CN1139933A - 由在GP130结合介面突变的白细胞介素-6(IL-6)受体α的可溶形式组成的IL-6拮抗剂 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及白细胞介素-6拮抗剂，该拮抗剂的特征在于它由人IL-6受体α的可溶形式(shIL-6Ra)组成，所述shIL-6Ra包含在gp130结合界面上的一个或多个突变。在优选的实施方案中，所述突变存在于选自Ala228、Asn230、His280和Asp281的位置上。这些拮抗剂可以用作能预防和治疗由异常IL-6活性引起的疾病的药物。图4显示与野生型shIL-6Ra的激动性质比较突变体Ala228Asp/Asn230Asp/His280Ser/Asp281Val的拮抗活性。该拮抗剂可以用于制备预防、控制和治疗由异常IL-6生物活性引起的疾病的药物。
Description
本发明涉及免疫学领域。更具体地说，本发明的主题是白细胞介素-6受体α的可溶形式的突变体，这种突变体负向影响单体受体复合物IL-6/sIL-6Rα和gp130之间的二聚体受体复合物的形成。本发明的另一个主题是这些突变物作为白细胞介素-6的拮抗剂在控制、预防及治疗由异常IL-6活性引起的疾病上的用途。
本发明内容中的“白细胞介素6”或“IL-6”指IL-6和其保持野生型IL-6生物特征的片段、缺失体、插入体、取代体、突变体及修饰体。除非有特别说明，该术语是指人IL-6。
IL-6作用于不同的靶细胞引起一系列生物学反应。然而，生理产生的IL-6调控B细胞的增殖和成熟、T细胞的激活及炎症反应情况下肝脏中急相蛋白的产生。该细胞因子的失调生产在许多炎症、自体免疫和瘤形成疾病的病理中起关键作用。
如现有技术中所知，人们进行了大量尝试来寻找IL-6生物活性抑制剂，一方面想弄清在单一疾病发生中这一细胞因子的作用，另一方面也寻求治疗疾病的药物。
已经知道成熟的人IL-6蛋白(hIL-6)是一个185个氨基酸组成的多肽，其中包括两个二硫键(Cys45-Cys51，Cys74-Cys84)。IL-6通过两个结合位点(称为位点I和位点II)和靶细胞表面的至少两种特异受体(IL-Rα和gp130)相互作用形成一个三聚体复合物IL-6(受体)2起作用。这一复合物按以下顺序形成：第一个受体(IL-6Rα)以低亲合力结合到IL-6的位点I上(不传递信号)；然后第二受体(gp130)以高亲合力与IL-6位点II结合后转导信号。
基于上述机制，已设计了人IL-6突变体，该突变体可通过位点I与第一受体结合，但不能二聚化第二受体，因为突变在空间上抑制第二受体结合到位点II上。这种类型的突变体已经在WO 94/09138(Cetus Onclogy Corporation)及WO 94/011402和PCT/IT94/00095(Istituto di Ricerche di Biologia Molecolare p.Angeletti S.P.A.)中有描述。
现在已惊奇地发现在gp130的界面区含有一个或多个突变的IL-6受体α的可溶形式是IL-6的拮抗剂，这一发现形成了本发明的基础。
在一个实施方案中，sIL-6Rα包含至少一个在选自Ala228、Asn230、His280和Asp281位置上的突变。所述的突变可以是选自例如Asn230Asp(SEQ ID NO：1)；Ala 228 Asp/Asn230Asp(SEQ IDNO：2)，His 280Ser/Asp281 Val(SEQ ID NO：3)的突变。
在一个优选的实施方案中，sIL-6Rα含有在位置Ala228、Ans230、His280和Asp281上的多突变。给出好的效果的多突变是Ala228 Asp/Asn230 Asp/His280 Ser/Asp281 Val(SEQ ID NO：4)。
本发明的由IL-6α受体的可溶形式构成的、在与gp130结合的界面上发生突变的IL-6拮抗剂，可以以治疗和预防与异常IL-6活性有关的疾病有效的浓度被施用。为此目的，按照本发明的拮抗剂最好经静脉或皮下注射施用，本领域技术人员对这些施用方法是熟知的。
到此为止，已给出了本发明的一般性描述。以下将借助下列实施例对其进行更详细的描述，以便更清楚地了解本发明的目的、特征、优点和其操作方法。
图1A表示本发明的突变体与35S标记sgp130(gP130可溶形式)的体外免疫共沉淀在SDS/PAGE(12％)上的分离。图1B显示了在对应于迁移125I-IL-6的凝胶上的位置。
图2以矩形图的形式表示了野生型sIL-6Rα受体和突变型sIL-6Rα受体在A375细胞膜上与gp130作用的不同能力。
图3表示用35S标记的sgp1 30与2.0μg野生型受体或与2.0μg突变型受体(SEQ ID NO：4)的体外免疫共沉淀在SDS/PAGE凝胶(12％)上的分离。
图4表示了与野生型shIL-6Rα的激动性质比较，突变体(SEQID NO：4)在HepG2细胞上的拮抗活性。
图5表示了由APRF和DNA结合位点(SIE，Serum InducibleElement)形成的复合物在凝胶上的分离。(突变SEQ ID NO：4不抑制OM依赖性APRF在HepG2细胞上的激活)。
本发明的IL-6拮抗剂可通过合成或重组技术产生。在后一种情况下，编码sIL-6-Rα的cDNA可整合到质粒中去，然后在原核或真核细胞中表达。一般来说，细菌是较好的原核微生物。
此外，编码本发明的sIL-6Rα突变体的cDNA亦可被引入到哺乳动物细胞中，这些哺乳动物细胞可以选自CHO，COS，C127，HepG2，SK Hep。而且，这些蛋白亦可用公知的重组杆状病毒技术(AcNPV菌株)在昆虫细胞(Sf9或HighFive)中表达。
实施例1sIL-6Rα突变体的制备
sIL-6RαcDNA作为5′EcoRI-3′XbaI片段可用完整的IL-6RαcDNA作为模板经PCR扩增得到(Sporeno E.，Paonessa G.，Salvati A.L.，Graziani R.，Delmastro P.，Ciliberto G.and Toniatti C.(1994)J.Biol.Chem.269，10991-10995)。设计3′引物以便在位于6个组氨酸编码序列之后的324氨基酸位点引入一个人工TAG终止密码子。进行这一工作以保证sIL-6Rα和我们产生的突变体在分子的羧基端具有一个6个组氨酸的尾部，它在以后使用金属亲和层析进行所述分子的提纯中是有用的。然后，产生的片段可被导入到COS-7细胞表达载体pcDNAI(Invitrogen)中，并整体测序，由此得到pC6FRH质粒。
再用pC6FRH质粒作为模板进行现有技术中描述的两步法PCR扩增(Landt O.，Grunert H.P.and Hahn U.(1990)Gene 96，125-128)来构建下列四种突变体：Asn230Asp(SEQ ID NO：1)；Asn 230 Asp/Ala228 Asp(SEQ ID NO：2)；His 280 Ser/Asp 281 Val(SEQ ID NO：3)和Ala228 Asp/Asn 230 Asp/His 280 Ser/Asp281Val(SEQ ID NO：4)。
然后在COS-7细胞中表达所述突变体，将COS-7细胞在5％CO2下保持在补加有10％FCS及谷氨酸和抗生素的DME培养基(Dulbecco′s modified Eagle′s medium)中。为了表达蛋白，将2.5×106个COS-7细胞接种到100-mm组织培养皿中，第二天用2μg不同的shIL-6Rα表达载体进行转染。这一过程采用DEAE-葡聚糖技术(在Seed B.，Aruffto A.(1987)Proc.Natl.Acad.Sci.USA.84，3365—3369中描述)。转染16小时后，把细胞分割并重新接种于100—mm培养皿中并于37℃下在完整培养基中培养。72—96小时后收集培养基，离心并用于进行共免疫沉淀和结合分析。为了监测每个突变体的表达水平，重新接种2.5×105个转染COS—7细胞于35—mm培养皿中，转染48小时后，用[35S]甲硫氨酸代谢标记4小时。离心获得的上清液用抗人IL-6Rα的单克隆抗体I6R1/9.G11免疫沉淀，然后用含SDS的聚丙烯酰胺凝胶电泳对免疫沉淀物进行分析。
突变体的IL-6结合分析
为了检测包含在COS细胞条件培养基中的sIL-6Rα对IL-6的亲和力，使用我们产生的蛋白质中的6个组氨酸尾端。
取适量的转染COS细胞上清液(事先用滴定实验测定，并在其中加入咪唑至终浓度5mM)，与20—40pM的125I-IL-6和增加的浓度的未标记的细胞因子混合。在平衡状态下，加入40μl Ni2+-NTA-琼脂糖(一种能选择性结合包含组氨酸尾端之蛋白的树脂)，温育额外的1小时。被受体结合因而不直接与树脂结合的配体，经离心通过PBS中30％蔗糖垫层与游离配体(上清液)分离。所有的步骤均在4℃进行。由游离和结合cpm(每分钟放射活性计数)值，可给出竞争替代曲线。所得结果经Scatchard转化后确定各种可溶性IL-6受体的表现Kd值(参见Sporeno，Paonessa，Salviati，Graziani，Delmastro，Ciliberto and Toniatti(1994)，J.Biol.Chem.269，10991—10995)。用UltraFit软件(Biosoft)在Macintosh计算机上进行结合数据分析及曲线匹配。
从表1可以看出，结合亲合力如下：a)突变体Asn 230Asp(SEQID NO：1)、Asn230Asp/Ala 228 Asp(SEQ ID NO：2)基本上没有改变；b)突变体His280Ser/Asp 281 Val(SEQ ID NO：3)稍有降低而且结果是可重复的(在25nM和6nM之间)；c)突变体Ala228 Asp/Asn230 Asp/His 280 Ser/Asp 281 Val(SEQ ID NO：4)完全保持了野生型蛋白的活性。
表1
COS细胞中表达的用组氨酸标记的可溶性IL-6受体(野生型和突变型)的IL-6结合亲和力
突变体 IL-6结合亲和力(nM)Asn230Asp (SEQ ID NO：1) 1.5±1Ala228Asp/Asn230Asp (SEQ ID NO：2) 2.0±1His280Ser/Asp281Val (SEQ ID NO：3) 4.3±2Ala228Asp/Asn230Asp/His280Ser/Asp281Val (SEQ ID NO：4) 2.5±1野生型sIL-6Rα 2.0±1突变体与gp130的结合
sIL-6Rα/sgp130异源二聚体的IL-6-依赖性形成，用合适的单克隆抗体经体外共免疫沉淀容易检测。由此进行表现出与野生型有相同数量级的IL-6结合亲合力的突变体的选择，在有IL-6存在下，用共免疫沉淀法估价它们与sgp130的结合。
将35S标记的sgp130、125I-IL-6以及转染COS-7细胞培养基(既有野生型又有突变型受件)一起温育。体外结合后，向混合物中加入抗IL-6RαI6/R19.G11.，将免疫沉淀物在SDS-聚丙烯酰胺凝胶上分离。结果如图1所示。可以看出，突变体His280 Ser/Asp 281 Val(SEQ ID NO：3)大大降低了IL-6/sIL-6Rα复合物与gp130分子的结合。单点取代突变体Asn 230 Asp(SEQ ID NO：1)也降低与gp130的相互作用(第2道)，这一突变体与sgp130作用的效果与突变体Ala228 Asp/Asn 230Asp(SEQ ID NO：2)的该效果有相同的数量级。最后，四位点突变体Ala 228 Asp/Asn230Asp/His280 Ser/Asp 281 Val(SEQ ID NO：4)表现出共免疫沉淀35S-gp130的最差的能力。
同样检测了这些受体突变体与细胞膜表面的gp130相互作用的能力。为此，结合实验所用细胞为人黑瘤A375细胞，这种细胞具有超过IL-6Rα的过量gp130分子。实际上，125I-IL-6与A375单细胞单层的结合能力可由加入可溶性受体大大提高。这种现象归因于sIL-IL-6Rα与125I-IL-6结合然后再与细胞表面的gp130分子相互作用的能力。这种作用的特异性由这样一个事实证明：在sIL-6Rα存在下的125I-IL-6结合的增加可经加入过量的未标记人肿瘤抑制素M(Oncostation OM)而受竞争(图2)。这种细胞因子可以直接与gp130结合而使其与IL-6/IL-6Rα复合物和gp130的结合形成一种竞争。与野生型shIL-6Rα不同，当用125I-IL-6加上可溶性突变受体(作为拮抗剂起作用)处理细胞时仅检测到特异结合的微少增加(图2)。以下突变体表现出与gP130作用的最大变化：His280 Ser/Asp 281 Val(SEQ ID NO：3)和Ala 228 Asp/Asn 230Asp/His 280 Ser/Asp 281 Val(SEQ ID NO：4)。证明突奕体Ala 228 Asp/Asn 230 Asp/His 280 Ser/Asp 281 Val(SEQ ID NO：4)是IL-6拮抗剂
以上结果显示这种突变(与IL-6的亲合力没有任何降低)对gp130结合具有最好效果。为了研究这种突变体的生物学活性，用NaxBac系统(Invitrogen′s Baculovirus Exprecsion System)大量产生这种突变型和野生型可溶性受体。将表达和提纯的受体进行免疫沉淀实验。
采用Sf9细胞(培养基为Grace′s昆虫培养基)用于转染转移载体、分离重组病毒及制备高滴度病毒原种。用High Five细胞(In-vitrogen)替代产生蛋白质。简单地说，将在完全Gracer′s昆虫培养基培养中生长的4×107High Five细胞接种到750ml培养瓶中，用合适的重组病毒在10MOI下感染。2小时后，冲洗细胞，加SF—900无血清培养基。转染后36小时收集培养物上清液，用PBS透析后直接上样于Ni2+-NTA琼脂糖柱上。用PBS/8mM咪唑洗涤后，野生型shIL-6Rα和突变型受体均在PBS/80mM中被洗脱。纯化蛋白质经PBS透析，直接用于实验或4℃贮存(可达三周)。
纯化蛋白的使用使定量分析受体量及比较野生型受体和突变型受体在大范围IL-6浓度下与gp130作用的能力成为可能。结果(图3)与以前用COS细胞来源的受体所获得的结果是相当吻合的。有趣的是，在曲线上的每一个点，实变型受体与gp130的共免疫沉淀量都要低于野生型受体，即使在细胞因子的最高测试浓度(100nM)下也是这样。这些发现证实了IL-6与突变型sIL-6Rα间的相互作用产生与gp130有较低亲合力的复合物。
为了试验这些突变体对IL-6活性的潜在的拮抗作用，我们选择了人肝癌细胞中转录因子APRF(急相应答因子)/STAT3的IL-6依赖性激活。APRF的激活(依赖于酪氨酸磷酸化)是在IL-6家族的所有细胞因子刺激下在几分钟内发生的快速胞质反应。
用递增浓度的IL-6与固定量野生型和突变型受体(100nM)一起，对人HepG2细胞进行刺激。如图4所示，在shIL-6Rα加强的IL-6诱导激活APRF过程中，可溶性突变受体不但缺乏任何激动活性，而且下调该细胞因子的活性(图4，第8-10道)。和共免疫沉淀实验结果预示的一样，当用高达20pM的IL-6处理细胞时，抑制作用是完全的(图4，第8和9道)，并且在IL-6浓度达到最高时(200pM，图4第10道)，只检测到微弱的诱导作用。
为了试验拮抗作用是否是对IL-6特异的，将突变体加入到用经IL-6相关的细胞因子OM诱导的HepG2细胞中，已知OM有效诱导APRF磷酸化。如图5所示，突变体不拮抗OM活性。
序列表
一般信息
(i)申请人：ISTITUTO DI RICERCHE DI BIOLOGIAMOLECOLARE P.ANGELETTI S.p.A.
(ii)发明名称：由在GP130结合界面突变的白细胞介素6(IL-6)受体α可溶形式组成的IL-6拮抗剂
(iii)序列数目：4
(iv)通信地址
(A)地址：Società Italiana Brevetti
(B)街道：Piazza di Pietra，39
(C)城市：罗马
(D)国家：意大利
(E)邮政编码：I-00186
(v)计算机可读形式：
(A)介质类型：3.5吋软盘，1.44兆字节
(B)计算机：IBM PC兼容
(C)操作系统：PC-DOS/MS-DOS Rev.6.22
(D)软件：Microsoft Word 6.0
(viii)代理人信息
(A)姓名：DI CERBO，Mario(Dr.)
(C)卷号：RM/X88470/PC-DC
(ix)电讯信息
(A)电话：06/6785941
(B)电传：06/6794692
(C)电传：612287 ROPAT(1)SEQ ID NO：1信息
(i)序列特征
(A)长度：15个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：蛋白质
(iii)假定的：否
(v)片段类型：内部
(vii)直接来源
(A)合成：真核细胞产生的重组蛋白
(ix)特征：
(A)名称：Asn230Asp
(C)鉴别方法：变性SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
(D)其他信息：白细胞介素6受体突变体的222—236位氨基酸序列
(xi)序列描述：SEQ ID NO：1
Ile Thr Val Thr Ala Val Ala Arg Asp Pro Arg Trp Leu Ser
1 5 10Val15(2)SEQ ID NO：2信息
(i)序列特征
(A)长度：15个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：蛋白质
(iii)假定的：否
(v)片段类型：内部
(vii)直接来源
(A)合成：真核细胞产生的重组蛋白
(ix)特征：
(A)名称：Ala228Asp/Asn230Asp
(C)鉴别方法：变性SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
(D)其他信息：白细胞介素-6受体胺突变体的222—236位氨基酸序列
(xi)序列描述：SEQ ID NO：2
Ile Thr Val Thr Ala Val Asp Arg Asp Pro Arg Trp Leu Ser
1 5 10Val15(3)SEQ ID NO：3信息
(i)序列特征
(A)长度：15个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：蛋白质
(iii)假定的：否
(v)片段类型：内部
(vii)直接来源
(A)合成：真核细胞产生的重组蛋白
(ix)特征：
(A)名称：His280Ser/Asp281Val
(C)鉴别方法：变性SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
(D)其他信息：白细胞介素6受体突变体的273-287位氨基酸序列
(xi)序列描述：SEQ ID NO：3
Leu Gln His His Cys Val Ile Ser Val Ala Trp Ser Gly Leu Arg
1 5 10 15(4)SEQ ID NO：4信息
(i)序列特征
(A)长度：66个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：蛋白质
(iii)假定的：否
(v)片段类型：内部
(vii)直接来源
(A)合成：真核细胞产生的重组蛋白
(ix)特征：
(A)名称：Ala228Asp/Asn230Asp/His280Ser/Asp281Val
(C)鉴别方法：变性SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
(D)其他信息：白细胞介素6受体突变体的222—287氨基酸序列
(xi)序列描述：SEQ ID NO：4Ile Thr Val Thr Ala Val Asp Arg Asp Pro Arg Trp Leu Ser Val Thr1 5 10 15Trp Gln Asp Pro His Ser Trp Asn Ser Ser Phe Tyr Arg Leu Arg Phe
20 25 30Glu Leu Arg Tyr Arg Ala Glu Arg Ser Lys Thr Phe Thr Thr Trp Met
35 40 45Val Lys Asp Leu Gln His His Cys Val Ile Ser Val Ala Trp Ser Gly
50 55 60Leu Arg65
Claims (8)
1.白细胞介素-6(IL-6)拮抗剂，其特征在于，它由IL-6α受体可溶形式(sIL-6Rα)组成，所述sIL-6Rα包含在与gp130结合的界面上的一个或多个突变。
2.按照权利要求1的白细胞介素-6拮抗剂，其中sIL-6Rα包含在选自Ala228、Asn230、His280和Asp281位置上的至少一个突变。
3.按照权利要求1或2的白细胞介素-6拮抗剂，其中sIL-6Rα包含突变Asn230 Asp(SEQ ID NO：1)。
4.按照权利要求1或2的白细胞介素-6拮抗剂，其中sIL-6Rα包含突变Ala228Asp/Asn 230 Asp(SEQ ID NO：2)。
5.按照权利要求1或2的白细胞介素-6拮抗剂，其中sIL-6Rα包含突变His 280 Ser/Asp 281 Val(SEQ ID NO：3)。
6.按照权利要求1或2的白细胞介素-6拮抗剂，其中sIL-6Rα包含突变Ala 228 Asp/Asn 230 Asp/His 280 SeR/Asp 281 Val(SEQ ID NO：4)。
7.按照权利要求1—6的白细胞介素-6拮抗剂在研究和制备能够控制、预防和治疗由异常IL-6活性引起的疾病的药物中的用途。
8.以上描述、说明的和要求的作为IL-6拮抗剂起作用的可溶性受体及其用途。
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|---|---|---|---|
| ITRM940794A IT1274350B (it) | 1994-12-06 | 1994-12-06 | Antagonisti di interleuchina-6(il-6) che consistono di forme solubili del ricettore alfa di il-6, mutate nell'interfaccia che si lega a gp 130 |
| ITRM94A000794 | 1994-12-06 |
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|---|---|
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|---|---|---|---|
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|---|---|
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7227837B1 (en) | 1998-04-30 | 2007-06-05 | At&T Labs, Inc. | Fault tolerant virtual tandem switch |
| CN110133241A (zh) * | 2019-05-21 | 2019-08-16 | 中国食品药品检定研究院 | 一种测定重组人可溶性gp130-Fc融合蛋白生物学活性的新方法 |
Families Citing this family (33)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7091181B2 (en) | 1994-12-12 | 2006-08-15 | Omeros Corporation | Method of inhibition of pain and inflammation during surgery comprising administration of soluble TNF receptors |
| CA2230949C (en) * | 1995-09-28 | 2009-11-17 | Judith Chebath | Synthetic peptides that inhibit il-6 activity |
| US6217858B1 (en) | 1997-02-11 | 2001-04-17 | Hadasit & Medical Research Services & Development Company, Ltd. | Pharmaceutical composition for treating hepatitis B virus (HBV) infection |
| GB9621095D0 (en) * | 1996-10-09 | 1996-11-27 | Imperial College | Novel system |
| JPH10324639A (ja) | 1997-03-21 | 1998-12-08 | Chugai Pharmaceut Co Ltd | Ｉｌ−６アンタゴニストを有効成分として含有する感作ｔ細胞関与疾患の予防・治療剤 |
| CA2237915A1 (en) | 1998-05-19 | 1999-11-19 | Stephen Shaughnessy | Osteoporosis treatment |
| JP4799516B2 (ja) * | 1998-08-24 | 2011-10-26 | 中外製薬株式会社 | Ｉｌ−６アンタゴニストを有効成分として含有する膵炎の予防又は治療剤 |
| AU757261B2 (en) | 1998-08-24 | 2003-02-13 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Preventives or remedies for pancreatitis containing IL-6 antagonists as the active ingredient |
| EP1206275B1 (en) * | 1998-11-05 | 2007-09-05 | Omeros Corporation | Irrigation solution and method for inhibition of pain and inflammation |
| AU7078200A (en) | 1999-08-27 | 2001-03-26 | United States Of America, Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services, The | Polypeptides, comprising il-6 ligand-binding receptor domains and related nucleic acids, antibodies, compositions, and methods of use |
| UA80091C2 (en) | 2001-04-02 | 2007-08-27 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Remedies for infant chronic arthritis-relating diseases and still's disease which contain an interleukin-6 (il-6) antagonist |
| AUPR769501A0 (en) * | 2001-09-14 | 2001-10-11 | Biomolecular Research Institute Limited | Cytokine receptor 1 |
| JP4555924B2 (ja) | 2003-02-24 | 2010-10-06 | 中外製薬株式会社 | インターロイキン−６アンタゴニストを含有する脊髄損傷治療剤 |
| GB2401040A (en) | 2003-04-28 | 2004-11-03 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Method for treating interleukin-6 related diseases |
| ES2392824T3 (es) | 2003-10-17 | 2012-12-14 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Agente terapéutico contra el mesotelioma |
| AR048210A1 (es) | 2003-12-19 | 2006-04-12 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Un agente preventivo para la vasculitis. |
| EP1941907B1 (en) | 2005-10-14 | 2016-03-23 | Fukuoka University | Inhibitor of transplanted islet dysfunction in islet transplantation |
| US8945558B2 (en) | 2005-10-21 | 2015-02-03 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Methods for treating myocardial infarction comprising administering an IL-6 inhibitor |
| AR057582A1 (es) | 2005-11-15 | 2007-12-05 | Nat Hospital Organization | Agentes para suprimir la induccion de linfocitos t citotoxicos |
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| WO2007086490A1 (ja) | 2006-01-27 | 2007-08-02 | Keio University | 脈絡膜血管新生を伴う疾患の治療剤 |
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| BRPI0806812B8 (pt) | 2007-01-23 | 2021-09-14 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Agente para suprimir reação de rejeição crônica e uso de um inibidor de il-6 |
| KR101665729B1 (ko) | 2008-06-05 | 2016-10-12 | 국립연구개발법인 고쿠리츠간켄큐센터 | 신경침윤 억제제 |
| SI2578231T1 (sl) | 2010-05-28 | 2023-01-31 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Okrepljen protitumorski T celični odzivnik |
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| EP2898896A1 (en) | 2014-01-22 | 2015-07-29 | Université Pierre et Marie Curie (Paris 6) | Agents for use in the treatment of retinal inflammation |
| BR112017014067B1 (pt) | 2015-02-27 | 2021-01-12 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | usos de um anticorpo receptor de il-6 para no tratamento de doenças relacionadas a il-6 |
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-
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- 1995-12-05 CN CN95191457A patent/CN1139933A/zh active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7227837B1 (en) | 1998-04-30 | 2007-06-05 | At&T Labs, Inc. | Fault tolerant virtual tandem switch |
| CN110133241A (zh) * | 2019-05-21 | 2019-08-16 | 中国食品药品检定研究院 | 一种测定重组人可溶性gp130-Fc融合蛋白生物学活性的新方法 |
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