JP2003507011A

JP2003507011A - Ｉｌ−１６拮抗剤

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Publication number: JP2003507011A
Application number: JP2001515701A
Authority: JP
Inventors: デイヴィッドエム．センター、; ウィリアムダブリュー．クリュイクシャンク、; ハーディコーンフェルド、
Original assignee: Research Corp Technologies Inc
Current assignee: Research Corp Technologies Inc
Priority date: 1999-08-05
Filing date: 2000-08-04
Publication date: 2003-02-25
Also published as: CA2378778A1; US6699466B1; US7914778B2; US20110207679A1; US20070031375A1; US20100008936A1; US7608691B2; WO2001010893A3; US20030153504A1; EP1212363A2; US7208149B2; MXPA02001268A; US20120213790A1; CA2378778C; WO2001010893A2

Abstract

(57)【要約】本発明は、ＩＬ−１６のＣ−末端の特異的領域に実質的に対応する配列を持った一連のペプチドがＩＬ−１６の活性を防止しうることを突き止めた。本発明は、この種のＩＬ−１６防止性ペプチド長さ４アミノ酸程度短くしうることを示した。これら知見に基づき、本発明はＩＬ−１６拮抗剤ペプチド並びにたとえば或る種の炎症病のようなＩＬ−１６媒体障害の処置に関するその使用を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】本発明は、ＩＬ−１６拮抗剤およびたとえば或る種の炎症病のようなＩＬ−１
６媒介障害を処置するためのその使用に関するものである。特に本発明は、ＩＬ
−１６のＣ−末端領域と配列が一致するＩＬ−１６拮抗剤ペプチドの発見に関す
るものである。

【０００２】従来、リンパ球ケモアトラクタント（ｃｈｅｍｏａｔｔｒａｃｔａｎｔ）因子
（もしくはＬＣＦ）と呼ばれるインターロイキン−１６（ＩＬ−１６）は、ＣＤ
４^＋Ｔリンパ球を静止させるケモアトラクタント活性を有するプロ（ｐｒｏ−）
炎症性リンホキンである。その後の研究は、ＩＬ−１６が単核細胞、好酸球およ
びプロ−Ｂ細胞を含めＣＤ４^＋標的細胞におけるシグナルトランスダクションを
活性化させると共に、走化性に加え各種の生物学的活性を刺激することを示す。
これら活性には、レトロウィルス複製の阻止［マシアクゼク等、ジャーナル・イ
ミュノロジー、第１５８巻、第５頁（１９９７）；ゾウ等、ネイチャー・メディ
シン、第３巻、第６５９頁（１９９７）およびバイヤー等、ネイチャー、第３７
８巻、第５６３頁（１９９５）］、ＣＤ４^＋Ｔ細胞増殖のためのＩＬ−２Ｒのア
ップレギュレーションおよびＩＬ−２との相乗性［パラダ等、ジャーナル・イミ
ュノロジー、第１６０巻、第２１１５頁（１９９８）］、ＣＤ４^＋プロ−Ｂ細胞
におけるＲＡＧ−１およびＲＡＧ−２発現の誘発［スザボ等、ジャーナル・イミ
ュノロジー、第１６１巻、第２２４８頁（１９９８）］、および混成リンパ球反
応（ＭＬＲ）の一時的阻止［テオドール等、ジャーナル・イミュノロジー、第１
５７巻、第１９５８頁（１９９６）］がある。或る種の人間の病気および実験ネ
ズミモデルの検討は、ＩＬ−１６がＣＤ４^＋Ｔリンパ球および他のＣＤ４^＋細胞
種類の組織再生を特徴とする炎症状態に関与することを示す。ＩＬ−１６が体液
のＥＬＩＳＡおよび／またはビオアッセーにより或いは免疫組織化学およびその
場のハイブリッド化技術により同定されている症状は、気管支喘息［ラヘルゲ等
、アメリカン・ジャーナル・レスピレーション・セル・モレキュラ・バイオロジ
ー、第１７巻、第１９３頁（１９９７）］、炎症性腸病［ケイツ等、ガストロエ
ンテロロジー、第１１２巻、第Ａ１１０頁（１９９７）］、グラベス病［クルイ
クシャンク等、ジャーナル・アレルギー・クリニカル・イミュノロジー、第９９
巻、第５５４頁（１９９７）］、多発性硬化症［ビジソン等、ジャーナル・イミ
ュノロジー、第１５８巻、第３０４６頁（１９９７）］および水胞性類天疱瘡［
センター等、ジャーナル・インベスチゲーション、ダーマトロジー、第８１巻、
第２０４頁（１９８３）］を包含する。さらにＩＬ−１６はリューマチ性関節炎
［クリミューク等、ジャーナル・イミュノロジー、第１６２巻、第４２９３−４
２９９頁（１９９９）］および狼瘡［リー等、ブリティシュ・ジャーナル・リュ
ーマトロジー、第３７巻、第１３３４−１３３７頁（１９９８）］の病因論にも
関与する。従って、炎症病を処置する目的でＩＬ−１６活性を阻害しうる薬剤を
同定および／または生成させることが望ましい。

【０００３】ＩＬ−１６の予想アミノ酸配列は中心ＰＤＺモジュールを含有し、構造的研究
はＩＬ−１６がそれぞれ１７および１４残基の柔軟Ｎ−末端およびＣ−末端テー
ルを有するコアＰＤＺ様構成を取ることを確認している［ムールハーン等、ネイ
チャー・ストラクチャル・バイオロジー、第５巻、第６８２頁（１９９８）］。
ヒトＩＬ−１６の１６Ｃ−末端アミノ酸（Ａｒｇ１０６〜Ｓｅｒ１２１）に対応
する合成オリゴペプチドは、天然もしくは組換ヒトもしくはネズミＩＬ−１６の
ケモアトラクタント活性を阻止すると報告されている［キーネ等、ジャーナル・
イミュノロジー、第１６０巻、第５９４５頁（１９９８）］。

【０００４】本発明は、ＩＬ−１６のＣ−末端の天然もしくは置換配列に対応する一連のペ
プチドがＩＬ−１６活性を阻止しうることを示す。ＩＬ−１６媒介障害を処置す
るのに有用な組成物および方法が、これらペプチドを用いて開発される。

【０００５】本発明の１つの実施形態はＩＬ−１６拮抗剤に向けられる。

【０００６】本発明の他の実施形態はＩＬ−１６拮抗剤ペプチドに向けられる。

【０００７】本発明のＩＬ−１６拮抗剤ペプチドは長さが少なくとも４アミノ酸であり、実
質的にＡｒｇ／Ｌｙｓ−Ａｒｇモチーフを包含するヒトもしくはネズミＩＬ−１
６のＣ−末端配列、すなわちヒトＩＬ−１６のＲ^１０６−Ｒ^１０７、ネズミＩＬ
−１６のＲ^１０３−Ｒ^１０４またはたとえばリスザルからのＩＬ−１６のＫ^１０ ^６ −Ｒ^１０７に対応する。

【０００８】本発明の好適ＩＬ−１６拮抗剤ペプチドはテトラマーペプチドＸ_ａａ０ＲＸ_ａ _ａ１Ｘ_ａａ２（配列ＩＤ番号：１）であり、ここでＸ_ａａ０はＡｒｇもしくは
Ｌｙｓであり、Ｘ_ａａ１およびＸ_ａａ２は任意のアミノ酸とすることができる。
好ましくはＸ_ａａ１およびＸ_ａａ２は哺乳動物ＩＬ−１６の天然配列に見られる
ようなアミノ酸、たとえばＸ_ａａ１につきＬｙｓもしくはＴｈｒおよびＸ_ａａ２につきＳｅｒである。

【０００９】より好ましくはＸ_ａａ０ＲＸ_ａａ１Ｘ_ａａ２は哺乳動物ＩＬ−１６の天然配列
に一致する配列を持ったテトラマー、たとえばＲＲＫＳ（配列ＩＤ番号：２）、
ＲＲＴＳ（配列ＩＤ番号：３）、またはＫＲＫＳ（配列ＩＤ番号：４）である。
一層好ましくは、この種のテトラマーは第１アミノ酸としてＡｒｇを有する。配
列ＩＤ番号：２−４のテトラマーの同族体（ｈｏｍｏｌｏｇ）もしくは類似体（
ａｎａｌｏｇ）も本発明により考えられる。たとえばＲＲＫＳ（配列ＩＤ番号：
２）の類似体はＲＲＡＳ（配列ＩＤ番号：５）およびＲＲＫＡ（配列ＩＤ番号：
６）を包含する。

【００１０】本発明の他の好適なＩＬ−１６拮抗剤ペプチドはＸ_ａａ１Ｘ_ａａ２Ｘ_ａａ０Ｒ
の配列（配列ＩＤ番号：８）を有するテトラマーペプチドであり、ここでＸ_ａ _ａ０はＡｒｇもしくはＬｙｓであり、Ｘ_ａａ１およびＸ_ａａ２は任意のアミノ酸
とすることができる。

【００１１】好ましくはＸ_ａａ１およびＸ_ａａ２は哺乳動物ＩＬ−１６の天然配列に見られ
るようなアミノ酸、たとえばＸ_ａａ１につきＶａｌおよびＸ_ａａ２につきＩｌｅ
もしくはＬｅｕである。

【００１２】より好ましくはＸ_ａａ１Ｘ_ａａ２Ｘ_ａａ０Ｒは哺乳動物ＩＬ−１６の天然配列
に一致する配列を持ったテトラマー、たとえばＶＩＲＲ（配列ＩＤ番号：９）、
ＶＬＲＲ（配列ＩＤ番号：１０）、およびＶＩＫＲ（配列ＩＤ番号：１１）であ
る。一層好ましくは、この種のテトラマーは第１アミノ酸としてＡｒｇを有する
。これらテトラマー（配列ＩＤ番号：９−１１）の同族体もしくは類似体も本発
明により考えられる。

【００１３】更に本発明の他の好適ＩＬ−１６拮抗剤ペプチドはＸ_ａａ１Ｘ_ａａ０ＲＸ_ａａ _２の配列（配列ＩＤ番号：１２）を有するテトラマーペプチドであり、ここでＸ _ａａ０はＡｒｇもしくはＬｙｓであり、Ｘ_ａａ１およびＸ_ａａ２は任意のアミノ
酸とすることができる。

【００１４】好ましくはＸ_ａａ１およびＸ_ａａ２は、哺乳動物ＩＬ−１６の天然配列に見ら
れるようなアミノ酸である。たとえばＸ_ａａ１はＩｌｅもしくはＬｅｕとするこ
とができ、Ｘ_ａａ２はＬｙｓもしくはＴｈｒとすることができる。

【００１５】より好ましくはＸ_ａａ１Ｘ_ａａ２Ｘ_ａａ０ＲはＩＬ−１６の天然配列に一致す
る配列を持ったテトラマー、たとえばＩＲＲＫ（配列ＩＤ番号：１３）、ＩＲＲ
Ｔ（配列ＩＤ番号：１４）、ＬＲＲＫ（配列ＩＤ番号：１５）およびＩＫＲＫ（
配列ＩＤ番号：１６）である。一層好ましくは、この種のテトラマーは第１アミ
ノ酸としてＡｒｇを有する。この種のテトラマーの同族体および類似体も本発明
により考えられる。

【００１６】さらに本発明によれば、ＩＬ−１６拮抗剤ペプチドは、この種の拮抗剤ペプチ
ドが上記テトラマー配列の１つ［すなわちＸ_ａａ０ＲＸ_ａａ１Ｘ_ａａ２（配列Ｉ
Ｄ番号：１）、Ｘ_ａａ１Ｘ_ａａ０ＲＸ_ａａ２（配列ＩＤ番号：８）もしくはＸ_ａ _ａ１Ｘ_ａａ２Ｘ_ａａ０Ｒ（配列ＩＤ番号：１２）］を有する限り並びにおよびこ
の種のペプチドが少なくとも１つのＩＬ−１６生物学的活性に拮抗する限り、テ
トラマーよりも長くすることができる。

【００１７】本発明の任意の上記ＩＬ−１６拮抗剤ペプチドをコードする核酸分子、この種
の任意の核酸分子を含む発現ベクター並びにこの種のヌクレオチド配列もしくは
ベクターを含有する関連宿主細胞も本発明により考えられる。

【００１８】他面において本発明は、本発明のＩＬ−１６拮抗剤ペプチドに向けられる抗体
をも提供する。

【００１９】好ましくは本発明の抗体は、配列が哺乳動物ＩＬ−１６蛋白質の対応配列に一
致するＩＬ−１６拮抗剤ペプチドに対し育成され、これら抗体はＩＬ−１６の活
性に拮抗し或いはこれを中和する。ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗
体の両者も本発明により考えられる。

【００２０】本発明のモノクローナル抗体の機能的誘導体も考えられ、本発明のｍＡｂｓの
Ｆａｂ、Ｆａｂ′、Ｆ（ａｂ′）_２、単鎖抗体、ヒト適用抗体などを包含する。

【００２１】本発明の関連する形態は、この種のペプチドをイミュノゲンとして使用するこ
とによる本発明のＩＬ−１６拮抗剤ペプチドに特異的な抗体の育成方法に向けら
れる。

【００２２】他の実施形態において本発明は、ＩＬ−１６拮抗剤ペプチドもしくは抗体の１
種もしくはそれ以上と医薬上許容しうるキャリアとを含む医薬組成物を提供する
。本発明の医薬組成物はさらに、たとえば既知抗炎症剤（たとえば抗−ＣＤ４抗
体、抗−ＴＮＦα抗体、ＮＳＡＩＤＳ、ステロイド、サイクロスポリン−Ａもし
くは細胞毒性剤）のような他の適する活性成分をも含みうる。

【００２３】本発明は他面においてＩＬ−１６とＩＬ−１６リセプタとの相互作用もしくは
結合を、本発明により考えられるＩＬ−１６拮抗剤を用いて阻止、遮蔽または防
止する方法を提供する。

【００２４】他面において本発明は、治療上有効量の本発明の医薬組成物を投与することに
よる患者におけるＩＬ−１６媒介障害の処置方法をも提供する。特に、本発明の
方法を用いて処置しうるＩＬ−１６媒介障害は喘息、リューマチ様関節炎、炎症
性腸病、グレーブス病、多発性硬化症、狼瘡および水胞性類天疱瘡を包含する。

【００２５】図１は、阻止研究につき使用されるＩＬ−１６およびペプチドの構造を図示す
る。成熟ＩＬ−１６（カスペース−３開裂によりプロ−ＩＬ−１６から放出）は
、それぞれ１７および１４残基のＮ−末端およびＣ−末端テール（クロスハッチ
）により整列した中心ＰＤＺ様ドメインよりなる１２１アミノ酸ポリペプチドで
ある。位置１０６および１０７におけるアルギニン残基はＰＤＺドメインの境界
内にある。天然末端配列をカーツーンの下に示す。Ａｒｇ^１０６からＳｅｒ^１２ ^１までの示したＣ−末端配列に対応するオリゴペプチドを作製した。天然配列の
アラニン置換基で作製されたペプチドを肉太活字で示す。

【００２６】図２は、Ｃ−末端ペプチドの存在下もしくは不存在下にてヒトＴリンパ球を用
いる走化性分析におけるＣ−末端ペプチドによるＩＬ−１６刺激Ｔ細胞運動の阻
止を示す。（Ａ）天然ＩＬ−１６配列に対応するオリゴペプチドによるＩＬ−１
６阻止。ペプチドを用い或いはペプチドなしに１０^−９Ｍ（実線）、１０^−１０Ｍ（空線）および１０^−１１Ｍ（クロスハッチ線）の濃度におけるｒＩＬ−１６
に応答する細胞移動を、比較緩衝剤（１００％として考える）に応答する細胞移
動と比較した。示したペプチドのそれぞれを１０μｇ／ｍｌにて添加した。１０
個の高出力フィールドを計数すると共に、各状態につき平均を得た。その結果を
、３種の実験につき平均％比較移動±ＳＥＭとして現す。比較条件と実験条件と
の間の比較をスチューデントｔ試験により解析した。星印はペプチドの存在下も
しくは不存在下における示したＩＬ−１６濃度でのＴ細胞移行の統計的有意差（
Ｐ＜０．０５）を示す。（Ｂ）アラニン置換基を有するオリゴペプチドによるＩ
Ｌ−１６阻止。結果を４種の実験につき平均％比較移動±ＳＥＭとして現す。

【００２７】図３は、ペプチドによるＩＬ−１６の特異的阻止を示す。Ｔ細胞をｇｐ１２０
もしくはＬｅｕ３ａにより０．５μｇ／ｍｌ（実線）、１．０μｇ／ｍｌ（空線
）および５．０μｇ／ｍｌ（クロスハッチ線）にて、示したようにペプチドＲＲ
ＫＳ（１０μｇ／ｍｌ）の存在下もしくは不存在下で刺激した。結果を３種の実
験につき平均％比較移動±ＳＥＭとして現す。

【００２８】図４は、ＰＣＲ突然変異により発生すると共に大腸菌にて生成された組換ＩＬ
−１６突然変異体の組成を図示する。天然Ｎ−末端およびＣ−末端配列を中心Ｐ
ＤＺ−様コアに整列するクロスハッチ線として現す。１２もしくは１６Ｃ−末端
残基および１２もしくは２２Ｎ−末端残基の欠失を図面に示す。単一アラニン置
換を有する突然変異体をも示す。

【００２９】図５は、突然変異ｒＩＬ−１６のケモアトラクタント活性を示す。（Ａ）Ｃ−
末端およびＮ−末端欠失突然変異。試験したｒＩＬ−１６の濃度は１０^−８Ｍ（
実線）、１０^−９Ｍ（空線）、１０^−１０Ｍ（クロスハッチ線）および１０^−１ ^１Ｍ（点線）を包含した。（Ｂ）Ｃ−末端ポイント突然変異を有するＩＬ−１６
構成体のケモアトラクタント活性。ＩＬ−１６ポイント突然変異はアラニンに対
するＡｒｇ^１０６プラスＡｒｇ^１０７（ＩＡＡＫ）、アラニンに対するＡｒｇ^１ ^０７（ＩＲＡＫ）またはアラニンに対するＡｒｇ^１０６（ＩＡＲＫ）を包含した
。

【００３０】図６は、天然および突然変異ｒＩＬ−１６のウェスタン・ブロット分析を示す
。天然ｒＩＬ−１６およびＣ−末端ＩＬ−１６欠失突然変異蛋白質をＳＤＳ／Ｐ
ＡＧＥにより解像すると共に、エレクトロブロッチングによりニトロセルロース
に移行させた。二反復ブロットをポリクローナルウサギ抗−ＩＬ−１６（上側パ
ネル）またはモノクローナル抗−ＩＬ−１６（ｍＡｂ１７．１；下側パネル）で
検査し、ＨＲＰ−抱合第２Ａｂで検出し、化学蛍光により可視化させた。Ｃ−４
欠失（レイン１）、Ｃ−８（レイン２）、Ｃ−１２（レイン３）、Ｃ−１６（レ
イン４）、天然ｒＩＬ−１６（レイン５）。

【００３１】図７は、天然ｒＩＬ−１６もしくはＣ−末端ポイント突然変異を有するｒＩＬ
−１６によるＭＬＲの阻止を示す。刺激細胞は、ミトマイシンＣで予備処理され
たＰＢＭＣで構成した。応答細胞は、異なるドナーから単離されると共に比較緩
衝剤で培養された（ＩＬ−１６なし）或いは１０^−８Ｍ（黒線）、１０^−９Ｍ（
空線）、１０^−１０Ｍ（クロスハッチ線）もしくは１０^−１１Ｍ（点線）にて天
然もしくは突然変異ｒＩＬ−１６で予備処理されたＴリンパ球とした。ＩＬ−１
６ポイント突然変異はアラニンに対するＡｒｇ^１０６プラスＡｒｇ^１０７（ＩＡ
ＡＫ）、アラニンに対するＡｒｇ^１０７（ＩＲＡＫ）またはアラニンに対するＡ
ｒｇ^１０６（ＩＡＲＫ）を包含した。これら培養物を［^３Ｈ］チミジンにより５
日目に処理すると共に、６日目にシンチレーショングラフのため回収した。結果
を３種の実験につき平均ｃｐｍ（バックグラウンドを除く）±ＳＤとして現す。

【００３２】図８は、ＩＬ−１６欠失突然変異体によるＭＬＲの阻止を示す。応答細胞を比
較緩衝液（ＩＬ−１６なし）にて予備培養し、或いは（１０^−８Ｍ〜１０^−１１Ｍの）天然ｒＩＬ−１６により或いはｒＩＬ−１６欠失構成体Ｃ−１２、Ｃ−１
６、Ｎ−１２、Ｎ−２２、Ｃ−１６プラスＮ−１２またはＣ−１６プラスＮ−２
２により予備処理した。星印は天然ｒＩＬ−１６もしくは突然変異ｒＩＬ−１６
により同一濃度で予備処理された各細胞を比較する平均ｃｐｍにおける有意差（
Ｐ＜０．０５）を示す。

【００３３】図９は、各動物種からのＩＬ−１６配列を示す。アフリカミドリザル、アカゲ
ザルおよびマンゲビーからのＩＬ−１６配列は同一である。Ａｒｇ／Ｌｙｓ−Ａ
ｒｇモチーフに下線を施す。

【００３４】本発明によれば、実質的にＩＬ−１６のＣ−末端の特異的領域に対応する配列
を持った一連のペプチドはＩＬ−１６の活性を阻止しうることを突き止めた。驚
くことに本発明者等は、この種のＩＬ−１６阻止性ペプチドを長さ４アミノ酸程
度に短くしうることを突き止めた。

【００３５】従って本発明は、ＩＬ−１６拮抗剤に向けられる。「ＩＬ−１６拮抗剤」とい
う用語は、たとえばＩＬ−１６リセプタ（たとえばＣＤ４リセプタ）に対するＩ
Ｌ−１６の相互作用もしくは結合を阻害、遮蔽または防止することにより、少な
くとも１つのＩＬ−１６媒介生物学的活性の停止を阻止、抑制または生ぜしめる
任意の分子を意味する。

【００３６】ここで用いる「ＩＬ−１６媒介生物学的活性」は、たとえばＣＤ４^＋Ｔ細胞の
ようなＣＤ４^＋細胞の走化性、レトロウィルス複製の阻止（たとえば感染ＰＢＭ
ＣにおけるＨＩＶおよびＳＩＶの阻止）、ＣＤ４^＋Ｔ細胞の上のＩＬ−２Ｒのア
ップレギュレーション、ＣＤ４^＋Ｔ細胞増殖につきＩＬ−２との相乗性、ＣＤ４ ^＋プロ−Ｂ細胞におけるＲＡＧ−１およびＲＡＧ−２発現の誘発、および混成リ
ンパ球反応（ＭＬＲ）の阻止を包含する。これらＩＬ−１６媒介生物学的活性は
クルイクシャルク等［プロシーディング・ナショナル・アカデミー・サイエンス
、ＵＳＡ、第９１巻、第５１０９−５１１３頁（１９９４）；マシアスゼク等、
ジャーナル・イミュノロジー、第１５８巻、第５頁（１９９７）、ゾウ等、ネイ
チャー・メジスン、第３巻、第６５９頁（１９９７）およびバイヤー等、ネイチ
ャー、第３７８巻、第５６３頁（１９９５）；パラダ等、ジャーナル・イミュノ
ロジー、第１６０巻、第２１１５頁（１９９８）；スザボ等、ジャーナル・イミ
ュノロジー、第１６１巻、第２２４８頁（１９９８）；およびテオドール等、ジ
ャーナル・イミュノロジー、第１５７巻、第１９５８頁（１９９６）］によりそ
れぞれ記載された分析を用いて決定することができる。

【００３７】ＩＬ−１６拮抗剤は２つの方法で機能する。拮抗剤は細胞表面リセプタにつき
ＩＬ−１６と競合することにより、ＩＬ−１６リセプタに対するＩＬ−１６の結
合を阻止、遮蔽もしくは防止することができる。この種類の拮抗剤（すなわちリ
セプタを結合するがシグナルトランスダクションを始動させない）はここでは「
競合性拮抗剤」とも称され、本発明の特徴である。代案としてＩＬ−１６拮抗剤
はＩＬ−１６リセプタに対するＩＬ−１６の結合を実質的に阻止、遮蔽もしくは
防止するのに充分な親和性および特異性を有するＩＬ−１６に結合し或いは隔絶
することができることにより、たとえばＴ−細胞走化性のような少なくとも１つ
のＩＬ−１６媒介生物学的活性の停止を阻止、抑制もしくは生ぜしめる。この種
類のＩＬ−１６拮抗剤は「隔絶性拮抗剤」とも呼ばれる。

【００３８】本発明によれば、好適ＩＬ−１６拮抗剤はペプチド（ここでは「ＩＬ−１６拮
抗剤ペプチドと称する」）および抗体を包含する。

【００３９】本発明によれば、ＩＬ−１６拮抗剤ペプチドは長さが少なくとも４アミノ酸で
あり、Ａｒｇ／Ｌｙｓ−Ａｒｇモチーフを包囲するヒトもしくはネズミＩＬ−１
６のＣ−末端配列、すなわちヒトＩＬ−１６のＲ^１０６−Ｒ^１０７、ネズミＩＬ
−１６のＲ^１０３−Ｒ^１０４またはリスザルおよびアオツス・トリビルガツスか
らのＩＬ−１６のＫ^１０６−Ｒ^１０７に実質的に対応する。アミノ酸の番号付け
は、ＩＬ−１６の熟成分泌型の配列に従って規定される。ヒトおよびマウスから
の熟成ＩＬ−１６の配列はキーネ等により記載されている［ジャーナル・イミュ
ノロジー、第１６０巻、第５９４５−５９５４頁（１９９８）］。図９をも参照
されたい。アフリカミドリザル、アカゲザル、マンゲビー、ゼブ、マッカク、リ
スザルおよびオアツス・トリビルガツスからの全長プロ−ＩＬ−１６の配列はウ
ェブサイトｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／Ｅｎｔ
ｒｅｚ／ｐｒｏｔｅｉｎ．ｈｔｍｌにてジェンバンク・データベースにより公開
されている。これら動物種からの熟成ＩＬ−１６の予想配列をも図９に含ませる
。

【００４０】「実質的に対応する」という用語は、Ａｒｇ／Ｌｙｓ−Ａｒｇモチーフを包囲
するヒトもしくはネズミＩＬ−１６のＣ−末端領域の天然配列に同一である配列
を持ったペプチド、並びにこの種のペプチドの同族体および類似体を意味する。

【００４１】「同族体」という用語は、この種の同族体ペプチドがＩＬ−１６拮抗剤特性を
保持する限り、ヒトもしくはネズミＩＬ−１６に対し全蛋白質（すなわち成熟蛋
白質）レベルにて実質的に相同である他の哺乳動物種のＩＬ−１６蛋白質からの
対応ペプチドを意味する。哺乳動物種はアフリカミドリザル、アカゲザル、マン
ゲビー、ゼブ、マッカク、リスザルおよびオアツス・トリビルガツスを包含しう
る。本発明によれば、アフリカミドリザル、アカゲザルおよびマンゲビーからの
ＩＬ−１６配列は同一であって、ヒトＩＬ−１６に対し約９５％の相同性を有す
ると共にネズミＩＬ−１６に対し約８２．１％の相同性をそれぞれ有する。

【００４２】「実質的に相同」という用語は少なくとも約６５％、好ましくは少なくとも約
７０％、より好ましくは少なくとも約７５％のアミノ酸相同性の程度を意味し、
この程度は次のパラメータの選択にてリップマン−パールソン蛋白整合プログラ
ムを用いて計算される類似性指数であり、すなわちＫチュープル＝２、ギャップ
・ペナルティー＝４およびギャップ・レングス・ペナルティ＝１２。

【００４３】本発明によれば、本発明のＩＬ−１６拮抗剤ペプチドはヒトおよびネズミＩＬ
−１６、並びにヒトもしくはネズミＩＬ−１６蛋白質に実質的に相同である他の
哺乳動物種のＩＬ−１６分子に拮抗する。

【００４４】「類似体」という用語は１つもしくはそれ以上のアミノ酸変化により相違する
ペプチドを意味し、この相違（たとえばアミノ酸残基の置換、付加もしくは欠失
）が関連ペプチドのＩＬ−１６拮抗剤特性を無効にしない。

【００４５】すなわちペプチドの類似体は、保持的に或いは非保持的に置換されたペプチド
の１つもしくはそれ以上のアミノ酸残基を有することができる。保持的置換の例
はたとえば他についてのＩ、Ｖ、ＬもしくはＭのような非極性（疎水性）残基の
置換；たとえばＫにつきＲ、ＮにつきＱ、ＳにつきＧもしくはその逆のような他
の極性残基につき１つの極性（親水性）残基の置換；並びにたとえば他について
のＫ、ＲもしくはＨのような塩基性残基の置換またはたとえば他についてのＤも
しくはＥのような１個の酸性残基の置換を包含する。非保持的置換の例はたとえ
ばＣ、Ｑ、Ｄ、Ｋのような極性（親水性）残基につきＩ、Ｖ、Ｌ、Ａ、Ｍのよう
な非極性（疎水性）残基の置換および／またはその逆を包含する。

【００４６】さらに「類似体」という用語は、ペプチドが必須ＩＬ−１６拮抗剤特性を保持
する限り、非誘導化残基の代わりとしての化学誘導化残基の使用をも包含する。

【００４７】さらに類似体は、関連ペプチドのＮ−末端もしくはＣ−末端に対するアミノ酸
の付加をも包含する。たとえばペプチドのＮ−もしくはＣ−末端に対するシステ
インの付加は、所望ならばこれによりペプチドをキャリア蛋白質（たとえばアル
ブミン）に共有付着させることができる。この種の付着は、血液からのペプチド
の排除を最小化させうると共にペプチドの蛋白質分解をも防止することができる
。

【００４８】さらに本発明の目的で、Ｌ−アミノ酸の代わりにＤ−アミノ酸を含有するペプ
チドも「類似体」という用語に包含される。この種のＤ−異性体の存在は、蛋白
質分解活性およびペプチドの排除を最小化させるにも役立ちうる。

【００４９】本発明の好適ＩＬ−１６拮抗剤ペプチドはＸ_ａａ０ＲＸ_ａａ１Ｘ_ａａ２（配列
ＩＤ番号：１）の配列を有するテトラマーペプチドであり、ここでＸ_ａａ０はＡ
ｒｇもしくはＬｙｓであり、Ｘ_ａａ１およびＸ_ａａ２は任意のアミノ酸とするこ
とができ、これはＡ＝Ａｌａ＝アラニン、Ｒ＝Ａｒｇ＝アルギニン、Ｎ＝Ａｓｎ＝アスパラギン、Ｄ＝Ａｓｐ＝アスパラギン酸、Ｃ＝Ｃｙｓ＝システイン、Ｑ＝Ｇｌｎ＝グルタミン、Ｅ＝Ｇｌｕ＝グルタミン酸、Ｇ＝Ｇｌｙ＝グリシン、Ｈ＝Ｈｉｓ＝ヒスチジン、Ｉ＝Ｉｌｅ＝イソロイシン、Ｌ＝Ｌｅｕ＝ロイシン、Ｋ＝Ｌｙｓ＝リジン、Ｍ＝Ｍｅｔ＝メチオニン、Ｆ＝Ｐｈｅ＝フェニルアラニン、Ｐ＝Ｐｒｏ＝プロリン、Ｓ＝Ｓｅｒ＝セリン、Ｔ＝Ｔｈｒ＝スレオニン、Ｗ＝Ｔｒｐ＝トリプトファン、Ｙ＝Ｔｙｒ＝チロシン、およびＶ＝ＶａＬ＝バリンを包含する。

【００５０】好ましくはＸ_ａａ１およびＸ_ａａ２は、哺乳動物ＩＬ−１６の天然配列に見ら
れるようなアミノ酸である。たとえばＸ_ａａ１はＬｙｓ（ヒト、アフリカミドリ
ザル、アカゲザル、マンゲビー、ゼブ、マッカク、リスザルおよびアオツス・ト
リビルガツス）またはＴｈｒ（ネズミ）とすることができ、Ｘ_ａａ２はＳｅｒ（
ヒト、アフリカミドリザル、アカゲザル、マンゲビー、ゼブ、マッカク、リスザ
ル、アオツス・トリビルガツスおよびネズミ）とすることができる。

【００５１】より好ましくはＸ_ａａ０ＲＸ_ａａ１Ｘ_ａａ２は、哺乳動物ＩＬ−１６の天然配
列に一致する配列を持ったテトラマーである。この種のテトラマー配列の例はＲ
ＲＫＳ（配列ＩＤ番号：２）（ヒト、アフリカミドリザル、アカゲザル、マンゲ
ビー、ゼブおよびマッカク）、ＲＲＴＳ（配列ＩＤ番号：３）（ネズミ）および
ＫＲＫＳ（配列ＩＤ番号：４）（リスザルおよびアオヅス・トリビルガツス）を
包含する。

【００５２】一層好ましくはＸ_ａａ０ＲＸ_ａａ１Ｘ_ａａ２は哺乳動物ＩＬ−１６の天然配列
に一致すると共にＸ_ａａ０はＡｒｇであり、たとえばＲＲＫＳ（配列ＩＤ番号：
２）およびＲＲＴＳ（配列ＩＤ番号：３）である。

【００５３】これらテトラマー配列ＩＤ番号：２〜４の同族体および類似体も本発明により
考えられる。たとえば本発明のテトラマーＲＲＫＳ（配列ＩＤ番号：２）の類似
体はＲＲＡＳ（配列ＩＤ番号：５）およびＲＲＫＡ（配列ＩＤ番号：６）を包含
し、ＲＲＴＳ（配列ＩＤ番号：３）の類似体はＲＲＡＳ（配列ＩＤ番号：５）お
よびＲＲＴＡ（配列ＩＤ番号：７）である。

【００５４】本発明の他の好適ＩＬ−１６拮抗剤ペプチドはＸ_ａａ１Ｘ_ａａ２Ｘ_ａａ０Ｒの
配列（配列ＩＤ番号：１２）を有するテトラマーペプチドであり、ここでＸ_ａａ _０はＡｒｇもしくはＬｙｓであり、Ｘ_ａａ１およびＸ_ａａ２は任意のアミノ酸と
することができる。

【００５５】好ましくはＸ_ａａ１およびＸ_ａａ２は哺乳動物ＩＬ−１６の天然配列に見られ
るようなアミノ酸である。たとえばＸ_ａａ１はＶａｌ（ヒト、アフリカミドリザ
ル、アカゲザル、マンゲビー、ゼブ、マッカク、リスザル、アオツス・トリビル
ガツスおよびネズミ）とすることができ、Ｘ_ａａ２はＩｌｅ（ヒト、アフリカミ
ドリザル、アカゲザル、マンゲビー、マッカク、リスザル、アオツス・トリビル
ガツスおよびネズミ）またはＬｅｕ（ゼブ）とすることができる。

【００５６】より好ましくはＸ_ａａ１Ｘ_ａａ２Ｘ_ａａ０Ｒ（配列ＩＤ番号：８）は哺乳動物
ＩＬ−１６の天然配列に一致する。この種のテトラマー配列の例はＶＩＲＲ（配
列ＩＤ番号：９）（ヒト、アフリカミドリザル、アカゲザル、マンゲビー、マッ
カクおよびネズミ）、ＶＬＲＲ（配列ＩＤ番号：１０）（ゼブ）およびＶＩＫＲ
（配列ＩＤ番号：１１）（リスザルおよびアオツス・トリビルガツス）を包含す
る。

【００５７】一層好ましくはＸ_ａａ１Ｘ_ａａ２Ｘ_ａａ０Ｒは哺乳動物ＩＬ−１６の天然配列
に一致し、Ｘ_ａａ０はＡｒｇであり、たとえばＶＩＲＲ（配列ＩＤ番号：９）お
よびＶＬＲＲ（配列ＩＤ番号：１０）である。

【００５８】これらテトラマー（配列ＩＤ番号：９〜１１）の同族体および類似体も本発明
により考えられる。

【００５９】本発明のさらに好適な他のＩＬ−１６拮抗剤ペプチドはＸ_ａａ１Ｘ_ａａ０ＲＸ _ａａ２の配列（配列ＩＤ番号：１２）を有するテトラマーペプチドであり、ここ
でＸ_ａａ０はＡｒｇもしくはＬｙｓであり、Ｘ_ａａ１およびＸ_ａａ２は任意のア
ミノ酸とすることができる。

【００６０】好ましくはＸ_ａａ１およびＸ_ａａ２は哺乳動物ＩＬ−１６の天然配列に見られ
るようなアミノ酸である。たとえばＸ_ａａ１はＩｌｅ（ヒト、アフリカミドリザ
ル、アカゲザル、マンゲビー、マッカク、リスザル、アオツス・トリビルガツス
およびネズミ）またはＬｅｕ（ゼブ）とすることができ、Ｘ_ａａ２はＬｙｓ（ヒ
ト、アフリカミドリザル、アカゲザル、マンゲビー、マッカク、ゼブ、リスザル
およびアオツス・トリビルガツス）、またはＴｈｒ（ネズミ）とすることができ
る。

【００６１】より好ましくはＸ_ａａ１Ｘ_ａａ２Ｘ_ａａ０Ｒ（配列ＩＤ番号：１２）はＩＬ−
１６の天然配列に一致する。この種のテトラマー配列の例はＩＲＲＫ（配列ＩＤ
番号：１３）（ヒト、アフリカミドリザル、アカゲザル、マンゲビーおよびマッ
カク）、ＬＲＲＫ（配列ＩＤ番号：１５）（ゼブ）、ＩＫＲＫ（配列ＩＤ番号：
１６）（リスザルおよびアオツス・トリビルガツス）およびＩＲＲＴ（配列ＩＤ
番号：１４）（ネズミ）を包含する。

【００６２】一層好ましくはＸ_ａａ１Ｘ_ａａ０ＲＸ_ａａ２（配列ＩＤ番号：１２）は哺乳動
物ＩＬ−１６の天然配列に一致すると共にＸ_ａａ０はＡｒｇであり、たとえばＩ
ＲＲＫ（配列ＩＤ番号：１３）、ＬＲＲＫ（配列ＩＤ番号：１５）およびＩＲＲ
Ｔ（配列ＩＤ番号：１４）である。

【００６３】この種のテトラマー（配列ＩＤ番号：１３−１６）の同族体および類似体も本
発明により考えられる。

【００６４】さらに本発明によれば、ＩＬ−１６拮抗剤ペプチドは、この種の拮抗剤ペプチ
ドが上記テトラマー配列の１つを有する限り、すなわちＸ_ａａ０ＲＸ_ａａ１Ｘ_ａ _ａ２（配列ＩＤ番号：１）、Ｘ_ａａ１Ｘ_ａａ０ＲＸ_ａａ２（配列ＩＤ番号：１２
）もしくはＸ_ａａ１Ｘ_ａａ２Ｘ_ａａ０Ｒ（配列ＩＤ番号：８）を有する限り、お
よびこの種のペプチドが少なくとも１つのＩＬ−１６生物学的活性に拮抗する限
りテトラマーよりも長くすることができる。好ましくはペプチドはＸ_ａａ０ＲＸ _ａａ１Ｘ_ａａ２（配列ＩＤ番号：１）を含有し、より好ましくはＸ_ａａ０は配列
ＩＤ番号：１にてＡｒｇである。一般的に言えば、ペプチドは３５個未満、好ま
しくは２５個未満、より好ましくは１６個未満のアミノ酸を有する。本発明のペ
プチドはＲＲＫＳＬＱＳＫＥＴＴＡＡＧＤＳ（配列ＩＤ番号：３３）を含まない
。

【００６５】好適拮抗剤ペプチドは、残基Ａｒｇ／Ｌｙｓから出発するＩＬ−１６の天然Ｃ
−末端配列に一致する配列を持ったものを包含し、これはヒトＩＬ−１６につい
てのＡｒｇ^１０６または他の哺乳動物ＩＬ−１６分子の対応位置である。この種
のペプチドの例は六量体ＲＲＫＳＬＱ（配列ＩＤ番号：１７）、ＲＲＴＳＬＱ（
配列ＩＤ番号：１８）、ＲＲＫＳＣＭ（配列ＩＤ番号：１９）、ＫＲＫＳＭＱ（
配列ＩＤ番号：２０）、八量体ＲＲＫＳＬＱＳＫ（配列ＩＤ番号：２４）、ＲＲ
ＴＳＬＱＣＫ（配列ＩＤ番号：２５）、ＲＲＫＳＬＱＰＫ（配列ＩＤ番号：２６
）、ＲＲＫＳＣＭＳＫ（配列ＩＤ番号：２７）およびＫＲＫＳＭＱＳＫ（配列Ｉ
Ｄ番号：２８）を包含する。好適ペプチドはＲＲＫＳＬＱ（配列ＩＤ番号：１７
）、ＲＲＴＳＬＱ（配列ＩＤ番号：１８）、ＲＲＫＳＣＭ（配列ＩＤ番号：１９
）、ＲＲＫＳＬＱＳＫ（配列ＩＤ番号：２４）、ＲＲＴＳＬＱＣＫ（配列ＩＤ番
号：２５）、ＲＲＫＳＬＱＰＫ（配列ＩＤ番号：２６）およびＲＲＫＳＣＭＳＫ
（配列ＩＤ番号：２７）を包含する。任意のこれらテトラマーの同族体および類
似体も本発明により考えられる。

【００６６】本発明のＩＬ−１６拮抗剤ペプチドは各種の周知技術により作製することがで
きる。たとえば、これらペプチドは最初にメルフィールドによりジャーナル・ア
メリカン・ケミカル・ソサエティ、第８５巻、第２１４９−２１５４頁（１９６
３）により記載された標準的固相合成技術またはザ・プロテインス、第ＩＩ巻、
第３版、Ｈ．ニューラス等編、第１０５−２３７頁、アカデミックプレス社、ニ
ューヨーク、Ｎ．Ｙ．（１９７６）に記載された溶液法を用いて化学合成するこ
とができる。ボダンスズキー等、ペプチドシンセシス、ジョーン・ウィリー・ア
ンド・サンズ社、第２版（１９７６）；およびＪ．スチュアートおよびＪ．Ｄ．
ヤング、固相ペプチド合成、ピアス・ケミカル・カンパニー、ロックフォード、
イリノイ州（１９８４）をも参照。種々異なるペプチド合成にて使用するのに適
する保護基は上記刊行物、並びにＪ．Ｆ．Ｗ．マッコミー、有機化学における保
護基、フレナム・プレス社、ニューヨーク、Ｎ．Ｙ．（１９７３）に記載されて
いる。

【００６７】さらに本発明のペプチドは組換ＤＮＡ技術により作製することもできる。本発
明のペプチドをコードするヌクレオチド配列は当業者により容易に作製すること
ができ、次いで発現ベクターに挿入して適する宿主細胞にて主題のペプチドを生
成することができる。組換生成されたペプチドは慣用の手順に従い精製すること
ができる。

【００６８】本発明のＩＬ−１６拮抗剤ペプチドをコードする核酸分子およびこの種の任意
の核酸分子を包含する発現ベクター、並びにこの種のヌクレオチド配列もしくは
ベクターを含有する関連宿主細胞も本発明により考えられる。

【００６９】他面において本発明は、本発明のＩＬ−１６拮抗剤ペプチドに対し育成された
抗体をも提供する。本発明の抗体はｍＡｂ１４．１もしくはｍＡｂ１７．１［ク
ルイクシャンク等、プロシーディング・ナショナル・アカデミー・サイエンス、
ＵＳＡ、第９１（１１）巻、第５１０９−５１１３頁（１９９４）；ヘッセル等
、ジャーナル・イミュノロジー、第１６０巻、第２９９８−３００５頁（１９９
８）；およびキーン等、ジャーナル・イミュノロジー、第１６０巻、第５９４５
−５９５４頁（１９９８）参照］を包含しない。

【００７０】好ましくは本発明の抗体は、配列が哺乳動物ＩＬ−１６蛋白質、好ましくはヒ
トＩＬ−１６の対応配列に一致するようなＩＬ−１６拮抗剤ペプチドに対し育成
される。本発明によれば、この種の抗体は、ＩＬ−１６リセプタと相互作用する
のに要するＩＬ−１６分子のペプチドエピトープに結合して少なくとも１つのＩ
Ｌ−１６媒介生物学的活性を遮蔽および中和することにより、ＩＬ−１６機能を
も阻止しうる。本発明の抗体はｍＡｂ１４．１もしくはｍＡｂ１７．１［ヘッセ
ル等、ジャーナル・イミュノロジー、第１６０巻、第２９９８−３００５頁（１
９９８）およびキーン等、ジャーナル・イミュノロジー、第１６０巻、第５９４
５−５９５４頁（１９９８）参照］を包含しない。

【００７１】本発明の抗体は周知方法により発生させることができる。フロインド・アジュ
バントと組み合わせて、これらペプチドをたとえばウサギ、マウス、ウシ、モル
モット、ラット、ロバなどの適する動物に注入することができる。これらペプチ
ドはアウスイーベル等（１９８９）、「分子生物学における現在のプロトコール
」、ジョーン・ウィリー・アンド・サンズ、ニューヨークに記載されたように免
疫化に先立ちキャリアポリペプチド（たとえばＫＬＨ）に結合することができる
。

【００７２】ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体の両者は免疫化動物を用いて作
製することができる。ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体の作製方法
は当業界にて周知され、たとえばＥ．ハーロウおよびＤ．レイン、「アンチボデ
ィーズ：ラボラトリー・マニュアル」、コールド・スプリング・ハーバー・プレ
ス社（１９８８）に見ることができる。ポリクローナル抗体は、たとえば親和性
クロマトグラフィーのような多数の周知蛋白質精製法を用いて免疫化動物の血清
から容易に精製することができる。モノクローナル抗体は標準的ハイブリドーマ
技術に従い作製することができる［たとえばコーラー等、「ネイチャー」、第２
５６巻、第４９５頁（１９７５）参照］。要するに免疫化動物の脾臓を摘出し、
そのリンパ球を不死細胞ラインに融合させることができる。得られるハイブリド
ーマを最初にスクリーニングすることができ、これには親和性を該当ペプチド抗
原に結合させ、次いでこれを各種のたとえばＥＬＩＳＡのような免疫分析により
決定することもできる。該当ペプチド抗原に特異性であるモノクローナル抗体を
生成するハイブリドーマは、たとえばＣＤ４^＋Ｔ細胞の走化性のような少なくと
も１つのＩＬ−１６媒介生物学的活性を阻止する能力につきスクリーニングする
ことができる。この種のＩＬ−１６−阻止性抗体は本発明における有用な拮抗剤
であると考えられる。

【００７３】本発明によるモノクローナル抗体の機能的誘導体も考えられる。「機能的誘導
体」という用語は、本発明のモノクローナル抗体から誘導されると共に本発明の
モノクローナル抗体の抗原特異性を保持している抗体分子またはその断片を意味
する。機能的誘導体の例は本発明のｍＡｂｓのＦａｂ、Ｆａｂ′、Ｆ（ａｂ′） _２、単鎖抗体、ヒト適合化抗体などを包含する。

【００７４】単鎖抗体（ＳＡｂ）は、短ペプチドリンカーを用いて互いに重鎖および軽鎖の
可変ドメインを融合させることにより単一分子に抗原結合部位を再構成して形成
される。この種の単鎖抗体の可変断片（Ｆｖｓ）は、必要に応じ免疫グロブリン
分子の重鎖における一定ドメインの全部または一部に融合させることができる。
ｓＡｂの使用は、宿主細胞への一より多い遺伝子構成物の導入における技術的困
難性を回避する。単鎖抗体およびその製造方法は当業界にて公知である。たとえ
ばベドジク等（１９９０）、ジャーナル・バイオロジカル・ケミストリー、第２
６５巻、第１８６１５頁；チャウドハリー等（１９９０）、プロシーディング・
ナショナル・アカデミー・サイエンス、第８７巻、第９４９１頁；ラドナー等に
係る米国特許第４，９４６，７７８号；およびカポン等に係る米国特許第５，３
５９，０４６号参照。

【００７５】本発明のモノクローナル抗体は、人間に使用するため免疫原性を減少すべくヒ
ト適合させることができる。たとえばマウスで育成されたモノクローナル抗体を
ヒト適合させるため、１つの手法はヒト免疫グロブリンの一定領域に結合された
ネズミｍＡｂの初期可変領域を有するマウス−ヒトキメラ抗体を作製することで
ある。キメラ抗体およびその製造方法は当業界にて公知である。たとえばキャビ
リー等、ヨーロッパ特許出願第１２５０２３号（１９８４年１１月１４日付け公
開）；タニグチ等、ヨーロッパ特許出願第１７１４９６号（１９８５年２月１９
日付け公開）；モリソン等、ヨーロッパ特許出願第１７３４９４号（１９８６年
３月５日公開）；ノイベルガー等、ＰＣＴ出願ＷＯ８６／０１５３３号（１９
８６年３月１３日付け公開）；クドー等、ヨーロッパ特許出願第１８４１８７号
（１９８６年６月１１日公開）；ロビンソン等、国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ８６
／０２２６９号（１９８７年５月７日付け公開）；リュー等、プロシーディング
・ナショナル・アカデミー・サイエンス、ＵＳＡ、第８４巻、第３４３９−３４
４３頁（１９８７）；サン等、プロシーディング・ナショナル・アカデミー・サ
イエンス、ＵＳＡ、第８４巻、第２１４−２１８頁（１９９７）；ベター等、サ
イエンス、第２４０巻、第１０４１−１０４３頁（１９８８）参照。これら引例
を参考のためここに引用する。一般に、ネズミｍＡｂのＨおよびＬ鎖抗原結合性
領域をコードするＤＮＡセグメントはｍＡｂ生産性ハイブリドーマ細胞からクロ
ーン化させることができ、次いでこれをそれぞれヒト免疫グロブリンのＣ_Ｈおよ
びＣ_Ｌ領域をコードするＤＮＡセグメントに結合させて、ネズミ−ヒトキメラ免
疫グロブリンコード性遺伝子を生成させることができる。ヒト適合化抗体は第２
手法を用いて作製することができ、すなわちたとえばマエダ等、ヒューマン・ア
ンチボディー・ハイブリドーマ、第２巻、第１２４−１３４頁（１９９１）およ
びパドラン、モレキュラ・イミュノロジー、第２８巻、第４８９−４９８頁（１
９９１）に記載された再形成ヒト抗体を構築することができる。

【００７６】本発明の関連面は、この種のペプチドを免疫原として使用することにより本発
明のＩＬ−１６拮抗剤ペプチドに特異性の抗体を発生させる方法に向けられる。

【００７７】本発明の他の実施形態においては、１種もしくはそれ以上のＩＬ−１６拮抗剤
、たとえばＩＬ−１６拮抗剤ペプチドもしくは抗体を医薬組成物に含ませる。こ
の種の医薬組成物は、たとえばＩＬ−１６媒介炎症病のようなＩＬ−１６媒介障
害の処置に使用される。

【００７８】本発明の医薬組成物はさらにたとえば公知の抗炎症剤（たとえば抗−ＣＤ４抗
体、抗−ＴＮＦα抗体、ＮＳＡＩＤＳ、ステロイド、サイクロスポリン−Ａもし
くは細胞毒性剤）のような他の適する活性成分をも含むことができる。

【００７９】本発明によれば、医薬組成物は医薬上許容しうるキャリアをも含む。

【００８０】ここで使用する医薬上許容しうるキャリアは任意および全ての溶剤、分散媒体
、等張剤などを包含する。任意の慣用の媒体、薬剤、希釈剤もしくはキャリアが
受容体またはそこに含まれる活性成分の治療効果に悪影響を及ぼさない限り、本
発明の方法を実施する際のその使用が適している。キャリアは液体、半固体、た
とえばペースト、または固体キャリアとすることができる。キャリアの例は油、
水、塩水溶液、アルコール、糖、ゲル、脂質、リポソーム、樹脂、多孔性マトリ
ックス、結合剤、充填剤、コーチング、保存料など、またはその組合せを包含す
る。

【００８１】本発明によれば、本発明の医薬組成物の活性成分を任意の便利かつ実用的な方
法（たとえば混合、溶解、懸濁、乳化、カプセル化、吸収など）によりキャリア
と組み合わせることができ、たとえば錠剤、カプセル、粉末、シロップや、注射
用、移植用、吸入用、摂取用などに適する懸濁液の剤形に作製することができる
。必要に応じ、本発明の医薬組成物は周知方法により無菌にすべきである。たと
えば、溶液はフィルター滅菌もしくはオートクレーブにより無菌にすることがで
きる。無菌粉末を得るには、滅菌溶液を減圧乾燥させ或いは必要に応じ凍結乾燥
させることができる。

【００８２】本発明の他の実施形態は、本発明により考えられるＩＬ−１６拮抗剤を用いる
ことによりＩＬ−１６とＩＬ−１６リセプタとの相互作用もしくは結合を阻止、
遮蔽または防止する方法を提供する。

【００８３】本発明の他面において、本発明の医薬組成物はＩＬ−１６媒介病理的障害の処
置に使用される。すなわち本発明は、治療上有効量の本発明による医薬組成物を
投与することによる患者におけるＩＬ−１６媒介障害の処置方法を提供する。

【００８４】「ＩＬ−１６媒介障害」という用語は、ＩＬ−１６分子の関与を必要とする徴
候の病理的障害、開始、進行もしくは保持を意味する。とくに本発明により考え
られるＩＬ−１６媒介障害は喘息、リューマチ様関節炎、炎症性腸炎、グレーブ
ス病、多発性硬化症、狼瘡および水胞性類天疱瘡を包含する。

【００８５】「処置」という用語は、開始を防止もしくは遅延させ、進行を抑制し或いは障
害の徴候を緩和させるようなＩＬ−１６活性の効果的阻止を意味する。

【００８６】「患者」という用語は任意の哺乳動物検体を意味する。好ましくは患者はヒト
患者である。

【００８７】本発明によれば、哺乳動物患者にてＩＬ−１６媒介障害を処置するには、使用
する好適医薬組成物はこの種の哺乳動物種のＩＬ−１６分子の機能に効果的に拮
抗するＩＬ−１６拮抗剤ペプチドもしくは抗体で構成されたものである。

【００８８】「治療上有効量」という用語は、開始を防止もしくは遅延させ、進行を遅らせ
或いは障害の徴候を緩和するようＩＬ−１６活性の阻止を行うのに要する投与量
を意味する。

【００８９】正確な投与量は、処置される病気状態もしくは症状および他のたとえば体重お
よび患者の症状のような臨床的因子、治療に対する患者の応答、処方物のタイプ
および投与ルートに依存する。治療上有効であると共に悪影響のない正確な投与
量は当業者により決定することができる。一般的に、成人に投与するのに適する
医薬組成物の量は体重１ｋｇ当たり約０．００１ｍｇ〜約２０ｍｇの範囲、より
好ましくは体重１ｋｇ当たり約０．０１ｍｇ〜約５ｍｇの範囲である。好ましく
はペプチドは１回の投与当たり少なくとも約５０ｍｇの量、より好ましくは１回
の投与当たり約５００ｍｇまでの量にて投与すべきである。本発明のペプチド組
成物は最終的に血流から除去されるので、組成物の再投与が必要とされる。代案
として、調節放出マトリックスで提供されるペプチドの移植もしくは注入も用い
ることができる。

【００９０】本発明の医薬組成物は、任意の実用的かつ便利な方法で患者に投与することが
できる。用いうる投与ルートは経口、点眼、点鼻、局部、経皮もしくは非経口（
たとえば静脈内、腹腔内、皮膚内、皮下もしくは筋肉内）を包含する。さらに医
薬組成物は、注射により或いは外科移植により或いは付着により予備選択組織も
しくは器官部位に近接して体内に導入して有意量の活性物質を直接拡散によりそ
の部位に導入し、好ましくは調節放出的に導入することができる。

【００９１】以下、限定はしないが本発明を実施例により更に説明する。この開示で用いた
用語および表現は説明の意味であって限定を意味するものでなく、そこに示した
特徴の均等物を排除すべく用いたものでない。従って本発明の範囲内で各種の改
変をなしうることが了解されよう。この開示に挙げた刊行物を全て参考のためこ
こに引用する。

【００９２】例１物質および方法ペプチド天然もしくは改変Ｃ−末端ＩＬ−１６配列に対応する合成オリゴペプチドをリ
サーチ・ジェネチックス・インコーポレーション（アトランタ、ＧＡ）の工業施
設にて作製した。

【００９３】細胞作製ヒト末梢血液単核細胞（ＰＢＭＣ）を、フィコール−パッグ［ファルマシア社
、ピスカタウェイ、ＮＪ］における密度遠心分離により健康な志願者の血液から
記載されたように分離した［センター等、ジャーナル・イミュノロジー、第１２
８巻、第２５６頁（１９８２）；クルイクシャンク等、ジャーナル・イミュノロ
ジー、第１２８巻、第２５６９頁（１９８２）；およびクルイクシャンク等、ジ
ャーナル・イミュノロジー、第１３８巻、第３８１７頁（１９８７）］。単核細
胞層を、０．４％のウシ血清アルブミンと２５ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液と１００
Ｕ／ｍｌのペニシリンと１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシンとが補充された
媒体１９９［Ｍ．Ａ．ビオプロダクツ社、ウォーカースビル、ＭＤ］（Ｍ１９９
−ＨＰＳ）で洗浄した。各試料をナイロンウール付着によりＴリンパ球につき豊
富化させた［ジュリアス等、ヨーロピアン・ジャーナル・イミュノロジー、第３
巻、第６４５頁（１９７３）に記載］。非付着性細胞は、流動サイトメトリーに
より決定して＞９５％ＣＤ３^＋であった。

【００９４】組換蛋白質天然プロ−ＩＬ−１６から開裂された１２１Ｃ−末端アミノ生物活性サイトキ
ンに対応する組換ヒトＩＬ−１６を大腸菌にて、発現ベクターｐＥＴ−３０Ｌ
ＩＣ［ノバゲン社、マジソン、ＷＩ］を用い、ポリヒスチジン融合蛋白質として
生成させた。形質転換細菌の溶解の後、蛋白質を金属キレート化クロマトグラフ
ィーにより精製し、Ｎ−末端ポリヒスチジン標識をエンテロキナーゼでの開裂に
より除去した。

【００９５】天然ＩＬ−１６発現ベクター（ｐＥＴ−３０／ＩＬ−１６^１２１）をＰＣＲ突
然変異の雛形として用い、Ｃ−末端（Ｃ−４〜Ｃ−１６）に順次に４個のアミノ
酸欠失および１２もしくは２２Ｎ−末端残基の欠失を有する４種の組換ＩＬ−１
６（ｒＩＬ−１６）突然変異体を形成させた。ＩＬ−１６の最初の１２もしくは
２２Ｎ−末端残基および最後の１６Ｃ−末端残基を欠失する２種の二重欠失構成
物をも形成させた。ｒＩＬ−１６のＣ−末端残基におけるポイント突然変異を、
製造業者の指針に従いストラタジーン・クイック・チェンジ・キット［ストラタ
ジーン社、ラ・ヨラ、ＣＡ］を用いて部位指向突然変異により発生させた。ポイ
ント突然変異はＡｒｇ^１０６、Ａｒｇ^１０７およびＡｒｇ^１０６プラスＡｒｇ^１ ^０７につきアラニン置換を含んだ。

【００９６】ウエスタン・ブロット分析天然および突然変異のｒＩＬ−１６蛋白質を１５％ＳＤＳ−ポリアクリルアミ
ドゲルを介し電気泳動にかけ、次いでニトロセルロース膜へ電気泳動移行させた
。これら膜をポリクローナルウサギ抗−ｒＩＬ−１６もしくはクローン１７．１
と呼ばれるネズミ抗−ｒＩＬ−１６ｍＡｂのいずれかで検査した。２次的西洋ワ
サビペルオキシダーゼ（ＨＲＢ）結合抗免疫グロブリンを１：５０００の濃度に
て使用し、シグナルを化学蛍光により可視化させた［ピアス社、ロックフォード
、ＩＬ］。

【００９７】走化性分析改変ボイデン走化性チャンバを用いて細胞移動を測定した［センター等、ジャ
ーナル・イミュノロジー、第１２８巻、第２５６頁（１９８２）；クルイクシャ
ンク等、ジャーナル・イミュノロジー、第１２８巻、第２５６９頁（１９８２）
およびクルイクシャンク等、ジャーナル・イミュノロジー、第１３８巻、第３８
１７頁（１９８７）に記載］。細胞をＭ１９９−ＨＰＳに懸濁させ（５×１０^６細胞／ｍｌ）、次いで上側ウェルに充填し、下側ウェルから気孔８μｍ寸法のニ
トロセルロース膜により分離した。下側ウェルには、合成ペプチドと共に或いは
それなしに、比較緩衝液または実験ケモアトラクタント刺激剤を充填した。３７
℃にて４時間の培養後、各膜を除去すると共にヘマトキシリンで染色し、エタノ
ールおよびプロパノールでの順次の洗浄により脱水し、次いでキシレンで洗浄し
て光学顕微鏡による細胞計数のためフィルタを清澄させた。細胞移動を、全ての
状態につき二反復ウェルにて５つの別々のフィールドで深さ５０μｍを越えて移
動したフィルタにおける細胞の個数を計数することにより定量化した。細胞カウ
ント数を、１００％に基準化された未刺激の比較細胞移動と比較した。この結果
を平均％比較移動として現し、データをスチューデントｔ試験により統計的有意
差（Ｐ＜０．０５）につき解析した。

【００９８】混成リンパ球反応ＰＢＭＣ（１０^６／ｍｌ）を２５μｇ／ｍｌのミトマイシンＣと共に３０分間
にわたり培養することにより、混成リンパ球反応のための刺激性細胞を作製した
。次いで、これら細胞を２５ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液と１００Ｕ／ｍｌのペニシ
リンと１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシンとが補充されたＲＰＭＩ１６４０
媒体（ＲＰＭＩ１６４０−ＨＰＳ）で４回洗浄し、次いで１０％胎児ウシ血清が
補充されたＲＰＭＩ１６４０−ＨＰＳに１０^６細胞／ｍｌにて再懸濁させた（完
全培体）。応答細胞を無関係ドナーから作製し、完全培体に１０^６細胞／ｍｌに
て懸濁させ、比較緩衝液またはｒＩＬ−１６もしくは突然変異ｒＩＬ−１６構成
物（１０^−９Ｍ〜１０^−１１Ｍ）と共に予備培養した（１時間、３７℃）。次い
で刺激性細胞を添加し（１：１）、細胞混合物を四反復にて９６ウェルの丸底プ
レートに移した。細胞培養物を５日目に［^３Ｈ］チミジンで処理し、タイターテ
ク細胞収穫器で収穫し、ベクトン・ディキンソン・シンチレーション・カウンタ
にて６日目に計数した。その結果をバックグランドより高い平均％ｃｐｍ±ＳＥ
Ｍとして現す。データをスチューデントｔ試験により統計的有意差（Ｐ＜０．
０５）につき解析した。

【００９９】例２Ｃ−末端オリゴペプチドによるＩＬ−１６刺激Ｔリンパ球運動性の阻止ヒトＩＬ−１６残基の１６Ｃ−末端から誘導された一連のオリゴペプチドを作
製し（図１）、改変ボイデン走化性チャンバ分析を用いてＴリンパ球運動性を刺
激する能力につき試験した。

【０１００】ヒトＴリンパ球を上側ウェルに充填し、ｒＩＬ−１６を１０^−９Ｍ、１０^−１ ^０Ｍもしくは１０^−１１Ｍの濃度にて下側ウェルに、ＩＬ−１６のアミノ酸Ａｒ
ｇ^１０６〜Ｌｙｓ^１１３（配列ＩＤ番号：２４）およびＧｌｕ^１１４〜Ｓｅｒ^１ ^２１（配列ＩＤ番号：４６）に対応する２種の８量体ペプチドの存在下もしくは
不存在下に充填した。図２Ａに示すように、Ａｒｇ^１０６〜Ｌｙｓ^１１３ペプチ
ド（配列ＩＤ番号：２４）のみがこの分析にてＩＬ−１６を阻止した。６量体Ｒ
ＲＫＳＬＱ（配列ＩＤ番号：１７）もＩＬ−１６−刺激Ｔ細胞移動を阻止したが
、ランダム選択配列（配列ＩＤ番号：４７）における同じ残基を有するスクラン
ブルペプチドは阻止活性を示さなかった。阻止を媒介する残基をさらに規定する
ため、Ａｒｇ^１０６からＬｙｓ^１１３までの８残基配列をＲＲＫＳ（配列ＩＤ番
号：２）およびＬＱＳＫ（配列ＩＤ番号：４８）に分割した。ＲＲＫＳ（配列Ｉ
Ｄ番号：２）のみがＩＬ−１６ケモアトラクタント活性を阻止した（図２Ａ）。

【０１０１】ＲＲＫＳ内の個々の残基の関与をアラニン走査により分析した（図２Ｂ）。Ａ
ｒｇ^１０６またはＡｒｇ^１０７いずれかの置換は、ＩＬ−１６−誘発走化性に対
し阻止活性の喪失に関連した。これに対し、ペプチドＲＲＡＳ（配列ＩＤ番号：
５）およびＲＲＫＡ（配列ＩＤ番号：６）は天然ＲＲＫＳ（配列ＩＤ番号：２）
と同程度効果的にＩＬ−１６を阻止した。

【０１０２】ＣＤ４刺激に応答する走化性のＲＲＫＳ（配列ＩＤ番号：２）による阻止がＩ
Ｌ−１６に特異性であるかどうかを試験するため、ペプチドＲＲＫＳ（配列ＩＤ
番号：２）をＴ細胞運動性を誘発する２種の異なるＣＤ４リガンド（すなわちＨ
ＩＶ−１ｇｐ１２０（ストレインＨＩＶ−１_３Ｂ）およびＬｅｕ３ａｍＡｂ）
と組み合わせて試験した。ＨＩＶ−１ｇｐ１２０（１３）または二価の抗−ＣＤ
４ｍＡｂＬｅｕ３ａに応答する細胞移動はこのペプチドにより遮蔽されな
かった（図３）。

【０１０３】これらデータは、４残基ペプチドＲＲＫＳがＩＬ−１６のケモアトラクタント
活性を効果的かつ特異的に阻止しうることを示す。

【０１０４】例３ＩＬ−１６欠失突然変異体のケモアトラクタント活性ＩＬ−１６突然変異構成物をＣ−４〜Ｃ−１６からの４Ｃ−末端アミノ酸の順
次の欠失により形成させた（図４）。Ｃ−１２構成物はＳｅｒ^１０８で終端し、
ＲＲＫＳモチーフを保持する。Ｃ−１６構成物はＩｌｅ^１０５で終端して、ＲＲ
ＫＳおよびその後の下流残基を欠失する。これら突然変異体ＩＬ−１６分子を走
化性分析にて試験した。図５Ａに示したように、Ｃ−１２は天然ｒＩＬ−１６と
して活性であった一方、Ｃ−１６欠失はケモアトラクタント活性を完全に排除し
た。同様な実験において、Ｃ−４およびＣ−８欠失構成物は天然ｒＩＬ−１６に
匹敵するケモアトラクタント活性を示した。ペプチド研究と一致するこれら結果
は、ＲＲＫＳモチーフ内の残基をＩＬ−１６−刺激ケモアトラクタント活性につ
き必要とされることを示す。

【０１０５】走化性信号化にＩＬ−１６のＮ−末端構造物が寄与するかどうかを決定するた
め、１２もしくは２２Ｎ−末端アミノ酸の欠失を伴う２種の追加構成物を試験し
た。Ｎ−１２およびＮ−２２欠失突然変異体の両者は天然ＩＬ−１６に匹敵する
ケモアトラクタント活性を示した（図５Ａ）。これら結果は、Ｎ−末端ドメイン
が細胞運動性を活性化するリセプタ相互作用に必要とされないことを示す。

【０１０６】例４ＩＬ−１６ケモアトラクタント活性に対する特定Ｃ−末端残基の寄与ケモアトラクタント信号化に対するＲＲＫＳモチーフ内の個々の残基の関与を
決定すると共に最少の構造変化を伴うＩＬ−１６突然変異体の活性を試験するた
め、アラニン置換を用いる一連のポイント突然変異を行った（図４）。Ａｒｇ^１ ^０７単独またはＡｒｇ^１０６プラスＡｒｇ^１０７の置換は、組換蛋白質のケモア
トラクタント活性を完全に抑止した（図５Ｂ）。これに対し、Ａｒｇ^１０６単独
の置換は全活性を保持した。運動性応答の同一のパターンが、異なるＩＬ−１６
−応答性細胞タイプ、すなわちヒト末梢血液単核細胞を用いて観察された。

【０１０７】多量体形成が欠失もしくはポイント突然変異により途絶されるかどうかを試験
するため、上記で発生した突然変異体ＩＬ−１６分子をＨＰＬＣにより評価した
。これら構成物は全て天然ＩＬ−１６と同様な多量体を形成した。これら観察は
、Ａｒｇ^１０７の突然変異がＣＤ４結合またはＩＬ−１６による活性化を直接阻
害することを示す。

【０１０８】例５ＩＬ−１６突然変異蛋白質のウェスタン分析ウサギポリクローナル抗−ＩＬ−１６Ａｂ、並びにネズミモノクローナル抗−
ＩＬ−１６（クローン１７．１）を、ｒＩＬ−１６を免疫原として用いて発生さ
せた。このｍＡｂを、ＩＬ−１６ケモアトラクタント活性の中和につきハイブリ
ドーマ上澄液をスクリーニングして分離した。ウエスタン・ブロット分析を天然
ｒＩＬ−１６およびＣ−末端欠失突然変異体を用いて行い（図６）、これにはポ
リクローナルＡｂもしくはｍＡｂのいずれかを検出に用いた。予想通り、ポリク
ローナルＡｂは天然ｒＩＬ−１６および全部の欠失突然変異体を認識した。ｍＡ
ｂ１７．１は天然ｒＩＬ−１６および４、８もしくは１２Ｃ−末端残基を欠如す
る欠失突然変異体、並びにＮ−末端欠失変異体を検出した。しかしながらｍＡｂ
１７．１はＣ−１６に結合しなかった。従って中和性抗−ＩＬ−１６ｍＡｂ１
７．１のためのエピトープはペプチド阻止および突然変異実験によりＩＬ−１６
ケモアトラクタント活性に要することが示された同一ドメインにマップ（ｍａｐ
）する。

【０１０９】例６混成リンパ球反応の阻止ＩＬ−１６の他の生物学的活性がＣ−末端ドメインにより媒介されるかどうか
を決定するため、天然および突然変異ｒＩＬ−１６構成物をその一方向ＭＬＲの
阻止能力につき試験した。応答体Ｔリンパ球をｒＩＬ−１６もしくは比較緩衝剤
で予備試験し、次いで無関係ドナーからのミトマイシンＣ−処理刺激剤ＰＢＭＣ
と共に培養した。１０^−８Ｍ天然ｒＩＬ−１６での予備処理は６日目にチミジン
組み込みを未処理細胞と比較してほぼ７０％だけ減少させた。驚くことに、ケモ
アトラクタント活性を喪失したＣ−末端ポイント突然変異を伴うＩＬ−１６突然
変異体はＭＬＲを阻止する全能力を保持した（図７）。Ｃ−１６欠失突然変異体
は天然ｒＩＬ−１６とほぼ同じ活性を有し、投与量応答の〜１ｌｏｇシフトを
有した（図８）。１２もしくは２２Ｎ−末端残基の欠失は、Ｃ−１６として同様
なパターンを示した。ＭＬＲ阻止は減少したが排除されなかった。これに対し、
Ｃ−１６欠失とＮ−１２もしくはＮ−２２とを組み合わせた構成物はＭＬＲを阻
止する全能力を喪失した。

【０１１０】これらデータは、ＩＬ−１６のＮ−末端ドメインおよびＣ−末端ドメインの両
者がリセプタ結合および活性化に関与すること、およびＴ細胞運動性を刺激する
のに要するＩＬ−１６の構造要素が混成リンパ球反応の阻止に要するものとは異
なることを示す。

【０１１１】

【表１】

【表２】略語：ｈ＝ヒト、ｍ＝ネズミ、ａｇ＝アフリカミドリザル、ｒｈ＝アカゲザル、ｍａｎ
＝マンゲビー、ｚ＝ゼブ、ｍａｃ＝マッカク、ｓｍ＝リスザル、ａｔ＝アオツス
・トリビルガツス

【図面の簡単な説明】

【図１】阻止研究につき使用されるＩＬ−１６およびペプチドの構造を示
す図面。

【図２】Ｃ−末端ペプチドの存在下もしくは不存在下にてヒトＴリンパ球
を用いる走化性分析におけるＣ−末端ペプチドによるＩＬ−１６−刺激Ｔ細胞運
動の阻止を示す図面。

【図３】ペプチドによるＩＬ−１６の特異的阻止を示す図面。

【図４】ＰＣＲ突然変異により発生すると共に大腸菌で生成された組換Ｉ
Ｌ−１６突然変異体の組成を示す図面。

【図５】突然変異ｒＩＬ−１６のケモアトラクタント活性を示す図面。

【図６】天然および突然変異ｒＩＬ−１６のウエスタン・ブロット分析を
示す図面。

【図７】天然ｒＩＬ−１６もしくはＣ−末端ポイント突然変異を伴うｒＩ
Ｌ−１６によるＭＬＲの阻止を示す図面。

【図８】ＩＬ−１６欠失突然変異体によるＭＬＲの阻止を示す図面。

【図９】各動物種からのＩＬ−１６配列を示す図面。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 1/04 Ａ６１Ｐ 11/06 5/14 25/00 11/06 29/00 １０１ 25/00 31/22 29/00 １０１Ｃ０７Ｋ 5/10 31/22 5/11 Ｃ０７Ｋ 5/10 7/06 5/11 7/08 7/06 16/44 7/08 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ 16/44 Ａ６１Ｋ 37/02 (72)発明者クリュイクシャンク、ウィリアムダブリュー．アメリカ合衆国マサチューセッツ州 01886 ウエストフォードバターナットロード 13 (72)発明者コーンフェルド、ハーディアメリカ合衆国マサチューセッツ州 02481 ウェルズリーヒルズギャリソンロード５Ｆターム(参考） 4B024 AA01 BA80 CA05 DA06 EA04 GA11 4C084 AA01 AA02 BA01 BA02 BA08 BA17 BA23 BA24 CA53 CA56 CA59 DA59 MA02 ZA02 ZA59 ZA66 ZB15 ZB33 4C085 AA14 BB18 CC03 DD22 DD23 DD62 EE01 4C086 DA08 ZC03 4H045 AA10 AA11 BA13 BA14 BA15 BA17 EA22 FA33 FA73 FA74

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】ＩＬ−１６拮抗剤ペプチド。
【請求項２】ＲＲＫＳ（配列ＩＤ番号：２）、ＲＲＴＳ（配列ＩＤ番号：
３）、ＫＲＫＳ（配列ＩＤ番号：４）、ＲＲＡＳ（配列ＩＤ番号：５）、ＲＲＫ
Ａ（配列ＩＤ番号：６）およびＲＲＴＡ（配列ＩＤ番号：７）よりなる群から選
択される配列よりなるＩＬ−１６拮抗剤ペプチド。
【請求項３】ＲＲＫＳＬＱ（配列ＩＤ番号：１７）、ＲＲＴＳＬＱ（配列
ＩＤ番号：１８）、ＲＲＫＳＣＭ（配列ＩＤ番号：１９）、ＫＲＫＳＭＱ（配列
ＩＤ番号：２０）、ＲＲＡＳＬＱ（配列ＩＤ番号：２１）、ＲＲＫＡＬＱ（配列
ＩＤ番号：２２）およびＲＲＴＡＬＱ（配列ＩＤ番号：２３）よりなる群から選
択される配列よりなるＩＬ−１６拮抗剤ペプチド。
【請求項４】ＲＲＫＳＬＱＳＫ（配列ＩＤ番号：２４）、ＲＲＴＳＬＱＣ
Ｋ（配列ＩＤ番号：２５）、ＲＲＫＳＬＱＰＫ（配列ＩＤ番号：２６）、ＲＲＫ
ＳＣＭＳＫ（配列ＩＤ番号：２７）、ＫＲＫＳＭＱＳＫ（配列ＩＤ番号：２８）
、ＲＲＡＳＬＱＳＫ（配列ＩＤ番号：２９）、ＲＲＫＡＬＱＳＫ（配列ＩＤ番号
：３０）、ＲＲＴＡＬＱＣＫ（配列ＩＤ番号：３１）およびＲＲＡＳＬＱＣＫ（
配列ＩＤ番号：３２）よりなる群から選択される配列よりなるＩＬ−１６拮抗剤
ペプチド。
【請求項５】ＲＲＴＳＬＱＣＫＱＴＴＡＳＡＤＳ（配列ＩＤ番号：３４）
、ＲＲＡＳＬＱＳＫＥＴＴＡＡＧＤＳ（配列ＩＤ番号：３５）、ＲＲＫＡＬＱＳ
ＫＥＴＴＡＡＧＤＳ（配列ＩＤ番号：３６）、ＲＲＴＡＬＱＣＫＱＴＴＡＳＡＤ
Ｓ（配列ＩＤ番号：３７）およびＲＲＡＳＬＱＣＫＱＴＴＡＳＡＤＳ（配列ＩＤ
番号：３８）よりなる群から選択される配列よりなるＩＬ−１６拮抗剤ペプチド
。
【請求項６】Ｘ_ａａ０ＲＸ_ａａ１Ｘ_ａａ２（配列ＩＤ番号：１）［ここで
Ｘ_ａａ０はＡｒｇもしくはＬｙｓであり、Ｘ_ａａ１およびＸ_ａａ２は任意のアミ
ノ酸である］を有するＩＬ−１６拮抗剤ペプチド。
【請求項７】Ｘ_ａａ１がＬｙｓ、ＴｈｒもしくはＡｌａから選択され、Ｘ _ａａ２がセリンもしくはＡｌａから選択される請求項６に記載のＩＬ−１６拮抗
剤ペプチド。
【請求項８】Ｘ_ａａ０がＡｒｇである請求項６に記載のＩＬ−１６拮抗剤
ペプチド。
【請求項９】Ｘ_ａａ１がＬｙｓ、ＴｈｒもしくはＡｌａから選択され、Ｘ _ａａ２がＳｅｒもしくはＡｌａである請求項８に記載のＩＬ−１６拮抗剤ペプチ
ド。
【請求項１０】Ｘ_ａａ０がＬｙｓである請求項６に記載のＩＬ−１６拮抗
剤ペプチド。
【請求項１１】Ｘ_ａａ１がＬｙｓ、ＴｈｒもしくはＡｌａから選択され、
Ｘ_ａａ２がＳｅｒもしくはＡｌａである請求項１０に記載のＩＬ−１６拮抗剤ペ
プチド。
【請求項１２】テトラマー配列が哺乳動物ＩＬ−１６の天然配列に一致す
る請求項８または１０に記載のＩＬ−１６拮抗剤ペプチド。
【請求項１３】ＲＲＫＳ（配列ＩＤ番号：２）、ＲＲＴＳ（配列ＩＤ番号
：３）、ＫＲＫＳ（配列ＩＤ番号：４）、ＲＲＡＳ（配列ＩＤ番号：５）、ＲＲ
ＫＡ（配列ＩＤ番号：６）およびＲＲＴＡ（配列ＩＤ番号：７）よりなる群から
選択される配列を有するＩＬ−１６拮抗剤ペプチド。
【請求項１４】Ｘ_ａａ１Ｘ_ａａ２Ｘ_ａａ０Ｒ（配列ＩＤ番号：８）［ここ
でＸ_ａａ０はＡｒｇもしくはＬｙｓであると共にＸ_ａａ１およびＸ_ａａ２は任意
のアミノ酸である］を有するＩＬ−１６拮抗剤ペプチド。
【請求項１５】Ｘ_ａａ１がＶａｌであると共にＸ_ａａ２がＩｌｅもしくは
Ｌｅｕである請求項１４に記載のＩＬ−１６拮抗剤ペプチド。
【請求項１６】Ｘ_ａａ０がＡｒｇである請求項１４に記載のＩＬ−１６拮
抗剤ペプチド。
【請求項１７】Ｘ_ａａ１がＶａｌであると共に、Ｘ_ａａ２がＩｌｅもしく
はＬｅｕである請求項１６に記載のＩＬ−１６拮抗剤ペプチド。
【請求項１８】Ｘ_ａａ０がＬｙｓである請求項１４に記載のＩＬ−１６拮
抗剤ペプチド。
【請求項１９】Ｘ_ａａ１がＶａｌであると共に、Ｘ_ａａ２がＬｅｕもしく
はＩｌｅである請求項１８に記載のＩＬ−１６拮抗剤ペプチド。
【請求項２０】テトラマー配列が哺乳動物ＩＬ−１６の天然配列に一致す
る請求項１６または１８に記載のＩＬ−１６拮抗剤ペプチド。
【請求項２１】ＶＩＲＲ（配列ＩＤ番号：９）、ＶＬＲＲ（配列ＩＤ番号
：１０）およびＶＩＫＲ（配列ＩＤ番号：１１）よりなる群から選択される配列
を有するＩＬ−１６拮抗剤ペプチド。
【請求項２２】Ｘ_ａａ１Ｘ_ａａ０ＲＸ_ａａ２（配列ＩＤ番号：１２）［こ
こでＸ_ａａ０はＡｒｇもしくはＬｙｓであり、Ｘ_ａａ１およびＸ_ａａ２は任意の
アミノ酸である］を有するＩＬ−１６拮抗剤ペプチド。
【請求項２３】Ｘ_ａａ１がＩｌｅもしくはＬｅｕであると共にＸ_ａａ２が
Ｌｙｓ、ＴｈｒもしくはＡｌａである請求項２２に記載のＩＬ−１６拮抗剤ペプ
チド。
【請求項２４】Ｘ_ａａ０がＡｒｇである請求項２２に記載のＩＬ−１６拮
抗剤ペプチド。
【請求項２５】Ｘ_ａａ１がＩｌｅもしくはＬｅｕから選択されると共に、
Ｘ_ａａ２がＬｙｓ、ＴｈｒもしくはＡｌａである請求項２４に記載のＩＬ−１６
拮抗剤ペプチド。
【請求項２６】Ｘ_ａａ０がＬｙｓである請求項２２に記載のＩＬ−１６拮
抗剤ペプチド。
【請求項２７】Ｘ_ａａ１がＬｅｕもしくはＩｌｅｕから選択されると共に
、Ｘ_ａａ２がＬｙｓ、ＴｈｒもしくはＡｌａである請求項２６に記載のＩＬ−１
６拮抗剤ペプチド。
【請求項２８】テトラマー配列が、哺乳動物ＩＬ−１６の天然配列に一致
する請求項２４または２６に記載のＩＬ−１６拮抗剤ペプチド。
【請求項２９】ＩＲＲＫ（配列ＩＤ番号：１３）、ＩＲＲＴ（配列ＩＤ番
号：１４）、ＬＲＲＫ（配列ＩＤ番号：１５）およびＩＫＲＫ（配列ＩＤ番号：
１６）よりなる群から選択される配列を有するＩＬ−１６拮抗剤ペプチド。
【請求項３０】ＲＲＫＳＬＱ（配列ＩＤ番号：１７）、ＲＲＴＳＬＱ（配
列ＩＤ番号：１８）、ＲＲＫＳＣＭ（配列ＩＤ番号：１９）、ＫＲＫＳＭＱ（配
列ＩＤ番号：２０）、ＲＲＡＳＬＱ（配列ＩＤ番号：２１）、ＲＲＫＡＬＱ（配
列ＩＤ番号：２２）およびＲＲＴＡＬＱ（配列ＩＤ番号：２３）よりなる群から
選択される配列を有するＩＬ−１６拮抗剤ペプチド。
【請求項３１】ＲＲＫＳＬＱＳＫ（配列ＩＤ番号：２４）、ＲＲＴＳＬＱ
ＣＫ（配列ＩＤ番号：２５）、ＲＲＫＳＬＱＰＫ（配列ＩＤ番号：２６）、ＲＲ
ＫＳＣＭＳＫ（配列ＩＤ番号：２７）、ＫＲＫＳＭＱＳＫ（配列ＩＤ番号：２８
）、ＲＲＡＳＬＱＳＫ（配列ＩＤ番号：２９）、ＲＲＫＡＬＱＳＫ（配列ＩＤ番
号：３０）、ＲＲＴＡＬＱＣＫ（配列ＩＤ番号：３１）およびＲＲＡＳＬＱＣＫ
（配列ＩＤ番号：３２）よりなる群から選択される配列を有するＩＬ−１６拮抗
剤ペプチド。
【請求項３２】ＲＲＴＳＬＱＣＫＱＴＴＡＳＡＤＳ（配列ＩＤ番号：３４
）、ＲＲＡＳＬＱＳＫＥＴＴＡＡＧＤＳ（配列ＩＤ番号：３５）、ＲＲＫＡＬＱ
ＳＫＥＴＴＡＡＧＤＳ（配列ＩＤ番号：３６）、ＲＲＴＡＬＱＣＫＱＴＴＡＳＡ
ＤＳ（配列ＩＤ番号：３７）およびＲＲＡＳＬＱＣＫＱＴＴＡＳＡＤＳ（配列Ｉ
Ｄ番号：３８）よりなる群から選択される配列を有するＩＬ−１６拮抗剤ペプチ
ド。
【請求項３３】請求項１〜４、６、１４または２２のいずれか１種のペプ
チドをコードする単離された核酸分子。
【請求項３４】請求項１〜４、６、１４または２２のいずれか一項に記載
のペプチドに対し育成された抗体。
【請求項３５】請求項１〜４、６、１４または２２のいずれかに記載のペ
プチドと、医薬上許容しうるキャリアとを有する医薬組成物。
【請求項３６】請求項３４に記載の抗体を有する医薬組成物。
【請求項３７】請求項１〜４、６、１４または２２のいずれかに記載の治
療上有効量のペプチドおよび医薬上許容しうるキャリアを患者に投与することを
含む患者におけるＩＬ−１６媒介障害の処置方法。
【請求項３８】前記ＩＬ−１６媒介障害が喘息、リューマチ性関節炎、炎
症性胃腸病、グレーブス病、多発性硬化症、狼瘡または水疱性類天疱瘡から選択
される炎症病である請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】抗−ＣＤ４抗体、抗−ＴＮＦα抗体、ＮＳＡＩＤＳ、ステ
ロイド、サイクロスポリン−Ａもしくは細胞毒性剤から選択される抗炎症剤を同
時投与することをさらに有する請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】ＩＬ−１６拮抗剤。
【請求項４１】ＩＬ−１６拮抗剤と医薬上許容しうるキャリアとを有する
医薬組成物。
【請求項４２】ＩＬ−１６拮抗剤の投与によりＩＬ−１６リセプタとのＩ
Ｌ−１６の相互作用を遮断することを有するＩＬ−１６媒介障害の処置方法。