JPH09118625A - 新規生理活性物質ｎｆ００２３３ａ、その製造法及びその用途 - Google Patents
新規生理活性物質ｎｆ００２３３ａ、その製造法及びその用途Info
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- JPH09118625A JPH09118625A JP7299353A JP29935395A JPH09118625A JP H09118625 A JPH09118625 A JP H09118625A JP 7299353 A JP7299353 A JP 7299353A JP 29935395 A JP29935395 A JP 29935395A JP H09118625 A JPH09118625 A JP H09118625A
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- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
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- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】フォスフォジエステラーゼ阻害作用を有す新規
生理活性物質を提供する。 【解決手段】ケトメラ（Ｃｈａｅｔｏｍｅｌｌａ）属に
属し、生理活性物質ＮＦ００２３３Ａを生産する能力を
有する微生物を培地に培養し、培養液中に生理活性物質
ＮＦ００２３３Ａを精製蓄積せしめ、これを採取するこ
とにより生理活性物質ＮＦ００２３３Ａを得た。生理活
性物質ＮＦ００２３３Ａ又はその薬理学的に許容される
塩はフォスフォジエステラーゼ阻害剤の有効成分として
有用である。
生理活性物質を提供する。 【解決手段】ケトメラ（Ｃｈａｅｔｏｍｅｌｌａ）属に
属し、生理活性物質ＮＦ００２３３Ａを生産する能力を
有する微生物を培地に培養し、培養液中に生理活性物質
ＮＦ００２３３Ａを精製蓄積せしめ、これを採取するこ
とにより生理活性物質ＮＦ００２３３Ａを得た。生理活
性物質ＮＦ００２３３Ａ又はその薬理学的に許容される
塩はフォスフォジエステラーゼ阻害剤の有効成分として
有用である。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、新規生理活性物質
ＮＦ００２３３Ａ、その製造法及びその用途に関する。
フォスフォジエステラーゼ阻害作用を有する化合物は、
例えば抗喘息薬、気管支拡張薬、気管支炎治療薬、抗ア
レルギー薬、抗炎症薬、抗リウマチ薬、降圧薬、狭心症
治療薬、不整脈治療薬、脳循環代謝改善薬、血液凝固阻
害薬、抗鬱薬などとして使用される生理活性物質として
期待されている。
ＮＦ００２３３Ａ、その製造法及びその用途に関する。
フォスフォジエステラーゼ阻害作用を有する化合物は、
例えば抗喘息薬、気管支拡張薬、気管支炎治療薬、抗ア
レルギー薬、抗炎症薬、抗リウマチ薬、降圧薬、狭心症
治療薬、不整脈治療薬、脳循環代謝改善薬、血液凝固阻
害薬、抗鬱薬などとして使用される生理活性物質として
期待されている。
【０００２】
【従来の技術】従来、フォスフォジエステラーゼ阻害作
用を有し、気管支拡張薬、狭心症治療薬、不整脈治療
薬、脳循環代謝改善薬、抗うつ薬などとして使用される
生理活性物質としては、テオフィリン、アムリノン、ロ
リプラム、等が知られている。
用を有し、気管支拡張薬、狭心症治療薬、不整脈治療
薬、脳循環代謝改善薬、抗うつ薬などとして使用される
生理活性物質としては、テオフィリン、アムリノン、ロ
リプラム、等が知られている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】しかし、これらの化合
物は副作用が強く、満足すべきものではない。これらの
用途に適する新規化合物の発明が待たれている。
物は副作用が強く、満足すべきものではない。これらの
用途に適する新規化合物の発明が待たれている。
【０００４】
【課題を解決するための手段】そこで、本発明者らは、
微生物の代謝産物について、種々検索した結果、ケトメ
ラ属に属する一菌株がフォスフォジエステラーゼ阻害作
用を有する生理活性物質ＮＦ００２３３Ａを産生する事
を見い出した。すなわち、本発明は新規生理活性物質Ｎ
Ｆ００２３３Ａ又はその薬理学上許容される塩に関す
る。更に本発明はケトメラ（Chaetomella ）属に属し、
生理活性物質ＮＦ００２３３Ａを生産する能力を有する
微生物を培地に培養し、培養物中に生理活性物質ＮＦ０
０２３３Ａを生成蓄積せしめ、これを採取する事を特徴
とする生理活性物質ＮＦ００２３３Ａの製造法に関す
る。更に本発明は、生理活性物質ＮＦ００２３３Ａ又は
その薬理学的に許容される塩を有効成分とする抗喘息
薬、気管支拡張薬、気管支炎治療薬、抗アレルギー薬、
抗炎症薬、抗リウマチ薬、降圧薬、狭心症治療薬、不整
脈治療薬、脳循環代謝改善薬、血液凝固阻止薬、抗鬱薬
に関する。
微生物の代謝産物について、種々検索した結果、ケトメ
ラ属に属する一菌株がフォスフォジエステラーゼ阻害作
用を有する生理活性物質ＮＦ００２３３Ａを産生する事
を見い出した。すなわち、本発明は新規生理活性物質Ｎ
Ｆ００２３３Ａ又はその薬理学上許容される塩に関す
る。更に本発明はケトメラ（Chaetomella ）属に属し、
生理活性物質ＮＦ００２３３Ａを生産する能力を有する
微生物を培地に培養し、培養物中に生理活性物質ＮＦ０
０２３３Ａを生成蓄積せしめ、これを採取する事を特徴
とする生理活性物質ＮＦ００２３３Ａの製造法に関す
る。更に本発明は、生理活性物質ＮＦ００２３３Ａ又は
その薬理学的に許容される塩を有効成分とする抗喘息
薬、気管支拡張薬、気管支炎治療薬、抗アレルギー薬、
抗炎症薬、抗リウマチ薬、降圧薬、狭心症治療薬、不整
脈治療薬、脳循環代謝改善薬、血液凝固阻止薬、抗鬱薬
に関する。
【０００５】
【発明の実施の形態】本発明において、生理活性物質Ｎ
Ｆ００２３３Ａは塩基と塩を作るが、その薬理学的に許
容される塩とはナトリウム、カリウム等の金属アルカリ
塩、カルシウム塩、アンモニウム塩等が挙げられる。好
ましくはナトリウム、カリウム塩である。上記生理活性
物質ＮＦ００２３３Ａはケトメラ（Chaetomella ）属に
属するＮＦ００２３３Ａ生産菌を培養し、該化合物を生
成蓄積せしめ、この培養物より採取する事により得られ
る。
Ｆ００２３３Ａは塩基と塩を作るが、その薬理学的に許
容される塩とはナトリウム、カリウム等の金属アルカリ
塩、カルシウム塩、アンモニウム塩等が挙げられる。好
ましくはナトリウム、カリウム塩である。上記生理活性
物質ＮＦ００２３３Ａはケトメラ（Chaetomella ）属に
属するＮＦ００２３３Ａ生産菌を培養し、該化合物を生
成蓄積せしめ、この培養物より採取する事により得られ
る。
【０００６】ＮＦ００２３３Ａの生産菌の代表的なもの
として、土壌より分離したケトメララフィゲラ ＮＦ
００２３３（Chaetomella raphigera NF 00233）株（工
業技術院生命工学工業技術研究所ＦＥＲＭＰ−１５１９
０）が挙げられる。
として、土壌より分離したケトメララフィゲラ ＮＦ
００２３３（Chaetomella raphigera NF 00233）株（工
業技術院生命工学工業技術研究所ＦＥＲＭＰ−１５１９
０）が挙げられる。
【０００７】本発明におけるフォスフォジエステラーゼ
阻害活性を有する生理活性物質ＮＦ００２３３Ａ生産菌
はケトメラ（Chaetomella ）属に属するが、例えば本発
明者らが分離したＮＦ ００２３３（受託番号ＦＥＲＭ
Ｐ−１５１９０）菌株は、本発明に最も有効に使用さ
れる菌株の一例である。
阻害活性を有する生理活性物質ＮＦ００２３３Ａ生産菌
はケトメラ（Chaetomella ）属に属するが、例えば本発
明者らが分離したＮＦ ００２３３（受託番号ＦＥＲＭ
Ｐ−１５１９０）菌株は、本発明に最も有効に使用さ
れる菌株の一例である。
【０００８】本発明に用いるケトメラ属に属する菌株
は、例えば、紫外線、エックス線および薬品などを用い
る人工的な変異手段で容易に変異しうるものであり、ど
の様な変異株であっても本発明の対象とする生理活性物
質ＮＦ００２３３Ａの生産能を有するものは、すべて本
発明に使用する事ができる。
は、例えば、紫外線、エックス線および薬品などを用い
る人工的な変異手段で容易に変異しうるものであり、ど
の様な変異株であっても本発明の対象とする生理活性物
質ＮＦ００２３３Ａの生産能を有するものは、すべて本
発明に使用する事ができる。
【０００９】本発明によりＮＦ００２３３Ａを製造する
には、まず前記菌株を菌が利用し得る栄養物を含有する
培地で好気的に培養する。栄養源としては、従来から菌
の培養に利用されている公知のものが使用でき、例えば
炭素源としてはグルコース、フラクトース、グリセリ
ン、シュークロース、デキストリン、ガラクトース、有
機酸などを単独かまたは組み合わせて用いることができ
る。
には、まず前記菌株を菌が利用し得る栄養物を含有する
培地で好気的に培養する。栄養源としては、従来から菌
の培養に利用されている公知のものが使用でき、例えば
炭素源としてはグルコース、フラクトース、グリセリ
ン、シュークロース、デキストリン、ガラクトース、有
機酸などを単独かまたは組み合わせて用いることができ
る。
【００１０】無機および有機窒素源としては塩化アンモ
ニウム、硫酸アンモニウム、尿素、硝酸アンモニウム、
硝酸ナトリウム、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、乾
燥酵母コーン・スチープ・リカー、大豆粉、綿実油カ
ス、カザミノ酸、バクトソイトン、ソリュブル・ベジタ
ブル・プロティン、オートミールなどを単独または組み
合わせて用いることができる。
ニウム、硫酸アンモニウム、尿素、硝酸アンモニウム、
硝酸ナトリウム、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、乾
燥酵母コーン・スチープ・リカー、大豆粉、綿実油カ
ス、カザミノ酸、バクトソイトン、ソリュブル・ベジタ
ブル・プロティン、オートミールなどを単独または組み
合わせて用いることができる。
【００１１】その他必要に応じて食塩、炭酸カルシウ
ム、硫酸マグネシウム、硫酸銅、硫酸鉄、硫酸亜鉛、塩
化マンガン、燐酸塩などの無機塩類を加えることができ
るほか有機物、例えばアミノ酸類、ビタミン類、核酸類
や無機物を適当に添加することができる。培養法として
は液体培養法、特に深部攪拌培養法が最も適している。
培養温度は２０℃〜４５℃、ｐＨは微酸性ないし微アル
カリ性で培養を行うことが望ましい。
ム、硫酸マグネシウム、硫酸銅、硫酸鉄、硫酸亜鉛、塩
化マンガン、燐酸塩などの無機塩類を加えることができ
るほか有機物、例えばアミノ酸類、ビタミン類、核酸類
や無機物を適当に添加することができる。培養法として
は液体培養法、特に深部攪拌培養法が最も適している。
培養温度は２０℃〜４５℃、ｐＨは微酸性ないし微アル
カリ性で培養を行うことが望ましい。
【００１２】液体培養では通常３〜５日間培養を行うと
ＮＦ００２３３Ａ物質が培養液中に生成蓄積される。培
養菌体中の生成量が最大に達したときに培養を停止し、
菌体と培養液をろ別し、菌体より目的物を精製単離す
る。菌体から本物質の精製単離には一般に微生物代謝生
産物をその培養菌体から単離するために、用いられる分
離精製の方法が利用される。
ＮＦ００２３３Ａ物質が培養液中に生成蓄積される。培
養菌体中の生成量が最大に達したときに培養を停止し、
菌体と培養液をろ別し、菌体より目的物を精製単離す
る。菌体から本物質の精製単離には一般に微生物代謝生
産物をその培養菌体から単離するために、用いられる分
離精製の方法が利用される。
【００１３】即ち、培養液は通常のろ過法でろ液と菌体
部に分離する。得られたろ液をダイヤイオンＨＰ−２０
カラムに吸着せしめ、水洗後５０％アセトン水で溶出す
る。その溶出画分を濃縮後酢酸エチル、ブタノールで順
次抽出する。
部に分離する。得られたろ液をダイヤイオンＨＰ−２０
カラムに吸着せしめ、水洗後５０％アセトン水で溶出す
る。その溶出画分を濃縮後酢酸エチル、ブタノールで順
次抽出する。
【００１４】ブタノール層の減圧濃縮物について、水−
メタノールで展開するＣＨＰ−２０カラムクロマトグラ
フィーにかける。得られた活性画分について、ＬＨ−２
０カラムクロマトグラフィー（移動層：メタノール）に
かけ、さらにＯＤＳカラムクロマトグラフィー（移動
層：水−メタノール）にかけＮＦ００２３３Ａを得る。
メタノールで展開するＣＨＰ−２０カラムクロマトグラ
フィーにかける。得られた活性画分について、ＬＨ−２
０カラムクロマトグラフィー（移動層：メタノール）に
かけ、さらにＯＤＳカラムクロマトグラフィー（移動
層：水−メタノール）にかけＮＦ００２３３Ａを得る。
【００１５】上記のようにして得られた生理活性物質Ｎ
Ｆ００２３３Ａの理化学的性質を下記に示す。
Ｆ００２３３Ａの理化学的性質を下記に示す。
【００１６】１）外観；黄色粉末 ２）分子量；６１４ ３）分子式；Ｃ33Ｈ58Ｏ8 Ｓ ４）溶解性；低級アルコールに可溶、ヘキサン、石油エ
ーテル、水に不溶 ５）シリカゲル薄層クロマトグラフィーによるＲｆ値；
クロロホルム−メタノール（５：１）の展開溶媒で０．
４を示す。 ６）紫外部吸収スペクトル；図１に示す。 ７）赤外部吸収スペクトル；臭化カリウム錠剤で測定し
たスペクトルを図２に示す。 ８）水素核磁気共鳴スペクトル；重ジメチルスルホキシ
ド中で測定したスペクトルを図３に示す。 ９）炭素核磁気共鳴スペクトル；重ジメチルスルホキシ
ド中で測定したスペクトルを図４に示す。 １０）呈色反応；バニリン硫酸、ヨウ素に陽性。
ーテル、水に不溶 ５）シリカゲル薄層クロマトグラフィーによるＲｆ値；
クロロホルム−メタノール（５：１）の展開溶媒で０．
４を示す。 ６）紫外部吸収スペクトル；図１に示す。 ７）赤外部吸収スペクトル；臭化カリウム錠剤で測定し
たスペクトルを図２に示す。 ８）水素核磁気共鳴スペクトル；重ジメチルスルホキシ
ド中で測定したスペクトルを図３に示す。 ９）炭素核磁気共鳴スペクトル；重ジメチルスルホキシ
ド中で測定したスペクトルを図４に示す。 １０）呈色反応；バニリン硫酸、ヨウ素に陽性。
【００１７】医薬品として使用する場合の製剤化および
投与方法は従来公知の種々の方法が適用できる。すなわ
ち、投与方法としては注射、経口、直腸投与などが可能
である。製剤形態としては注射剤、粉末剤、顆粒剤、錠
剤、坐剤などの形態がとり得る。
投与方法は従来公知の種々の方法が適用できる。すなわ
ち、投与方法としては注射、経口、直腸投与などが可能
である。製剤形態としては注射剤、粉末剤、顆粒剤、錠
剤、坐剤などの形態がとり得る。
【００１８】製剤化の際にＮＦ００２３３Ａに悪影響を
与えない限り、医薬用に用いられる種々の補助剤、すな
わち、担体やその他の助剤、例えば安定剤、防腐剤、無
痛化剤、乳化剤等が必要に応じて使用されうる。製剤に
おいて、ＮＦ００２３３Ａの含量は製剤形態等により広
範囲に変えることが可能であり、一般にはＮＦ００２３
３Ａを０．０１〜１００％（重量）、好ましくは０．１
〜７０％（重量）含有し、残りは通常医薬用に使用され
る担体その他の補助剤からなる。
与えない限り、医薬用に用いられる種々の補助剤、すな
わち、担体やその他の助剤、例えば安定剤、防腐剤、無
痛化剤、乳化剤等が必要に応じて使用されうる。製剤に
おいて、ＮＦ００２３３Ａの含量は製剤形態等により広
範囲に変えることが可能であり、一般にはＮＦ００２３
３Ａを０．０１〜１００％（重量）、好ましくは０．１
〜７０％（重量）含有し、残りは通常医薬用に使用され
る担体その他の補助剤からなる。
【００１９】ＮＦ００２３３Ａの投与量は症状等により
異なるが、成人１人１日当り０．０１〜８００mg程度で
ある。連投を必要とする場合には１日当り使用量をおさ
えることが好ましい。
異なるが、成人１人１日当り０．０１〜８００mg程度で
ある。連投を必要とする場合には１日当り使用量をおさ
えることが好ましい。
【００２０】
【作用】以下に実験例を挙げて、ＮＦ００２３３Ａのフ
ォスフォジエステラーゼ阻害作用について述べる。
ォスフォジエステラーゼ阻害作用について述べる。
【００２１】実験例１．ウシ・フォスフォジエステラー
ゼの調製 屠殺後のウシ気道平滑筋５０ｇをはさみおよびメスで細
切して５倍溶のＥＤＴＡ２ｍＭを含む２０ｍＭトリス緩
衝液（ｐＨ７．４）に懸濁し、ポリトロンホモジナイザ
ーによって破砕してフォスフォジエステラーゼ粗酵素液
を調製した。10,000×ｇにて２０分間遠心分離を行い上
清を可溶性フォスフォジエステラーゼ粗酵素液とする。
更にＱ−セファロース・ファーストフロー・カラム（１
００ｍｌ）に可溶性粗酵素画分を添加し緩衝液にて洗浄
後、５０ｍＭ〜１Ｍ酢酸ナトリウムの濃度勾配にて溶出
する。０．７Ｍ酢酸ナトリウムで溶出されるフォスフォ
ジエステラーゼ活性画分を粗酵素液とした。
ゼの調製 屠殺後のウシ気道平滑筋５０ｇをはさみおよびメスで細
切して５倍溶のＥＤＴＡ２ｍＭを含む２０ｍＭトリス緩
衝液（ｐＨ７．４）に懸濁し、ポリトロンホモジナイザ
ーによって破砕してフォスフォジエステラーゼ粗酵素液
を調製した。10,000×ｇにて２０分間遠心分離を行い上
清を可溶性フォスフォジエステラーゼ粗酵素液とする。
更にＱ−セファロース・ファーストフロー・カラム（１
００ｍｌ）に可溶性粗酵素画分を添加し緩衝液にて洗浄
後、５０ｍＭ〜１Ｍ酢酸ナトリウムの濃度勾配にて溶出
する。０．７Ｍ酢酸ナトリウムで溶出されるフォスフォ
ジエステラーゼ活性画分を粗酵素液とした。
【００２２】実験例２．フォスフォジエステラーゼ活性
の測定 フォスフォジエステラーゼ活性は３’，５’−サイクリ
ック・アデノシン・モノフォスフェイト（シグマ社、米
国、以後ｃＡＭＰと称する）を基質として用い、反応
後、残存したｃＡＭＰを高速液体クロマトグラフィーで
測定した。０．３ｍｌ容量プラスチックチューブに以下
の添加物：０．０２ｍｇ／ｍｌｃＡＭＰ、２．５ｍＭジ
チオスレイトール、６ｍＭ塩化マグネシウム、５０ｍＭ
トリス緩衝液（ｐＨ８．０）、１μｌのフォスフォジエ
ステラーゼ酵素液及び評価サンプルを加え、最終容量を
水で２００μｌに調製する。混合物を攪拌し、３７℃・
６０分間インキュベートする。各チューブに２００ｍＭ
テトラエチレンジアミン水溶液２０μｌを添加すること
によって反応を停止させる。本溶液２０μｌを高速液体
クロマトグラフィー（ＯＤＳカラム：３．９ｍｍφ×１
５０ｍｍ、ＷＡＴＥＲＳ社、米国）にかけ残存するｃＡ
ＭＰを測定した。この方法により測定した本発明化合物
のフォスフォジエステラーゼ阻害活性値を〔表１〕に示
す。
の測定 フォスフォジエステラーゼ活性は３’，５’−サイクリ
ック・アデノシン・モノフォスフェイト（シグマ社、米
国、以後ｃＡＭＰと称する）を基質として用い、反応
後、残存したｃＡＭＰを高速液体クロマトグラフィーで
測定した。０．３ｍｌ容量プラスチックチューブに以下
の添加物：０．０２ｍｇ／ｍｌｃＡＭＰ、２．５ｍＭジ
チオスレイトール、６ｍＭ塩化マグネシウム、５０ｍＭ
トリス緩衝液（ｐＨ８．０）、１μｌのフォスフォジエ
ステラーゼ酵素液及び評価サンプルを加え、最終容量を
水で２００μｌに調製する。混合物を攪拌し、３７℃・
６０分間インキュベートする。各チューブに２００ｍＭ
テトラエチレンジアミン水溶液２０μｌを添加すること
によって反応を停止させる。本溶液２０μｌを高速液体
クロマトグラフィー（ＯＤＳカラム：３．９ｍｍφ×１
５０ｍｍ、ＷＡＴＥＲＳ社、米国）にかけ残存するｃＡ
ＭＰを測定した。この方法により測定した本発明化合物
のフォスフォジエステラーゼ阻害活性値を〔表１〕に示
す。
【００２３】
【表１】 このようにＮＦ００２３３Ａはフォスフォジエステラー
ゼに対して強い阻害作用を示し、そのＩＣ50値は１．０
８×１０-5Ｍである。
ゼに対して強い阻害作用を示し、そのＩＣ50値は１．０
８×１０-5Ｍである。
【００２４】
【実施例】以下に本発明の実施例を示すが、これは単な
る一例であって何等本発明を限定するものではなく、種
々の変法が可能である。 製造法 ロータリー型振とう機用５００ｍｌ三角フラスコに澱粉
２．０％、グルコース２．０％、コーンスチープリカー
１．５％、ペプトン０．３％、酵母エキス０．２％、炭
酸カルシウム０．２％、燐酸２カリウム０．２％、硫酸
マグネシウム０．０５％塩化コバルト０．０００１％、
プロナールＳＴ−１０．０１％の培地（ｐＨ６．５）１
００ｍｌを分注し、１２０℃、２０分間オートクレーブ
滅菌した。これにＮＦ ００２３３株（工業技術院生命
工学工業研究所菌寄第Ｐ−１５１９０）の１白金耳を接
種し、２５℃、２２０回転／分、の条件で２日間振とう
培養した。これとは別にロータリー型振とう機用５００
ｍｌ三角フラスコに澱粉２．０％、グルコース２．０
％、コーンスチープリカー１．５％、ペプトン０．３
％、酵母エキス０．２％、炭酸カルシウム０．２％、燐
酸２カリウム０．２％、硫酸マグネシウム０．０５％塩
化コバルト０．０００１％、プロナールＳＴ−１０．０
１％の培地（ｐＨ６．５）１００ｍｌを分注し、１２０
℃、２０分間オートクレーブ滅菌したフラスコに前記の
培養液１ｍｌを移植し、２５℃、２２０回転／分、の条
件で５日間振とう培養した。
る一例であって何等本発明を限定するものではなく、種
々の変法が可能である。 製造法 ロータリー型振とう機用５００ｍｌ三角フラスコに澱粉
２．０％、グルコース２．０％、コーンスチープリカー
１．５％、ペプトン０．３％、酵母エキス０．２％、炭
酸カルシウム０．２％、燐酸２カリウム０．２％、硫酸
マグネシウム０．０５％塩化コバルト０．０００１％、
プロナールＳＴ−１０．０１％の培地（ｐＨ６．５）１
００ｍｌを分注し、１２０℃、２０分間オートクレーブ
滅菌した。これにＮＦ ００２３３株（工業技術院生命
工学工業研究所菌寄第Ｐ−１５１９０）の１白金耳を接
種し、２５℃、２２０回転／分、の条件で２日間振とう
培養した。これとは別にロータリー型振とう機用５００
ｍｌ三角フラスコに澱粉２．０％、グルコース２．０
％、コーンスチープリカー１．５％、ペプトン０．３
％、酵母エキス０．２％、炭酸カルシウム０．２％、燐
酸２カリウム０．２％、硫酸マグネシウム０．０５％塩
化コバルト０．０００１％、プロナールＳＴ−１０．０
１％の培地（ｐＨ６．５）１００ｍｌを分注し、１２０
℃、２０分間オートクレーブ滅菌したフラスコに前記の
培養液１ｍｌを移植し、２５℃、２２０回転／分、の条
件で５日間振とう培養した。
【００２５】得られた培養液（１０Ｌ）を通常のろ過方
法でろ液と菌体に分離した。得られたろ液をダイヤイオ
ンＨＰ−２０カラム（１Ｌ）に吸着せしめ、水（１
Ｌ），２０％アセトン水（２Ｌ）で順次洗浄し、５０％
アセトン水（２Ｌ）で溶出した。その溶出画分を５００
ｍｌまで濃縮し、酢酸エチル、ブタノールで順次抽出し
た。ブタノール層の減圧濃縮物（３．６４３ｇ）につい
て、メタノール水（０〜１００％）で展開するＣＨＰ−
２０カラムクロマトグラフィー（φ３×１５ｃｍ）にか
けた。メタノール濃度が８０〜８４％で溶出した活性画
分を濃縮し、濃縮乾固物（０．４２７ｇ）を得た。この
濃縮乾固物（０．１３３ｇ）をＬＨ−２０カラムクロマ
トグラフィー（φ３×９０ｃｍ、移動相：メタノール）
にかけ活性画分（０．０４２ｇ）を得、さらにＯＤＳカ
ラムクロマトグラフィー（資生堂社製、ＣＡＰＣＥＬＬ
ＰＡＫ、移動相：メタノール−５ｍＭ−Ｎａ2ＨＰＯ4
（８５：１５））にかけ精製し、ＬＨ−２０カラムクロ
マトグラフィーにより脱塩することでＮＦ００２３３Ａ
（１５．５ｍｇ）を得た。精製したＮＦ００２３３Ａを
用いて、外観、分子量、溶解性、シリカゲル薄層クロマ
トグラフィーによるＲｆ値、紫外部吸収スペクトル、赤
外吸収スペクトル、1Ｈ−ＮＭＲスペクトル、13Ｃ−Ｎ
ＭＲスペクトルを測定した。ＮＦ００２３３Ａの理化学
的性質は前記した通りの値を示した。
法でろ液と菌体に分離した。得られたろ液をダイヤイオ
ンＨＰ−２０カラム（１Ｌ）に吸着せしめ、水（１
Ｌ），２０％アセトン水（２Ｌ）で順次洗浄し、５０％
アセトン水（２Ｌ）で溶出した。その溶出画分を５００
ｍｌまで濃縮し、酢酸エチル、ブタノールで順次抽出し
た。ブタノール層の減圧濃縮物（３．６４３ｇ）につい
て、メタノール水（０〜１００％）で展開するＣＨＰ−
２０カラムクロマトグラフィー（φ３×１５ｃｍ）にか
けた。メタノール濃度が８０〜８４％で溶出した活性画
分を濃縮し、濃縮乾固物（０．４２７ｇ）を得た。この
濃縮乾固物（０．１３３ｇ）をＬＨ−２０カラムクロマ
トグラフィー（φ３×９０ｃｍ、移動相：メタノール）
にかけ活性画分（０．０４２ｇ）を得、さらにＯＤＳカ
ラムクロマトグラフィー（資生堂社製、ＣＡＰＣＥＬＬ
ＰＡＫ、移動相：メタノール−５ｍＭ−Ｎａ2ＨＰＯ4
（８５：１５））にかけ精製し、ＬＨ−２０カラムクロ
マトグラフィーにより脱塩することでＮＦ００２３３Ａ
（１５．５ｍｇ）を得た。精製したＮＦ００２３３Ａを
用いて、外観、分子量、溶解性、シリカゲル薄層クロマ
トグラフィーによるＲｆ値、紫外部吸収スペクトル、赤
外吸収スペクトル、1Ｈ−ＮＭＲスペクトル、13Ｃ−Ｎ
ＭＲスペクトルを測定した。ＮＦ００２３３Ａの理化学
的性質は前記した通りの値を示した。
【００２６】
【発明の効果】以上より明らかなように、本発明の生理
活性物質ＮＦ００２３３Ａ又はその薬理学的に許容され
る塩はフォスフォジエステラーゼ阻害を有し、例えば抗
喘息薬、気管支拡張薬、気管支炎治療薬、抗アレルギー
薬、抗炎症薬、抗リュウマチ薬、降圧薬、狭心症治療
薬、不整脈治療薬、脳循環代謝治療薬、血液凝固阻止
薬、抗鬱薬の有効成分として、期待できる。
活性物質ＮＦ００２３３Ａ又はその薬理学的に許容され
る塩はフォスフォジエステラーゼ阻害を有し、例えば抗
喘息薬、気管支拡張薬、気管支炎治療薬、抗アレルギー
薬、抗炎症薬、抗リュウマチ薬、降圧薬、狭心症治療
薬、不整脈治療薬、脳循環代謝治療薬、血液凝固阻止
薬、抗鬱薬の有効成分として、期待できる。
【図１】ＮＦ００２３３Ａのメタノール中で測定した紫
外部吸収スペクトル
外部吸収スペクトル
【図２】ＮＦ００２３３Ａの臭化カリウム錠剤で測定し
た赤外吸収スペクトル
た赤外吸収スペクトル
【図３】ＮＦ００２３３Ａの重ジメチルスルホキシド中
で測定した水素核磁気共鳴スペクトル
で測定した水素核磁気共鳴スペクトル
【図４】ＮＦ００２３３Ａの重ジメチルスルホキシド中
で測定した炭素核磁気共鳴スペクトル
で測定した炭素核磁気共鳴スペクトル
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 35/70 ＡＢＱ Ａ６１Ｋ 35/70 ＡＢＱ ＡＢＲ ＡＢＲ ＡＢＳ ＡＢＳ ＡＢＵ ＡＢＵ ＡＣＢ ＡＣＢ ＡＣＤ ＡＣＤ ＡＣＦ ＡＣＦ Ｃ０７Ｇ 17/00 Ｃ０７Ｇ 17/00 Ｃ Ｃ１２Ｎ 1/14 Ｃ１２Ｎ 1/14 Ａ 9/99 9/99 Ｃ１２Ｐ 1/02 Ｃ１２Ｐ 1/02 Ｚ //(Ｃ１２Ｎ 1/14 Ｃ１２Ｒ 1:645） (Ｃ１２Ｐ 1/02 Ｃ１２Ｒ 1:645）
Claims (6)
- 【請求項１】下記の理化学的性質を示す生理活性物質Ｎ
Ｆ００２３３Ａ又はその薬理学的に許容される塩 １）外観；黄色粉末 ２）分子量；６１４ ３）分子式；Ｃ33Ｈ58Ｏ8 Ｓ ４）溶解性；低級アルコールに可溶、ヘキサン、石油エ
ーテル、水に不溶。 ５）シリカゲル薄層クロマトグラフィーによるＲｆ値；
クロロホルム−メタノール（５：１）の展開溶媒で０．
４を示す。 ６）紫外部吸収スペクトル；図１に示す。 ７）赤外部吸収スペクトル；臭化カリウム錠剤で測定し
たスペクトルを図２に示す。 ８）水素核磁気共鳴スペクトル；重ジメチルスルホキシ
ド中で測定したスペクトルを図３に示す。 ９）炭素核磁気共鳴スペクトル；重ジメチルスルホキシ
ド中で測定したスペクトルを図４に示す。 １０）呈色反応；バニリン−硫酸、ヨウ素に陽性。 - 【請求項２】ケトメラ（Chaetomella ）属に属し、生理
活性物質ＮＦ００２３３Ａを生産する能力を有する微生
物を培地に培養し、培養物中に生理活性物質ＮＦ００２
３３Ａを生成蓄積せしめ、これを採取する事を特徴とす
る請求項１記載の生理活性物質ＮＦ００２３３Ａの製造
法。 - 【請求項３】請求項１記載の生理活性物質ＮＦ００２３
３Ａ又はその薬理学的に許容される塩を有効成分とする
抗喘息薬、気管支拡張薬、気管支炎治療薬、抗アレルギ
ー薬、抗炎症薬、抗リウマチ薬、降圧薬、狭心症治療
薬、不整脈治療薬、脳循環代謝改善薬、血液凝固阻止
薬、抗鬱薬。 - 【請求項４】請求項１記載の生理活性物質ＮＦ００２３
３Ａ又はその薬理学的に許容される塩を有効成分とする
フォスフォジエステラーゼ阻害剤。 - 【請求項５】請求項１記載の生理活性物質ＮＦ００２３
３Ａ又はその薬理学的に許容される塩を有効成分とす医
薬。 - 【請求項６】生理活性物質ＮＦ００２３３Ａを生産する
能力を有するケトメラＮＦ００２３３（Chaetomella ra
phigera NF 00233) 。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7299353A JPH09118625A (ja) | 1995-10-25 | 1995-10-25 | 新規生理活性物質ｎｆ００２３３ａ、その製造法及びその用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7299353A JPH09118625A (ja) | 1995-10-25 | 1995-10-25 | 新規生理活性物質ｎｆ００２３３ａ、その製造法及びその用途 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09118625A true JPH09118625A (ja) | 1997-05-06 |
Family
ID=17871465
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7299353A Pending JPH09118625A (ja) | 1995-10-25 | 1995-10-25 | 新規生理活性物質ｎｆ００２３３ａ、その製造法及びその用途 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH09118625A (ja) |
-
1995
- 1995-10-25 JP JP7299353A patent/JPH09118625A/ja active Pending
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