CN105121463B - 肽 - Google Patents

Abstract

本申请提供了一种能够与MHC分子体外结合并被呈递至T细胞而无需抗原加工的肽(即apitope)，所述肽包含髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)的40至60区段的一部分。具体地，本申请提供了一种apitope，其选自以下髓鞘少突胶质细胞糖蛋白：MOG 41‑55、43‑57、44‑58和45‑59。本申请还提供了该肽在药物组合物中的用途以及使用该肽治疗和/或预防疾病的方法。

Description

肽

技术领域

本发明涉及来自髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)的肽。具体地，本发明涉及包含MOG的40-60区段的一部分的肽，其能够与MHC分子体外结合并被呈递给T细胞而无须抗原加工。本申请还涉及该肽在治疗和/或预防疾病中的用途。

背景技术

多发性硬化(MS)是影响中枢神经系统的慢性退行性疾病，特征在于神经轴突的脱髓鞘。MS会造成众多生理和精神症状，并且通常发展为生理缺陷和认知功能障碍。疾病通常在年轻人(20至40岁)中发病，在女性中更常见，并且在世界范围内影响超过一百万人。

MS的病程各不相同，并且会潜伏或随时间稳步发展。已根据进展模式描述了MS的几种亚型。患有MS的人会患有几乎任何神经症状或迹象，包括知觉变化，如丧失敏感度或发麻、刺痛或麻痹(感觉迟钝和感觉异常)、肌肉虚弱、阵挛、肌肉痉挛或移动困难；协调和平衡困难(共济失调)；语言问题(构音障碍)或吞咽问题(吞咽困难)问题、视觉问题(眼球震颤、视神经炎(包括光幻视)或复视)、疲劳、急性或慢性疼痛以及膀胱和肠困难。

目前MS被认为是免疫介导性病症，其中人体自身的免疫系统攻击并损伤了髓鞘质。

没有已知的针对MS的治愈方法。已证明，几种现有疗法在疾病侵袭(复发)后的功能恢复中、在防止或降低新的疾病侵袭(复发)的程度或频率中、或者在预防或降低残疾程度中是有效的。然而，很多现有MS疗法有副作用或耐受不良。因而需要对能有效治疗MS并有效缓解或减少MS的症状的MS替代疗法。

发明内容

本发明人已确定了一系列衍生自髓鞘少突胶质细胞糖蛋白的肽，所述肽可以通过固定的抗原呈递细胞呈递给T细胞。这些肽可有效预防和/或治疗脱髓鞘疾病，如多发性硬化。

因此，在第一方面，本发明提供了能够与MHC分子体外结合并被呈递给T细胞而无需抗原加工的肽(即apitope)，所述肽包含髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)的40至60区段的一部分。

所述肽可包含髓鞘少突胶质细胞糖蛋白的41至59区段的一部分。

所述肽可选自以下髓鞘少突胶质细胞糖蛋白肽：MOG 41-55、43-57、44-58和45-59。

所述肽可为MOG 41-55。

在第二方面，本发明提供了根据本发明的第一方面的肽以用于治疗和/或预防脱髓鞘疾病。

在第三方面，本发明提供了包含一种或多种根据本发明的第一方面的肽的药物组合物。

在第四方面，本发明提供了治疗和/或预防有此需要的受试者中的脱髓鞘疾病的方法，所述方法包含向所述受试者给药根据本发明的第一方面所述的肽的步骤。

在第五方面，本发明涉及根据本发明的第一方面的肽在制造用于预防和/或治疗脱髓鞘疾病的药物中的用途。

与本发明的第二、第四和第五方面有关，所述疾病可为多发性硬化。

附图说明

图1为显示不同MOG特异性杂交瘤克隆的肽特异性的图。

图2显示了增殖恢复测定(recall proliferation assay)的结果，所述测定用于测试用ROK5(MOG 41-55)治疗小鼠的效果，在所述治疗之后用MOG35-55免疫接种，随后用MOG35-55体外恢复。

图3显示了来自小鼠的脾细胞的上清液的细胞因子分布，所述小鼠用ROK5或PBS体内预处理，并用MOG35-55免疫接种，随后用MOG35-55体外恢复。

图4图解说明体内EAE预防方案。

图5显示了肽MOG35-55在鼠模型中诱导了EAE。

图6显示了小鼠和人类ROK5apitope均可降低由MOG35-55诱导的疾病的严重性。

图7显示了huROK5降低了疾病的严重性，并造成疾病负担(disease burden)峰的延迟。

具体实施方式

在第一方面，本发明涉及一种肽。

肽

术语“肽”根据其标准含义是用来指一系列残基(通常为L-氨基酸)，通常通过α-氨基和相邻氨基酸的羧基之间的肽键彼此相连。该术语包括修饰的肽和合成的肽类似物。

本发明的肽的长度为能够与主要组织相容性复合体(MHC)I类或II类分子体外结合并被呈递给T细胞而无需抗原加工。换句话说，该肽能够直接与MHC分子的肽结合槽结合而无需在一个端点或两个端点进行任何修剪。

与MHC I类分子结合的肽通常为7至13个氨基酸、更通常地为8至10个氨基酸的长度。该肽的结合通过以下方式在其两个端点得到稳定，所述方式为肽的主链原子与所有MHCI类分子的肽结合槽内的非可变位点之间的接触。在所述槽的两个端点处都具有非可变位点，其与肽的氨基和羧基末端结合。肽长度的变化通过肽主链的卷曲来调节，通常在允许所需柔性的脯氨酸或甘氨酸残基处发生。

与MHC II类分子结合的肽通常为8至20个氨基酸之间的长度，更通常地为10至17个氨基酸之间的长度。这些肽以沿着两端开放的MHC II肽结合槽(与MHC I类肽结合槽不同)伸展的构象存在。主要通过主链原子与排列形成肽结合槽的保守残基接触而使肽维持在合适的位置。

本发明的肽可以通过化学方法制备(Peptide Chemistry,A practicalTextbook.Mikos Bodansky,Springer-Verlag,Berlin.)。例如，可以通过固相技术合成肽(Roberge JY等人(1995)Science 269:202-204)，从树脂上切除，并通过制备性高效液相色谱纯化(如Creighton(1983)Proteins Structures And Molecular Principles,WHFreeman and Co,New York NY)。例如，根据制造商提供的说明书使用ABI 431A肽合成仪(Perkin Elmer)可实现自动合成。

或者，可通过重组方式、或通过从更长的多肽上切除来制备所述肽。例如，可以通过从髓鞘碱性蛋白上切除来获得所述肽。肽的组成可通过氨基酸分析或测序来确定(如Edman降解法)。

髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)

髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)是具有单个胞外Ig可变域(Ig-V)的I型完整膜蛋白。MOG的氨基酸序列在动物物种间高度保守(>90％)，这表明其重要的生物功能。MOG在CNS中在髓鞘以及胞体最外层上和少突胶质细胞过程中特异性表达。

成熟MOG的序列(缺少29氨基酸信号肽)如下(SEQ ID No.5)。

SEQ ID No.5

GQFRVIGPRHPIRALVGDEVELPCRISPGKNATGMEVGWYRPPFSRVVHLYRNGKDQDGDQ

APEYRGRTELLKDAIGEGKVTLRIRNVRFSDEGGFTCFFRDHSYQEEAAMELKVEDPFYWVSPGVL

VLLAVLPVLLLQITVGLVFLCLQYRLRGKLRAEIENLHRTFDPHFLRVPCWKITLFVIVPVLGP

LVALIICYNWLHRRLAGQFLEELRNPF

本发明的肽衍生自髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)的40-60区段。所述肽可衍生自经抗原呈递细胞对抗原天然加工而产生的抗原片段。

MOG的40-60区段具有以下序列：

SEQ ID No.6

YRPPFSRVVHLYRNGKDQDGD

所述肽可包含来自以下肽的最小表位：MOG 41-55、43-57、44-58和45-59。

MOG 41-55、43-57、44-58和45-59的序列为：

MOG 41-55:RPPFSRVVHLYRNGK(SEQ ID No.1)

MOG 43-57:PFSRVVHLYRNGKDQ(SEQ ID No.2)

MOG 44-58:FSRVVHLYRNGKDQD(SEQ ID No.3)

MOG 45-59:SRVVHLYRNGKDQDG(SEQ ID No.4)

所述肽可包含来自MOG 41-55的最小表位。所述肽可由MOG 41-55组成。

Apitope

在适应性免疫应答中，T淋巴细胞能够识别蛋白抗原的内在表位。抗原呈递细胞(APC)吸收蛋白抗原并将它们降解成短的肽片段。肽可与细胞内的主要组织相容性复合体(MHC)I类或II类分子结合并被转运至细胞表面。当与MHC分子一起被呈递至细胞表面时，该肽可被T细胞识别(通过T细胞受体(TCR))，在这种情况下该肽为T细胞表位。

T细胞表位在对任何抗原(无论是自身的或外来的)的适应性免疫应答中扮演了重要的角色。已通过使用实验模型证实了T细胞表位在超敏性疾病(包括过敏、自身免疫性疾病和移植排斥)中扮演的重要角色。通过注射与佐剂组合的合成肽(基于T细胞表位的结构)可以诱导炎症或过敏性疾病。

相比之下，已显示可以通过给药可溶形式的肽表位来诱导对特定肽表位的免疫耐受。在实验性自身免疫脑脊髓炎(EAE-一种多发性硬化(MS)的模型)(Metzler和Wraith(1993)Int.Immunol.5:1159-1165；Liu和Wraith(1995)Int.Immunol.7:1255-1263；Anderton和Wraith(1998)Eur.J.Immunol.28:1251-1261)；以及关节炎、糖尿病和葡萄膜视网膜炎的实验模型(如以上Anderton和Wraith(1998)中所述)中，给药可溶性的肽抗原被证实是一种抑制疾病的有效方法。这也被证实是一种治疗EAE中疾病进展的方法(如上所述的Anderton和Wraith(1998))。

致耐受性肽在治疗或预防疾病中的用途已吸引了相当多的注意力。其一个原因是已显示某些致耐受性表位可下调针对相同组织内的不同抗原的T细胞应答。这种被称为“旁观者抑制”的现象是指使用特定的致耐受性肽(如上所述的Anderton和Wraith(1998))可以诱导针对给定抗原内的多于一个表位(优选所有表位)的耐受性和针对给定疾病的多于一个抗原的耐受性。这避免了需确定特定疾病中的全部病原性抗原的需要。

肽也是一种有利的治疗选择，这是由于肽相对较低的成本以及可生产出具有改变的免疫性状的肽类似物的事实。因而可以对肽进行修饰以改变其与MHC或TCR的相互作用。

这种方法的一个可能的问题是，已经显示并不是所有作为T细胞表位的肽都能够诱导耐受性。髓鞘碱性蛋白(MBP)肽89-101是一种免疫接种后的免疫显性抗原，同时在引发T细胞反应和诱导EAE方面也具有非常有效的免疫原。然而，已显示，当以溶液形式给药时，该肽在诱导耐受性方面是无效的(如上所述的Anderton和Wraith(1998))。

对于所观察到的在T细胞表位诱导耐受性能力方面的等级提出了一系列解释(如以上Anderton和Wraith(1998)中所述)。具体地，已提出在肽对MHC的亲和力和致耐受性间存在相关性(如上所述的Liu和Wraith(1995))，但这与一些观察不相符。例如，非致耐受性的MBP[89-101]以相对较高的亲和力与I-A^S结合。因而无法直接预测哪些肽将诱导耐受性。

本发明人已证明，如果肽表位具有无需抗原加工就被未成熟的APC呈递的合适大小，则其可诱导免疫耐受性(国际专利申请PCT/GB01/03702)。因此，可以通过这样的事实，即一些表位在其能被MHC分子呈递前需要进一步的加工，来解释一些T细胞表位是致耐受性而另一些无法诱导耐受性的观察结果。虽然当与佐剂结合注射时其有能力诱导疾病，但当以可溶性形式给药时这些需要进一步加工的表位无法诱导耐受性。

不需要进一步加工的表位能够诱导耐受性，并被发明人称为“apitope”(不依赖于抗原加工的表位(Antigen Processing Independent epiTOPES))。

不依赖于抗原加工的呈递系统(APIPS)

本申请的肽能够与MHC分子在体外结合并被呈递给T细胞而无需抗原加工。

可以使用“无加工”系统测试肽是否能够无需抗原加工就与MHC分子结合。该系统应能够通过MHC分子将抗原呈递给T细胞，但无法加工抗原。因而可以使用不依赖于抗原加工的呈递系统(APIPS)测试肽在体外结合至MHC分子并无需抗原加工就被呈递给T细胞的能力。

APIPS的实例包括：

a)固定的APC(含有或不含CD28抗体)；

b)含有MHC I类或II类分子的脂质膜(含有或不含CD28抗体)；和

c)纯化的天然或重组的与板结合(plate-bound)形式的MHC(含有或不含CD28抗体)。

已知使用固定的APC来探究T细胞应答，例如在研究中通过测量对经截短的肽的应答来探究多肽内的最小表位(Fairchild等人(1996)Int.Immunol.8:1035-1043)。可使用例如甲醛(通常为多聚甲醛)或戊二醛来固定APC。

脂质膜(可为平面膜或脂质体)可通过使用人工脂质来制备，或可为来自APC的质膜/微粒体碎片。

在使用中，可将APIPS施用于组织培养皿的孔中。然后加入肽抗原，并通过添加挑选的T细胞系或克隆来检测肽与APIPS的MHC部分的结合。可通过本领域已知的任何方法，例如通过掺入³H胸腺嘧啶核苷或细胞因子分泌，来测量T细胞系或克隆的活化。

如果肽能够通过APIPS被呈递给T细胞，那么它就能够无需抗原加工就与MHC分子结合，且这就是apitope。

耐受性

本发明的肽能够诱导针对髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)的耐受性。

如本文所用，术语“致耐受性”是指能够诱导耐受性。

耐受性是对抗原不应答。对自身抗原的耐受性是免疫系统的一个重要特征，当失去该耐受性时，可导致自身免疫性疾病。适应性免疫系统必须保持对大量的各种传染源的应答能力的同时避免其自身组织中含有的自身抗原的免疫攻击。这在很大程度上受不成熟的T淋巴细胞对胸腺中凋亡细胞死亡的灵敏度来调控(中枢性耐受)。然而，不是所有的自身抗原都能在胸腺中检测到，因此自身反应性的胸腺细胞的死亡并不完全。因而，也存在这样的机制，外周组织中成熟的自身反应性T淋巴细胞藉此机制获得耐受性(外周耐受)。Anderton等人在1999年给出了对中枢和外周耐受性机制的综述(Immunological Reviews169:123-137)。

可通过在至少一部分CD4+T细胞中诱导无反应性来产生或表征耐受性。为了活化T细胞，肽必须与能够向T细胞传递两种信号的“专业”APC缔合。第一信号(信号1)通过APC细胞表面上的MHC-肽复合体来递送，并通过TCR被T细胞接收。第二信号(信号2)通过APC表面上的共同刺激分子(如CD80和CD86)来递送，并被T细胞表面上的CD28接收。人们认为，当T细胞在缺乏信号2的情况下接收信号1时，其并未被活化，并且事实上变得无反应性。无反应性的T细胞对随后的抗原刺激也无反应，并且能够抑制其它免疫应答。无反应性的T细胞被认为牵涉在介导T细胞耐受性中。

在能够与MHC分子一起被呈递之前需要加工的肽不诱导耐受性，因为它们必须被成熟的抗原呈递细胞处理。成熟的抗原呈递细胞(如巨噬细胞、B细胞和树突细胞)能够进行抗原加工，但也能够向T细胞递送信号1和2，导致T细胞活化。另一方面，apitope能够在未成熟的APC上与II类MHC结合。因而其无需共同刺激就被呈递给T细胞，导致T细胞无反应性和耐受性。

当然，apitope也能与成熟APC细胞表面处的MHC分子结合。然而，免疫系统含有比成熟的APC更丰富的不成熟APC(有人提出少于10％的树突细胞被活化，Summers等人(2001)Am.J.Pathol.159:285-295)。因此，apitope的默认状态为无反应性/耐受性，而非活化。

已显示当耐受性被吸入肽诱导时，抗原特异性的CD4+T细胞的增殖能力降低。同时，由这些细胞产生的IL-2、IFN-和IL-4的生成被下调，但IL-10的生成增加。已显示，对处于肽诱导的耐受性状态中的小鼠中的IL-10进行中和完全恢复了对疾病的敏感性。有人已提出，一定数量的调控细胞持续保持在产生IL-10同时介导免疫调节的耐受状态(Burkhart等人(1999)Int.Immunol.11:1625-1634)。

因此可通过各种技术来监测耐受性的诱导，其包括：

a)降低对感染其中所述肽为体内目标表位的疾病的敏感性；

b)在CD4+T细胞中诱导无反应性(可通过随后的体外抗原刺激来检测)；

c)改变CD4+T细胞数量，包括：

(i)降低增殖；

(ii)下调IL-2、IFN-和IL-4的生成；和

(iii)增加IL-10的生成。

目标疾病

本发明的肽可用于治疗和/或预防疾病。所述疾病可为脱髓鞘疾病，如肾上腺脑白质营养不良、白质消融病或多发性硬化(MS)。

本发明的肽在治疗和/或预防多发性硬化(MS)中十分有效。多发性硬化(MS)是一种慢性炎症疾病，特征在于在整个CNS白质中传播并在各位点和各个时期发生的多种脱髓鞘病变(McFarlin和McFarland,1982New England J.Medicine 307:1183-1188和1246-1251)。MS被认为是由自身反应性T细胞介导的。

药物组合物

在第二方面，本发明涉及包含一种或多种本发明第一方面的肽的药物组合物。

本发明人预测，尽管存在“旁观者抑制”，但可能有必要靶向多种不同的T细胞克隆以有效诱导耐受性。因此可向个体给药多种肽以预防或治疗疾病。

药物组合物可例如包含1至20种之间的apitope，例如1至15种、2至8种或4至6种apitope。

当存在两种或更多种apitope时，药物组合物可为试剂盒形式，其中一些或每种apitope均单独提供以用于同时给药、单独给药或顺序给药。

或者(或另外)，如果药物组合物(或其任何部分)以多剂量形式给药，则每一剂量单独包装。

药物组合物可包含治疗或预防有效量的特定或每种apitope，同时任选地包含药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。

同样，在本发明的药物组合物中，特定或每种apitope可与任何合适的一种或多种粘合剂、润滑剂、悬浮剂、包被剂或助溶剂混合。

给药

所述肽可在无佐剂的情况下以可溶性形式给药。

所述肽可通过粘膜途径给药。

研究显示，当以可溶性形式经腹膜内(i.p.)、静脉内(i.v.)或鼻内(i.n.)或口服给药时，所述肽可诱导T细胞耐受性(如上所述的Anderton和Wraith(1998)；如上所述的Liu和Wraith(1995)；Metzler和Wraith(1999)Immunology 97:257-263)。

所述肽可经鼻内给药。

小鼠中的研究表明，诱导耐受性所需的肽给药的持续时间取决于受体中T细胞的前体频率(如上所述的Burkhart等人(1999))。因此，肽的确切剂量和给药次数将取决于个体，然而，在优选的实施方式中进行多次给药。

如果同时给药多种肽，其可以为适合单次或多次给药的“鸡尾酒”形式。或者可优选进行多次给药，但改变各次之间肽的相对浓度。

在优选的实施方式中，可沿用“剂量梯度增加”方案，其中以递增的浓度向患者多次给药。该方法已被用于例如磷脂酶A2肽在针对蜂毒变态反应的免疫治疗的应用中(Müller等人(1998)J.Allergy Clin Immunol.101:747-754和Akdis等人(1998)J.Clin.Invest.102:98-106)。

实施例

以下实施例用于举例说明本发明，但不能被解释为对本发明的限制。本发明特别涉及这些实施例中所描述的具体实施方式。

实施例1–确定髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)内的apitope

材料和方法

抗原

将编码人类MOG的125个氨基酸的N末端部分(其代表胞外结构域)的核酸序列克隆至细菌表达载体中(pET系统)。该重组人类MOG胞外结构域(rhMOG_ED)在细菌系统中表达为在其C末端具有His标签的融合蛋白。

使用标准F-moc化学合成跨越rhMOG_ED的一组15-个的重叠肽。该15个的肽有5个氨基酸被替换，并有10个氨基酸重叠。

产生T细胞克隆

通过对DR2+小鼠进行免疫接种而产生MOG特异性的杂交瘤T细胞克隆。用在完全弗氏佐剂(CFA)中的MOG重叠肽库或rhMOG_ED使DR2+小鼠免疫。10天后，移除脾和引流淋巴结，纯化CD4+T细胞并用抗原/CFA对其进行体外再刺激。一周后，用抗原对T细胞进行体外再刺激以增加活化的抗原特异性细胞的数量。

3天后，将活化的T细胞与胸腺细胞系BW5147融合。然后用HAT选择培养基选择杂交瘤克隆，并用IL-2ELISA进行肽特异性筛选。

增殖测定

将活的或多聚甲醛(p-formaldehyde)固定的Mgar(HLA-DR2+ve)细胞与肽在血清中与T细胞一起孵育或只在血清中孵育，保持48小时。通过IL-2的生成来测量T细胞增殖应答。

结果

在图1中显示了不同的MOG特异性杂交瘤克隆对嵌套MOG肽的呈递的应答。由于其能够被固定的APT呈递给T细胞而无需进一步加工，因此肽MOG 41-55(“ROK5”)被定义为apitope。然后使用在25-60区域重叠的肽、使用一个氨基酸被替换的肽来进行详细的研究。肽MOG 41-55、43-57、44-58和45-59被确定为apitope(图1)。

表1中给出了这些肽的序列。

表1–被确定为apitope的MOG肽的序列

肽	MOG	氨基酸序列
			ROK5	MOG 41-55	RPPFSRVVHLYRNGK
ROK19	MOG 43-57	PFSRVVHLYRNGKDQ
			ROK20	MOG 44-58	FSRVVHLYRNGKDQD
ROK21	MOG 45-59	SRVVHLYRNGKDQDG

实施例2–离体耐受测定

为了确定被确定为apitope的肽是否能够诱导对抗原的耐受性，进行离体研究。在-8天、-4天和-2天用100μg ROK5(MOG 41-55)、100μg MOG35-55或PBS使HLA-DR2转基因小鼠免疫。在第0天，通过在尾根部与CFA结合注射来用

的MOG 35-55刺激小鼠。

在第10天，收获脾细胞和引流淋巴结并分离它们各自的细胞群体，并用MOG 35-55进行增殖恢复测定。分开处理来自各只小鼠的细胞，并在图2中将数据分开作图。为了恢复应答，用一定剂量范围的MOG 35-55(

)离体处理细胞，并确定通过掺入³H-胸腺嘧啶核苷的增殖。针对每种条件计算刺激指数(相对于无抗原增殖)。

如图2所示，ROK5(MOG 41-55)能够抑制用MOG 35-55刺激的免疫应答。

也探究了ROK5预处理对不同细胞因子分布的效果。如图3所示，脾细胞的IFN、IL-2、GM-CSF、IL6的生成明显受到ROK5预处理的影响。

实施例3–ROK5预防EAE

EAE(实验性自身免疫性脑脊髓炎)是MS的一种受广泛研究的模型，并可通过用于强佐剂中的髓鞘或髓鞘组分(包括MOG)来免疫而在各种基因易感实验动物种类(包括啮齿目动物和灵长目动物)中诱导。

为了测试ROK5在HLA-DR2转基因小鼠中预防MOG诱导的EAE的能力，在该类小鼠系中建立疾病模型。使用致脑炎的MOG肽即小鼠MOG35-55(mMOG 35-55)来诱导疾病。然后，在EAE预防实验中如下测试ROK5：

实验1：给药3次ROK5进行预处理，随后用mMOG 35-55进行免疫接种。

实验2：给药5次ROK5进行预处理，随后用mMOG 35-55进行免疫接种。

在每个实验中，每组使用10只小鼠。

肽序列：

mMOG35-55:MEVGWYRSPFSRVVHLYRNGK(SEQ ID No.7)

hROK5(41-55):RPPFSRVVHLYRNGK(SEQ ID No.1)

mROK5(41-55):RSPFSRVVHLYRNGK(SEQ ID No.8)

人类和小鼠的MOG不同在于42位处的氨基酸取代，脯氨酸被丝氨酸取代。两种MOG35-55肽都是免疫原性的，但小鼠MOG 35-55更能够导致脑炎，因此选择小鼠MOG 35-55以在所述模型中诱导EAE。

在图4A和4B中描述了体内EAE预防方案。

MOG诱导的EAE模型

在第0天建立两组DR2转基因小鼠，“100μg”组中的动物(n＝7)接受在完全弗氏佐剂(CFA)中的100μg的mMOG 35-55(100μl尾根部皮下注射)，“200μg”组中的动物(n＝8)接受在CFA中的200μg的mMOG 35-55。在第0天和第2天，对所有动物注射百日咳毒素(PBS中，200ng，腹腔内注射)。每天对临床EAE进行评分并测量动物体重。

如图5A、5B和下表2所示，两种剂量的mMOG 35-55都可以良好发病率诱导EAE。

表2

组	发病率	开始发病的平均天数
			100ug	4/7	12.25
200ug	7/8	12

ROK5EAE预防实验

在该基础上测试ROK5预防MOG诱导的EAE的能力。

A/第一实验

进行第一实验，其中用于CFA中的小鼠ROK5、人类ROK5或PBS(100μl中100μg)对动物预处理3次(每次间隔3天，在侧腹部皮下注射)，然后在第0天和第2天用CFA中的200μg的mMOG 35-55(在尾根部皮下注射)和用200ng的百日咳毒素(200ng，在PBS中，腹腔内注射)使所有动物免疫。

每天对临床EAE进行评分并测量动物体重。图6显示小鼠和人类ROK5apitope都可降低由MOG诱导的疾病的严重性。有趣的是，人类ROK5更有效。

如图6A和6B中所示，实验1显示小鼠和人类ROK5apitope都可降低由MOG 35-55诱导的疾病的严重性。

B/第二实验

进行第二实验，其中用于CFA中的人类ROK5或PBS(100μl中100μg)对动物预处理5次(每次间隔3天，在侧腹部皮下注射)，然后在第0天和第2天用CFA中的200μg的mMOG 35-55(在尾根部皮下注射)和用200ng的百日咳毒素(200ng，在PBS中，腹腔注射)使所有动物免疫。每天对临床EAE进行评分。

在实验2中(图7)，huROK5降低了疾病的严重性并造成了疾病负担峰的延迟。

总结来说，人类ROK5apitope能够在两种EAE实验中都降低疾病严重性。

对本发明所述方法和系统的各种改进和改变，对于本领域技术人员来说是显而易见的，其并未背离本发明的范围和主旨。虽然结合特定优选的实施方式来描述了本发明，应理解所要求保护的发明不应当过分局限于具体实施方式。实施上，本发明意图涵盖那些为了实现本发明而对所记载的模型进行的各种改进，这些改进对于化学或分子生物学或相关领域的技术人员来说是显而易见的。将以上说明书中提到的所有出版物并入本申请作为参考。

Claims (5)

1.肽，所述肽选自以下髓鞘少突胶质细胞糖蛋白肽：SEQ ID No.1、SEQ ID No.3和SEQID No.4。

2.根据权利要求1所述的肽，所述肽为SEQ ID No.1。

3.一种药物组合物，包含一种或多种肽，所述肽选自以下髓鞘少突胶质细胞糖蛋白肽：SEQ ID No.1、SEQ ID No.3和SEQ ID No.4。

4.肽在制造用于预防和/或治疗脱髓鞘疾病的药物中的用途，所述肽选自以下髓鞘少突胶质细胞糖蛋白肽：SEQ ID No.1、SEQ ID No.3和SEQ ID No.4。

5.根据权利要求4所述的用途，其中所述疾病为多发性硬化。

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