JPH09194383A

JPH09194383A - セラミド合成促進剤

Info

Publication number: JPH09194383A
Application number: JP8026001A
Authority: JP
Inventors: Minoru Sasaki; 稔佐々木; Osamu Tanno; 修丹野; Mikio Tonomura; 幹雄外村
Original assignee: Kanebo Ltd
Current assignee: Kanebo Ltd
Priority date: 1996-01-19
Filing date: 1996-01-19
Publication date: 1997-07-29
Anticipated expiration: 2016-01-19
Also published as: JP3129646B2

Abstract

(57)【要約】【課題】本発明の目的は、皮膚表層内部で表皮細胞自身
のセラミド合成を活発化させ皮膚バリア機能を改善する
ことにより荒れ肌の改善および各種皮膚疾患の改善が期
待されるセラミド合成促進剤を提供することにある。【解決手段】ニコチン酸および／またはニコチンアミド
を含む菌培養物を有効成分とするセラミド合成促進剤で
ある。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、皮膚表層内部にお
いて表皮細胞自身のセラミド合成を活発化させ皮膚バリ
ア機能を改善することにより荒れ肌の改善および各種皮
膚疾患の改善が期待されるセラミド合成促進剤に関す
る。

【０００２】

【従来の技術】脂質の一種であるセラミドは、生体内で
大部分を占めるグリセロ脂質に比べて量的には少ない
が、重要な生理的役割を持つ事が最近知られてきてい
る。ヒトを始めとする哺乳類での生体分布も生理的に重
要である場所にあるが、中でも脳、肝臓、皮膚などに蓄
積されている事が知られている。

【０００３】皮膚では特に表皮角質層にセラミドが集積
しているが、これは表皮細胞によって合成分泌され、細
胞間に独特のラメラ構造を形成している細胞間脂質の主
成分となっている（Lukas Landmann：Anat Embryol ,１
７８巻, １−３頁, １９８８年）。角質層は、皮膚の保
湿能や生体の物理的保護を始めとする一連の生理的役
割、いわゆるバリアー機能を持っているが、細胞間脂質
はこのバリアー機能の実体であり、生命維持において最
も重要な役割の一つを担っている（芋川玄爾：香粧会
誌、１５巻（４号）、２５０−２５３頁、１９９１
年）。この意味から、皮膚セラミドは生体防御の重要な
物質の１つになっていると言える。

【０００４】肌荒れや乾燥肌、また各種皮膚疾患では、
この角質層の健全な形成が妨げられ、バリアー機能の低
下が起きている事が数多く報告されている。具体的な例
としては、皮膚表面の加齢に伴う表皮層のターンオーバ
ーの低下、あるいは光や温度、気象条件などの外的要因
によって生じる肌荒れや乾燥肌があげられる。これはバ
リアー機能の低下が生じ、本来皮膚が有している保湿能
力の低下と水分蒸散量の増加が生じた結果誘発されると
考えられている（赤崎秀一ほか：日皮会誌、９８巻（１
号）、４１−５１頁、１９８８年）。

【０００５】また皮膚疾患のなかで、アトピー性皮膚炎
では患者の炎症部のみならず非炎症部でもバリアー機能
の低下や崩壊が見られ、患者皮膚中セラミドの全般的
な、あるいは特定の種類の含量低下が報告されている
（川島真：香粧会誌、１５巻（４号）、２６１−２６２
頁、１９９１年）。このほか乾癬でも患者皮膚中のセラ
ミド量の変動が報告されており（Stefania.M：Arch De
rmatol. １３０巻，４５２−４５６頁，１９９４年）、
この場合もこの変動がバリアー崩壊と関係していると考
えられる。

【０００６】このような皮膚バリアー機能の低下や崩壊
からくる皮膚の疾患や不全に対しては、従来保湿剤の投
与で皮膚の乾燥状態を防ぎ潤いを持たせることや、抗炎
症剤による湿疹の抑制が試みられてきた。しかし、これ
らの方法は、角質表面の水分あるいは保湿成分の一部を
補給する為にその効果が一時的なものに留まり、皮膚内
部に充分な潤いを持続的に与える事ができなかったり
（武村俊之：ファルマシア、２８巻、１頁、１９９２
年）、一時的な炎症を抑えても効果の持続性や副作用に
問題のあることが多かった。

【０００７】これに対し、最近バリアー構成主要成分で
あるセラミドの外部補給で皮膚の改善治療を試みる事も
行われ、肌荒れ状態やアトピー性皮膚炎に有効な事も報
告された（檜垣祐子ほか：アレルギーの臨床、１３巻
（１２号）、２６−２８頁、１９９３年）。しかしなが
ら、この方法は効果の出現が早いと思われる半面、従来
から用いられていた保湿剤などと同様、効果の持続性の
点で不充分であり、また皮膚の状態による経皮吸収の違
いなどで効果が充分発揮されないという欠点がある。

【０００８】一方、ニコチン酸およびニコチンアミドは
動植物組織に広く存在するビタミンの一種で、従来から
酵母菌等の菌の培養時に増殖因子として使用されてい
る。しかし、それらの菌培養物が表皮細胞のセラミド合
成を促進することについては知られていない。

【０００９】

【発明が解決しようとする課題】かかる事情に鑑み、本
発明者等が、皮膚表層内部で表皮細胞自身のセラミド合
成を活発化させ皮膚バリアー機能を改善させる事を意図
し、培養表皮細胞系での探索を鋭意検討した結果、ニコ
チン酸および／またはニコチンアミドを含む菌培養物が
有効なセラミド合成促進作用を有することを見出し、本
発明を完成するに至ったものであって、その目的とする
ところは、皮膚表層内部で表皮細胞自身のセラミド合成
を活発化させ皮膚バリアー機能を改善することにより荒
れ肌の改善および各種皮膚疾患の改善が期待されるセラ
ミド合成促進剤を提供するにある。

【００１０】

【課題を解決するための手段】上述の目的は、ニコチン
酸および／またはニコチンアミドを含む菌培養物を有効
成分とするセラミド合成促進剤、更には菌培養物が、乳
酸菌培養物、ビフィズス菌培養物、きのこ菌体培養物ま
たは酵母菌培養物であることを特徴とする該セラミド合
成促進剤によって、達成される。

【００１１】

【発明の実施の形態】以下、本発明の構成について詳説
する。

【００１２】本発明に用いられるニコチン酸および／ま
たはニコチンアミドを含む菌培養物としては、例えばニ
コチン酸および／またはニコチンアミドを含む培地で培
養した乳酸菌培養物、ビフィズス菌培養物、きのこ菌体
培養物、酵母菌培養物等が挙げられる。

【００１３】乳酸菌としては、例えば Streptococcus
thermophilus，Lactobacillus bulugaricus ，Lactoco
ccus lactis 等、ビフィズス菌としては、例えば B
ifidobacterium bifidum 等、きのこ菌体としては、
例えば Lentinus edodes（しいたけ），Pleurotus
ostreatus （ひらたけ），Flammuiina velutipes（え
のきたけ）等、酵母菌としては、例えばSaccharomyces
cerevisiae，Endomyces magnusii 等が挙げられ
る。

【００１４】本発明のセラミド合成促進剤を得るに際
し、ニコチン酸またはニコチンアミドの、これらの菌の
培養系への添加量は、０．０００１〜１重量％（以下％
で示す）が好ましい。

【００１５】本発明のセラミド合成促進剤の使用形態と
しては、培養細胞への添加剤の他、皮膚外用剤があり、
例えば軟膏、クリーム、ローションなどが挙げられる。
外用剤の基剤としては、公知の外用基剤で良く、特に限
定されない。

【００１６】本発明のセラミド合成促進剤である菌培養
物を、培養表皮細胞系へ添加してセラミド合成を促進す
る場合の添加量は、０．００１〜１０％が好ましい。１
０％以下であると、表皮細胞への刺激が少ないという点
で好ましい。

【００１７】本発明のセラミド合成促進剤の皮膚外用剤
への配合量は、セラミド合成を十分に促進し、しかも培
養物の色や臭いが出にくいことから、組成物総量を基準
として、０．０１〜２０％とするのが好ましく、特に好
ましくは０．１〜１０％である。

【００１８】

【実施例】以下、実施例、比較例により詳細に説明す
る。

【００１９】実施例１〜６，比較例１〜３（乳酸菌培養
物）表１に示す組成物に精製水を加えて１００ｍｌとし、１
２１℃、２０分間高圧滅菌して培地を調製した（スキム
ミルクはＤｉｆｃｏ社製、グルコース、ニコチン酸およ
びニコチンアミドは関東化学社製を用いた）。これに同
培地で３７℃、２４時間前培養したLactococcus lact
is（IFO 12007 ）、Streptococcus thermophilus（AT
CC 19254）およびLactobacillus bulgaricus（ATCC 1
1842）を１％接種した。３７℃、２４時間静置培養後、
遠心分離で菌体を除き、培養上清を８０℃、３０分間処
理した乳酸菌培養物を、本発明のセラミド合成促進剤
（実施例１〜６）とした。

【００２０】尚、比較例として、ニコチン酸およびニコ
チンアミドのいずれも用いない他は、実施例１〜６と同
様にして、乳酸菌培養物を得た（比較例１〜３）。

【００２１】

【表１】

【００２２】実施例７〜８，比較例４（酵母菌培養物）表２に示す組成物に精製水を加えて１００ｍｌとし、１
２１℃、２０分間高圧滅菌して培地を調製した（マルト
エキストラクトブロスはＤｉｆｃｏ社製をニコチン酸は
関東化学社製を用いた）。これに同培地で２８℃、４８
時間前培養したSaccharomyces cerevisiae（IFO 237
5）を１％接種した。２８℃、４８時間振とう培養後、
遠心分離で菌体を除き、培養上清を８０℃、３０分間処
理した酵母菌培養物を、本発明のセラミド合成促進剤
（実施例７〜８）とした。

【００２３】尚、比較例として、ニコチン酸およびニコ
チンアミドのいずれも用いない他は、実施例７〜８と同
様にして、乳酸菌培養物を得た（比較例４）。

【００２４】

【表２】

【００２５】以下、実施例１〜８のセラミド合成促進
剤，および比較例１〜４によって得られた菌培養物を用
いた、セラミド合成促進試験と皮膚バリアー回復試験に
ついて述べる。

【００２６】試験例１セラミド合成促進試験（１）方法（ａ）培養表皮細胞ヒト正常表皮細胞は市販されているもの（Ｃａｓｃａｄ
ｅＢｉｏｌｏｇｉｃ社製）を用いた。

【００２７】（ｂ）細胞培養用培地培地としては増殖因子としてＢＰＥ（牛脳下垂体）を添
加したＭＣＤＢ１５３培地を用いた。

【００２８】（ｃ）Ｈｅｐｅｓ緩衝液の調製Ｈｅｐｅｓ７．１５ｇ、グルコース１．８ｇ、塩化カリ
ウム０．２２ｇ、塩化ナトリウム７．７ｇ、リン酸水素
二ナトリウム・１２水和物０．２７ｇを精製水に溶解
し、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液にてｐＨ７．４に調整
後、１ｌにメスアップした。

【００２９】（ｄ）細胞培養正常ヒト表皮細胞の細胞数をＭＣＤＢ１５３培地にて１
×１０⁴ 個／ｍｌに調製し、６０mmコラーゲンコートプ
レート（ファルコン社製）に４ｍｌずつ播種し、９５％
空気（Ｖ／Ｖ）−５％（Ｖ／Ｖ）炭酸ガスの雰囲気下、
３７℃で５日間静置培養した。

【００３０】培養上清を吸引除去し、実施例１〜８のセ
ラミド合成促進剤，および比較例１〜４の菌培養物を１
重量％添加したＭＣＤＢ１５３培地を４ｍｌずつ各ディ
ッシュに加えた。尚、コントロールとしてＨｅｐｅｓ緩
衝液を添加した。このディッシュを９５％空気（Ｖ／
Ｖ）−５％（Ｖ／Ｖ）炭酸ガスの雰囲気下、３７℃で６
日間静置培養した。

【００３１】６日目に０．５μＣｉの〔¹⁴Ｃ〕−セリン
（ＡｍｅｒｉｃａｎＲａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄＣｈ
ｅｍｉｃａｌｓ社製）を培地に添加して、培養を２日間
更に行った。培養後、以下のごとく細胞を処理した。

【００３２】（ｅ）脂質の抽出培地上澄を吸引除去し、５m1のＨｅｐｅｓ緩衝液で２回
洗浄した後、細胞をセルスクレーパー（住友ベークライ
ト社製）でディッシュからかきとった。これを１．６ml
のＨｅｐｅｓ緩衝液に，懸濁し、４mlのメタノールと２
mlのクロロホルムを加え混合する。２０分間室温で静置
した後、それぞれ１．６mlのクロロホルム層をとり、脂
質画分を得た。クロロホルムを遠心分離により除き１ml
のベンゼンに再溶解した。

【００３３】（ｆ）イアトロビーズカラムを用いたセラ
ミド画分の単離ベンゼンに溶解した脂質試料を、イアトロビーズ100 β
1 を充填したカラムに供し、ベンゼン−酢酸エチル
（４：１）溶液で洗浄した後、酢酸エチル１ｍl にて溶
出させることにより、セラミド画分を得た。

【００３４】（ｇ）〔¹⁴Ｃ〕ラベルされたセラミドの放
射活性測定上記セラミド画分に取り込まれた放射活性を、液体シン
チレーションカウンターにて測定した。

【００３５】（２）結果結果を図１に示す。図１より明らかなようにニコチン酸
および／またはニコチンアミドを加えた培地で培養した
菌培養物からなる本発明のセラミド合成促進剤（実施例
１〜８）でセラミドの合成促進効果が認められた。

【００３６】試験例２皮膚バリアー回復試験（１）方法供試動物としてはＳｋｈ：ｈｒ系ヘアレスマウス雄性
（日本ＳＬＣ）６週齡を購入、２週間予備飼育した後、
１群５匹で実験を開始した。

【００３７】荒れ肌はレチノイン酸（ビタミンＡ酸：al
l-transretinoic acid,SIGMA）２０μｇをエタノールに
溶解、マウスの臀部に均一になるように１日１回（午
前）、３日間塗布して作製した。

【００３８】実施例１，３，５のセラミド合成促進剤２
ｍｌを凍結乾燥後、同量の５０％（Ｖ／Ｖ）エタノール
に溶解し、レチノイン酸を塗布し始めた日の午後から、
同様に１００μｌを１日１回（午後）、３日間塗布し
た。尚、コントロールとして５０％（Ｖ／Ｖ）エタノー
ルのみを塗布した。

【００３９】レチノイン酸塗布３日後に経表皮水分喪失
量（ＴＥＷＬ）を測定し、水分蒸散量(mg/cm²/min)で示
した。尚、ＴＥＷＬは皮膚バリアー機能を測る指標で、
バリアー機能が破壊すると上昇し、それが回復すると低
下するものである。ＴＥＷＬの測定はフォーション製の
ＡＵＭ−３を用いて行なった。

【００４０】（２）結果結果を図２に示す。図２より明らかなように、レチノイ
ン酸塗布３日後の実施例１，３，５のセラミド合成促進
剤塗布群のＴＥＷＬはコントロールよりも低く、実施例
１，３，５のセラミド合成促進剤の塗布によりレチノイ
ン酸による皮膚バリアー機能のダメージを回復すること
がわかった。

【００４１】以下、本発明のセラミド合成促進剤の応用
例を示す。

【００４２】応用例１〜３（スキンクリーム）実施例１, ３, ５のセラミド合成促進剤を表３の組成で
それぞれを配合しスキンクリームを調製した（応用例１
〜３）。

【００４３】（１）組成

【表３】

【００４４】（２）調製法（Ａ）成分および（Ｂ）成分を各々８０℃に加熱溶解し
た後混合して、攪拌しつつ冷却し、３０℃まで冷却し
て、スキンクリームを調製した。

【００４５】応用例４〜６（ローション）実施例１，３，５のセラミド合成促進剤を表４の組成で
配合し、ローションを調製した（応用例４〜６）。

【００４６】（１）組成

【表４】

【００４７】（２）調製法（Ａ）成分および（Ｂ）成分をそれぞれ混合溶解し、
（Ｂ）を（Ａ）に加えて、混合攪拌して、ローションを
調製した。

【００４８】

【発明の効果】以上の如く、本発明により、皮膚表層内
部で表皮細胞自身のセラミド合成を活発化させ皮膚バリ
アー機能を改善することによって荒れ肌の改善および各
種皮膚疾患の改善が期待されるセラミド合成促進剤を提
供できることは明らかである。

【図面の簡単な説明】

【図１】実施例１〜８のセラミド合成促進剤の、セラミ
ド合成促進効果を示す図である。

【図２】実施例１，３，５のセラミド合成促進剤による
荒れ肌改善効果を示す図である。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】ニコチン酸および／またはニコチンアミ
ドを含む菌培養物を有効成分とするセラミド合成促進
剤。
【請求項２】菌培養物が、乳酸菌培養物、ビフィズス
菌培養物、きのこ菌体培養物または酵母菌培養物である
請求項１記載のセラミド合成促進剤。