JPH09322795A - 水不溶性グルカンの精製方法 - Google Patents
水不溶性グルカンの精製方法Info
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- JPH09322795A JPH09322795A JP8144126A JP14412696A JPH09322795A JP H09322795 A JPH09322795 A JP H09322795A JP 8144126 A JP8144126 A JP 8144126A JP 14412696 A JP14412696 A JP 14412696A JP H09322795 A JPH09322795 A JP H09322795A
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- glucan
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【解決手段】 水不溶性グルカンを産生する微生物の培
養液又は水不溶性グルカンを構成成分とする微生物菌体
含有溶液を、0.175 〜3.5 w/w%の酸化物及びｐＨを10〜
12.5にせしめる水酸化物で同時に処理することを特徴と
する、水不溶性グルカンの精製方法。 【効果】 本発明によれば、水不溶性グルカンを産生す
る微生物の培養液、又は水不溶性グルカンを構成成分と
する微生物菌体含有溶液について、生産菌の細胞破壊、
脱色及び粘度低下を同時に行うことができ、水不溶性グ
ルカンを複雑な工程を経ることなく、工業的に安価で且
つ効率的に精製することができる。
養液又は水不溶性グルカンを構成成分とする微生物菌体
含有溶液を、0.175 〜3.5 w/w%の酸化物及びｐＨを10〜
12.5にせしめる水酸化物で同時に処理することを特徴と
する、水不溶性グルカンの精製方法。 【効果】 本発明によれば、水不溶性グルカンを産生す
る微生物の培養液、又は水不溶性グルカンを構成成分と
する微生物菌体含有溶液について、生産菌の細胞破壊、
脱色及び粘度低下を同時に行うことができ、水不溶性グ
ルカンを複雑な工程を経ることなく、工業的に安価で且
つ効率的に精製することができる。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、水不溶性グルカン
を産生する微生物の培養液又は水不溶性グルカンを構成
成分とする微生物菌体含有溶液より水不溶性グルカンを
精製する方法に関する。
を産生する微生物の培養液又は水不溶性グルカンを構成
成分とする微生物菌体含有溶液より水不溶性グルカンを
精製する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】水不溶性グルカンは天然系繊維として食
品素材（特開昭60-105460 、特開昭62-83854号) 、人工
皮膚（J.D.Fontana et al., Applied Biochemistry and
Biotechnology, vol. 24/25, p.253-264, 1990)、製紙
（特開昭63-295793 号) 、制ガン剤（特公昭40-22398、
特公昭47-37002号) 等に利用されている。
品素材（特開昭60-105460 、特開昭62-83854号) 、人工
皮膚（J.D.Fontana et al., Applied Biochemistry and
Biotechnology, vol. 24/25, p.253-264, 1990)、製紙
（特開昭63-295793 号) 、制ガン剤（特公昭40-22398、
特公昭47-37002号) 等に利用されている。
【０００３】水不溶性グルカンは、酢酸菌、担子菌、酵
母菌等を通気攪拌培養、静置培養、固体培養等をするこ
とによって得られるが、培養液には培地成分由来の不純
物や、生産菌の培養によって生成される低分子、高分子
の不純物が存在するために、水不溶性グルカンをこれら
から分離、分画、精製する必要がある。精製方法として
は、多糖類を精製する通常の方法で行われ、不純物の除
去は、例えば遠心分離、酸又はアルカリ溶液や熱水によ
る抽出、有機溶媒による沈殿、透析、イオン交換クロマ
トグラフィー（特公昭42-2918 号) 、第４級アンモニウ
ム塩として沈殿除去する方法（特公昭43-20567号) 、第
４級アンモニウム化合物の特定塩基性ｐＨ領域で分別沈
殿する方法（特公昭47-37002号) 等により行われてい
る。また、培養液には、固液分離性を悪くし、濾過の際
に目的物質中に不純物又は水溶性グルカンを残留させる
原因となる粘性の増加、生産菌の残留、着色などの問題
がある。よって、水不溶性グルカンを培養液から精製す
るには、不純物の除去に加え、着色物質の除去（特公昭
53-44563号) 、高分子粘性物質の除去など、複雑な工程
を経なければならないのが現状である。
母菌等を通気攪拌培養、静置培養、固体培養等をするこ
とによって得られるが、培養液には培地成分由来の不純
物や、生産菌の培養によって生成される低分子、高分子
の不純物が存在するために、水不溶性グルカンをこれら
から分離、分画、精製する必要がある。精製方法として
は、多糖類を精製する通常の方法で行われ、不純物の除
去は、例えば遠心分離、酸又はアルカリ溶液や熱水によ
る抽出、有機溶媒による沈殿、透析、イオン交換クロマ
トグラフィー（特公昭42-2918 号) 、第４級アンモニウ
ム塩として沈殿除去する方法（特公昭43-20567号) 、第
４級アンモニウム化合物の特定塩基性ｐＨ領域で分別沈
殿する方法（特公昭47-37002号) 等により行われてい
る。また、培養液には、固液分離性を悪くし、濾過の際
に目的物質中に不純物又は水溶性グルカンを残留させる
原因となる粘性の増加、生産菌の残留、着色などの問題
がある。よって、水不溶性グルカンを培養液から精製す
るには、不純物の除去に加え、着色物質の除去（特公昭
53-44563号) 、高分子粘性物質の除去など、複雑な工程
を経なければならないのが現状である。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明の課題は、複雑
な工程を経ることなく、工業的に安価で且つ効率的な水
不溶性グルカンの精製方法を提供することにある。
な工程を経ることなく、工業的に安価で且つ効率的な水
不溶性グルカンの精製方法を提供することにある。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、水不溶性
グルカンを産生する微生物の培養液又は水不溶性グルカ
ンを構成成分とする微生物菌体含有溶液から水不溶性グ
ルカンを効率的に精製するためには、当該液の液性改善
が重要であることに着目し、鋭意研究を重ねた結果、当
該液を水酸化物及び酸化物で同時に処理することで、生
産菌の細胞破壊、脱色及び粘度低下が同時に達成され、
水不溶性グルカンを効率的に精製できることを見いだ
し、本発明を完成するに至った。
グルカンを産生する微生物の培養液又は水不溶性グルカ
ンを構成成分とする微生物菌体含有溶液から水不溶性グ
ルカンを効率的に精製するためには、当該液の液性改善
が重要であることに着目し、鋭意研究を重ねた結果、当
該液を水酸化物及び酸化物で同時に処理することで、生
産菌の細胞破壊、脱色及び粘度低下が同時に達成され、
水不溶性グルカンを効率的に精製できることを見いだ
し、本発明を完成するに至った。
【０００６】すなわち、本発明は、水不溶性グルカンを
産生する微生物の培養液又は水不溶性グルカンを構成成
分とする微生物菌体含有溶液を、0.175 〜3.5w/w% の酸
化物及びｐＨを10〜12.5にせしめる水酸化物で同時に処
理することを特徴とする、水不溶性グルカンの精製方法
である。以下、本発明を詳細に説明する。
産生する微生物の培養液又は水不溶性グルカンを構成成
分とする微生物菌体含有溶液を、0.175 〜3.5w/w% の酸
化物及びｐＨを10〜12.5にせしめる水酸化物で同時に処
理することを特徴とする、水不溶性グルカンの精製方法
である。以下、本発明を詳細に説明する。
【０００７】
【発明の実施の形態】本発明の精製方法の対象となる水
不溶性グルカンは、具体的には、酢酸菌の産生するバク
テリア・セルロース、担子菌の構成成分であるレンチナ
ン、酵母菌の表層構造である酵母グルカン等が挙げられ
る。
不溶性グルカンは、具体的には、酢酸菌の産生するバク
テリア・セルロース、担子菌の構成成分であるレンチナ
ン、酵母菌の表層構造である酵母グルカン等が挙げられ
る。
【０００８】本発明に用いられる水不溶性グルカン産生
又は構成菌は、特に限定されないが、例えば、サッカロ
マイセス・セレビシエ ATCC 18824, ATCC 9763, ATCC 2
6615, ATCC 15248, IFO 555等、アセトバクター・キシ
リナム IFO 3288, ATCC 10821, ATCC 31174、あるいは
アセトバクター・パストリアヌス ATCC 23766、同ライ
センス ATCC 23765、サルシナ・ベントリクリ、バクテ
リウム・キシロイデス、シュードモナス属細菌、アグロ
バクテリウム属細菌、及び真正担子菌類等の担子菌があ
る。
又は構成菌は、特に限定されないが、例えば、サッカロ
マイセス・セレビシエ ATCC 18824, ATCC 9763, ATCC 2
6615, ATCC 15248, IFO 555等、アセトバクター・キシ
リナム IFO 3288, ATCC 10821, ATCC 31174、あるいは
アセトバクター・パストリアヌス ATCC 23766、同ライ
センス ATCC 23765、サルシナ・ベントリクリ、バクテ
リウム・キシロイデス、シュードモナス属細菌、アグロ
バクテリウム属細菌、及び真正担子菌類等の担子菌があ
る。
【０００９】微生物の培養に用いられる培地は、水不溶
性グルカン産生又は構成菌の種類（酢酸菌、酵母菌、担
子菌）によって異なるが、当該菌に対して当業界で通常
用いTられる培地が使用され、合成培地、天然培地のい
ずれでもよく、液体培地が好ましい。例えば、合成培地
としては、一般に炭素源として各種糖類、窒素源として
尿素、アンモニウム塩、硝酸塩など、微量栄養素として
各種ビタミン、ヌクレオチド、無機塩（Ｍｇ、Ｃａ、Ｆ
ｅ、Ｎａ、Ｋ、Ｍｎ、Ｃｏ、Ｃｕ等）等が例示される。
天然培地としては、炭素源として各種糖類、アミノ酸、
有機酸、窒素源としては大豆蛋白質、蛋白質加水分解
物、酵母エキス、肉エキス等が例示される。 培養液の
ｐＨは、弱酸性が好ましく、通常5.0 〜6.5 がよい。培
養温度は、20〜35℃、培養時間は24〜216 時間程度が例
示される。培養は通気攪拌培養、静置培養、固体培養の
いずれの方法でも可能である。
性グルカン産生又は構成菌の種類（酢酸菌、酵母菌、担
子菌）によって異なるが、当該菌に対して当業界で通常
用いTられる培地が使用され、合成培地、天然培地のい
ずれでもよく、液体培地が好ましい。例えば、合成培地
としては、一般に炭素源として各種糖類、窒素源として
尿素、アンモニウム塩、硝酸塩など、微量栄養素として
各種ビタミン、ヌクレオチド、無機塩（Ｍｇ、Ｃａ、Ｆ
ｅ、Ｎａ、Ｋ、Ｍｎ、Ｃｏ、Ｃｕ等）等が例示される。
天然培地としては、炭素源として各種糖類、アミノ酸、
有機酸、窒素源としては大豆蛋白質、蛋白質加水分解
物、酵母エキス、肉エキス等が例示される。 培養液の
ｐＨは、弱酸性が好ましく、通常5.0 〜6.5 がよい。培
養温度は、20〜35℃、培養時間は24〜216 時間程度が例
示される。培養は通気攪拌培養、静置培養、固体培養の
いずれの方法でも可能である。
【００１０】こうして、通常、上記微生物の培養によっ
て得られた培養液又は微生物菌体含有溶液の性状は、微
生物含量が2.0 ×106 〜4.0 ×109 個／ｍｌ、粘度が40
0 〜10,000 cpsであり、また着色度（430nm での吸光
度) は0.4 〜7.0 である。当該培養液又は当該微生物菌
体含有溶液は、必要に応じて水等で希釈し、以下に述べ
る水酸化物及び酸化物に付することができる。当該培養
液又は当該微生物菌体含有溶液に水酸化物や酸化物等を
添加した処理液量は当該培養液又は微生物菌体含有溶液
量を約１〜10倍希釈することで本発明の目的とする効果
を発揮することができる。その理由は、処理時の均一性
を保ち、酸化物が局所的に不均一に反応することを防止
するためである。当該培養液又は当該微生物菌体含有溶
液に水酸化物や酸化物等を添加した当初の処理液の微生
物量が4.0 ×109 個／ｍｌより多く、又は粘度が10,000
cps より大きく、又は着色度（430nm での吸光度) が7.
0 を越える場合は、未反応物が残存することから望まし
くないので、希釈する必要がある。
て得られた培養液又は微生物菌体含有溶液の性状は、微
生物含量が2.0 ×106 〜4.0 ×109 個／ｍｌ、粘度が40
0 〜10,000 cpsであり、また着色度（430nm での吸光
度) は0.4 〜7.0 である。当該培養液又は当該微生物菌
体含有溶液は、必要に応じて水等で希釈し、以下に述べ
る水酸化物及び酸化物に付することができる。当該培養
液又は当該微生物菌体含有溶液に水酸化物や酸化物等を
添加した処理液量は当該培養液又は微生物菌体含有溶液
量を約１〜10倍希釈することで本発明の目的とする効果
を発揮することができる。その理由は、処理時の均一性
を保ち、酸化物が局所的に不均一に反応することを防止
するためである。当該培養液又は当該微生物菌体含有溶
液に水酸化物や酸化物等を添加した当初の処理液の微生
物量が4.0 ×109 個／ｍｌより多く、又は粘度が10,000
cps より大きく、又は着色度（430nm での吸光度) が7.
0 を越える場合は、未反応物が残存することから望まし
くないので、希釈する必要がある。
【００１１】本発明の水不溶性グルカンの精製方法は、
上記微生物の培養によって得られた培養液又は微生物菌
体含有溶液に、水酸化物及び酸化物を所定の濃度添加
し、50〜70℃、好ましくは55〜65℃にて、８〜24時間、
好ましくは14〜18時間、攪拌処理することによって行
う。
上記微生物の培養によって得られた培養液又は微生物菌
体含有溶液に、水酸化物及び酸化物を所定の濃度添加
し、50〜70℃、好ましくは55〜65℃にて、８〜24時間、
好ましくは14〜18時間、攪拌処理することによって行
う。
【００１２】本発明の精製方法に使用する水酸化物とし
ては、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カル
シウム、水酸化アンモニウム、炭酸水素ナトリウム等が
挙げられる。当該水酸化物は、0.1 〜10w/w%、好ましく
は0.5 〜３w/w%の水不溶性グルカンを含む培養液又は微
生物菌体含有溶液にｐＨが10〜12.5、好ましくは10.2〜
12.2になる様に添加する。ｐＨが10未満になるように当
該水酸化物を添加した場合は、処理液の粘度、菌の細胞
破壊や着色度が本発明ほど改善されない。また、ｐＨが
12.5を越えると、着色度の改善が低下する。
ては、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カル
シウム、水酸化アンモニウム、炭酸水素ナトリウム等が
挙げられる。当該水酸化物は、0.1 〜10w/w%、好ましく
は0.5 〜３w/w%の水不溶性グルカンを含む培養液又は微
生物菌体含有溶液にｐＨが10〜12.5、好ましくは10.2〜
12.2になる様に添加する。ｐＨが10未満になるように当
該水酸化物を添加した場合は、処理液の粘度、菌の細胞
破壊や着色度が本発明ほど改善されない。また、ｐＨが
12.5を越えると、着色度の改善が低下する。
【００１３】本発明の精製方法に使用する酸化物として
は、過酸化物、塩素系酸化物等が挙げられる。過酸化物
としては、具体的には、過酸化水素、過酸化ナトリウム
等が例示され、塩素系酸化物としては、具体的には、サ
ラシ粉、亜塩素酸ナトリウム、次亜塩素酸ナトリウム等
が挙げられる。当該酸化物は、同培養液又は微生物菌体
含有溶液に、実質的に0.175 〜3.5 w/w%、好ましくは0.
175 〜3.0w/w% の濃度になるよう添加する。0.175w/w%
未満の場合は、脱色が不充分であり、また3.5w/w% を越
える場合は別の着色が観察される等、好ましくない。
は、過酸化物、塩素系酸化物等が挙げられる。過酸化物
としては、具体的には、過酸化水素、過酸化ナトリウム
等が例示され、塩素系酸化物としては、具体的には、サ
ラシ粉、亜塩素酸ナトリウム、次亜塩素酸ナトリウム等
が挙げられる。当該酸化物は、同培養液又は微生物菌体
含有溶液に、実質的に0.175 〜3.5 w/w%、好ましくは0.
175 〜3.0w/w% の濃度になるよう添加する。0.175w/w%
未満の場合は、脱色が不充分であり、また3.5w/w% を越
える場合は別の着色が観察される等、好ましくない。
【００１４】本発明の精製方法に使用する水酸化物及び
酸化物の添加方法は、特に限定されない。すなわち、水
酸化物の添加後に酸化物を加えても良いし、又は酸化物
を添加後に水酸化物を添加しても良い。また、水酸化物
と酸化物を同時に添加しても良いし、交互に添加しても
良い。但し、水酸化物及び酸化物を添加する際の反応液
の温度は30℃以下に維持することが望ましい。反応液の
温度を上げる場合は、水酸化物及び酸化物を全量添加後
が好ましい。水酸化物や酸化物の急激な添加は酸素やア
ンモニアガスの急激な発生等をもたらし、本発明の効果
を低減させる。
酸化物の添加方法は、特に限定されない。すなわち、水
酸化物の添加後に酸化物を加えても良いし、又は酸化物
を添加後に水酸化物を添加しても良い。また、水酸化物
と酸化物を同時に添加しても良いし、交互に添加しても
良い。但し、水酸化物及び酸化物を添加する際の反応液
の温度は30℃以下に維持することが望ましい。反応液の
温度を上げる場合は、水酸化物及び酸化物を全量添加後
が好ましい。水酸化物や酸化物の急激な添加は酸素やア
ンモニアガスの急激な発生等をもたらし、本発明の効果
を低減させる。
【００１５】上記の精製工程を経て得られた培養液又は
微生物菌体含有溶液は処理前に比較して、その正常細胞
数は少なくとも1/5 ×10-5以下に減少し、着色度は1/1.
3 〜1/3 、粘度は1/1.7 〜1/10にそれぞれ低減する。こ
こで、正常細胞数とは、微生物の培養によって得られた
培養液又は微生物菌体含有溶液の微生物は水酸化物や酸
化物等により破壊されるが、その際、細胞が破壊されず
に残存した数をさす。そして、細胞の生死ではなく、細
胞の形態が維持されているものをさす。以上の本発明の
精製方法による、培養液又は微生物菌体含有溶液の液性
の改善状況を下表に示す。
微生物菌体含有溶液は処理前に比較して、その正常細胞
数は少なくとも1/5 ×10-5以下に減少し、着色度は1/1.
3 〜1/3 、粘度は1/1.7 〜1/10にそれぞれ低減する。こ
こで、正常細胞数とは、微生物の培養によって得られた
培養液又は微生物菌体含有溶液の微生物は水酸化物や酸
化物等により破壊されるが、その際、細胞が破壊されず
に残存した数をさす。そして、細胞の生死ではなく、細
胞の形態が維持されているものをさす。以上の本発明の
精製方法による、培養液又は微生物菌体含有溶液の液性
の改善状況を下表に示す。
【００１６】
【表１】
【００１７】1)粘度：＋＋＋（高），＋＋（中），＋
（低）2) 菌の細胞破壊：＋＋＋（極めて効果有り），＋＋（有
り），＋（少し有り），−（なし）3) 着色度：＋＋＋＋（着色），＋＋＋（やや着色），＋
（脱色），−（十分脱色）
（低）2) 菌の細胞破壊：＋＋＋（極めて効果有り），＋＋（有
り），＋（少し有り），−（なし）3) 着色度：＋＋＋＋（着色），＋＋＋（やや着色），＋
（脱色），−（十分脱色）
【００１８】
【実施例】以下実施例により本発明を更に具体的に説明
するが、本発明をこれらによって何ら限定されるもので
はない。 〔実施例１〕（ナタデココの精製） 表２に示す培地を１Ｌ容ガラスジャーファーメンターに
300ml 加え、オートクレーブで120 ℃、20分間加熱殺菌
した。放冷後、これにアセトバクター・キシリナム（Ac
etobacter xylinum）ATCC 31174を接種し、均一に分散
し、30℃で96時間静置培養して培養液を得た。この培養
液はナタデココを10g/L の濃度〔日本分析化学会編；分
析化学便覧p.998 (1961)記載の方法でセルロースとして
定量〕で含有し、正常細胞数は1.3 ×109個／ml（トー
マ血球計で測定）、粘度は5000cp（10g/L のナタデココ
を水に均一に懸濁して測定した粘度；Ｂ型粘度計で測
定）、着色度は0.92（430nm での吸光度を測定）であっ
た。
するが、本発明をこれらによって何ら限定されるもので
はない。 〔実施例１〕（ナタデココの精製） 表２に示す培地を１Ｌ容ガラスジャーファーメンターに
300ml 加え、オートクレーブで120 ℃、20分間加熱殺菌
した。放冷後、これにアセトバクター・キシリナム（Ac
etobacter xylinum）ATCC 31174を接種し、均一に分散
し、30℃で96時間静置培養して培養液を得た。この培養
液はナタデココを10g/L の濃度〔日本分析化学会編；分
析化学便覧p.998 (1961)記載の方法でセルロースとして
定量〕で含有し、正常細胞数は1.3 ×109個／ml（トー
マ血球計で測定）、粘度は5000cp（10g/L のナタデココ
を水に均一に懸濁して測定した粘度；Ｂ型粘度計で測
定）、着色度は0.92（430nm での吸光度を測定）であっ
た。
【００１９】
【表２】
【００２０】1) Salt mixture: FeSO4・7H2O 361 mg/L CaCl2・2H2O 1.47 g/L NaMoO4・2H20 24.2 mg/L ZnSO4・7H2O 173 mg/L MnSO4・5H2O 139 mg/L CuSO4・5H2O 5 mg/L
【００２１】2) Vitamine Mixture: イノシトール 200mg/L ニコチン酸 40g/L ピリドキシン塩酸塩 40g/L チアミン塩酸塩 40g/L パントテン酸カルシウム 20g/L リボフラビン 20g/L ｐ−アミノ安息香酸 20g/L 葉酸 200γ/L ビオチン 200γ/L
【００２２】 処理法１−Ａ 上記の培養液100ml に水100ml を加えて均一に分散し、
遠心分離し、等量の水にて２回洗浄を行い、粗ナタデコ
コを得た。これに、pHが13になる様に27%NaOH水溶液を
添加して均一に懸濁後、60℃で14時間攪拌処理した。処
理物の粘度は1580cp（Ｂ型粘度計で測定）で、正常細胞
数は２×105個／ml（トーマ血球計で測定）、着色度は
5.2 （430nm での吸光度を測定）であった。処理後、ナ
タデココを遠心分離にて回収し、100ml の水で2 回洗浄
し、精製ナタデココ0.70ｇ（乾物重量）を得た。
遠心分離し、等量の水にて２回洗浄を行い、粗ナタデコ
コを得た。これに、pHが13になる様に27%NaOH水溶液を
添加して均一に懸濁後、60℃で14時間攪拌処理した。処
理物の粘度は1580cp（Ｂ型粘度計で測定）で、正常細胞
数は２×105個／ml（トーマ血球計で測定）、着色度は
5.2 （430nm での吸光度を測定）であった。処理後、ナ
タデココを遠心分離にて回収し、100ml の水で2 回洗浄
し、精製ナタデココ0.70ｇ（乾物重量）を得た。
【００２３】 処理法１−Ｂ 上記の培養液100ml に、pHが12.2になる様に27%NaOH 水
溶液を、また0.35w/w%になる様にH2O2を加え、60℃で４
時間攪拌処理した。処理物の粘度は500cp で、細胞は全
て破壊され、着色度は0.3 （430nm での吸光度を測定）
であった。処理後、ナタデココを遠心分離にて回収し、
100ml の水で2 回洗浄し、精製ナタデココ 0.96gを得
た。表３に上記の各処理法によるナタデココの回収率、
純度、及び着色度の測定結果を示した。
溶液を、また0.35w/w%になる様にH2O2を加え、60℃で４
時間攪拌処理した。処理物の粘度は500cp で、細胞は全
て破壊され、着色度は0.3 （430nm での吸光度を測定）
であった。処理後、ナタデココを遠心分離にて回収し、
100ml の水で2 回洗浄し、精製ナタデココ 0.96gを得
た。表３に上記の各処理法によるナタデココの回収率、
純度、及び着色度の測定結果を示した。
【００２４】
【表３】
【００２５】1) 日本電色工業株式会社製、色差計Ｚ−
３００Ａにて測定した。黄色の着色度を示し、＋側は色
が濃く−側は薄いことを示す。2) 白色度を示し、０は黒色、 100に近づく程白色であ
ることを示す。白色標準板の白を100%とし、波長457nm
における試料（固形）の白色度を測定（色に関する事
柄、及びＺ−３００Ａユーザーズマニュアル、日本電色
工業株式会社）。
３００Ａにて測定した。黄色の着色度を示し、＋側は色
が濃く−側は薄いことを示す。2) 白色度を示し、０は黒色、 100に近づく程白色であ
ることを示す。白色標準板の白を100%とし、波長457nm
における試料（固形）の白色度を測定（色に関する事
柄、及びＺ−３００Ａユーザーズマニュアル、日本電色
工業株式会社）。
【００２６】 処理法１−Ｃ 上記の培養液を下記表４の各条件で処理し、同表に結果
を併せて示した。
を併せて示した。
【００２７】
【表４】
【００２８】〔実施例２〕（バクテリア・セルロースの
精製） 実施例１と同様な培地でアセトバクター・キシリナムAT
CC 31174を通気攪拌培養し、培養液を得た。この培養液
は15g/L の濃度でバクテリア・セルロースを含有し〔日
本分析化学会編；分析化学便覧p.998 (1961)記載の方法
でセルロースとして定量〕、正常細胞数は1.3 ×109個
／ml（トーマ血球計で測定）、粘度は5000cp（Ｂ型粘度
計で測定）、着色度は0.92（430nm での吸光度を測定）
であった。
精製） 実施例１と同様な培地でアセトバクター・キシリナムAT
CC 31174を通気攪拌培養し、培養液を得た。この培養液
は15g/L の濃度でバクテリア・セルロースを含有し〔日
本分析化学会編；分析化学便覧p.998 (1961)記載の方法
でセルロースとして定量〕、正常細胞数は1.3 ×109個
／ml（トーマ血球計で測定）、粘度は5000cp（Ｂ型粘度
計で測定）、着色度は0.92（430nm での吸光度を測定）
であった。
【００２９】この培養液100ml に水100ml を加えて均一
に分散した後、pHが10.5, 12.0, 12.5になる様に27%NaO
H 水溶液を加え、それぞれのpH値において同時に0.175
w/w%、0.7w/w% 、1.05w/w%になる様にH2O2を加え（処理
法２−Ａ〜Ｉ）、均一に懸濁し、60℃で４時間撹拌処理
した。同様に、pHが12.0になる様に27%NaOH 水溶液のみ
を加え（処理法２−Ｊ）、又は1.05w/w%になる様にH2O2
のみを加え（処理法２−Ｋ）、処理した。これらの各処
理物の分析結果を表５に示す。
に分散した後、pHが10.5, 12.0, 12.5になる様に27%NaO
H 水溶液を加え、それぞれのpH値において同時に0.175
w/w%、0.7w/w% 、1.05w/w%になる様にH2O2を加え（処理
法２−Ａ〜Ｉ）、均一に懸濁し、60℃で４時間撹拌処理
した。同様に、pHが12.0になる様に27%NaOH 水溶液のみ
を加え（処理法２−Ｊ）、又は1.05w/w%になる様にH2O2
のみを加え（処理法２−Ｋ）、処理した。これらの各処
理物の分析結果を表５に示す。
【００３０】
【表５】
【００３１】表５に示す各処理を行ったバクテリア・セ
ルロースを遠心分離にて回収し、100ml の水で3 回洗浄
し、精製バクテリア・セルロースを得た。各処理におけ
る回収率、純度、着色度を表６に示す。
ルロースを遠心分離にて回収し、100ml の水で3 回洗浄
し、精製バクテリア・セルロースを得た。各処理におけ
る回収率、純度、着色度を表６に示す。
【００３２】
【表６】
【００３３】〔実施例３〕（バクテリア・セルロースの
精製） 実施例２と同様な方法で得たアセトバクター・キシリナ
ムの培養液を表７、８の条件（３−Ａ〜Ｉ）、（３’−
Ａ〜Ｉ）で60℃、４時間処理し、同表に結果を併せて示
した。
精製） 実施例２と同様な方法で得たアセトバクター・キシリナ
ムの培養液を表７、８の条件（３−Ａ〜Ｉ）、（３’−
Ａ〜Ｉ）で60℃、４時間処理し、同表に結果を併せて示
した。
【００３４】
【表７】
【００３５】
【表８】
【００３６】表７、８に示す各処理を行ったバクテリア
・セルロースを遠心分離し、100mlの水で３回洗浄し、
精製バクテリア・セルロースを得た。表７、処理区３−
Ａ〜Ｃ、及び表８、処理区３’−Ａ〜Ｃはいずれも純度
は99% 以上であった。一方、対照区（表７、処理区３−
Ｄ〜Ｈ、及び表８、処理区３’−Ｄ〜Ｇ）及び無処理区
（表７、処理区３−Ｉ、表８、処理区３’−Ｈ）は、70
% 以下であった。
・セルロースを遠心分離し、100mlの水で３回洗浄し、
精製バクテリア・セルロースを得た。表７、処理区３−
Ａ〜Ｃ、及び表８、処理区３’−Ａ〜Ｃはいずれも純度
は99% 以上であった。一方、対照区（表７、処理区３−
Ｄ〜Ｈ、及び表８、処理区３’−Ｄ〜Ｇ）及び無処理区
（表７、処理区３−Ｉ、表８、処理区３’−Ｈ）は、70
% 以下であった。
【００３７】〔実施例４〕（酵母グルカンの精製） グルコース50g/L 、硫安3g/L、酵母エキス2g/L、ペプト
ン2g/L、リン酸一カリウム10g/L 、硫酸マグネシウム2g
/L、塩化カルシウム0.7g/Lよりなる培地を硫酸にてpH5.
5 に調整後、1L容ガラスジャーファーメンターに300ml
加え、オートクレーブで120 ℃、20分間加熱殺菌した。
放冷後、これにサッカロマイセス・セレビシエ(Sacchar
omyces cerevisiae) IFO 555 を接種し、通気攪拌しな
がら30℃で30時間培養し、培養液を得た。培養液100ml
にpHが12になる様に27%NaOH 水溶液を加え、70℃で4 時
間処理したもの（４−Ａ）と、培養液100ml にpHが12に
なる様に27%NaOH 水溶液を加え、同時にH2O2を0.35 w/w
% になる様に加えて70℃で4 時間処理したもの（４−
Ｂ）についてそれぞれの培養液の粘度、残存する正常細
胞数、着色度を観察した結果、粘度は４−Ａ：420cp 、
４−Ｂ：95cp、正常細胞数は４−Ａ：2.6 ×107 個/ml
、４−Ｂ：1.2 ×105 個/ml 以下、着色度（430nm で
の吸光度) は４−Ａ：0.85、４−Ｂ：0.1 であった。
ン2g/L、リン酸一カリウム10g/L 、硫酸マグネシウム2g
/L、塩化カルシウム0.7g/Lよりなる培地を硫酸にてpH5.
5 に調整後、1L容ガラスジャーファーメンターに300ml
加え、オートクレーブで120 ℃、20分間加熱殺菌した。
放冷後、これにサッカロマイセス・セレビシエ(Sacchar
omyces cerevisiae) IFO 555 を接種し、通気攪拌しな
がら30℃で30時間培養し、培養液を得た。培養液100ml
にpHが12になる様に27%NaOH 水溶液を加え、70℃で4 時
間処理したもの（４−Ａ）と、培養液100ml にpHが12に
なる様に27%NaOH 水溶液を加え、同時にH2O2を0.35 w/w
% になる様に加えて70℃で4 時間処理したもの（４−
Ｂ）についてそれぞれの培養液の粘度、残存する正常細
胞数、着色度を観察した結果、粘度は４−Ａ：420cp 、
４−Ｂ：95cp、正常細胞数は４−Ａ：2.6 ×107 個/ml
、４−Ｂ：1.2 ×105 個/ml 以下、着色度（430nm で
の吸光度) は４−Ａ：0.85、４−Ｂ：0.1 であった。
【００３８】４−Ａ，Ｂ両処理法による処理物を100ml
の水で6 回洗浄し、凍結乾燥して乾燥物をそれぞれ４−
Ａ：0.5g、４−Ｂ：0.12g を得た。それぞれを2N硫酸で
100℃、8 時間加水分解して遊離したグルコースをグル
コースアナライザーで分析して酵母グルカンの純度を測
定した結果、４−Ａ：48% 、４−Ｂ：85% であった。
の水で6 回洗浄し、凍結乾燥して乾燥物をそれぞれ４−
Ａ：0.5g、４−Ｂ：0.12g を得た。それぞれを2N硫酸で
100℃、8 時間加水分解して遊離したグルコースをグル
コースアナライザーで分析して酵母グルカンの純度を測
定した結果、４−Ａ：48% 、４−Ｂ：85% であった。
【００３９】〔実施例５〕（レンチナンの精製） 生しいたけ300gにpHが12になる様に27%NaOH 水溶液を加
えた水溶液を60℃4 時間処理したもの（５−Ａ）と、pH
が12になる様に27% NaOH水溶液を加えさらに0.35w/w%と
なる様にH2O2を加えた水溶液を60℃で4 時間処理したも
の（５−Ｂ）について、それぞれ粘度、細胞の破壊状
態、着色度について観察した結果、表９の通りであっ
た。
えた水溶液を60℃4 時間処理したもの（５−Ａ）と、pH
が12になる様に27% NaOH水溶液を加えさらに0.35w/w%と
なる様にH2O2を加えた水溶液を60℃で4 時間処理したも
の（５−Ｂ）について、それぞれ粘度、細胞の破壊状
態、着色度について観察した結果、表９の通りであっ
た。
【００４０】
【表９】
【００４１】*) 顕微鏡下で細胞形を観察し、細胞が全
く変形していない場合を(-) 、10% 以内の変形を(+) 、
10〜50% の変形を(++)、50% 以上の変形を(+++) で表示
した。これらを遠心分離して不溶物を回収し、水で6 回
洗浄した後、凍結乾燥品を５−Ａ：1.8g、５−Ｂ：0.3g
を得た。これらを10mgずつとり、2ml の2N H2SO4中に均
一の懸濁し、100 ℃で8 時間加水分解して遊離したグル
コースをグルコースアナライザーで分析してレンチナン
の純度を比較した結果、５−Ａ：32% 、５−Ｂ：80% で
あった。
く変形していない場合を(-) 、10% 以内の変形を(+) 、
10〜50% の変形を(++)、50% 以上の変形を(+++) で表示
した。これらを遠心分離して不溶物を回収し、水で6 回
洗浄した後、凍結乾燥品を５−Ａ：1.8g、５−Ｂ：0.3g
を得た。これらを10mgずつとり、2ml の2N H2SO4中に均
一の懸濁し、100 ℃で8 時間加水分解して遊離したグル
コースをグルコースアナライザーで分析してレンチナン
の純度を比較した結果、５−Ａ：32% 、５−Ｂ：80% で
あった。
【００４２】
【発明の効果】本発明によれば、水不溶性グルカンを産
生する微生物の培養液、又は水不溶性グルカンを構成成
分とする微生物菌体含有溶液について、生産菌の細胞破
壊、脱色及び粘度低下を同時に行うことができ、水不溶
性グルカンを複雑な工程を経ることなく、工業的に安価
で且つ効率的に精製することができる。
生する微生物の培養液、又は水不溶性グルカンを構成成
分とする微生物菌体含有溶液について、生産菌の細胞破
壊、脱色及び粘度低下を同時に行うことができ、水不溶
性グルカンを複雑な工程を経ることなく、工業的に安価
で且つ効率的に精製することができる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 //(Ｃ１２Ｐ 19/04 Ｃ１２Ｒ 1:02） (Ｃ１２Ｐ 19/04 Ｃ１２Ｒ 1:865） (Ｃ１２Ｐ 19/04 Ｃ１２Ｒ 1:645）
Claims (4)
- 【請求項１】 水不溶性グルカンを産生する微生物の培
養液又は水不溶性グルカンを構成成分とする微生物菌体
含有溶液を、0.175 〜3.5 w/w%の酸化物及びｐＨを10〜
12.5にせしめる水酸化物で同時に処理することを特徴と
する、水不溶性グルカンの精製方法。 - 【請求項２】 水不溶性グルカンが、レンチナン、酵母
グルカン、セルロースから選択される請求項１記載の精
製方法。 - 【請求項３】 当該培養液又は当該微生物菌体含有溶液
の微生物含量が2.0×106 〜4.0 ×109 個／mlである請
求項１記載の精製方法。 - 【請求項４】 当該培養液又は当該微生物菌体含有溶液
の粘度が400 〜10,000 cpsである請求項１記載の精製方
法。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14412696A JP3687194B2 (ja) | 1996-06-06 | 1996-06-06 | 水不溶性グルカンの精製方法 |
| US08/867,354 US5795979A (en) | 1996-06-06 | 1997-06-02 | Water-insoluble glucan purification method |
| EP97303783A EP0811690B1 (en) | 1996-06-06 | 1997-06-03 | Water-insoluble glucan purification method |
| DE69701204T DE69701204T2 (de) | 1996-06-06 | 1997-06-03 | Verfahren zur Reinigung von wasserunlöslichen Glucanen |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14412696A JP3687194B2 (ja) | 1996-06-06 | 1996-06-06 | 水不溶性グルカンの精製方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09322795A true JPH09322795A (ja) | 1997-12-16 |
| JP3687194B2 JP3687194B2 (ja) | 2005-08-24 |
Family
ID=15354813
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP14412696A Expired - Fee Related JP3687194B2 (ja) | 1996-06-06 | 1996-06-06 | 水不溶性グルカンの精製方法 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5795979A (ja) |
| EP (1) | EP0811690B1 (ja) |
| JP (1) | JP3687194B2 (ja) |
| DE (1) | DE69701204T2 (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006166737A (ja) * | 2004-12-13 | 2006-06-29 | Alpron Co Ltd | 酵母由来グルカンの製造方法 |
| JP2008011818A (ja) * | 2006-07-07 | 2008-01-24 | Fujicco Co Ltd | ナタデココシートの製造方法 |
| US7745181B2 (en) | 2004-02-13 | 2010-06-29 | Alpron Co., Ltd. | Process for producing yeast-derived glucan |
| JP2015214623A (ja) * | 2014-05-08 | 2015-12-03 | 株式会社神鋼環境ソリューション | 微細藻類からβ−グルカンを分離する分離方法 |
| JP7340729B1 (ja) * | 2023-03-29 | 2023-09-07 | フジッコ株式会社 | ナタデココシートの製造方法 |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE19839216C1 (de) * | 1998-08-28 | 2000-01-20 | Aventis Res & Tech Gmbh & Co | Verfahren zur Herstellung von sphärischen Mikropartikeln, die ganz oder teilweise aus mindestens einem wasserunlöslichen Verzweigungen enthaltenden Polyglucan bestehen, sowie mit diesem Verfahren erhältliche Mikropartikel und die Verwendung |
| KR20040004614A (ko) * | 2001-05-28 | 2004-01-13 | 에자끼구리고가부시키가이샤 | 글루칸의 생성방법 및 제조방법 |
| NL1018568C2 (nl) * | 2001-07-17 | 2003-01-21 | Tno | Winning van polysachariden uit plantaardig en microbieel materiaal. |
| WO2005023227A2 (en) * | 2003-09-08 | 2005-03-17 | Pfizer Health Ab | Nicotine formulations and use thereof |
| CA2912012C (en) | 2005-05-05 | 2018-05-29 | Sensient Flavors Inc. | Production of beta-glucans and mannans |
| WO2008032134A1 (es) * | 2006-09-11 | 2008-03-20 | Compana Nacional De Levaduras Levapan S.A. | Proceso para la obtencion de glucan de levadura por autolisis de celulas de levadura saccharomyces cerevisiae de panaderia |
| PT104691B (pt) * | 2009-07-28 | 2013-04-22 | Univ Tras Os Montes E Alto Douro | Processo de obtenção de fibra dietetica de cogumelos e respectiva fibra |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS52117492A (en) * | 1975-12-11 | 1977-10-01 | Hayashibara Biochem Lab Inc | Preparation of water-insoluble glucan |
| US4908310A (en) * | 1987-12-23 | 1990-03-13 | University Of Kansas | Water insoluble polysaccharide polymer and method thereof |
| US5223491A (en) * | 1989-11-09 | 1993-06-29 | Donzis Byron A | Method for revitalizing skin by applying topically water insoluble glucan |
-
1996
- 1996-06-06 JP JP14412696A patent/JP3687194B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
1997
- 1997-06-02 US US08/867,354 patent/US5795979A/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-06-03 EP EP97303783A patent/EP0811690B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-06-03 DE DE69701204T patent/DE69701204T2/de not_active Expired - Lifetime
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| US7745181B2 (en) | 2004-02-13 | 2010-06-29 | Alpron Co., Ltd. | Process for producing yeast-derived glucan |
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| JP4570949B2 (ja) * | 2004-12-13 | 2010-10-27 | 株式会社アルプロン | 酵母由来グルカンの製造方法 |
| JP2008011818A (ja) * | 2006-07-07 | 2008-01-24 | Fujicco Co Ltd | ナタデココシートの製造方法 |
| JP4628320B2 (ja) * | 2006-07-07 | 2011-02-09 | フジッコ株式会社 | ナタデココシートの製造方法 |
| JP2015214623A (ja) * | 2014-05-08 | 2015-12-03 | 株式会社神鋼環境ソリューション | 微細藻類からβ−グルカンを分離する分離方法 |
| JP7340729B1 (ja) * | 2023-03-29 | 2023-09-07 | フジッコ株式会社 | ナタデココシートの製造方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0811690A1 (en) | 1997-12-10 |
| DE69701204T2 (de) | 2000-07-06 |
| EP0811690B1 (en) | 2000-01-26 |
| DE69701204D1 (de) | 2000-03-02 |
| US5795979A (en) | 1998-08-18 |
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