JPH0827010A - 制癌免疫療法剤 - Google Patents

制癌免疫療法剤

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JPH0827010A
JPH0827010A JP6188756A JP18875694A JPH0827010A JP H0827010 A JPH0827010 A JP H0827010A JP 6188756 A JP6188756 A JP 6188756A JP 18875694 A JP18875694 A JP 18875694A JP H0827010 A JPH0827010 A JP H0827010A
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JP
Japan
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enterococcus faecalis
docosahexaenoic acid
carcinostatic
fish
bacterium enterococcus
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JP6188756A
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Tetsuo Yamamoto
哲郎 山本
Tsunaichi Iwatani
綱一 岩谷
Kazutomo Ohashi
一智 大橋
Kazuyoshi Yazawa
一良 矢澤
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NICHINICHI SEIYAKU KK
Sagami Chemical Research Institute
Original Assignee
NICHINICHI SEIYAKU KK
Sagami Chemical Research Institute
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Abstract

(57)【要約】 【構成】 エンテロコッカス・フェカリス属に属する微
生物の菌体又はその処理物とドコサヘキサエン酸とを有
効成分として含む、制癌免疫療法剤 【効果】 本発明の制癌免疫療法剤に使用されるエンテ
ロコッカス属菌は、腸内乳酸球菌であり、またドコサヘ
キサエン酸も、食品中に含有されている成分であるた
め、毒性及び副作用がなく、乳酸菌単独で用いるよりも
増強された制癌活性を有する。従って、本発明の制癌療
法剤は、乳癌、大腸癌等の種々の癌の治療薬及び改善薬
として期待される。

Description

【発明の詳細な説明】
【0001】
【産業上の利用分野】本発明は強い制癌作用を示す、制
癌免疫療法剤に関するものである。
【0002】
【従来の技術】癌の治療において、免疫療法は重要な部
分を占めている。制癌免疫療法剤として、これまでにピ
シバニール、クレスチン、レンチナン等が知られている
が、それらの活性は未だ満足すべきものではない。
【0003】最近、乳酸菌の一種である、エンテロコッ
カス・フェカリス(Enterococcusfaecalis)菌(腸球
菌)に経口投与で制癌作用のあることが見いだされ、こ
のものは免疫力を高めることにより制癌作用を発現する
ことが明らかにされた(大橋ら、薬学雑誌,113,396-399
(1993))。しかしながら、この菌と他の薬剤もしくは他
の食品との併用効果は検討されていなかった。
【0004】一方、ドコサヘキサエン酸(DHA)は、
脳や網膜等の興奮性膜に多く含まれているn−3系の不
飽和脂肪酸であり、アラキドン酸カスケードを阻害する
作用を有していることが知られている。ドコサヘキサエ
ン酸には記憶、学習能の改善、視力低下抑制、発癌抑制
作用、免疫抑制作用等の薬理活性があるとされている。
また、DHAを多く含む魚油にもマクロファージ活性の
抑制(Dustin L. B. et al., J. Immunol., 144,4888-4
897(1990))LTB4、LTC4産生を抑制する(Lokesh
B. R. et al., Biochem. Biophys. Acta, 958,99-107(1
988))などの報告があり、臓器移植においてCyAと併
用すると免疫抑制効果が増強されるとの報告(Kelley
V. E. et al., Transplantation, 48,98-102(1989))も
ある。また、自己免疫疾患である、慢性関節リウマチや
乾癬の患者にこの魚油を投与して効果が上がったという
報告(特開平1−66118号公報、特開平3−900
22号公報)、ベーチェット病患者への投与では皮膚症
状が改善したという報告(橋本喬司他、厚生省特定疾患
ベーチェット病調査研究班、平成3年度研究業績,185-
187)がある。しかしながら、免疫賦活剤との併用した
場合の効果については、全く知られていなかった。
【0005】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、エンテロコ
ッカス・フェカリス菌の有する免疫賦活による制癌作用
が増強された制癌免疫療法剤を提供することを目的とす
る。
【0006】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、エンテロ
コッカス・フェカリス菌の制癌作用の増強について種々
検討した結果、この菌とドコサヘキサエン酸を組み合わ
せると制癌作用が増強されることを見いだし、本発明を
完成するに至った。
【0007】すなわち本発明は、エンテロコッカス・フ
ェカリス菌とドコサヘキサエン酸とを有効成分として含
む、制癌免疫療法剤に関するものである。
【0008】エンテロコッカス・フェカリス菌は、レン
サ球菌に属し、腸内に存在する常在菌の一種である(Pe
ter H. A. S. et al., Bergey's Manual of Systematic
Bacteriology. vol.2(1986))。本発明においては、こ
の菌種に属する種々の菌株を用いることができるが、特
に制癌活性が高い点で、NF−1011菌株を用いるこ
とが好ましい。この菌株は、ヒトの糞便中より単離さ
れ、Maekawaらの分類(Maekawa S. et al., Microbiol.
Immunol., 36,671-681(1992))に従うと、5型の血清
型に属する分離頻度の低い特殊な菌株である。該菌株は
工業技術院微生物工業技術研究所に微工研菌寄第125
64号として寄託されている。
【0009】以下にエンテロコッカス・フェカリスNF
−1011の分離手段及び同菌株の菌学的及び生理学的
性質を示す。
【0010】(1)分離手段 健常者の糞便の加熱滅菌水による10倍希釈物を適切な
選択培地(KMN寒天平板及びSF寒天平板)に塗抹
し、好気条件下37℃で、48〜72時間培養し、菌集
落を出現させた。この菌集落を別の同種平板培地に画線
塗布し、同様に培養して菌集落を再び出現させた。同様
の操作を数回繰り返し、単一の菌種だけからなる単一集
落を分離した。この新分離菌株について、菌学的(形態
的、生化学的及び血清学的)性状を調べ、エンテロコッ
カス・フェカリス(Enterococcus faecalis)に属すると
分類同定した。
【0011】(2)菌学的及び生理学的性質 ───────────────────────────── 性状 判定 ───────────────────────────── グラム染色性 + 菌形態 球形 カタラーゼ − 溶血性 α 血清群 D 増殖性 10℃ + 45℃ + 50℃ + 熱耐性 60℃ 30分 + 胆汁エスクリン添加培地での生育 + pH9.6培地での生育 + 6.5%食塩添加培地での生育 + メチレンブルー染色性 + ゼラチン液化 − 0.01%TTC添加培地での生育 + テルライト添加培地での生育 + 酸生成の有無 グリセロール + L−アラビノース − D−リボース + D−キシロース − D−グルコース + D−ガラクトース + D−フラクトース + D−マンノース + マルトース + マンニトール + シュクロース + L−ソルボース − D−ソルビトール + L−ラムノース − ラクトース + アミグタリン + エスクリン + セロビオース + メリビオース − イヌリン − メレジトース + ───────────────────────────── +;陽性、−;陰性 TTC;2,3,5−トリフェニルテトラゾリウムクロリド
【0012】本発明において、エンテロコッカス・フェ
カリス菌は、生菌体もしくは死菌体のいずれの形でも用
いることができるが、in vitroでの実験において、生菌
体に対し死菌体がより強力な腫瘍壊死因子(TNF)産
生能を有する点で、死菌体を用いることが好ましい。
【0013】本発明に用いるドコサヘキサエン酸とは、
遊離酸を始め、その塩、エステル、グリセリド、リン脂
質、コリン化合物、アスコルビン酸化合物、アミノ酸化
合物等を意味する。本発明に用いるドコサヘキサエン酸
としては、医薬目的では、純度90%以上のものが好ま
しく、純度95%以上のものが特に好ましい。
【0014】このようなドコサヘキサエン酸はドコサヘ
キサエン酸を含む油脂や混合物から、たとえば、特開平
4−95048号公報、特開平4−159398号公
報、及び特開平4−243849号公報に記載の方法に
より、ドコサヘキサエン酸を分離、生成することによっ
て得られる。
【0015】ドコサヘキサエン酸を含む油脂としては、
好ましくは総脂肪酸中のドコサヘキサエン酸の占める割
合が5%以上のものが良く、このようなものの例を挙げ
るとイワシ、サバ、アジ、サケ、サンマ等の青背魚より
抽出した魚油、マグロやカツオなどの大型海産魚の眼窩
脂肪由来の魚油、微生物や海藻由来の油脂、オキアミ
油、タラやイカ肝臓より抽出した海産物由来の油脂など
が好ましい例として挙げられる。
【0016】本発明の制癌免疫療法剤は治療のために経
口的に投与することができる。経口投与剤としては散
剤、顆粒剤、カプセル剤、錠剤などの固形製剤あるいは
シロップ剤、エリキシル剤などの液状製剤とすることが
できる。これらの製剤は活性成分に薬理学的、製剤学的
に認容される製造助剤を加えることにより常法に従って
製造される。更に公知の技術により持続性製剤とするこ
とも可能である。当該製造助剤を用いる場合は、本発明
の制癌免疫療法剤中のNF−1011の配合量は、患者
の年齢、性別、体重、症状、あるいは投与形態により異
なるが、通常は1〜70重量%、好ましくは5〜50重
量%である。また、ドコサヘキサエン酸の配合量も、患
者の年齢、性別、体重、症状、あるいは投与形態により
異なるが、通常は1〜50重量%、好ましくは5〜30
重量%である。
【0017】上記製造助剤としては、賦形剤(例:澱
粉、乳糖、結晶セルロース、乳糖カルシウム、メタケイ
酸アルミン酸マグネシウム、無水ケイ酸)、崩壊剤
(例:カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチル
セルロースカルシウム)、潤滑剤(例:ステアリン酸マ
グネシウム、タルク)、コーテング剤(例:ヒドロキシ
エチルセルロース)、矯味剤などの製剤用成分が使用さ
れる。
【0018】上記構成成分を有する本発明の制癌免疫療
法剤は、公知の製造法、たとえば日本薬局方第10版製
剤総則記載の方法ないし適当な改良を加えた方法によっ
て製造することができる。
【0019】
【実施例】以下本発明を実施例により詳細に説明する。
ただし、本発明はこれらの実施例によって限定されるも
のではない。
【0020】実施例1(菌体の調製) Enterococcus faecalisNF−1011をロゴサ液体培
地10リットルに接種(菌数;106個/ml)し、3
7℃16時間静置培養を行い、生菌数109個/mlの
培養液を得た。得られた培養液を12,000rpmで
遠心分離して集菌し、これを生理的食塩水(0.85%
NaCl水溶液)で2回洗浄して、100ml蒸留水に
懸濁し、110℃10分間加熱した。その後凍結乾燥に
より死菌体菌末を得た。
【0021】以下にロゴサ液体培地の組成を示す。 トリプチケース 10 g 酵母エキス 5 g トリプトース 3 g リン酸一カリウム 3 g リン酸二カリウム 3 g クエン酸三アンモニウム 2 g ツイーン80(界面活性剤) 1 g グルコース 20 g システイン塩酸塩 0.2g 塩類溶液(1のとおり) 5 ml 蒸留水 1,000 ml (pHを水酸化ナトリウム溶液で7.0に調整、121
℃15分間加熱滅菌) (1)塩類溶液;MgSO4・7H2O 11.5 g FeSO4・7H2O 0.68g MnSO4・2H2O 2.4 g 蒸留水 100 ml
【0022】実施例2.日本SLCより購入したC3H
/He N系マウス(雄性、6週齢、体重22±1g)
を、マウス用粉末飼料(CE−2、日本クレア製)及び
滅菌水道水を与え、温度25±2℃、湿度60±10
%、照明周期12時間の部屋で6日間予備飼育した後、
平均体重が同じになるように8匹づつ3群(NF−10
11群、DHA+NF−1011群、対照群)に群分け
した。
【0023】MM46乳癌細胞はC3H/He N系マ
ウス腹腔内で継代培養したものを使用した。マウス腹腔
内移植後1週間目のMM46乳癌細胞を採取し、PBS
(−)(通常のPBSからCaCl2とMgCl2・6H
2Oを除いた緩衝液)に浮遊、700rpm、5分の遠
心洗浄を3回繰り返した後、PBS(−)で濃度調節し
たものを上記マウス腹部皮内に生細胞数が1×106
/匹になるよう移植した。
【0024】MM46乳癌を移植した次の日からNF−
1011群、DHA+NF−1011群は実施例1で得
た菌体を5%配合した飼料を自由摂取させた。また、D
HA+NF−1011群へのDHA(DHAエチルエス
テル体98%)及び対照群ならびにNF−1011群に
は蒸留水を、各々10ml/kg/日になるよう胃ゾン
デによる強制投与を行った。
【0025】腫瘍移植後36日目に体重を測定した後、
腫瘍組織を摘出し、重量測定を行った。結果を表1に示
す。
【0026】 表1 ──────────────────────────────────── 腫瘍重量(g) 体重(g) 腫瘍の相対重量(%) ──────────────────────────────────── 対照群 3.96 28.2 14.04 NF−1011群 2.68 26.2 10.23 DHA+NF−1011群 2.48 27.9 8.89 ────────────────────────────────────
【0027】NF−1011の単独投与群では腫瘍の相
対重量は対照群に比べて27%減少し、NF−1011
とDHAを併用すると37%の減少が認められ、併用に
よって制癌活性の増強効果が認められた。
【0028】
【発明の効果】本発明の制癌免疫療法剤は、増強された
制癌活性を有する。従って、本発明の制癌療法剤は、乳
癌、大腸癌等の種々の癌の治療薬及び改善薬として期待
される。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 大橋 一智 三重県阿山郡伊賀町大字柘植町3353−1 アーバンライフ柘植110号室 (72)発明者 矢澤 一良 神奈川県相模原市鵜野森1丁目28番10号

Claims (2)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項1】 エンテロコッカス・フェカリス菌とドコ
    サヘキサエン酸とを有効成分として含む、制癌免疫療法
  2. 【請求項2】 エンテロコッカス・フェカリス菌がエン
    テロコッカス・フェカリスNF−1011である、制癌
    免疫療法剤
JP6188756A 1994-07-19 1994-07-19 制癌免疫療法剤 Pending JPH0827010A (ja)

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