CN1211401C

CN1211401C - 一种人白细胞介素－17受体样蛋白及其编码基因与应用

Info

Publication number: CN1211401C
Application number: CN 02123540
Authority: CN
Inventors: 熊世勤; 常智杰; 傅新元
Original assignee: Tsinghua University
Current assignee: Tsinghua University
Priority date: 2002-07-01
Filing date: 2002-07-01
Publication date: 2005-07-20
Anticipated expiration: 2022-07-01
Also published as: CN1465592A

Abstract

本发明公开了一种人白细胞介素-17受体样蛋白及其编码基因与应用，本发明提供的人白细胞介素-17受体样蛋白，具有序列表中序列2的氨基酸残基序列或将序列2的氨基酸残基序列经过1-10个氨基酸残基的取代、缺失或添加且具有抑制FGF活性、激活STAT5、介导细胞增殖功能的由序列2衍生的蛋白质。本发明的人白细胞介素-17受体样蛋白可以使Stat5因子活化、介导细胞增殖，并可望在促进或抑制精子形成的药物中得到应用。

Description

一种人白细胞介素-17受体样蛋白及其编码基因与应用

技术领域

本发明涉及一种人白细胞介素-17受体样蛋白及其编码基因与应用。

背景技术

白细胞介素是一类重要的细胞因子，可以通过与靶细胞膜表面的特异受体结合而介导广泛的生物学作用，诸如：细胞增殖、分化、造血调节、免疫及炎症应答等。白细胞介素17(IL-17/IL-17A)是IL-17家族第一个被克隆的T细胞来源的促炎症细胞因子。人IL-17通常以一个二硫键连接组成的同二聚体分泌性糖蛋白形式存在，分子质量为30～35kD。尽管IL-17只在局限的组织和细胞系表达，但却有广泛的生物学功能，尤其是在促炎症和造血功能方面较为突出，与IL-17的低亲和力受体-IL-17R广泛表达相一致。IL-17还能刺激多种细胞因子的产生，如：来源于巨嗜细胞的肿瘤坏死因子α，来源于成纤维细胞的IL-1β、IL-6、IL-8、ICAM-1以及来源于滑膜细胞的G-CSF、PGE2，因此可介导多种生物学作用。

尽管目前已克隆了至少7种IL-17家族配体成员，但有关该家族成员的受体研究却知之甚少。IL-17R是第一个被鉴定的IL-17受体家族成员，广泛表达于多种不同的组织。但是，IL-17与IL-17R的亲和力较弱，与IL-17具有的广泛的生物学功能并不匹配，并且IL-17R并不含有与先前已知蛋白相似的结构。IL-17Rh1/IL-17BR与IL-17R一样，并不含有与先前已知蛋白相似的结构域，但它们的胞外结构域具有保守的胱氨酸残基，胞内结构域含有与IL-17R相似的氨基酸残基序列，暗示它们可能具有相似的下游信号事件。研究结果表明：NF-κB是它们共同介导的下游信号分子。

曾报道，IL-17A和IL-17E能诱导核转录因子NF-κB的活化，另外也有研究结果表明IL-17A所诱导的下游信号事件包括活化胞外调控激酶(ERK-1/ERK-2)，氮末端激酶(JNK，c-Jun)，p38有丝分裂原激酶，Raf、Stats等下游信号分子。IL-17AR的敲基因小鼠研究表明，在肿瘤坏死因子-α结合因子-6(TRAF-6)缺陷的细胞系，IL-17诱导的下游信号事件明显阻断，提示TRAF-6对于IL-17刺激的信号是必要的。由于已知的几种IL-17受体成员的胞内结构域并不含有与Toll/IL-1R相似的结构，因此寻找和鉴定未知的IL-17家族成员的潜在受体显得尤其必要。

发明内容

本发明的目的是提供一种新的人白细胞介素-17受体样蛋白及其编码基因。

一种人白细胞介素-17受体样蛋白，它具有序列表中序列2的氨基酸残基序列或将序列2的氨基酸残基序列经过1-10个氨基酸残基的取代、缺失或添加且具有抑制FGF活性、激活STAT5、介导细胞增殖功能的由序列2衍生的蛋白质。

本发明的人白细胞介素-17受体样蛋白命名为hIL-17RLM-S，是一种单跨膜细胞因子受体，由595个氨基酸残基组成。胞外区分别含有4个胱氨酸残基和4个潜在的N-糖基化部位。跨膜区由23个氨基酸组成。在临近跨膜区的3’端含有一个Toll/IL-1R样结构域。5’端并不含有潜在的信号肽或前导序列。

本发明采用多组织Northern Blot方法，检测了hIL-17RLM-S的mRNA组织表达分布，结果表明：hIL-17RLM-S mRNA主要在肾及睾丸表达，在脑、心、脾、子宫有微弱的mRNA表达。但并未检测到hIL-17RLM-S在胸腺、胰腺、前列腺、外周血、小肠、结肠、骨骼肌、肝、肺、胎盘等组织的表达。表明hIL-17RLM-S的mRNA表达具有组织特异性。检测了hIL-17RLM-S在众多细胞系的表达分布，结果表明：IL-17RLM在所选择的大多数细胞系如：293，293T，HepG2，Ho8910，SGC7901，CNE，Hela，L02，A431，CHO，Cos7，GBE，Jurcat，K562，6T-CEM等皆有表达，但在某些白血病细胞系如：HL60，U937，THP1和成纤维细胞3T3并未检测到其表达。

本发明序列表中序列1的DNA序列编码序列2的蛋白质，由4508个碱基组成，位于人3号染色体(3p21.1)距NT_005787.8 420,648到506,133的位置，其基因组位置与IL-17BR和Toll receptor9基因非常临近，hIL-17RLM-S的起始编码氨基酸位于第五个外显子，共有14个外显子组成。

研究表明，本发明的人白细胞介素-17受体样蛋白可以使Stat5因子活化、介导细胞增殖，并可望在促进或抑制精子形成的药物或其它方面得到应用。

下面结合具体实施例对本发明做进一步说明。

具体实施方式

实施例1、hIL-17RLM-S基因的克隆及表达

以IL-17R的胞内结构域为诱饵，采用生物信息学方法，借助NCBI公共数据库，利用IL-17R的胞内结构域的EST和氨基酸序列Blast结果获得一个潜在的由564个氨基酸组成的未知跨膜糖蛋白-AL133097.01(DKFZp434N1928克隆)，它与IL-17AR有32％的氨基酸同源性，表明该未知蛋白为一个IL-17AR相似性分子。根据该蛋白cDNA序列(3863bps)，分析得知该片段为一不完整的cDNA片段，在其5’端，未有译起始氨基酸，而以组氨酸开头，也不存在5’端未翻译区。表明该未知蛋白并不完整。但分析该cDNA的3’未翻译区发现存在PolyA加尾信号(AATAAA)和PolyA部位，表明该cDNA存在完整的3’未翻译区。为此，采用快速扩增5’-cDNA末端方法(RACE-PCR)克隆该基因的完整序列。根据预测的hIL-17RLM-S的cDNA序列，设计引物，将其分子克隆。以293T和睾丸的总RNA为模板，通过RACE-PCR将其克隆到T-A载体，并测序，结果显示其5’端未翻译区含有终止密码子，长度为4508bp。编码一个由595个氨基酸组成的单跨膜糖蛋白。

将hIL-17RLM-S瞬时转染于Cos7细胞，检测其在胞内的表达和糖基化情况。hIL-17RLM-S在Cos7细胞的表达显示其分子量约为70kD。与预测的hIL-17RLM-S胞外区含有多个氮糖基化位点相匹配。

为了检测hIL-17RLM-S在细胞的内源性表达，采用免疫沉淀方法，使用抗hIL-17RLM-S兔多克隆抗血清，检测hIL-17RLM-S是否在人肾癌细胞系GRC-1有内源性蛋白表达。结果表明：hIL-17RLM-S在人肾癌细胞系GRC-1存在内源性蛋白表达，其分子质量约100kD，很可能为hIL-17RLM-S的一种选择性剪切形式。但是，在GRC-1细胞系，并未同时检测到hIL-17RLM-S几种选择性剪切形式的蛋白表达。说明hIL-17RLM-S几种选择性剪切形式的内源性蛋白表达存在组织、细胞特异性。

对hIL-17RLM-S在细胞器的表达定位进行研究。将hIL-17RLM-S构建于EGFP-N1真核表达载体，将其瞬时转染于Cos7细胞，结果显示其主要表达在细胞膜上。为了进一步检测hIL-17RLM-S在细胞的内源性表达定位，进行了免疫荧光染色实验。借助hIL-17RLM-S兔多克隆抗血清，选择两种肾癌细胞系786-O和GRC-1，进行免疫染色研究，以检测hIL-17RLM-S在细胞的内源性表达定位。结果清楚表明hIL-17RLM-S主要定位在细胞膜。

实施例2、hIL-17RLM-S胞内结构域的功能——活化Stat5和介导细胞增殖

本发明的发明人构建了一系列嵌合受体，通过对hIL-17RLM-S胞内区人工二聚化，证实了其传递信号的能力。

发明人将EPOR的胞外区和跨膜区与hIL-17RLM-S的胞内区构建一嵌合受体，借助EPO的刺激，进而检测hIL-17RLM-S的胞内区传递信号的潜力。首先进行了荧光素酶报道分析，瞬时共转染指示的受体表达质粒，Stat5应答的荧光素酶报道质粒4FTKSLN，pRL-TK载体(内对照)，转染36小时后，使用重组人EPO刺激或不刺激(PBS)约30分钟后，收获细胞，进行荧光素酶报道分析。结果显示：EPOR/hIL-17RLM-S嵌合受体与全长EPOR一样，在EPO的刺激作用下，能够介导Stat5的活化；并且当共转染Stat5的负显性突变体(dominant mutant)-Stat5 CYF时，EPOR/hIL-17RLM-S嵌合受体介导Stat5的活化被明显抑止；全长hIL-17RLM-S的过表达并不能介导Stat5的活化。这个结果暗示，hIL-17RLM-S的胞内区具有能够介导Stat5活化的潜力。

Stat5活化的一个重要标志是其在Jak激酶的作用下，Stat5的酪氨酸被磷酸化，然后转位入核，介导下游靶基因的表达。为了进一步检测hIL-17RLM-S的胞内区介导Stat5活化的潜力，采用免疫沉淀方法，检测EPOR/hIL-17RLM-S是否能够介导Stat5酪氨酸磷酸化。向Cos7细胞共转染嵌合受体-EPORextm/hIL-17RLM-Sicd或全长EPOR或空载体(Mock)，Jak2，stat5高纯度表达质粒。在EPO刺激前30分钟，培养基中补加NaV3O4以抑制内源性磷酸化酶的水解。使用重组人EPO刺激或不刺激(PBS)约30分钟后，收获细胞，制备总细胞裂解液，一部分用于免疫沉淀，另一部分直接用于Western blot以检测转染质粒的表达情况。结果表明：EPORextm/hIL-17RLM-Sicd嵌合受体同EPOR一样，在EPO的刺激下，能够介导Stat5酪氨酸磷酸化；而在EPO未刺激组和空载体组，并未检测到Stat5酪氨酸磷酸化。这一结果进一步表明hIL-17RLM-S的胞内区能够介导Stat5酪氨酸磷酸化。

为了进一步证实hIL-17RLM-S胞内区具有介导Stat5活化的潜力，采用gel shiftassay以分析是否EPOR/hIL-17RLM-S嵌合受体能够介导细胞核抽提物Stat5-DNA结合复合体的形成，以证实其介导Stat5活化。具体做法是共转染指示的表达质粒于Cos7细胞，在EPO的作用后，制备细胞核抽提物，进行凝胶电泳阻滞分析实验。实验结果显示：EPORextm/hIL-17RLM-Sicd嵌合受体同EPOR一样，在EPO的刺激下，能够介导Stat5-DNA结合复合体的形成；而在EPO未刺激组和空载体组，并未检测到Stat5-DNA结合复合体的形成。采用冰冷的未标记的特异性结合Stat5的DNA探针，能够竞争性抑止Stat5-DNA结合复合体的形成。这一结果表明：hIL-17RLM-S胞内区具有介导特异性Stat5-DNA结合复合体形成的特性。

为了进一步确定Stat5-DNA结合复合体的特异性和Stat5具体成分，分别借助抗Stat5ab，Stat5b，Stat1和Stat3特异性抗体，进行了Supershift分析实验。结果显示：抗Stat5ab或Stat5b能够显著超迁移这个DNA结合复合体，而Stat1或Stat3特异性抗体却并不能超迁移这个DNA结合复合体，暗示EPOR/hIL-17RLM-S嵌合受体所介导的Stat5-DNA结合复合体主要为Stat5b-DNA复合体。这一结果进一步表明了hIL-17RLM-S胞内区具有活化Stat5信号的潜力。

上述实验结果显示：hIL-17RLM-S具有活化Stat5的信号潜力。为了进一步鉴定是否细胞内稳定表达的EPORextm/hIL-17RLM-Sicd嵌合受体在重组人红细胞生成素(rhEPO)的刺激下也具有介导Stat5活化的信号能力，发明人建立了稳定表达细胞系，命名为稳定表达EPOR和EPORextm/hIL-17RLM-Sicd的阳性细胞系Ba/F3，采用Northern blot和western blot方法鉴定具有稳定表达EPOR和EPORextm/hIL-17RLM-Sicd嵌合受体的阳性细胞克隆。

对稳定表达EPOR和EPORextm/hIL-17RLM-Sicd的阳性Ba/F3细胞系进行gelshift assay实验。结果表明：EPOR/hIL-17RLM-S与EPOR稳定表达细胞系一样，EPO能够以时间依赖方式诱导其细胞核抽提物Stat5-DNA结合复合体的形成；然而在野生型Ba/F3细胞系，却并未诱导其细胞核抽提物Stat5-DNA结合复合体的形成。进一步表明hIL-17RLM-S的胞内区具有活化Stat5的信号能力。

Supershift分析结果显示：采用抗Stat5ab或Stat5b，能够超迁移Stat5-DNA结合复合体，然而采用抗Stat5a或Stat1特异性抗体却并未超迁移Stat5-DNA结合复合体。这表明EPOR/hIL-17RLM-S嵌合受体主要介导Stat5b的活化，而不是Stat5a的活化。另外。使用冰冷的未标记Stat5 DNA特异性结合探针，能够特异地竞争性抑止Stat5-DNA结合复合体地形成，而使用无关的探针却不能竞争性抑止Stat5-DNA结合复合体的形成。这些结果充分证明了EPOR/hIL-17RLM-S嵌合受体主要介导Stat5b的活化，而不是Stat5a的活化。这一结果也与通过瞬时过量表达EPOR/hIL-17RLM-S在Cos7细胞所介导Stat5活化的结果相吻合。据此可以得出，在Cos7细胞瞬时过量表达和在Ba/F3细胞稳定表达EPORextm/hIL-17RLM-Sicd嵌合受体都能够介导Stat5活化，表明hIL-17RLM-S胞内区具有活化转录因子Stat5的信号潜力。

通常，I型细胞因子受体应答其偶连配体具有传递细胞增殖的信号能力。借助[3H]-Thymidine整合，进行了细胞增殖分析实验。结果表明：EPORextm/hIL-17RLM-Sicd嵌和受体稳定表达的Ba/F3细胞系和EPOR稳定表达的Ba/F3细胞系一样，能够应答EPO的刺激，出现细胞增殖现象，并且这种增殖效应为EPO浓度依赖的方式和刺激时间依赖的方式。这暗示hIL-17RLM-S的胞内结构域具有传递细胞增殖的信号潜力。

实施例3、hIL-17RLM-S与FGFRs的相互作用、共定位及对细胞分化的影响

免疫沉淀和Western blot结果显示：hIL-17RLM-S能够与爪蟾(Xenopus)mFGFR1或mFGFR2在瞬时共转染的Cos7细胞相互作用。但并未检测到hIL-17RLM-S与mFGFR3或mFGFR4的相互作用。

为了进一步确定hIL-17RLM-S与mFGFR1或mFGFR2的相互作用，进行了免疫染色实验，并进行Merge分析。Merge实验结果显示，hIL-17RLM-S与mFGFR2共定位于细胞膜和胞浆部位。

为了探讨是否hIL-17RLM-S与FGFR1或FGFR2在人体内源性组织中共定位表达。首先借助常规免疫组化的方法，检测hIL-17RLM-S、FGFR1和FGFR2在人体组织中的原位表达分布。结果表明：hIL-17RLM-S、FGFR1和FGFR2在人体肾和睾丸组织中具有非常相似的表达分布，表达在组织的相同细胞类型，并且主要表达在组织细胞膜及细胞浆部位。另外FGFR1在肾及睾丸组织中的表达明显强于FGFR2的表达。

为了进一步确定是否hIL-17RLM-S与FGFR1在人体某些组织共定位表达，使用人多组织阵列(tissue array)，采用双重或三重免疫组化染色试剂盒，大量筛检了hIL-17RLM-S与FGFR1在人体多种组织中的表达分布，并进行merge分析。结果显示：在睾丸、肾组织，hIL-17RLM-S(绿光)和FGFR1(红光)具有极强的阳性免疫染色，并且具有非常相似的表达样式和细胞特异性。另外merge实验分析结果表明，hIL-17RLM-S和FGFR1明显共表达定位于睾丸组织的特异细胞类型。在肾组织和其它组织，尽管hIL-17RLM-S和FGFR1具有较强的阳性免疫染色和相似的表达分布，但是merge结果却并未显示hIL-17RLM-S和FGFR1的共定位表达分布。这表明hIL-17RLM-S和FGFR1的共定位表达分布具有组织特异性。也暗示hIL-17RLM-S与FGFR1在睾丸组织生精细胞中的特异性共定位表达很可能与精子的形成有关。

实施例4、hIL-17RLM-S抑制FGF介导的下游信号通路

有资料表明：FGF介导的下游Ras-Raf-MEK-MAPK信号通路受Sprouty家族成员的负调节。在早期斑马鱼胚胎发育过程中，由于FGF3，FGF8，spouty2，sprouty4与zSef/zhIL-17RLM-S为一协同表达组。因而，我们假设hIL-17RLM-S有可能同sprouty家族成员一样，具有在高等生物抑制FGF介导的下游信号通路及相应的某些生物学功能。

实验中，首先构建了EGFP-tagged hIL-17RLM-S(WT)，EGFP-hIL-17RLM-Secdtm(ΔC)(含有hIL-17RLM-S的胞外结构域和跨膜结构域)，EGFP-hIL-17RLM-Stmcyd(ΔN)(含有hIL-17RLM-S的胞内结构域和跨膜结构域)和EGFP-hIL-17RLM-S(DN：Δ327-333)(缺失含有潜在酪氨酸磷酸化部位的一段基因序列)真核表达质粒。经DNA测序证实和western blot检测其在细胞的过表达正确。

在大鼠嗜铬神经细胞瘤细胞系-PC12细胞过表达上述真核表达质粒，转染36小时后，使用碱性成纤维细胞生长因子(FGF2)刺激细胞约72小时后，荧光显微镜拍照和计数细胞分化的百分率。结果显示：野生型hIL-17RLM-S能够显著抑制FGF2诱导PC12细胞的分化。然而，野生型全长hIL-17RLM-S对FGF2诱导PC12细胞分化的这种抑制作用能够被EGFP-hIL-17RLM-Secdtm(ΔC)逆转，但并不能够被EGFP-hIL-17RLM-Stmcyd(ΔN)和EGFP-hIL-17RLM-S(DN：Δ327-333)所逆转。这一结果暗示：hIL-17RLM-S的胞内结构域对与hIL-17RLM-S对FGF2诱导PC12细胞分化的抑制作用是必需的，然而hIL-17RLM-S的胞外结构域以及hIL-17RLM-S的胞内区潜在酪氨酸磷酸化部位却并不需要。这一结果也表明：hIL-17RLM-S的胞内结构域是对FGF2诱导PC12细胞分化抑制作用的功能结构域。

序列表

<160>2

<210>1

<211>4508

<212>DNA

<2l3>人属人种(Homo sapiens)

<400>1

cagcagtggt aacgacgcac agtacgcggg ggaaaagaaa cgggaagtgg ccgtgggccg 60

gtgaattccg tgtagtggcc aagctttgtt ccaaagaggg ggaggtggtg acagtctctt 120

gcccactgaa gcgtgccaga cagagtgcta ggcatggggg cagaggtgaa tcagatgaca 180

gccacctctc accacgagga gtggctgaaa gtgtgactgg actacaggca atcctggcct 240

tggcagggag tggggccagc cagcagaaac agtgggctgt acaacatcac cttcaaatat 300

gacaattgta ccacctactt gaatccagtg gggaagcatg tgattgctga cgcccagaat 360

atcaccatca gccagtatgc ttgccatgac caagtggcag tcaccattct ttggtcccca 420

ggggccctcg gcatcgaatt cctgaaagga tttcgggtaa tactggagga gctgaagtcg 480

gagggaagac agtgccaaca actgattcta aaggatccga agcagctcaa cagtagcttc 540

aaaagaactg gaatggaatc tcaacctttc ctgaatatga aatttgaaac ggattatttc 600

gtaaaggttg tcccttttcc ttccattaaa aacgaaagca attaccaccc tttcttcttt 660

agaacccgag cctgtgacct gttgttacag ccggacaatc tagcttgtaa acccttctgg 720

aagcctcgga acctgaacat cagccagcat ggctcggaca tgcaggtgtc cttcgaccac 780

gcaccgcaca acttcggctt ccgtttcttc tatcttcact acaagctcaa gcacgaagga 840

cctttcaagc gaaagacctg taagcaggag caaactacag agatgaccag ctgcctcctt 900

caaaatgttt ctccagggga ttatataatt gagctggtgg atgacactaa cacaacaaga 960

aaagtgatgc attatgcctt aaagccagtg cactccccgt gggccgggcc catcagagcc 1020

gtggccatca cagtgccact ggtagtcata tcggcattcg cgacgctctt cactgtgatg 1080

tgccgcaaga agcaacaaga aaatatatat tcacatttag atgaagagag ctctgagtct 1140

tccacataca ctgcagcact cccaagagag aggctccggc cgcggccgaa ggtctttctc 1200

tgctattcca gtaaagatgg ccagaatcac atgaatgtcg tccagtgttt cgcctacttc 1260

ctccaggact tctgtggctg tgaggtggct ctggacctgt gggaagactt cagcctctgt 1320

agagaagggc agagagaatg ggtcatccag aagatccacg agtcccagtt catcattgtg 1380

gtttgttcca aaggtatgaa gtactttgtg gacaagaaga actacaaaca caaaggaggt 1440

ggccgaggct cggggaaagg agagctcttc ctggtggcgg tgtcagccat tgccgaaaag 1500

ctccgccagg ccaagcagag ttcgtccgcg gcgctcagca agtttatcgc cgtctacttt 1560

gattattcct gcgagggaga cgtccccggt atcctagacc tgagtaccaa gtacagactc 1620

atggacaatc ttcctcagct ctgttcccac ctgcactccc gagaccacgg cctccaggag 1680

ccggggcagc acacgcgaca gggcagcaga aggaactact tccggagcaa gtcaggccgg 1740

tccctatacg tcgccatttg caacatgcac cagtttattg acgaggagcc cgactggttc 1800

gaaaagcagt tcgttccctt ccatcctcct ccactgcgct accgggagcc agtcttggag 1860

aaatttgatt cgggcttggt tttaaatgat gtcatgtgca aaccagggcc tgagagtgac 1920

ttctgcctaa aggtagaggc ggctgttctt ggggcaaccg gaccagccga ctcccagcac 1980

gagagtcagc atgggggcct ggaccaagac ggggaggccc ggcctgccct tgacggtagc 2040

gccgccctgc aacccctgct gcacacggtg aaagccggca gcccctcgga catgccgcgg 2100

gactcaggca tctatgactc gtctgtgccc tcatccgagc tgtctctgcc actgatggaa 2160

ggactctcga cggaccagac agaaacgtct tccctgacgg agagcgtgtc ctcctcttca 2220

ggcctgggtg aggaggaacc tcctgccctt ccttccaagc tcctctcttc tgggtcatgc 2280

aaagcagatc ttggttgccg cagctacact gatgaactcc acgcggtcgc ccctttgtaa 2340

caaaacgaaa gagtctaagc attgccactt tagctgctgc ctccctctga ttccccagct 2400

catctccctg gttgcatggc ccacttggag ctgaggtctc atacaaggat atttggagtg 2460

aaatgctggc cagtacttgt tctcccttgc cccaaccctt taccggatat cttgacaaac 2520

tctccaattt tctaaaatga tatggagctc tgaaaggcat gtccataagg tctgacaaca 2580

gcttgccaaa tttggttagt ccttggatca gagcctgttg tgggaggtag ggaggaaata 2640

tgtaaagaaa aacaggaaga tacctgcact aatcattcag acttcattga gctctgcaaa 2700

ctttgcctgt ttgctattgg ctaccttgat ttgaaatgct ttgtgaaaaa aggcactttt 2760

aacatcatag ccacagaaat caagtgccag tctatctgga atccatgttg tattgcagat 2820

aatgttctca tttatttttg atgtagaatt tacattgcca tgggtgttaa ataagctttg 2880

agtcaaaagt caagaaagtg actgaatata cagtcacctt ttatgaaatg agtctctgtg 2940

ttactgggtg gcatgactga ttgaggtgaa gctcacgggg ccaggctgac cgtcttgacc 3000

gttccacttg agataggttg gtcatcgtgc agaaggcccc aggacctcag cacacacagc 3060

ctcctcttgg tctgagtagg catcatgtgg gggccagatc tgcctgctgt ttccatgggt 3120

tacatttact gtgctgtatc tcagatgttg gtgtctggaa gtttattctt aagagactgc 3180

tacccagctg gtctgtatta ttggaagttg cagttcgtgc tttggttggc cttctggtct 3240

aaagctgtgt cctgaatatt agggatcaca attcactgaa atacagcagt gtgtggaggt 3300

gatggccagt taatctgctg aactggtttt gactaatgac aaacctcttt ttaagatggt 3360

agaatggagg tgatagtcac aaaagtaaat gttccatttt tatgaatgac tttctacaga 3420

gtttctattt ctaaagaaaa aacaattgtt cacatcccat ctgatgatta gcatgtgtgt 3480

aatgaatgct gtcttggtct cccctgtgga aacccttctc cctgtgcctt agagcaggtg 3540

tgtacatctc tcactacctt tctcatgggt gctgttagat tttggcaccc gttttctcag 3600

cattcagccc agggaatgtg gttttcactt cttcgtcaga taagaccaac atgaaggggt 3660

atgttgagaa acatcctgag gcaaggtggg aggtgggatg gggcaggact ttcccttcca 3720

agcacatgca tggcaggtgg ggaaaggggg gcttgcaccc ctgctggaaa gaaaaggttt 3780

gtgtatattt ctgatgcaaa tgtcatactc actgctctgt aaaggcagct ggcagctttt 3840

tgggaaaaga acgtgctcgt ctgttctctg gcatcaagtt tcttgcagct gctctgaggg 3900

agagacagtg agctgcaaga ctgcctcccc ataacaacag gcaactcaga gaagagtcat 3960

tttatgttgt tcctatggaa tctggaatga gtgcagagct cctacccaca catgactgcc 4020

ccgccatttc atcctaggca ttctgtgaag gagattggtt agtccaaact tgctaacata 4080

cgaaaattca cttggaacat gatgagagat ttcttattga ggccaagaga tgtttcctgt 4140

cccagaggaa ccattaggag tcgcttttag ggtattcagc tttgttcatg aaataaggca 4200

tctctgagaa agtggcccca gggagagaat ggaggactgg gaggagaagc attaactgag 4260

ctccaagggt gtgtgggcag agagcttgct atgtgaactc actccttaag aaaatggaag 4320

agaaaaagag agtgctagtt aaaaaatcgg gatgttttag tttggattta gggttttgat 4380

acttatgttg aaatactaat gtttctgatc aataaaatca aactcttaat ataccgagta 4440

atgaaaccat agtgtgattg cctcagaata aattgagaag tccaaaaaaa aaaaaaaaaa 4500

aaaaaaaa

4508

<210>2

<211>595

<212>PRT

<213>人属人种(Homo sapiens)

<400>2

Met Glu Ser Gln Pro Phe Leu Asn Met Lys Phe Glu Thr Asp Tyr

1 5 10 15

Phe Val Lys Val Val Pro Phe Pro Ser Ile Lys Asn Glu Ser Asn

20 25 30

Tyr His Pro Phe Phe Phe Arg Thr Arg Ala Cys Asp Leu Leu Leu

35 40 45

Gln Pro Asp Asn Leu Ala Cys Lys Pro Phe Trp Lys Pro Arg Asn

50 55 60

Leu Asn Ile Ser Gln His Gly Ser Asp Met Gln Val Ser Phe Asp

65 70 75

His Ala Pro His Asn Phe Gly Phe Arg Phe Phe Tyr Leu His Tyr

80 85 90

Lys Leu Lys His Glu Gly Pro Phe Lys Arg Lys Thr Cys Lys Gln

95 100 105

Glu Gln Thr Thr Glu Met Thr Ser Cys Leu Leu Gln Asn Val Ser

110 115 120

Pro Gly Asp Tyr Ile Ile Glu Leu Val Asp Asp Thr Asn Thr Thr

125 130 135

Arg Lys Val Met His Tyr Ala Leu Lys Pro Val His Ser Pro Trp

140 145 150

Ala Gly Pro Ile Arg Ala Val Ala Ile Thr Val Pro Leu Val Val

155 160 165

Ile Ser Ala Phe Ala Thr Leu Phe Thr Val Met Cys Arg Lys Lys

170 175 180

Gln Gln Glu Asn Ile Tyr Ser His Leu Asp Glu Glu Ser Ser Glu

185 190 195

Ser Ser Thr Tyr Thr Ala Ala Leu Pro Arg Glu Arg Leu Arg Pro

200 205 210

Arg Pro Lys Val Phe Leu Cys Tyr Ser Ser Lys Asp Gly Gln Asn

215 220 225

His Met Asn Val Val Gln Cys Phe Ala Tyr Phe Leu Gln Asp Phe

230 235 240

Cys Gly Cys Glu Val Ala Leu Asp Leu Trp Glu Asp Phe Ser Leu

245 250 255

Cys Arg Glu Gly Gln Arg Glu Trp Val Ile Gln Lys Ile His Glu

260 265 270

Ser Gln Phe Ile Ile Val Val Cys Ser Lys Gly Met Lys Tyr Phe

275 280 285

Val Asp Lys Lys Asn Tyr Lys His Lys Gly Gly Gly Arg Gly Ser

290 295 300

Gly Lys Gly Glu Leu Phe Leu Val Ala Val Ser Ala Ile Ala Glu

305 310 315

Lys Leu Arg Gln Ala Lys Gln Ser Ser Ser Ala Ala Leu Ser Lys

320 325 330

Phe Ile Ala Val Tyr Phe Asp Tyr Ser Cys Glu Gly Asp Val Pro

335 340 345

Gly Ile Leu Asp Leu Ser Thr Lys Tyr Arg Leu Met Asp Asn Leu

350 355 360

Pro Gln Leu Cys Ser His Leu His Ser Arg Asp His Gly Leu Gln

365 370 375

Glu Pro Gly Gln His Thr Arg Gln Gly Ser Arg Arg Asn Tyr Phe

380 385 390

Arg Ser Lys Ser Gly Arg Ser Leu Tyr Val Ala Ile Cys Asn Met

395 400 405

His Gln Phe Ile Asp Glu Glu Pro Asp Trp Phe Glu Lys Gln Phe

410 415 420

Val Pro Phe His Pro Pro Pro Leu Arg Tyr Arg Glu Pro Val Leu

425 430 435

Glu Lys Phe Asp Ser Gly Leu Val Leu Asn Asp Val Met Cys Lys

440 445 450

Pro Gly Pro Glu Ser Asp Phe Cys Leu Lys Val Glu Ala Ala Val

455 460 465

Leu Gly Ala Thr Gly Pro Ala Asp Ser Gln His Glu Ser Gln His

470 475 480

Gly Gly Leu Asp Gln Asp Gly Glu Ala Arg Pro Ala Leu Asp Gly

485 490 495

Ser Ala Ala Leu Gln Pro Leu Leu His Thr Val Lys Ala Gly Ser

500 505 510

Pro Ser Asp Met Pro Arg Asp Ser Gly Ile Tyr Asp Ser Ser Val

515 520 525

Pro Ser Ser Glu Leu Ser Leu Pro Leu Met Glu Gly Leu Ser Thr

530 535 540

Asp Gln Thr Glu Thr Ser Ser Leu Thr Glu Ser Val Ser Ser Ser

545 550 555

Ser Gly Leu Gly Glu Glu Glu Pro Pro Ala Leu Pro Ser Lys Leu

560 565 570

Leu Ser Ser Gly Ser Cys Lys Ala Asp Leu Gly Cys Arg Ser Tyr

575 580 585

Thr Asp Glu Leu His Ala Val Ala Pro Leu

590 595

Claims

1、一种人白细胞介素-17受体样蛋白，它具有序列表中序列2的氨基酸残基序列或将序列2的氨基酸残基序列经过1-10个氨基酸残基的取代、缺失或添加且具有抑制FGF活性、激活STAT5、介导细胞增殖功能的由序列2衍生的蛋白质。

2、根据权利要求1所述的蛋白质，其特征在于：所述蛋白质具有序列表中序列2的氨基酸残基序列。

3、编码权利要求1所述蛋白的基因。

4、根据权利要求3所述的基因，其特征在于：所述人白细胞介素-17受体样蛋白的编码基因是序列表中序列1的DNA序列。

5、权利要求1所述的人白细胞介素-17受体样蛋白在体外使Stat5因子活化中的应用。

6、权利要求1所述的人白细胞介素-17受体样蛋白在体外介导细胞增殖中的应用。

7、权利要求1所述的人白细胞介素-17受体样蛋白在制造促进或抑制精子形成的药物中的作用。

8、权利要求1所述的人白细胞介素-17受体样蛋白在制备抑制高等生物FGF介导的下游信号通路的产品中的应用。