CN101886991B - 一种双向电泳乌贼墨囊全蛋白样品的制备方法 - Google Patents

一种双向电泳乌贼墨囊全蛋白样品的制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN101886991B
CN101886991B CN2010101962922A CN201010196292A CN101886991B CN 101886991 B CN101886991 B CN 101886991B CN 2010101962922 A CN2010101962922 A CN 2010101962922A CN 201010196292 A CN201010196292 A CN 201010196292A CN 101886991 B CN101886991 B CN 101886991B
Authority
CN
China
Prior art keywords
ink sac
complete protein
cuttlefish ink
cuttlefish
under
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
CN2010101962922A
Other languages
English (en)
Other versions
CN101886991A (zh
Inventor
詹萍萍
王春琳
母昌考
宋微微
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Ningbo University
Original Assignee
Ningbo University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ningbo University filed Critical Ningbo University
Priority to CN2010101962922A priority Critical patent/CN101886991B/zh
Publication of CN101886991A publication Critical patent/CN101886991A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN101886991B publication Critical patent/CN101886991B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Landscapes

  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明公开了一种双向电泳乌贼墨囊全蛋白样品的制备方法，通过丙酮溶液去除色素、多糖和核酸等杂质让墨囊粉末全蛋白沉淀分离，用酒精清洗掉丙酮，然后用裂解液裂解和提取蛋白，再用水化上样缓冲液稀释，得到乌贼墨囊全蛋白双向电泳样品液，且每300μl乌贼墨囊全蛋白双向电泳样品液中含有300-350μg乌贼墨囊全蛋白；该方法可以有效去除乌贼墨囊中色素、多糖和核酸等干扰双向电泳过程的杂质，为乌贼墨囊全蛋白双向电泳创造了条件，为乌贼墨囊相关的蛋白质研究打下了基础，且该方法简单易行，快速，具有较大的实际应用价值。

Description

一种双向电泳乌贼墨囊全蛋白样品的制备方法
技术领域
本发明涉及双向电泳蛋白质样品的制备方法，具体涉及一种双向电泳乌贼墨囊全蛋白样品的制备方法。
背景技术
蛋白质组分析是研究墨囊中蛋白质的自身变化及周围环境刺激相应的重要技术手段，有利于深入了解其对墨囊发育及功能完善的作用，达到控制墨囊发生的目的。要顺利开展墨囊蛋白质组学研究，关键技术之一是墨囊组织中蛋白质样品的制备。公开号为CN101260146，名称为一种苹果属植物蛋白质双向电泳方法的发明专利申请，公开了将苹果材料在液氮中研碎，加入-20℃预冷的含10％的三氯乙酸和0.07％的β巯基乙醇的丙酮溶液中匀浆，-20℃下放置1小时，然后离心，重复6次将沉淀物中加入4倍体积的含有0.07％的β巯基乙醇的丙酮溶液，-20℃下放置1小时，离心，最后得到蛋白质样品，对蛋白质样品进行等电聚焦电泳和垂直凝胶电泳的双向电泳分析。由于乌贼墨囊中杂质成份复杂，如色素、多糖和核酸等都可干扰双向电泳过程，因此目前还没有制备双向电泳乌贼墨囊全蛋白样品的研究报道，所以未发现乌贼墨囊全蛋白的双向电泳分析的研究，从而导致乌贼墨囊相关的蛋白质组研究滞后。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种双向电泳乌贼墨囊全蛋白样品的制备方法，该方法可以有效去除乌贼墨囊中色素、多糖和核酸等干扰双向电泳过程的杂质，为乌贼墨囊全蛋白双向电泳创造了条件，为乌贼墨囊相关的蛋白质研究打下了基础。
本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种双向电泳乌贼墨囊全蛋白样品的制备方法，包括下述步骤：
1)将液氮研磨的墨囊粉末溶于-20℃预冷的含质量百分浓度为10％的三氯乙酸和0.02％的二硫苏糖醇的丙酮溶液中，所述墨囊粉末与所述丙酮溶液的质量体积比为1∶10-20，在-20℃条件下静置1小时，然后在4℃，10000g条件下离心，得到首次沉淀物；
2)上述首次沉淀物用质量浓度为75％的酒精清洗后，在4℃，10000g条件下再次离心，得到再次沉淀物；
3)将上述再次沉淀物在4℃条件下干燥，然后加入裂解液，所述裂解液含有浓度为7mol/L的尿素，2mol/L硫脲，40mmol/L三羟甲基氨基甲烷，6mmol/L二硫苏糖醇，1mmol/L的苯甲基黄酰氟，1mmol/L的乙二胺四乙酸二钠，40g/L的3-[3-(胆酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐，750ug/L的亮肽素，5ml/L的两性电解质，所述裂解液与所述墨囊粉末的体积质量比为2-4∶1，在4℃条件下静置1小时，然后在4℃，10000g条件下离心4小时，收集上清液得到乌贼墨囊全蛋白粗提液；
4)在上述乌贼墨囊全蛋白粗提液中加入水化上样缓冲液，所述水化上样缓冲液含有浓度为7mol/L的尿素，2mol/L硫脲，6mmol/L二硫苏糖醇，40g/L的3-[3-(胆酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐，5ml/L的两性电解质，10g/L的溴酚蓝，混合均匀得到乌贼墨囊全蛋白双向电泳样品液，其中每300ul乌贼墨囊全蛋白双向电泳样品液中含有300-350ug乌贼墨囊全蛋白。
与现有技术相比，本发明的优点在于一种双向电泳乌贼墨囊全蛋白样品的制备方法，通过丙酮溶液去除色素、多糖和核酸等杂质使墨囊粉末全蛋白沉淀分离，用酒精清洗掉丙酮，然后用裂解液裂解和提取蛋白，再用水化上样缓冲液稀释，得到乌贼墨囊全蛋白双向电泳样品液，且每300ul乌贼墨囊全蛋白双向电泳样品液中含有300-350ug乌贼墨囊全蛋白；该方法可以有效去除乌贼墨囊中色素、多糖和核酸等干扰双向电泳过程的杂质，为乌贼墨囊全蛋白双向电泳创造了条件，为乌贼墨囊相关的蛋白质研究打下了基础，且该方法简单易行，快速，具有较大的实际应用价值。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明作进一步详细描述。
实施例1
一种双向电泳乌贼墨囊全蛋白样品的制备方法，称取液氮研磨的墨囊粉末1g溶于10ml经-20℃预冷的含质量百分浓度为10％的三氯乙酸和0.02％的二硫苏糖醇的丙酮溶液中，在-20℃条件下静置1小时，然后在4℃，10000g条件下离心，得到首次沉淀物；将上述首次沉淀物用质量浓度为75％的酒精清洗后，在4℃，10000g条件下再次离心，得到再次沉淀物；将上述再次沉淀物在4℃条件下干燥，然后加入2ml裂解液，裂解液中含有浓度为7mol/L的尿素，2mol/L硫脲，40mmol/L三羟甲基氨基甲烷，6mmol/L二硫苏糖醇，1mmol/L的苯甲基黄酰氟，1mmol/L的乙二胺四乙酸二钠，40g/L的3-[3-(胆酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐，750ug/L的亮肽素，5ml/L的两性电解质，在4℃条件下静置1小时，然后在4℃，10000g条件下离心4小时，收集上清液得到乌贼墨囊全蛋白粗提液；在上述乌贼墨囊全蛋白粗提液中加入水化上样缓冲液，水化上样缓冲液中含有浓度为7mol/L的尿素，2mol/L硫脲，6mmol/L二硫苏糖醇，40g/L的3-[3-(胆酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐，5ml/L的两性电解质，10g/L的溴酚蓝，混合均匀得到乌贼墨囊全蛋白双向电泳样品液，其中每300ul乌贼墨囊全蛋白双向电泳样品液中含有300-350ug乌贼墨囊全蛋白。
实施例2
一种双向电泳乌贼墨囊全蛋白样品的制备方法，与实施例1基本相同，所不同的只是-20℃预冷的含质量百分浓度为10％的三氯乙酸和0.02％的二硫苏糖醇的丙酮溶液为20ml，裂解液为4ml。
实施例3
一种双向电泳乌贼墨囊全蛋白样品的制备方法，与实施例1基本相同，所不同的只是-20℃预冷的含质量百分浓度为10％的三氯乙酸和0.02％的二硫苏糖醇的丙酮溶液为15ml，裂解液为3ml。

Claims (1)

1.一种双向电泳乌贼墨囊全蛋白样品的制备方法，其特征在于包括下述步骤：
1)将液氮研磨的墨囊粉末溶于-20℃预冷的含质量百分浓度为10％的三氯乙酸和0.02％的二硫苏糖醇的丙酮溶液中，所述墨囊粉末与所述丙酮溶液的质量体积比为1∶10-20，在-20℃条件下静置1小时，然后在4℃，10000g条件下离心，得到首次沉淀物；
2)上述首次沉淀物用质量浓度为75％的酒精清洗后，在4℃，10000g条件下再次离心，得到再次沉淀物；
3)将上述再次沉淀物在4℃条件下干燥，然后加入裂解液，所述裂解液含有浓度为7mol/L的尿素，2mol/L硫脲，40mmol/L三羟甲基氨基甲烷，6mmol/L二硫苏糖醇，1mmol/L的苯甲基黄酰氟，1mmol/L的乙二胺四乙酸二钠，40g/L的3-[3-(胆酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐，750ug/L的亮肽素，5ml/L的两性电解质，所述裂解液与所述墨囊粉末的体积质量比为2-4∶1，在4℃条件下静置1小时，然后在4℃，10000g条件下离心4小时，收集上清液得到乌贼墨囊全蛋白粗提液；
4)在上述乌贼墨囊全蛋白粗提液中加入水化上样缓冲液，所述水化上样缓冲液含有浓度为7mol/L的尿素，2mol/L硫脲，6mmol/L二硫苏糖醇，40g/L的3-[3-(胆酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐，10g/L的溴酚蓝，5ml/L的两性电解质，混合均匀得到乌贼墨囊全蛋白双向电泳样品液，其中每300ul乌贼墨囊全蛋白双向电泳样品液中含有300-350ug乌贼墨囊全蛋白。
CN2010101962922A 2010-06-10 2010-06-10 一种双向电泳乌贼墨囊全蛋白样品的制备方法 Expired - Fee Related CN101886991B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2010101962922A CN101886991B (zh) 2010-06-10 2010-06-10 一种双向电泳乌贼墨囊全蛋白样品的制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2010101962922A CN101886991B (zh) 2010-06-10 2010-06-10 一种双向电泳乌贼墨囊全蛋白样品的制备方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN101886991A CN101886991A (zh) 2010-11-17
CN101886991B true CN101886991B (zh) 2011-11-23

Family

ID=43072996

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN2010101962922A Expired - Fee Related CN101886991B (zh) 2010-06-10 2010-06-10 一种双向电泳乌贼墨囊全蛋白样品的制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN101886991B (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102914460A (zh) * 2012-10-16 2013-02-06 山东农业大学 一种适合双向电泳的蚯蚓蛋白样品制备方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20040027822A (ko) * 2004-03-10 2004-04-01 한국기초과학지원연구원 벼 종자 미량 단백질의 프로테오믹스 연구를 위한 벼 종자글루테린 저장 단백질의 제거방법
JP4194669B2 (ja) * 1995-10-20 2008-12-10 花王株式会社 毛髪処理剤
CN101392018A (zh) * 2008-10-30 2009-03-25 中国科学院新疆生态与地理研究所 沙冬青蛋白质双向电泳技术
CN101718745A (zh) * 2009-12-07 2010-06-02 南京农业大学 黄麻根系总蛋白双向电泳方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP4194669B2 (ja) * 1995-10-20 2008-12-10 花王株式会社 毛髪処理剤
KR20040027822A (ko) * 2004-03-10 2004-04-01 한국기초과학지원연구원 벼 종자 미량 단백질의 프로테오믹스 연구를 위한 벼 종자글루테린 저장 단백질의 제거방법
CN101392018A (zh) * 2008-10-30 2009-03-25 中国科学院新疆生态与地理研究所 沙冬青蛋白质双向电泳技术
CN101718745A (zh) * 2009-12-07 2010-06-02 南京农业大学 黄麻根系总蛋白双向电泳方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
刘国勇等.巴东木莲雌蕊柱头蛋白的提取与双向电泳分离.《江西农业大学学报》.2009,第31卷(第03期), *

Also Published As

Publication number Publication date
CN101886991A (zh) 2010-11-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Wu et al. Protein extraction from plant tissues for 2DE and its application in proteomic analysis
CN103897018B (zh) 大豆种子总蛋白质的提取方法及其专用试剂
CN101891799B (zh) 一种低分子量麦谷蛋白亚基的提取分离鉴定方法
CN104178480A (zh) 利用dna吸附柱快速提取植物dna的试剂盒及方法
WO2013058572A3 (ko) 하이드로젤을 이용한 세포 패터닝 및 전달 방법 및 이를 이용한 세포 기반 바이오센서
CN101886991B (zh) 一种双向电泳乌贼墨囊全蛋白样品的制备方法
Kim Native agarose gel electrophoresis of multiprotein complexes
CN101788541B (zh) 一种分离富集和鉴定大分子量蛋白质的方法
CN102393435A (zh) 一种水产品中痕量藻毒素含量的检测方法
CN101392018B (zh) 沙冬青蛋白质双向电泳技术
WO2012134262A3 (en) A method for extracting protein from pectin rich plant material
Popper et al. The plant cell wall
CN109443866B (zh) 棉花叶片双向电泳及高通量质谱分析的蛋白提取方法
CN104021911A (zh) 磁性材料[Co2Na2(hmb)4(N3)2(CH3CN)2]·(CH3CN)2 及合成方法
CN106908402A (zh) 蚕豆根系蛋白质组学分析的样品制备方法
CN103512997A (zh) 一种两维短梯度高效蛋白质组分离鉴定方法
CN102721592A (zh) 一种适用于双向电泳的蚜虫蛋白样品制备方法
CN107098948A (zh) 一种快速提取果梅花芽中蛋白质的方法
CN104036909B (zh) 磁性材料[Cu3(N3)6(DMF)2]n及合成方法
CN102914460A (zh) 一种适合双向电泳的蚯蚓蛋白样品制备方法
CN106769358B (zh) 一种油佐剂疫苗破乳后水相的纯化方法
WO2012048331A3 (en) Isolation of phosphoproteins, glycoproteins and fragments thereof
CN102269742A (zh) 一种鉴定小麦高分子量谷蛋白亚基的超高效液相色谱方法及其应用
CN105277638A (zh) 一种单克隆抗体IgG质谱测序方法
Yang et al. Phycobiliproteins

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20111123

Termination date: 20180610

CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee