JPH09503232A - ＧＰ１３０結合界面で突然変異したインターロイキン−６（ＩＬ−６）受容体αの可溶性型であるＩＬ−６アンタゴニスト - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 これらは、ｇｐ１３０界面に１つまたはそれ以上の突然変異を有するヒトＩＬ−６の受容体αの可溶性型（ｓｈＩＬ−６Ｒα）よりなることを特徴とする、インターロイキン−６のアンタゴニストである。好適な実施態様において、突然変異は、Ａｌａ２２８、Ａｓｎ２３０、Ｈｉｓ２８０、およびＡｓｐ２８１よりなる群から選択される位置に存在する。これらのアンタゴニストは、異常ＩＬ−６活性に引き起こされる疾患を予防および治療することができる薬剤として使用することができる。図４は、野性型ｓｈＩＬ−６Ｒαのアゴニスト性と比較した、突然変異体Ａｌａ２２８Ａｓｐ／Ａｓｎ２３０Ａｓｐ／Ｈｉｓ２８０Ｓｅｒ／Ａｓｐ２８１Ｖａｌのアンタゴニスト活性を示す。このアンタゴニストは、異常ＩＬ−６生物活性に引き起こされる疾患を予防、制御および治療するための薬剤の調製に使用することができる。

Description

【発明の詳細な説明】 ＧＰ１３０結合界面で突然変異したインターロイキン−６（ＩＬ−６）受容体α の可溶性型であるＩＬ−６アンタゴニスト 説明 本発明は免疫の分野に関する。さらに詳しくは本発明の主題は、モノマー性受 容体複合体ＩＬ−６／ｓＩＬ−６Ｒαとｇｐ１３０のダイマー性受容体複合体の 形成を負に妨害する、インターロイキン−６の受容体αの可溶性型の突然変異体 である。本発明のさらなる主題は、異常なＩＬ−６活性により引き起こされる疾 患を制御、予防及び治療するためのインターロイキン−６アンタゴニストとして のこれらの突然変異体の使用である。 本発明において「インターロイキン−６」又は「ＩＬ−６」という用語は、Ｉ Ｌ−６、及び野生型ＩＬ−６の生物学的特徴を維持しているその断片、欠失体、 挿入体、置換体、突然変異体及び修飾体を意味する。他に特に明記していない場 合は、この用語はヒトＩＬ−６を意味する。 インターロイキン−６は、異なる標的細胞の種々の生物学的応答を誘発する。 しかしＩＬ−６の生理学的産生はＢ細胞増殖と成熟を制御するが、Ｔ細胞活性化 と炎症応答（サイトカインの制御されない産生）中の肝臓の急性相蛋白の産生は 、多くの炎症性、自己免疫性及び新生物性疾患の病原性に決定的に重要な役割を 果たす。 現状の技術水準から判断されるように、単一の疾患の発生におけるＩＬ−６の 果たす役割を研究し、治療用の薬剤を規定するために、ＩＬ−６生物活性阻害剤 を極めるための種々の試みが行われている。 また成熟なヒトＩＬ−６蛋白（ｈＩＬ−６）は、２つのジスルフィド結合（Ｃ ｙｓ４５〜Ｃｙｓ５１、及びＣｙｓ７４〜Ｃｙｓ８４）を有する１８５個のアミ ノ酸のポリペプチドであることも公知である。ＩＬ−６は、標的細胞表面上の少 なくとも２つの特異的受容体（ＩＬ−Ｒαとｇｐ１３０）との２つの結合部位（ 部位Ｉと部位IIとして知られている）と相互作用し、３量体複合体であるＩ Ｌ−６−（受容体）₂を形成することにより機能する。この複合体は以下のよう に順に形成される。第１の受容体（ＩＬ−６Ｒα）が、シグナルを伝達すること なくＩＬ−６の部位Ｉに低親和力で結合し、次に第２の受容体（ｇｐ１３０）が 高親和力でＩＬ−６の部位IIに結合した後シグナルを伝達する。 この機序に基づき、第１の受容体を部位Ｉに結合させることはできるが、突然 変異により第２の受容体が部位IIに結合するのを立体的に阻害する受容体が２量 体化することができなくするｈＩＬ−６突然変異体が設計された。この型の突然 変異体はＷＯ９４／０９１３８（シータス・オンコロジー社（CetusOncology Co rporation））、及びＷＯ９４／０１１４０２及びＰＣＴ/ＩＴ９４／０００９５ （インスチツト・ジ・リセルシェ・ジ・ビオロジア・モレコラレ・ピー・アンゲ レッチ社（Istituto di Ricerchedi Biologia MolecolareP．Angeletti S.p.A. ））に記載されている。 ｇｐ１３０との界面領域に１つまたはそれ以上の突然変異を有するＩＬ−６の 受容体αの可溶性型（ｓＩＬ−６Ｒα）はインターロイキン−６のアンタゴニス トであることが発見され、この発見が本発明の基礎となっている。 １つの実施態様において、ｓＩＬ−６Ｒαは、Ａｌａ２２８、Ａｓｎ２３０、 Ｈｉｓ２８０、およびＡｓｐ２８１から選択される位置に少なくとも１つの突然 変異を有する。例えば突然変異体は、Ａｓｎ２３０（配列番号：１）、Ａｌａ２ ２８Ａｓｐ／Ａｓｎ２３０Ａｓｐ（配列番号：２）、Ｈｉｓ２８０Ｓｅｒ／Ａｓ ｐ２８１Ｖａｌ（配列番号：３）よりなる群から選択し得る。 好適な実施態様において、ｓＩＬ−６Ｒαは、Ａｌａ２２８、Ａｓｎ２３０、 Ｈｉｓ２８０およびＡｓｐ２８１位に複数の突然変異を有する。良好な結果を与 えた複数突然変異体は、Ａｌａ２２８Ａｓｐ／Ａｓｎ２３０Ａｓｐ／Ｈｉｓ２８ ０Ｓｅｒ／Ａｓｐ２８１Ｖａｌ（配列番号：４）である。 ＩＬ−６のアンタゴニスト（本発明では、ｇｐ１３０に結合する界面で突然変 異した、ＩＬ−６の受容体αの可溶性型よりなる）は、異常ＩＬ−６活性に関連 した疾患の治療と予防に治療上有効な濃度で投与することができる。このために 本発明のアンタゴニストは、静脈内又は皮下注射により投与される。これらの投 与方法は当業者には公知である。 この時点まで発明を一般的に説明した。本発明の目的、特徴、利点および操作 方法をさらに理解できるようにするために、以下の例により本発明をより詳細に 説明する。 図１Ａは、³²Ｓで標識したｓｇｐ１３０（ｇｐ１３０の可溶性型）による、本 発明の突然変異体の共免疫沈降物のインビトロのＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル（１２％ ）分析を示す。図１Ｂは、移動した¹²⁵Ｉ−ＩＬ−６に対応するゲル上の位置を 示す。 図２は、野性型ｓＩＬ−６Ｒα受容体と、Ａ３７５細胞の膜上のｇｐ１３０と 相互作用するように突然変異したｓＩＬ−６Ｒα受容体の異なる能力を、ヒスト グラムの形で示す。 図３は、³²Ｓは２．０μgの野性型受容体又は２．０μgの突然変異受容体（配 列番号：４）で標識したｓｇｐ１３０の共免疫沈降物のインビトロのＳＤＳ−Ｐ ＡＧＥゲル（１２％）分析を示す。 図４は、野性型ｓｈＩＬ−６Ｒαのアゴニスト性と比較した、ＨｅｐＧ２細胞 上の突然変異体配列番号：４のアンタゴニスト活性を示す。 図５は、ＡＰＲＦとＤＮＡ結合部位により形成された複合体（ＳＩＥ、血清誘 導体性成分）のゲル分析を示す。（突然変異体配列番号：４は、ＨｅｐＧ２細胞 上のＯＭ−依存性ＡＰＲＦの活性化を阻害しない）。 本発明のＩＬ−６のアンタゴニストは、合成法又は組換え法を用いて産生され る。後者の場合、ｓＩＬ−６ＲαをコードするｃＤＮＡはプラスミドに導入され た後、原核生物細胞又は真核生物細胞中で発現される。細菌は好ましい原核微生 物である。 あるいは本発明のｓＩＬ−６Ｒα突然変異体をコードするｃＤＮＡは、哺乳動 物細胞に導入することもできる。これらの哺乳動物細胞は、ＣＨＯ、ＣＯＳ、Ｃ １２７、ＨｅｐＧ２、ＳＫ Ｈｅｐよりなる群から選択することができる。さら に該蛋白は、公知の組換えバキュロウイルス（Baculovirus）（ＡｃＮＰＶ株） 法を用いて昆虫細胞中（Ｓｆ９又はハイファイブ（HighFive））で発現すること もできる。例１ ｓＩＬ−６Ｒα突然変異体の調製 ｓＩＬ−６Ｒα ｃＤＮＡは、鋳型としてＩＬ−６Ｒαの完全ｃＤＮＡを用い てＰＣＲ法により５’ＥｃｏＲＩ−３’ＸｂａＩ断片として得られた（スポレノ ・イー、パオネッサ・ジー、サルバチ・エー・エル、グラジアニ・アール、デル マストロ・ピー、シリベルト・ジー、およびトニアッチ・シー（Sporeno E.，Pa onessaG.，Salvati A.L.，Graziani R.，DelmastroP.，CilibertoG．and Toniat ti C．）（１９９４）J．Biol．Chem．２６９、１０９９１−１０９９５）。３ ’プライマーは、６つのヒスチジンコード配列が先行するアミノ酸３２４位に人 工的ＴＡＧ停止コドンを導入するように設計した。これは我々が産生するｓＩＬ −６Ｒαおよびその突然変異体が、金属親和性クロマトグラフィーを用いて分子 を精製するのに有用な、分子のカルボキシ末端に６つのヒスチジンの「尾（tail ）」を、有することを確認するために行った。次に、作成した断片をＣＯＳ−７ 細胞発現ベクターｐｃＤＮＡＩ（インビトロゲン（Invitrogen））中に導入し、 完全に配列決定し、こうしてプラスミドｐＣ６ＦＲＨを得た。 次にプラスミドｐＣ６ＦＲＨを鋳型として用いて、以下の４つの突然変異体を コードする作成体：Ａｓｎ２３０Ａｓｐ（配列番号：１）；Ａｓｎ２３０Ａｓｐ ／Ａｌａ２２８Ａｓｐ（配列番号：２）；Ｈｉｓ２８０Ｓｅｒ／Ａｓｐ２８１Ｖ ａｌ（配列番号：３）およびＡｌａ２２８Ａｓｐ／Ａｓｎ２３０Ａｓｐ／Ｈｉｓ ２８０Ｓｅｒ／Ａｓｐ２８１Ｖａｌ（配列番号：４）を、過去に記載されている ２工程ＰＣＲ法（ラント・オー、グルナート・エィチ・ピー、ハーン・ユー（La ndt O.，Grunert H.P.，and Hahn，U.）（１９９０）Gene ９６、１２５−１２ ８）により得た。 次に、この突然変異体をＣＯＳ−７細胞中で発現した。このためにＣＯＳ−７ 細胞を、１０％ＦＣＳ、およびグルタミンと抗生物質を補足したダルベッコー改 変イーグル培地中で５％ＣＯ₂で維持した。蛋白発現のために、２．５×１０⁶個 のＣＯＳ−７細胞を１００mm組織培養プレー卜中に接種し、翌日ＤＥＡＥデキス トラン法（シード・ビー、アルフォ・エー（Seed B.，Aruffo A.）（１９８７） Proc．Natl．Acad．Sci．USA ８４、３３６５−３３６９）を用いて、種々のｓ ｈＩＬ−６Ｒα発現ベクター２μgでトランスフェクションした。トランスフ ェクション１６時間後細胞を分け、１００mmプレートに再度接種し、完全培地中 で３７℃で増殖させた。７２〜９６時間後培地を集め、遠心分離し、共免疫沈降 実験および結合測定法に使用した。各突然変異体の発現レベルを追跡するために 、トランスフェクションした２．５×１０⁵個のＣＯＳ−７細胞を３５mmのプレ ートに再接種し、トランスフェクションの４８時間後、［³⁵Ｓ］メチオニンで４ 時間代謝標識した。上澄液を、抗ヒトＩＬ−６Ｒαモノクローナル抗体Ｉ６Ｒ１ ／９．Ｇ１１で免疫沈降させた。次に免疫沈降した物質をＳＤＳを含有するポリ アクリルアミドゲルで電気泳動して分析した。突然変異体のＩＬ−６結合解析 調整ＣＯＳ細胞培養培地中に含有されるｓＩＬ−６Ｒα突然変異体のＩＬ−６ に対する親和性を測定するために、我々が産生させた蛋白中の６つのヒスチジン の「尾」を使用した。 あらかじめ力価測定実験で測定し、イミダゾールを最終濃度５mMになるように 加えた、トランスフェクションしたＣＯＳ細胞上澄液の適当な量を、２０〜４０ pMの¹²⁵Ｉ−ＩＬ−６、および上昇する濃度の非標識サイトカインと混合した。 平衡条件下で４０μlのＮｉ²¹−ＮＴＡ−アガロース（キアゲン（Quiagen））（ ヒスチジンの「尾」を持つ蛋白に選択的に結合することができる樹脂）を加え、 さらに１時間インキュベートを続けた。こうして受容体により結合されたリガン ドを間接的に樹脂に結合させ、ＰＢＳ中３０％ショ糖のクッションを介して遠心 分離して遊離リガンド（上澄液）から分離した。すべての工程は４℃で行なった 。遊離ｃｐｍと結合ｃｐｍ（１秒当たりの放射能カウント）の値から、競合排除 曲線を引いた。結果のスキャチャード（Scatchard）変換により、種々の可溶性 ＩＬ−６受容体の見かけのＫｄを決定した（スポレノ、パオネッサ、サルバチ、 グラジアニ、デルマストロ、シリベルト、およびトニアッチ（Sporeno，Paoness a，Salvati，Graziani，Delmastro，Ciliberto and Toniatti）（１９９４）J. Biol．Chem．２６９、１０９９１−１０９９５を参照）。マッキントッシュコン ピューターで「ウルトラフィット（UltraFit）」ソフトウェア（バイオソフト（ Biosoft）（登録商標））を用いて、結合データの解析と曲線当てはめを行った 。 表１から明らかなように、結合親和性は：１）突然変異体Ａｓｎ２３０Ａｓｐ （配列番号：１）、Ａｓｎ２３０Ａｓｐ／Ａｌａ２２８Ａｓｐ（配列番号：２） について実質的に同じであり；ｂ）Ｈｉｓ２８０Ｓｅｒ／Ａｓｐ２８１Ｖａｌ（ 配列番号：３）については、わずかではあるが再現性を以って（２．５nM〜６nM ）低下し；そしてｃ）Ａｌａ２２８Ａｓｐ／Ａｓｎ２３０Ａｓｐ／Ｈｉｓ２８０ Ｓｅｒ／Ａｓｐ２８１Ｖａｌ（配列番号：４）については、野性型の活性が十分 に保持された。 ｇｐ１３０への突然変異体の結合 ｓＩＬ−６Ｒα／ｓｇｐ１３０ヘテロダイマーのＩＬ−６依存性の生成は、適 当なモノクローナル抗体を使用して、インビトロで共免疫沈降法により容易に追 跡できる。こうして野性型と同じ程度のＩＬ−６結合親和性を示す突然変異体を 選択し、それらのｓｇｐ１３０への結合をＩＬ−６の存在下で共免疫沈降法によ り評価した。 ³²Ｓ−標識ｓｇｐ１３０を¹²⁵Ｉ−ＩＬ−６（免疫沈降法の内部標準として） とトランスフェクションしたＣＯＳ−７細胞培養培地（未変性又は突然変異受容 体のいずれかを含有する）の一部とインキュベートした。インビトロで結合させ た後、混合物に抗ＩＬ−６Ｒαモノクローナル抗体Ｉ６／Ｒ１９．Ｇ１１を加え 、免疫沈降物をＳＤＳ−ＰＡＧＥで分析した。結果を図１に示す。明らかなよう に、 突然変異体Ｈｉｓ２８０Ｓｅｒ／Ａｓｐ２８１Ｖａｌ（配列番号：３）は、ＩＬ −６／ｓＩＬ−６Ｒα複合体ｓｇｐ１３０分子の会合を強く低下させた（レーン ４）。また単一置換体Ａｓｎ２３０Ａｓｐ（配列番号：１）のｓｇｐ１３０との 相互作用は低下した（レーン２）。ｓｇｐ１３０との相互作用へのこの突然変異 体の作用は、突然変異体Ａｌａ２２８Ａｓｐ／Ａｓｎ２３０Ａｓｐ（配列番号： ２）と同程度であった。最後に、４重突然変異体Ａｌａ２２８Ａｓｐ／Ａｓｎ２ ３０Ａｓｐ／Ｈｉｓ２８０Ｓｅｒ／Ａｓｐ２８１Ｖａｌ（配列番号：４）は、³⁵ Ｓ−ｇｐ１３０を共免疫沈降する能力は最低であった（レーン５）。 受容体突然変異体をまた、細胞表面上のｇｐ１３０と相互作用する能力につい て試験した。この目的のために、ＩＬ−６Ｒαに比べてｇｐ１３０分子を過剰に 有するヒト黒色腫Ａ３７５細胞で結合実験を行なった。実際Ａ３７５単一層への¹²⁵ Ｉ−ＩＬ−６の結合は、可溶性受容体により強く増強された。この現象は、 ｓＩＬ−６Ｒαが¹²⁵Ｉ−ＩＬ−６に結合し、次に細胞の表面上に存在するｇｐ １３０分子と相互作用する能力による。この相互作用の特異性は、ｓＩＬ−６Ｒ αの存在下で¹²⁵Ｉ−ＩＬ−６の上昇した結合は、過剰の未標識ヒトオンコスタ チン（Oncostatin）Ｍ（ＯＭ）の添加により競合されるという事実により証明さ れる（図２）。このサイトカインは、直接ｇｐ１３０に結合することができ、Ｉ Ｌ−６／ＩＬ−６Ｒα複合体の結合についてｇｐ１３０と競合することができる 。野性型ｓｈＩＬ−６Ｒαと異なり、細胞を［¹²⁵Ｉ−ＩＬ−６＋アンタゴニス トとして作用する可能性突然変異受容体］を投与した時特異的結合がわずかに増 加したのみである（図２）。ｇｐ１３０との相互作用に対する最大の妨害は、Ｈ ｉｓ２８０Ｓｅｒ／Ａｓｐ２８１Ｖａｌ（配列番号：３）およびＡｌａ２２８Ａ ｓｐ／Ａｓｎ２３０Ａｓｐ／Ｈｉｓ２８０Ｓｅｒ／Ａｓｐ２８１Ｖａｌ（配列番 号：４）により示される。突然変異体Ａｌａ２２８Ａｓｐ／Ａｓｎ２３０Ａｓｐ／Ｈｉｓ２８０Ｓｅｒ／Ａ ｓｐ２８１Ｖａｌ（配列番号：４）がＩＬ−６アンタゴニストであることの証明 前記の結果は、この突然変異体が、ＩＬ−６への親和性を低下させることなく 、ｇｐ１３０に対し最大の結合を有することを示している。この突然変異体の生 物 学的活性を検討するために、その生産と野性型可溶性受容体の生産を、マックス バック（MaxBac）（登録商標）系（インビトロゲン（Invitrogen）のバキュロウ イルス発現系）を使用してスケールアップを行った。発現し精製した受容体を免 疫沈降実験で試験した。 グレース（Grace）の昆虫培地で増殖させたＳｆ９細胞を用いて、トランスフ ァーベクターのトランスフエクション、組換えウイルスの単離そして高力価ウイ ルスのストックの調製のために使用した。蛋白の産生のためにハイファイブ（Hi ghFive）（登録商標）細胞（インビトロゲン（Invitrogen））を使用した。簡単 に述べると、グレース（Grace）の昆虫培地で増殖させた４×１０⁷のハイファイ ブ（High Five）細胞を７５０mlのフラスコに接種し、感染多重度（MOI）１０で 適当な組換えウイルスで感染させた。２時間後細胞を洗浄し、ＳＦ−９００無血 清培地を加えた。感染３６時間後、培養上澄液を集め、ＰＢＳに対して透析し、 Ｎｉ²⁺−ＮＴＡ−アガロースカラムに直接適用した。ＰＢＳ／８mMイミダゾール で洗浄後、野性型ｓｈＩＬ−６Ｒαと突然変異体の両方をＰＢＳ／８０mMイミダ ゾールで溶出した。精製した蛋白をＰＢＳに対して透析し、直接使用するか又は ３週まで４℃で保存した。 精製した蛋白の使用することにより、受容体の量を定量し、野性型受容体と突 然変異受容体について広範囲のＩＬ−６濃度の存在下でｓｇｐ１３０と相互作用 する能力を比較することができた。その結果（図３）は、ＣＯＳ細胞誘導受容体 であらかじめ得られた結果とよく一致した。興味深いことに曲線の各点で、共免 疫沈降したｇｐ１３０の量は、野性型受容体より突然変異受容体で低く、試験し たサイトカインの最高濃度（１００nM）の場合でもこれは同じであった。これら の知見は、ＩＬ−６と突然変異ｓＩＬ−６Ｒαがｇｐ１３０に対して低親和性で 複合体を形成することを追認している。 ＩＬ−６活性に対する突然変異体の拮抗作用の可能性を試験するために、我々 はヒト肝癌細胞中の転写因子ＡＰＲＦ（急性相応答因子）／ＳＴＡＴ３のＩＬ− ６依存性活性化を選択した。チロシンリン酸化に依存するＡＰＲＦの活性化は、 迅速な細胞性事象であり、これはＩＬ−６ファミリーのすべてのサイトカインで 刺激後数分以内に起きる。 ヒトＨｅｐＧ２細胞を、一定量の野性型受容体および突然変異受容体（１００ nM）とともに増加する濃度のＩＬ−６で剌激した。図４に示すように、ｓｈＩＬ −６ＲαはＩＬ−６によりＡＰＲＦ誘導体を増強した（図４のレーン２〜４と５ 〜７を比較されたい）が、可溶性突然変異受容体はアゴニスト活性を欠くのみで なく、サイトカインの活性化をダウン修飾（down-modulate）した（図４、レー ン８〜１０）。共免疫沈降実験から予測されるように、細胞を２０pMまでのＩＬ −６で処理した時（レーン８と９、図４）阻害は完全であり、最大濃度のＩＬ− ６ではほんのわずかに誘導が検出された（２００pM、図４のレーン１０）。 拮抗作用がＩＬ−６に特異的であるか否かを試験するために、ＩＬ−６関連サ イトカインＯＭ（これもＡＰＲＦリン酸化を効率的に誘導することが知られてい る）で誘導したＨｅｐＧ２細胞に突然変異体を加えた。図５に示すように、突然 変異体は、ＯＭ活性に拮抗しなかった。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ Ｃ１２Ｐ 21/02 9162−4Ｂ Ｃ１２Ｎ 15/00 Ａ (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:91）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．ｇｐ１３０と結合する界面に１つまたはそれ以上の突然変異を有するＩＬ −６のα受容体の可溶性型（ｓＩＬ−６Ｒα）であることを特徴とするインター ロイキン−６（ＩＬ−６）のアンタゴニスト。 ２．ｓＩＬ−６Ｒαは、Ａｌａ２２８、Ａｓｎ２３０、Ｈｉｓ２８０、および Ａｓｐ２８１よりなる群から選択される位置に少なくとも１つの突然変異を有す る、請求の範囲第１項記載のインターロイキン−６のアンタゴニスト。 ３．ｓＩＬ−６Ｒαは突然変異体Ａｓｎ２３０Ａｓｐ（配列番号：１）を有す る、請求の範囲第１項又は第２項記載のインターロイキン−６のアンタゴニスト 。 ４．ｓＩＬ−６Ｒαは突然変異体Ａｌａ２２８Ａｓｐ／Ａｓｎ２３０Ａｓｐ（ 配列番号：２）を有する、請求の範囲第１項又は第２項記載のインターロイキン −６のアンタゴニスト。 ５．ｓＩＬ−６Ｒαは突然変異体Ｈｉｓ２８０Ｓｅｒ／Ａｓｐ２８１Ｖａｌ（ 配列番号：３）を有する、請求の範囲第１項又は第２項記載のインターロイキン −６のアンタゴニスト。 ６．ｓＩＬ−６Ｒαは突然変異体Ａｌａ２２８Ａｓｐ／Ａｓｎ２３０Ａｓｐ／ Ｈｉｓ２８０Ｓｅｒ／Ａｓｐ２８１Ｖａｌ（配列番号：４）を有する、請求の範 囲第１項又は第２項記載のインターロイキン−６のアンタゴニスト。 ７．異常ＩＬ−６活性により引き起こされる疾患を制御、予防および治療する ことができる薬剤の研究と調製のための、請求の範囲第１から第６項までに記載 のインターロイキン６アンタゴニストの使用。 ８．前述し、例示し、特許請求した、ＩＬ−６アンタゴニストとして作用する 可溶性受容体およびその使用。