JP2006166737A - 酵母由来グルカンの製造方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】 水を電気分解して得られるアルカリ性電解水を磨砕媒体として用い、これに酵母を加えて冷却しつつ、かかる酵母を物理的に磨砕した後、得られた磨砕物を、上記と同様なアルカリ性電解水の存在下、自己消化処理と共に、アルカリ性プロテアーゼを用いて酵素処理し、次いで、その酵素処理されたものを、pHが11以上、酸化還元電位が−800mVよりも低い強アルカリ性電解水にて洗浄し、更に、得られた洗浄処理物を、希酸水溶液にて接触、処理することにより、高純度グルカンを得る。
【選択図】 なし
Description
酵母菌としては、家庭用の乾燥パン酵母として市販されているドライイースト(日清スーパーカメリヤドライイースト)を準備した。
松江市の上水道水から、ホシザキ電機(株)製電解水生成装置(HOX−40A)を用いて、電解水を製造した。電解条件は、電解強度が3〜4A、流量が3〜4L/minであった。また、得られた電解水の酸化還元電位は、酸性電解水が約+580mV、アルカリ性電解水が約−700mVであった。
ホシザキ電機(株)製電解水生成装置(ROX−10WA)を用いて、塩化ナトリウム濃度が0.2%以下とされた食塩水の電解を行ない、陰極側より、pHが約11.5、酸化還元電位が約−900mVの強アルカリ性電解水を得た。
精製したβ−グルカンに残存する蛋白質量を、Bio−Rad社の蛋白質量測定試薬(Bradford法)により評価した。種々の濃度の牛血清アルブミン(BSA)を利用して、標準曲線を作成し、比色により、β−グルカン中の蛋白質量を評価した。
マウス・マクロファージ由来のRaw264.7細胞(米国ATCCより入手)を24wellプレートにより、10%牛胎児血清入りDulbeco's MEM メディウム(Sigma社製)中で、5%CO2 存在下、37℃で4時間培養した(0.5×106cells/well)。培養開始時に種々の濃度のβ−グルカンを添加して、腫瘍壊死因子(TNFα)の誘導産生能を、後述の酵素免疫測定法(ELISA)により、評価した。陽性対照群として、大腸菌由来の100ng/mlのリポポリサッカライド(LPS)を添加した。なお、TNFα産生の評価は、独立した実験を実験を3度試行し、その平均値を求めることにより、行なった。
抗マウスTNFαモノクローナル抗体を利用したサンドウィッチELISA法を原理とするTNFα測定キット(Duo−Set,R&Dシステム社製)を利用して、Raw264.7細胞が分泌した培養上清中のTNFαを測定した。このシステムの感度は、16pg/mlで、マウスTNFα以外の抗原(蛋白質)を認識しない、極めて特異性の高い測定法である。種々の濃度の組み換え型マウスTNFαを基準として、標準曲線を得て、培養上清中に分泌したTNFαを、ELISAリーダーにより測定した。
Claims (8)
- 水を電気分解して得られるアルカリ性電解水を磨砕媒体として用い、これに酵母を加えて冷却しつつ、かかる酵母を物理的に磨砕する工程と、
該磨砕工程で得られる磨砕物を、上記と同様なアルカリ性電解水の存在下、前記酵母の細胞内酵素による自己消化処理に加えて、アルカリ性プロテアーゼを用いて酵素処理する工程と、
かかる磨砕物の酵素処理されたものを、pHが11以上、酸化還元電位が−800mVよりも低い強アルカリ性電解水にて洗浄する工程と、
該洗浄工程で得られる洗浄処理物を、希酸水溶液にて接触、処理して、高純度グルカンを得る工程とを、
含むことを特徴とする酵母由来グルカンの製造方法。 - 前記磨砕工程が、不活性雰囲気下において実施される請求項1に記載の酵母由来グルカンの製造方法。
- 前記磨砕される酵母が、不活性ガスの液化物に接触せしめられて、凍結されている請求項1又は請求項2に記載の酵母由来グルカンの製造方法。
- 前記磨砕操作を進行せしめつつ、前記酵母と前記アルカリ性電解水の混合物に対して、不活性ガスの液化物が連続的に又は間欠的に添加されて、該混合物の冷却が行なわれる請求項1乃至請求項3の何れかに記載の酵母由来グルカンの製造方法。
- 前記不活性ガスの液化物が、液体窒素である請求項3又は請求項4に記載の酵母由来グルカンの製造方法。
- 前記磨砕によって、粒径が1〜30μmの酵母磨砕物とされる請求項1乃至請求項5の何れかに記載の酵母由来グルカンの製造方法。
- 前記強アルカリ性電解水による洗浄操作が、複数回、繰り返して実施される請求項1乃至請求項6の何れかに記載の酵母由来グルカンの製造方法。
- 前記希酸水溶液が、0.001〜0.1N塩酸水溶液である請求項1乃至請求項7の何れかに記載の酵母由来グルカンの製造方法。
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