆層HPLC解析は、各プロフィールにおいて一つの主要なピークを検出した。故に、さらなる精製の必要はない。これらのペプチドのアミノ酸解析は、理論上のアミノ酸構成と高い一致を示した。放射性ヨウ素化ブドウ球菌エンテロトキシン及び、合成ペプチドは、他の場合同様（Torres,B .A.,N.D.Griggs,H.M.Johnson[1993]Nature 364:152-154）、クロラミンTを用いて放射性ヨウ素化した。一時的にリガンド10μlのクロラミンT(5mg/ml)と、２５マイクリットルの0.5M リン酸カリウム緩衝液中で２分間、５００μCiの Na¹²⁵ I（１５μCi／μg アマシャム社、Arlingon Heights,IL）によって標識した。それぞれ１０μlの重亜硫酸塩ナトリウム（１０mg/ml）、ヨウ化カリウム（７０ mg/ml）及び、BSA（20mg/ml）及び15μlの塩化ナトリウム（４Ｍ）によって反応を中和させた後、５mlのセファロースG-10カラムで、試料を分画した。初めの溶出ピーク中で、最も高い放射活性を示した二つの画分をプールし、放射性標識結合分析に用いた。ブドウ球菌エンテロトキシン及び、合成ペプチドの比活性は、それぞれ、７０−１２０μCi／μg及び、３０−４μCi／μgの範囲であった。クラスII MHC 結合調査結合調査のために、A20細胞を用い、１x10⁶のA20細胞を、非標識の競合物質とともに１．５mlのエッペンドルフチューブ中で４５分間室温でインキュベーションし、続いて、放射性標識したSEs又は、ペプチドを加えた。加えてから４５分後、１０００μlの反応液を、あらかじめ３００μlの結合緩衝液を加えてあるウルトラフリーMC 5 μフィルターユニットに移した。フィルターユニットを１４０００ rpmで２分間遠心し、フィルターユニット中に残留した放射活性をガンマカウンターを用いて測定した。 I-Aペプチドの結合調査のため、合成I-Aβ^b(60-90)ペプチド（0.1M重炭酸塩／炭酸塩緩衝液pH9.6 の溶液、２５μg／ml、２００μl中）は、摂氏４度で６時間５５mm ポリスチレンチューブの１２mm の底部に吸収させた。チューブを３回洗浄し、残った活性部位を０．５％ＢＳＡを含むPBS（２ｍｌ／チューブ）で摂氏４度で一晩ブロックした。３回洗浄を行った後、競合物質（１００μlのPBS /BSA中）を加えて、４時間室温に放置し、続いて、５nM（最終濃度）の¹²⁵I-SEA 又は、¹²⁵I-MMTV ORF (76-119)[配列番号１]ペプチドを各々１００μl加えた。チューブを３回洗浄し、結合した放射活性をガンマカウンターを用いて測定した。ラージ細胞を用いた結合調査のため、１％BSA を含むPBS５０μl中の非放射性標識競合物質（SEs 及びペプチド）を最終指示濃度に達するよう、エッペンドルフチューブに入った１X10⁵のラージ細胞５０μlに加えた。競合物質を、細胞と共に室温で４５分間インキュベートし、続いて放射性標識したSEs又は、ペプチドを加えた。４５分後、細胞を３回洗浄し、沈殿及びチューブの底を切り離した。チューブの底の放射活性を、ガンマーカウンターを用いて測定した。細胞増殖検定健康なボランティアから提供された抹消血を、ヒト抹消単核細胞（PMNC）として用いた。PMNCは、ヒスタパキュ（Histapaque）（シグマ社、St.Louis,MO）を用いた１６００rpm２０分間の密度遠心によって、血液から単離した。単離したP MNCは、RPMI１６４０培養液（J.R．Scientific,Woodland,CA）で３回洗浄し、残留ヒスタパキュを除いた。最終洗浄後、PMNCを５％ウシ胎児血清（Intergen,Pur chase.NY）を含むRPMI 1640中に懸濁した。１ウェル当たり２X10⁵のPMNC及び、精製した。NeF蛋白を３枚の９６ウェルマイクロタイタープレートに最終量0.15m l/ウェルになるように加えた。培養物は５％二酸化炭素中において摂氏３７度でインキュベートした。９６時間目の採取の１８時間前に、培養物に³Hチミジン（³ H-T dR;１μCi／ウェル Amersham Corp.,Arlington Heights.IL）を加えた。細胞は、PHDセルハーベスター（Cambridge,MA）を用いて採取し、蒸留水で洗浄し、³H チミジンの結合を、カウント／分（CPM）としてβシンチレーションカウンターで測定した。すべての実験を三回行った。活性指数は、下記の等式によって算出した。細胞増殖の抑制ヒトPMNCの単離は上述の細胞増殖検定で述べられている。2.8X10⁶ 細胞／ml の細胞５０μlをマイクロタイタープレートのウェルに加えた。マイトジェン、スーパー抗原及び、NeFペプチドを、ウェルに加え、細胞を３７度で総計９６時間インキュベートした。³Hチミジン１μCi／ウェルをインキュベーション開始９０時間後に加え、上述されているようなフィルターペーパー上に採取する前の６時間インキュベーションした。放射活性は液体シンチレーションカウンターを用いて測定し、活性指数を上述のようにして算出した。PMNCの分画／再構築検定 PMNC から、セレクトアフィニティーカラム（Biotex Corporation,Edmonton,A lberta,Canada）を用いて、T細胞を単離した。このカラムは、B細胞及び単球をトラップし、T細胞を素通りさせる。この結果、９５％をはるかに上回るＴ細胞を精製する。T細胞を計数し、マイクロタイタープレートのウェルに、2.8X10⁶細胞／mlを５０μl加えた。抗原提示細胞（APC）は次法によって作成された。同一提供者からのPMNCを１０分間0.8%パラホルムアルデヒドで処理した。パラホルムアルデヒドは、細胞膜を凝固させ、クラスIIＭＨＣ抗原と、スーパー抗原との結合を許すが、抗体結合が、内面化及び進行することを許すものではない。大量に細胞を洗浄し、３７度で１時間インキュベートすることで、過剰のパラホルムアルデヒドを浸出させた。パラホルムアルデヒド処理を行ったAPCは、スーパー抗原を提示するが、特異的抗原は提示しない。このようにパラホルムアルデヒド処理したAPCの使用は、スーパー抗原と、特異抗原の間の認識を可能にする。APCを計数し、マイクロタイタープレートのウェルに2.8X10⁶細胞／mlの細胞を５０μl加えた。マイトジェン及びスーパー抗原を加え、細胞を３７度で総計９６時間インキュベートした。９０時間目に、³Hチミジン（１μCi／ウェル）を加え、細胞をフィルターペーパー上に採取する前の６時間インキュベーションした。放射活性は液体シンチレーションカウンターを用いて測定し、活性指数（SI）を上述のようにして算出した。IFN の誘導検定 PMNC （1X10⁷細胞／mlを１００μl）を２４ウェルプレートで最終液量３００ μlの培養液中において、SEA(100 ng/ml)、NeF(100 ng/ml),及びConA(10μg/ml) の存在下で培養した。培養開始後２４、４８、７２、９６時間目に、１００μl づつサンプルを分取した。IFNの検定は、ヒトWISH細胞に１ウェル当たり約４０P FUを与える水泡性口内炎ウイルスを用いたマイクロプラークリダクション検定法を用いて行った。IFN 1U/ml は、１ウェルあたり５０％に近いPFU の数の減少と同等の濃度と定義する。特異的抗血清との反応が中和されることによって限定されるように、誘導されたIFN活性は、IFN_γとなる。SEA 及びNeFで処理した細胞を培養したサンプルは、抗INFα又は、抗INF_γの１０００の中和ユニットとともに前処理された。対照は培養液のみで処理をおこなった。サンプルはヒトWISH細胞へ移す前に、３７度で１時間インキュベートした。残ったIFN活性を上述のようにして測定した。下記は、本発明の実施に最善の方法を含む手順を説明する実施例である。これらの実施例に限定して解釈されるべきではない。すべてのパーセンテージは対重量であり、すべての溶媒の比率は特別な注意がない限り、量比に関するものである。実施例１クラスII MHC 分子発現細胞へのMMTV ORF ペプチドの量反応性結合細胞表面にクラスII MHC分子を発現させた細胞株への、MMTV ORFペプチドの量反応性結合は、¹²⁵I-SEAを用いた競争阻害法によって評価された。MMTV ORF(76- 119)[配列番号１]ペプチドは、２０μMの濃度において５０％近くのA20細胞と結合する¹²⁵I-SEAを５０％まで減少させる。非標識SEAは、MMTV ORF (76-119)[配列番号１] ペプチドより２０倍も影響を及ぼす競合物である。これは、報告されたSEA のI-E^dに対する結合のKdと矛盾しない。故に、MMTV ORF (76-119))[配列番号１] ペプチドは、A20細胞との結合に関して用量作用法則に従い、SEA と競合する。実施例２クラスII MHC β鎖ペプチドへのMMTV ORF（76-119）[配列番号１ ]ペプチドの結合 I-Aβ^b(60-90)ペプチドと、¹²⁵I-SEA及び、MMTV ¹²⁵I-MMTV ORF(76-119)[配列番号１] ペプチドの直接結合は、競争的放射免疫検定法によって検定された。これは、抗原結合の定法 (Russel,J.K.,C.H.Pontzer,H.M.Johnson[1991]Proc.Natl .Acad.Sci.USA 88:7228-7232)として示されており、SEAとクラスII MHC β鎖の外側のα−ヘリックス領域との結合として示される。この領域はβ鎖の60-90アミノ酸残基によって取り囲まれている。SEA 及び、MMTV ORF (76-119)[配列番号１]と競合する¹²⁵I-SEA 及び¹²⁵I-MMTV ORF (76-119)[配列番号１]はすべての、細胞で見られる競合と類似した方法で、I-Aβ^b（６０−９０）ペプチドと結合する。この結果は、MMTV ORF (76-119)[配列番号１] の結合領域としての、クラスII MHC が示すペプチドとの結合とのデータと矛盾がなくSEA及びMMTV ORF (76-119)[配列番号１]が、クラスII分子のβ鎖と類似した領域と結合することを示している。実施例３ FIV 接種及びFIV 感染ネコからの抗体によるFIV ORF4 ペプチドの検出 FIV接種及びFIV 感染ネコからの抗血清はELISA抗体検出を用いてORF4に反応する抗体の存在を評価した。ネコより得たウイルス接種及び、細胞接種したウイルス中和血清はFIV ORF4(1-30)[配列番号10]及び、FIV ORF4(21-25)[配列番号11] ペプチドに対し反応した。しかしながら、抗血清はFIV ORF4(1-30)[配列番号10] に対し、非常に高い反応性を示した。プールされ、FIV 感染ネコから、様々な時期に抜き取られた抗血清はORF4ペプチドの４つすべてに反応した。感染後約２２０週間目にFIV ORF(1-30)[配列番号10] を除く、すべてのペプチドに対する２回目のピークが観察されたとはいえ、感染後１０週間目に反応のピークが観察された。このデータは、ORF4ペプチド断片に対応するFIV スーパー抗原蛋白が、FIV 接種及びFIV 感染ネコからの抗血清がORF4ペプチドに反応するとき、in vivo において発現することを示唆している。４種のORF 4ペプチドそれぞれのために、イムノアフィニィティーカラムは定法によって調製した。受動免疫化の研究によって感染からネコを保護することを上述した、ウイルス接種ネコから採られ、部分的に精製された抗血清は、特異的ペプチドと反応する抗血清中の抗体の精製をするためのORF４ペプチドイムノアフィニィティーカラムを素通りした。カラムの素通り画分及び溶出の双方をウイルス中和検定によって、活性を検定した。FIV ORF4(1-30)[配列番号１０]ペプチドカラムからの溶出画分に、高いウイルス中和活性が観察された（図２）。他のペプチドカラムからの溶出画分にはウイルス中和活性は含まれず、これらのカラムの素通り画分においてすべてのウイルス中和活性が検出された。このことは、 FIV ORF4ペプチドと反応する抗体及び血清中立抗体の存在との間に、強い相関があることを証明するものである。FIV ORF4(1-30)[配列番号１０]とFIV ORF4(21- 55)[配列番号11]との間に９アミノ酸が重複するため、ウィルス接種ネコ中に存在する、ウイルス中和抗体は明らかにFIV ORF4(1-30)[配列番号１０]のN末端の一部を認識する。実施例４組み換えHIV NeF 蛋白に対するヒト抹消単球細胞の増殖的反応 Nef 蛋白のヒト抹消単球細の増殖に対する効果が調べられた。実験の典型的結果を図４に示した。NeF蛋白の変化に対する細胞増殖の反応は個体ごとに特有であるが、0.3-3μg／μlのNeFでの刺激後４８及び９６時間後に一貫して見ることができた。実施例５ヒトクラスIIＭＨＣ分子発現細胞へのHIV-1NeF (123-160)[配列番号 18]ペプチドとの量反応性結合クラスII MHC分子を発現しているヒト細胞系へのHIV-1 NeFペプチドの量反応性結合は競争的阻害法を用いて検定した。HIV-1 NeF (126-160)[配列番号１８] ペプチドは、¹²⁵I-SEA とラージ細胞の結合を３０μMの濃度時に２０％近く減少させ、３００μMのペプチド濃度ででは４０％近く減少させた。HIV-1 NeF(1-38) [配列番号14]及び、HIV-1 NeF(31-65)[配列番号15]は３００μMのペプチド濃度で、¹²⁵I-SEA とラージ細胞との結合をわずかに減少させた。実施例６ワクチンここで述べられた新規スーパー抗原蛋白及びペプチドが、ワクチンのような免疫原性の構成物に利用可能である。そのような構成物は、人間や動物の投与すると、スーパー抗原を発現しているウイルスの感染に対するヒト又は動物の感受性を減少させる、抗体又は他のスーパー抗原の反応を高める。ワクチンを包含するここで述べたスーパー抗原蛋白およびペプチド、及びその抗原的変異体又は、免役的特性を人工的に作成可能であることは、周知である。例えば、このようなワクチンを注射可能な溶液又は懸濁液として生成することが可能である。固形状から溶液又は懸濁液に変化させ、上述の液体を注射することも可能である。任意の乳状液にすることも可能である。活性を有する抗原性の１つまたは、複数の成分は薬学上許容されうる賦形剤及び、活性成分の融和剤と混合することが可能である。例えば、適当な賦形剤としては、水、塩水、デキストロース、グリセロール、エタノール又は同等のもの、及びそれらの混合物である。加えて、必要であれば本ワクチンは湿潤剤、又は乳化剤、pH緩衝剤、又は水酸化アルミニウム又は、ムラミルジペプチド又はそれらの混合物のような補助物質を少量含むことができる。粘膜に対しては、コレラトキシンサブユニットB又は、作成された類似の抗体のような他の薬剤も用いることが可能である。ペプチドの場合においては、KLHのような大分子又は、しばしば免役力を高める破傷風変性毒素と結合させる。ワクチンは伝統的投与、例えば、皮下または筋内注射よって投与される。加えて、多くは経口投与であるが、座薬を含め適当な他の方法で処方される。座薬においては、伝統的な膠結剤及び担体として、例えばポリアルカリングリコール、又はトリグリセロイドが含まれる。座薬は、活性成分を約0.5% から約10%、好ましくは約１から２%の範囲で含む混合物の形態をとることができる。経口処方は通常、賦形剤として例えば、薬剤品質のマンニトール、ラクトース、スターチ、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウム、及び類似物を使用することができる。これらの構成物は、液状、懸濁液、錠剤、丸剤、カプセル剤、徐放性、又は粉剤で処方され、活性成分を約10%から95%含み、好ましくは約25%から約70%含んだ形態をとることができる。本構成物は、薬学的に許容された塩、酸を加えた塩（ペプチドの遊離アミノ基の形状として）及び、例えば、塩酸又はリン酸といった無機酸、又は例えば酢酸、シュウ酸、酒石酸、マンデ酸といった有機酸というように、中性又は塩としてワクチンを包含した形で処方することができる。遊離カルボニル基とともに塩として、例えばナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、または水酸化鉄といった無機塩として、又はイソプロピルアミン、トリメチルアミン、２−エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカイン、又はそれに類似した物のような有機塩成分としても誘導することができる。ワクチンは一般的に治療目的、望む予防程度に依存して投与量が決定される。活性物質の必要とされる投与量は、現場の判断及び個人の特性に依存する。しかしながら、適当な活性物質の投薬量の範囲は、一人当たり約数μgである。投与計画及び追加抗原刺激は変化可能だが、注射又は他の投与法による一回目の投与から、１から２週間の間をおいて投与するのが典型的である。本明細書において記載された実施例及び態様は、例示のみを目的としており、それについての様々な修飾や改変が当業者に示唆されており、それらは本発明の精神及び範囲並びに添付されたクレームの範囲に含まれるべきものである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＧ０１Ｎ 33/569 9284−4ＣＡ６１Ｋ 39/395 Ｄ // Ａ６１Ｋ 39/395 9162−4ＢＣ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ (72)発明者ヤマモトジャネットケー. アメリカ合衆国フロリダ州ゲインズヴィルエス．ダヴリュウ．62ンドブルヴァード＃7346

Claims

【特許請求の範囲】１．動物の免疫応答を刺激する方法において、レトロウイルススーパー抗原、またはスーパー抗原の特性をもつペプチド断片を含む薬剤組成物を有効用量、該動物に投与することを含む方法。２．請求の範囲１に記載の方法において、スーパー抗原が、MMTVの3'LTRスーパー抗原またはそのペプチド断片である方法。３．請求の範囲２に記載の方法において、該スーパー抗原ペプチドが、主にMM TV ORF(76-119)と命名されたペプチドからなる方法。４．請求の範囲１に記載の方法において、該スーパー抗原が、FIVの3'LTR ORF ４蛋白またはスーパー抗原のペプチド断片を含む方法。５．請求の範囲４に記載の方法において、該ペプチドが、実質的に、FIV ORF4 (1-30)およびFIV ORF4(21-55)と命名されたペプチドを含む群から選択されたペプチドからなる方法。６．請求の範囲１に記載の方法において、該スーパー抗原がHIV-1 3'LTRスーパー抗原またはそのペプチド断片である方法。７．請求の範囲６に記載の方法において、該スーパー抗原がHIV-1 NeF蛋白である方法。８．請求の範囲６に記載の方法において、該スーパー抗原ペプチドが、主に、 HIV-1 NeF(1-38)およびHIV-1 NeF(123-160)と命名されたペプチドを含む群から選択されるペプチドからなる方法。９．レトロウイルスのスーパー抗原蛋白質と反応する抗体を検出する方法において、免疫複合体を形成させるために、該抗体を含んでいると思われる生物サンプルを、スーパー抗原あるいは該スーパー抗原蛋白質のペプチド断片に接触させ、該サンプルに抗体が存在することを検出するために、該免疫複合体の存在を測定することを含む方法。 10．請求の範囲９に記載の方法において、 (a) MMTV ORF(76-119)、FIV ORF4(l-30)、FIV ORF4(21-55)、HIV-1 NeF(1-38 )、HIV-1 NeF(31-65)、HIV-1 NeF(62-99)、HIV-1 NeF(93-132)、HIV-1 NeF(123- 160)、HIV-1 NeF(156-186)、およびHIV-1 NeF(182-206)と命名されたペプチドからなる群から選択されるペプチドを結合した固相を含む免疫吸着剤を、検定すべき生物標本のサンプルと、サンプル中のいかなる反応抗体も免疫吸着剤に結合できる条件下でインキュベートし、該ペプチド断片を、該固相に結合した抗原-抗体複合体形成を誘導するために用いて、免疫吸着剤と抗体の複合体を得ること、 (b) 免疫吸着剤をサンプルから分離すること、 (c) サンプル中に抗スーパー抗原抗体があることを示すものとして、免疫吸着剤に結合した抗体があるか否かを検定すること、の各ステップを含む方法。 11．単離精製されたスーパー抗原、または、実質的にレトロウイルスの3'LTR 配列によってコードされるアミノ酸配列を含むペプチド。 12．請求の範囲11に記載のスーパー抗原において、該ペプチドが、実質的にMM TV ORF(76-119)、FIV ORF4(1-30)、FIV ORF4(21-55)、HIV-1 NeF(1-38)およびHI V-1 NeF(123-160)からなる群から選択されたペプチドからなるスーパー抗原。 13．スーパー抗原または請求の範囲11のペプチドをコードする塩基配列を含む単離されたポリヌクレオチド。 14．レトロウイルスの3'LTR配列にコードされているスーパー抗原蛋白質またはそのペプチド断片に特異的に結合する単離抗体。 15．請求の範囲14による抗体において、HIV-1 NeF蛋白またはそのペプチド断片に特異的に結合する抗体。 16．請求の範囲15による抗体において、HIV-1 NeF(1-38)、HIV-1 NeF(31-65) 、HIV-1 NeF(62-99)、HIV-1 NeF(93-132)、HIV-1 NeF(123-160)、HIV-1 NeF(156 -186)、およびHIV-1 NeF(182-206)と命名されたHIV-1 NeFペプチドからなるグループから選択されるアミノ酸配列に特異的に結合する抗体。 17．IV-1 NeF蛋白の効果を阻害する方法において、NeFアンタゴニストを投与することを含む方法。 18．請求の範囲17による方法において、該アンタゴニストは、HIV-1 NeF蛋白またはそのペプチド断片に対する抗体、HIV-1 NeFペプチドに対する抗体、HIV=1 NeF蛋白をコードするポリヌクレオチドに対するアンチセンス・ポリヌクレオチドあるいはその断片、クラスII MHC分子に結合するがそのようなMHC分子をもつ細胞を活性化しないHIV-1 NeFペプチドおよびペプチド類似体、および、クラスI I MHC分子に結合することによってHIV-1 NeF蛋白がそのような分子に結合するのを阻害する抗体からなる群から選択される方法。 19．請求の範囲18による方法において、HIV-1 NeFペプチドが、HIV-1 NeF(1-3 8)、HIV-1 NeF(31-65)、HIV-1 NeF(62-99)、HIV-1 NeF(93-132)、HIV-1 NeF(123 -160)、HIV-1 NeF(156-186)、およびHIV-1 NeF(182-206)と命名されたHIV-1 NeF ペプチドからなる群から選択されるアミノ酸配列を有するものである方法。 20．薬理学上認容しうる賦形剤に入ったHIV-1 NeF蛋白、その断片または変異体を含む免疫原組成物。 21．請求の範囲20による免疫原組成物において、HIV-1 NeF(123-160)と命名されたペプチドを含む免疫原組成物。 22．動物において、一定のＶ_β型Ｔ細胞レセプターをもつＴ細胞を除去ないし不活化する方法において、レトロウイルスのスーパー抗原またはその断片もしくは変異体でスーパー抗原性を有するものを含む薬剤組成物を、該動物に有効用量投与することを含む方法。 23．請求の範囲22に記載の方法において、該スーパー抗原が、HIV-1 NeF蛋白またはその断片もしくは変異体でスーパー抗原性を有するものを含む方法。