JPH09169800A - 毛上皮特異蛋白質又はその誘導体及びそれらの製造方法並びに毛髪処理剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】毛髪損傷の修復あるいは予防に有用な蛋白質お
よびその誘導体と、それらの製造方法、並びに毛髪損傷
修復剤を提供する。 【解決手段】下記（Ａ）及び（Ｂ），又は（Ｃ）及び
（Ｄ）に示す性質を有する蛋白質によって達成される。 （Ａ）アミノ酸分析結果；Cys8〜12モル％，Glu6.0〜10
モル％，Asp14 〜18モル％ （Ｂ）SDS-ポリアクリルアミド電気泳動による分子量が
6,000 〜12,000である。 （Ｃ）下記化１及び化２で表されるアミノ酸配列を有す
る。 【化１】 【化２】 （但し、Ｘはいずれのアミノ酸でも良い。） （Ｄ）SDS-ポリアクリルアミド電気泳動による分子量が
6,000 〜8,000 である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、毛髪損傷の予防ま
たは修復に有用な毛上皮特異蛋白質画分、毛上皮特異蛋
白質、毛上皮特異蛋白質誘導体画分、毛上皮特異蛋白質
誘導体、毛上皮特異蛋白質の製造方法及び毛髪処理剤に
関する。

【０００２】

【従来の技術】毛髪がパーマ処理等により損傷を受けキ
ューティクルの捲れや枚数の減少が起こることが知られ
ている。この際、毛髪から蛋白質が溶出されるという報
告はあるが、その由来については不明であった。

【０００３】また、損傷毛髪の修繕剤として従来シリコ
ンなどの毛髪コート剤や毛髪ケラチン、その加水分解物
またはその誘導体を補う試みが行われてきている。しか
し、毛髪ケラチンは不溶性の蛋白質でパーマ処理等によ
り溶出される蛋白質とは全く異なる物性を持つため充分
な損傷毛髪の修繕効果を得ることは困難なのが実情であ
る。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】本発明者等はかかる事
情に鑑み鋭意検討した結果、毛上皮から抽出操作を行う
ことにより得られる、毛髪の表層を構成する特定の蛋白
質が上記の毛髪の損傷により溶出される蛋白質の成分の
一つであり、また該蛋白質が毛髪を還元剤を含む緩衝液
で抽出することにより効率良く製造できること、さらに
は該蛋白質を含有せしめた毛髪処理剤として有用である
ことを見い出し本発明を完成するに至ったものであっ
て、その目的は、毛髪損傷予防あるいは損傷毛髪修復に
有用な毛上皮特異蛋白質画分、毛上皮特異蛋白質、毛上
皮特異蛋白質誘導体画分、毛上皮特異蛋白質誘導体、毛
上皮特異蛋白質の製造方法及び毛髪処理剤を提供するに
ある。

【０００５】

【課題を解決するための手段】従って、上述の目的は、
哺乳類の毛上皮より抽出される蛋白質画分であって、下
記（Ａ）及び（Ｂ）に示す性質を有する毛上皮特異蛋白
質を含むことを特徴とする毛上皮特異蛋白質画分、該毛
上皮特異蛋白質画分を精製することによって得られる、
下記（Ａ）及び（Ｂ）に示す性質を有する毛上皮特異蛋
白質，蛋白質のＳＨ基の全部又は一部を修飾することに
よって得られる毛上皮特異蛋白質誘導体画分及び毛上皮
特異蛋白質誘導体，毛髪を、還元剤を含む緩衝液を用い
て抽出することを特徴とする毛上皮特異蛋白質の製造方
法、さらに該毛上皮特異蛋白質画分を毛髪処理剤に配合
することによって達成される。

【０００６】（Ａ）アミノ酸分析でシステインを 8〜12
モル％、グルタミン酸を 6〜10モル％、アスパラギン酸
を 14 〜18モル％のアミノ酸組成を有する。 （Ｂ）SDS-ポリアクリルアミド電気泳動による分子量が
6,000 〜12,000である。

【０００７】尚、アミノ酸分析においては、分析対象で
ある蛋白質中のシスチン，グルタミン，アスパラギン
が、加水分解によってそれぞれシステイン，グルタミン
酸，アスパラギン酸に分解されることから、上記（Ａ）
のシステイン，グルタミン酸，アスパラギン酸のモル％
には、蛋白質中のシスチン，グルタミン，アスパラギン
由来のものも含まれている。

【０００８】更に、哺乳類の毛上皮の代わりにヒト毛上
皮から類似の蛋白質を用いても上述の目的を達成するの
により望ましい。ヒト毛上皮より抽出される蛋白質画分
であって、下記（Ｃ）及び（Ｄ）に示す性質を有する毛
上皮特異蛋白質を含むことを特徴とする毛上皮特異蛋白
質画分、該毛上皮特異蛋白質画分を精製することによっ
て得られる、下記（Ｃ）及び（Ｄ）に示す性質を有する
毛上皮特異蛋白質，蛋白質のＳＨ基の全部又は一部を修
飾することによって得られる毛上皮特異蛋白質誘導体画
分及び毛上皮特異蛋白質誘導体、毛髪を還元剤を含む緩
衝液を用いて抽出することを特徴とする毛上皮特異蛋白
質の製造方法、さらに該毛上皮特異蛋白質画分を毛髪処
理剤に配合することによって達成される。

【０００９】（Ｃ）下記化５及び化６で表されるアミノ
酸配列を有する。

【００１０】

【化５】

【００１１】

【化６】

【００１２】（但し、Ｘはいずれのアミノ酸でも良
い。）

【００１３】（Ｄ）SDS-ポリアクリルアミド電気泳動に
よる分子量が 6,000〜8,000 である。

【００１４】

【発明の実施の形態】以下、本発明の構成について詳説
する。

【００１５】本発明で用いられる毛上皮（キューティク
ル）の取得方法としては、公知の毛髪から分離して得る
方法が挙げられる。例えば、毛髪を水中で振とう、攪拌
あるいは超音波処理することにより、物理的に剥離する
ことができる（Journal of the Society of Cosmetic C
hemists,25巻, 13頁, 1974年参照）。剥離した毛上皮
は、ガーゼやメッシュで濾過することにより、毛髪から
分離した後、遠心分離又は濾過することにより収集する
ことができる。なお、本発明で用いる毛髪は人毛のほか
羊毛、豚毛などの由来のものが挙げられる。

【００１６】本発明の毛上皮特異蛋白質画分の製造方法
としては、例えば収集した毛髪または毛髪より分離して
得た毛上皮を、還元剤のみを含む緩衝液，還元剤及
び可溶化剤を含む緩衝液、等の抽出液で抽出する方法等
が挙げられる。特に純度の高い毛上皮特異蛋白質を必要
とされる用途に用いる場合には、毛上皮特異蛋白質の抽
出の際、の還元剤のみを含む緩衝液中で抽出操作を行
うと、より混在物の少ない毛上皮特異蛋白質画分を得る
ことができるので好ましい。

【００１７】抽出操作は、毛上皮の抽出緩衝液の液性を
アルカリ性とし、温度を25℃から 100℃の条件として行
うことが好ましい。

【００１８】また、毛上皮から毛上皮特異蛋白質画分を
製造する際には毛上皮を抽出液中で攪拌するか、ホモジ
ナイザー等を用いて毛上皮を抽出液中擦り潰すと、効率
良く本発明の毛上皮特異蛋白質画分が得られ好ましい。

【００１９】本発明に用いられる還元剤としては、メル
カプトエタノール、ジチオスレイトール、亜硫酸ナトリ
ウム、チオグリコール酸アンモニウム等が挙げられる。

【００２０】本発明に用いられる還元剤の、単独使用の
濃度としては、緩衝液総量の１〜３重量％が好ましい。

【００２１】抽出液に用いられる可溶化剤としては、周
知公用の変性剤、界面活性剤等の可溶化剤等を用いるこ
とができ、例えば変性剤としては尿素、塩酸グアニジン
等が挙げられ、界面活性剤としてはドデシル硫酸ナトリ
ウム等が挙げられる。

【００２２】本発明の毛上皮特異蛋白質の製造方法とし
ては、上述の方法で毛髪より抽出される毛上皮特異蛋白
質画分を、電気泳動工程、限外ろ過工程、又は液体クロ
マトグラフィー工程等により精製する方法等が挙げられ
る。

【００２３】本発明に用いられる限外ろ過工程における
膜としては、ポリスルホン系、ポリエーテルスルホン
系、ポリアクリロニトリル系膜等が挙げられる。また、
液体クロマトグラフィーに用いられる担体としては、イ
オン交換樹脂、疎水性樹脂、分子篩樹脂等が挙げられ
る。

【００２４】本発明で得られる哺乳類由来の毛上皮特異
蛋白質は、下記（Ａ）及び（Ｂ）に示す性質を有する蛋
白質である。

【００２５】（Ａ）アミノ酸分析でシステインを 8〜12
モル％、グルタミン酸を 6〜10モル％、アスパラギン酸
を 14 〜18モル％のアミノ酸組成を有する。 （Ｂ）SDS-ポリアクリルアミド電気泳動による分子量が
6,000 〜12,000である。

【００２６】本発明で得られるヒト毛上皮特異蛋白質
は、下記（Ｃ）及び（Ｄ）に示す性質を有する蛋白質で
ある。

【００２７】（Ｃ）下記化７及び化８で表されるアミノ
酸配列を有する。

【００２８】

【化７】

【００２９】

【化８】

【００３０】（但し、Ｘはいずれのアミノ酸でも良
い。）

【００３１】（Ｄ）SDS-ポリアクリルアミド電気泳動に
よる分子量が6,000 〜8,000 である。

【００３２】本発明の毛上皮特異蛋白質誘導体画分の製
造方法としては、本発明の毛上皮特異蛋白質画分に含有
される本発明の毛上皮特異蛋白質のＳＨ基を例えば、モ
ノヨード酢酸あるいはエチレンイミン等で修飾する通常
の方法が挙げられる。

【００３３】本発明の毛上皮特異蛋白質誘導体の製造方
法としては、本発明の毛上皮特異蛋白質のＳＨ基を例え
ば、モノヨード酢酸あるいはエチレンイミン等で修飾す
る方法の他、毛上皮特異蛋白質画分を修飾して毛上皮特
異蛋白質誘導体画分を得た後、電気泳動工程、限外ろ過
工程、又は液体クロマトグラフィー工程等により精製す
る方法等が挙げられる。

【００３４】本発明の毛上皮特異蛋白質誘導体として
は、S-カルボキシメチル化あるいはS-アミノエチル化さ
れた毛上皮特異蛋白質等が挙げられる。

【００３５】尚、この毛上皮特異蛋白質誘導体の、SDS-
ポリアクリルアミド電気泳動による分子量は、14,000〜
15,000である。修飾前の分子量が6,000 〜8,000 である
のに比べてかなり大きくなっているが、これは修飾する
前の分子内に形成されていたＳ−Ｓ架橋が、ＳＨ基の修
飾によって切断されたためであると考えられる。

【００３６】本発明の毛上皮特異蛋白質誘導体は、還元
剤や可溶化剤が存在しなくても水に溶解するので広い範
囲に応用することができる。

【００３７】本発明の毛上皮特異蛋白質及びその画分、
並びに毛上皮特異蛋白質誘導体及びその画分自体もＳ−
Ｓ架橋又はＳＨ基を多量に含有した蛋白質であるので、
直接シャンプー、リンス、ヘアートリートメント等の毛
髪処理剤に配合することによって、毛髪の保護成分とし
て使用することも可能である。

【００３８】本発明の毛上皮特異蛋白質、毛上皮特異蛋
白質誘導体およびその画分を含む毛髪処理剤の剤形とし
てはトリートメント、リンス、シャンプー、ヘアクリー
ム、ヘアーローション、ヘアーパック、パーマネント用
剤等、毛髪に対して用いる各種のものが挙げられる。

【００３９】本発明の毛髪処理剤中の毛上皮特異蛋白質
および毛上皮特異蛋白質誘導体の含有量は、組成物の総
量を基準として0.001 重量％〜１重量％が好ましく0.01
重量％〜0.1 重量％が特に好ましい。また、本発明の毛
上皮特異蛋白質画分および毛上皮特異蛋白質誘導体画分
の含有量は、組成物の総量を基準として0.01重量％〜５
重量％が好ましく0.1 重量％〜１重量％が特に好まし
い。

【００４０】更に、本発明の毛上皮特異蛋白質誘導体及
び毛上皮特異蛋白質は、ＣａやＺｎ等の金属に対する結
合能を有しているので各種皮膚疾患治療剤、キレート剤
として用いることもできる。

【００４１】この他、本発明の毛上皮特異蛋白質及びそ
の画分、並びに毛上皮特異蛋白質誘導体及びその画分
は、例えば毛上皮を特異的に認識する抗体を作製する際
の抗原としても有用である。

【００４２】

【実施例】以下、実施例、比較例によって本発明を更に
詳細に説明する。

【００４３】実施例１〜４（ヒト毛上皮からの毛上皮特
異蛋白質画分、毛上皮特異蛋白質誘導体画分、毛上皮特
異蛋白質及び毛上皮特異蛋白質誘導体の製造） （１）ヒト毛上皮 800mgを、8M尿素及び 0.2M 2-メルカ
プトエタノールを含む0.2Mトリス（pH 9.5) 3ml に加
え、50℃１時間インキュベートした後、ガラスホモジナ
イザーを用いて擦り潰した。更に50℃１時間インキュベ
ートした後、遠心分離（10,000 g）して上清を集め、毛
上皮特異蛋白質画分（蛋白質量として21mg；実施例１）
を得た。

【００４４】（２）また、この毛上皮特異蛋白質画分
（実施例１）の半量にモノヨード酢酸75mgを加え、トリ
スでｐH 9.0 とし、遮光下室温で1.5 hr攪拌した。10mM
トリス−塩酸緩衝液（pH 8.0）により透析して毛上皮特
異蛋白質（カルボキシメチル化）誘導体画分（実施例
２）を得た。

【００４５】（３）毛上皮特異蛋白質ならびにその毛上
皮特異蛋白質（カルボキシメチル化）誘導体はSDS-ポリ
アクリルアミド電気泳動により分離した。上記によって
得られた実施例１又は２の画分を、6M尿素を含む15％ゲ
ルを用いて電気泳動した後、ポリビニリデンジフルオラ
イド（PVDF）膜に転写し、得られた毛上皮抽出物の分子
量約7,000 のバンドならびにその毛上皮抽出物誘導体の
分子量約15,000のバンドを切り取り、酢酸／アセトニト
リル／水（7:2:1)の混合溶液で抽出し、毛上皮特異蛋白
質（実施例３）及び毛上皮特異蛋白質（カルボキシメチ
ル化）誘導体（実施例４）を得た。

【００４６】PVDF膜上の毛上皮特異蛋白質（カルボキシ
メチル化）誘導体を0.5%ポリビニルピロリドンで処理し
た後、トリプシン（プロメガ社製）を加え24時間37℃で
反応させた。得られた分解物を下記条件の逆相液体クロ
マトグラフィーに付し、保持時間14.2分及び18.3分の画
分を分取した。

【００４７】 カラム：A-312 ODS (6.O×150 mm, YMC 社製) 溶出：水−アセトニトリル−トリフルオロ酢酸（90:10:
0.1)から水−アセトニトリル−トリフルオロ酢酸（30:7
0:0.1)の直線的濃度勾配（60分間かけて濃度勾配をかけ
る） 流速：2.O ml/min 検出：220 nmにおける吸光度

【００４８】得られた画分を減圧乾燥後、アプライドバ
イオシステムズ社製471A気相プロテインシークエンサー
でアミノ酸配列を分析し、下記の結果を得た。

【００４９】保持時間14.2分の画分のアミノ酸配列分析
結果：

【００５０】

【化９】

【００５１】保持時間18.3分の画分のアミノ酸配列分析
結果：

【００５２】

【化１０】

【００５３】（但し、Ｘは未同定のアミノ酸である。）

【００５４】実施例５〜８（ヒト毛上皮からの毛上皮特
異蛋白質画分、毛上皮特異蛋白質誘導体画分、毛上皮特
異蛋白質及び毛上皮特異蛋白質誘導体の製造） ヒト毛上皮100 mgを用いる以外は、実施例１〜４と同様
にして、ヒト毛上皮からの毛上皮特異蛋白質画分、毛上
皮特異蛋白質誘導体画分、毛上皮特異蛋白質及び毛上皮
特異蛋白質誘導体を製造した（実施例５〜８）。

【００５５】得られた画分を減圧乾燥後、アプライドバ
イオシステムズ社製471A気相プロテインシークエンサー
でアミノ酸配列を分析し、下記の結果を得た。

【００５６】保持時間14.2分の画分のアミノ酸配列分析
結果：

【００５７】

【化１１】

【００５８】保持時間18.3分の画分のアミノ酸配列分析
結果：

【００５９】

【化１２】

【００６０】実施例９（変性剤及び還元剤含有緩衝液に
よる毛上皮特異蛋白質画分の製造） ヒト毛上皮800 mgを、8M尿素及び 0.2M 2-メルカプトエ
タノールを含む0.2Mトリス（pH 9.5) 3ml に加え、50℃
１時間インキュベートした後、ガラスホモジナイザーを
用いて擦り潰した。更に50℃１時間インキュベートした
後、遠心分離（10,000 g）して上清を収集した。残渣を
ガラスホモジナイザーを用いて擦り潰し、50℃１時間イ
ンキュベートした後、遠心分離（10,000 g）し上清を収
集する操作を、計６回繰り返し、得られた上清を集めて
毛上皮特異蛋白質画分（蛋白質量として21mg）を得た。

【００６１】実施例１０（界面活性剤及び還元剤含有緩
衝液による毛上皮特異蛋白質画分の製造） ヒト毛上皮を抽出する溶液として、2%ドデシル硫酸ナト
リウム及び 10mM ジチオスレイトールを含む0.2Mトリス
（pH 9.0) 3ml を用いる以外は実施例９と同様にして、
毛上皮特異蛋白質画分（蛋白質量として15mg）を得た。

【００６２】実施例１１（ヒト毛上皮からの還元剤含有
緩衝液による毛上皮特異蛋白質画分の製造） ヒト毛上皮を抽出する溶液として、 0.2M 2-メルカプト
エタノールを含む0.2Mトリス（pH 9.5) 3ml を用いる以
外は実施例９と同様にして、毛上皮特異蛋白質画分（蛋
白質量として8.9 mg）を得た。

【００６３】実施例１２（全毛髪のパーマ液による毛上
皮特異蛋白質画分の製造） ヒト毛髪2.5gをパーマ第１液（12％チオグリコール酸ア
ンモニウム、１％エタノールアミン、0.05％エチレンジ
アミン四酢酸ナトリウム、0.42％アンモニア水溶液）50
mlに室温15分間浸した。５回パーマ第１液を交換して溶
出液を集め、限外濾過膜を用いて濃縮し毛上皮特異蛋白
質画分（蛋白質量として0.13mg）を得た。

【００６４】実施例１３〜１６（羊毛上皮からの毛上皮
特異蛋白質画分、毛上皮特異蛋白質誘導体画分、毛上皮
特異蛋白質及び毛上皮特異蛋白質誘導体の製造） 羊毛上皮 200mgを用い、実施例１〜４の（１）と同様の
方法により、毛上皮特異蛋白質画分（蛋白質量として5.
2 mg；実施例１３）を得た。

【００６５】また、この毛上皮特異蛋白質画分（実施例
１３）の半量にモノヨード酢酸を25mg加える他は、実施
例１〜４の（２）と同様にして、毛上皮特異蛋白質（カ
ルボキシメチル化）誘導体画分（実施例１４）を得た。

【００６６】毛上皮特異蛋白質ならびにその毛上皮特異
蛋白質（カルボキシメチル化）誘導体はSDS-ポリアクリ
ルアミド電気泳動により分離した。上記によって得られ
た実施例１３又は１４の画分を、6M尿素を含む15％ゲル
を用いて電気泳動した後、得られた毛上皮抽出物の分子
量約7,000 のバンドならびにその毛上皮抽出物誘導体の
分子量約15,000のバンドを切り取り、蛋白質溶出装置
（ISCO社製、1750）を用いて抽出し、毛上皮特異蛋白質
（実施例１５）及び毛上皮特異蛋白質（カルボキシメチ
ル化）誘導体（実施例１６）を得た。

【００６７】得られた画分を6M塩酸で加水分解後、日立
製アミノ酸分析機でアミノ酸を分析した、下記の結果を
得た。なお、システイン含量は実施例１５では過ギ酸酸
化後加水分解して得たシステイン酸、実施例１６ではS-
カルボキシメチルシステインとしての定量値である。

【００６８】

【表１】

【００６９】比較例１（変性剤及び還元剤含有緩衝液に
よる毛皮質蛋白質画分の製造） 原料として、毛上皮を除いた毛髪、すなわち毛皮質 800
mgを用いる以外は実施例１と同様にして、可溶性蛋白質
画分（蛋白質量として 160mg）を得た。

【００７０】試験例１（蛋白質の分析） 毛上皮特異蛋白質画分（実施例１，２，１０，１１，１
２，１３）ならびに毛皮質蛋白質画分（比較例１）の蛋
白質の分析結果を図１に示した。尚、毛上皮特異蛋白質
画分ならびに毛皮質蛋白質画分中の蛋白質の分析は、毛
上皮特異蛋白質（実施例３）ならびに毛上皮特異蛋白質
（カルボキシメチル化）誘導体（実施例４）の分離に用
いたSDS-ポリアクリルアミド電気泳動により行った。

【００７１】実施例１，２，１０，１１，１２，１３で
はいずれも低分子の蛋白質バンドが観察されるのに対
し、比較例１では観察されなかった。

【００７２】試験例２（蛋白質の分析） 試験例１と同様にして、実施例９，１０，１１，比較例
１の蛋白質の分析を行い、結果を図２に示した。

【００７３】実施例９，１０，１１ではいずれも低分子
の蛋白質バンドが観察されるのに対し、比較例１では観
察されなかった。

【００７４】試験例３（毛上皮特異蛋白質の分析） 毛上皮特異蛋白質画分中の毛上皮特異蛋白質の分析は、
毛上皮特異蛋白質に対する特異抗体を用いて、ウエスタ
ンブロッティング法により行った。毛上皮特異蛋白質に
対する特異抗体は、アミノ酸配列に基づき合成して得ら
れるペプチド抗原を免疫して得た抗血清を用いた。

【００７５】ここでは抗原として、毛上皮特異蛋白質の
部分アミノ酸配列に基いて合成した下記の構造を持つ多
抗原性ペプチドを使用した。

【００７６】

【化１３】

【００７７】多抗原性ペプチド 250μｇを、３週間毎４
回、FCA(初回免疫時) 又は、FIA(追加免疫時) と共にウ
サギに免疫し、初回免疫から10週後に全採血して得た抗
血清を、以下の試験に用いた。

【００７８】実施例１，２，１０，１１，１２，１３で
得た毛上皮特異蛋白質画分及び比較例１で得た毛皮質蛋
白質画分を試験例１の方法で電気泳動した後、ＰＶＤＦ
膜に転写した後、0.8%の塩化ナトリウム及び0.1%のTwee
n 20を含む20mMトリス塩酸緩衝液で 1,000倍に希釈した
抗毛上皮特異蛋白質血清に浸し、１時間室温で反応させ
た。結合した抗体をプロテインブロッティングキット
（RPN23,Amersham社製）で検出した結果を図３に示し
た。

【００７９】実施例１，２，１０，１１，１２，１３で
はいずれも低分子の蛋白質バンドへの抗毛上皮特異蛋白
質特異抗体の結合が観察されるのに対し、比較例１では
観察されなかった。従って、実施例１，２，１０，１
１，１２，１３の毛上皮特異蛋白質画分がいずれも毛上
皮特異蛋白質を多量に含有することは明らかである。

【００８０】試験例４（毛上皮特異蛋白質の分析） 試験例３と同様にして、実施例９〜１１の毛上皮特異蛋
白質の分析を行なった結果を、図４に示す。

【００８１】実施例９〜１１ではいずれも低分子の蛋白
質バンドへの抗毛上皮特異蛋白質特異抗体の結合が観察
されるのに対し、比較例１では観察されなかった。従っ
て、実施例９〜１１の毛上皮特異蛋白質画分がいずれも
毛上皮特異蛋白質を多量に含有することは明らかであ
る。

【００８２】実施例１７〜２３（毛上皮特異蛋白質含有
毛髪処理剤） 実施例１，２，１０，１１，１２，１３で得た毛上皮特
異蛋白質画分及び毛上皮特異蛋白質誘導体画分10mgを20
mM2-メルカプトエタノールを含む生理リン酸緩衝液１ml
に溶解し、毛上皮特異蛋白質含有の毛髪損傷修復用毛髪
処理剤（実施例１７〜２３）を調製した。

【００８３】試験例５（損傷毛髪に対する修復効果） 予め、パーマ処理を３回施した毛髪７束を、実施例１７
〜２３の毛上皮特異蛋白質含有毛髪損傷修復剤に各々室
温で30分間浸した後、水洗した。無処理毛髪（健常
毛），修復剤処理前及び処理後のパーマ処理毛髪の３種
の毛髪に、キューティクルの捲れが観察し易い様にそれ
ぞれ結び目を作り、走査型電子顕微鏡観察を行った。パ
ーマ処理毛髪に観察されるキューティクルの捲れが、い
ずれの処理剤で処理することによっても健常毛程度に修
復した様子が観察された。

【００８４】実施例２４〜３０（毛上皮特異蛋白質含有
毛髪トリートメント剤） 下記に示す組成の、実施例１，２，１０，１１，１２，
１３，１４で得た毛上皮特異蛋白質画分及び毛上皮特異
蛋白質誘導体画分を含有した毛髪トリートメント剤（実
施例２４〜３０）を調製した。

【００８５】

【表２】

【００８６】試験例６（毛上皮特異蛋白質含有毛髪トリ
ートメント剤の官能試験） ヒト毛束（黒髪5g）を実施例２４〜３０の毛上皮特異蛋
白質含有毛髪トリートメント剤に１時間浸漬後、流水で
10分間水洗して風乾した。処理後毛束のくし通り、しな
やかさ、風合について処理前の毛束とどちらがよいか官
能評価を行った結果、いずれも毛上皮特異蛋白質含有毛
髪トリートメント剤で処理した毛束の方がくし通り、し
なやかさ、風合が良好であった。

【００８７】応用例１（毛上皮特異蛋白質を利用した毛
髪診断キット） 以下に記載した４種の溶液よりなる毛髪診断キットを作
製し、ヒト毛髪で損傷度を診断した。

【００８８】Ａ液：実施例１１で得た毛上皮蛋白質画分
１mgを、３週間毎４回、FCA(初回免疫時) 又は、FIA(追
加免疫時) と共にウサギに免疫し、初回免疫から10週後
に全採血して得た抗血清を、0.05%Tween 20 を含むPBS
で1,000 倍希釈して作製した。

【００８９】Ｂ液：ペルオキシダーゼ標識ヤギ抗ウサギ
IgG 抗体（カッペル社製）を、0.05%Tween20を含むPBS
で7,000 倍希釈して作製した。

【００９０】Ｃ液：オルトフェニレンジアミン20mg及び
過酸化水素10μｌを含む0.2Mリン酸二ナトリウム−0.1M
クエン酸緩衝液, pH 5.0（ペルオキシダーゼの基質溶
液）

【００９１】Ｄ液：生理食塩水

【００９２】髪の傷んだ人と健常な人の毛髪10mgにＡ液
を加え37℃、１時間インキュベートした。Ｄ液で６回洗
浄した後、Ｂ液と室温、30分間インキュベートした。Ｄ
液で６回洗浄した後、Ｃ液を加えると、傷んだ人の毛髪
を入れた試験管が発色した。

【００９３】以上の結果から、毛上皮特異蛋白質を抗原
として得た抗体で、毛髪の損傷状態あるいは健康状態を
知ることができることは明らかである。

【００９４】尚、Ａ液を加え37℃、１時間インキュベー
トした時点で、傷んだ毛髪の方は、ハリが戻る等の損傷
修復効果も見られた。このことから、本発明の毛上皮特
異蛋白質画分を抗原として得た抗体は、毛髪の損傷の修
復・予防にも有用であることが明らかとなった。

【００９５】

【発明の効果】以上の結果から、本発明により、毛髪の
損傷状態あるいは健康状態を知るマーカーとして，ある
いは損傷毛の修復および予防用素材として有用な、毛上
皮特異蛋白質画分、毛上皮特異蛋白質、毛上皮特異蛋白
質誘導体画分、毛上皮特異蛋白質誘導体、毛上皮特異蛋
白質の製造方法及び毛髪処理剤を提供できることは明ら
かである。

【図面の簡単な説明】

【図１】毛上皮特異蛋白質画分、毛上皮特異蛋白質誘導
体画分及び毛皮質蛋白質画分を、SDS-ポリアクリルアミ
ド電気泳動（6M尿素存在下、15％ゲル）により分離し、
蛋白質をクマシーブリリアントブルー（CBBG）で染色し
た図面代用写真である。矢印は、毛上皮特異蛋白質のバ
ンドを示す。 レーン１；実施例１の蛋白質画分 レーン２；実施例２の蛋白質画分 レーン３；実施例１０の蛋白質画分 レーン４；実施例１１の蛋白質画分 レーン５；実施例１２の蛋白質画分 レーン６；実施例１３の蛋白質画分 レーン７；比較例１の蛋白質画分

【図２】毛上皮特異蛋白質画分及び毛皮質蛋白質画分
を、SDS-ポリアクリルアミド電気泳動（6M尿素存在下、
15％ゲル）により分離し、蛋白質をクマシーブリリアン
トブルー（CBBG）で染色した図面代用写真である。矢印
は、毛上皮特異蛋白質のバンドを示す。 レーン１；実施例９の蛋白質画分 レーン２；実施例１０の蛋白質画分 レーン３；実施例１１の蛋白質画分 レーン４；比較例１の蛋白質画分

【図３】毛上皮特異蛋白質画分、毛上皮特異蛋白質誘導
体画分及び毛皮質蛋白質画分の毛上皮特異蛋白質を分析
した図面代用写真である。試験例１の条件で電気泳動
後、PVDF膜に転写し、毛上皮特異蛋白質の特異抗体で検
出した。矢印は、毛上皮特異蛋白質のバンドを示す。 レーン１；実施例１の蛋白質画分 レーン２；実施例２の蛋白質画分 レーン３；実施例１０の蛋白質画分 レーン４；実施例１１の蛋白質画分 レーン５；実施例１２の蛋白質画分 レーン６；実施例１３の蛋白質画分 レーン７；比較例１の蛋白質画分

【図４】毛上皮特異蛋白質画分及び毛皮質蛋白質画分の
毛上皮特異蛋白質を分析した図面代用写真である。試験
例２の条件で電気泳動後、PVDF膜に転写し、毛上皮特異
蛋白質の特異抗体で検出した。矢印は、毛上皮特異蛋白
質のバンドを示す。 レーン１；実施例９の蛋白質画分 レーン２；実施例１０の蛋白質画分 レーン３；実施例１１の蛋白質画分 レーン４；比較例１の蛋白質画分

Claims (8)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 哺乳類の毛上皮より抽出される蛋白質で
   あって、下記（Ａ）及び（Ｂ）に示す性質を有する毛上
   皮特異蛋白質を含むことを特徴とする毛上皮特異蛋白質
   画分。 （Ａ）アミノ酸分析でシステインを 8〜12モル％、グル
   タミン酸を 6〜10モル％、アスパラギン酸を 14 〜18モ
   ル％のアミノ酸組成を有する。 （Ｂ）SDS-ポリアクリルアミド電気泳動による分子量が
   6,000 〜12,000である。
2. 【請求項２】 請求項１記載の毛上皮特異蛋白質画分を
   精製することによって得られる、下記（Ａ）及び（Ｂ）
   に示す性質を有する毛上皮特異蛋白質。 （Ａ）アミノ酸分析でシステインを 8〜12モル％、グル
   タミン酸を 6〜10モル％、アスパラギン酸を 14 〜18モ
   ル％のアミノ酸組成を有する。 （Ｂ）SDS-ポリアクリルアミド電気泳動による分子量が
   6,000 〜12,000である。
3. 【請求項３】 ヒト毛上皮より抽出される蛋白質画分で
   あって、下記（Ｃ）及び（Ｄ）に示す性質を有する毛上
   皮特異蛋白質を含むことを特徴とする毛上皮特異蛋白質
   画分。 （Ｃ）下記化１及び化２で表されるアミノ酸配列を有す
   る。 【化１】 【化２】 （但し、Ｘはいずれのアミノ酸でも良い。） （Ｄ）SDS-ポリアクリルアミド電気泳動による分子量が
   6,000 〜8,000 である。
4. 【請求項４】 請求項３記載の毛上皮特異蛋白質画分を
   精製することによって得られる、下記（Ｃ）及び（Ｄ）
   に示す性質を有する毛上皮特異蛋白質。 （Ｃ）下記化３及び化４で表されるアミノ酸配列を有す
   る。 【化３】 【化４】 （但し、Ｘはいずれのアミノ酸でも良い。） （Ｄ）SDS-ポリアクリルアミド電気泳動による分子量が
   6,000 〜8,000 である。
5. 【請求項５】 請求項１または３記載の毛上皮特異蛋白
   質画分に含有される蛋白質のＳＨ基の全部又は一部を修
   飾することによって得られる毛上皮特異蛋白質誘導体画
   分。
6. 【請求項６】 請求項２または４記載の毛上皮特異蛋白
   質中のＳＨ基の全部又は一部を修飾することによって得
   られる毛上皮特異蛋白質誘導体。
7. 【請求項７】 毛髪より抽出して請求項１または３記載
   の毛上皮特異蛋白質画分を製造するに際し、還元剤を含
   む緩衝液を用いて抽出することを特徴とする、毛上皮特
   異蛋白質の製造方法。
8. 【請求項８】 請求項１〜７のいずれかに記載の毛上皮
   特異蛋白質画分、毛上皮特異蛋白質、毛上皮特異蛋白質
   誘導体画分、毛上皮特異蛋白質誘導体を含むことを特徴
   とする毛髪処理剤。