JPH09235234A - 循環器系疾患予防治療剤 - Google Patents
循環器系疾患予防治療剤Info
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- JPH09235234A JPH09235234A JP8043216A JP4321696A JPH09235234A JP H09235234 A JPH09235234 A JP H09235234A JP 8043216 A JP8043216 A JP 8043216A JP 4321696 A JP4321696 A JP 4321696A JP H09235234 A JPH09235234 A JP H09235234A
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- preventive
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Abstract
(57)【要約】
【解決手段】 アルギン酸オリゴ糖又はその塩を有効成
分として含む循環器系疾患予防治療剤。 【効果】 本発明により、循環器系疾患予防治療剤が提
供される。
分として含む循環器系疾患予防治療剤。 【効果】 本発明により、循環器系疾患予防治療剤が提
供される。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、アルギン酸オリゴ
糖又はその塩を有効成分として含む循環器系疾患予防治
療剤に関する。
糖又はその塩を有効成分として含む循環器系疾患予防治
療剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】コレステロールは、アセチル-CoAよりメ
バロン酸やスクアレンなどの中間体を経て、20数段階の
複雑な反応により生合成される。その複雑な反応におい
てHMG-CoA （ヒドロキシメチルグルタリル-CoA）還元酵
素は律速酵素として知られ、その阻害剤として発見され
たコンパクチンはコレステロール低下剤として実用化さ
れている。そして、ACAT（アシル-CoA：コレステロール
アシルトランスフェラーゼ) も同様にコレステロール代
謝における律速酵素として注目され、その阻害剤の開発
が進められている。そのACAT阻害剤は、腸管に働けば食
事からのコレステロール吸収を阻害し、食事性の高コレ
ステロール血症に効力を発揮するだけでなく、血管壁の
マクロファージに働けば、泡沫化を抑制して動脈硬化の
予防にプラスに作用すると考えられている。すなわち、
ACAT阻害剤は、抗高脂血症剤及び抗動脈硬化剤として一
度に期待される臨床的に非常に意義深い新薬である。そ
の例として、アミド基をもつもの（アミド剤）、尿素骨
格をもつもの（ウレア剤）、イミダゾール基をもつもの
（イミダゾール剤）の３つに大別することができるが、
オリゴ糖の例はない。さらに、ACAT阻害剤の中には組織
（臓器）ターゲッティングという安全性の問題も残され
ている。例えば、ACAT阻害剤の投与により掻痒感、発
疹、頭重、頭痛、めまい、食欲不振、下痢、腹部満腹
感、便秘、悪心・嘔吐、心窩部不快感、筋肉痛、胆石形
成等の副作用を生ずる場合がある。
バロン酸やスクアレンなどの中間体を経て、20数段階の
複雑な反応により生合成される。その複雑な反応におい
てHMG-CoA （ヒドロキシメチルグルタリル-CoA）還元酵
素は律速酵素として知られ、その阻害剤として発見され
たコンパクチンはコレステロール低下剤として実用化さ
れている。そして、ACAT（アシル-CoA：コレステロール
アシルトランスフェラーゼ) も同様にコレステロール代
謝における律速酵素として注目され、その阻害剤の開発
が進められている。そのACAT阻害剤は、腸管に働けば食
事からのコレステロール吸収を阻害し、食事性の高コレ
ステロール血症に効力を発揮するだけでなく、血管壁の
マクロファージに働けば、泡沫化を抑制して動脈硬化の
予防にプラスに作用すると考えられている。すなわち、
ACAT阻害剤は、抗高脂血症剤及び抗動脈硬化剤として一
度に期待される臨床的に非常に意義深い新薬である。そ
の例として、アミド基をもつもの（アミド剤）、尿素骨
格をもつもの（ウレア剤）、イミダゾール基をもつもの
（イミダゾール剤）の３つに大別することができるが、
オリゴ糖の例はない。さらに、ACAT阻害剤の中には組織
（臓器）ターゲッティングという安全性の問題も残され
ている。例えば、ACAT阻害剤の投与により掻痒感、発
疹、頭重、頭痛、めまい、食欲不振、下痢、腹部満腹
感、便秘、悪心・嘔吐、心窩部不快感、筋肉痛、胆石形
成等の副作用を生ずる場合がある。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、アルギン酸
オリゴ糖又はその塩を有効成分として含む循環器系疾患
予防治療剤を提供することを目的とする。
オリゴ糖又はその塩を有効成分として含む循環器系疾患
予防治療剤を提供することを目的とする。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
の基づいて鋭意研究を行った結果、アルギン酸オリゴ糖
又はその塩が循環器系疾患予防治療剤として有用である
ことを見出し、本発明を完成するに至った。すなわち、
本発明は、アルギン酸オリゴ糖又はその塩を有効成分と
して含む循環器系疾患予防治療剤である。
の基づいて鋭意研究を行った結果、アルギン酸オリゴ糖
又はその塩が循環器系疾患予防治療剤として有用である
ことを見出し、本発明を完成するに至った。すなわち、
本発明は、アルギン酸オリゴ糖又はその塩を有効成分と
して含む循環器系疾患予防治療剤である。
【０００５】ここで、アルギン酸オリゴ糖又はその塩と
しては、アルギン酸又はその塩をアルテロモナス属に属
する微生物の菌体又はその処理物で処理したものが挙げ
られ、アルテロモナス属に属する微生物としてはアルテ
ロモナス・エスピーNo.1786が挙げられる。また、アル
ギン酸オリゴ糖又はその塩は、単独又はいずれの組み合
わせにより用いてもよい。
しては、アルギン酸又はその塩をアルテロモナス属に属
する微生物の菌体又はその処理物で処理したものが挙げ
られ、アルテロモナス属に属する微生物としてはアルテ
ロモナス・エスピーNo.1786が挙げられる。また、アル
ギン酸オリゴ糖又はその塩は、単独又はいずれの組み合
わせにより用いてもよい。
【０００６】さらに、アルギン酸オリゴ糖又はその塩と
しては、次式Ｉ：
しては、次式Ｉ：
【０００７】
【化４】
【０００８】（式中、Ｒは水素原子又は金属イオンを表
し、Ｒ’はＧ、Ｍ、Ｇ−Ｇ、Ｍ−Ｇ、Ｍ−Ｍ、Ｇ−Ｇ−
Ｇ、Ｇ−Ｇ−Ｍ、Ｇ−Ｍ−Ｇ、Ｇ−Ｍ−Ｍ、Ｍ−Ｇ−
Ｇ、Ｍ−Ｍ−Ｇ、Ｍ−Ｍ−Ｍ又はＭ−Ｇ−Ｍ（Ｍは次式
II：
し、Ｒ’はＧ、Ｍ、Ｇ−Ｇ、Ｍ−Ｇ、Ｍ−Ｍ、Ｇ−Ｇ−
Ｇ、Ｇ−Ｇ−Ｍ、Ｇ−Ｍ−Ｇ、Ｇ−Ｍ−Ｍ、Ｍ−Ｇ−
Ｇ、Ｍ−Ｍ−Ｇ、Ｍ−Ｍ−Ｍ又はＭ−Ｇ−Ｍ（Ｍは次式
II：
【０００９】
【化５】
【００１０】（Ｒは前記と同様である。）で示されるＤ
−マンニュロン酸を表し、Ｇは次式III:
−マンニュロン酸を表し、Ｇは次式III:
【００１１】
【化６】
【００１２】（Ｒは前記と同様である。）で示されるＬ
−グルロン酸を表し、各単糖間の結合はα−又はβ−
１，４結合である。）を表す。）で示される化合物のう
ちの少なくとも１つが挙げられる。
−グルロン酸を表し、各単糖間の結合はα−又はβ−
１，４結合である。）を表す。）で示される化合物のう
ちの少なくとも１つが挙げられる。
【００１３】「少なくとも１つ」とは、上記各種アルギ
ン酸又はその塩を、前記と同様に単独又はいずれかの組
み合わせにより用いることができることを意味する。例
えば、上記式Ｉにおいて、Ｒ’がＧ又はＭであるものを
単独で用いることはもちろん、Ｒ’がＧ−Ｇ、Ｍ−Ｇ、
Ｇ−Ｇ−Ｍなどの２糖又は３糖の２種以上を組み合わせ
て用いてもよく、さらに、２糖のアルギン酸ナトリウム
オリゴ糖と３糖のアルギン酸カリウムオリゴ糖との組み
合わせなどのように、異なるアルギン酸オリゴ糖の塩を
組み合わせて用いてもよい。
ン酸又はその塩を、前記と同様に単独又はいずれかの組
み合わせにより用いることができることを意味する。例
えば、上記式Ｉにおいて、Ｒ’がＧ又はＭであるものを
単独で用いることはもちろん、Ｒ’がＧ−Ｇ、Ｍ−Ｇ、
Ｇ−Ｇ−Ｍなどの２糖又は３糖の２種以上を組み合わせ
て用いてもよく、さらに、２糖のアルギン酸ナトリウム
オリゴ糖と３糖のアルギン酸カリウムオリゴ糖との組み
合わせなどのように、異なるアルギン酸オリゴ糖の塩を
組み合わせて用いてもよい。
【００１４】循環器系疾患としては、高脂血症（例えば
高コレステロール血症、高中性脂肪血症など）又は動脈
硬化（例えばアテローム性動脈硬化など）が挙げられ
る。以下、本発明を詳細に説明する。
高コレステロール血症、高中性脂肪血症など）又は動脈
硬化（例えばアテローム性動脈硬化など）が挙げられ
る。以下、本発明を詳細に説明する。
【００１５】本発明の循環器系疾患予防治療剤に含まれ
る有効成分であるアルギン酸オリゴ糖又はその塩は、ア
ルギン酸又はその塩に、アルテロモナス属に属する微生
物が生産するアルギン酸又はその塩の分解酵素、即ちア
ルギン酸リアーゼを作用させて得ることができる。アル
ギン酸とは、Ｄ−マンニュロン酸とＬ−グルロン酸を構
成糖とする多糖類の一つであり、その塩としては、例え
ば、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸カリウム又はこ
れらの混合物が挙げられる。また、アルギン酸オリゴ糖
の塩としては、例えば、アルギン酸ナトリウムオリゴ
糖、アルギン酸カリウムオリゴ糖、アルギン酸カルシウ
ムオリゴ糖又はこれらの混合物等が挙げられる。
る有効成分であるアルギン酸オリゴ糖又はその塩は、ア
ルギン酸又はその塩に、アルテロモナス属に属する微生
物が生産するアルギン酸又はその塩の分解酵素、即ちア
ルギン酸リアーゼを作用させて得ることができる。アル
ギン酸とは、Ｄ−マンニュロン酸とＬ−グルロン酸を構
成糖とする多糖類の一つであり、その塩としては、例え
ば、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸カリウム又はこ
れらの混合物が挙げられる。また、アルギン酸オリゴ糖
の塩としては、例えば、アルギン酸ナトリウムオリゴ
糖、アルギン酸カリウムオリゴ糖、アルギン酸カルシウ
ムオリゴ糖又はこれらの混合物等が挙げられる。
【００１６】先ず、本発明の循環器系疾患予防治療剤に
含まれる有効成分であるアルギン酸オリゴ糖又はその塩
を得るために用いられるアルギン酸リアーゼを生産する
微生物について説明する。かかる微生物としては、アル
テロモナス属に属する微生物が挙げられ、アルテロモナ
ス・エスピー No.1786を例示することができる。
含まれる有効成分であるアルギン酸オリゴ糖又はその塩
を得るために用いられるアルギン酸リアーゼを生産する
微生物について説明する。かかる微生物としては、アル
テロモナス属に属する微生物が挙げられ、アルテロモナ
ス・エスピー No.1786を例示することができる。
【００１７】アルテロモナス・エスピー No.1786は、魚
介類の腸及びその内容物よりアルギン酸ナトリウムを唯
一の炭素源としてスクリーニングを実施した結果、カブ
トガニの腸より分離されたものであり、その形態学的性
質及び生理学的性質は下記の表１に示す通りである。
介類の腸及びその内容物よりアルギン酸ナトリウムを唯
一の炭素源としてスクリーニングを実施した結果、カブ
トガニの腸より分離されたものであり、その形態学的性
質及び生理学的性質は下記の表１に示す通りである。
【００１８】
【表１】
【００１９】上記表１に示す菌株の性質に基づいて清水
らの方法〔海洋微生物研究法、学会出版センター、 228
〜239 (1985)参照〕に従って同定を試みた結果、上記微
生物(本菌株) は、アルテロモナス属に属することが判
明した。尚、本菌株は、通商産業省工業技術院生命工学
工業技術研究所に、FERM P-11685として寄託されてい
る。
らの方法〔海洋微生物研究法、学会出版センター、 228
〜239 (1985)参照〕に従って同定を試みた結果、上記微
生物(本菌株) は、アルテロモナス属に属することが判
明した。尚、本菌株は、通商産業省工業技術院生命工学
工業技術研究所に、FERM P-11685として寄託されてい
る。
【００２０】上記表１に示す性質を有する菌株を培養
し、得られた培養物から通常の精製手法によってアルギ
ン酸リアーゼを分離精製する。培地としては、例えば、
アルギン酸ナトリウム（1.00％）、硫酸ナトリウム（1.
00％）、塩化カリウム（0.08％）、硫酸マグネシウム
（７水和物）（1.24％）、リン酸水素二カリウム（３水
和物）（0.01％）、塩化アンモニウム（0.10％）、クエ
ン酸鉄アンモニウム（0.01％）及び塩化カルシウム（0.
15％）を含む培地組成が挙げられる。
し、得られた培養物から通常の精製手法によってアルギ
ン酸リアーゼを分離精製する。培地としては、例えば、
アルギン酸ナトリウム（1.00％）、硫酸ナトリウム（1.
00％）、塩化カリウム（0.08％）、硫酸マグネシウム
（７水和物）（1.24％）、リン酸水素二カリウム（３水
和物）（0.01％）、塩化アンモニウム（0.10％）、クエ
ン酸鉄アンモニウム（0.01％）及び塩化カルシウム（0.
15％）を含む培地組成が挙げられる。
【００２１】培養は、例えば、凍結乾燥菌体アルテロモ
ナス・エスピー No.1786株を２回前培養 (各々25℃、２
日) 後、本培養 (25℃、１日) を行う。このようにして
上記微生物を培養することによって、アルギン酸リアー
ゼが蓄積された培養上清又は微生物を含む培養物が得ら
れる。次に、該培養物を材料にして、蛋白質の分離、精
製に用いられる方法によりアルギン酸リアーゼを得るこ
とができる。例えば、上記培養液から分画分子量500,00
0 限外濾過膜 (ロミコン社製) により菌体を取り除いて
粗アルギン酸リアーゼ溶液とするほか、更に、該粗アル
ギン酸リアーゼ溶液について、塩析法、遠心分離法、各
種クロマトグラフィー、電気泳動等を適当に組み合わせ
て精製を行ってもよい。各種クロマトグラフィーとして
は、疎水、ゲルろ過、イオン交換、逆相、アフィニティ
ークロマトグラフィー等が挙げられる。また、精製品の
純度及びその分子量の確認のため、ＳＤＳ（ラウリル硫
酸ナトリウム）ポリアクリルアミドゲル電気泳動法やゲ
ル濾過法等を用いることもできる。
ナス・エスピー No.1786株を２回前培養 (各々25℃、２
日) 後、本培養 (25℃、１日) を行う。このようにして
上記微生物を培養することによって、アルギン酸リアー
ゼが蓄積された培養上清又は微生物を含む培養物が得ら
れる。次に、該培養物を材料にして、蛋白質の分離、精
製に用いられる方法によりアルギン酸リアーゼを得るこ
とができる。例えば、上記培養液から分画分子量500,00
0 限外濾過膜 (ロミコン社製) により菌体を取り除いて
粗アルギン酸リアーゼ溶液とするほか、更に、該粗アル
ギン酸リアーゼ溶液について、塩析法、遠心分離法、各
種クロマトグラフィー、電気泳動等を適当に組み合わせ
て精製を行ってもよい。各種クロマトグラフィーとして
は、疎水、ゲルろ過、イオン交換、逆相、アフィニティ
ークロマトグラフィー等が挙げられる。また、精製品の
純度及びその分子量の確認のため、ＳＤＳ（ラウリル硫
酸ナトリウム）ポリアクリルアミドゲル電気泳動法やゲ
ル濾過法等を用いることもできる。
【００２２】このようにして得られたアルギン酸リアー
ゼの酵素的性質は次の通りである。 作用：アルギン酸又はその塩を基質として上記微生物
の生産するアルギン酸リアーゼを反応させた時、反応生
成物であるアルギン酸オリゴ糖又はその塩の二重結合に
由来する特異吸収波長である230nm における吸光度の増
加、及び生じるオリゴ糖による還元力の増加が確認され
た。
ゼの酵素的性質は次の通りである。 作用：アルギン酸又はその塩を基質として上記微生物
の生産するアルギン酸リアーゼを反応させた時、反応生
成物であるアルギン酸オリゴ糖又はその塩の二重結合に
由来する特異吸収波長である230nm における吸光度の増
加、及び生じるオリゴ糖による還元力の増加が確認され
た。
【００２３】至適ｐＨ：上記微生物の生産するアルギ
ン酸リアーゼは、ｐＨ7.０〜7.５の範囲で相対活性量が
高く、相対活性量が最大になるｐＨ7.０が至適ｐＨであ
る。 至適温度及び熱安定性：上記微生物の生産するアルギ
ン酸リアーゼは、45〜55℃の範囲で高く、相対活性量が
最大になる50℃が至適温度であった。また、室内での濃
縮を行っても失活しなかった。
ン酸リアーゼは、ｐＨ7.０〜7.５の範囲で相対活性量が
高く、相対活性量が最大になるｐＨ7.０が至適ｐＨであ
る。 至適温度及び熱安定性：上記微生物の生産するアルギ
ン酸リアーゼは、45〜55℃の範囲で高く、相対活性量が
最大になる50℃が至適温度であった。また、室内での濃
縮を行っても失活しなかった。
【００２４】酵素活性：下記組成の反応液を用い、ア
ルギン酸ナトリウムとアルギン酸リアーゼを50℃にて10
分間反応させ、生成したオリゴ糖量をネルソン・ソモギ
ー法により測定することにより、アルギン酸リアーゼの
酵素活性を測定できる。この酵素活性は、１分間に１μ
moleのマンニュロン酸に相当するアルギン酸ナトリウム
オリゴ糖を生成する酵素量を１単位として示す。酵素活
性測定には、アルギン酸カリウムを用いても良い。
ルギン酸ナトリウムとアルギン酸リアーゼを50℃にて10
分間反応させ、生成したオリゴ糖量をネルソン・ソモギ
ー法により測定することにより、アルギン酸リアーゼの
酵素活性を測定できる。この酵素活性は、１分間に１μ
moleのマンニュロン酸に相当するアルギン酸ナトリウム
オリゴ糖を生成する酵素量を１単位として示す。酵素活
性測定には、アルギン酸カリウムを用いても良い。
【００２５】 （反応液の組成) ・0.５％アルギン酸ナトリウム（和光純薬製) を含む0.05Ｍリン酸ナトリウム緩 衝液 (ｐＨ7.０) ・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・0.45ml ・酵素液・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・0.05ml 尚、本発明のアルギン酸オリゴ糖又はその塩を製造する
ためには、上記本菌株を通常の変異手段を適用して得ら
れる変異株であってアルギン酸リアーゼ産生能を有する
菌株を培養して得られるアルギン酸リアーゼも使用する
ことができる。次に、原料のアルギン酸又はその塩に、
前記アルギン酸リアーゼを反応させてアルギン酸オリゴ
糖又はその塩を得る。
ためには、上記本菌株を通常の変異手段を適用して得ら
れる変異株であってアルギン酸リアーゼ産生能を有する
菌株を培養して得られるアルギン酸リアーゼも使用する
ことができる。次に、原料のアルギン酸又はその塩に、
前記アルギン酸リアーゼを反応させてアルギン酸オリゴ
糖又はその塩を得る。
【００２６】尚、この場合、アルギン酸又はその塩とア
ルギン酸リアーゼとの反応温度は45〜55℃、反応時のｐ
Ｈが7.０〜7.５の条件で行うのが好ましく、50℃、ｐＨ
7.０の条件で行うのが更に好ましい。本発明のアルギン
酸オリゴ糖又はその塩としては、末端が４，５−不飽和
ウロン酸であり、Ｄ−マンニュロン酸及びＬ−グルロン
酸を構成糖とするオリゴ糖であり、例えば、次式Ｉ：
ルギン酸リアーゼとの反応温度は45〜55℃、反応時のｐ
Ｈが7.０〜7.５の条件で行うのが好ましく、50℃、ｐＨ
7.０の条件で行うのが更に好ましい。本発明のアルギン
酸オリゴ糖又はその塩としては、末端が４，５−不飽和
ウロン酸であり、Ｄ−マンニュロン酸及びＬ−グルロン
酸を構成糖とするオリゴ糖であり、例えば、次式Ｉ：
【００２７】
【化７】
【００２８】（式中、Ｒは水素原子又は金属イオンを表
し、Ｒ’はＧ、Ｍ、Ｇ−Ｇ、Ｍ−Ｇ、Ｍ−Ｍ、Ｇ−Ｇ−
Ｇ、Ｇ−Ｇ−Ｍ、Ｇ−Ｍ−Ｇ、Ｇ−Ｍ−Ｍ、Ｍ−Ｇ−
Ｇ、Ｍ−Ｍ−Ｇ、Ｍ−Ｍ−Ｍ又はＭ−Ｇ−Ｍ（Ｍは次式
II：
し、Ｒ’はＧ、Ｍ、Ｇ−Ｇ、Ｍ−Ｇ、Ｍ−Ｍ、Ｇ−Ｇ−
Ｇ、Ｇ−Ｇ−Ｍ、Ｇ−Ｍ−Ｇ、Ｇ−Ｍ−Ｍ、Ｍ−Ｇ−
Ｇ、Ｍ−Ｍ−Ｇ、Ｍ−Ｍ−Ｍ又はＭ−Ｇ−Ｍ（Ｍは次式
II：
【００２９】
【化８】
【００３０】（Ｒは前記と同様である。）で示されるＤ
−マンニュロン酸を表し、Ｇは次式ＩＩＩ：
−マンニュロン酸を表し、Ｇは次式ＩＩＩ：
【００３１】
【化９】
【００３２】（Ｒは前記と同様である。）で示されるＬ
−グルロン酸を表し、各単糖間の結合はα−又はβ−
１，４結合である。）を表す。）で示される化合物のう
ちの少なくとも１つが挙げられる。
−グルロン酸を表し、各単糖間の結合はα−又はβ−
１，４結合である。）を表す。）で示される化合物のう
ちの少なくとも１つが挙げられる。
【００３３】また、前記式（Ｉ）、(II)及び(III) にお
いて、Ｒは水素原子又は種々の金属イオンを表す。金属
イオンとしては、例えば、Na、K 、Ca1/2 、Mg1/2 、Cu
1/2 、Zn1/2 、Fe1/2 、Fe1/3 などが挙げられるが、こ
れらに限定されない。
いて、Ｒは水素原子又は種々の金属イオンを表す。金属
イオンとしては、例えば、Na、K 、Ca1/2 、Mg1/2 、Cu
1/2 、Zn1/2 、Fe1/2 、Fe1/3 などが挙げられるが、こ
れらに限定されない。
【００３４】以上のようにして得られるアルギン酸オリ
ゴ糖又はその塩の活性成分は、そのまま本発明の循環器
系疾患予防治療剤として用いることができ、凍結乾燥、
噴霧乾燥、熱風乾燥等の方法で乾燥しておくことができ
る。
ゴ糖又はその塩の活性成分は、そのまま本発明の循環器
系疾患予防治療剤として用いることができ、凍結乾燥、
噴霧乾燥、熱風乾燥等の方法で乾燥しておくことができ
る。
【００３５】本発明の循環器系疾患予防治療剤は、高脂
血症又は動脈硬化に対する予防及び治療を目的として用
いることができる。また、投与する方法は経口により行
い、その投与形態としては、錠剤、カプセル剤、散剤、
顆粒剤、細粒剤、シロップ剤、乳剤、懸濁剤等が挙げら
れる。また、その投与量は動物か人間かによって、ま
た、年齢及び健康状態により異なり、広範囲に変えるこ
とができる。この場合、本発明の循環器系疾患予防治療
剤の有効量と適切な希釈剤及び薬理学的に使用し得る担
体との組成物として投与される有効量は、配合量として
全量の0.001 〜20重量％、好ましくは0.01〜20重量％で
あり、１日１回から数回に分けて２日以上投与される。
血症又は動脈硬化に対する予防及び治療を目的として用
いることができる。また、投与する方法は経口により行
い、その投与形態としては、錠剤、カプセル剤、散剤、
顆粒剤、細粒剤、シロップ剤、乳剤、懸濁剤等が挙げら
れる。また、その投与量は動物か人間かによって、ま
た、年齢及び健康状態により異なり、広範囲に変えるこ
とができる。この場合、本発明の循環器系疾患予防治療
剤の有効量と適切な希釈剤及び薬理学的に使用し得る担
体との組成物として投与される有効量は、配合量として
全量の0.001 〜20重量％、好ましくは0.01〜20重量％で
あり、１日１回から数回に分けて２日以上投与される。
【００３６】本発明の循環器系疾患予防治療剤を経口投
与する場合、剤形により乳糖や澱粉等の賦形剤を含有さ
せることもでき、他の薬剤（ビタミン剤）との併用も可
能である。本発明において、アルギン酸オリゴ糖又はそ
の塩が循環器系疾患予防治療剤として有効であることを
裏付ける薬理試験、及び毒性試験を以下に述べる。
与する場合、剤形により乳糖や澱粉等の賦形剤を含有さ
せることもでき、他の薬剤（ビタミン剤）との併用も可
能である。本発明において、アルギン酸オリゴ糖又はそ
の塩が循環器系疾患予防治療剤として有効であることを
裏付ける薬理試験、及び毒性試験を以下に述べる。
【００３７】〔試験例１〕循環器系疾患予防治療試験 動物（ラット）を用い、本発明の循環器系疾患予防治療
剤としての効果を調べるため、以下の試験を行った。自
然発症高血圧ラット（ＳＨＲ系，６週齢）を試験動物と
して用いた。オリゴ糖（３％のアルギン酸カリウムオリ
ゴ糖）を餌中に加えて投与した群（オリゴ糖群，６匹）
とオリゴ糖を加えない群（対照群，６匹）に分けて飼育
した。５週間後、それぞれのラットの肝臓を摘出し、AC
AT活性を測定した。
剤としての効果を調べるため、以下の試験を行った。自
然発症高血圧ラット（ＳＨＲ系，６週齢）を試験動物と
して用いた。オリゴ糖（３％のアルギン酸カリウムオリ
ゴ糖）を餌中に加えて投与した群（オリゴ糖群，６匹）
とオリゴ糖を加えない群（対照群，６匹）に分けて飼育
した。５週間後、それぞれのラットの肝臓を摘出し、AC
AT活性を測定した。
【００３８】ACAT活性は、肝臓ミクロソーム分画におい
て、Oleoyl-coenzyme A を基質として添加し、酵素反応
後生成したOleoyl cholesterolをHPLCで分離・定量する
ことにより求めた。その結果、対照群の活性が210.7 ±
17.8pmol/min/mg protein であるのに対し、オリゴ糖群
が133.3 ±12.4pmol/min/mg protein となった。この値
の間は、統計処理の結果、p ＜0.01で有意な差として認
められた。
て、Oleoyl-coenzyme A を基質として添加し、酵素反応
後生成したOleoyl cholesterolをHPLCで分離・定量する
ことにより求めた。その結果、対照群の活性が210.7 ±
17.8pmol/min/mg protein であるのに対し、オリゴ糖群
が133.3 ±12.4pmol/min/mg protein となった。この値
の間は、統計処理の結果、p ＜0.01で有意な差として認
められた。
【００３９】この結果により、アルギン酸オリゴ糖にAC
AT阻害作用が認められた。従って、本発明の循環器系疾
患予防治療剤は、高脂血症又は動脈硬化の予防治療に有
効であると考えられる。
AT阻害作用が認められた。従って、本発明の循環器系疾
患予防治療剤は、高脂血症又は動脈硬化の予防治療に有
効であると考えられる。
【００４０】〔試験例２〕毒性試験 アルギン酸の分解物を用いてマウスに対する急性毒性試
験を行った。OECD化学物質毒性試験指針（1987）に準拠
したマウスにおける急性経口毒性試験において、５週齢
のＩＣＲ系雌雄マウスを使用し（１群10匹）、マウス胃
ゾンデを用いて強制単回投与した。投与日では投与１時
間以内及び５時間目おける死亡例及び死亡率を記録し、
更に投与後１〜14日目における死亡例及び死亡率を記録
した。なお、アルギン酸の分解物を投与しない群を対照
群とした。
験を行った。OECD化学物質毒性試験指針（1987）に準拠
したマウスにおける急性経口毒性試験において、５週齢
のＩＣＲ系雌雄マウスを使用し（１群10匹）、マウス胃
ゾンデを用いて強制単回投与した。投与日では投与１時
間以内及び５時間目おける死亡例及び死亡率を記録し、
更に投与後１〜14日目における死亡例及び死亡率を記録
した。なお、アルギン酸の分解物を投与しない群を対照
群とした。
【００４１】結果を表２（雄）及び表３（雌）に示す。
表２及び表３より、アルギン酸の分解物の単回投与によ
る致死量は雌雄ともに2,000mg/kg以上であるものと認め
られた。
表２及び表３より、アルギン酸の分解物の単回投与によ
る致死量は雌雄ともに2,000mg/kg以上であるものと認め
られた。
【００４２】
【表２】
【００４３】
【表３】
【００４４】
【実施例】以下、本発明を実施例によりさらに具体的に
説明する。但し、本発明は、これら実施例により限定さ
れるものではない。
説明する。但し、本発明は、これら実施例により限定さ
れるものではない。
【００４５】〔実施例１〕 アルギン酸塩オリゴ糖の調
製 (1) アルギン酸リアーゼの調製 (培地組成) ・アルギン酸ナトリウム・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・1.00％ ・硫酸ナトリウム・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・1.00％ ・塩化カリウム・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・0.08％ ・硫酸マグネシウム（７水和物）・・・・・・・・・・・・・・・・1.24％ ・リン酸水素二カリウム（３水和物）・・・・・・・・・・・・・・0.01％ ・塩化アンモニウム・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・0.10％ ・クエン酸鉄アンモニウム・・・・・・・・・・・・・・・・・・・0.01％ ・塩化カルシウム・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・0.15％ 上記組成の培地を用い、凍結乾燥菌体アルテロモナス・
エスピー No.1786株を２回前培養 (25℃、２日) 後、本
培養 (25℃、１日) を行った。その結果、酵素活性が培
養液１ml当たり、0.90単位であるアルギン酸リアーゼ培
養液が生産された。上記培養液から分画分子量500,000
限外濾過膜 (ロミコン社製) により菌体を取り除いて粗
アルギン酸リアーゼ溶液とした。
製 (1) アルギン酸リアーゼの調製 (培地組成) ・アルギン酸ナトリウム・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・1.00％ ・硫酸ナトリウム・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・1.00％ ・塩化カリウム・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・0.08％ ・硫酸マグネシウム（７水和物）・・・・・・・・・・・・・・・・1.24％ ・リン酸水素二カリウム（３水和物）・・・・・・・・・・・・・・0.01％ ・塩化アンモニウム・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・0.10％ ・クエン酸鉄アンモニウム・・・・・・・・・・・・・・・・・・・0.01％ ・塩化カルシウム・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・0.15％ 上記組成の培地を用い、凍結乾燥菌体アルテロモナス・
エスピー No.1786株を２回前培養 (25℃、２日) 後、本
培養 (25℃、１日) を行った。その結果、酵素活性が培
養液１ml当たり、0.90単位であるアルギン酸リアーゼ培
養液が生産された。上記培養液から分画分子量500,000
限外濾過膜 (ロミコン社製) により菌体を取り除いて粗
アルギン酸リアーゼ溶液とした。
【００４６】(2) アルギン酸ナトリウムオリゴ糖の製造 アルギン酸ナトリウム (10.0kg) を90L の脱塩水に溶解
後、上記(1) で得られた粗アルギン酸リアーゼ溶液 (5
0,000U)を加え、40℃で６時間攪拌しながら反応させ
た。反応液を除蛋白、脱塩後、凍結乾燥してアルギン酸
ナトリウムオリゴ糖粉末を4.２kg得た。
後、上記(1) で得られた粗アルギン酸リアーゼ溶液 (5
0,000U)を加え、40℃で６時間攪拌しながら反応させ
た。反応液を除蛋白、脱塩後、凍結乾燥してアルギン酸
ナトリウムオリゴ糖粉末を4.２kg得た。
【００４７】(3) アルギン酸カリウムオリゴ糖の製造 アルギン酸カリウム (10.0kg) を90L の脱塩水に溶解
後、上記(1) で得られた粗アルギン酸リアーゼ溶液 (5
0,000U)を加え、40℃で６時間攪拌しながら反応させ
た。反応液を除蛋白、脱塩後、凍結乾燥してアルギン酸
カリウムオリゴ糖粉末を4.２kg得た。
後、上記(1) で得られた粗アルギン酸リアーゼ溶液 (5
0,000U)を加え、40℃で６時間攪拌しながら反応させ
た。反応液を除蛋白、脱塩後、凍結乾燥してアルギン酸
カリウムオリゴ糖粉末を4.２kg得た。
【００４８】尚、同様にしてアルギン酸カリウムとアル
ギン酸ナトリウムとの混合物を用いれば、アルギン酸ナ
トリウムオリゴ糖とアルギン酸カリウムオリゴ糖との混
合物が得られる。
ギン酸ナトリウムとの混合物を用いれば、アルギン酸ナ
トリウムオリゴ糖とアルギン酸カリウムオリゴ糖との混
合物が得られる。
【００４９】(4) アルギン酸カルシウムオリゴ糖の製造 (2)及び(3)で得られたアルギン酸ナトリウムオリゴ糖及
びアルギン酸カリウムオリゴ糖を、酢酸カルシウムをは
じめとする各種の水溶液のカルシウム塩と一緒に電気透
析装置 (旭化成工業 (株) 製、商品名、マイクロアシラ
イザー) で処理した。その結果、アルギン酸ナトリウム
オリゴ糖（4.2 kg) からアルギン酸カルシウムオリゴ糖
が3.3kg得られた。
びアルギン酸カリウムオリゴ糖を、酢酸カルシウムをは
じめとする各種の水溶液のカルシウム塩と一緒に電気透
析装置 (旭化成工業 (株) 製、商品名、マイクロアシラ
イザー) で処理した。その結果、アルギン酸ナトリウム
オリゴ糖（4.2 kg) からアルギン酸カルシウムオリゴ糖
が3.3kg得られた。
【００５０】〔参考例１〕本参考例は、本発明のアルギ
ン酸ナトリウムオリゴ糖の重合度の分析例を示すもので
ある。重合度の決定は、マス分析及びＮＭＲ分析により
行った。マス分析には、ジャスコインタナショナル
（株）製の液体クロマトグラフ質量分析装置を用い、Ｎ
ＭＲ分析には日本電子（株）製を用いた。
ン酸ナトリウムオリゴ糖の重合度の分析例を示すもので
ある。重合度の決定は、マス分析及びＮＭＲ分析により
行った。マス分析には、ジャスコインタナショナル
（株）製の液体クロマトグラフ質量分析装置を用い、Ｎ
ＭＲ分析には日本電子（株）製を用いた。
【００５１】次に、実施例１で調製したアルギン酸ナト
リウムオリゴ糖をDEAE GLASS（ナカライテスク社製）を
用いたNaClによる０〜0.25M グラジエント溶出による高
速液体クロマトグラフィー（HPLC) に供し、フラクショ
ンコレクターで分画した。この溶出パターンを図１に示
す。230nm に吸収のある画分１〜８（以下、それぞれ
「Ｐ１」、「Ｐ２」、・・・「Ｐ８」とする）を回収
し、それぞれの画分を同じ条件で再クロマトすると、表
４記載のようなオリゴ糖（Ｐ１〜Ｐ６、Ｐ７−１〜Ｐ７
−６及びＰ８の画分）が得られた。
リウムオリゴ糖をDEAE GLASS（ナカライテスク社製）を
用いたNaClによる０〜0.25M グラジエント溶出による高
速液体クロマトグラフィー（HPLC) に供し、フラクショ
ンコレクターで分画した。この溶出パターンを図１に示
す。230nm に吸収のある画分１〜８（以下、それぞれ
「Ｐ１」、「Ｐ２」、・・・「Ｐ８」とする）を回収
し、それぞれの画分を同じ条件で再クロマトすると、表
４記載のようなオリゴ糖（Ｐ１〜Ｐ６、Ｐ７−１〜Ｐ７
−６及びＰ８の画分）が得られた。
【００５２】なお、表４において「Ｐ７−１」〜「Ｐ７
−６」とは、Ｐ７が６画分に分画されたものを意味す
る。これらのオリゴ糖をマス分析に供した結果、表４に
示すようなｍ／ｚのピークが検出され、そのｍ／ｚ値よ
りそれぞれ重合度を推定した。さらに、ＮＭＲ分析を行
ったところ、図２に示すように本発明のアルギン酸ナト
リウムオリゴ糖の構造が示された。図２中、「△」は
４，５−不飽和ウロン酸を表し、Ｍ及びＧは、それぞれ
式(II)で示されるＤ−マンニュロン酸、式(III) で示さ
れるＬ−グルロン酸を表す。また、本参考例では、式
(I) 、(II)及び(III) 中、Ｒがナトリウムである化合物
を用いた。なお、アルギン酸カリウムオリゴ糖及びアル
ギン酸カルシウムオリゴ糖の構造も同一の構造であっ
た。また、各単糖間の結合は、α−又はβ−１，４結合
である。
−６」とは、Ｐ７が６画分に分画されたものを意味す
る。これらのオリゴ糖をマス分析に供した結果、表４に
示すようなｍ／ｚのピークが検出され、そのｍ／ｚ値よ
りそれぞれ重合度を推定した。さらに、ＮＭＲ分析を行
ったところ、図２に示すように本発明のアルギン酸ナト
リウムオリゴ糖の構造が示された。図２中、「△」は
４，５−不飽和ウロン酸を表し、Ｍ及びＧは、それぞれ
式(II)で示されるＤ−マンニュロン酸、式(III) で示さ
れるＬ−グルロン酸を表す。また、本参考例では、式
(I) 、(II)及び(III) 中、Ｒがナトリウムである化合物
を用いた。なお、アルギン酸カリウムオリゴ糖及びアル
ギン酸カルシウムオリゴ糖の構造も同一の構造であっ
た。また、各単糖間の結合は、α−又はβ−１，４結合
である。
【００５３】
【表４】
【００５４】
【発明の効果】本発明により、循環器系疾患予防治療剤
が提供される。本発明の循環器系疾患予防治療剤は、安
全でかつ安定である。
が提供される。本発明の循環器系疾患予防治療剤は、安
全でかつ安定である。
【図１】アルギン酸ナトリウムオリゴ糖のHPLCの結果を
示す図である。
示す図である。
【図２】アルギン酸ナトリウムオリゴ糖の構造を示す図
である。
である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 // Ａ６１Ｋ 35/74 Ａ６１Ｋ 35/74 Ｇ Ｃ１２Ｐ 19/00 Ｃ１２Ｐ 19/00 19/12 19/12 (72)発明者 樋浦 望 茨城県つくば市和台16−２ マルハ株式会 社中央研究所内 (72)発明者 大栗 智昭 茨城県つくば市和台16−２ マルハ株式会 社中央研究所内
Claims (6)
- 【請求項１】 アルギン酸オリゴ糖又はその塩を有効成
分として含む循環器系疾患予防治療剤。 - 【請求項２】 アルギン酸オリゴ糖又はその塩が、アル
ギン酸又はその塩をアルテロモナス属に属する微生物の
菌体又はその処理物で処理したものである請求項１記載
の循環器系疾患予防治療剤。 - 【請求項３】 アルテロモナス属に属する微生物がアル
テロモナス・エスピーNo.1786 である請求項２記載の循
環器系疾患予防治療剤。 - 【請求項４】 アルギン酸オリゴ糖又はその塩が、単独
又はいずれかの組み合わせにより用いられるものである
請求項１〜３のいずれか１項に記載の循環器系疾患予防
治療剤。 - 【請求項５】 アルギン酸オリゴ糖又はその塩が、次式
Ｉ： 【化１】 （式中、Ｒは水素原子又は金属イオンを表し、Ｒ’は
Ｇ、Ｍ、Ｇ−Ｇ、Ｍ−Ｇ、Ｍ−Ｍ、Ｇ−Ｇ−Ｇ、Ｇ−Ｇ
−Ｍ、Ｇ−Ｍ−Ｇ、Ｇ−Ｍ−Ｍ、Ｍ−Ｇ−Ｇ、Ｍ−Ｍ−
Ｇ、Ｍ−Ｍ−Ｍ又はＭ−Ｇ−Ｍ（Ｍは次式II： 【化２】 （Ｒは前記と同様である。）で示されるＤ−マンニュロ
ン酸を表し、Ｇは次式III: 【化３】 （Ｒは前記と同様である。）で示されるＬ−グルロン酸
を表し、各単糖間の結合はα−又はβ−１，４結合であ
る。）を表す。）で示される化合物のうちの少なくとも
１つである請求項１〜３のいずれか１項に記載の循環器
系疾患予防治療剤。 - 【請求項６】 循環器系疾患が高脂血症又は動脈硬化で
ある請求項１〜５のいずれか１項に記載の循環器系疾患
予防治療剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP04321696A JP3878239B2 (ja) | 1996-02-29 | 1996-02-29 | 循環器系疾患予防治療剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP04321696A JP3878239B2 (ja) | 1996-02-29 | 1996-02-29 | 循環器系疾患予防治療剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09235234A true JPH09235234A (ja) | 1997-09-09 |
| JP3878239B2 JP3878239B2 (ja) | 2007-02-07 |
Family
ID=12657729
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP04321696A Expired - Fee Related JP3878239B2 (ja) | 1996-02-29 | 1996-02-29 | 循環器系疾患予防治療剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3878239B2 (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6274566B1 (en) * | 1999-02-23 | 2001-08-14 | Econugenics, Inc. | Methods for treating mammals with modified alginates and pectins |
| US6462029B1 (en) | 1999-02-23 | 2002-10-08 | Econugenics | Compositions and methods for treating mammals with modified alginates and modified pectins |
| JP2009126856A (ja) * | 2007-11-28 | 2009-06-11 | Fancl Corp | 血中中性脂肪上昇抑制剤 |
| EP2431043A1 (en) | 2007-05-23 | 2012-03-21 | Amcol International Corporation | Cholesterol-interacting layered phyllosilicates for suppressing gastrointestinal cholesterol absorption |
| EP2441458A1 (en) | 2010-08-31 | 2012-04-18 | Maruha Nichiro Foods, Inc. | A vascular protecting agent having salt-absorption inhibitory activity |
-
1996
- 1996-02-29 JP JP04321696A patent/JP3878239B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6274566B1 (en) * | 1999-02-23 | 2001-08-14 | Econugenics, Inc. | Methods for treating mammals with modified alginates and pectins |
| US6462029B1 (en) | 1999-02-23 | 2002-10-08 | Econugenics | Compositions and methods for treating mammals with modified alginates and modified pectins |
| US7026302B2 (en) | 1999-02-23 | 2006-04-11 | Better Health Publishing | Compositions and methods for treating mammals with modified alginates and modified pectins |
| US7452871B2 (en) | 1999-02-23 | 2008-11-18 | Econugenics, Inc. | Compositions and methods for treating mammals with modified alginates and modified pectins |
| EP2431043A1 (en) | 2007-05-23 | 2012-03-21 | Amcol International Corporation | Cholesterol-interacting layered phyllosilicates for suppressing gastrointestinal cholesterol absorption |
| US8481084B2 (en) | 2007-05-23 | 2013-07-09 | Amcol International Corporation | Cholesterol-interacting layered phyllosilicates and methods of reducing hypercholesteremia in a mammal |
| US8821937B2 (en) | 2007-05-23 | 2014-09-02 | Amcol International Corporation | Methods of treating cardiovascular disorders associated with atherosclerosis |
| JP2009126856A (ja) * | 2007-11-28 | 2009-06-11 | Fancl Corp | 血中中性脂肪上昇抑制剤 |
| EP2441458A1 (en) | 2010-08-31 | 2012-04-18 | Maruha Nichiro Foods, Inc. | A vascular protecting agent having salt-absorption inhibitory activity |
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3878239B2 (ja) | 2007-02-07 |
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