JPH09110815A - フェニルヒドラジン誘導体および細胞傷害防御剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 生体内での活性酸素種の消去効果に優れ、活
性酸素種による細胞傷害に基づく疾病の予防および治療
に優れた効果を発揮する細胞傷害防御剤を得る。 【解決手段】 下式で表わされるフェニルヒドラジン誘
導体を有効成分とする細胞傷害防御剤。 【化１】 （式中、Ｒ¹は炭素数５〜２２の飽和もしくは不飽和ア
ルキル基を示す。Ｒ²およびＲ³は、Ｒ²が水素原子、Ｒ³
が水素原子もしくはフェニル基、またはＲ²とＲ³とが結
合したエチレン基もしくはプロピレン基を示す。）

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は新規かつ有用なフェ
ニルヒドラジン誘導体、ならびにこのフェニルヒドラジ
ン誘導体を有効成分とする薬剤であって、活性酸素種に
よる細胞傷害に基づく疾病を予防および治療するための
細胞傷害防御剤に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】生体内には多数の活性酸素消去システム
があり、酸化的なストレスから生体を保護している。そ
れらの防御システムの乱れから生じた活性酸素が様々な
疾病の発現に関与していることが明らかにされた。特に
近年、動脈硬化の発症機序に活性酸素による血管内皮細
胞の傷害が深く関与していることが注目されている。

【０００３】活性酸素種による細胞傷害は、炎症や脳・
心臓・循環器・消化器などに発生する各種疾患の一部と
みなされ、現在までにも生体内においてこれらの活性酸
素種を消去する薬剤の検討が行われてきた。例えば、活
性酸素の消去や過酸化脂質の分解などの作用を有する抗
酸化性化合物が活性酸素消去剤として多方面からのアプ
ローチによって開発されてきた（ラジカル消去剤、メビ
オ、５、９０〜９４、１９８８）。

【０００４】しかし、現在までに検討されてきたスーパ
ーオキシドディスムターゼを始めとする酵素類は、分子
量が大きく組織移行性が否定的であることや、安定性に
も問題が残る。また、ビタミンＥやビタミンＣは、生体
を用いた実験で安定性や活性酸素消去作用が充分ではな
い等の難点が残る。

【０００５】ところで、本発明のフェニルヒドラジン誘
導体の一部に類似した構造をもつインドリン誘導体が、
Hypertension, 15, 224(1990) に記載されているが、細
胞傷害防御効果については全く記載されていない。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、細胞
内に容易に取り込まれ、優れた細胞傷害防御効果を発揮
するとともに、低毒性である新規かつ有用なフェニルヒ
ドラジン誘導体、およびこれを有効成分とする細胞傷害
防御剤を提供することである。

【０００７】

【課題を解決するための手段】一般的に生体内で細胞、
例えば血管内皮細胞に傷害を与える物質としては過酸化
脂質およびスーパーオキシド、ヒドロキシルラジカル、
一重項酸素、過酸化水素などの活性酸素種が知られてい
る。本発明者らは、⁵¹Ｃｒでラベルした培養血管内皮細
胞を、活性化した白血球により傷害させ、⁵¹Ｃｒの放出
量により細胞傷害を定量化する実験系をつくり、各種化
合物の血管内皮細胞傷害抑制効果を種々検討した結果、
後述の一般式（１）で表わされるフェニルヒドラジン誘
導体に強い抑制効果があることを見出し、本発明を完成
した。

【０００８】すなわち、本発明は次のフェニルヒドラジ
ン誘導体およびそれを有効成分とする細胞傷害防御剤で
ある。 （１） 下記一般式（１）で表わされるフェニルヒドラ
ジン誘導体。

【化２】 （式中、Ｒ¹は炭素数５〜２２の飽和もしくは不飽和ア
ルキル基を示す。Ｒ²およびＲ³は、Ｒ²が水素原子、Ｒ³
が水素原子もしくはフェニル基、またはＲ²とＲ³とが結
合したエチレン基もしくはプロピレン基を示す。） （２） 上記（１）記載のフェニルヒドラジン誘導体を
有効成分とすることを特徴とする細胞傷害防御剤。

【０００９】一般式（１）おいてＲ¹で示される炭素数
５〜２２の飽和もしくは不飽和アルキル基の具体的なも
のとしては、ペンチル基、ヘキシル基、ペプチル基、オ
クチル基、ノニル基、デシル基、ウンデシル基、ドデシ
ル基、トリデシル基、テトラデシル基、ペンタデシル
基、ヘキサデシル基、ヘプタデシル基、オクタデシル
基、ノナデシル基等の直鎖飽和アルキル基；イソペンチ
ル基、ネオペンチル基、tert−ペンチル基、イソヘキシ
ル基等の分岐鎖飽和アルキル基；cis−９−テトラデセ
ニル基、trans−３−ヘキサデセニル基、cis−９−ヘキ
サデセニル基、cis−６−オクタデセニル基、cis−９−
オクタデセニル基、trans−９−オクタデセニル基、cis
−１１−オクタデセニル基、cis−９−エイコセニル
基、cis−１３−ドコセニル基、２，４−ヘキサジエニ
ル基、cis−９，cis−１２−オクタデカジエニル基、ci
s−６，cis−９−オクタデカジエニル基、cis−９，cis
−１２，cis−１５−オクタデカトリエニル基、cis−
６，cis−９，cis−１２−オクタデカトリエニル基、ci
s−９，trans−１１，trans−１３−オクタデカトリエ
ニル基、cis−５，cis−８，cis−１１，cis−１４−エ
イコサテトラエニル基、cis−５，cis−８，cis−１
１，cis−１４−，cis−１７−エイコサペンタエニル
基、cis−４，cis−７，cis−１０，cis−１３，cis−
１６−ドコサペンタエニル基、cis−４，cis−７，cis
−１０，cis−１３，cis−１６，cis−１９−ドコサヘ
キサエニル基等の不飽和結合を１〜６個有するアルキル
基などがあげられる。

【００１０】一般式（１）においてＲ²は水素原子、Ｒ³
は水素原子もしくはフェニル基である。またＲ²とＲ³と
は結合していてもよく、この場合Ｒ²とＲ³とから形成さ
れる基はエチレン基もしくはプロピレン基である。Ｒ²
とＲ³とが結合している場合、一般式（１）で表わされ
るフェニルヒドラジン誘導体は下記一般式（１ａ）、Ｒ
²とＲ³とが結合していない場合、一般式（１）で表わさ
れるフェニルヒドラジン誘導体は下記一般式（１ｂ）で
表わされる。

【化３】 （式中、Ｒ⁴は水素原子もしくはメチル基、Ｒ⁵は水素原
子もしくはフェニル基、Ｒ¹は前記と同じものを示
す。）

【００１１】一般式（１ａ）で表わされるフェニルヒド
ラジン誘導体は、例えば次のような方法により合成する
ことができる。まず、インドリンまたは２−メチルイン
ドリンを亜硝酸、亜硝酸塩、亜硝酸メチル、亜硝酸エチ
ル等のニトロソ化試薬を用いて常法によりニトロソ化
し、ニトロソ体を得る。次に得られたニトロソ体を水素
化リチウムアルミニウム等の還元剤を用いて常法により
還元し、ヒドラジン類を得る。次に得られたヒドラジン
類に酸ハロゲン化物またはカルボン酸などを常法により
反応させてアシル化することにより、一般式（１ａ）で
表わされるフェニルヒドラジン誘導体を製造することが
できる。

【００１２】上記反応は下記反応式（２ａ）で表わされ
る。式中、Ｒ¹およびＲ⁴は前記と同じものを示す。

【化４】

【００１３】一般式（１ｂ）で表わされるフェニルヒド
ラジン誘導体は、例えば次のような方法により合成する
ことができる。フェニルヒドラジンまたはジフェニルヒ
ドラジンに酸ハロゲン化物またはカルボン酸などを常法
により反応させてアシル化することにより、一般式（１
ｂ）で表わされるフェニルヒドラジン誘導体を製造する
ことができる。なお、フェニルアミン（アニリン）また
はジフェニルアミンを出発原料とし、前記（１ａ）で表
わされるフェニルヒドラジン誘導体の製造方法と同様に
してニトロソ化したのち還元し、フェニルヒドラジンま
たはジフェニルヒドラジンを得ることができる。

【００１４】ジフェニルヒドラジンに酸ハロゲン化物を
反応させる反応は下記反応式（２ｂ）で表わされる。式
中、Ｒ¹は前記と同じものを示す。

【化５】

【００１５】このようにして得られる本発明のフェニル
ヒドラジン誘導体は、抽出、再結晶、クロマトグラフィ
ーなどの公知の方法により単離、精製することができ
る。

【００１６】本発明の細胞傷害防御剤は一般式（１）で
表わされるフェニルヒドラジン誘導体を有効成分として
含有するものである。本発明の細胞傷害防御剤は、活性
酸素種による細胞傷害を防御するものであり、虚血性心
疾患、虚血性脳疾患、循環器疾患（例えば動脈硬化
等）、消化器疾患（例えば消化管、肝臓、膵臓などの疾
患）、皮膚疾患、癌、腎炎、肺疾患などの疾患および炎
症に対して有効である。

【００１７】一般式（１）で表わされるフェニルヒドラ
ジン誘導体においては、Ｒ¹がcis−９−オクタデセニル
基の場合に特に細胞傷害防御効果が高く、好ましく使用
できる。

【００１８】本発明の細胞傷害防御剤は、一般式（１）
で表わされるフェニルヒドラジン誘導体をそれ自体公知
の薬理的に許容される担体、賦形剤、崩壊剤、矯正剤、
増量剤、希釈剤、溶解補助剤などと混合し、公知の方法
に従って医薬組成物、例えば錠剤、カプセル剤、顆粒
剤、散剤、粉末剤、丸剤、ドリンク剤、注射剤、点滴
剤、坐剤などの形態に製剤化することができる。このよ
うな製剤は経口的もしくは非経口的に投与することがで
きる。

【００１９】投与量は投与対象、投与経路、症状などに
よっても異なるが、経口的に投与する場合、一般式
（１）で表わされるフェニルヒドラジン誘導体として通
常１回量として約０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重、好
ましくは０．０１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重を１日１〜３回
程度投与する。また非経口的に投与する場合、例えば坐
剤では一般式（１）で表わされるフェニルヒドラジン誘
導体として約０．０５〜２０ｍｇ／ｋｇ体重を１日１〜
２回投与することが好ましい。

【００２０】

【発明の効果】本発明のフェニルヒドラジン誘導体は、
新規かつ有用である。本発明のフェニルヒドラジン誘導
体は、細胞内に容易に取り込まれ、優れた細胞傷害防御
効果を発揮するとともに、低毒性である。本発明の細胞
傷害防御剤は上記フェニルヒドラジン誘導体を有効成分
として含有しているので、生体内での活性酸素種の消去
効果に優れており、このため活性酸素種による細胞傷害
に基づく疾病の予防および治療に優れた効果を発揮す
る。

【００２１】

〔Ｎ−（２，３−ジヒドロ−２−メチル−１Ｈ−インドール−１−イル）−cis−９−オクタデセンアミドの合成〕

１）１−アミノ−２−メチルインドリンの合成 ２−メチルインドリン１．５ｇ（１１．３ｍｍｏｌ）を
テトラヒドロフラン１０ｍｌに溶解し、氷冷下、１０％
亜硝酸エチル（エタノール溶液）１６．５ｍｌ（亜硝酸
エチルとして１７．３ｍｍｏｌ）を滴下した。

【００２２】滴下後、氷浴を外し、室温に戻しつつ攪拌
し、１時間半後、溶媒を留去した。得られた暗褐色油状
物１．８３６ｇにテトラヒドロフラン２０ｍｌを加え、
氷冷下、水素化リチウムアルミニウム８５５ｍｇ（２
２．５ｍｍｏｌ）を少しずつ加え攪拌した。

【００２３】０℃で１時間後、含水エーテルにて過剰の
水素化リチウムアルミニウムを分解後、有機層を無水硫
酸マグネシウムにて乾燥した。溶媒留去後、得られた褐
色油状物１．４０ｇをシリカゲルカラムクロマトグラフ
ィー（溶出液：ヘキサン→１：９（ｖ／ｖ）酢酸エチル
／ヘキサン）にて精製し、目的物９３２ｍｇを無色針状
晶として得た（収率５５．８％）。この化合物の分析結
果は次の通りである。

【００２４】質量分析：Fab（POS) マトリックス；ｍ−ニトロベンジルアルコール m/z；148［Ｍ]⁺，132 IR (KBr，cm^-1)：3300，3160，1620，1590，1470，1460

【００２５】¹H-NMR (δ(ppm)，270MHz，CDCl₃/TMS)：
1.39(d，J=6.3Hz，3H)，2.54(dd，J=10.9，14.8Hz，1
H)，3.04(dd，J=7.6，14.8Hz，1H)，3.16-3.33(m，1
H)，3.44(br s，2H)，6.71-6.84(m，2H)，7.06(d，J=7.
3Hz，1H)，7.14(t，J=7.6Hz，1H)¹³ C-NMR(δ(ppm)，67.8MHz，CDCl₃/TMS)：18.11，36.1
5，68.03，109.56，120.00，124.19，127.40，127.87，
154.64

【００２６】上記結果から、得られた化合物は１−アミ
ノ−２−メチルインドリンであることを確認した。

【００２７】２）Ｎ−（２，３−ジヒドロ−２−メチル
−１Ｈ−インドール−１−イル）−cis−９−オクタデ
センアミドの合成 上記１）で得た１−アミノ−２−メチルインドリン５０
ｍｇ（０．３４ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン１ｍｌ
に溶解し、氷冷下、トリエチルアミン０．０６ｍｌ
（０．４３ｍｍｏｌ）、次いでオレオイルクロリド１２
２ｍｇ（０．４１ｍｍｏｌ）を２ｍｌのテトラヒドロフ
ランに溶解した溶液をゆっくり滴下、攪拌した。

【００２８】０℃で２時間後、反応液を１Ｎ塩酸中に注
ぎ、酢酸エチルにて抽出し、有機層を１Ｎ水酸化ナトリ
ウム、次いで水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムにて乾
燥した。溶媒留去後、得られた無色油状物１６０ｍｇを
シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出液：ヘキサ
ン→１：９（ｖ／ｖ）酢酸エチル／ヘキサン）にて精製
し、目的物１３４ｍｇを白色ワックス状物として得た
（収率９６．２％）。この化合物の分析結果は次の通り
である。

【００２９】質量分析：Fab（POS) マトリックス；ｍ−ニトロベンジルアルコール m/z；412［Ｍ]⁺，147，132¹ H-NMR (δ(ppm)，270MHz，アセトンd₆/TMS)：0.88(t，
J=6.9Hz，3H)，1.10-1.45(m，22H)，2.04(m，2H)，2.25
(t，J=7.3Hz，2H)，2.40-2.60(m，1H)，3.02-3.20(m，1
H)，3.86-4.05(m，1H)，5.28-5.42(m，2H)，6.42-7.18
(m，4H)，8.64(br s，1H)

【００３０】¹³C-NMR(δ(ppm)，67.8MHz，アセトンd₆/T
MS)：14.34，18.90，23.29，26.36，27.78〜32.60，34.
84，36.55，66.72，109.36，120.39，125.05，127.71，
127.83，130.53，130.56，152.83，172.18

【００３１】上記結果から、下記式（３）で表わされる
Ｎ−（２，３−ジヒドロ−２−メチル−１Ｈ−インドー
ル−１−イル）−cis−９−オクタデセンアミドが得ら
れたことを確認した。

【化６】

【００３２】実施例１−２ 〔Ｎ−（２，３−ジヒドロ−２−メチル−１Ｈ−インド
ール−１−イル）デカンアミドの合成〕 実施例１−１と同様にして、１−アミノ−２−メチルイ
ンドリン１００ｍｇ（０．６７ｍｍｏｌ）、デカノイル
クロリド１５４ｍｇ（０．８１ｍｍｏｌ）およびトリエ
チルアミン０．１１ｍｌ（０．７９ｍｍｏｌ）より、目
的物２０８ｍｇを無色固体として定量的に得た。この化
合物の分析結果は次の通りである。

【００３３】質量分析：Fab（POS) マトリックス；ｍ−ニトロベンジルアルコール m/z；302［Ｍ]⁺，132¹ H-NMR (δ(ppm)，270MHz，アセトンd₆/TMS)：0.87(3
H)，1.15-1.45(m，12H)，2.05(m，2H)，2.25(t，J=7.4H
z，2H)，2.38-2.6(m，1H)，3.0-3.18(m，1H)，3.85-4.0
5(m，1H)，6.40-7.15(m，4H)，8.64(br s，1H)¹³ C-NMR(δ(ppm)，67.8MHz，アセトンd₆/TMS)：14.33，
18.92，23.31，26.38-32.60，34.86，36.55，66.74，10
9.38，120.41，125.07，127.73，127.83，152.85，172.
20

【００３４】上記結果から、下記式（４）で表わされる
Ｎ−（２，３−ジヒドロ−２−メチル−１Ｈ−インドー
ル−１−イル）デカンアミドが得られたことを確認し
た。

【化７】

【００３５】実施例１−３ 〔Ｎ−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イ
ル）デカンアミドの合成〕 実施例１−１と同様にして、インドリン１ｇ（８．４ｍ
ｍｏｌ）から１−アミノインドリン５５４ｍｇ（褐色油
状物、収率４９．２％）を得、１−アミノインドリン１
００ｍｇ（０．７５ｍｍｏｌ）、デカノイルクロリド１
７１ｍｇ（０．９０ｍｍｏｌ）、およびトリエチルアミ
ン０．１２ｍｌ（０．８６ｍｍｏｌ）より、目的物１７
２ｍｇを淡黄色固体として得た（収率８０．０％）。こ
の化合物の分析結果は次の通りである。

【００３６】質量分析：Fab（POS) マトリックス；ｍ−ニトロベンジルアルコール m/z；288［Ｍ]⁺，133¹ H-NMR (δ(ppm)，270MHz，アセトンd₆/TMS)：0.87(3
H)，1.15-1.45(m，12H)，2.05(m，2H)，2.22(t，J=7.4H
z，2H)，2.93(t，J=8.2Hz，2H)，3.61(t，J=8.2Hz，2
H)，6.44-7.18(m，4H)，8.68(br s，1H)

【００３７】上記結果から、下記式（５）で表わされる
Ｎ−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−１Ｈ−インドール−１
−イル）デカンアミドが得られたことを確認した。

【化８】

【００３８】実施例１−４ 〔Ｎ′，Ｎ′−ジフェニル−cis−９−オクタデセノヒ
ドラジドの合成〕塩化メチレン１５ｍｌに１，１−ジフ
ェニルヒドラジン塩酸塩４４０ｍｇ（２．０ｍｍｏ
ｌ）、トリエチルアミン０．５８ｍｌ（４．２ｍｍｏ
ｌ）を加え、氷冷下、塩化メチレン５ｍｌにオレオイル
クロリド０．５ｇ（１．７ｍｍｏｌ）を溶解した溶液を
少しずつ加え、２時間攪拌した。

【００３９】反応液を１Ｎ塩酸溶液に注ぎ、塩化メチレ
ンにて抽出し、有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶
液、次いで水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムにて乾燥
した。溶媒留去後、得られた７２１ｍｇのワックス状粗
精製物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出
液：ヘキサン→１：９（ｖ／ｖ）酢酸エチル／ヘキサ
ン）にて精製し、目的物５７８ｍｇを白色アモルファス
として得た（収率７７．５％）。この化合物の分析結果
は次の通りである。

【００４０】質量分析：Fab（POS) マトリックス；ｍ−ニトロベンジルアルコール m/z；448［Ｍ]⁺，184，168 IR(KBr，cm^-1)：3270，2920，2850，1670，1600，1500

【００４１】¹H-NMR (δ(ppm)，270MHz，アセトンd₆/TM
S)：0.88(t，J=6.9Hz，3H)，1.14-1.44(m，22H)，1.67
(m，2H)，2.05(m，4H)，2.3(t，J=7.4Hz，2H)，5.26-5.
43(m，2H)，6.90-7.40(m，10H)，9.55(br s，1H)

【００４２】上記結果から、下記式（６）で表わされる
Ｎ′，Ｎ′−ジフェニル−cis−９−オクタデセノヒド
ラジドが得られたことを確認した。

【化９】

【００４３】実施例１−５ 〔Ｎ′，Ｎ′−ジフェニルデカノヒドラジドの合成〕実
施例１−４と同様にして、１，１−ジフェニルヒドラジ
ン塩酸塩６９４ｍｇ（３．１ｍｍｏｌ）、デカノイルク
ロリド５００ｍｇ（２．６ｍｍｏｌ）、トリエチルアミ
ン０．９１ｍｌ（６．５ｍｍｏｌ）を用いて、目的物６
６７ｍｇ（無色粉末状結晶、クロロホルム−ヘキサンよ
り再結晶）を得た（収率７５．２％）。この化合物の分
析結果は次の通りである。

【００４４】質量分析：Fab（POS) マトリックス；ｍ−ニトロベンジルアルコール m/z；338［Ｍ]⁺，184，168¹ H-NMR (δ(ppm)，270MHz，CDCl₃/TMS)：0.87(t，J=6.7
Hz，3H)，1.12-1.43(m，12H)，1.54(m，2H)，2.38(t，J
=7.6Hz，2H)，6.95-7.38(m，10H)

【００４５】上記の結果から、下記式（７）で表わされ
るＮ′，Ｎ′−ジフェニルデカノヒドラジドが得られた
ことを確認した。

【化１０】

【００４６】実施例１−６ 〔Ｎ′−フェニル−cis−９−オクタデセノヒドラジド
の合成〕塩化メチレン１５ｍｌにフェニルヒドラジン
０．２１６ｇ（２．０ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン
０．２８ｍｌ（２．０ｍｍｏｌ）を加え、氷冷下、塩化
メチレン５ｍｌにオレオイルクロリド０．５ｇ（１．７
ｍｍｏｌ）を溶解した溶液を少しずつ加え、２時間攪拌
した。

【００４７】反応液を１Ｎ塩酸溶液に注ぎ、塩化メチレ
ンにて抽出し、有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶
液、次いで水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムにて乾燥
した。溶媒留去後、得られた橙色固体４９２ｍｇをシリ
カゲルカラムクロマトグラフィー（溶出液：ヘキサン→
２：８（ｖ／ｖ）酢酸エチル／ヘキサン）にて精製し、
目的物３８２ｍｇを白色固体として得た（収率６１．７
％）。この化合物の分析結果は次の通りである。

【００４８】質量分析：Fab（POS) マトリックス；ｍ−ニトロベンジルアルコール m/z；373［Ｍ+1]⁺，108，92 IR (KBr，cm^-1)：2920，2850，1670，1640

【００４９】¹H-NMR (δ(ppm)，270MHz，アセトンd₆/TM
S)：0.88(t，J=6.9Hz，3H)，1.15-1.45(m，22H)，1.64
(m，2H)，2.05(m，4H)，2.26(t，J=7.4Hz，2H)，5.27-
5.43(m，2H)，6.68-6.90(m，3H)，7.06-7.20(m，2H)

【００５０】上記結果から、下記式（８）で表わされる
Ｎ′−フェニル−cis−９−オクタデセノヒドラジンが
得られたことを確認した。

【化１１】

【００５１】実施例１−７ 〔Ｎ′−フェニルデカノヒドラジドの合成〕実施例１−
６と同様にして、フェニルヒドラジン３４０ｍｇ（３．
１ｍｍｏｌ）、デカノイルクロリド５００ｍｇ（２．６
ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン０．４４ｍｌ（３．２ｍ
ｍｏｌ）より、目的物３３８ｍｇ（無色粉末、クロロホ
ルム−ヘキサンより再結晶）を得た（収率４９．１
％）。この化合物の分析結果は次の通りである。

【００５２】質量分析：Fab（POS) マトリックス；ｍ−ニトロベンジルアルコール m/z；263［Ｍ+1]⁺，108，92 IR (neat，cm^-1)：2920，2850，1660，1640

【００５３】¹H-NMR (δ(ppm)，270MHz，アセトンd₆/TM
S):0.88(3H)，1.18-1.48(m，12H)，1.64(m，2H)，2.26
(t，J=7.3Hz，2H)，6.70-7.0(m，3H)，7.10-7.25(m，2
H)，8.94(br s，1H)

【００５４】上記結果から、下記式（９）で表わされる
Ｎ′−フェニルデカノヒドラジドが得られたことを確認
した。

【化１２】

【００５５】実施例２−１ 表１に示すフェニルヒドラジン誘導体の薬理試験を次の
ようにして行った。 １）ウシ血管内皮細胞の培養 ウシ頸動脈血管５〜１０ｃｍを摘出した後、抗生物質
（ペニシリン、ストレプトマイシンなど）を添加したＰ
ＢＳ（リン酸緩衝溶液）で軽く洗い、同様の抗生物質含
有ＭＥＭ（最小必須培地：minimum essential medium）
培地に浸し、氷冷して培養室に持ち帰った。

【００５６】血管はさらに抗生物質含有ＭＥＭ培地で数
回洗浄した。その後、血管に付着している脂肪をきれい
に取り去り、ハサミで分岐部を切り、その分岐部を通る
形で血管を縦に切り開いた。平らな固定面の上に血管を
内膜面を上にし、引っ張った形でピン固定した。＃１１
のメスを用い、内膜面に軽く触れるようにして内皮細胞
を剥離した。その際、メスを予め２０％ＦＢＳ（ウシ胎
児血清）含有ＭＥＭ培地（抗生物質を含有している）に
湿らせて、メスの動きをスムーズにすると共に平滑筋細
胞の混入を防いだ。

【００５７】メスに付着した内皮細胞を上記ＭＥＭ培地
１０ｍｌに分散させ、８００ｒｐｍで５分間遠心分離し
た。その後、沈渣に上記ＭＥＭ培地を加え、ピペットで
内皮細胞が数十個集まった稲穂状になるまで分散し、プ
ラスチックシャーレに播き培養した。

【００５８】２）血管内皮細胞を用いた活性酸素傷害防
御試験 ９６穴マイクロプレートに上記の方法で単離して培養し
たウシ頸動脈内皮細胞を、１穴あたり２×１０⁴個の細
胞を播き、２日間培養し、コンフルエントにした。その
中に、表１に示した各種被検薬を最終目的濃度になるよ
うに添加し、２４時間培養して被検薬を内皮細胞に取り
込ませた。その後⁵¹Ｃｒ−クロム酸ナトリウムを１穴あ
たり０．５μＣｉ加えて、さらに１８時間培養し、細胞
内に⁵¹Ｃｒ−クロム酸ナトリウムを取り込ませた。

【００５９】その後、ハンクス平衡塩溶液（ＧＩＢＣＯ
ＢＲＬ社製）で３回洗浄し、４×１０⁵ｃｅｌｌ／ｗ
ｅｌｌの白血球（ヒト末梢血よりフィコール（商品名、
ファルマシア社製）で分離した好中球）を加え、１２−
Ｏ−テトラデカノイル−ホルボール−１３−アセテート
を１０ｎｇ／ｍｌ加えて刺激した。この化合物は白血球
膜に作用してＮＡＤＰＨ依存性の五単糖リン酸回路を刺
激して活性酸素の産生を促進し、内皮細胞を傷害するも
のである。この時、活性酸素により傷害を受けた細胞か
ら⁵¹Ｃｒが放出される。

【００６０】５時間後に培養液中に放出されてきた⁵¹Ｃ
ｒの放射活性をγ−シンチレーション・カウンターで測
定し、被検薬取り込み状態での放出量とした。内皮細胞
内に取り込まれた⁵¹Ｃｒの総量は、０．１％のトリトン
Ｘ−１００を加えて細胞膜を溶かすことによって、培養
液に放出された放射活性を測定し、細胞内総⁵¹Ｃｒ量と
した。また、被検薬、白血球および１２−Ｏ−テトラデ
カノイル−ホルボール−１３−アセテートを添加しない
時の放射活性量を無刺激時放出量とした。

【００６１】内皮細胞の傷害率は、下記数式〔１〕で導
かれる⁵¹Ｃｒの放出率（specific release of ⁵¹Ｃｒ；
ＳＲ）により定量化した。

【数１】

【００６２】次に、内皮細胞傷害抑制率を下記数式
〔２〕より求めた。結果を表１に示す。

【数２】

【００６３】比較例１−１ 下記式（１０）で表わされる化合物を被検薬として、実
施例２−１に準じて薬理試験を行った。結果を表１に示
す。

【化１３】

【００６４】比較例１−２ 下記式（１１）で表わされる化合物を被検薬として、実
施例２−１に準じて薬理試験を行った。結果を表１に示
す。

【化１４】

【００６５】

【表１】 **：ｐ＜０．０１ * ：ｐ＜０．０５対コントロール

【００６６】表１の結果から明らかなように、表１のフ
ェニルヒドラジン誘導体は細胞内に容易に取り込まれ、
活性酸素種による内皮細胞傷害を抑制した。

【００６７】参考例１ 表２に示すフェニルヒドラジン誘導体を被検薬として、
細胞毒性を被検薬処理時の細胞内総⁵¹Ｃｒ量を測定する
ことにより調べた。まず実施例２−１の２）と同様にし
て血管内皮細胞内に被検薬および⁵¹Ｃｒ−クロム酸ナト
リウムを取り込ませた。次に、前記ハンクス平衡塩溶液
で洗浄後、活性化好中球で内皮細胞傷害を惹起させた。
この時、被検薬に細胞毒性があればハンクス平衡塩溶液
で洗浄することにより、死んだ細胞は洗い流され、被検
薬処理時の細胞内総⁵¹Ｃｒ量は減少する。そこで、被検
薬無処理時の細胞内総⁵¹Ｃｒ量に対する被検薬処理時の
細胞内総⁵¹Ｃｒ量を百分率で表した。結果を表２に示
す。

【００６８】

【表２】 **：ｐ＜０．０１ * ：ｐ＜０．０５対コントロール

【００６９】表２の結果から明らかなように、被検薬処
理による有意な減少は認められず、毒性のないことが示
された。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ０７Ｄ 209/08 Ｃ０７Ｄ 209/08 215/58 215/58

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 下記一般式（１）で表わされるフェニル
   ヒドラジン誘導体。 【化１】 （式中、Ｒ¹は炭素数５〜２２の飽和もしくは不飽和ア
   ルキル基を示す。Ｒ²およびＲ³は、Ｒ²が水素原子、Ｒ³
   が水素原子もしくはフェニル基、またはＲ²とＲ³とが結
   合したエチレン基もしくはプロピレン基を示す。）
2. 【請求項２】 請求項１記載のフェニルヒドラジン誘導
   体を有効成分とすることを特徴とする細胞傷害防御剤。