JPH0931097A - クラミジア・トラコマティス抗体の測定法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】クラミジア・トラコマティス抗体の測定法の提
供。 【構成】クラミジア・トラコマティスの主要外膜蛋白質
中の第ＩＶ可変領域の一次構造に由来するアミノ酸配列
を有するポリペプチドと抗クラミジア・トラコマティス
抗体を含む検体を混合し、該ポリペプチドとクラミジア
・トラコマティス抗体との免疫複合体を形成せしめ、該
免疫複合体を検出することからなる抗クラミジア・トラ
コマティス抗体の測定法及びそれに用いるクラミジア・
トラコマティス抗体と親和性を有するポリペプチド。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明はクラミジア抗体の測定法
に関し、さらに詳しくはクラミジア・トラコマティス主
要外膜蛋白質（ＭＯＭＰ）に対する抗体と高い親和性
（結合能）を有するポリペプチドを用いるクラミジア抗
体の測定に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】クラミジア・トラコマティス（Ｃｈｌａ
ｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）はトラコーマ、
封入体結膜炎、非淋菌性尿道炎や性病性リンパ肉芽腫
（ＬＧＶ）の起因微生物で、近年、性行為感染症（ＳＴ
Ｄ）の原因微生物の１つとして注目を集めている。

【０００３】クラミジア・トラコマティス感染症の臨床
検査法には、擦過により採取した患者検体中のクラミジ
ア・トラコマティス菌体の検出を目的とする抗原検査法
やＤＮＡ検査法と、血清を検体とする抗体検査法があ
る。クラミジア・トラコマティス感染症の診断は患者材
料から抗原またはＤＮＡを検出することがより直接で検
査の基本ではあるが、骨盤内感染症や小児新生児肺炎あ
るいは子宮内膜や卵管炎など抗原検査材料の採取が容易
でない場合もあり、血清中のクラミジア・トラコマティ
ス抗体の検出は重要な検査法となっている。

【０００４】現在、最も信頼性の高い血清抗体検査法は
間接マイクロ免疫蛍光抗体法（マイクロ−ＩＦ法）であ
る。しかしながら標準的なマイクロ−ＩＦ法は１５種類
のクラミジア・トラコマティス血清型の精製基本小体
（以下これを「ＥＢ」ということがある）を材料として
特異蛍光を観察するため、同定微生物の完全な形態また
は構造を必要とする。また、マイクロ−ＩＦ法は操作法
が複雑で熟練を要し、多検体の処理に適さないため、臨
床検査室では診断法としてはあまり採用されていない。

【０００５】一方、近年開発された酵素免疫測定法（以
下これを「ＥＬＩＳＡ」ということがある）は簡便かつ
迅速に多検体の処理ができる利点を有している。このＥ
ＬＩＳＡを用いたクラミジア・トラコマティス抗体の測
定に関する報告がなされているが、そのほとんどがクラ
ミジア・トラコマティスＬ２株のＥＢをそのまま、また
は、ＳＤＳ（ドデシル硫酸ナトリウム）処理してＥＬＩ
ＳＡ用の抗原材料として用いる。そのため、クラミジア
属の共通抗原の存在によるクラミジア・ニューモニエ抗
体およびクラミジア・シッタシ抗体との交差反応を含む
非特異的反応があることが知られている。これはひとつ
にはクラミジア・トラコマティスの持つ複雑な抗原性に
起因している。すなわちクラミジア属（ｇｅｎｕｓ）特
異的抗原、クラミジア・トラコマティス種（ｓｐｅｃｉ
ｅｓ）特異的抗原およびクラミジア・トラコマティスの
血清型（ｂｉｏｂａｒ）特異的抗原があると考えられて
いる。代表的なクラミジア属特異的抗原としてはリポポ
リサッカライドが知られている。

【０００６】一方、代表的なクラミジア・トラコマティ
ス種特異的抗原、および血清型特異的抗原としては、ク
ラミジア・トラコマティス主要外膜蛋白質（Ｍａｊｏｒ
Ｏｕｔｅｒ Ｍｅｍｂｒａｎｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ；以下
これを「ＭＯＭＰ」ということがある）が知られてお
り、これはクラミジア・トラコマティス外膜蛋白質の約
６０％を占めるといわれている。このＭＯＭＰは血清型
共通領域と血清型に特異的な第Ｉ〜第ＩＶの４つの可変
領域より構成されている（Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎａｎｄ
Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ５７（４）：ｐ１０４０−１０４９
（１９８９））。しかしながらＭＯＭＰにも一部クラミ
ジア属特異的抗原の存在が知られており、ＭＯＭＰ以外
のクラミジア・トラコマティス外膜抗原は主に属特異的
抗原である。

【０００７】従って、従来のＥＬＩＳＡ法においては、
クラミジア属特異的抗原の存在による非特異的反応のた
めクラミジア・トラコマティス種に対する抗体のみを特
異的に測定することは出来なかった。

【０００８】

【発明が解決しようとする課題】本発明の主たる目的
は、上述のクラミジア・トラコマティスの複雑な抗原性
によりこれまで特異的に測定することが困難であったク
ラミジア・トラコマティス種特異的抗体の測定法の提供
にある。

【０００９】

【課題を解決するための手段】本発明者等はクラミジア
・トラコマティス感染症の診断において有用なポリペプ
チドおよび該ポリペプチドを用いた診断法の開発を目的
として鋭意研究を重ねた結果、クラミジア・トラコマテ
ィス感染症患者検体と特異的に反応する抗原決定部位
（以下これを「エピトープ」ということがある）が主要
外膜蛋白質（ＭＯＭＰ）中の第ＩＶ可変領域に存在する
ことを見いだし、本発明を完成するに至った。すなわ
ち、本発明はクラミジア・トラコマティスの主要外膜蛋
白質中の第ＩＶ可変領域の一次構造に由来するアミノ酸
配列を有するポリペプチドと抗クラミジア・トラコマテ
ィス抗体を含む検体を混合し、該ポリペプチドとクラミ
ジア・トラコマティス抗体との免疫複合体を形成せし
め、該免疫複合体を検出することを特徴とする抗クラミ
ジア・トラコマティス抗体の測定法およびそれに用いる
クラミジア・トラコマティス抗体と親和性を有するポリ
ペプチドである。

【００１０】以下、本発明についてさらに詳細に説明す
る。本発明のクラミジア・トラコマティス感染症患者の
血清中の抗クラミジア抗体に親和性（結合能）を有する
ポリペプチドのアミノ酸配列は、クラミジア・トラコマ
ティスの各血清型の主要外膜蛋白質（ＭＯＭＰ）の一次
構造（Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．，１６８：ｐ１２７７
−１２８２（１９８６）、Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ
Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，５７（４）：ｐ１０４０−１０４９
（１９８９））を基に、例えば、血清型Ｌ２の全アミノ
酸配列および血清型特異的な可変領域を網羅するノナペ
プチド群を合成し、抗クラミジア・トラコマティス抗体
陽性の患者検体を用いクラミジア・トラコマティス主要
外膜蛋白質（ＭＯＭＰ）中のエピトープを解析し、その
知見を用いて決定することができる。本発明で用いるポ
リペプチドは上記で解析したエピトープ配列を少なくと
も含む配列の長さ（アミノ酸数）が９〜４５、好ましく
は２０〜４５が適当である。

【００１１】先ず、マルチピンペプチド合成装置（Ｌａ
ｂｓｙｓｔｅｍｓ社製）を用い、ポリスチレンピン上に
Ｎ末より順次数アミノ酸残基、例えば２アミノ酸残基を
ずらしたノナペプチド群を同時に合成する。次に、これ
らのポリペプチドの中から、クラミジア・トラコマティ
ス感染症患者血清中のＩｇＧが結合するペプチド配列を
西洋ワサビパーオキシダーゼ結合マウス抗ヒトＩｇＧモ
ノクローナル抗体を二次抗体、オルトフェニレンジアミ
ンを発色基質とする免疫測定法により検索することによ
り、クラミジア・トラコマティス主要外膜蛋白質（ＭＯ
ＭＰ）中のエピトープを解析し、その知見に基づいてク
ラミジア・トラコマティス抗体に親和性を有するポリペ
プチドを合成し、それを用いてクラミジア・トラコマテ
ィス抗体を検出することができる。

【００１２】（１）エピトープ解析用ノナペプチド群 エピトープ解析用のペプチドのアミノ酸配列は、例え
ば、クラミジア・トラコマティスの血清型Ｌ２の主要外
膜蛋白質（ＭＯＭＰ）のアミノ酸一次構造（Ｊ．Ｂａｃ
ｔｅｒｉｏｌ．，１６８：ｐ１２７７−１２８２（１９
８６））および各血清型に特異的な可変領域のアミノ酸
配列（Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，
５７（４）：ｐ１０４０−１０４９（１９８９））を基
に決定することができる。例えば以下のようにクラミジ
ア・トラコマティスの血清型Ｌ２のＭＯＭＰのアミノ酸
配列（配列番号１）を網羅するオーバーラップしたノナ
ペプチド群と各血清型に特異的な可変領域のアミノ酸配
列（配列番号２）を網羅するノナペプチド群を組み合わ
せることによって各血清型のＭＯＭＰの全配列に相当す
る領域のエピトープ解析を行うことができる。

【００１３】 血清型Ｌ２のＭＯＭＰのアミノ酸配列
を網羅するノナペプチド群 例えば、配列番号１に示されるクラミジア・トラコマテ
ィス血清型Ｌ２のＭＯＭＰの一次構造配列中の２２残基
のシグナルペプチド部分を除いたアミノ酸番号２３から
始まる９アミノ酸残基で示されるペプチド配列をペプチ
ド番号１−１とし、アミノ酸番号２５から始まる９アミ
ノ酸残基で示されるペプチド配列をペプチド番号１−２
とする。以下順次２残基毎にＣ端末側へ始点をシフトさ
せ、ペプチド番号１−１８２までペプチド番号１−Ｎは
配列番号１で示される配列中のアミノ酸番号（２Ｎ＋２
１）から始まる９アミノ酸残基で示されるペプチド配列
のペプチドとする。上記ペプチド番号１−１〜ペプチド
番号１−１８２の１８２種類のノナペプチド群をマルチ
ピンペプチド合成装置（Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ社製）で
合成する。

【００１４】 各血清型特異的な可変領域のアミノ酸
配列を網羅するノナペプチド群 例えば、クラミジア・トラコマティスの１５種の血清型
のうちＢ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｆ、Ｃ、Ｈ、Ｉ、ＪおよびＫ株
のＭＯＭＰ中の可変領域の配列を直列に連結した配列番
号２で示されるアミノ酸配列において、アミノ酸番号１
から始まる９アミノ酸残基で示されるペプチド配列をペ
プチド番号２−１とし、アミノ酸番号３から始まる９ア
ミノ酸残基で示されるペプチド配列をペプチド番号２−
２とする。以下順次２残基毎にペプチド番号２−８９ま
でペプチド番号２−Ｎはアミノ酸番号（２Ｎ−１）から
始まる９アミノ酸残基で示されるペプチド配列とする。

【００１５】同様にして、ペプチド番号２−９０から２
−１９８までのペプチド番号２−Ｎはアミノ酸番号（２
Ｎ＋６）から始まる９アミノ酸残基で示される配列、ペ
プチド番号２−１９９から２−２５２までのペプチド番
号２−Ｎはアミノ酸番号（２Ｎ＋１３）から始まる９ア
ミノ酸残基で示される配列、ペプチド番号２−２５３か
ら２−２８８までのペプチド番号２−Ｎはアミノ酸番号
（２Ｎ＋２０）から始まる９アミノ酸残基で示される配
列、ペプチド番号２−２８９から２−３１９までのペプ
チド番号２−Ｎはアミノ酸番号（２Ｎ＋２７）から始ま
る９アミノ酸残基で示される配列、ペプチド番号２−３
２０から２−３５８までのペプチド番号２−Ｎはアミノ
酸番号（２Ｎ＋３４）から始まる９アミノ酸残基で示さ
れる配列とする。なお、各ペプチド番号と対応するクラ
ミジア・トラコマティスの血清型を表１に示す。

【００１６】

【表１】

【００１７】

【表２】

【００１８】上記ペプチド番号２−１〜ペプチド番号２
−３５８の３５８種類のノナペプチド群をマルチピンペ
プチド合成装置（Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ社製）で合成す
る。

【００１９】（２）エピトープ配列の決定 上記マルチピンペプチド合成装置でポリエチレンピン上
に合成されたノナペプチド群と適当に希釈したクラミジ
ア・トラコマティス感染患者検体を反応させ、免疫複合
体を形成させる。次に未反応の抗体を除くため、ピンを
洗浄した後に、西洋ワサビパーオキシダーゼ結合山羊抗
マウスＩｇＧ抗体等の酵素標識抗ヒトＩｇＧ動物血清を
加え、さらにノナペプチド／クラミジア・トラコマティ
ス抗体／西洋ワサビパーオキシダーゼ結合山羊抗マウス
ＩｇＧ抗体の免疫複合体を形成させる。未反応西洋ワサ
ビパーオキシダーゼ結合山羊抗マウスＩｇＧ抗体を洗浄
して除去した後、ペルオキシダーゼ基質であるオルトフ
ェニレンジアミンと過酸化水素を含む溶液を加え、発色
反応を行い、吸光度を求める。これにより発色が確認さ
れた反応容器内に存在するノナペプチドは、クラミジア
・トラコマティス抗体と免疫複合体を形成したことを示
し、そのノナペプチドはエピトープの一部であることを
明らかにすることができる。

【００２０】（３）エピトープの一部を含むポリペプチ
ドの合成 エピトープが決定された後、その一部を含むポリペプチ
ドは、例えば固相合成法により得ることができる。即
ち、該ポリペプチドを構成する保護アミノ酸を用意し、
担体樹脂上で自動ペプチド合成機（アプライドバイオシ
ステムズ社製、モデル４３０Ａペプチドシンセサイザ
ー）で合成する。得られた保護ペプチド樹脂を無水フッ
化水素（ＨＦ）法で保護基を除去、酸処理で樹脂から該
ポリペプチドを脱離し、粗ポリペプチドを得る。得られ
た粗ポリペプチドは逆相クロマトグラフィゲル（ＨＰＬ
Ｃ）で精製し、高純度ポリペプチドを得ることができ
る。

【００２１】（４）クラミジア・トラコマティス抗体の
検出法 先ず、エピトープの一部を含む上記合成ポリペプチドを
適当な固相材料、例えばプラスティク、合成繊維または
無機材質等に固定化し、適当に希釈したクラミジア・ト
ラコマティス感染患者検体を反応させ、免疫複合体を形
成させる。次に、未反応の抗体を洗浄除去した後に、適
当な標識物質、例えば酵素、ラジオアイソトープ、化学
発光物質または蛍光物質等で標識化した抗ヒトＩｇＧ抗
体またはプロテインＡ等の標識化ヒトＩｇＧ結合性物質
を加え、該合成ペプチド／クラミジア・トラコマティス
抗体／標識化ヒトＩｇＧ結合性物質の免疫複合体を形成
させ、免疫複合体中の標識物質の存在及びその量を検出
することにより、検体中のクラミジア・トラコマティス
抗体を測定することができる。

【００２２】あるいは、該合成ポリペプチドを、酵素、
アイソトープ、化学発光物質、蛍光物質等で標識し、標
識化ポリペプチドを調製し、未標識ポリペプチド存在
下、検体中のクラミジア・トラコマティス抗体と抗原抗
体反応をさせる、いわゆる競合イムノアッセイ法でもク
ラミジア・トラコマティス抗体を測定することができ
る。標識物質の検出は、それ自体既知の通常用いられる
方法により容易に行うことができる。

【００２３】

【実施例】次に、実施例により本発明をさらに具体的に
説明する。しかしながら、下記の実施例は本発明につい
て具体的な認識を得る一助として挙げたものであり、こ
れによって本発明の範囲は何ら限定されるものではな
い。

【００２４】実施例１ クラミジア・トラコマティスの
エピトープ解析 クラミジア・トラコマティスの各血清型の主要外膜蛋白
質（ＭＯＭＰ）の一次構造を基に、血清型Ｌ２の全アミ
ノ酸配列（配列番号１）および各血清型の血清型特異的
可変領域のアミノ酸配列（配列番号２）を網羅するノナ
ペプチド群を合成し、クラミジア・トラコマティス抗体
の存在が確認されている患者検体を用いてクラミジア・
トラコマティスのＭＯＭＰ上のエピトープの解析を次の
とおり行った。

【００２５】（１） ノナペプチドの合成 Ａ）ノナペプチド合成 配列番号１および配列番号２に示すアミノ酸配列を網羅
する前記ペプチド番号１−１〜ペプチド番号１−１８２
およびペプチド番号２−１〜ペプチド番号２−３５８の
５４０種類のノナペプチド群をマルチピンペプチド合成
装置（Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ社製）を用い、９−フルオ
レニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）−アミノ酸
誘導体をＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジミド（Ｄ
ＣＣ）で縮合することにより行った。詳細な合成手順を
次に示す。

【００２６】１）クラミジア・トラコマティスのＬ２株
のＭＯＭＰの全アミノ酸配列（配列番号１）および血清
型特異的可変領域のアミノ酸配列（配列番号２）をもと
に合成プログラムを組み、９アミノ酸残基からなるペプ
チドフラグメントを２アミノ酸残基ずつずらして合計５
４０種類のペプチドの合成を行った。 ２）合成は９６本のピンのついたマルチピンプレートと
９６穴のマイクロプレートを各６枚用い１縮合反応当た
り（１サイクル）一晩かけて合成を行った。

【００２７】３）合成プログラムに従って、Ｆｍｏｃ−
アミノ酸を秤量した（最終濃度：５０ｍＭ）。 ４）ピンには予めＦｍｏｃ基がついているので、まず２
０％ピペリジン／ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）でＦ
ｍｏｃ基を除去した。

【００２８】５）Ｆｍｏｃ基を除去した後、ＤＭＦでピ
ンを洗浄し、２０％ピペリジン／ＤＭＦを除去し更にメ
タノール（ＭｅＯＨ）で３回洗浄しピンを乾燥させた。 ６）予め秤量しておいたＦｍｏｃ−アミノ酸にプログラ
ムに従って調製した１−ヒドロキシベンゾトリアゾール
（ＨＯｂｔ）/ＤＭＦ溶液（最終濃度：７２ｍＭ）を加
え、良く混和しアイスバスに入れておく。

【００２９】７）プログラムに従い調製したＤＣＣ/Ｄ
ＭＦ溶液をＦｍｏｃ−アミノ酸溶液を１５０μlずつ分
注し、マルチピンプレートと合わせ室温で昼夜振盪反応
させた。 ８）反応後、マルチピンプレートをマイクロプレートか
らはずしＤＭＦでよく洗浄し、ＭｅＯＨで２回洗浄後乾
燥した。乾燥後は上記４）Ｆｍｏｃ基の除去から繰り返
し合成した。

【００３０】Ｂ）Ｎ−末端アミノ酸のアセチル化 １）全合成終了後、ピンをＤＭＦおよびＭｅＯＨで洗浄
し、２０％ヒ゜ペリジン／ＤＭＦでＦｍｏｃを除去し
た。

【００３１】２）ピンをＤＭＦで洗浄後、ＤＭＦ：無水
酢酸：アニソール＝５０：５：１に調製した溶液（２２
４ｍｌ/プレート）にピンを浸し、室温で９０分間反応
させてアセチル化した。 ３）ＭｅＯＨでピンを洗浄後、乾燥させた。

【００３２】Ｃ）側鎖保護基の脱離反応 １）トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）：エタンジチオール：
アニソール＝９０：５：５に調製した溶液（約１７０ｍ
ｌ/プレート）にアセチル化したピンを浸し、室温で４
時間反応させて側鎖の保護基をはずした。 ２）ピンを乾燥させた後、０．１％塩酸（ＨＣｌ）/Ｍ
ｅＯＨ：Ｈ₂Ｏ＝１：１を３００ｍｌ/Ｂｏｘに調製し
て、ピンを付けて洗浄した。その後ピンを乾燥させた。

【００３３】（２）エピトープの解析 下記に示す方法で、（１）で合成した５４０種類のノナ
ペプチド群を用い、クラミジア・トラコマティス抗体の
存在が確認されている患者検体を用いてクラミジア・ト
ラコマティス抗体のエピトープ解析を行った。 １）２％牛血清アルブミン（ＢＳＡ）溶液を平底ＥＩＡ
プレートに２００μｌ／ｗｅｌｌ分注し、ピンを合わせ
て室温で２時間静置し、ブロッキングを行った。 ２）ピンを取り出し、洗浄緩衝液で３回洗浄した後、緩
衝液で希釈した患者検体を１００μｌ/ｗｅｌｌ分注
し、ピンを合わせ４℃で２４時間振とうしながら反応さ
せた。

【００３４】３）ピンを取り出し、洗浄緩衝液で３回洗
浄した後、希釈した西洋ワサビパーオキシダーゼ標識抗
ヒトＩｇＧマウスモノクローナル抗体溶液を１００μｌ
／ｗｅｌｌ分注し、ピンを合わせ４℃で１時間振とうし
ながら反応させた。 ４）ピンを取り出し、洗浄緩衝液で３回洗浄した後、過
酸化水素とオルトフェニレンジアミンを含む基質液を１
５０μｌ/ｗｅｌｌ分注し、ピンを合わせ室温で１５分
間反応後、各ｗｅｌｌに１Ｎ硫酸５０μｌを加え反応を
停止し、吸光度４９２ｎｍを測定した。その結果を図１
〜図５に示す。

【００３５】図１〜図５に示した結果から明らかなとお
り、ペプチド番号１−１４８（配列番号３）、１−１４
９（配列番号４）、１−１５５（配列番号５）、１−１
５６（配列番号６）、１−１５７（配列番号７）、１−
１５８（配列番号８）、２−２５９（配列番号９）、２
−２６０（配列番号１０）、２−２６１（配列番号１
１）、２−２６２（配列番号１２）、２−２６３（配列
番号１３）、２−２６４（配列番号１４）、２−２６５
（配列番号１５）、２−２６６（配列番号１６）、２−
２６７（配列番号１７）、２−２６８（配列番号１
８）、２−２６９（配列番号１９）、２−２８２（配列
番号２０）、２−２８７（配列番号２１）、２−２８８
（配列番号２２）、２−２９５（配列番号２３）、２−
２９６（配列番号１０；２−２６０と同配列）、２−２
９７（配列番号２４）、２−３０１（配列番号２５）、
２−３０２（配列番号２６）、２−３０３（配列番号２
７）、２−３０４（配列番号２８）、２−３４８（配列
番号２９）、２−３４９（配列番号３０）の２８種類の
ノナペプチドがクラミジア・トラコマティス抗体に高い
親和性（結合能）を有していた。これらのノナペプチド
のアミノ酸配列はいずれもＭＯＭＰ上の第ＩＶ可変領域
のアミノ酸配列の一部であった。

【００３６】実施例２ クラミジア・トラコマティス抗
体に親和性を有するポリペプチドの合成 クラミジア・トラコマティス抗体に親和性を有する配列
番号３〜３０記載のアミノ酸配列を含む配列番号３１〜
配列番号３６に示すポリペプチドを固相合成法で化学合
成した。

【００３７】配列番号３１、配列番号３２、配列番号３
３、配列番号３４、配列番号３５および配列番号３６
は、それぞれクラミジア・トラコマティスの血清型Ｄ、
Ｆ、Ｈ、ＢとＥ、ＧおよびＫの第ＩＶ可変領域のアミノ
酸配列に相当する。また、配列番号３２〜配列番号３６
に示す配列を有するポリペプチドは水溶性を上げるため
にクラミジア由来の配列のＮ末端側に親水性アミノ酸を
付加して合成を行った。以下に配列番号３１のポリペプ
チドについての合成法を示すがそれ以外のポリペプチド
の合成についても使用する保護アミノ酸を置き換える以
外は基本操作法は同じである。

【００３８】（１）保護ペプチド樹脂へのＭｅｔの導入 Ａ）脱保護および中和 第三ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）−Ｇｌｎ−フェ
ニルアセタミドメチル（ＰＡＭ）樹脂（０．７１ｍｍｏ
ｌ／ｇ）０．７０２２ｇをジクロロメタン(ＤＣＭ)で２
回洗浄した。この樹脂に３０％ＴＦＡ溶液（溶媒：ＤＣ
Ｍ）８ｍｌを加え３分間攪拌後、濾過した。更に５０％
ＴＦＡ溶液（溶媒：ＤＣＭ）８ｍｌを加え、１７分間攪
拌後濾過してＢｏｃ基を脱離させた。得られた樹脂を下
記の溶媒で順次処理し、各々の処理後に濾過した。 ＤＣＭ（５回、各３０秒） ５％ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）/ＤＣＭ
（１回、１分） ５％ＤＩＥＡ/Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）（５
回、各３０秒）

【００３９】Ｂ）Ｂｏｃ−Ｍｅｔ−１−ヒドロキシベン
ゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）エステルの調製 Ｂｏｃ−Ｍｅｔ２ｍｍｏｌを０．８ｍｌＤＣＭ/３．５
ｍｌＮＭＰ/２ｍｌＮＭＰ−ＨＯＢｔ混合液に溶解後、
１Ｍジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）溶液
（溶媒：ＤＣＭ）２ｍｌを加え、３６分間反応させ、Ｂ
ｏｃ−Ｍｅｔ−（ＨＯＢｔ）エステルを形成させた。副
生するジシクロヘキシルウレアを濾別して除いた。

【００４０】Ｃ）縮合反応 Ｂ）で調製したＭｅｔ−（ＨＯＢｔ）エステルのＤＣＭ
/ＮＭＰ溶液をＡ）で調製したＧｌｎ−ＰＡＭに加え、
室温で３０分間反応させ、更にジメチルスルホキシド
（ＤＭＳＯ）を最終濃度２０％となるように加え室温で
１６分間反応させた。次に３．８当量のＤＩＥＡを加え
室温で７分間反応した。反応終了後、ＤＣＭで３回洗浄
した。未反応のα−アミノ基をアセチル化する目的で、
１０％無水酢酸、５％ＤＩＥＡ、ＤＣＭ溶液で２分、続
いて１０％無水酢酸、ＤＣＭ溶液で４分反応し、ＤＣＭ
で４回洗浄した。

【００４１】（２）各アミノ酸の導入 （１）と同様にして、Ｂｏｃ−Ｍｅｔ−Ｇｌｎ−ＰＡＭ
に配列番号３１の各構成アミノ酸に対応する保護アミノ
酸を順次カップリングさせた。

【００４２】（３）保護ペプチド樹脂の液体フッ化水素
（ＨＦ）処理 乾燥した樹脂ペプチド（１．０２ｇ）を秤量し、ＨＦ分
解用反応容器（テフロン製）に入れ、アニソール１ｍｌ
を加え、一時間放置し、樹脂を膨潤させた。攪拌子を入
れた前記反応容器をＨＦ分解装置（ペプチド研究所製）
に取付、ドライアイス−エタノール浴中に置き、ＨＦ５
ｍｌを反応容器中に導入した。この混合物を氷浴中にお
いて１時間、０℃で攪拌した。減圧下にＨＦを徐々に留
去した。１時間後反応容器を取り外し、無水ジエチルエ
ーテルを用いて反応容器から樹脂ペプチド分解物を取り
出し、無水ジエチルエーテルで洗浄した。３０％酢酸５
０ｍｌ中に樹脂ペプチド分解物を加え、脱保護されたペ
プチドを溶解した。これを、塩交換の目的で予め酢酸型
に置換し、イオン交換樹脂カラム（Ｄｏｗｅｘ１ｘ２
１、室町化学社製）を通した。素通り画分に水を加えて
酢酸濃度を１Ｎに調節した後、凍結乾燥して配列番号３
１に示すポリペプチド５１２．９ｍｇを得た。

【００４３】（４）逆相ＨＰＬＣによる配列番号３１の
ポリペプチドの精製 （３）で得られた粗ペプチド１０６．７ｍｇを精製水に
溶解（１０ｍｇ／ｍｌ）し、高速液体クロマトグラフィ
ーアイソクラティック溶出法により精製した。カラムは
ＹＭＣ−Ｄ（ワイ・エム・シィ社製、φ２ｘ２５ｃｍ）
を用い、溶離液はＡ液として水（４０）−アセトニトリ
ル（６０）−１０％ＴＦＡ（１）を用い、Ａ（６１）−
Ｂ（３９）、流速１０ｍｌ／ｍｉｎの条件下で溶出させ
た。ここで、（ ）は溶媒の体積比である。配列番号３
１のポリペプチドに相当する画分（保持時間２９．６
分）を分取し、凍結乾燥して白色の精製ペプチド１６．
０ｍｇを得た。

【００４４】（５）配列番号３１のポリペプチドの構造
確認と純度試験 上記（４）で得られたポリペプチドをＨＰＬＣ、アミノ
酸分析およびＦａｂ質量分析で次のとおり分析し、構造
確認と純度検定を行った。精製ポリペプチド２０μｇを
下記測定条件の逆相ＨＰＬＣにて分析した結果、クロマ
トグラム上２３．７分にペプチドに基づく単一の強い吸
収を認め、これが目的の配列番号３１に示すポリペプチ
ドであることが判明した。またアミノ酸分析の結果およ
びＦａｂ質量分析の結果（(Ｍ＋Ｈ)⁺３５１０．５）
は、それぞれ理論値に一致するものであった。

【００４５】 逆相ＨＰＬＣ測定条件 カラム：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ ＯＤＳ−Ａ３０２（φ４．６ｘ２５０ｍｍ） 流速：１ｍｌ/ｍｉｎ 溶離液：Ａ液（水：アセトニトリル：１０％ＴＦＡ＝１００：０：１） Ｂ液（水：アセトニトリル：１０％ＴＦＡ＝４０：６０：１） 濃度勾配：Ａ/Ｂ＝１００/０（０分）→０/１００（３０分） 波長：２２０ｎｍ

【００４６】配列番号３２〜配列番号３６に示されるア
ミノ酸配列を有するポリペプチドについても、使用する
保護アミノ酸を置き換える以外は上記と同様に方法で合
成および精製し、構造確認と純度検定を行った。合成し
たポリペプチドはＨＰＬＣ、アミノ酸分析およびＦａｂ
質量分析の結果、高純度の標品であることが確認でき
た。

【００４７】実施例３ ラジオイムノアッセイによる抗
クラミジア・トラコマティス抗体の測定 （１）ペプチド固相化ビーズの作製 実施例２で合成した配列番号３１、配列番号３２および
配列番号３３に示す配列のポリペプチドをそれぞれ１０
μｇ／ｍｌになるように２０ｍＭ炭酸緩衝液（ｐＨ９．
６）で調製し、各ペプチド溶液３０ｍｌ中にポリスチレ
ンビーズ１００個を加え、室温で一晩振盪して物理吸着
させた。液を捨てＰＢＳ（含塩リン酸緩衝液）で３回ビ
ーズを洗浄した後、２％ＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）
−ＰＢＳ溶液３０ｍｌ中にビーズを移し、室温で一晩浸
透してブロッキングをおこなった。ブロッキング後、液
を捨て０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０（ＩＣＩ社製）を含む
ＰＢＳ溶液（０．０５％Ｔ−ＰＢＳ）で３回洗浄を行っ
た。

【００４８】（２）検体の測定 健常者およびクラミジア・トラコマティス感染症患者の
血清を０．０５％Ｔ−ＰＢＳを用いて適当倍率に希釈
し、２００μｌづつチューブに分注し、配列番号３１、
配列番号３２および配列番号３３のポリペプチドをコー
ティングしたビーズをそれぞれ加え、室温で２時間反応
させた。反応終了後、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０−ＰＢ
Ｓ溶液で、ビーズを５回洗浄した。ついで¹²⁵Ｉで標識
したプロテインＡ（Ｚｙｍｅｄ社製）を０．０５％Ｔ−
ＰＢＳで適当に希釈し、各チューブに２００μｌづつ加
え、室温で２時間反応をおこなった。反応液を除去し、
０．０５％Ｔ−ＰＢＳで５回洗浄した後、γ−カウンタ
ーにて各チューブの放射能の測定を行った。

【００４９】その結果、クラミジア感染症の患者検体は
１０例とも全てのペプチドまたは少なくとも１種類以上
のペプチドと反応した。一方、健常者の検体はいずれも
反応性を示さなかった（図６参照）。

【００５０】実施例４ 酵素免疫測定法による抗クラミ
ジア・トラコマティス抗体の測定 （１）ペプチド固相化プレートの作製 実施例２で合成した配列番号３１、配列番号３２、配列
番号３３、配列番号３４、配列番号３５および配列番号
３６で示されるポリペプチドをそれぞれ１０μｇ／ｍｌ
になるように２０ｍＭ炭酸緩衝液（ｐＨ９．６）で等量
ずつ混合して調製した。このペプチド溶液をマイクロプ
レートの各ウェルに１００μｌずつ加え、４℃で一晩静
置して物理吸着させた。液を捨てＰＢＳで３回プレート
を洗浄した後、２％ＢＳＡ−ＰＢＳ溶液を１００μｌず
つ各ウェルに分注し、室温で３時間ブロッキングをおこ
なった。ブロッキング後、液を捨て０．０５％Ｔｗｅｅ
ｎ２０を含むＰＢＳ溶液（０．０５％Ｔ−ＰＢＳ）で３
回洗浄を行った。

【００５１】（２）検体の測定 健常者血清、クラミジア・トラコマティス感染患者血清
およびクラミジア・ニューモニエ感染患者血清を各１０
例ずつ測定した。まず、検体を０．０５％Ｔ−ＰＢＳを
用いて適当倍率に希釈し、１００μｌずつ各ウェルに分
注し、室温で２時間反応させた。反応終了後、０．０５
％Ｔ−ＰＢＳで、プレートを５回洗浄した。ついでペル
オキシダーゼで標識した抗ヒトＩｇＧ抗体を０．０５％
Ｔ−ＰＢＳで適当に希釈し、各ウェルに１００μｌずつ
加え、室温で２時間反応をおこなった。反応液を除去
し、０．０５％Ｔ−ＰＢＳで５回洗浄した後、ο−フェ
ニレンジアミンと過酸化水素水を含む基質液を１００μ
ｌずつ分注し、一定時間後に１Ｎ硫酸液を加え、吸光度
を測定した。

【００５２】その結果を図７に示す。図７から明らかな
とおり、健常者検体およびクラミジア・ニューモニエ感
染患者検体はいずれもポリペプチドとの反応性を示さな
かった。一方、クラミジア・トラコマティス感染患者検
体は１０例全て高い吸光度を示した。このことから本発
明のポリペプチドはクラミジア・ニューモニエとは反応
せず、クラミジア・トラコマティスに高い特異性を示す
ことが明らかとなった。

【００５３】

【発明の効果】従来のＥＬＩＳＡ法においては、クラミ
ジア・トラコマティスの複雑な抗原性によりこれまでク
ラミジア・トラコマティス抗体を特異的に測定すること
が困難であったが、本発明によるクラミジア・トラコマ
ティス主要外膜蛋白質（ＭＯＭＰ）に対する抗体と高い
親和性（結合能）を有するポリペプチドを用いることに
より、クラミジア抗体の特異的測定が可能となった。

【００５４】

【配列表】

配列番号：１ 配列の長さ：３９４ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 他の情報：クラミジア・トラコマティス血清型Ｌ２の主
要外膜蛋白質の一次構造 配列 Met Lys Lys Leu Leu Lys Ser Val Leu Val Phe Ala Ala Leu Ser Ser 1 5 10 15 Ala Ser Ser Leu Gln Ala Leu Pro Val Gly Asn Pro Ala Glu Pro Ser 20 25 30 Leu Met Ile Asp Gly Ile Leu Trp Glu Gly Phe Gly Gly Asp Pro Cys 35 40 45 Asp Pro Cys Thr Thr Trp Cys Asp Ala Ile Ser Met Arg Met Gly Tyr 50 55 60 Tyr Gly Asp Phe Val Phe Asp Arg Val Leu Gln Thr Asp Val Asn Lys 65 70 75 80 Glu Phe Gln Met Gly Ala Lys Pro Thr Thr Ala Thr Gly Asn Ala Ala 85 90 95 Ala Pro Ser Thr Cys Thr Ala Arg Glu Asn Pro Ala Tyr Gly Arg His 100 105 110 Met Gln Asp Ala Glu Met Phe Thr Asn Ala Ala Tyr Met Ala Leu Asn 115 120 125 Ile Trp Asp Arg Phe Asp Val Phe Cys Thr Leu Gly Ala Thr Ser Gly 130 135 140 Tyr Leu Lys Gly Asn Ser Ala Ser Phe Asn Leu Val Gly Leu Phe Gly 145 150 155 160 Asp Asn Glu Asn His Ala Thr Val Ser Asp Ser Lys Leu Val Pro Asn 165 170 175 Met Ser Leu Asp Gln Ser Val Val Glu Leu Tyr Thr Asp Thr Thr Phe 180 185 190 Ala Trp Ser Ala Gly Ala Arg Ala Ala Leu Trp Glu Cys Gly Cys Ala 195 200 205 Thr Leu Gly Ala Ser Phe Gln Tyr Ala Gln Ser Lys Pro Lys Val Glu 210 215 220 Glu Leu Asn Val Leu Cys Asn Ala Ala Glu Phe Thr Ile Asn Lys Pro 225 230 235 240 Lys Gly Tyr Val Gly Gln Glu Phe Pro Leu Asp Leu Lys Ala Gly Thr 245 250 255 Asp Gly Val Thr Gly Thr Lys Asp Ala Ser Ile Asp Tyr His Glu Trp 260 265 270 Gln Ala Ser Leu Ala Leu Ser Tyr Arg Leu Asn Met Phe Thr Pro Tyr 275 280 285 Ile Gly Val Lys Trp Ser Arg Ala Ser Phe Asp Ala Asp Thr Ile Arg 290 295 300 Ile Ala Gln Pro Lys Ser Ala Thr Thr Val Phe Asp Val Thr Thr Leu 305 310 315 320 Asn Pro Thr Ile Ala Gly Ala Gly Asp Val Lys Ala Ser Ala Glu Gly 325 330 335 Gln Leu Gly Asp Thr Met Gln Ile Val Ser Leu Gln Leu Asn Lys Met 340 345 350 Lys Ser Arg Lys Ser Cys Gly Ile Ala Val Gly Thr Thr Ile Val Asp 355 360 365 Ala Asp Lys Tyr Ala Val Thr Val Glu Thr Arg Leu Ile Asp Glu Arg 370 375 380 Ala Ala His Val Asn Ala Gln Phe Arg Phe 385 390

【００５５】配列番号：２ 配列の長さ：７５８ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 他の情報：クラミジア・トラコマティスのの血清型Ｂ、
Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｆ、Ｃ、Ｈ、Ｉ、ＪおよびＫの主要外膜蛋
白質中の可変領域の一次構造を直列に並べた配列 配列 Val Asn Lys Glu Phe Gln Met Gly Ala Lys Pro Thr Thr Thr Thr Gly 1 5 10 15 Asn Ala Val Ala Pro Ser Thr Leu Thr Ala Arg Glu Asn Pro Ala Tyr 20 25 30 Gly Ala Lys Pro Thr Thr Asp Glu Gly Asn Ser Ala Ala Pro Ser Thr 35 40 45 Leu Glu Phe Gln Met Gly Asp Lys Pro Thr Ser Thr Thr Gly Asn Ala 50 55 60 Thr Ala Pro Thr Thr Leu Thr Ala Arg Val Asn Lys Glu Phe Glu Met 65 70 75 80 Gly Glu Ala Leu Ala Gly Ala Ser Gly Asn Thr Thr Ser Thr Leu Ser 85 90 95 Lys Leu Val Glu Arg Thr Asn Pro Ala Tyr Gly Phe Gln Met Gly Ala 100 105 110 Ala Pro Thr Thr Ser Asp Val Ala Gly Leu Gln Asn Asp Pro Thr Thr 115 120 125 Asn Val Ala Arg Pro Asn Pro Ala Tyr Gly Ala Ala Pro Thr Thr Asn 130 135 140 Asp Ala Ala Asp Leu Gln Asn Asp Pro Lys Thr Asn Val Ala Arg Ala 145 150 155 160 Ala Pro Thr Thr Lys Asp Val Ala Gly Leu Glu Asn Asp Pro Thr Thr 165 170 175 Ser Asp Val Glu Gly Leu Gln Asn Asp Val Gly Leu Phe Gly Asn Asn 180 185 190 Glu Asn Gln Thr Lys Val Ser Asn Gly Ala Phe Val Pro Asn Met Ser 195 200 205 Leu Asp Gln Ser Val Val Glu Leu Tyr Val Gly Leu Phe Gly Asp Asn 210 215 220 Glu Asn Gln Lys Thr Val Lys Ala Glu Ser Val Pro Asn Met Ser Phe 225 230 235 240 Asp Gln Ser Val Val Asp Asn Glu Asn Gln Ser Thr Val Lys Thr Asn 245 250 255 Ser Val Pro Asn Met Gly Leu Phe Gly Asp Gly Val Asn Ala Thr Lys 260 265 270 Pro Ala Ala Asp Ser Ile Pro Asn Val Gln Leu Asn Gln Ser Val Val 275 280 285 Glu Leu Phe Gly Asp Gly Glu Asn Ala Thr Gln Pro Ala Ala Thr Ser 290 295 300 Ile Pro Asn Val Gly Leu Phe Gly Thr Lys Thr Lys Ser Ser Asp Phe 305 310 315 320 Asn Thr Ala Lys Leu Val Pro Asn Ile Ala Leu Asn Arg Ala Val Val 325 330 335 Glu Leu Tyr Lys Thr Gln Ser Ser Asn Phe Asn Thr Ala Lys Leu Val 340 345 350 Pro Asn Ala Ala Leu Asn Gln Ala Val Val Glu Leu Asp Thr Lys Thr 355 360 365 Gln Ala Ser Ser Phe Asn Thr Ala Asn Leu Phe Pro Asn Thr Ala Leu 370 375 380 Gly Thr Lys Thr Gln Tyr Ser Lys Phe Asn Thr Ala Asn Leu Val Pro 385 390 395 400 Asn Thr Ala Leu Asp Arg Ala Val Val Glu Lys Gly Tyr Val Gly Lys 405 410 415 Glu Leu Pro Leu Asp Leu Thr Ala Gly Thr Asp Ala Ala Thr Gly Thr 420 425 430 Lys Asp Tyr Val Gly Lys Glu Phe Pro Leu Asp Leu Thr Lys Gly Tyr 435 440 445 Val Gly Gln Glu Phe Pro Leu Ala Leu Ile Ala Gly Thr Asp Ala Phe 450 455 460 Pro Leu Ala Leu Thr Ala Gly Thr Asp Ala Lys Gly Tyr Val Gly Ala 465 470 475 480 Glu Phe Pro Leu Asn Ile Thr Ala Gly Thr Glu Ala Ala Thr Gly Thr 485 490 495 Ala Glu Phe Pro Leu Asp Ile Ile Ala Gly Thr Glu Ala Lys Gly Tyr 500 505 510 Val Gly Val Glu Phe Pro Leu Asp Ile Thr Ala Gly Thr Arg Ile Ala 515 520 525 Gln Pro Lys Ser Ala Glu Thr Ile Phe Asp Val Thr Thr Leu Asn Pro 530 535 540 Thr Ile Ala Gly Ala Gly Asp Val Lys Thr Ser Ala Glu Gly Gln Leu 545 550 555 560 Gly Asp Thr Met Gln Ile Gln Pro Lys Ser Ala Thr Ala Ile Phe Asp 565 570 575 Thr Thr Thr Leu Asn Pro Gly Asp Val Lys Thr Gly Ala Glu Gly Gln 580 585 590 Leu Ala Gly Asp Val Lys Ala Ser Ala Glu Gly Gln Arg Ile Ala Gln 595 600 605 Pro Arg Leu Val Thr Pro Val Val Asp Ile Thr Thr Leu Asn Pro Thr 610 615 620 Ile Ala Gly Cys Gly Ser Val Ala Gly Ala Asn Thr Glu Gly Gln Ile 625 630 635 640 Ser Asp Thr Met Gln Ile Ala Gln Pro Lys Leu Ala Lys Pro Val Val 645 650 655 Asp Ile Gly Cys Gly Ser Val Val Ala Ala Asn Ser Glu Gly Gln Ile 660 665 670 Ser Lys Gly Thr Val Val Ser Ser Ala Glu Asn Glu Leu Ala Asp Val 675 680 685 Ala Ser Gly Ser Glu Asn Asp Leu Ala Asp Leu Asn Pro Thr Ile Thr 690 695 700 Gly Lys Gly Ala Val Val Ser Ser Gly Ser Asp Asn Glu Leu Ala Gln 705 710 715 720 Pro Lys Leu Ala Glu Ala Ile Leu Asp Val Thr Thr Leu Asn Pro Thr 725 730 735 Ile Ala Gly Lys Gly Thr Val Val Ala Ser Gly Ser Asp Asn Asp Leu 740 745 750 Ala Asp Thr Met Gln Ile 755

【００５６】配列番号：３ 配列の長さ：９ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 他の情報：配列番号１のアミノ酸番号３１７〜３２５
（実施例１のペプチド番号１−１４８）に相当する配列

【００５７】配列番号：４ 配列の長さ：９ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 他の情報：配列番号１のアミノ酸番号３１９〜３２５
（実施例１のペプチド番号１−１４９）に相当する配列

【００５８】配列番号：５ 配列の長さ：９ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 他の情報：配列番号１のアミノ酸番号３３１〜３３９
（実施例１のペプチド番号１−１５５に相当する配列

【００５９】配列番号：６ 配列の長さ：９ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 他の情報：配列番号１のアミノ酸番号３３３〜３４１
（実施例１のペプチド番号１−１５６）に相当する配列

【００６０】配列番号：７ 配列の長さ：９ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 他の情報：配列番号１のアミノ酸番号３３５〜３４３
（実施例１のペプチド番号１−１５７）に相当する配列

【００６１】配列番号：８ 配列の長さ：９ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 他の情報：配列番号１のアミノ酸番号３３７〜３４５
（実施例１のペプチド番号１−１５８）に相当する配列

【００６２】配列番号：９ 配列の長さ：９ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 他の情報：配列番号２のアミノ酸番号５３８〜５４６
（実施例１のペプチド番号２−２５９）に相当する配列

【００６３】配列番号：１０ 配列の長さ：９ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 他の情報：配列番号２のアミノ酸番号５４０〜５４８
（実施例１のペプチド番号２−２６０、２−２９６）に
相当する配列

【００６４】配列番号：１１ 配列の長さ：９ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 他の情報：配列番号２のアミノ酸番号５４２〜５５０
（実施例１のペプチド番号２−２６１）に相当する配列

【００６５】配列番号：１２ 配列の長さ：９ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 他の情報：配列番号２のアミノ酸番号５４４〜５５２
（実施例１のペプチド番号２−２６２）に相当する配列

【００６６】配列番号：１３ 配列の長さ：９ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 他の情報：配列番号２のアミノ酸番号５４６〜５５４
（実施例１のペプチド番号２−２６３）に相当する配列

【００６７】配列番号：１４ 配列の長さ：９ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 他の情報：配列番号２のアミノ酸番号５４８〜５５６
（実施例１のペプチド番号２−２６４）に相当する配列

【００６８】配列番号：１５ 配列の長さ：９ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 他の情報：配列番号２のアミノ酸番号５５０〜５５８
（実施例１のペプチド番号２−２６５）に相当する配列

【００６９】配列番号：１６ 配列の長さ：９ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 他の情報：配列番号２のアミノ酸番号５５２〜５６０
（実施例１のペプチド番号２−２６６）に相当する配列

【００７０】配列番号：１７ 配列の長さ：９ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 他の情報：配列番号２のアミノ酸番号５５４〜５６２
（実施例１のペプチド番号２−２６７）に相当する配列

【００７１】配列番号：１８ 配列の長さ：９ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 他の情報：配列番号２のアミノ酸番号５５６〜５６４
（実施例１のペプチド番号２−２６８）に相当する配列

【００７２】配列番号：１９ 配列の長さ：９ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 他の情報：配列番号２のアミノ酸番号５５８〜５６６
（実施例１のペプチド番号２−２６９）に相当する配列

【００７３】配列番号：２０ 配列の長さ：９ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 他の情報：配列番号２のアミノ酸番号５８４〜５９２
（実施例１のペプチド番号２−２８２）に相当する配列

【００７４】配列番号：２１ 配列の長さ：９ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 他の情報：配列番号２のアミノ酸番号５９４〜６０２
（実施例１のペプチド番号２−２８７）に相当する配列

【００７５】配列番号：２２ 配列の長さ：９ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 他の情報：配列番号２のアミノ酸番号５９６〜６０４
（実施例１のペプチド番号２−２８８）に相当する配列

【００７６】配列番号：２３ 配列の長さ：９ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 他の情報：配列番号２のアミノ酸番号６１７〜６２５
（実施例１のペプチド番号２−２９５）に相当する配列

【００７７】配列番号：２４ 配列の長さ：９ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 他の情報：配列番号２のアミノ酸番号６２１〜６２９
（実施例１のペプチド番号２−２９７）に相当する配列

【００７８】配列番号：２５ 配列の長さ：９ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 他の情報：配列番号２のアミノ酸番号６２９〜６３７
（実施例１のペプチド番号２−３０１）に相当する配列

【００７９】配列番号：２６ 配列の長さ：９ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 他の情報：配列番号２のアミノ酸番号６３１〜６３９
（実施例１のペプチド番号２−３０２）に相当する配列

【００８０】配列番号：２７ 配列の長さ：９ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド ３＝配列の特徴 他の情報：配列番号２のアミノ酸番号６３３〜６４１
（実施例１のペプチド番号２−３０３）に相当する配列

【００８１】配列番号：２８ 配列の長さ：９ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 他の情報：配列番号２のアミノ酸番号６３５〜６４３
（実施例１のペプチド番号２−３０４）に相当する配列

【００８２】配列番号：２９ 配列の長さ：９ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 他の情報：配列番号２のアミノ酸番号７３０〜７３８
（実施例１のペプチド番号２−３４８）に相当する配列

【００８３】配列番号：３０ 配列の長さ：９ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 他の情報：配列番号２のアミノ酸番号７３２〜７４０
（実施例１のペプチド番号２−３４９）に相当する配列

【００８４】配列番号：３１ 配列の長さ：３５ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 他の情報：クラミジア・トラコマティスの血清型Ｄの主
要外膜蛋白質中の第ＩＶ可変領域のアミノ酸配列を含む
配列 配列 Lys Ser Ala Thr Ala Ile Phe Asp Thr Thr Thr Leu Asn Pro Thr Ile 1 5 10 15 Ala Gly Ala Gly Asp Val Lys Thr Ser Ala Glu Gly Gln Leu Gly Asp 20 25 30 Thr Met Gln 35

【００８５】配列番号：３２ 配列の長さ：４０ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 他の情報：クラミジア・トラコマティスの血清型Ｆの主
要外膜蛋白質中の第ＩＶ可変領域のアミノ酸配列を含む
配列 配列 Tyr Lys Lys Lys Arg Leu Val Thr Pro Val Val Asp Ile Thr Thr Leu 1 5 10 15 Asn Pro Thr Ile Ala Gly Cys Gly Ser Val Ala Gly Ala Asn Thr Glu 20 25 30 Gly Gln Ile Ser Asp Thr Met Gln 35 40

【００８６】配列番号：３３ 配列の長さ：４０ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 他の情報：クラミジア・トラコマティスの血清型Ｈの主
要外膜蛋白質中の第ＩＶ可変領域のアミノ酸配列を含む
配列 配列 Tyr Lys Lys Lys Lys Leu Ala Glu Ala Ile Leu Asp Val Thr Thr Leu 1 5 10 15 Asn Pro Thr Ile Ala Gly Lys Gly Thr Val Val Ala Ser Gly Ser Asp 20 25 30 Asn Asp Leu Ala Asp Thr Met Gln 35 40

【００８７】配列番号：３４ 配列の長さ：３２ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 他の情報：クラミジア・トラコマティスの血清型Ｂおよ
びＥの主要外膜蛋白質中の第ＩＶ可変領域のアミノ酸配
列を含む配列 配列 Tyr Lys Lys Lys Ser Ala Glu Thr Ile Phe Asp Val Thr Thr Leu Asn 1 5 10 15 Pro Thr Ile Ala Gly Ala Gly Asp Val Lys Ala Ser Ala Glu Gly Gln 20 25 30

【００８８】配列番号：３５ 配列の長さ：３０ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 他の情報：クラミジア・トラコマティスの血清型Ｇの主
要外膜蛋白質中の第ＩＶ可変領域のアミノ酸配列を含む
配列 配列 Tyr Lys Lys Lys Leu Ala Lys Pro Val Val Asp Ile Thr Thr Leu Asn 1 5 10 15 Pro Thr Ile Ala Gly Cys Gly Ser Val Val Ala Ala Asn Ser 20 25 30

【００８９】配列番号：３６ 配列の長さ：２６ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 他の情報：クラミジア・トラコマティスの血清型Ｋの主
要外膜蛋白質中の第ＩＶ可変領域のアミノ酸配列を含む
配列 配列 Tyr Lys Lys Lys Thr Thr Leu Asn Pro Thr Ile Thr Gly Lys Gly Ala 1 5 10 15 Val Val Ser Ser Gly Ser Asp Asn Glu Leu 20 25

【図面の簡単な説明】

【図１】クラミジア・トラコマティスの血清型Ｌ２の主
要外膜蛋白質（ＭＯＭＰ）上のエピトープ解析を行った
結果を示す図である。

【図２】クラミジア感染症患者検体を用いて、クラミジ
ア・トラコマティス抗体のエピトープ解析を行った結果
を示す図である。

【図３】クラミジア感染症患者検体を用いて、クラミジ
ア・トラコマティス抗体のエピトープ解析を行った結果
を示す図である。

【図４】クラミジア感染症患者検体を用いて、クラミジ
ア・トラコマティス抗体のエピトープ解析を行った結果
を示す図である。

【図５】クラミジア感染症患者検体を用いて、クラミジ
ア・トラコマティス抗体のエピトープ解析を行った結果
を示す図である。

【図６】ラジオイムノアッセイにより、クラミジア感染
症患者血清と健常者血清を用いて抗クラミジア・トラコ
マティス抗体の測定を行った結果を示す図である。

【図７】酵素免疫測定法により、クラミジア・トラコマ
ティス感染症患者血清とクラミジア・ニューモニエ感染
症患者血清および健常者血清を用いて抗クラミジア・ト
ラコマティス抗体の測定を行った結果を示す図である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｇ０１Ｎ 33/571 Ｇ０１Ｎ 33/571 (72)発明者 伊藤 昭夫 茨城県稲敷郡阿見町中央八丁目５番１号 株式会社ユカ・メディアス開発センター内

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 クラミジア・トラコマティスの主要外膜
   蛋白質中の第ＩＶ可変領域の一次構造に由来するアミノ
   酸配列を有するポリペプチドと抗クラミジア・トラコマ
   ティス抗体を含む検体を混合して、該ポリペプチドとク
   ラミジア・トラコマティス抗体との免疫複合体を形成せ
   しめ、該免疫複合体を検出することを特徴とする抗クラ
   ミジア・トラコマティス抗体の測定法
2. 【請求項２】 ポリペプチドが配列番号３〜配列番号３
   ０で示されるアミノ酸配列の少なくともいずれか一種以
   上のアミノ酸配列を含むポリペプチドである請求項１記
   載の測定法
3. 【請求項３】 ポリペプチドが配列番号３１〜配列番号
   ３６で示されるいずれかのアミノ酸配列を含むポリペプ
   チドである請求項１記載の測定法
4. 【請求項４】 配列番号３〜配列番号３０で示されるア
   ミノ酸配列の少なくともいずれか一種以上のアミノ酸配
   列を含むクラミジア抗体に親和性を有するポリペプチド
5. 【請求項５】 配列番号３１〜配列番号３６で示される
   いずれかのアミノ酸配列を含むクラミジア抗体に親和性
   を有するポリペプチド