EA028077B1

EA028077B1 - N-(4-гидрокси-4-метилциклогексил)-4-фенилбензолсульфонамиды и n-(4-гидрокси-4-метилциклогексил)-4-(2-пиридил)бензолсульфонамиды и их терапевтическое применение

Info

Publication number: EA028077B1
Application number: EA201592308A
Authority: EA
Inventors: Лиза Пейтел; Стефен Аллан Смит; Иан Роберт Грейг; Сэмюэл Кэмерон Уильямс
Original assignee: Пимко 2664 Лимитед
Priority date: 2013-06-26
Filing date: 2014-06-24
Publication date: 2017-10-31
Also published as: US9624167B2; IL243103A0; KR20160024392A; US20180037544A1; EP3013799A1; JP2016529218A; WO2014207445A1; US10029979B2; DK3013799T3; PL3013799T3; US10233147B2; SG11201510646SA; BR112015031527B1; US20170217881A1; SI3013799T1; US9796670B2; BR112015031527A2; ZA201600202B; CY1119438T1; EP3013799B1

Abstract

Изобретение относится в целом к области терапевтических соединений. В частности, изобретение относится к некоторым замещенным N-(4-гидрокси-4-метилциклогексил)-4-фенилбензолсульфонамидным и N-(4-гидрокси-4-метилциклогексил)-4-(2-пиридил)бензолсульфонамидным соединениям (в совокупности именуемым в документе НМС соединениями), которые подходят, например, для лечения нарушений (например, заболеваний), включая воспаление и/или разрушение суставов и/или потерю костной ткани; нарушения, опосредованные чрезмерной и/или неадекватной и/или длительной активацией иммунной системы; воспалительные и аутоиммунные нарушения, например ревматоидный артрит; псориаз; псориатический артрит; хроническую обструктивную болезнь легких (ХОБЛ); астму; атеросклероз; воспалительное заболевание кишечника; анкилозирующий спондилоартрит; рассеянный склероз; системную красную волчанку; синдром Шегрена; расстройство, связанное с потерей костной ткани, такое как потеря костной массы, связанная с чрезмерной активностью остеокластов при ревматоидном артрите, остеопороз, заболевание костей, связанное с раком, или болезнь Педжета; раковое заболевание, такое как гематологическая злокачественная опухоль, такая как множественная миелома, лейкоз или лимфома, или солидный рак, такой как рак мочевого пузыря, рак молочной железы (женской и/или мужской), рак толстой кишки, почечно-клеточная карцинома, рак почки, рак легкого, рак поджелудочной железы, рак желудка, рак предстательной железы, рак мозга, рак кожи, рак щитовидной железы, базально-клеточная адамантинома или меланома; расстройство, связанное с фиброзом, такое как системный склероз или склеродермия; или редкий васкулит, такой как болезнь Бехчета. Изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим такие соединения, и к применению таких соединений и композиций, например, в терапии.

Description

Настоящее изобретение относится в целом к области терапевтических соединений. В частности, настоящее изобретение относится к некоторым замещенным Ы-(4-гидрокси-4-метилциклогексил)-4фенилбензолсульфонамидным и Ы-(4-гидрокси-4-метилциклогексил)-4-(2-пиридил)бензолсульфонамидным соединениям (в совокупности именуемым в настоящем документе НМС соединениями), которые подходят, например, для лечения нарушений (например, заболеваний), включая воспаление и/или разрушение суставов и/или потерю костной ткани; нарушения, опосредованные чрезмерной и/или неадекватной и/или длительной активацией иммунной системы; воспалительные и аутоиммунные нарушения, например ревматоидный артрит; псориаз; псориатический артрит; хроническая обструктивная болезнь легких (ХОБЛ); астма; атеросклероз; воспалительное заболевание кишечника; анкилозирующий спондилоартрит; рассеянный склероз; системную красную волчанку; синдром Шегрена; расстройство, связанное с потерей костной ткани, такое как потеря костной массы, связанная с чрезмерной активностью остеокластов при ревматоидном артрите, остеопороз, заболевание костей, связанное с раком, или болезнь Педжета; раковое заболевание, такое как гематологическая злокачественная опухоль, такая как множественная миелома, лейкоз или лимфома, или солидный рак, такой как рак мочевого пузыря, рак молочной железы (женской и/или мужской), рак толстой кишки, почечно-клеточная карцинома, рак почки, рак легкого, рак поджелудочной железы, рак желудка, рак предстательной железы, рак мозга, рак кожи, рак щитовидной железы, базально-клеточная адамантинома или меланома; расстройство, связанное с фиброзом, такое как системный склероз или склеродермия; или редкий васкулит, такой как болезнь Бехчета. Настоящее изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим такие соединения, и к применению таких соединений и композиций, например, в терапии.

Уровень техники

В настоящем документе приведен ряд публикаций с целью более полного описания и раскрытия изобретения и существующего уровня техники в области, к которой относится изобретение. Полное содержание каждой из указанных публикаций включено в настоящее описание посредством ссылки в той же степени, как если бы для каждой отдельной публикации конкретно и индивидуально было указано ее включение посредством ссылки.

Во всем тексте настоящего описания, включая последующую формулу изобретения, если иное не следует из контекста, слово включать и его вариации, такие как включает и включающий, подразумевают включение заявленного целого или стадии, или группы целых или стадий, но не исключение любого другого целого или стадии, или группы целых или стадий.

Следует отметить, что в настоящем описании и прилагаемой формуле изобретения неопределенная и определенная формы единственного числа включают определяемые объекты во множественном числе, если контекст явно не предписывает иное. Таким образом, например, ссылка на фармацевтический носитель включает смеси двух или более таких носителей и т.п.

В настоящем документе диапазоны часто выражены как от примерно одного конкретного значения и/или до примерно другого конкретного значения. Когда выражен такой диапазон, другой вариант реализации включает величины от одного конкретного значения и/или до другого конкретного значения. Аналогично, когда значения выражены в виде приблизительных величин с использованием ранее упомянутого примерно, следует понимать, что конкретные значения составляют другой вариант реализации.

Настоящее описание содержит информацию, которая может быть полезной для понимания настоящего изобретения. Это не является признанием того, что любая такая информация представляет собой уровень техники или относится к описываемому в настоящем документе изобретению, или что любая специально или неявно упоминаемая публикация представляет собой уровень техники.

Хроническое воспалительное заболевание.

Воспаление представляет собой иммунную реакцию тканей вследствие телесных повреждений. Острое воспаление представляет собой нормальную защитную реакцию, которая защищает и исцеляет организм после физической травмы или инфекции, характеризующуюся жаром, отеком и покраснением в области повреждения. Однако если воспаление сохраняется в течение длительного периода, оно становится хроническим. Хроническое воспаление является признаком и сопутствующим фактором ряда болезненных состояний, включая ревматоидный артрит, воспалительное заболевание кишечника, системную красную волчанку, рассеянный склероз и псориаз.

Воспалительный процесс является сложным и включает биологический каскад молекулярных и клеточных сигналов, которые изменяют физиологические реакции. В области повреждения клетки высвобождают молекулярные сигналы, такие как цитокины и интерлейкины, которые вызывают ряд изменений в пораженной области, включая расширение кровеносных сосудов, увеличение притока крови, повышение проницаемости сосудов, вторжение лейкоцитов (белых кровяных клеток) и экссудацию жидкостей, содержащих белки, например иммуноглобулины (антитела). В воспалительном каскаде участву- 1 028077 ют несколько различных типов лейкоцитов, в том числе гранулоциты, моноциты и лимфоциты. Тем не менее, хроническое воспаление в первую очередь опосредуется моноцитами и долгоживущими макрофагами; моноциты созревают в макрофаги, когда они покидают кровоток и входят в ткани. Макрофаги поглощают и переваривают микроорганизмы, чужеродные организмы и стареющие клетки и высвобождают несколько различных химических медиаторов, в том числе фактор некроза опухоли альфа (ΦΗΟα), интерлейкины (например, 1Ь-1, 1Ь-6, 1Ь-12 и Ш-23) и простагландины, которые закрепляют воспалительную реакцию. На более поздних стадиях в пораженные ткани входят другие клетки, в том числе лимфоциты.

Таким образом, существует общая патология, лежащая в основе широкого спектра хронических воспалительных состояний. Кроме того, признаки хронического воспаления наблюдаются также и при других заболеваниях, включая раковые заболевания и метаболические заболевания, такие как ожирение и диабет.

Одним из наиболее распространенных хронических воспалительных состояний является ревматоидный артрит (РА) - состояние, которое затрагивает до 2% мирового населения. Хотя это комплексное заболевание, существует ряд физиологических, клеточных и биохимических факторов, связанных с прогрессированием РА, которые являются общими для целого ряда других заболеваний, в том числе заболеваний с компонентом аутоиммунного ответа (например, рассеянный склероз), воспаления (например, атеросклероз и рак), потери костной ткани (например, остеопороз) и пролиферации (например, гематологические опухоли). Это делает понимание РА важным не только для изучения более широкого круга заболеваний, но и предполагает, что фармацевтические агенты, которые работают через модификацию указанных общих процессов, могут быть применимы не только для РА. Последнее подтверждается клинической практикой, где было показано, что лекарственные средства против РА имеют широкую применимость для множества других состояний.

Ревматоидный артрит и связанные аутоиммунные/воспалительные заболевания.

Ревматоидный артрит (РА) представляет собой аутоиммунное заболевание, характеризующееся хроническим воспалением синовиальной выстилки множества суставов в сочетании с прогрессивной деградацией суставов. РА обычно затрагивает суставы запястья и рук, а также может затрагивать локти, плечи, бедра, колени и шею, приводя к сильной боли и инвалидности (см., например, 8со11 с1 а1., 2010). По оценкам Всемирной организации здравоохранения, 23,7 млн человек страдают от РА, частота заболеваемости которым с возрастом растет.

Точная причина РА, как и всех аутоиммунных нарушений, остается неясной, хотя возможные триггеры включают снижение аутотолерантности, ненормальный ответ на факторы окружающей среды, инфекционные агенты и гормональный стимул (см., например, К1аге8ко§ с1 а1., 2006; РиекТеш с1 а1., 2005).

На клеточном уровне развитие РА, как правило, начинается с Т-клеток, проникающих в синовиальную мембрану, выстилающую пораженный сустав; затем это приводит к активации моноцитов, макрофагов и синовиальных фибробластов путем контакта клетка-клетка и последующему высвобождению различных цитокинов, в том числе фактора некроза опухоли альфа (ΦΗΟα) и провоспалительных интерлейкинов, таких как 1Ь-1, 1Ь-6, 1Ь-12 и 1Ь-23 (см., например, АкТгу с1 а1., 2011). Эти провоспалительные цитокины затем играют важную роль в организации нескольких сложных каскадов передачи сигнала, включающих ΝΡΚΒ, регуляторный фактор интерферонов (ΙΚΡ), ТоП-подобные рецепторы (ТЬК) и пути 1ак/8ТАТ (см., например, Ма1етиб с1 а1., 2010), которые приводят к индукции генов, кодирующих различные продукты, которые усугубляют воспалительную реакцию, а также способствуют разрушению ткани. Указанные продукты включают ферменты, разрушающие ткани, такие как коллагеназы, матриксные металлопротеиназы (ММР), катепсины и другие провоспалительные факторы, такие как селектины, интегрины, лейкотриены, простагландины, хемокины и другие цитокины (см., например, Мс1ипе8 с1 а1., 2007; 8то1еи с1 а1., 2003). Кроме того, указанные клетки также увеличивают выработку ММР, что приводит к деградации внеклеточного матрикса и потере хряща в суставе (см., например, 8нн. 2010) - процесс, в который также вовлечен специализированный класс клеток, известных как остеокласты, и фактор, известный как лиганд рецептора-активатора ядерного фактора каппа-В (ΚΑΝΚΤ) (см., например, Такауаиа§1, 2009).

ΚΑΝΚΤ является важным фактором для генерации остеокластов, и активируемая ΚΑΝΚΤ выработка приводит к росту дифференциации остеокластов и, в конечном счете, разрушению кости (см., например, Ьои§ с1 а1., 2012). Воспалительная реакция в РА приводит к накоплению лимфоцитов, дендритных клеток и макрофагов, все из которых действуют локально для продуцирования цитокинов и других провоспалительных медиаторов, таких как ΦΗΟα и 1Ь-6, которые в дальнейшем усиливают влияние ΚΑΝΚΤ на разрушение костной ткани. Кроме того, воспалительный каскад приводит к гипоплазии синовиоцитов (см., например, Такауаиа§1, 2009), которая, в свою очередь, приводит к утолщению и васкуляризации синовиальной оболочки в деструктивную и агрессивную ткань, известную как паннус. Паннус содержит как остеокласты, разрушающие кость, так и металлопротеиназы, которые участвуют в разрушении хряща. Таким образом, ось ΚΑΝΚΤ имеет решающее значение для прогрессирования и патологии РА, а также остеоиммунной системы (взаимодействие между иммунной и костной системами), которая является

- 2 028077 основной в патологии ряда различных болезненных состояний, описанных ниже.

Роль ΦΗΟα в РА.

Суперсемейство рецепторов и лигандов ФНО играет ключевую роль в этиологии воспаления и связанной местной и системной потере костной ткани. ΦΗΟα является мощным провоспалительным агентом, который регулирует многие аспекты функции макрофагов. Он быстро высвобождается после травмы, инфекции или воздействия бактериальных ЬР§ и, было обнаружено, что он является одним из наиболее распространенных ранних медиаторов в воспаленной ткани. Его основная роль помимо различных функций состоит в организации выработки провоспалительного каскада цитокинов. В дополнение к провоспалительным цитокинам, ΦΗΟα также увеличивает уровень медиаторов трансдукции сигнала липидов, таких как простагландины. Основываясь на указанном действии, ΦΗΟα был предложен в качестве главного действующего фактора в воспалительной клеточной активации и рекрутменте, и предполагается, что он играет важную роль в развитии многих хронических воспалительных заболеваний, включая ревматоидный артрит (см., например, Ни, 2005; РеШтапп с1 а1., 2001; Втеппап с1 а1., 1996; Втеппап е! а1., 1992). Важность ΦΗΟα в РА подчеркивается обнаружением того, что антитела, блокирующие ΦΗΟα, могут предотвращать воспаление в животных моделях РА, и что анти-ΦΗΟα терапия в настоящее время является наиболее эффективным средством лечения РА (см., например, Р1зе1зку, 2012, и дополнительно подробно описано ниже).

Сам ΦΗΟα инициирует сигнальный каскад, который приводит к активации факторов транскрипции ΝΡΚΒ и АР-1 (см., например, Раташез^атаи е! а1., 2010). Связывание ΦΗΟα и 1Ь-1 с их соответствующими рецепторами приводит к рекрутированию нижележащих переносчиков сигналов, называемых ΤΚΑΡ. Дополнительные киназы рекрутируются ΤΚΑΡ3, и полученный киназный комплекс активирует путь МАР-киназ, в конечном счете приводя к активации АР-1 и фосфорилированию 1кВ киназы. 1кВ является ингибитором ΝΡΚΒ, который действует, предотвращая транслокацию ΝΡΚΒ к ядру. Φοсфοрилирοвание 1кВ киназой приводит к деградации 1кВ. После деградации 1кВ ΝΡΚΒ мигрирует к ядру, где он способствует транскрипции анти-апоптотических генов, которые способствуют выживанию Т- и В-клеток, тем самым продлевая иммунный ответ. Это продление воспалительной реакции является основной причиной хронической природы РА. Ο важности активации ΝΡΚΒ свидетельствует тот факт, что ингибирование активности ΝΡκΒ ингибирующими пептидами может предотвратить артрит на животных моделях РА (см., например, Лш1 е! а1., 2004).

Другие ключевые факторы при ревматоидном артрите.

Как описано выше, ряд факторов в дополнение к ΦΗΟα и ΝΡΚΒ способствует воспалению при РА и других хронических воспалительных заболеваниях. Среди них 1Ь-6 и регуляторные факторы интерферона (ΙΚΡ).

Интерлейкин 6 (1Ь-6) представляет собой провоспалительный цитокин, уровни которого увеличиваются в результате активации различных клеток иммунной системы в ходе воспаления при РА преимущественно макрофагами и Т-клетками. Οη проявляет плейотропные эффекты в ходе болезни посредством своей ключевой роли в ответной реакции острой фазы и активно участвует в управлении переходом от острого к хроническому воспалению. Οη осуществляет это путем изменения состава белых кровяных телец инфильтрата в воспалительном пространстве, перемещения его от нейтрофилов к моноцитам/макрофагам (см., например, СаЬау, 2006). Кроме того, 1Ь-6 оказывает стимулирующее действие на Ти В-клетки, таким образом, способствуя хроническим воспалительным ответам, а также остеокластам, способствуя тем самым потере костной ткани. Указанные эффекты участвуют в патологии широкого спектра аутоиммунных/воспалительных заболеваний помимо РА, в том числе системной красной волчанки, атеросклероза, псориаза, псориатического артрита, астмы, хронической обструктивной болезни легких (ΧΟΒΛ), синдрома Шегрена, атеросклероза и воспалительного заболевания кишечника, а также раковых заболеваний, таких как множественная миелома и рак предстательной железы. Кроме того, 1Ь-6 вовлечен в заболевания, связанные с потерей костной ткани (например, остеопороз), заболевания, опосредованные фиброзом (например, системный склероз), диабеты, отторжения трансплантата, различные виды рака (в том числе, например, множественную миелому, лимфому, рак предстательной железы), нейродегенеративные заболевания (например, болезни Альцгеймера), психические расстройства (например, депрессии) и некоторые редкие васкулиты (например, болезнь Бехчета); для полного обзора см., например, Ктсои, 2012.

Регуляторные факторы интерферонов (ΙΚΡ) состоят из семейства транскрипционных факторов с различными функциями в регуляции транскрипции клеточных реакций в отношении здоровья и болезней. ΙΚΡ обычно содержат ДОК-связывающий домен на Ν-конце, где большинство членов также содержит ΙΚΡ-связанный домен на С-конце, который опосредует белок-белковые взаимодействия. Десять ΙΚΡ и несколько кодированных вирусами гомологов ΙΚΡ были идентифицированы у млекопитающих. ΙΚΡ активируются в ответ на эндогенные и микробные раздражители во время иммунного ответа и выборочно и совместно модулируют экспрессию ключевых цитокинов и транскрипционных факторов, участвующих в различных воспалительных процессах. ^пример, стимуляция рецептора бактериального липополисахарида ТЬК-4 активирует сигнальный каскад, который активирует как ΝΡΚΒ, так и ΙΚΡ-5, в то

- 3 028077 время как ΙΚΡ-7 активируется процессом, задействующим 8ТАТ семейство факторов транскрипции, которые также, но независимо друг от друга, активируется 1Ь-6.

Активация ΙΚΡ приводит к ряду последующих эффектов, включая спецификацию пути макрофагов (см., например, Кгаи8§гиЪег с1 а1., 2011), дифференциацию Т-хелперов (см., например, Ζΐκπίβ е! а1., 2012) и пролиферацию В-клеток (см., например, М1иат1ио е! а1., 2012). Эти разнообразные роли в заболеваниях подчеркиваются данными, полученным с помощью моделей животных с нокаутом, которые показывают, например, снижение уровней 1Ь-6 и ФНОа в ответ на воспалительные стимулы (см., например, Такаока е! а1., 2005).

В дополнение к биологической роли в ΙΚΡ, описанной выше, несколько членов семейства ΙΡΡ были генетически связаны с предрасположенностью к воспалительным заболеваниям. Например, полиморфизм в ΙΡΡ-3 и ΙΚΡ-7 связан с восприимчивостью к системной красной волчанке (см., например, Акайо§Ы е! а1., 2008; Рц е! а1., 2011). Кроме того, ΙΚΡ-5, который контролирует путь макрофагов, связан с восприимчивостью к РА, системной красной волчанке, гранулематозу Вегенера, синдрому Шегрена и системному склерозу (см., например, 8йапР е! а1., 2012; Ни е! а1., 2011).

Лечение ревматоидного артрита.

Ранние методы лечения РА сосредоточены на контроле симптомов заболевания, главным образом, путем уменьшения воспаления, а не замедления развития заболевания. Указанные лекарственные средства включают НПВП, такие как аспирин, диклофенак и напроксен. Воспаление далее контролировалось глюкокортикоидами и их комбинациями с НПВП при условии достаточно эффективного краткосрочного контроля воспаления. Совсем недавно был введен более агрессивный подход к лечению РА, начиная с возникновения заболевания, с использованием так называемых базисных противоревматических препаратов, модифицирующих течение болезни (ΌΜΑΚΌ), которые действуют путем замедления или даже предотвращения прогрессирования заболевания. Они включают ряд старых лекарственных средств, в том числе соли золота; сульфасалазин; противомалярийные средства, такие как гидроксихлорохин; Дпеницилламин; иммунодепрессанты, такие как микофенольная кислота, азатиоприн, циклоспорин А, такролимус и сиролимус; миноциклин; лефлуномид и, самое главное, метотрексат (см., например, 8то1еп е! а1., 2003).

Метотрексат в настоящее время является золотым стандартом терапии для сравнений клинических испытаний, и в целом используется в сочетании с более новыми методами лечения. Он эффективен у большинства пациентов, но в сочетании со всеми из вышеперечисленных агентов имеет значительные побочные эффекты со стороны желудочно-кишечного тракта, которые побуждают примерно 50% пациентов в конечном итоге прекратить лечение (см., например, Мойи! е! а1., 2005). Еще одним недостатком указанных более старых ΌΜΑΡΌ является время, необходимое лекарственному средству, чтобы начать действовать, которое варьируется от недель, в случае метотрексата, до месяцев, в случае солей золота. Несмотря на то, что полная ремиссия происходит только у примерно четверти пациентов, тем, у кого не возникает никакого эффекта, обычно нельзя прекратить терапию без риска возобновления симптомов заболевания в более острой форме (см., например, 8то1еп е! а1., 2003).

В последние годы появление биологических агентов направленного противовоспалительного действия совершило революцию в лечении РА. Несколько биологических агентов в настоящее время одобрены для использования при РА, в том числе биопрепараты анти-1Ь-6 и 1Ь-1, такие как тоцилизумаб (Ас1етта®) и анакинра (Кшете!®) (см., например, 8со11 е! а1., 2010). Тем не менее, первым и самым важным из биологических агентов является терапия блокатором фактора некроза опухоли (анти-ФНО).

Анти-ΦΗΟα терапия является лидирующим на рынке методом лечения РА. Доступны разнообразные анти-ФНОа агенты, в том числе нейтрализующие антитела, такие как инфликсимаб (Кетюабе®; 1&1 и 8сйетт§ Р1ои§й) и адалимумаб (Нитка®; АЪЪоИ), или рецепторы-ловушки, такие как этанерцепт (ЕпЬте1®; Ат§еи и ^уе!й), оба из которых представляют проверенные и очень эффективные методы лечения РА, а также других заболеваний, таких как болезнь Крона и псориаз. Ряд других воспалительных и аутоиммунных расстройств также исследуется в качестве потенциальных мишеней. Другие подходы к блокировке действия ФНОа включают пегилированный анти-ФНОа фрагмент цертолизумаб (Οιη/ίη®. исв). Все указанные методы лечения действуют, в конечном счете, путем предотвращения активации нижележащих эффекторов ФНОа, описанных выше, в том числе ΝΡκΒ. Тем не менее, несмотря на их успех на рынке, анти-ФНОа терапия имеет ряд побочных эффектов, включая повышенный риск некоторых злокачественных опухолей, таких как лимфома, и серьезных инфекций, таких как Легионелла и Листерия, а также повышенный риск сердечной недостаточности, реактивации гепатита В и демиелинизирующих заболеваний.

И, наконец, совсем недавно ингибитор 1АК киназы, тофацитиниб (Хе1)ат®, Ρίΐζετ) дополнил ряд методов лечения РА. Однако тофацитиниб страдает от ряда проблем с безопасностью, включая повышенный риск серьезных инфекций, а также повышенный риск желудочно-кишечных перфораций, повреждения печени и некоторых видов рака, которые, вероятно, ограничивают его использование на человеке (см., например, О'8йеа е! а1., 2013).

Таким образом, сохраняется потребность в новых и улучшенных методах лечения РА и других вос- 4 028077 палительных заболеваний с особым акцентом на повышение безопасности.

Остеоиммунная система и нарушения костей.

Термин остеоиммунная система используется для обозначения комбинированного и связанного взаимодействия между иммунной и скелетной системами.

В нормальных физиологических условиях скелетная система обеспечивает поддержку, мобильность, защиту жизненно важных органов и является минеральным резервуаром для кальция и фосфата. Для достижения и адаптации к этим функциям, скелет существует в динамическом равновесии, характеризующимся непрерывной резорбцией костей, опосредованной остеокластами, и осаждением костей, опосредованной остеобластами (см., например, КаткеШу εΐ а1., 2002). Этот биологический процесс был назван ремоделирование костей, и он происходит в сочетании с остеобластами, продуцирующими основные факторы дифференциации остеокластов, включая ΚΑΝΚΤ, описанные выше, и формированием костей, стимулированным остеокластами путем продуцирования остеобластных медиаторов по мере деградации костной ткани.

Как врожденные, так и адаптивные иммунные клетки оказывают влияние на остеокласты и остеобласты посредством различных медиаторов клеточной поверхности и секретируемых медиаторов (см., например, Такауаиа§1, 2009). Активация рецептора ΚΑΝΚΤ (ΚΑΝΚ) предшественников остеокластов запускает каскад транскрипционных изменений, который приводит к образованию остеокластов и экспрессии механизма, необходимого для резорбции кости, включая молекулы, необходимые для присоединения к кости, секрецию кислоты и протеолиз. Многие факторы транскрипции, важные для дифференцировки остеокластов являются ключевыми регуляторами иммунных реакций, такие как ΝΡΚΒ и ядерный фактор активированных Т-клеток с1 (ΝΡΑΤοΙ), и этот процесс также усиливается факторами, участвующими в воспалении, такими как ΦΗΟα и 1Ь-6.

В дополнение к своей важной роли в прогрессировании и патогенезе РА, остеоиммунная система играет важную роль в ряде других заболеваний, включая остеопороз и другие заболевания костей, и рак (см., например, ЭаПак с1 а1., 2011).

Остеопороз является распространенным заболеванием, характеризующимся снижением плотности костной ткани, ухудшением костной ткани и повышенным риском переломов. Многие факторы влияют на патогенез остеопороза, включая плохое питание, отсутствие физических нагрузок, курение и чрезмерное потребление алкоголя. Остеопороз возникает также в связи с воспалительными заболеваниями, такими как ревматоидный артрит, эндокринными заболеваниями, такими как тиреотоксикоз, и при определенной лекарственной терапии, такой как лечение глюкокортикоидами. Более того, переломы из-за хрупкости, связанной с остеопорозом, представляют собой одно из наиболее важных осложнений, которые могут возникнуть у пациентов с ревматическими заболеваниями, такими как РА, системная красная волчанка и болезнь Бехтерева.

Болезнь Педжета является распространенным состоянием неизвестной этиологии, характеризующимся повышенной потерей костной ткани и неорганизованным ремоделированием костной ткани с областями повышенной активности остеокластов и остеобластов. Хотя кости с эффектами Педжета часто плотнее, чем нормальные, аномальная архитектура вызывает механическую слабость костей, в результате чего возникает деформация кости и повышенная восприимчивость к патологическому перелому.

Было показано, что передача сигнала 1Ь-6, ΦΗΟα и ΚΑΝΚΤ играет важную роль в чрезмерной активности остеокластов и, как следствие, увеличении потери костной ткани (см., например, Таиака с1 а1., 2003; Кообшаи, 2006). Применение лекарственных средств, которые влияют на указанные пути, были подтверждены завершением клинических испытаний моноклональных антител против ΚΑΝΚΤ, АМС 162 (ПеиокцтаЬ®, Ат§еи), для лечения остеопороза/множественной миеломы, а также увеличением количества доказательств, демонстрирующих, что анти-ΦΗΟα и анти-1Ь-6 терапия также предотвращает потерю костной ткани при артритных заболеваниях (см., например, 0§а1а с1 а1., 2012; ВШаи, 2010).

Остеоиммунная система и рак.

Многие виды раковых заболеваний влияют на кости. Рак-ассоциированное заболевание костей может проявиться возникновением гиперкальциемии или развитием остеолитических и/или остеосклеротических метастазов. Увеличение остеокластной резорбции кости играет ключевую роль в патогенезе обоих состояний. Несмотря на то, что почти любой рак может быть осложнен костными метастазами, наиболее распространенными источниками являются множественная миелома, рак молочной железы и рак предстательной железы. Наиболее распространенными опухолями, связанными с гиперкальциемией, являются множественная миелома, карцинома молочной железы и карцинома легких.

Как описано выше, сигнализация ΚΑΝΚ/ΚΑΝΚΤ имеет важное значение для формирования остеокластов и резорбции костной ткани, которая происходит во время ремоделирования скелета. Наряду с тем, что физиологические уровни сигнализации ΚΑΝΚ/ΚΑΝΚΤ стимулируют пролиферацию и клеточное выживание эпителиальных клеток молочной железы, недавно было показано, что аберрантная сигнализация ΚΑΝΚ/ΚΑΝΚΤ в этих тканях влияет на возникновение и прогрессирование онкогенеза рака молочной железы, и блокирование передачи сигнала ΚΑΝΚΓ, используя деносумаб (Х§еуа®, Лт§сп). является эффективным для предотвращения вторичных осложнений костных метастазов, например патоло- 5 028077 гических переломов и гиперкальциемии у пациентов с раком молочной железы (см., например, 81е§еге с1 а1., 2011).

Терапия, которая блокирует передачу сигнала ΚΑΝΚ/ΚΑΝΚΒ, может также уменьшить способность остеотропных раковых заболеваний к метастазированию в кости. Было показано, что передача сигнала через ΚΑΝΚ на поверхности эпителиальных опухолевых клеток человека, а также клеток меланомы, вызывает реакцию хемотаксиса в указанных опухолевых клетках, в то время как в мышиной модели метастазов меланомы, терапевтическое лечение мышей с помощью остеопротегерина, который нейтрализует рецептор ΚΑΝΚΒ, ΚΑΝΚ, значительно снижало нагрузку опухоли в костях, но не в других органах.

В дополнение к роли ΚΑΝΚΚ при раке получают все больше доказательств того, что активация ΝΡΚΒ с помощью молекул, таких как ΦΗΟα, может играть важную роль в продвижении и прогрессировании как гематологических злокачественных новообразований, таких как миелома и лимфома, так и солидных опухолей, таких как рак молочной железы, предстательной железы и легких (см., например, Ваиб е! а1., 2009). Повышается осознание роли и важности воспаления и остеоиммунной системы при раке и в развитии резистентности к лучевой терапии и химиотерапевтическим агентам. Кроме того, было высказано предположение, что воспаление является на самом деле одним из основных признаков в рака (см., например, Мап1оуап1, 2009). Поэтому повышение эффективности противоракового лечения путем предотвращения активации ΝΡΚΒ является перспективной стратегией для улучшения существующих терапевтических схем и в настоящее время исследуется, прежде всего, в отношении лечения множественной миеломы.

Дефекты в нормальных путях апоптоза также вовлечены в развитие и прогрессирование роста опухолевых клеток, также как и в воспаление. Апоптоз (запрограммированная гибель клеток) играет ключевую роль в удалении аномальных клеток; дефекты в сигнальных каскадах, которые, как правило, приводят к его индукции, играют ключевую роль в онкогенезе. Лучевая терапия и многие химиотерапевтические агенты действуют, вызывая повреждение клеток, которые, как правило, индуцируют апоптоз; дефекты в пути будут также снижать эффективность таких агентов. Наиболее важными эффекторными молекулами сигнального пути, ведущего к апоптозу, являются каспазы, которые могут быть активированы рядом стимулов, в том числе связыванием ΦΗΟα с его рецептором. Мутации генов, которые кодируют каспазы, были найдены в ряде видов опухолей, в том числе желудка, молочной железы, почечных клеток и шейки матки, а также часто в Т-клеточной лимфобластной лимфоме и амелобластомах базальных клетках (см., например, РЬПейепкоу е! а1., 2004). Соединения, которые активируют каспазы и повышают чувствительность клеток к апоптозу, будут весьма эффективными в качестве терапии для лечения рака в виде отдельных агентов или для повышения эффективности существующей химиотерапии рака и лучевой терапии.

Агенты, которые предотвращают срыв воспаления остеоиммунной системы.

Авторы изобретения определили новые соединения, которые, например, предотвращают воспаление и/или потерю костной ткани, и, таким образом, могут быть использованы для лечения заболеваний с воспалительным или аутоиммунным компонентом, включая, например, ревматоидный артрит, воспалительное заболевание кишечника, системную красную волчанку, атеросклероз, астму, хроническую обструктивную болезнь легких (ХОБЛ), увеит, воспаление тазовых органов, эндометриоз, псориаз и псориатический артрит; заболевания, которые связаны с потерей костной ткани, в том числе, например, потерю костной ткани, связанную с ревматоидным артритом, остеопорозом, болезнью Педжета и множественной миеломой, а также рак, связанный с активацией ΝΡΚΒ. с аномальной передачей сигнала ΝΡΚΒ или с воспалением или перепроизводством 1Ь-6, в том числе гематологические злокачественные новообразования, такие как множественная миелома, лейкемия, Т-клеточная лимфобластная лимфома и другие лимфомы (например, неходжкинская лимфома), и солидные опухоли, такие как рак мочевого пузыря, рак молочной железы (женской и/или мужской), рак толстой кишки, рак почки, рак легких, рак поджелудочной железы, рак предстательной железы, рак мозга, рак кожи, рак щитовидной железы, меланомы и; рак, связанный с инактивацией или ухудшением каспаз-опосредованной гибели клеток, такой как рак желудка, рак молочной железы, рак почки, рак шейки матки, и адамантиномы базальных клеток; состояний, связанных с модуляцией активности ΙΚΡ-5, включая гранулематоз Вегенера и системный склероз; связанное с фиброзом перепроизводство 1Ь-6, например системный склероз или склеродермия; нейродегенеративные заболевания, связанные с перепроизводством 1Ь-6, такие как болезнь Альцгеймера; психические расстройства также связанные с перепроизводством 1Ь-6, такие как депрессия; заболевания ангиогенеза, связанные с перепроизводством 1Ь-6, такие как возрастная макулярная дегенерация и диабетическая ретинопатия, связанные с 1Ь-6 гиперплазией, такие как болезнь Кастельмана и некоторые редкие васкулиты, связанные с перепроизводством 1Ь-6, такие как болезнь Бехчета.

Не желая быть связанными какой-либо конкретной теорией, авторы изобретения полагают, что этот процесс может иметь механизм, который включает блокирование ΦΗΟα и/или передачу сигнала КАЫКЬ и/или активность ΙΚΡ, и/или ингибирование выработки 1Ь-6.

- 6 028077

Известные соединения.

Аап» еТ а1., 2010, описывает некоторые соединения, которые, по-видимому, обладают высоким сродством и являются селективными полными агонистами дофаминового рецептора Ό³. Примеры соединений, показанные в указанном документе, включают следующее (см., например, с. 18-19 и 48-50 в указанном документе):

Сйеп еТ а1., 2012 описывает аналогичные соединения.

Т§иТ§ит1 еТ а1., 2005, описывает некоторые соединения, которые, по-видимому, демонстрируют ΌΡΡ-ΐν-ингибирующую активность и, по-видимому, подходят для лечения диабета II типа и ожирения. Следующее соединение показано в примере 89 на с. 192 в указанном документе:

НабЫа еТ а1., 2007 описывает некоторые соединения, которые якобы являются подходящими в качестве модуляторов транспортеров АТФ-связывающей кассеты (АВС) или их фрагментов, в том числе трансмембранный регулятор муковисцидоза (СРТК). Следующее соединение показано в примере 208 на с. 77 в указанном документе:

Ка1§Топ еТ а1., 2005, описывает некоторые амиды дифен-1Ь-4-сульфокислоты для использования в качестве ингибиторов выживания, образования и/или активности остеокластов; ингибиторов состояний, опосредованных остеокластами и/или характеризующихся костной резорбцией; для лечения заболеваний костей, таких как остеопороз, ревматоидный артрит, заболеваний костей, связанных с раком, и болезни Педжета; и для лечения состояний, связанных с воспалением или активацией иммунной системы. Примеры соединений, показанные в указанном документе, включают следующее:

- 7 028077

Оге1§ е! а1., 2006, описывает аналогичные соединения.

Оге1§ е! а1., 2008, описывает некоторые амиды бифен-1Б-4-сульфокислот для лечения воспаления и/или разрушения суставов и/или потери костной ткани; нарушений, опосредованных чрезмерной и/или неадекватной и/или длительной активацией иммунной системы; воспалительных и аутоиммунных расстройств, например ревматоидного артрита, псориаза, псориатического артрита, хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ), атеросклероза, воспалительных заболеваний кишечника и анкилозирующего спондилита; и нарушений, связанных с потерей костной ткани, таких как потеря костной ткани, связанная с чрезмерной активностью остеокластов при ревматоидном артрите, остеопороза, заболевания костей, связанные с раком, и болезни Педжета. Примеры соединений, показанные в указанном документе, включают следующее:

Оге1§ е! а1., 2010В, описывает некоторые амиды бифен-1Б-4-сульфокислот для лечения воспаления и/или разрушения суставов и/или потери костной ткани; нарушений, опосредованных чрезмерной и/или неадекватной и/или длительной активацией иммунной системы; воспалительных и аутоиммунных расстройств, например ревматоидного артрита, псориаза, псориатического артрита, хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ), атеросклероза, воспалительных заболеваний кишечника и анкилозирующего спондилита; и нарушений, связанных с потерей костной ткани, таких как потеря костной ткани, связанная с чрезмерной активностью остеокластов при ревматоидном артрите, остеопороз, заболевания костей, связанные с раком, и болезнь Педжета, и раковых заболеваний, таких как гематологические злокачественные опухоли и солидные опухоли. Примеры соединений, показанные в указанном документе, включают следующее:

Оге1§ е! а1., 2013 описывает аналогичные соединения.

Оге1§ е! а1., 2010а, описывает некоторые амиды бифен-1Б-4-сульфокислот для лечения воспаления и/или разрушения суставов и/или потери костной ткани; нарушений, опосредованных чрезмерной и/или неадекватной и/или длительной активацией иммунной системы; воспалительных и аутоиммунных расстройств, например ревматоидного артрита, псориаза, псориатического артрита, хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ), атеросклероза, воспалительных заболеваний кишечника и анкилозирующего спондилита; и нарушений, связанных с потерей костной ткани, таких как потеря костной ткани, связанная с чрезмерной активностью остеокластов при ревматоидном артрите, остеопороз, заболевания костей, связанные с раком, и болезнь Педжета, и раковых заболеваний, таких как гематологические зло- 8 028077 качественные опухоли и солидные опухоли. Примеры соединений, показанные в указанном документе, включают следующее:

Новые соединения с улучшенными свойствами.

НМС соединения, описанные в настоящем документе, не проявляют несколько токсичных эффектов, которые присутствуют у известных соединений, особенно соединений, показанных на Оге1§ е! а1., 2010а, и демонстрируют улучшенную эффективность на моделях заболеваний.

Не будучи связанными какой-либо конкретной теорией, авторы настоящего изобретения полагают, что конкретные комбинации заместителей и их положения в биарильной кольцевой структуре приводят к необычным свойствам. В дополнение к значительному снижению острой ΐη νΐνο токсикологии, указанные комбинации избавляют соединения общей цитотоксичности, генотоксичности и побочных эффектов со стороны сердечно-сосудистой системы, присутствующих у известных соединений. В частности, НМС соединения, описанные в настоящем документе, не являются генотоксичными, демонстрируют значительное улучшение общей цитотоксичности и, по существу, не проявляют ингибирование человеческого

- 9 028077 гена специфических калиевых каналов сердца человека (НЕКС), который представляет собой основную причину побочных эффектов со стороны сердечно-сосудистой системы.

Если лекарственное средство используется в клинике, оно должно иметь соответствующий профиль безопасности и эффективности. Данное средство должно продемонстрировать приемлемую острую токсичность, достаточную для того чтобы обеспечить возможность его дозирования, исключая возможность серьезных общих побочных эффектов. Кроме того, оно не должно вызывать генетическое повреждение (генотоксичность), потому что генотоксичные агенты могут являться канцерогенными для организма человека. Клинически приемлемое лекарственное средство также не должно ингибировать НЕКС, ионный канал, который при ингибировании, может вызвать смертельное расстройство сердечной деятельности, известное как синдром удлинения от интервала рт. Наряду с этими показателями безопасности, лекарственное средство должно быть достаточно активным в отношении биологической мишени с получением требуемого терапевтического эффекта; оно должно иметь достаточную растворимость, чтобы абсорбироваться из желудочно-кишечного тракта; и оно должно иметь достаточную стабильность, чтобы оставаться в кровообращении столько, сколько требуется для достижения биологической мишени.

НМС соединения, описанные в настоящем документе, демонстрируют улучшенную эффективность в моделях ревматоидного артрита, например, по сравнению с соединениями, показанными в Сгсщ с1 а1., 2010а. Это показано как большей величиной воздействия на заболевание, так и большей активностью, оба из этих эффектов проявляются, что важно, когда НМС соединения вводят при уже установленном заболевании. Это отражает клинические условия для использования указанных соединений. Кроме того, указанные эффекты проявляются без явной токсичности.

Снижение токсикологических свойств (побочных эффектов) лекарственного средства является препятствием для разработки, равным по сложности и важности с оптимизацией фармакодинамики (действие лекарственного средства на организм) и фармакокинетики (действия тела на лекарственное средство). НМС соединения, описанные в данном документе, имеют существенные преимущества при использовании их в качестве пероральных терапевтических агентов (по сравнению с известными соединениями) за счет улучшения острой общей ш νινο токсикологии, генотоксической и цитотоксической безопасности, а также сердечно-сосудистой безопасности, с небольшим или без изменения ш νινο фармакокинетики или потери активности в отношении биологической мишени.

НМС соединения, описанные в настоящем документе, объединяют требуемые характеристики пероральных активных агентов для лечения, например, хронических воспалительных состояний, потери костной ткани и рака.

Краткое описание графических материалов

На фиг. 1 показаны шесть графиков, демонстрирующих средний артритный показатель как функцию от времени (день дозирования) для исследуемого соединения, дозированного по 10 мг/кг/сутки путем принудительного перрорального введения (незакрашенные круги), и контроля (закрашенные круги), для каждого из (А) НМС-С-02-А (сверху слева), (В) НМС-С-01-А (сверху посередине), (С) ΗΜΟ-Ν-02-Α (сверху справа), (Ό) НМС-Ν-ΟΙ-Α (снизу слева), (Е) НМС-С-01-В (снизу посередине), (Р) НМС-Ν-ΟΙ-Β (снизу справа), как описано в разделе Биологическое исследование 6 ниже.

На фиг. 2 показаны два графика, демонстрирующих средний артритный показатель как функцию от времени (день дозирования) для исследуемого соединения (незакрашенные круги, незакрашенные квадраты), контроля (закрашенные круги) и положительного контроля присутствующего на рынке лекарственного средства этанерцепт (треугольники), для каждого из (А) ΑΒΌ899 при 10 мг/кг/сутки (слева), (В) НМС-С-01-А при 0,3 и 3 мг/кг/сутки (справа), как описано в разделе Биологическое исследование 6 ниже.

На фиг. 3 показаны шесть графиков, демонстрирующих средний артритный показатель как функцию от времени (день дозирования) для исследуемого соединения (незакрашенные круги), контроля (закрашенные круги), и положительного контроля метотрексата (треугольники) для каждого из (Α) ΑΒΌ899, дозированного по 3 мг/кг/сутки (сверху слева), (В) НМС-С-01-А, дозированного по 3 мг/кг/сутки (сверху посередине), (С) НМС-Ν-ΟΙ-Α, дозированного по 3 мг/кг/сутки (сверху справа), (Ό) ΑΒΌ899, дозированного по 10 мг/кг/сутки (снизу слева), (Е) НМС-С-01-А, дозированного по 10 мг/кг/сутки (снизу посередине), и (Р) НМС-Ν-ΟΙ-Α дозированного по 10 мг/кг/сутки (снизу справа), как описано в разделе Биологическое исследование 11 ниже.

Краткое описание изобретения

Один из аспектов изобретения относится к некоторым замещенным ^(4-гидрокси-4метилциклогексил)-4-фенилбензолсульфонамидным и ^(4-гидрокси-4-метилциклогексил)-4-(2пиридил)бензолсульфонамидным соединениям (в совокупности именуемым в настоящем документе НМС соединениями), описанным в настоящем документе.

Другой аспект изобретения относится к композиции (например, фармацевтической композиции), содержащей НМС соединение, описанное настоящем документе, и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.

Другой аспект изобретения относится к способу получения композиции (например, фармацевтической композиции), включающему стадию смешивания НМС соединения, описанного в настоящем доку- 10 028077 менте, и фармацевтически приемлемого носителя или разбавителя.

Другой аспект изобретения относится к НМС соединению, описанному в настоящем документе, для применения в способе лечения организма человека или животного путем терапии, например, для применения в способе лечения нарушения (например, заболевания), описанного в настоящем документе.

Другой аспект изобретения относится к применению НМС соединения, описанного в настоящем документе, для получения лекарственного средства для лечения, например лечения нарушения (например, заболевания), описанного в настоящем документе.

Другой аспект изобретения относится к способу лечения, например, нарушения (например, заболевания), описанного в настоящем документе, включающему введение пациенту, нуждающемуся в лечении, терапевтически эффективного количества НМС соединения, описанного в настоящем документе, предпочтительно в форме фармацевтической композиции.

Другой аспект изобретения относится к набору, содержащему (а) НМС соединение, описанное в настоящем документе, предпочтительно обеспеченное в виде фармацевтической композиции и содержащееся в подходящей емкости и/или с подходящей упаковкой; и (В) инструкции по применению, например письменные указания относительно введения соединения.

Другой аспект изобретения относится к НМС соединению, которое может быть получено посредством способа синтеза, описанного в настоящем документе, или способа, включающего способ синтеза, описанный в настоящем документе.

Другой аспект настоящего изобретения относится к НМС соединению, полученному посредством способа синтеза, описанного в настоящем документе, или способа, включающего способ синтеза, описанный в настоящем документе.

Другой аспект настоящего изобретения относится к новым промежуточным соединениям, описанным в настоящем документе, которые подходят для применения в описанных в настоящем документе способах синтеза.

Другой аспект настоящего изобретения относится к применению таких новых промежуточных соединений, описанных в настоящем документе, в описанных в настоящем документе способах синтеза.

Специалисту в данной области техники будет понятно, что признаки и предпочтительные варианты реализации одного аспекта изобретения также относятся и к другим аспектам изобретения.

Подробное описание изобретения

Соединения.

Один из аспектов изобретения относится к некоторым соединениям, которые могут быть удобно описаны как замещенные Ы-(4-гидрокси-4-метилциклогексил)-4-фенилбензолсульфонамидные и N-(4гидрокси-4-метилциклогексил)-4-(2-пиридил)бензолсульфонамидные соединения.

№(4-Гидрокси-4-метилциклогексил)-4-фенилбензолсульфонамид

№(4-Гидрокси-4-метилциклогексил)-4-(2-пиридил)бензолсульфонамид

Таким образом, один из аспектов настоящего изобретения представляет собой соединение, выбранное из соединений следующих формул или их фармацевтически приемлемых солей, гидратов или сольватов (для удобства, в совокупности именуемые в настоящем документе как НМС соединения):

ΟΝ	НМС-С-01
	НМС-С-02
ц\=/ й н ν^_0Η Ρ	НМС-С-03

- 11 028077

Следует отметить, что заместители на одной стороне циклогексильного кольца (то есть -ОН и -СНз на правой стороне) могут быть расположены как транс/цис или цис/транс по отношению к остальной части молекулы (то есть на циклогексильном кольце, к которому они присоединены, по отношению к остальному соединению, к которому они присоединены в пара-положение циклогексильного кольца).

Если не указано иное, предполагается, что все такие конформации охватываются ссылкой на соединение, для которого не указана конкретная конформация.

- 12 028077

Согласно одному из вариантов реализации соединение находится в транс-ОН конформации, как, например, следующие соединения:

ΟΝ /=( / \/°^НЗУУ\=/ у н ХУън	НМС-С-01-А
СР₃ А7-ь„	НМС-С-02-А
Е_лу^СНз Р	НМС-С-ОЗ-А
ν^>=/ § V	НМС-С-04-А
^ΟΝ _	НМС-С-05-А
Р /=^ /Гу. ° ЛЛ/^СНз ^сЧХ>Тя-<Л	НМС-С-06-А
р Ι__Ν_уу^Нз ^м>=/ а«υλ» Р	ΗΜΟΝ-01-Α
Р /=^ ° _/ \/^СНз	ΗΜΟ-Ν-02-Α
/=ζ_^Λ° _ЛЛ/^СНз У,Г\=/Ч ^н νΎΐ,Η	ΗΜΟΝ-03-Α
/=<Ул ЛЛ/^СНз^гГ>=/ й ^н νΎ-·ό„ Р	ΗΜΟΝ-04-Α

- 13 028077

Согласно одному из вариантов реализации соединение находится в цис-ОН конформации, как, например, следующие соединения:

ΟΝ ΑΖΛ=Λ Ц н '-^Аон	НМС-С-01-В
Η Η~ν>_ΟΗ	НМС-С-02-В
ν^\=/ Й Η ν>_0Η Ρ	НМС-С-03-В
Й Η ννν,Η ρ'	НМС-С-04-В
	НМС-С-05-В
/=( ίι ЛЛ^^Нз ЧЯДКА.	НМС-С-06-В
1__Ν ЛЛл^СНз Ρ	ΗΜΟ-Ν-01-Β
Ρ /=( ίί ΟΛ··^³ ν_Ν'Α\=/ у Η^ν>οΗ	ΗΜΟΝ-02-Β
С1 ._( ._. Ο __, СН, ΙΙ-Ν-ΛΛ/ Й ^н νΛ_Η	ΗΜΟΝ-03-Β
С1 /=( /ГЛ, ° ЛЛ.^СНз С1—/>-(/ 5-Ν—< X νΓ>=/ Й ^Η ν^0Η Ρ	ΗΜΟΝ-04-Β

Следует отметить, что кольцо циклогексана может занять конформацию кресло, ванна, или твист, и что возможно взаимное превращение между конформациями. Если не указано иное, предполагается, что все такие конформации (например, кресло, ванна, или твист, ОН осевой, ОН экваториальный и т.д.), охватываются ссылкой на соединения, для которых не указана конкретная конформация.

По существу очищенные формы.

Один из аспектов настоящего изобретения относится к НМС соединениям, описанным в настоящем документе, в по существу очищенной форме и/или в форме по существу не содержащей загрязняющих примесей.

Согласно одному из вариантов реализации по существу очищенная форма составляет по меньшей мере 50 мас.%, например по меньшей мере 60 мас.%, например по меньшей мере 70 мас.%, например по меньшей мере 80 мас.%, например по меньшей мере 90 мас.%, например по меньшей мере 95 мас.%, например по меньшей мере 97 мас.%, например по меньшей мере 98 мас.%, например по меньшей мере 99 мас.%.

Если не указано конкретно, термин по существу очищенная форма относится к соединению в любой конформационной форме. Например, согласно одному из вариантов реализации термин по сущест- 14 028077 ву очищенная форма относится к смеси конформационных форм, т.е., очищенных от других соединений. Согласно одному из вариантов реализации термин по существу очищенная форма относится к одной конформационной форме. Согласно одному из вариантов реализации термин по существу очищенная форма относится к смеси конформационных форм. Согласно одному из вариантов реализации термин по существу очищенная форма относится к эквимолярной смеси конформационных форм.

Согласно одному из вариантов реализации загрязняющие примеси составляют не более 50 мас.%, например не более 40 мас.%, например не более 30 мас.%, например не более 20 мас.%, например не более 10 мас.%, например не более 5 мас.%, например не более 3 мас.%, например не более 2 мас.%, например не более 1 мас.%.

Если не указано конкретно, термин загрязняющие примеси относится к другим соединениям, отличным от конформационных форм. Согласно одному из вариантов реализации термин загрязняющие примеси относится к другим соединениям и другим конформационным формам.

Согласно одному из вариантов реализации по существу очищенная форма составляет по меньшей мере 60% конформационной чисты (т.е. 60% соединения, в расчете на моли, представляет собой требуемую конформацию и 40% представляет собой нежелательную конфирмационную форму(ы)), например по меньшей мере 70% конформационной чисты, например по меньшей мере 80% конформационной чисты, например по меньшей мере 90% конформационной чисты, например по меньшей мере 95% конформационной чисты, например по меньшей мере 97% конформационной чисты, например по меньшей мере 98% конформационной чисты, например по меньшей мере 99% конформационной чисты.

Изомеры.

Некоторые соединения могут присутствовать в одной или более конкретных геометрических, оптических, энантиомерных, диастереомерных, эпимерных, атроповых, стереоизомерных, таутомерных, конформационных или аномерных формах, включая, но не ограничиваясь перечисленными, цис- и трансформы; Е- и Ζ-формы; с-, 1- и г-формы; эндо- и экзо-формы; К-, 8- и мезо-формы; Ό- и Ь-формы; 6- и Iформы; (+) и (-) формы; кето-, енольные и енолятные формы; син- и анти-формы; синклинальные и антиклинальные формы; α- и β-формы; аксиальные и экваториальные формы; формы ванна, кресло, твист, конверт и полукресло и их комбинации, в дальнейшем совместно именуемые изомеры (или изомерные формы).

Ссылка на класс структур также может включать структурно изомерные формы, входящие в этот класс (например, С_1-7алкил включает н-пропил и изопропил; бутил включает н-, изо-, втор- и трет- бутил; метоксифенил включает орто-, мета- и пара-метоксифенил). Тем не менее, ссылка на конкретную группу или схему замещения не предназначена для включения других структурных (или конституционных изомеров), которые отличаются по отношению к связи между атомами, а не по положению в пространстве. Например, ссылку на метоксигруппу, -ОСН₃, не следует понимать как ссылку на ее структурный изомер гидроксиметильную группу -СН₂ОН. Аналогичным образом, ссылку на орто-хлорфенил не следует понимать как ссылку на его структурный изомер мета-хлорфенил.

Вышеописанное исключение не относится к таутомерным формам, например кето-, енольной и енолятной формам, как, например, в следующих таутомерных парах: кето/енол (проиллюстрирована ниже), имин/енамин, амид/иминоспирт, амидин/амидин, нитрозо/оксим, тиокетон/ентиол, Νнитрозо/гидроксиазо и нитро/ацинитро.

-с-с

I \ с=с он /

\

-н

7т с=с кето енол енолят

Следует отметить, что в термин изомер конкретно включены соединения с одной или более изотопными заменами. Например, Н может присутствовать в любой изотопной форме, включая ¹Н, ²Η(Ό) и ³Н(Т); С может присутствовать в любой изотопной форме, включая ¹¹С, ¹²С, ¹³С и ¹⁴С; О может присутствовать в любой изотопной форме, включая ¹⁵О, ¹⁶О и ¹⁸О; N может присутствовать в любой изотопной форме, включая ¹⁴Ν и ¹⁵Ν; Т может присутствовать в любой изотопной форме, включая ¹⁸Т и ¹⁹Т и т.п.

Если не указано иное, ссылка на конкретное соединение включает все такие изомерные формы, включая их смеси (например, рацемические смеси). Способы получения (например, асимметрический синтез) и разделения (например, фракционная кристаллизация и хроматографические способы) таких изомерных форм либо известны в данной области техники, либо могут быть легко разработаны путем адаптации предложенных в настоящем документе способов или известных способов известным образом.

Соли.

Удобным или целесообразным может оказаться получение, очистка и/или обработка соответствующей соли соединения, например фармацевтически приемлемой соли. Примеры фармацевтических солей рассматриваются в Бег§е е! а1., 1977, РйагтаееийеаПу Аееер1аЫе 8а11з, I. РНагт. 8ек, Уо1. 66, р. 119.

Например, если соединение является анионным или содержит функциональную группу, которая может быть анионной (например, -СООН может быть -СОО^-), то может быть образована соль с подхо- 15 028077 дящим катионом. Примеры подходящих неорганических катионов включают, но не ограничиваются перечисленными, ионы щелочных металлов, такие как Να' и К+, катионы щелочно-земельных металлов, такие как Са²+ и М§²⁺, и другие катионы, такие как А1³⁺. Примеры подходящих органических катионов включают, но не ограничиваются перечисленными, ион аммония (т.е. ΝΗ4+) и замещенные ионы аммония (например, ΝΗ3Κ⁺, ΝΗ2Κ₂ ⁺, ΝΗΚ3⁺, ΝΚ4⁺). Примерами некоторых подходящих замещенных ионов аммония являются ионы, полученные из этиламина, диэтиламина, дициклогексиламина, триэтиламина, бутиламина, этилендиамина, этаноламина, диэтаноламина, пиперазина, бензиламина, фенилбензиламина, холина, меглумина и трометамина, а также аминокислоты, такие как лизин и аргинин. Пример обычного четвертичного аммониевого иона представляет собой Ы(СН₃)₄ ⁺.

Если соединение является катионным или содержит функциональную группу, которая может быть катионной (например, -ΝΗ₂ может быть -ΝΗ₃+), то может быть образована соль с подходящим анионом. Примеры подходящих неорганических анионов включают, но не ограничиваются перечисленными, ионы, полученные из следующих неорганических кислот: соляной, бромоводородной, йодоводородной, серной, сернистой, азотной, азотистой, фосфорной и фосфористой. Примеры подходящих органических анионов включают, но не ограничиваются перечисленными, ионы, полученные из следующих органических кислот: 2-ацетоксибензойной, уксусной, аскорбиновой, аспарагиновой, бензойной, камфорсульфокислоты, коричной, лимонной, этилендиаминтетрауксусной, этандисульфоновой, этансульфоновой, фумаровой, глюкогептоновой, глюконовой, глутаминовой, гликолевой, гидроксималеиновой, гидроксинафталинкарбоновой, изэтиновой, молочной, лактобионовой, лауриновой, малеиновой, яблочной, метансульфоновой, слизевой, олеиновой, щавелевой, пальмитиновой, памовой, пантотеновой, фенилуксусной, фенилсульфокислоты, пропионовой, пировиноградной, салициловой, стеариновой, янтарной, сульфаниловой, винной, толуолсульфоновой и валериановой. Примеры подходящих полимерных органических анионов включают, но не ограничиваются перечисленными, ионы, полученные из следующих полимерных кислот: дубильной кислоты, карбоксиметилцеллюлозы.

Если не указано иное, ссылка на конкретное соединение также включает его солевые формы.

Сольваты и гидраты.

Удобным или целесообразным может оказаться получение, очистка и/или обработка соответствующего сольвата соединения. В настоящем документе используемый в общепринятом смысле термин сольват относится к комплексу растворенного вещества (например, соединения, соли соединения) и растворителя. Если растворителем является вода, сольват в целях удобства можно называть гидратом, например моногидратом, дигидратом, тригидратом и т.д.

Если не указано иное, ссылка на конкретное соединение также включает его сольватные и гидратные формы.

Химически защищенные формы.

Удобным или целесообразным может оказаться получение, очистка и/или обработка соединения в химически защищенной форме. В настоящем документе используемый в общепринятом смысле термин химически защищенная форма относится к соединению, в котором одна или более реакционноспособных функциональных групп защищены от нежелательных химических реакций при заданных условиях (например, рН, температура, облучение, растворитель и т.п.). На практике применяют хорошо известные химические способы для обратимого перевода в инертное состояние функциональной группы, которая в противном случае была бы реакционноспособной при заданных условиях. В химически защищенной форме одна или более реакционноспособных функциональных групп присутствуют в форме защищенной или защитной группы (также известной как закрытая или закрывающая группа или блокированная или блокирующая группа). Посредством защиты реакционноспособной функциональной группы можно проводить реакции с участием других незащищенных реакционноспособных функциональных групп без воздействия на защищенную группу; защитная группа может быть удалена, обычно на последующей стадии, причем удаление, по существу, не влияет на остальную часть молекулы; см., например, Рго1ссИ\'С Огоирк ΐη Ог§аи1с 8упШе818 (Т. Огееп апй Р. \Уи18; 4ΐ1ι Εάίίίοη; 1оЬп \УПсу апй §оп8, 2006).

Большое разнообразие таких способов защиты, блокирования или закрытия является широко применяемым и хорошо известным в органическом синтезе. Например, соединение, содержащее две неэквивалентные реакционноспособные функциональные группы, обе из которых обладают реакционной способностью при заданных условиях, может быть превращено в производное с переводом одной из функциональных групп в защищенное и, следовательно, инертное состояние при заданных условиях; защищенное таким образом соединение может быть использовано в качестве реагента, который фактически содержит только одну реакционноспособную функциональную группу. После завершения целевой реакции (с участием другой функциональной группы) защищенная группа может быть подвергнута снятию защиты с возвращением ее первоначальной функциональности.

Например, аминогруппа может быть защищена, например, превращением в амид (-ΝΚΤΟ-Κ.) или уретан (-ΝΚΟΟ-ΟΚ), например, такой как метиламид (-ΝΗΟΟ-ΟΗ₃); бензилоксиамид (-ΝΗΕΟ-ΟΕΗ₂Ε₆Η₅. -ΝΗ-СЬ/); трет-бутоксиамид (-ΝΗΟΟ-ΟΟ(ΟΗ₃)₃, -ΝΗ-Вос); 2-бифен-1Ь-2-пропоксиамид (-ΝΗΟΟΟΟ^Η^Ο^Ο^, ΝΗ-Врос), 9-флуоренилметоксиамид (-ΝΗ-Ртос), 6-нитровератрилоксиамид (-ΝΗЫУос), 2-триметилсилилэтилоксиамид (-ΝΗ-Теос), 2,2,2-трихлорэтилоксиамид (-ΝΗ-Тгос), аллилоксиа- 16 028077 мид (ΝΗ-АИос), 2-(фенилсульфонил)этилоксиамид (-ЫН-Ркес) или, в соответствующих случаях (например, циклических аминов), превращением в нитроксидный радикал (>N-0·).

Пролекарства.

Удобным или целесообразным может оказаться получение, очистка и/или обработка соединения в форме пролекарства. В настоящем документе термин пролекарство относится к соединению, которое при метаболизации (например, ш νινο) превращается в целевое активное соединение. Как правило, пролекарство является неактивным или менее активным, чем целевое активное соединение, но может обеспечить свойства, полезные с точки зрения обработки, введения или метаболизации.

Химический синтез.

Способы химического синтеза НМС соединений описаны в настоящем документе. Эти и/или другие известные способы могут быть изменены и/или адаптированы известным образом, чтобы облегчить синтез дополнительных НМС соединений, описанных в настоящем документе.

Композиции.

Один аспект настоящего изобретения относится к композиции (например, фармацевтической композиции), содержащей НМС соединение, описанное в настоящем документе, и фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или вспомогательное вещество.

Согласно одному из вариантов реализации композиция дополнительно содержит один или более (например, 1, 2, 3, 4) дополнительных терапевтических агентов, описанных в настоящем документе.

Другой аспект изобретения относится к способу получения композиции (например, фармацевтической композиции), включающему смешивание НМС соединения, описанного в настоящем документе, и фармацевтически приемлемого носителя, разбавителя или вспомогательного вещества.

Другой аспект изобретения относится к способу получения композиции (например, фармацевтической композиции), включающему смешивание НМС соединения, описанного в настоящем документе; одного или более (например, 1, 2, 3, 4) дополнительных терапевтических агентов, описанных в настоящем документе; и фармацевтически приемлемого носителя, разбавителя или вспомогательного вещества.

Применения.

НМС соединения, описанные в настоящем документе, подходят, например, для лечения нарушений (например, заболеваний) включая, например, нарушения (например, заболевания), описанные в настоящем документе.

Применение в терапии.

Другой аспект изобретения относится к НМС соединению, описанному в настоящем документе, в комбинации с одним или более (например, 1, 2, 3, 4) дополнительными терапевтическими агентами, описанными в настоящем документе, для применения в способе лечения организма человека или животного путем терапии, например, для применения в способе лечения нарушения (например, заболевания), описанного в настоящем документе.

Применение для получения лекарственных средств.

Другой аспект изобретения относится применению НМС соединения, описанного в настоящем документе, для получения лекарственного средства для лечения, например лечения нарушения (например, заболевания), описанного в настоящем документе.

Согласно одному из вариантов реализации указанное лекарственное средство содержит НМС соединения.

Другой аспект изобретения относится к применению НМС соединения, описанного в настоящем документе, и одного или более (например, 1, 2, 3, 4) дополнительных терапевтических агентов, описанных в настоящем документе, для получения лекарственного средства для лечения, например лечения нарушения (например, заболевания), описанного в настоящем документе.

Согласно одному из вариантов реализации указанное лекарственное средство содержит НМС соединение и один или более (например, 1, 2, 3, 4) дополнительных терапевтических агентов.

Способы лечения.

Другой аспект изобретения относится к способу лечения, например, нарушения (например, заболевания), описанного в настоящем документе, включающему введение пациенту, нуждающемуся в лечении, терапевтически эффективного количества НМС соединения, описанного в настоящем документе, предпочтительно в форме фармацевтической композиции, и одного или более (например, 1, 2, 3, 4) дополнительных терапевтических агентов, описанных в настоящем документе, предпочтительно в форме фармацевтической композиции.

- 17 028077

Состояния, подвергаемые лечению.

Согласно одному из вариантов реализации лечение представляет собой лечение воспалительного нарушения или аутоиммунного нарушения.

Согласно одному из вариантов реализации лечение представляет собой лечение нарушения, связанного с воспалением и/или активацией иммунной системы.

Согласно одному из вариантов реализации лечение представляет собой лечение нарушения, опосредованного чрезмерной и/или неадекватной и/или длительной активацией иммунной системы.

Согласно одному из вариантов реализации лечение представляет собой лечение воспаления.

Согласно одному из вариантов реализации лечение представляет собой лечение нарушения, связанного с воспалением или активацией иммунной системы.

Согласно одному из вариантов реализации лечение представляет собой лечение ревматоидного артрита; псориаза; псориатического артрита; хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ); астмы; атеросклероза; воспалительного заболевания кишечника или болезни Бехтерева.

Согласно одному из вариантов реализации лечение представляет собой лечение ревматоидного артрита.

Согласно одному из вариантов реализации лечение представляет собой лечение псориаза.

Согласно одному из вариантов реализации лечение представляет собой лечение псориатического артрита.

Согласно одному из вариантов реализации лечение представляет собой лечение хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ).

Согласно одному из вариантов реализации лечение представляет собой лечение астмы.

Согласно одному из вариантов реализации лечение представляет собой лечение атеросклероза.

Согласно одному из вариантов реализации лечение представляет собой лечение болезни Бехтерева (анкилозирующего спондилоартрита).

Согласно одному из вариантов реализации лечение представляет собой лечение воспалительного заболевания кишечника.

Согласно одному из вариантов реализации лечение представляет собой предотвращение иммунного ответа, ведущего к отторжению органов или трансплантата после трансплантации.

Согласно одному из вариантов реализации лечение представляет собой предотвращение воспалительного состояния, в котором нарушена экспрессия или активность ΙΚΡ-5.

Согласно одному из вариантов реализации лечение представляет собой лечение опухоли, которая чрезмерно экспрессирует ΦΗΟα, 1Ь-1, 1Ь-6, КАЫКЬ и/или ΝΡΚΒ.

Согласно одному из вариантов реализации лечение представляет собой лечение опухоли, для которой ингибирование экспрессии или активности, или передачи сигнала ΦΗΟα, 1Ь-1, КАЫКЬ, ΝΡΚΒ. ΙΚΡ, таких как ΙΚΡ-3, -5 или -7 и/или 1Ь-6, улучшает или усиливает действие цитотоксических агентов, уничтожающих опухоли.

Согласно одному из вариантов реализации лечение представляет собой лечение гематологического злокачественного новообразования.

Согласно одному из вариантов реализации лечение представляет собой лечение множественной миеломы.

Согласно одному из вариантов реализации лечение представляет собой лечение лейкоза; например острого лимфобластного лейкоза.

Согласно одному из вариантов реализации лечение представляет собой лечение лимфомы; например неходжкинской лимфомы, Т-клеточной лимфомы (например, Т-лимфобластной лимфомы, экстранодальной Т-клеточной лимфомы, кожной Т-клеточной лимфомы, анапластической крупноклеточной лимфомы, ангиоиммунобластомной Т-клеточной лимфомы), и лимфомы В-клеток (например, лимфомы Ходжкина, неходжкинской лимфомы) (например, диффузной В-крупноклеточной лимфомы, фолликулярной лимфомы, лимфомы лимфатической ткани, связанной со слизистой, мелкоклеточной лимфоцитарной лимфомы, лимфомы клеток мантийной зоны, волосатоклеточного лейкоза и лимфомы Беркитта).

Согласно одному из вариантов реализации лечение представляет собой лечение солидного рака, например рака мочевого пузыря, рака молочной железы (женского и/или мужского), рака толстой кишки, почечно-клеточной карциномы, рака почки, рака легких, рака поджелудочной железы, рака желудка, рака предстательной железы, рака мозга, рака кожи, рака щитовидной железы, базально-клеточной адамантиномы или меланомы.

Согласно одному из вариантов реализации гематологическое злокачественное новообразование (например, множественная миелома, лейкоз, лимфома и т.д.) и солидный рак (например, рака мочевого пузыря и т.д.) связаны с активацией ΝΡΚΒ, с аберрантной передачей сигнала ΝΡΚΒ или с воспалением.

Согласно одному из вариантов реализации гематологическое злокачественное новообразование (например, множественная миелома, лейкоз, лимфома и т.д.) и солидный рак (например, рака мочевого пузыря и т.д.) связаны с инактивацией или нарушенной индукцией каспазы или аберрантной передачей сигнала каспазой.

- 18 028077

Согласно одному из вариантов реализации лечение представляет собой лечение пролиферативного нарушения; например болезнь Кастлемана.

Согласно одному из вариантов реализации лечение представляет собой лечение заболевания или нарушения, выбранного из заболевания, имеющего воспалительный или аутоиммунный компонент, включая астму, атеросклероз, аллергические заболевания, такие как атопия, аллергический ринит, атопический дерматит, анафилаксию, аллергический бронхолегочный аспергиллез и аллергический пневмонит (болезнь голубеводов, аллергический альвеолит у сельскохозяйственных рабочих, гиперчувствительный пневмонит, болезнь легких солодпадчиков); аллергии, включая блошиный дерматит у млекопитающих, таких как домашние животные, например собаки и кошки, контактные аллергены, включая укусы комаров или аллергические реакции на укус насекомого, ядовитый плющ, ядовитый дуб, сумах ядовитый или другие аллергены кожи; аутоиммунные нарушения, в том числе сахарный диабет I типа и связанные с ним осложнения, рассеянный склероз, артрит, системная красная волчанка, аутоиммунный тиреоидит (АИТ), аутоиммунные заболевания печени, такие как гепатит и первичный билиарный цирроз печени, гипертиреоз (болезнь Грейвса; тиреотоксикоз), инсулин-устойчивый диабет, аутоиммунная недостаточность надпочечников (болезнь Аддисона), аутоиммунный оофорит, аутоиммунный орхит, аутоиммунная гемолитическая анемия, пароксизмальная холодная гемоглобинурия, болезнь Бехчета, аутоиммунная тромбоцитопения, аутоиммунная нейтропения, пернициозная анемия, анемия эритроцитов, аутоиммунные коагулопатии, эндометриоз, миастения, экспериментальный аллергический энцефаломиелит, аутоиммунный полиневрит, пузырчатка и другие буллезные заболевания, ревмокардит, синдром Гудпасчера, посткардиотомный синдром, синдром Шегрена, полимиозит, дерматомиозит и склеродермия; болезненные состояния, возникающие в результате ненадлежащего воспаления, либо местного или системного, например синдром раздраженного или воспаленного кишечника (Ма/хиссНсШ с1 а1., 1996), кожные заболевания, такие как красный плоский лишай, гиперчувствительность замедленного типа, хроническое воспаление легких, например альвеолит легких и легочная гранулема, воспаления десен или другие болезни периодонта и костное воспаление, связанное с поражением эндодонтического происхождения (Уо1е)шкоуа с1 а1., 1997), гиперчувствительные заболевания легких, такие как аллергический пневмонит (8и§1уаша с1 а1., 1995), и связанное с воспалением высвобождение гистамина из базофилы (Эгогак с1 а1., 1996), такое как сенная лихорадка, высвобождение гистамина из тучных клеток (ОаШ с1 а1., 1989), или опухолей тучных клеток, реакции гиперчувствительности 1 типа (анафилаксия, кожная аллергии, крапивница, подагра, аллергический ринит, аллергический и гастроэнтерит); язвенный колит или болезнь Крона; ΦΗΟα индуцированное поликистозное заболевание почек (Ы с1 а1., 2008); или криопиринассоциированные периодические синдромы, в том числе синдром Макла-Уэлса.

Согласно одному из вариантов реализации лечение представляет собой лечение нарушения, опосредованного остеокластами.

Согласно одному из вариантов реализации лечение представляет собой лечение нарушения, характеризующегося чрезмерной резорбцией кости.

Согласно одному из вариантов реализации лечение представляет собой лечение нарушения, связанного с потерей костной ткани.

Согласно одному из вариантов реализации лечение представляет собой лечение потери костной ткани.

Согласно одному из вариантов реализации лечение представляет собой лечение потери костной ткани, связанной с воспалением.

Согласно одному из вариантов реализации лечение представляет собой лечение потери костной ткани, не связанной с воспалением.

Согласно одному из вариантов реализации лечение представляет собой лечение потери костной ткани, связанной с чрезмерной активацией остеокластов.

Согласно одному из вариантов реализации лечение представляет собой лечение разрушения суставов.

Согласно одному из вариантов реализации лечение представляет собой лечение разрушения суставов, связанного с воспалением.

Согласно одному из вариантов реализации лечение представляет собой лечение разрушения суставов, связанного с чрезмерной активацией остеокластов.

Согласно одному из вариантов реализации лечение представляет собой лечение потери костной ткани, связанной с чрезмерной активацией остеокластов при ревматоидном артрите, остеопорозе, заболевании костей, связанном с раком, или болезни Педжета.

Согласно одному из вариантов реализации лечение представляет собой лечение потери костной ткани, связанной с ревматоидным артритом, остеопорозом, заболеванием костей, связанным с раком, или болезни Педжета в костях.

Согласно одному из вариантов реализации лечение представляет собой лечение ревматоидного артритом, остеопороза, заболевания костей, связанного с раком, или болезнь Педжета в костях.

Согласно одному из вариантов реализации лечение представляет собой лечение неоплазии костей, как первичной опухоли, так и метастазов, в том числе остеосаркомы и остеомы (см., например, ΖΗεη§ с1

- 19 028077 а1., 1998), и заболевания костей, связанного с раком (например, гиперкальциемии при злокачественных новообразованиях, костных метастазов, остеолитических метастазов в кости, множественной миеломы, рака молочной железы).

Согласно одному из вариантов реализации лечение представляет собой лечение гиперкалиемии, вызванной состояниями, связанными с повышенной костной резорбции, включая: интоксикацию витамина Ό, первичный или третичный гиперпаратиреоз, иммобилизацию и саркоидоз.

Согласно одному из вариантов реализации лечение представляет собой лечение асептического расшатывания имплантатов протезов (например, искусственные суставы, например колени, бедра и т.д., могут быть ослаблены вследствие активности остеокластов под действием местного воспаления) (см., например, СЫ1Й8 с1 а1., 2001).

Согласно одному из вариантов реализации лечение представляет собой лечение остеопороза, остеоартрита, эктопического формирования костной ткани.

Согласно одному из вариантов реализации лечение представляет собой лечение нарушения, связанного с фиброзом, такого как системный склероз или склеродермия.

Согласно одному из вариантов реализации лечение представляет собой лечение редкого васкулита, такого как болезнь Бехчета.

Лечение.

Термин лечение, используемый в настоящем документе в контексте лечения нарушения, в общем относится к лечению и терапии как человека, так животного (например, в ветеринарии), при котором достигают некоторого желаемого терапевтического эффекта, например ингибирования развития нарушения, и включает снижение скорости прогрессирования, прекращение прогрессирования, облегчение симптомов нарушения, уменьшение степени тяжести нарушения и излечение нарушения. Термин также включает лечение в качестве профилактической меры (т.е. профилактику). Например, применение в случае пациентов, у которых еще не произошло развития нарушения, но которые входят в группу риска развития нарушения, охватывается термином лечение.

Например, лечение воспаления включает профилактику воспаления, снижение заболеваемости воспалением, снижение тяжести воспаления, облегчение симптомов воспаления и т.д.

Термин терапевтически эффективное количество в настоящем документе относится к такому количеству соединения, или вещества, композиции или лекарственной формы, содержащей соединение, которое эффективно для обеспечения некоторого желаемого терапевтического эффекта, соизмеримого с разумным соотношением польза/риск, при введении в соответствии с требуемой схемой лечения.

Комбинированная терапия.

Термин лечение включает комбинированное лечение и терапию, при которых сочетают два или более видов лечения или терапии, например, последовательно или одновременно. Например, соединения, описанные в настоящем документе, также могут быть применены в комбинированной терапии, например, в сочетании с другими агентами, например противовоспалительными агентами и т.д. Примеры видов лечения и терапии включают, но не ограничиваются перечисленными, химиотерапию (введение активных агентов, включая, например, лекарственные средства, антитела (например, как в иммунотерапии), пролекарства (например, как в фотодинамической терапии, способах ΟΌΕΡΤ, ΆΌΕΡΤ, и т.д.)); хирургическое лечение; лучевую терапию; фотодинамическую терапию; генную терапию и контролируемый пищевой рацион.

Один из аспектов настоящего изобретения относится к соединению, описанному в настоящем документе, в комбинации с одним или более дополнительными терапевтическими агентами.

Конкретная комбинация будет составлена по усмотрению лечащего врача, который должен выбирать дозировки, используя свои обычные знания в различных областях, и режимы дозирования, известные квалифицированному специалисту-практику.

Агенты (т.е. соединения, описанные в настоящем документе, а также один или более других агентов) могут быть введены одновременно или последовательно и могут быть введены согласно индивидуальным варьируемым режимам дозирования и посредством различных путей. Например, в случае последовательного введения агенты можно вводить через короткие интервалы времени (например, в течение периода, составляющего 5-10 мин) или более длинные интервалы (например, с промежутком 1, 2, 3, 4 или более часов или даже большим промежутком при необходимости), причем, точный режим дозирования должен быть соизмеримым со свойствами терапевтического агента (агентов).

Агенты (т.е. соединения, описанные в настоящем документе, а также один или более других агентов) могут быть приготовлены вместе в виде единой лекарственной формы или, альтернативно, индивидуальные агенты могут быть приготовлены раздельно и представлены вместе в форме набора, необязательно с инструкциями по их применению.

Другие применения.

НМС соединения, описанные в настоящем документе, также могут быть применены как часть исследования ιη νίίτο, например, для определения вероятности того, что лечение организма-кандидата с применением рассматриваемого соединения будет иметь положительный результат.

НМС соединения, описанные в настоящем документе, также могут быть применены в качестве

- 20 028077 стандартного соединения, например, при проведении анализа, с целью идентификации других соединений, других противовоспалительных агентов и т.д.

Наборы.

Один из аспектов изобретения относится к набору, содержащему (а) НМС соединение, описанное в настоящем документе, или композицию, содержащую описанное в настоящем документе НМС соединение, например, предпочтительно представленное в подходящей емкости и/или с подходящей упаковкой; и (В) инструкции по применению, например письменные указания относительно введения соединения или композиции.

Согласно одному из вариантов реализации набор дополнительно содержит один или более (например, 1, 2, 3, 4) дополнительных терапевтических агентов, описанных в настоящем документе.

Письменные инструкции могут также включать перечень показаний, для которых активный ингредиент представляет собой подходящий вид лечения.

Пути введения.

НМС соединение или содержащая НМС соединение фармацевтическая композиция могут быть введены субъекту посредством любого подходящего пути введения, либо системно/периферически, либо местно (т.е. в место, где требуется достижение желаемого эффекта).

Пути введения включают пероральный (например, посредством приема внутрь); буккальный; сублингвальный; трансдермальный (включая, например, введение с помощью повязки, пластыря и т.д.); трансмукозальный (включая, например, введение с помощью повязки, пластыря и т.д.); интраназальный (например, с помощью назального аэрозоля, капель или из атомайзера или устройства доставки с сухим порошком); глазной (например, с помощью глазных капель); легочный (например, с помощью ингаляционной или инсуффляционной терапии с применением, например, аэрозоля, например, через полость рта или носа); ректальный (например, с помощью суппозиториев или клизмы); вагинальный (например, с помощью пессария); парентеральный, например, посредством инъекции, включая подкожный, внутрикожный, внутримышечный, внутривенный, внутриартериальный, внутрисердечный, интратекальный, интраспинальный, интракапсулярный, субкапсулярный, интраорбитальный, интраперитонеальный, внутритрахеальный, субкутикулярный, внутрисуставный, субарахноидальный и интрастернальный; имплантацию депо или резервуара, например, подкожно или внутримышечно.

Согласно одному из предпочтительных вариантов реализации, способ введения представляет собой пероральный способ (например, путем принятия в пищу).

Согласно одному из предпочтительных вариантов реализации, способ введения представляет собой парентеральный способ (например, путем инъекции).

Субъект/пациент.

Субъектом/пациентом могут являться хордовые, позвоночные, млекопитающие, плацентарные млекопитающие, сумчатые (например, кенгуру, вомбат), грызуны (например, морская свинка, хомяк, крыса, мышь), мышевидные (например, мышь), зайцеобразные (например, кролик), пернатые (например, птица), псовые (например, собака), кошачьи (например, кошка), лошадиные (например, лошадь), свиноподобные (например, свинья), овечьи (например, овца), крупный рогатый скот (например, корова), приматы, обезьяноподобные (например, обезьяна или человекообразная обезьяна), обезьяны (например, мартышка, павиан), человекообразные обезьяны (например, горилла, шимпанзе, орангутан, гиббон) или человек.

Согласно одному из предпочтительных вариантов реализации субъектом/пациентом является человек.

Составы.

Наряду с тем что НМС соединение можно вводить отдельно, предпочтительно его предложение в виде фармацевтического состава (например, композиции, препарата, лекарственного средства), содержащего по меньшей мере одно НМС соединение, описанное в настоящем документе, вместе с одним или более другими фармацевтически приемлемыми ингредиентами, хорошо известными специалистам в данной области техники, включая фармацевтически приемлемые носители, разбавители, вспомогательные вещества, адъюванты, наполнители, буферы, консерванты, антиоксиданты, смазывающие вещества, стабилизаторы, солюбилизаторы, поверхностно-активные вещества (например, смачивающие агенты), маскирующие агенты, красители, ароматизаторы и подсластители. Состав может дополнительно содержать другие активные агенты, например другие терапевтические или профилактические агенты.

Таким образом, согласно настоящему изобретению также предложены фармацевтические композиции, определенные выше, и способы получения фармацевтической композиции, включающие смешивание по меньшей мере одного описанного в настоящем документе НМС соединения вместе с одним или более другими фармацевтически приемлемыми ингредиентами, хорошо известными специалистам в данной области техники, например носителями, разбавителями, вспомогательными веществами и т.д. При получении композиций в виде отдельных единиц (например, таблеток и т.д.) каждая единица содержит заранее определенное количество (дозу) соединения.

В настоящем документе термин фармацевтически приемлемый относится к соединениям, ингредиентам, веществам, композициям, лекарственным формам и т.д., которые с медицинской точки зрения подходят для применения в контакте с тканями рассматриваемого субъекта (например, человека), не де- 21 028077 монстрируя повышенной токсичности, раздражения, аллергической реакции или других проблем, или осложнений, соизмеримых с разумным соотношением польза/риск. Каждый носитель, разбавитель, вспомогательное вещество и т.д., также должен быть приемлемым в смысле совместимости с другими ингредиентами состава.

Сведения о подходящих носителях, разбавителях, вспомогательных веществах и т.д. можно найти в стандартной фармацевтической литературе, например Кет1и§1ои'8 РЬагтасеиИса1 8с1епсе8, 18ТН εάίΐίοη, Маек РиЪНкЫпё Сотрапу, ЕакТоп, Ра., 1990 и НаиДЬоок оГ Ркагтасеи11са1 ΕχάρίοηΚ 5ΐΗ εάίΤίοη, 2005.

Составы могут быть получены посредством любых способов, хорошо известных в области фармации. Такие способы включают стадию объединения соединения с носителем, который содержит один или более вспомогательных ингредиентов. Как правило, составы получают посредством равномерного и однородного объединения соединения с носителями (например, жидкими носителями, мелкодисперсным твердым носителем и т.д.) и далее формования продукта при необходимости.

Состав может быть получен с обеспечением быстрого или медленного высвобождения; немедленного, замедленного, приуроченного к определенному времени или пролонгированного высвобождения, или их комбинации.

Составы могут быть надлежащим образом представлены в форме жидкостей, растворов (например, водных, неводных), суспензий (например, водных, неводных), эмульсий (например, типа масло в воде, вода в масле), эликсиров, сиропов, электуариев, жидкостей для полоскания рта, капель, таблеток (включая, например, таблетки с покрытием), гранул, порошков, леденцов, пастилок, капсул (включая, например, твердые и мягкие желатиновые капсулы), саше, пилюль, ампул, пилюль больших размеров, суппозиториев, пессариев, настоек, гелей, паст, мазей, кремов, лосьонов, масел, пен, спреев, тонкораспыляемых жидкостей или аэрозолей.

Составы могут быть надлежащим образом представлены в виде пластыря, лейкопластыря, бандажа, повязки, и т.п., которые пропитывают одним или более соединениями и необязательно одним или более другими фармацевтически приемлемыми ингредиентами, включая, например, усилители проникновения, проницаемости и всасывания. Составы также могут быть надлежащим образом обеспечены в форме депо или резервуара.

Соединение может быть растворено в, суспендировано в или смешано с одним или более другими фармацевтически приемлемыми ингредиентами. Соединение может быть заключено в липосому или другую микрочастицу, предназначенную для направленной доставки соединения, например, к компонентам крови или одному, или более органам.

Составы, подходящие для перорального введения (например, посредством приема внутрь), включают жидкости, растворы (например, водные, неводные), суспензии (например, водные, неводные), эмульсии (например, типа масло в воде, вода в масле), эликсиры, сиропы, электуарии, таблетки, гранулы, порошки, капсулы, саше, пилюли, ампулы, пилюли больших размеров.

Составы, подходящие для буккального введения, включают жидкости для полоскания рта, леденцы, пастилки, а также пластыри, лейкопластыри, депо и резервуары. Леденцы, как правило, содержат соединение в ароматизированной основе, обычно сахарозе и камеди или трагаканте. Пастилки, как правило, содержат соединение в инертной матрице, такой как желатин и глицерин или сахароза и камедь. Жидкости для полоскания рта, как правило, содержат соединение в подходящем жидком носителе.

Составы, подходящие для сублингвального введения, включают таблетки, пастилки, леденцы, капсулы и пилюли.

Составы, подходящие для перорального трансмукозального введения, включают жидкости, растворы (например, водные, неводные), суспензии (например, водные, неводные), эмульсии (например, типа масло в воде, вода в масле), жидкости для полоскания рта, леденцы, пастилки, а также пластыри, лейкопластыри, депо и резервуары.

Составы, подходящие для неперорального трансмукозального введения, включают жидкости, растворы (например, водные, неводные), суспензии (например, водные, неводные), эмульсии (например, типа масло в воде, вода в масле), суппозитории, пессарии, гели, пасты, мази, кремы, лосьоны, масла, а также пластыри, лейкопластыри, депо и резервуары.

Составы, подходящие для трансдермального введения, включают гели, пасты, мази, кремы, лосьоны и масла, а также пластыри, лейкопластыри, бандажи, повязки, депо и резервуары.

Таблетки могут быть получены посредством обычных способов, например прессованием или формованием, необязательно с одним или более вспомогательными ингредиентами. Прессованные таблетки могут быть получены путем прессования соединения в легкосыпучей форме в подходящем таблеточном прессе, такой как порошок или гранулы, необязательно смешанного с одним или более связующими веществами (например, повидоном, желатином, камедью, сорбитом, трагакантом, гидроксипропилметилцеллюлозой); наполнителями или разбавителями (например, лактозой, микрокристаллической целлюлозой, гидрофосфатом кальция); смазывающими веществами (например, стеаратом магния, тальком, диоксидом кремния); разрыхлителями (например, крахмалгликолятом натрия, поперечно-сшитым повидоном, поперечно-сшитой натрий-карбоксиметилцеллюлозой); поверхностно-активными или диспергирующими или смачивающими агентами (например, лаурилсульфатом натрия); консервантами (например, мет-1Ь-п- 22 028077 гидроксибензоатом, проп-1Ь-п-гидроксибензоатом, сорбиновой кислотой); ароматизаторами, усилителями вкуса и подсластителями. Формованные таблетки могут быть получены путем формования в подходящей формовочной машине смеси порошкообразного соединения, увлажненной инертным жидким разбавителем. Таблетки необязательно могут иметь покрытие или насечку и могут быть приготовлены таким образом, чтобы обеспечивать медленное или контролируемое высвобождение содержащегося в них соединения, с применением, например, гидроксипропилметилцеллюлозы в различных соотношениях для обеспечения желаемого профиля высвобождения. Таблетки необязательно могут быть снабжены покрытием, например, с целью изменения профиля высвобождения, например кишечнорастворимой оболочкой, с обеспечением высвобождения в отделах кишечника, а не в желудке.

Мази, как правило, получают из соединения и парафиновой или водорастворимой мазевой основы.

Кремы, как правило, получают из соединения и кремовой основы типа масло в воде. При необходимости водная фаза кремовой основы может содержать, например, по меньшей мере около 30% мас./мас. многоатомного спирта, т.е. спирта, содержащего две или более гидроксильные группы, такого как пропиленгликоль, бутан-1,3-диол, маннит, сорбит, глицерин и полиэтиленгликоль и их смеси. Составы для местного введения могут при необходимости содержать соединение, усиливающее всасывание или проникновение соединения через кожу или другие пораженные участки. Примеры таких усилителей проникновения через кожу включают диметилсульфоксид и родственные аналоги.

Эмульсии, как правило, получают из соединения и масляной фазы, которая необязательно может содержать только эмульгатор (иначе известный как эмульгирующий агент), или она может содержать смесь по меньшей мере одного эмульгатора с жиром или маслом или и жиром и маслом. Предпочтительно в эмульсию включают гидрофильный эмульгатор вместе с липофильным эмульгатором, который выступает в качестве стабилизатора. Также предпочтительно включение и масла, и жира. Совместно эмульгатор (эмульгаторы) со стабилизатором (стабилизаторами) или без него образуют так называемый эмульгирующий воск, а воск вместе с маслом и/или жиром составляют так называемую эмульгирующую мазевую основу, которая образует масляную дисперсную фазу в составе крема.

Подходящие эмульгаторы и стабилизаторы эмульсии включают Твин 60 (Т\уссп 60), Спан 80 (§рап 80), цетостеариловый спирт, миристиловый спирт, глицерилмоностеарат и лаурилсульфат натрия. Выбор подходящих для состава масел или жиров основан на достижении требуемых косметических свойств, поскольку растворимость соединения в большинстве видов масел, применяемых в фармацевтических эмульсионных составах, может быть очень низкой. Таким образом, крем предпочтительно должен представлять собой нежирный, не оставляющий пятен и смываемый продукт с подходящей консистенцией во избежание утечки из тюбика или других емкостей. Могут быть применены одно- или двухосновные алкиловые сложные эфиры с неразветвленной или разветвленной цепью, такие как диизоадипат, изоцетилстеарат, сложный диэфир пропиленгликоля и жирных кислот кокосового масла, изопропилмиристат, децилолеат, изопропилпальмитат, бутилстеарат, 2-этилгексилпальмитат или смесь сложных эфиров с разветвленной цепью, известная как Кродамол САР (Сгобато1 САР), причем, три последних сложных эфира являются предпочтительными. Они могут быть применены отдельно или в комбинации в зависимости от требуемых свойств. Альтернативно, могут быть применены липиды с высокой температурой плавления, такие как белый мягкий парафин и/или жидкий парафин или другие минеральные масла.

Составы, подходящие для интраназального введения, в которых носитель представляет собой жидкость, включают, например, назальный спрей, капли для носа или аэрозоль для введения с помощью распылителя и содержат водные или масляные растворы соединения.

Составы, подходящие для интраназального введения, в которых носитель представляет собой твердое вещество, включают, например, составы в виде крупного порошка с размером частиц, например, в диапазоне от примерно 20 до примерно 500 мкм, которые вводят способом, аналогичным употреблению нюхательного табака, т.е. быстрым вдыханием через носовой ход порошка из емкости, подносимой близко к носу.

Составы, подходящие для легочного введения (например, с помощью ингаляционной или инсуффляционной терапии), включают составы в виде спрей-аэрозоля в упаковке под давлением с применением подходящего пропеллента, такого как дихлордифторметан, трихлорфторметан, дихлортетрафторэтан, диоксид углерода или другие подходящие газы.

Составы, подходящие для глазного введения, включают глазные капли, в которых соединение растворено или суспендировано в подходящем для соединения носителе, в частности водном растворителе.

Составы, подходящие для ректального введения, могут быть представлены в виде суппозиториев с подходящей основой, включая, например, природные или отвержденные масла, воски, жиры, полужидкие или жидкие полиолы, например, масло какао или салицилат или в виде раствора или суспензии для лечения с помощью клизмы.

Составы, подходящие для вагинального введения, могут быть представлены в виде пессариев, тампонов, кремов, гелей, паст, пен или составов для распыления, содержащие, кроме соединения, подходящие носители, известные в данной области техники.

Составы, подходящие для парентерального введения (например, посредством инъекции), включают водные или неводные изотонические апирогенные стерильные жидкости (например, растворы, суспен- 23 028077 зии), в котором соединение растворено, суспендировано или обеспечено иным образом (например, заключено в липосому или другую микрочастицу). Такие жидкости могут дополнительно содержать другие фармацевтически приемлемые ингредиенты, такие как антиоксиданты, буферы, консерванты, стабилизаторы, бактериостатические агенты, суспендирующие агенты, загустители и растворенные компоненты, превращающие состав в изотонический крови (или другой соответствующей физиологической жидкости) предполагаемого пациента. Примеры вспомогательных веществ включают, например, воду, спирты, полиолы, глицерин, растительные масла и т.п. Примеры подходящих изотонических носителей для применения в таких составах включают физиологический раствор для инъекций, раствор Рингера, или раствор Рингера с лактатом. Как правило, концентрация соединения в жидкости составляет от около 1 нг/мл до примерно 10 мкг/мл, например от примерно 10 нг/мл до примерно 1 мкг/мл. Составы могут находиться в герметичных однодозовых или многодозовых емкостях, например ампулах и флаконах, и могут храниться высушенном сублимацией (лиофилизированном) состоянии, требующем лишь добавления стерильного жидкого носителя, например воды для инъекций, непосредственно перед применением. Инъекционные экстемпоральные растворы и суспензии могут быть получены из стерильных порошков, гранул и таблеток.

Дозирование.

Специалисту в данной области техники будет понятно, что подходящие дозировки НМС соединений и композиций, содержащих НМС соединения, могут варьироваться от пациента к пациенту. Определение оптимальной дозы в общем случае будет включать соизмерение уровней терапевтического эффекта против любого риска или вредных побочных эффектов. Выбранный уровень дозировки будет зависеть от множества факторов, включая активность конкретного НМС соединения, путь введения, время введения, скорость экскреции НМС соединения, продолжительность лечения, другие лекарственные средства, соединения и/или вещества, применяемые в комбинации, степень тяжести нарушения и вид, пол, возраст, массу тела, состояние, общее состояние здоровья и предшествующий анамнез пациента. Количество НМС соединения и путь введения в конечном счете будут оставлены на усмотрение лечащего врача, ветеринара или врача-клинициста, хотя, как правило, доза будет выбрана с учетом достижения локальных концентраций в месте действия, которые обеспечивают желаемый эффект, по существу, не вызывая неблагоприятных или вредных побочных эффектов.

Введение может быть осуществлено в одной дозе, непрерывно или периодически (например, раздельными дозами через подходящие промежутки времени) на протяжении всего курса лечения. Способы определения наиболее эффективных путей и доз для введения хорошо известны специалистам в данной области техники и будет зависеть от применяемого для терапии состава, цели терапии, клетки-мишени (клеток-мишеней), подлежащих лечению, и субъекта, подлежащего лечению. Могут быть осуществлены однократные или многократные введения с уровнем дозы и режимом введения, выбранными лечащим врачом, ветеринаром или врачом-клиницистом.

В общем, подходящая доза НМС соединения находится в диапазоне от примерно 50 мкг до примерно 20 мг (чаще от примерно 100 мкг до примерно 10 мг) на 1 кг массы тела субъекта в сутки. Для введения через легкие (например, путем ингаляции), подходящий диапазон составляет от примерно 50 нг до примерно 1 мг на 1 кг массы тела субъекта в сутки. В случае, когда соединение представляет собой соль, сложный эфир, амид, пролекарство и т.п., вводимое количество рассчитывают на основе исходного соединения и, таким образом, фактическая масса, требующаяся для введения, пропорционально увеличивается.

Химический синтез.

Способы химического синтеза НМС соединения описаны в настоящем документе. Эти и/или другие известные способы (см., например, Οτείβ е! а1., 2010а; Байтапуаг е! а1., 2010) могут быть изменены и/или адаптированы известным образом, чтобы обеспечить альтернативные или улучшенные способы синтеза.

Синтез 1. (1г,4г)-4-Амино-1-метилциклогексан-1-ол

Гидроксид палладия (50% влажный с водой; 2,0 г) добавляли к перемешиваемому раствору (1г,4г)4-(дибензиламино)-1-метилциклогексанола (7,5 г, 24,2 ммоль) в метаноле (100 мл) в 300 мл автоклаве. Автоклав заполняли водородом (50 атм; ~5 МПа) и нагревали при 80°С в течение 24 ч. Смесь охлаждали и катализатор отфильтровывали. Фильтрат возвращали в автоклав и добавляли гидроксид палладия (50% влажный с водой; 3,0 г). Автоклав заполняли водородом (50 атм; ~50 МПа) и нагревали при 80°С в течение ночи. Смесь охлаждали и фильтровали через целит и фильтрат концентрировали с получением титульного соединения в виде беловатого липкого твердого вещества (3,2 г, количеств.).

¹Н ЯМР (400 МГц; СПС1₃) δ 2,86-2,76 (1Н, т), 1,84-1,76 (2Н, т), 1,75-1,63 (2Н, т), 1,55-1,43 (2Н, т), 1,30-1,17 (5Н, т).

- 24 028077

Синтез 1А. (1к,4к)-4-Амино-1-метилциклогексан-1-ол

Четыре равные навески (1к,4к)-4-дибензиламино-1-метилциклогексан-1-ола (каждая навеска составляла 15 г, всего 60 г) раздельно дебензилировали следующим образом: к (1к,4к)-4-дибензиламино-1метилциклогексан-1-олу (15 г, 193,9 ммоль) в этаноле (450 мл) добавляли 10% гидроксид палладия (15 г, 50% влажного катализатора). Реакционные смеси продували азотом с последующей продувкой газообразным водородом и перемешивали в атмосфере водорода в течение 16 ч при комнатной температуре. Раствор фильтровали через целит, который промывали дополнительным этилацетатом. Фильтраты от всех четырех навесок объединяли и выпаривали при пониженном давлении с получением титульного соединения (23 г, 91,8% выход). Соединение использовали без дополнительной очистки на следующей стадии.

¹Н ЯМР (400 МГц, СЭС1з) δ 2,6 (т, 1Н), 1,74-1,56 (т, 4Н), 1,5-1,3 (т, 7Н), 1,21 (δ, 3Н).

Синтез 2. 4-Бром-^((1т,4т)-4-гидрокси-4-метилциклогексил)бензолсульфонамид

Диизопропилэтиламин (24 мл, 137,8 ммоль) добавляли к раствору (1т,4т)-4-амино-1метилциклогексанола (3,6 г, 27,86 ммоль) в дихлорметане (150 мл) и реакционную смесь охлаждали до 0°С. 4-Бромбензол-1-сульфонилхлорид (7,83 г, 30,6 ммоль) добавляли в виде твердого вещества и реакционную смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение 4 ч. Реакционную смесь нейтрализовывали 1 М соляной кислотой и соединение экстрагировали в дихлорметане. Органический слой отделяли, сушили над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток промывали пентаном, фильтровали и сушили с получением титульного соединения (7 г, 72%).

¹Н ЯМР (400 МГц; СОС^) δ 7,74 (2Н, б), 7,65 (2Н, б), 4,77-4,61 (1Н, т), 3,33-3,23 (1Н, т), 1,85-1,75 (2Н, т), 1,63-1,51 (2Н, т), 1,49-1,30 (4Н, т), 1,20 (3Н, δ).

ЖХМС: (время анализа: 3,5 мин); время удерживания: 1,33 мин (97%, Μδ (ΕδΙ) т/ζ 346 (М-Н)+).

Синтез 3. ^((1т,4т)-4-Гидрокси-4-метилциклогексил)-4-(4,4,5,5-тетрамет-1Е-1,3,2-диоксаборолан-2ил)бензолсульфонамид

Раствор 4-бром^-((1т,4т)-4-гидрокси-4-метилциклогексил)бензолсульфонамида (9 г, 25,8 ммоль), 4,4,4',4',5,5,5',5'-октамет-1Г-2,2'-би(1,3,2-диоксаборолана) (9,87 г, 38,9 ммоль) и ацетата калия (7,6 г, 77,5 ммоль) в толуоле (50 мл) дегазировали с использованием аргона в течение 10 мин. Добавляли [1,1-бис(дифенилфосфино) ферроцен]дихлорпалладий(11) (1,8 г, 2,5 ммоль) и реакционную смесь дегазировали в течение дополнительных 10 мин и перемешивали при 100°С в течение 4 ч. Растворитель выпаривали при пониженном давлении и соединение экстрагировали в этилацетат. Органический слой отделяли, сушили над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении с получением титульного соединения (8 г, 78%) Μδ (ΕδΙ) т/ζ 394 (М-Н)+). Для больших партий, соединение использовали без дополнительной очистки. Если получение выполняли в меньшем масштабе, остаток растворяли в эфире, фильтровали и фильтрат концентрировали с получением требуемого продукта.

Синтез 4. 4-(3,5-Дихлорпиридин-2-ил)-№((1т,4т)-4-гидрокси-4-метилциклогексил)бензолсульфонамид (ΉΜ^Ν-03-Α)

С1

Смесь диоксана и воды (3:1; 20 мл) дегазировали. Добавляли 2,3,5-трихлорпиридин (1,65 г, 9,0 ммоль), ^((1т,4т)-4-гидрокси-4-метилциклогексил)-4-(4,4,5,5-тетрамет-1Е-1,3,2-диоксаборолан-2ил)бензолсульфонамид (1,8 г, 4,6 ммоль), ^СО₃ (1,24 г, 9,0 ммоль) и [1,1-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий(11) (257 мг, 0,35 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при 120°С в микроволновой печи в течение 3 ч. Реакционную смесь концентрировали, разбавляли этилацетатом и промывали водой. Органические экстракты сушили (Μ§δΟ₄) и концентрировали с получением неочищенного остатка, который очищали на флэш-колонке (элюент: от 40 до 50% этилацетата в гептане). Продукт дополнительно очищали путем кристаллизации три раза (этилацетат/гептан) с получением титульного соединения (284 мг, 15%).

¹Н ЯМР (400 МГц; СПС1₃) δ 8,59 (1Н, т), 7,97 (2Н, б), 7,92-7,85 (3Н, т), 4,62-4,55 (1Н, т), 3,38-3,28 (1Н, т), 1,92-1,76 (2Н, т), 1,8-1,35 (7Н, т), 1,22 (3Н, δ).

ЖХМС: подвижная фаза А: 0,05% трифторуксусной кислоты в воде, подвижная фаза В: 0,05% три- 25 028077 фторуксусной кислоты в ацетонитриле; колонка: УМС Θϋδ А, С18 (50X4,6 мм) 3 иМ; скорость потока: 1,2 мл/мин; температура: комнатная. Время анализа: 4,5 мин - исходный растворитель 20:80 В:А повышали линейно до 95:5 В:А в течение первых 3 мин, выдерживали при 95:5 В:А в течение 0,5 мин, затем немедленно возвращали до 20:80 В:А в течение последних 1,5 мин. Время удерживания: 2,50 мин, т/ζ 415 (М+Н)+.

Синтез 5. 4-(3,5-Дифторпиридин-2-ил)-№((1г,4г)-4-гидрокси-4-метилциклогексил)бензолсульфонамид (НМС-№02-А) р

Перемешиваемый раствор смеси диоксан:вода (9:1; 100 мл), №((1г,4г)-4-гидрокси-4метилциклогексил)-4-(4,4,5,5-тетрамет-1Е-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензолсульфонамида (20 г, 50,6 ммоль), 2-бром-3,5-дифторпиридина (14,73 г, 75,94 ммоль) и карбоната натрия (10,73 г, 101,2 ммоль) дегазировали с использованием аргона в течение 10 мин. Добавляли [1,1-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий(11) (3,7 г, 5,06 ммоль) и реакционную смесь дегазировали в течение дополнительных 10 мин и перемешивали при 110°С в течение 6 ч. Растворитель выпаривали при пониженном давлении и соединение экстрагировали в этилацетат. Органический слой отделяли, сушили над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле, и фракции концентрировали до минимального объема и затем фильтровали. Полученный остаток промывали 20% этилацетатом в гексане с последующим промыванием н-пентаном с получением титульного соединения (8 г, 41%).

¹Н ЯМР (400 МГц; метанол-б₄) δ 8,54 (ά, 1=2,0 Гц, 1Н), 8,11 (ά, 1=8,2 Гц, 2Н), 7,99 (ά, 1=8,1 Гц, 2Н), 7,74 (т, 1Н), 3,20 (т, 1Н), 1,83-1,27 (т, 8Н), 1,18 (δ, 3Н).

ЖХМС: подвижная фаза А: 10 мМ формиата аммония в воде + 0,1% аммиака, подвижная фаза В: ацетонитрил + 5% подвижная фаза А + 0,1% аммиака; колонка: УМС ТпагГ С18 (50X4,6 мм) 3 иМ; скорость потока: 1,4 мл/мин. Время анализа: 4,5 мин - начальный растворитель 30:70 В:А повышали линейно 95:5 В:А в течение первых 1,75 мин, выдерживали при 95:5 В:А в течение 1 мин, линейно понижали до 30:70 В:А в течение 1,25 мин и выдерживали при 30:70 В:А в течение последних 0,5 мин. Время удерживания 1,88 мин, т/ζ 381 (М-Н)+.

Синтез 6. 4'-Хлор-2'-циано-№((1г,4г)-4-гидрокси-4-метилциклогексил)бифен-1Г-4-сульфонамид (НМС-С-01-А)

Перемешиваемый раствор смеси диоксан:вода (9:1; 100 мл), №((1г,4г)-4-гидрокси-4метилциклогексил)-4-(4,4,5,5-тетрамет-1Г-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензолсульфонамида (12 г, 30,4 ммоль), 2-бром-5-хлорбензонитрила (9,86 г, 45,5 ммоль) и карбоната натрия (6,44 г, 60,8 ммоль) дегазировали с использованием аргона в течение 10 мин. Добавляли [1,1-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий(11) (2,21 г, 3,0 ммоль) и реакционную смесь дегазировали в течение дополнительных 10 мин и перемешивали при 110°С в течение 6 ч. Растворитель выпаривали при пониженном давлении и соединение экстрагировали в этилацетат. Органический слой отделяли, сушили над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении с последующим промыванием нпентаном (дважды) и сушили в вакууме при 45-50°С с получением титульного соединения (5,7 г, 46,5%).

¹Н ЯМР (400 МГц, метанол-б₄) δ 8,01 (ά, 1=8,1 Гц, 2Н), 7,95 (т, 1Н), 7,83-7,74 (т, 3Н), 7,64 (ά, 1=8,5 Гц, 1Н), 3,25-3,17 (т, 1Н), 1,8-1,54 (т, 4Н), 1,47-1,34 (т, 4Н), 1,18 (δ, 3Н).

ЖХМС: подвижная фаза А: 10 мМ формиата аммония в воде + 0,1% аммиака, подвижная фаза В: ацетонитрил + 5% подвижная фаза А + 0,1% аммиака; колонка: УМС ТпагГ С18 (50X4,6 мм) 3 иМ; скорость потока: 1,4 мл/мин. Время анализа: 4,5 мин - начальный растворитель 30:70 В:А повышали линейно 95:5 В:А в течение первых 2,5 мин, выдерживали при 95:5 В:А в течение 0,5 мин, линейно понижали до 30:70 В:А в течение 1 мин и выдерживали при 30:70 В:А в течение последних 0,5 мин. Время удерживания 2,167 мин, т/ζ 403 (М-Н)+.

Синтез 6А. 4'-Хлор-2'-циано-№((1г,4г)-4-гидрокси-4-метилциклогексил)бифен-1Г-4-сульфонамид (НМС-С-01-А)

Колбу объемом 10 л заполняли мелкодисперсным (1г,4г)-4-амино-1-метилциклогексан-1-олом (123,7 г, 0,957 моль) и дихлорметаном (2400 мл). Триэтиламин (534 мл, 3,830 моль) добавляли по каплям. Суспензию охлаждали до ниже 5°С и 4-(4-хлор-2-цианофенил)бензол-1-сульфонилхлорид (298,9 г, 0,957 моль) в дихлорметане (768 мл) добавляли по каплям, поддерживая температуру на уровне менее 25°С.

- 26 028077

Реакционную смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры и перемешивали в течение 40 ч. Реакционную смесь охлаждали до менее 10°С и 2 М водный раствор хлористо-водородной кислоты (2090 мл) добавляли по каплям, поддерживая температуру на уровне менее 25°С (наблюдали экзотермическое добавление и белый дым). Фазы разделяли и органический слой промывали водой (2090 мл). Органические вещества сушили над безводным сульфатом магния, фильтровали и остаток промывали дихлорметаном (2 х 50 мл). Объединенные фильтраты затем объединили с неочищенным продуктом с аналогичной маломасштабной реакции 4-(4-хлор-2-цианофенил)бензол-1-сульфонилхлорида (50 г) и (1г,4г)-4амино-1-метилциклогексан-1-ола, и все объединенные материалы абсорбировали непосредственно на силикагеле (800 г). Их очищали с помощью хроматографии на силикагеле (8000 г), элюируя сначала этилацетатом:дихлорметаном 20:80, и затем последовательно смесью этилацетат:дихлорметан 30:70, 40:60, 50:50, с последующим чистым этилацетатом. Фракции, содержащие продукт, объединяли и концентрировали с получением желтого твердого вещества. Указанное вещество сушили в вакуумной печи в течение ночи при 40°С с получением титульного соединения (406,8 г; всего 88% выход). Анализ ЯМР показал чистоту >97%.

¹Н ЯМР: (270 МГц; СИСВ) δ 8,02 (ά, 1=8,6 Гц, 2Н), 7,78 (ά, 1=2 Гц, 1Н), 7,73-7,63 (м, 3Н), 7,49 (ά, 1=8,5 Гц, 1Н), 4,89 (ά, 1=7 Гц, 1Н), 3,38 (м, 1Н), 1,98-1,75 (м, 2Н), 1,75-1,3 (м, 7Н, м), 1,23 (δ, 3Н).

ВЭЖХ: подвижная фаза А: очищенная вода + 0,1% трифторуксусная кислота, подвижная фаза В: ацетонитрил + 0,1% трифторуксусная кислота; колонка: ΓοΓίΐδ С18 4,6 х 150 мм; 3 иМ; скорость потока: 1,0 мл/мин. Время анализа: 30 мин -начальный растворитель 5:95 В:А повышали линейно 95:5 В:А в течение первых 15 мин, выдерживали при 95:5 В:А в течение последних 15 мин. Время удерживания 12,0 мин. Масс-спектр: Вгакег Езцшге 3000 Р1из Ιοη Тгар М8; полярность положительно заряженных ионов, Ε8Ι: μ/ζ 403 (М-Н)+.

Синтез 7. 4'-Фтор-Х-((1г,4г)-4-гидрокси-4-метилциклогексил)-2'-(трифторметил)бифен-1Г-4сульфонамид (НМС-С-02-А)

Перемешиваемый раствор диоксан:вода (9:1; 100 мл), Х-((1г,4г)-4-гидрокси-4-метилциклогексил)-4(4,4,5,5-тетрамет-1Г-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензолсульфонамид-ил)бензолсульфонамида (20 г, 50,6 ммоль), 1-бром-4-фтор-2-(трифторметил)бензола (18,45 г, 75,9 ммоль) и карбоната натрия (10,73 г, 101,2 ммоль) дегазировали с использованием аргона в течение 10 мин. Добавляли [1,1-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий(11) (3,7 г, 5,06 ммоль) и реакционную смесь дегазировали в течение дополнительных 10 мин и перемешивали при 110°С в течение 6 ч. Растворитель выпаривали при пониженном давлении, и соединение экстрагировали в этилацетат. Органический слой отделяли, сушили над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле и фракции концентрировали и затем фильтровали. Полученный остаток промывали минимальным объемом дихлорметана с последующим промыванием н-пентаном (дважды) и сушили в вакууме при 45-50°С с получением титульного соединения (10,2 г, 47%).

¹Н ЯМР (400 МГц, метанол-дд) δ 7,93 (ά, 1=7,9 Гц, 2Н), 7,59 (ά, 1=9,2 Гц, 1Н), 7,51 (ά, 1=8,1 Гц, 2Н), 7,46 (ά, 1=6,6Гц, 2Н), 3,20 (м, 1Н), 1,79-1,51 (м, 4Н), 1,49-1,30 (м, 4Н), 1,18 (δ, 3Н).

ЖХМС: подвижная фаза А: 10 мМ формиата аммония в воде + 0,1% аммиака, подвижная фаза В: ацетонитрил + 5% подвижная фаза А + 0,1% аммиака; колонка: УМС Тпай, С18 (50X4,6 мм) 3 иМ; скорость потока: 1,4 мл/мин. Время анализа: 4,5 мин - начальный растворитель 30:70 В:А повышали линейно 95:5 В:А в течение первых 1,75 мин, выдерживали при 95:5 В:А в течение 1 мин, линейно понижали до 30:70 В:А в течение 1,25 мин и выдерживали при 30:70 В:А в течение последних 0,5 мин. Время удерживания 2,16 мин, μ/ζ 430 (М-Н)+.

Синтез 8. 2',4',6'-Трифтор-Х-((1г,4г)-4-гидрокси-4-метилциклогексил)бифен-1Г-4-сульфонамид (НМС-С-03-А) р

Р

Дегазировали смесь диоксан:вода (3:1; 20 мл). Добавляли 1-бром-2,4,6-трифторбензол (1,91 г, 9,1 ммоль), Х-((1г,4г)-4-гидрокси-4-метилциклогексил)-4-(4,4,5,5-тетрамет-1Г-1,3,2-диоксаборолан-2ил)бензолсульфонамид (1,8 г, 4,6 ммоль), К₂СО₃ (1,24 г, 9,0 ммоль) и [1,1 бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий(11) (257 мг, 0,35 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при 120°С в микроволновой печи в течение 3 ч. Реакционную смесь концентрировали, разбавляли этилацетатом и промывали водой. Органические экстракты сушили (М§80₄) и концентрировали с получением неочищенного остатка, который очищали на флэш-колонке (элюент: 40-50% этилацетата в гептане). Продукт дополнительно очищали путем кристаллизации (этилацетат/гептан) с получением титульного соединения (620 мг, 34%).

- 27 028077 ¹Η ЯМР: (400 МГц; СБС^) δ 7,95 (ά, 2Н), 7,58 (ά, 2Н), 6,80 (ί, 2Н), 4,62-4,52 (т, 1Н), 3,41-3,30 (т, 1Н), 1,91-1,81 (т, 2Н), 1,66-1,34 (т, 6Н), 1,22 (з, 3Н).

ЖХМС: подвижная фаза А: 10 мМ формиата аммония в воде + 0,1% аммиака, подвижная фаза В: ацетонитрил + 5% подвижная фаза А + 0,1% аммиака; колонка: УМС Тпаг1, С18 (50X4,6 мм) 3 иМ; скорость потока: 1,4 мл/мин. Время анализа: 5,5 мин - начальный растворитель 30:70 В:А повышали линейно 95:5 В:А в течение первых 2,5 мин, выдерживали при 95:5 В:А в течение 1 мин, линейно понижали до 30:70 В:А в течение 1,5 мин и выдерживали при 30:70 В:А в течение последних 0,5 мин. Время удерживания 2,40 мин т/ζ 400 (М+Η)*.

Синтез 9. 4-Бром-3-фтор-К-((1г,4г)-4-гидрокси-4-метилциклогексил)бензолсульфонамид

Диизопропилэтиламин (20 мл, 116,2 ммоль) добавляли к раствору (1г,4г)-4-амино-1метилциклогексанола (3 г, 23,2 ммоль) в дихлорметане (150 мл) и реакционную смесь охлаждали до 0°С. 4-Бром-3-фторбензол-1-сульфонилхлорид (6,98 г, 25,5 ммоль) добавляли в виде твердого вещества и реакционную смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение 4 ч. Реакционную смесь нейтрализовывали 1 М соляной кислотой и соединение экстрагировали в дихлорметане. Οрганический слой отделяли, сушили над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток промывали н-пентаном, фильтровали и сушили с получением титульного соединения (7 г, 82%). М8 (Ε8Ι) т/ζ 368 (М+Η)*).

Синтез 10. 3-Φтοр-Ν-((1^,4^)-4-гидрοкси-4-метилциклοгексил)-4-(4,4,5,5-тетрамет-Ι^-1,3,2диоксаборолан-2-ил)бензолсульфонамид

Перемешиваемый раствор толуола (50 мл), 4-бром-3-фтор-К-((1г,4г)-4-гидрокси-4метилциклогексил)бензолсульфонамида (9 г, 24,6 ммоль), 4,4,4',4',5,5,5',5'-октамет-1Ь-2,2'-би(1,3,2диоксаборолана) (9,33 г, 36,7 ммоль) и ацетата калия (7,23 г, 73,7 ммоль) дегазировали с использованием аргона в течение 10 мин. Добавляли [1,1-бис-(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий(11) (1,8 г, 2,5 ммоль) и реакционную смесь дегазировали в течение дополнительных 10 мин и перемешивали при 110°С в течение 4 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали через целит. Οрганический слой отделяли, сушили над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении с получением титульного соединения (10 г, 98%). Для больших партий, соединение использовали без дополнительной очистки. Если получение проводили в меньшем масштабе, остаток растворяли в эфире, фильтровали и фильтрат концентрировали с получением требуемого продукта. М8 (Ε8Ι) т/ζ 412 (М-Η)*).

Синтез 11. 4-(3,5-Дифторпиридин-2-ил)-3-фтор-К-((1г,4г)-4-гидрокси-4-метилциклогексил)бензолсульфонамид (НМС-Ν-ΟΙ-Α) г

г

Перемешиваемый раствор диоксана (50 мл), 3-фтор-К-((1г,4г)-4-гидрокси-4-метилциклогексил)-4(4,4,5,5-тетрамет-1Ь-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензолсульфонамида (18 г, 43,6 ммоль), 2-бром-3,5дифторпиридина (12,68 г, 65,37 ммоль) и карбоната цезия (35,52 г, 109,0 ммоль) дегазировали с использованием аргона в течение 10 мин. Добавляли [1,1-бис-(дифенилфосфино) ферроцен]дихлорпалладий(11) (3,2 г, 4,4 ммоль) и реакционную смесь дегазировали в течение дополнительных 10 мин и затем перемешивали при 110°С в течение 6 ч. Растворитель выпаривали при пониженном давлении и соединение экстрагировали в этилацетат. Οрганический слой отделяли, сушили над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Οстатοк очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с последующим промыванием н-пентаном с получением титульного соединения (8,19 г, 47%).

¹Η ЯМР (400 МГц, метанол-б₄) δ 8,55 (ά, 1=2,1 Гц, 1Η), 7,87-7,71 (т, 4Н), 3,24 (т, 1Η), 1,8-1,7 (т, 2Η), 1,66-1,55 (т, 2Η), 1,51-1,34 (т, 4Η), 1,19 (з, 3Н).

ЖХМС: подвижная фаза А: 5 мМ формиата аммония в воде + 0,1% аммиака, подвижная фаза В: ацетонитрил + 5% подвижная фаза А + 0,1% аммиака; колонка: УМС Тпаг1, С18 (50X4,6 мм) 3 иМ; скорость потока: 1,4 мл/мин. Время анализа: 4,5 мин - начальный растворитель 30:70 В:А повышали линейно 95:5 В:А в течение первых 2,5 мин, выдерживали при 95:5 В:А в течение 0,5 мин, линейно понижали до 30:70 В:А в течение 1 мин и выдерживали при 30:70 В:А в течение последних 0,5 мин. Время удерживания 1,88 мин, т/ζ 399 (М-Η)*.

- 28 028077

Синтез 12. 4-(3,5-Дихлорпиридин-2-ил)-3-фтор-Ы-((1г,4г)-4-гидрокси-4-метилциклогексил)бензолсульфонамид (НМС-Ы-04-А)

Раствор 3 -фтор-Ы-(( 1 г,4г)-4 -гидрокси-4 -метилциклогексил)-4-(4,4,5,5 -тетрамет-1Ь-1,3,2диоксаборолан-2-ил)бензолсульфонамида (0,338 г, 0,82 ммоль) в диметоксиэтане (10 мл) продували аргоном в течение 15 мин. Добавляли 2-бром-3,5-дихлорпиридин (0,185 г, 0,82 ммоль) и карбонат натрия (0,175 г, 1,65 ммоль) в воде и дегазировали с использованием аргона в течение 30 мин. Добавляли [1,1бис-(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий(11) (0,12 г, 0,16 ммоль) и реакционную смесь дегазировали в течение дополнительных 10 мин и затем перемешивали при 80°С в течение 2 ч. Реакционную смесь охлаждали и фильтровали через целит. Растворитель выпаривали при пониженном давлении и остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с использованием 50% этилацетата в гексане с получением титульного соединения (0,04 г, 11%).

¹Н ЯМР (400 МГц, метанол-64) δ 1,19 (3Н, к), 1,33-1,52 (4Н, т), 1,54-1,66 (2Н, т), 1,69-1,82 (2Н, т), 3,25 (1Н, т), 7,68 (1Н, т), 7,75 (1Н, т), 7,82 (1Н, т), 8,20 (1Н, б, 1=2,1 Гц), 8,65 (1Н,б, 1=2,1 Гц).

ЖХМС: подвижная фаза А: 10 мМ формиата аммония в воде + 0,1% аммиака, подвижная фаза В: ацетонитрил + 5% подвижная фаза А + 0,1% аммиака; колонка: УМС ТпагТ, С18 (50X4,6 мм) 3 иМ; скорость потока: 1,2 мл/мин. Время анализа: 5 мин - начальный растворитель 35:65 В:А повышали линейно 95:5 В:А в течение первых 2,5 мин, выдерживали при 95:5 В:А в течение 1,3 мин, немедленно снижали до 35:65 В:А в течение последних 1,2 мин. Время удерживания 2,59 мин т/ζ 431 (М-Н)+.

Синтез 13. 4'-Хлор-2'-циано-1/1-((1к,4к)-4-гидрокси-4-метилциклогексил)-[1,Г-бифенил]-4сульфонамид (НМС-С-01-В)

ΟΝ

Раствор Ы-((1к,4к)-4-гидрокси-4-метилциклогексил)-4-(4,4,5,5-тетрамет-1Ь-1,3,2-диоксаборолан-2ил)бензолсульфонамида (17 г, 43,0 ммоль), 2-бром-5-хлорбензонитрила (14 г, 64,7 ммоль) и карбоната натрия (9,1 г, 86 ммоль) в смеси диоксан:вода (240 мл, 9:1) дегазировали с использованием аргона в течение 10 мин. Добавляли [1,1-бис-(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий(11) (3,14 г, 4,3 ммоль) и реакционную смесь дегазировали в течение дополнительных 10 мин. Реакционную смесь нагревали при 110°С в течение 6 ч. Растворитель выпаривали при пониженном давлении, добавляли воду и соединение экстрагировали в этилацетат. Органический слой отделяли, сушили над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с использованием силикагеля 100-200 меш с использованием 20-40% этилацетата в гексане в качестве элюента. Фракции концентрировали до 1/10 объема (85 мл) и затем фильтровали. Полученный остаток промывали 20% этилацетатом в гексане с последующим промыванием н-пентаном с получением титульного соединения. Выход: 5,8 г, 33% (за 2 стадии).

¹Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-б) δ 8,04-7,97 (т, 2Н), 7,79 (б, 1=2,2 Гц, 1Н), 7,69-7,64 (т, 3Н), 7,48 (б, 1=8,4 Гц, 1Н), 4,45 (б, 1=8 Гц, 1Н), 3,3-3,15 (Вг, 1Н), 1,74-1,51 (т, 6Н), 1,45-1,35 (т, 2Н), 1,20 (к, 3Н), 1,00 (к, 1Н).

ЖХМС: подвижная фаза А: 5 мМ формиата аммония в воде + 0,1% аммиака, подвижная фаза В: ацетонитрил + 5% подвижная фаза А + 0,1% аммиака; колонка: УМС ТпагТ, С18 (50X4,6 мм) 3 иМ; скорость потока: 1,4 мл/мин. Время анализа: 4,5 мин - начальный растворитель 30:70 В:А повышали линейно 95:5 В:А в течение первых 2 мин, выдерживали при 95:5 В:А в течение 1,5 мин, линейно понижали до 30:70 В:А в течение 0,5 мин и выдерживали при 30:70 В:А в течение последних 0,5 мин. Время удерживания 2,62 мин т/ζ 403,30 [М-1].

Синтез 14. 4'-Фтор-Ы-((1к,4к)-4-гидрокси-4-метилциклогексил)-2'-(трифторметил)-[1,1'-бифенил]-4сульфонамид (НМС-С-02-В)

Раствор Ы-((1к,4к)-4-гидрокси-4-метилциклогексил)-4-(4,4,5,5-тетрамет-1Ь-1,3,2-диоксаборолан-2ил)бензолсульфонамида (13,5 г, 34,1 ммоль), 1-бром-4-фтор-2-(трифторметил)бензола (12,45 г, 51,2 ммоль) и карбоната натрия (7,24 г, 68,3 ммоль) в смеси диоксан:вода (230 мл, 9:1) дегазировали с использованием аргона в течение 10 мин. Добавляли [1,1-бис-(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий(11) (2,49 г, 3,4 ммоль) и реакционную смесь дегазировали в течение дополнительных 10 мин. Реакционную смесь нагревали при 110°С в течение 6 ч. Растворитель выпаривали при пониженном давлении, добавляли воду и соединение экстрагировали в этилацетат. Органический слой отделяли, сушили над сульфатом

- 29 028077 натрия и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с использованием силикагеля 100-200 меш с использованием 20-40% этилацетат в гексане в качестве элюента. Фракции концентрировали до 1/10 объема (80 мл) и затем фильтровали. Полученный остаток промывали 20% этилацетатом в гексане с последующим промыванием н-пентаном с получением титульного соединения. Выход: 5,6 г, 20% (за 2 стадии).

¹Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-ά) δ 7,97-7,88 (т, 2Н), 7,52-7,40 (т, 3Н), 7,31 (άά, 1=7,0, 2,4 Гц, 2Н), 4,40 (ά, 1=8,0 Гц, 1Н), 3,25-3,12 (Ьт, 1Н), 1,70-1,50 (т, 6Н), 1,45-1,33 (т, 2Н), 1,20 (§, 3Н), 1,00 (Ь§, 1Н).

ЖХМС: подвижная фаза А: 5 мМ формиата аммония в воде + 0,1% аммиака, подвижная фаза В: ацетонитрил + 5% подвижная фаза А + 0,1% аммиака; колонка: УМС Тпат1, С18 (50X4,6 мм) 3 иМ; скорость потока: 1,4 мл/мин. Время анализа: 4,5 мин - начальный растворитель 30:70 В:А повышали линейно 95:5 В:А в течение первых 2 мин, выдерживали при 95:5 В:А в течение 1,5 мин, линейно понижали до 30:70 В:А в течение 0,5 мин и выдерживали при 30:70 В:А в течение последних 0,5 мин. Время удерживания 2,79 мин т/ζ 430 [М-1].

Синтез 15. 2',4',6'-Трифтор-^((18,48)-4-гидрокси-4-метилциклогексил)-[1,Г-бифенил]-4сульфонамид (НМС-С-03-В) р

Р

Раствор ^((18,48)-4-гидрокси-4-метилциклогексил)-4-(4,4,5,5-тетрамет-1Г-1,3,2-диоксаборолан-2ил)бензолсульфонамида (15 г, 37,9 ммоль), 2-бром-1,3,5-трифторбензола (12 г, 56,9 ммоль) и карбоната натрия (8,03 г, 75,8 ммоль) в смеси диоксан:вода (250 мл, 9:1) дегазировали с использованием аргона в течение 10 мин. Добавляли [1,1-бис-(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий(11) (2,77 г, 3,8 ммоль) и реакционную смесь дегазировали в течение дополнительных 10 мин. Реакционную смесь нагревали при 110°С в течение 6 ч. Растворитель выпаривали при пониженном давлении, добавляли воду и соединение экстрагировали в этилацетат. Органический слой отделяли, сушили над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с использованием силикагеля 100-200 меш с использованием 20-40% этилацетата в гексане в качестве элюента. Фракции концентрировали до 1/10 объема (90 мл) и затем фильтровали. Полученный остаток промывали 20% этилацетатом в гексане с последующим промыванием н-пентаном с получением титульного соединения. Выход: 4,98 г, 18% (за 2 стадии).

¹Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-ά) δ 7,99-7,92 (т, 2Н), 7,61-7,53 (т, 2Н), 6,80 (1, 1=8,2 Гц, 2Н), 4,39 (ά, >7,8 Гц, 1Н), 3,25-3,12 (Ьт, 1Н), 1,75-1,51 (т, 6Н), 1,48-1,33 (т, 2Н), 1,20 (8, 3Н), 0,99 (8, 1Н).

ЖХМС: подвижная фаза А: 5 мМ формиата аммония в воде + 0,1% аммиака, подвижная фаза В: ацетонитрил + 5% подвижная фаза А + 0,1% аммиака; колонка: УМС Тпат1, С18 (50X4,6 мм) 3 иМ; скорость потока: 1,4 мл/мин. Время анализа: 4,5 мин - начальный растворитель 30:70 В:А повышали линейно 95:5 В:А в течение первых 2 мин, выдерживали при 95:5 В:А в течение 1,5 мин, линейно понижали до 30:70 В:А в течение 0,5 мин и выдерживали при 30:70 В:А в течение последних 0,5 мин. Время удерживания 2,65 мин т/ζ 398 [М-1].

Синтез 16. 2,2',4'-Трифтор-^((18,48)-4-гидрокси-4-метилциклогексил)-[1,Г-бифенил]-4сульфонамид (НМС-С-04-В)

Раствор 3-фтор-^((18,48)-4-гидрокси-4-метилциклогексил)-4-(4,4,5,5-тетрамет-1Г-1,3,2диоксаборолан-2-ил)бензолсульфонамида (3,1 г, 7,5 ммоль), 1-бром-2,4-дифторбензола (2,1 г, 10,9 ммоль) и карбоната натрия (1,6 г, 15,0 ммоль) в смеси диоксан:вода (60 мл, 5:1) дегазировали с использованием аргона в течение 10 мин. Добавляли [1,1-бис-(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий(11) (0,548 г, 0,75 ммоль) и реакционную смесь дегазировали в течение дополнительных 10 мин. Реакционную смесь нагревали при 110°С в течение 6 ч. Растворитель выпаривали при пониженном давлении, добавляли воду и соединение экстрагировали в этилацетат. Органический слой отделяли, сушили над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с использованием силикагеля 100-200 меш с 20-40% этилацетатом в гексане в качестве элюента с получением титульного соединения. Выход: 0,6 г, 18% (за 2 стадии).

¹Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-ά) δ 7,73-7,69 (т, 2Н), 7,56-7,47 (т, 1Н), 7,44-7,32 (т, 1Н), 7,06-6,91 (т, 2Н), 4,41 (ά, >7,8 Гц, 1Н), 3,27-3,14 (Ьт, 1Н), 1,76-1,52 (т, 6Н), 1,48-1,35 (т, 2Н), 1,21 (8, 3Н), 0,97 (8, 1Н).

ЖХМС: подвижная фаза А: 5 мМ формиата аммония в воде + 0,1% аммиака, подвижная фаза В: ацетонитрил + 5% подвижная фаза А + 0,1% аммиака; колонка: УМС Тпат1, С18 (50X4,6 мм) 3 иМ; скорость потока: 1,4 мл/мин. Время анализа: 4,5 мин - начальный растворитель 30:70 В:А повышали линей- 30 028077 но 95:5 В:А в течение первых 2 мин, выдерживали при 95:5 В:А в течение 1,5 мин, линейно понижали до 30:70 В:А в течение 0,5 мин и выдерживали при 30:70 В:А в течение последних 0,5 мин. Время удерживания 2,70 мин т/ζ 398 [М-1].

Синтез 17. 4-(3,5-Дифторпиридин-2-ил)-3-фтор-Х-((18,48)-4-гидрокси-4-метилциклогексил)бензолсульфонамид (НМС-Ν-ΟΙ-Β) р

Р

Раствор 3-фтор-Х-((18,48)-4-гидрокси-4-метилциклогексил)-4-(4,4,5,5-тетрамет-1Г-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензолсульфонамида (22 г, 53,2 ммоль), 2-бром-3,5-дифторпиридина (15,5 г, 79,9 ммоль) и карбоната цезия (52,0 г, 159,6 ммоль) в смеси диоксан:вода (100 мл) дегазировали с использованием аргона в течение 10 мин. Добавляли [1,1-бис-(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий(11) (3,9 г, 5,3 ммоль) и реакционную смесь дегазировали в течение дополнительных 10 мин. Реакционную смесь нагревали при 110°С в течение 6 ч. Растворитель выпаривали при пониженном давлении, добавляли воду и соединение экстрагировали в этилацетат. Органический слой отделяли, сушили над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с использованием силикагеля 100-200 меш с использованием 20-40% этилацетата в гексане в качестве элюента. Фракции концентрировали до 1/10 объема (110 мл) и фильтровали. Полученный остаток промывали 20% этилацетатом в гексане с последующим промыванием н-пентаном с получением титульного соединения. Выход: 5,6 г, 26% (за 2 стадии).

¹Н ЯМР (400МГц, хлороформ-ά) δ 8,50 (т, 1Н),7,83-7,67 (т, 3Н), 7,41-7,33 (т, 1Н), 4,43 (ά, >7,8 Гц, 1Н), 3,28-3,13 (т, 1Н), 1,74-1,52 (т, 6Н), 1,46-1,35 (т, 2Н), 1,21 (8, 3Н), 0,97 (8, 1Н).

ЖХМС: подвижная фаза А: 5 мМ формиата аммония в воде + 0,1% аммиака, подвижная фаза В: ацетонитрил + 5% подвижная фаза А + 0,1% аммиака; колонка: УМС ТпагГ С18 (50X4,6 мм) 3 иМ; скорость потока: 1,4 мл/мин. Время анализа: 4,5 мин - начальный растворитель 30:70 В:А повышали линейно 95:5 В:А в течение первых 2 мин, выдерживали при 95:5 В:А в течение 1,5 мин, линейно понижали до 30:70 В:А в течение 0,5 мин и выдерживали при 30:70 В:А в течение последних 0,5 мин. Время удерживания 2,42 мин т/ζ 399 [М-1].

Синтез 18. 4-(3,5-Дифторпиридин-2-ил)-Х-((18,48)-4-гидрокси-4-метилциклогексил)бензолсульфонамид (НМС-^02-Б) р

Перемешиваемый раствор ^((18,48)-4-гидрокси-4-метилциклогексил)-4-(4,4,5,5-тетрамет-1>1,3,2диоксаборолан-2-ил)бензолсульфонамида (26,5 г, 67,0 ммоль), 2-бром-3,5-дифторпиридина (19,5 г, 100,5 ммоль) и карбоната натрия (14,22 г, 134,2 ммоль) в смеси диоксан: вода (250 мл, 9:1) дегазировали с использованием аргона в течение 10 мин. Добавляли [1,1-бис-(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий(11) (4,90 г, 6,70 ммоль) и реакционную смесь дегазировали в течение дополнительных 10 мин. Реакционную смесь нагревали при 110°С в течение 6 ч. Растворитель выпаривали при пониженном давлении, добавляли воду и соединение экстрагировали в этилацетат. Органический слой отделяли, сушили над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с использованием силикагеля 100-200 меш с использованием 20-40% этилацетата в гексане в качестве элюента. Фракции концентрировали до 1/10 объема (100 мл) и затем фильтровали. Полученный остаток промывали 20% этилацетатом в гексане с последующим промыванием н-пентаном с получением титульного соединения. Выход: 5,9 г, 26% (за 2 стадии).

¹Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-ά) δ 8,48 (ά, >2,4 Гц, 1Н), 8,13-8,06 (т, 2Н), 7,98 (ά, ά=8,5 Гц, 2Н), 7,39-7,31 (т, 1Н), 4,39 (ά, >7,8 Гц, 1Н), 3,25-3,1 (Ьг, 1Н), 1,72-1,5 (т, 6Н), 1,42-1,32 (т, 2Н), 1,19 (8, 3Н), 0,96 (8, 1Н).

ЖХМС: подвижная фаза А: 5 мМ формиата аммония в воде + 0,1% аммиака, подвижная фаза В: ацетонитрил + 5% подвижная фаза А + 0,1% аммиака; колонка: УМС ТпаН;, С18 (50X4,6 мм) 3 иМ; скорость потока: 1,4 мл/мин. Время анализа: 4,5 мин - начальный растворитель 30:70 В:А повышали линейно 95:5 В:А в течение первых 2 мин, выдерживали при 95:5 В:А в течение 1,5 мин, линейно понижали до 30:70 В:А в течение 0,5 мин и выдерживали при 30:70 В:А в течение последних 0,5 мин. Время удерживания 2,41 мин т/ζ 381 [М-1].

- 31 028077

Синтез 19. 4-(3,5-Дихлорпиридин-2-ил)-К-((18,48)-4-гидрокси-4-метилциклогексил)бензолсульфонамид (ΗΜΟ-Ν-03-Β)

С1

Раствор К-((18,48)-4-гидрокси-4-метилциклогексил)-4-(4,4,5,5-тетрамет-1Ь-1,3,2-диоксаборолан-2ил)бензолсульфонамида (1,5 г, 3,8 ммоль), 2-бром-3,5-дихлорпиридина (1,3 г, 5,7 ммоль) и карбоната натрия (0,805 г, 7,6 ммоль) в смеси диоксан:вода (18 мл, 5:1) дегазировали с использованием аргона в течение 10 мин. Добавляли [1,1-бис-(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий(11) (0,277 мг, 0,38 ммоль) и реакционную смесь дегазировали в течение дополнительных 10 мин. Реакционную смесь нагревали при 110°С в течение 6 ч. Дополнительный раствор К-((18,48)-4-гидрокси-4-метилциклогексил)-4(4,4,5,5-тетрамет-1Ь-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензолсульфонамида (4 г, 10,1 ммоль), 2-бром-3,5дихлорпиридина (3,44 г, 15,2 ммоль) и карбоната натрия (2,14 г, 20,2 ммоль) в смеси диоксан:вода (54 мл, 5:1) дегазировали с использованием аргона в течение 10 мин. Добавляли [1,1-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий(11) (0,739 г, 1,0 ммоль) и реакционную смесь дегазировали в течение дополнительных 10 мин. Реакционную смесь нагревали при 110°С в течение 6 ч. Обе вышеуказанные партии объединяли. Растворитель выпаривали при пониженном давлении, добавляли воду и соединение экстрагировали в этилацетат. Органический слой отделяли, сушили над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с использованием силикагеля 100-200 меш с 20-40% этилацетатом в гексане в качестве элюента. Фракции концентрировали до 1/10 объема (30 мл) и затем фильтровали. Полученный остаток промывали 20% этилацетатом в гексане с последующим промыванием н-пентаном с получением титульного соединения. Выход: 0,79 г, 14% (за 2 стадии).

¹Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-б) δ 8,59 (т, 1Н), 8,02-7,94 (т, 2Н), 7,90-7,83 (т, 3Η), 4,47 (б, 1=8 Гц, 1Н), 3,25-3,1 (Ьг, 1Н), 1,73-1,5 (т, 6Н), 1,44-1,32 (т, 2Н), 1,19 (8, 3Η), 1,01 (8, 1Η).

ЖХМС: подвижная фаза А: 5 мМ формиата аммония в воде + 0,1% аммиака, подвижная фаза В: ацетонитрил + 5% подвижная фаза А + 0,1% аммиака; колонка: УМС ТпагТ, С18 (50X4,6 мм) 3 иМ; скорость потока: 1,4 мл/мин. Время анализа: 4,5 мин - начальный растворитель 30:70 В:А повышали линейно 95:5 В:А в течение первых 2 мин, выдерживали при 95:5 В:А в течение 1,5 мин, линейно понижали до 30:70 В:А в течение 0,5 мин и выдерживали при 30:70 В:А в течение последних 0,5 мин. Время удерживания 2,69 мин т/ζ 413[М-1].

Синтез 20. 2,2',4'-Трифтор-К-((1г,4г)-4-гидрокси-4-метилциклогексил)-[1,1'-бифенил]-4сульфонамид (НМС-С-04-А)

Раствор 3-фтор-К-((1г,4г)-4-гидрокси-4-метилциклогексил)-4-(4,4,5,5-тетрамет-1Г-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензолсульфонамида (3,5 г, 8,4 ммоль), 1-бром-2,4-дифторбензола (2,44 г, 12,7 ммоль) и карбоната натрия (1,79 г, 16,9 ммоль) в смеси диоксан:вода (60 мл, 5:1) дегазировали с использованием аргона в течение 10 мин. Добавляли [1,1-бис-(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий(11) (0,619 г, 0,85 ммоль) и реакционную смесь дегазировали в течение дополнительных 10 мин. Реакционную смесь нагревали при 110°С в течение 6 ч. Растворитель выпаривали при пониженном давлении, добавляли воду и соединение экстрагировали в этилацетат. Органический слой отделяли, сушили над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью очистки 8ГС: подвижная фаза: СО₂:метанол (05-50 за 5 мин), колонка: 5Шса 2-этилпиридин (250 х 4,6 мм, 5 мкм), скорость потока: 3 мл/мин, длина волны: 210-400 нм, с получением титульного соединения. Выход: 0,7 г, 19% (за 2 стадии).

¹Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-б) δ 7,78-7,64 (т, 2Н), 7,62-7,45 (т, 1Н), 7,44-7,34 (т, 1Н), 7,06-6,91 (т, 2Н), 4,51 (б, 1=6,8 Гц, 1Н), 3,40-3,35 (Ьг, 1Н), 1,95-1,83 (т, 2Н), 1,67-1,37 (т, 6Н), 1,25 (б, 1=3,3 Гц, 3Η), 1,13 (8, 1Η).

ЖХМС: подвижная фаза А: 5 мМ формиата аммония в воде + 0,1% аммиака, подвижная фаза В: ацетонитрил + 5% подвижная фаза А + 0,1% аммиака; колонка: УМС ТпагТ, С18 (50X4,6 мм) 3 иМ; скорость потока: 1,4 мл/мин. Время анализа: 4,5 мин - начальный растворитель 30:70 В:А повышали линейно 95:5 В:А в течение первых 2 мин, выдерживали при 95:5 В:А в течение 1,5 мин, линейно понижали до 30:70 В:А в течение 0,5 мин и выдерживали при 30:70 В:А в течение последних 0,5 мин. Время удерживания 2,56 мин т/ζ 398 [М-1].

- 32 028077

Синтез 21. 5-Хлор-2-фенилбензонитрил

ΟΝ

2-Бром-5-хлорбензонитрил (297,0 г, 1,372 моль), фенилбороновую кислоту (184,0 г, 1,509 моль), карбонат натрия (436,3 г, 4,116 моль), 1,2-диметоксиэтан (4455 мл) и воду (1485 мл) добавляли в сосуд с атмосферой азота. Колбу дегазировали три раза азотом и добавляли тетракис(трифенилфосфин)палладии(О) (79,3 г, 0,069 моль). Колбу дегазировали три раза азотом и перемешивали и нагревали до 70°С и затем перемешивали при этой температуре в течение 24 ч. Дополнительно добавляли фенилбороновую кислоту (36,8 г, 0,302 моль), карбоната натрия (87,3 г, 0,824 моль) и тетракис(трифенилфосфин)палладий (15,9 г, 0,014 моль) и смесь перемешивали в течение дополнительных 16 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, суспензию фильтровали и твердое вещество промывали этилацетатом (2 х 2000 мл). Объединенные фильтраты разделяли и органический слой промывали насыщенным солевым раствором (2 х 2000 мл). Органический слой сушили над безводным сульфатом магния, фильтровали, и твердое вещество промывали этилацетатом (1000 мл). Объединенные фильтраты концентрировали, абсорбируя на силикагеле (600 г). Неочищенное вещество очищали на силикагеле (6 кг), элюируя 25-50% толуолом в гептане. Чистые фракции объединяли и концентрировали с получением белого твердого вещества. Твердое вещество азеотропировали с гептаном (8 х 800 мл) для удаления всех остатков толуола и получили требуемое соединение. Выход = 215,9 г (73,6%).

¹Н ЯМР (270 МГц, ДМСО 06> δ 8,18-8,12 (т, 1Н), 7,86 (бб, 1=8,4 Гц, 2,4 Гц, 1Н), 7,7-7,45 (т, 6Н).

Синтез 22. 4-(4-Хлор-2-цианофенил)бензол-1-сульфоновая кислота

ΟΝ

В 5-л колбу заполняли неочищенный 5-хлор-2-фенилбензонитрил (407,8 г, 1,909 моль) и хлороформ (2325 мл). Бледно-желтый раствор охлаждали до менее 5°С и добавляли хлорсульфоновую кислоту (343 мл, 5,15 моль), поддерживая температуру на уровне менее 10°С. Реакционную смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры и темно-коричневый раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи, реакционную смесь концентрировали при 20°С и остаток растворяли в этилацетате (2325 мл) - наблюдали экзотерму 33°С. Добавляли воду (490 мл) (экзотерма до 64°С) с последующим добавлением насыщенного солевого раствора (1920 мл), и смесь охлаждали до 19°С. Густую суспензию фильтровали (очень медленная фильтрация) и остаток промывали водой (2 х 1 л) и этилацетат (2 х 1,5 л). Фильтрационный остаток сушили в вакууме при 40°С в течение 64 ч с получением 435 г вещества желтого цвета. Его суспендировали с этилацетатом (1740 мл) при комнатной температуре в течение 20 мин, суспензию фильтровали и остаток промывали этилацетатом (435 мл). (Фильтрационный остаток сушили в вакууме при 40-60°С в течение двух ночей с получением кремового твердого вещества (366,3 г), содержащего 289 г титульного соединения (52% выход). Анализ по Карлу Фишеру показал продукт, содержащий 4,3% воды.

¹Н ЯМР (270 МГц, ДМСО б„) δ 8,16 (б, 1=2,3 Гц, 1Н), 7,85 (бб, 1=2,3 Гц, 8,5 Гц, 1Н), 7,73 (б, 1=8,2 Гц, 2Н), 7,65 (б, 1=8,2 Гц, 1Н), 7,54 (б, 1=8,3 Гц, 2Н).

Синтез 23. 4-(4-Хлор-2-цианофенил)бензол-1-сульфонилхлорид

ΟΝ

5-л колбу заполняли неочищенной 4-(4-хлор-2-цианофенил)бензол-1-сульфоновой кислотой (366,3 г, содержащей 289 г 4-(4-хлор-2-цианофенил)бензол-1-сульфоновой кислоты, 0,98 моль) и толуолом (3000 мл). Тионилхлорид (423 мл, 5,83 моль) добавляли по каплям с последующим добавлением диметилформамида (5 мл, 0,0646 моль). Реакционную смесь нагревали до 75°С и перемешивали в течение ночи. Реакционную смесь охлаждали, концентрировали ΐη \'аеио и остаток разделяли между этилацетатом (3000 мл) и водой (1500 мл), и органический слой промывали насыщенным солевым раствором (1500 мл). Органический слой сушили над безводным сульфатом магния (50 г) и фильтровали. Остаток промывали этилацетатом (2 х 100 мл), и объединенные органические слои концентрировали с получением титульного соединения (297,6 г, 93% выход) в виде желтого твердого вещества. Анализ ЯМР показал чистоту ~95%.

¹Н ЯМР (270 МГц, ДМСО б₆) δ 8,16 (б, 1=2 Гц, 1Н), 7,87 (бб, 1=2,1 Гц, 8,2 Гц, 1Н), 7,73 (б, 1=8,2 Гц, 2Н), 7,64 (б, 1=8,2 Гц, 1Н), 7,54 (б, 1=8,3 Гц, 2Н).

- 33 028077

Синтез 24. 2'-Циано-4'-фтор-Ы-((1г,4г)-4-гидрокси-4-метилциклогексил)-[1,1'-бифенил1-4сульфонамид (НМС-С-05-А)

Перемешиваемый раствор Ы-((1г,4г)-4-гидрокси-4-метилциклогексил)-4-(4,4,5,5-тетрамет-1Ь,3,2диоксаборолан-2-ил)бензолсульфонамида (1,6 г, 4,05 ммоль), 2-бром-5-фторбензонитрила (2,03 г, 10,15 ммоль), карбоната натрия (1,07 г, 10,1 ммоль) в смеси диоксан: вода (30:3 мл) дегазировали с использованием аргона в течение 10 мин. Добавляли [1,1-бис-(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий(11) (0,296 г, 0,405 ммоль) и реакционную смесь дегазировали в течение дополнительных 10 мин и перемешивали при 110°С в течение 6 ч. Растворитель выпаривали при пониженном давлении и соединение экстрагировали в этилацетат. Органический слой отделяли, сушили над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле. Полученный остаток промывали гексаном с последующим промыванием н-пентаном с получением титульного соединения в виде белого твердого. Выход: 1,1 г, 70%.

¹Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-ά) δ 8,04-7,97 (т, 2Н), 7,71-7,64 (т, 2Н), 7,55-7,49 (т, 2Н), 7,39-7,46 (т, 1Н), 4,46 (ά, 1=6,6 Гц, 1Н), 3,45-3,32 (т, 1Н), 1,92-1,82 (т, 2Н), 1,65-1,35 (т, 6Н), 1,23 (δ, 3Н), 1,11 (Ъг8, 1Н).

ЖХМС: подвижная фаза А: 5 мМ формиата аммония в воде + 0,1% аммиака, подвижная фаза В: ацетонитрил + 5% подвижная фаза А + 0,1% аммиака; колонка: УМС ТпагГ, С18 (50X4,6 мм) 3 иМ; скорость потока: 1,4 мл/мин. Время анализа: 5 мин - начальный растворитель 30:70 В:А повышали линейно 95:5 В:А в течение первых 2,50 мин, выдерживали при 95:5 В:А в течение 1,5 мин, линейно понижали до 30:70 В:А в течение 0,5 мин и выдерживали при 30:70 В:А в течение последних 0,5 мин. Время удерживания 2,50 мин (ΕδΙ) т/ζ 387[М-1].

Синтез 25. 4'-Циано-2'-фтор-Ы-((1г,4г)-4-гидрокси-4-метилииклогексил)-[1,1'-бифенил1-4сульфонамид (НМС-С-06-А)

Перемешиваемый раствор Ы-((1г,4г)-4-гидрокси-4-метилциклогексил)-4-(4,4,5,5-тетрамет-1Е-1,3,2диоксаборолан-2-ил)бензолсульфонамида (1,6 г, 4,05 ммоль), 4-бром-3-фторбензонитрила (2,03 г, 10,1 ммоль), карбоната натрия (1,07 г, 10,1 ммоль) в смеси диоксан/вода (30/3 мл) дегазировали с использованием аргона в течение 10 мин. Добавляли [1,1-бис-(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий(11) (0,296 г, 0,405 ммоль) и реакционную смесь дегазировали в течение дополнительных 10 мин и перемешивали при 110°С в течение 6 ч. Растворитель выпаривали при пониженном давлении и соединение экстрагировали в этилацетат. Органический слой отделяли, сушили над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле. Полученный остаток промывали гексаном с последующим промыванием н-пентаном с получением титульного соединения в виде белого твердого. Выход: 1,19 г, 75,79%.

¹Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-ά) δ 8,03-7,96 (т, 2Н), 7,73-7,66 (т, 2Н), 7,62-7,56 (т, 2Н), 7,54-7,48 (т, 1Н), 4,51 (ά, 1=6,65 Гц, 1Н), 3,42-3,30 (т, 1Н), 1,95-1,82 (т, 2Н), 1,66-1,55 (т, 2Н) 1,53-1,37 (т, 4Н), 1,23 (δ, 3Н), 1,12 (Ъг8, 1Н).

ЖХМС: подвижная фаза А: 5 мМ формиата аммония в воде + 0,1% аммиака, подвижная фаза В: ацетонитрил + 5% подвижная фаза А + 0,1% аммиака; колонка: УМС ТпагГ, С18 (50X4,6 мм) 3 иМ; скорость потока: 1,4 мл/мин. Время анализа: 5 мин - начальный растворитель 30:70 В:А повышали линейно 95:5 В:А в течение первых 2,50 мин, выдерживали при 95:5 В:А в течение 1,5 мин, линейно понижали до 30:70 В:А в течение 0,5 мин и выдерживали при 30:70 В:А в течение последних 0,5 мин. Время удерживания 2,52 мин (ΕδΙ) т/ζ 387[М-1].

- 34 028077

Дополнительные соединения.

Следующие соединения получали также для использования в качестве референсных соединений в биологических исследованиях, описанных в настоящем документе:

Обозначение	Структура
ΑΒϋ599	Ρ ν^\=/ Й Η νν-οΗ
ΑΒϋ735	Ρ й нА7_Ьн Н₃с
ΑΒϋ836	С1 /^=<\ // λ_θ / \ζ^Η С1—ά /) <7 А—8-Ν—< X й ΛΛη
ΑΒϋ899	Ρ ° / V^е43 ν^Γ\=/ у
ΑΒϋ900	Ρ /-( /-\ 9 у-\ СН₃ г-СПУ з—_Ν -СУ
ВЕРСИИ	Ρ /^\ ΑΛ _ЛЛ/^СНз п н^У_Ън Н₃С

Биологические исследования.

Активность оценивали с помощью анализа жизнеспособности на основе выживаемости клеточной линии макрофагов 1774. Макрофаги тесно связаны с остеокластами и были ранее использованы в качестве модельной системы для исследования выживания остеокластов (см., например, Ьисктап с1 а1., 1998, Не1егосус1е-соп1а1П1п§ ЫзрйозрйопаТез саизе арор!оз1з апй тЫЪй Ъопе гезогрйоп Ъу ргеуепйп§ ргоТет ргепу1айоп: еу1Йепсе £гот зйисШге-асйУйу ге1айопзЫрз ΐη 1774 тасгорйа^ез, 1. Вопе Мтег. Кез., Уо1. 13, р. 1668-1678). Указанная модель демонстративна как для эффекта защиты костей при таких заболеваниях, как остеопороз, остеоартрит и ревматоидный артрит, так и воздействия на воспаление, поскольку также как у остеокластов, выживание макрофагов 1774 зависит от продолжительной активации ΝΡΚΒ.

Метаболическую стабильность измеряли путем определения скорости исчезновения соединения в присутствии микросомальных препаратов печени человека, которое количественно определяли с помощью жидкостной хроматографии с масс-спектрометрией и стандартной масс-спектрометрии (ЖХМС/МС).

Растворимость измеряли путем растворения соединения в имитации кишечного сока натощак (Ра55ΙΡ) и количественно определяли с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).

Противовоспалительные эффекты были дополнительно охарактеризованы путем оценки выработки интерлейкина-6 (1Б-6) макрофагами, полученными из ТНр-1 человека, стимулированных провоспалительным стимулом, представляющим собой бактериальный липополисахарид (ЛПС). ЛПС с рецептором клеточной поверхности, То11-подобным рецептором-4 активирует сигнальные пути ΝΙ'ΚΒ и 1КБ для выработки 11,-6. Снижение ИЛ в данном стимулированном анализе свидетельствует о противовоспалительных эффектах с возможностью лечения состояний, при которых нарушена выработка 11,-6.

Исследования ΐη у1уо были проведены для оценки потенциала указанных соединений в качестве лекарственных средств.

Фармакокинетика была оценена на крысах и воздействия на заболевания оценивали на мышиной модели индуцированного коллагеном артрита.

Биологическое исследование 1. Анализ жизнеспособности макрофагов 1774 с резазурином.

Активность тестируемых соединений ΐη уйго определяли путем инкубации с макрофагами 1774 и последующего определения жизнеспособности клеток с использованием резазурина.

- 35 028077

Резазурин представляет собой окислительно-восстановительный краситель, обычно используемый в качестве индикатора жизнеспособности в культивируемых клетках (см., например, Лиооркитаг-Оикте, 2005, Βπΐίδΐι 1оита1 оГ КаДю1о§у, Уо1. 78, р. 945-947). Он нетоксичен для клеток и стабилен в культуральной среде, позволяет осуществлять непрерывное измерение пролиферации клеток ш уПго как в кинетическом, так и в итоговом анализе. Анализ основан на способности жизнеспособных метаболически активных клеток восстанавливать резазурин (который имеет синий цвет и является нефлуоресцирующим) до ресоруфина и дигидроресоруфина (которые имеют красный цвет и являются флуоресцентными) с помощью электронов от восстанавливающих веществ, таких как никотинамидадениндинуклеотид (НАДФН) и флавинадениндинуклеотид (ФАД). Указанное преобразование из окисленной формы в восстановленную форму можно измерить либо колориметрически, либо флуорометрически. Нарушения, которые ухудшают жизнеспособность клеток и пролиферацию, также влияют на способность клеток к восстановлению резазурина, и скорость восстановления красителя прямо пропорциональна количеству присутствующих жизнеспособных клеток.

Для измерения флуоресценции, как правило, измеряют длины волн возбуждения 530-560 нм и длины волн испускания при 590 нм. Для колориметрических измерений, как правило, измеряют поглощающую способность при 570 нм (восстановленная форма) и 600 нм (окисленная форма). Простой расчет выполняется для определения относительных количеств двух веществ: высокое отношение ресоруфина (восстановленная форма) к резазурину (окисленная форма) является показателем того, что клетки пролиферируют и являются жизнеспособными. Низкое соотношение указывает, что клетки находятся в состоянии покоя или являются нежизнеспособными.

Клетки 1774 высеивали в количестве 10⁴ клеток на лунку в 100 мкл αΜΕΜ (α модифицированная среда Игла) в 96-луночные планшеты и оставляли прорастать в течение ночи. На следующий день исследуемые соединения получали в виде 100 мМ растворов в ДМСО. Указанные исходные растворы разбавляли в ДМСО и затем разбавляли 1000х в культуральной среде (αΜΕΜ) до добавления непосредственно в лунки с получением желаемой конечной концентрации соединения. Через 72 ч инкубации при 37°С/5% СО₂, резазурин (А1атаг В1ие, Вюкоигсе 1йетаДопа1) добавляли в каждую лунку (1:10 об./об., 10 мкл). Планшет затем инкубировали при 37°С в течение 3 ч и флуоресценцию измеряли при 590 нм с диапазоном 25 нм.

Средние результаты для каждого исследуемого соединения выражали в виде процента (%) от среднего контрольного значения, отражающего жизнеспособность клеток. Средние значения в зависимости от исследуемых концентраций затем были нанесены на график и 1С₅₀ рассчитывали путем подгонки данных с помощью 4-параметрического уравнения 1С₅₀ с использованием программы СгаГп (ЕгйНасик 8ойтеаге). Каждый эксперимент повторяли дважды и данные представлены как среднее 1С₅₀ для обоих экспериментов.

- 36 028077

Результаты обобщены в следующей таблице.

Таблица 1 Анализ жизнеспособности макрофагов ΰ774 с резазурином
Соединение	1С₅о (мкМ) <¹>	1С₅о (мкМ) <²>
ΑΒϋ599	0,19	0,41
ΑΒϋ735	0,10	0,07
ΑΒϋ836	0,28	1,45
ΑΒϋ900	0,56	3,64
ΑΒϋ899	0,08	0,27
ВЕР001	0,12	0,05
НМС-С-01-А	0,13	1,89
НМС-С-02-А	0,26	14,7
НМС-С-ОЗ-А	0,14	0,41
НМС-С-04-А		0,50
НМС-С-05-А		2,46
НМС-С-06-А		0,71
ΗΜΟ-Ν-01-Α	0,13	2,66
ΗΜΟ-Ν-02-Α	0,18	4,59
ΗΜΟ-Ν-03-Α	0,17	0,62
ΗΜΟ-Ν-04-Α	0,18
НМС-С-01-В		0,16
НМС-С-02-В		1,74
НМС-С-ОЗ-В		0,20
НМС-С-04-В		0,06
НМС-Ν-ΟΙ-Β		0,14
НМС-Ы-02-В		0,36
НМС-Ы-ОЗ-В		0,08

⁽¹⁾ Результаты анализа жизнеспособности макрофагов с резазурином, проведенного при 6 точечной концентрации от 10 мкМ до 10 нМ с п=3 повторами на концентрацию. Данные представляют собой среднее из 2 независимых экспериментов.

⁽²⁾ Результаты анализа жизнеспособности макрофагов с резазурином, проведенного при 12 точечной концентрации от 10 мкМ до 0,5 нМ с п=4 повторами на концентрацию. Данные представляют собой среднее из 3 независимых экспериментов.

Указанные данные демонстрируют, что НМС соединения, описанные в настоящем документе, в частности НМС-С-01-А и НМС-С-01-В; НМС-С-03-А и НМС-С-03-В; НМС-С-04-А и НМС-С-04-В; НМСС-06-А; НМС-Ν-ΟΙ-Β; НМС-№02-В и НМСА'-03-В. проявляют превосходную активность в анализе жизнеспособности макрофагов с резазурином и не теряют активность по сравнению с эталонными соединениями.

Биологическое исследование 2. Микросомальная стабильность, измеренная с помощью микросом печени человека.

Метаболическую стабильность исследуемых соединений измеряли путем определения скорости исчезновения соединения при инкубации в присутствии микросом печени человека. Микросомы печени получают из эндоплазматического ретикулума гепатоцитов, и они являются основным источником наиболее важных ферментов (цитохром Р450), участвующих в метаболизме лекарственных средств. Исследование устойчивости лекарственных средств в присутствии микросом печени принято в качестве ценной модели, позволяющей быстро предсказать стабильность лекарственных средств ΐη νινί).

Микросомы печени человека были получены из коммерческих источников. Исследуемые соединения (1 мкМ) инкубировали со смешанными микросомами печени (мужской и женской). Образцы инкубировали в течение 60-минутного периода и удаляли так, чтобы получить 6 временных точек, и анализировали с помощью ЖХ-МС/МС на присутствие/количество исследуемых соединений.

Микросомы (конечная концентрация белка 0,25 или 0,5 мг/мл), 0,1 М фосфатного буфера, рН 7,4, и исследуемое соединение (конечная концентрация 1 мкМ; разбавленное с 10 мМ исходного раствора с получением конечной концентрации ДМСО 0,1%) инкубировали при 37°С перед добавлением в никотинамидадениндинуклеотидфосфата (АЛ1)Р1 Н конечная концентрация 1 мМ), чтобы инициировать реакцию. Конечный объем инкубации составил 100 мкл. Контрольную инкубацию включали для каждого исследуемого соединения, где 0,1 М фосфатного буфера с рН 7,4 добавляли вместо NА^ΡΗ. Соединение положительного контроля, терфенадин, было включено в каждый эксперимент и все инкубации прово- 37 028077 дили один раз для каждого соединения.

Каждое соединение инкубировали в течение 0, 5, 15, 30, 45 или 60 мин. Реакции останавливали добавлением 100 мкл ледяного ацетонитрила, содержащего внутренний стандарт (0,001 мМ глипизида) в соответствующих точках времени. Инкубационные планшеты центрифугировали при 4000 об/мин в течение 15 мин при 4°С для осаждения белка и 0,1 мл аликвоты анализировали с использованием ЖХМС/МС, с условиями, показанными в следующей таблице.

Таблица 2 Условия ЖХ-МС/МС
ВЭЖХ:	Всп1гпас1ги АдНеп1
МС/МС:	ΑΡΙ 4000, ΑΡΙ 4000 Ω-Тгар
Программное обеспечение	Апа1уз11,5
Режим ионизации:	Турбоспрей, положительный режим ионизации
Режим сканирования:	Мониторинг множественных реакций (МРМ)
Колонка:	\Л/а1егз, Х1егга, МВ-С18 (2) 5 мкМ 50 х 3,0 мм
Температура колонки (°С):	40
Фаза А:	0,1% муравьиная кислота в воде
Фаза В:	0,1% муравьиная кислота в ацетонитриле
Стандартные инъекции (мкл):	1, 2, 3, 5, 7, 10
Исследуемые инъекции (мкл):	1, 2, 3, 10, 20, 50
Скорость потока (мл/мин):	0,8-1

Из графика зависимости натурального логарифма отношения площади пика (т.е. отношение площадь пика соединения:площадь пика внутреннего стандарта) от времени, был определен градиент линии. Впоследствии были рассчитаны период полувыведения (Т_1/2) и собственный клиренс (СЦ_пТ) с использованием следующих уравнений, где V = инкубационный объем (мкл/мг микросомального белка):

константа скорости элиминации (к) = (- градиент), период полувыведения (Т_1/2) (мин) = 0,063/к, собственный клиренс (СЬ_1пТ) (мкл/мин/миллион клеток) = (V х 0,693)/Т_1/2.

- 38 028077

Указанные данные обобщены в следующей таблице.

Таблица 3 Стабильность в отношении микросом печени человека
Соединение	Τι/2 (мин)⁽¹⁾	Т1/2 (мин)⁽²⁾
ΑΒϋ599	287
ΑΒϋ735	524
ΑΒϋ836	> 900
ΑΒϋ899	72	105
ΑΒϋ900		87
ВЕР001	43
НМС-С-01-А	82
НМС-С-02-А	55
НМС-С-ОЗ-А	84
НМС-С-04-А		100
НМС-С-05-А		123
НМС-С-06-А		240
НМС-Ν-ΟΙ-Α	175
НМС-1Ч-02-А	367
НМС-Ы-ОЗ-А	258
НМС-1Ч-04-А	156
НМС-С-01-В		70
НМС-С-02-В		18
нмс-с-оз-в		48
НМС-С-04-В		107
НМС-Ν-ΟΙ-Β		127
НМС-1Ч-02-В		168
НМС-1Ч-03-В		70

⁽¹⁾ Соединения инкубировали с микросомами печени человека при конечной концентрации белка 0,25 мг/мл с отбором проб на 5 временных точках: 0, 5,

15, 30 и 60 мин. Одну повторность выполняли на одну временную точку.

⁽²⁾ Соединения инкубировали с микросомами печени человека при конечной концентрации белка 0,5 мг/мл с отбором проб на 6 временных точках: 0, 5, 15,

30, 45 и 60 мин. Две повторности выполняли на одну временную точку.

Указанные данные демонстрируют, что НМС соединения, описанные в настоящем документе, показывают метаболическую стабильность, эквивалентную таковой у эталонных соединений.

Биологическое исследование 3. Растворимость в воде.

Растворимость в воде измеряли путем растворения соединений в имитации кишечного сока натощак (Ба881Р) и количественно определяли спектрофотометрически.

Ба881Б получали, как описано ниже.

Получение прозрачного Ра881Р: 0,21 г гранул гидроксида натрия (ΝαΟΗ), 1,97 г моногидрата дигидрофосфата натрия (ΝαΗ₂ΡΟ₄·2Η₂Ο) и 3,09 г хлорида натрия (ΝαΟ) растворяли в 400 мл деионизованной воды. Значение рН доводили до 6,5 с помощью 1 М соляной кислоты и дополнительно добавляли деионизированную воду до конечного объема 500 мл.

Получение Ра881Р: 0,056 г порошка 8ΙΡ (содержащего таурохолат натрия и лецитин) (Рйагез АО) растворяли в 25 мл пустого Ба881Б и перемешивали, пока порошок полностью не растворялся. Раствор выдерживали в течение 2 ч, в течение которых он стал непрозрачным; его использовали в течение 24 ч. Окончательный состав раствора характеризовался следующим:

таурохолат натрия: 3 мМ, лецитин: 0,75 мМ, осмолярность: 270 ± 10 мОсмоль, рН: 6,5.

Растворимость в воде определяли путем внесения известной концентрации исследуемого соединения (растворенного в ДМСО) в Ба881Б с последующей инкубацией в течение 16 ч. Оптическую плотность измеряли в конце инкубационного периода для исследуемых соединений и эталон использовали для определения растворимости. Вкратце, два образца получали для каждого определения: эталонный образец, состоящий из исходного раствора исследуемого соединения в ДМСО, разведенного в системном

- 39 028077 растворе (бесфосфатный слабопоглощающий буфер), и пропанола; и исследуемый образец (полученный в трех экземплярах), состоящий из 0,5 мл Ра551Р с внесенным исследуемым соединением при 0,2 мМ. Каждый образец инкубировали при комнатной температуре в течение 16 ч при постоянном встряхивании при 250 об/мин. В конце инкубационного периода 0,3 мл каждого образца отфильтровали через фильтровальную пластину ρΙΟΝ (ΡΙΟΝ, ШоВигп ΜΑ), разводили 1:1 пропанолом и сканировали с использованием УФ-спектрофотометрии при λ_ΜΑΧ (190-400 нм) и 5рес1та Мах Р1ик - Уеткюп 2.1000 (Мо1еси1ат ϋενώεδ, 5иппууа1е, СΑ), с программным обеспечением для определения растворимости ц5ОЬ Ехр1отет (ρΙΟΝ, ШоВигп, ΜΑ).

Растворимость в Ра551Р была рассчитана с помощью следующей формулы:

Растворимость в Ра551Р

150		СЮ	образа
75		СЮ	эталона

10⁶

Молекулярная масса мл где ΟΏ означает оптическую плотность;

Ст означает концентрацию эталона (33,4 мкМ);

молекулярная масса для исследуемого соединения (например, 381,44 для ΑΒΏ735).

Таблица 4 Растворимость в Ра581Р
Соединение	Растворимость (мг/мл)⁽¹⁾	Растворимость (м г/мл)⁽²⁾
ΑΒϋ599	0,03
ΑΒϋ735	0,02
ΑΒϋ836	0,03
ΑΒϋ899	0,06	0,13
ΑΒϋ900		0,12
ΡΕΡΟΟ1	0,05
НМС-С-01-А	0,06
НМС-С-02-А	0,04
НМС-С-03-А	0,03
НМС-С-04-А		0,08
НМС-С-05-А		0,19
НМС-С-06-А		0,11
ΗΜΟ-Ν-01-Α	0,03
ΗΜΟ-Ν-02-Α	0,02
ΗΜΟ-Ν-03-Α	> 0,08
ΗΜΟ-Ν-04-Α	0,06
НМС-С-01-В		0,08
НМС-С-02-В		0,07
НМС-С-03-В		0,15
НМС-С-04-В		0,13
ΗΜΟ-Ν-01-Β		0,12
ΗΜΟ-Ν-02-Β		0,12
ΗΜΟ-Ν-03-Β		0,10

⁽¹⁾ Проводили три повтора на исследование при рН 6,5.

⁽²⁾ Проводили два повтора на исследование при рН 6,8.

Указанные данные демонстрируют, что НМС соединения, описанные в настоящем документе, показывают растворимость, эквивалентную таковой у эталонных соединений.

Биологическое исследование 4. Анализ высвобождения 1Ь-6 ТНр1 макрофагами.

Активность ΐη νϊύΌ исследуемых соединений в клетках человека была определена путем инкубации с ТНр 1 макрофагами и последующей стимуляцией с воспалительным стимулом (бактериальный липополисахарид (ЛПС)) с последующим измерением высвобождением клеточного интерлейкина-6 (1Ь-6).

Указанный анализ очень показателен в отношении воздействия на воспаление. ЛПС является лигандом для То11-подобного рецептора-4 (ΤΡΚ4), который является членом семейства То11-подобных рецепторов клеточной поверхности. Указанный рецептор играет важную роль в активации иммунной системы, основные функции которого:

(а) рекрутировать иммунные клетки в местах инфекции путем производства цитокинов, таких как

1Ь-6;

- 40 028077 (b) активировать каскад комплемента, чтобы определить бактерии, активировать клетки и удалить как мертвые клетки, так и комплексы с антителами;

(c) активировать удаление посторонних веществ клетками, такими как макрофаги и дендритные клетки; а также (ά) активировать презентацию антигена, часть адаптивной иммунной системы.

ТБК4 оказывает свое действие путем активации сигнального каскада, что приводит к активации нескольких факторов транскрипции, включая ΝΤΚΒ и членов 3, 5 и 7 семейства регулирующего фактора транскрипции (ΙΚΡ) интерферона (ΙΚΡ-3, ΙΚΡ-5 и ΙΚΡ-7). Активация этих факторов транскрипции, в частности, ΝΤΚΒ и ΙΚΡ-7, запускает синтез и секрецию цитокинов, таких как интерлейкин 6 (Ш-6).

Перепроизводство/экспрессия Ш-6 связана со спектром заболеваний, в том числе аутоиммунными, воспалительными и раковыми. !Ш-6 преимущественно синтезируется макрофагами и Т-клетками и активно участвует в управлении перехода от острого к хроническому воспалению. Он действует путем изменения состава лейкоцитов инфильтрата в воспалительном пространстве, перемещая его из нейтрофилов к моноцитам/ макрофагам (см., например, СаЬау, 2006). Кроме того, ГЬ-6 оказывает стимулирующее действие на Т- и В-клетки (благоприятствуя хроническим воспалительным реакциям), а также на остеокласты (способствуя тем самым потере костной ткани). Эти эффекты участвуют в патологии ряда заболеваний, включая остеопороз, ревматоидный артрит, сахарный диабет, атеросклероз, депрессии, болезнь Альцгеймера, системную красную волчанку, болезнь Бехчета, множественную миелому и рак предстательной железы. Кроме того, пациенты с распространенным или метастатическим раком имеют более высокие, чем обычно уровни циркулирующих ГБ-6. Поэтому уменьшение уровней ГБ-6 в макрофагах является терапевтически полезным.

Клетки ТНр1 высевали в концентрации 1 х 10⁵ клеток/лунку и 1,7 х 10⁵ клеток/лунку в 500 мкл или 150 мкл полной среды ΚΡΜΙ, содержащей 1% пенициллина-стрептомицина и 10% инактивированной нагреванием фетальной бычьей сыворотки, в 24-луночные планшеты или 96-луночные планшеты соответственно, и оставляли прилипать в течение ночи. На следующий день клетки стимулировали форболмиристиновой кислотой (РМА) в конечной концентрации 100 нМ (24-луночные планшеты) или 200 нМ (96-луночные планшеты), чтобы индуцировать дифференцировку, и выдерживали в течение до 8 дней со сменой среды на 5 день, если клетки культивировали до 8 дней. Исследуемые соединения получали в виде 100 нм растворов в ДМСО и затем разводили серийно ДМСО перед разбавлением в культуральной среде. Разбавленные соединения добавляли к культурам за 1 ч до стимуляции 100 нг/мл БР8. После 16 или 18-часовой инкубации при 37°С/5% СО₂, клеточную культуральную среду собирали и анализировали на содержание Ш-6 человека с использованием набора !Ш-6 био-8е1 ЕЫ8А (К & Ό 8у51еш5). Средние результаты для каждого исследуемого соединения (п=3) были выражены в процентах (%) от среднего контрольного значения. Средние значения по исследуемым концентрациям затем наносили на график и КБ, для ингибирования Ш-6 рассчитывали путем подгонки данных по 4-параметрическому уравнению Ш50 с помощью программного обеспечения Сгай! усгБоп 6.0.12 (Егййасиз 8оП\уагс Б1б., Ьу Бг КоЬш БеаШегЬаггоу) или СгарЬРаб РгБт уегзюи 5.04 для \Утбо\У5 (СгарЬРаб 8ойуаге, Ба 1о11а, СаИГонна, И8А, ууу.§гарйрай.сош). Каждый эксперимент был повторен дважды, и данные представлены как среднее Ш₅₀ для обоих экспериментов.

- 41 028077

Результаты обобщены в следующей таблице.

Таблица 5 Анализ высвобождения 11_-6 макрофагами
Соединение	1С₅о (мкМ) <¹>	1С₅о (мкМ) ⁽²⁾
ΑΒϋ599		0,07
ΑΒϋ899		0,03
ΑΒϋ900		0,09
НМС-С-01-А	0,04	0,18
НМС-С-02-А	0,001	0,97
НМС-С-ОЗ-А	0,004	0,05
НМС-С-04-А		0,13
НМС-С-05-А		1,02
НМС-С-06-А		0,19
НМС-Ν-ΟΙ-Α	0,13	0,28
НМС-Ы-02-А	0,15	0,29
НМС-Ы-ОЗ-А	0,05
НМС-С-01-В		0,06
НМС-С-02-В		0,29
НМС-С-ОЗ-В		0,02
НМС-С-04-В		0,03
НМС-Ν-ΟΙ-Β		0,03
НМС-Ы-02-В		0,02
нмс-ы-оз-в		0,02

ТНр1 клетки высевали при концентрации 1 х 10⁵ клеток/лунку в 500 мкл полной среды КРМ1, содержащей 1% пенициллина-стрептомицина и 10% инактивированной нагреванием фетальной бычьей сыворотки, в 24-луночные планшеты на 8 дней со сменой среды на 5 день. Соединения тестировали в трех повторностях на 6-точечной кривой концентрация-эффект при концентрациях 10, 1, 0,1, 0,01, 0,001 и 0,0001 мкМ, и уровень 1Й-6 измеряли через 16 ч после стимуляции ЙР8. 1С₅₀рассчитывали с использованием Стай! νετδίοη 6.0.12 (ЕтДНасиз 8ой^ате).

⁽²⁾ ТНр1 клетки высевали при концентрации 1,7 х 10⁵ клеток/лунку в 150 мкл полной среде КРМ1, содержащей 1% пенициллина-стрептомицина и 10% инактивированной нагреванием фетальной бычьей сыворотки, в 96-луночные планшеты на 3 дня. Соединения тестировали в трех повторностях на 9 точечной кривой концентрация-эффект при концентрациях 30, 10, 3, 1, 0,3, 0,1, 0,03, 0,01 и 0,001 мкМ, и уровень 1Й6 измеряли через 18 ч после стимуляции ЙР8. 1С₅₀ рассчитывали с использованием СгарНРаб Рпзш νοΓδίοη 5,04 для Штбомх (СтарЬРаФ 8оЙ\уагс).

Указанные данные демонстрируют, что ΗМС соединения, описанные в настоящем документе, показывают превосходную активность в отношении ингибирования высвобождения 11,-6 из макрофагов человека, что свидетельствует о их применимости для лечения нарушений, в которую положительно регулируется 1Ь-6. Соединения ΗМС-С-01-А, ΗМС-С-03-А, ΗМС-С-06-А, ΗМС-С-01-В, ΗМС-С-03-В, ΗМС-С04-В, НМС-Ν-ΟΙ-Β, НМС-Х-02-В и НМС-Х-03-В показали особенно хорошую активность в снижении высвобождения 1Ь-6.

Биологическое исследование 5. Φармакοкинетические исследования на грызунах.

Всасывание и метаболическая стабильность были исследованы с использованием фармакокинетического анализа ΐη ν^νο.

Трем самцам крыс 8ргацнс-Оа^1су в возрасте 8-12 недель вводили исследуемые соединения либо перорально, либо внутривенно (уровень дозы 1 мг/кг массы тела внутривенно или 5 мг/кг массы тела перорально). Исследуемые соединения были получены в 0,5% карбоксиметилцеллюлозы (СМС)/0,1% Т\уссп 80 для перорального введения, или в 5% ДМСΟ/10% солютол в физиологическом растворе для внутривенного, введения Для соединения ΗМС-С-01-А форма для перорального введения была получена в 2% диметилацетамиде/20% гидроксипроп-1Е-3-циклодекстрине в воде. Животные имели свободный доступ к пище в течение всего исследования, за исключением голодания в течение ночи и 2 часа после введения дозы в день дозирования.

Οбразцы крови брали из ретро-орбитального сплетения в следующих временных точках и помещали в микропробирки, содержащие 20% раствор К₂Н1)ТА:

Пероральное дозирование: предварительная доза; 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 6, 8 и 24 ч после дозирования.

Внутривенное дозирование: предварительная доза; 0,08, 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 8, и 24 ч после дозирования.

Οбразцы крови центрифугировали с получением плазмы, которую переносили в отдельную емкость и замораживали при температуре -20 °С.

Для анализа образцы! оттаивали при комнатной температуре и получали путем осаждения белка с

- 42 028077 ацетонитрилом с введенным внутренним стандартом (500 нг/мл глипизида) в соотношении 1:4 с плазмой. Затем образцы встряхивали в течение 5 мин и центрифугировали в течение 10 мин при 20600 х § при 4°С. 100 мкл супернатанта собирали для анализа. Стандартные образцы были приготовлены аналогично, после введения 10 мкл аналита в пустые образцы плазмы крыс.

Концентрация исследуемого соединения в образцах плазмы крови крыс была определена с использованием ЖХ-МС/МС, с условиями, показанными в следующей таблице._

Таблица 6 Условия ЖХ-МС/МС
ВЭЖХ:	ВсЫтас1ги АдНеп1
МС/МС:	ΑΡΙ 4000
Программное обеспечение:	Апа1уз11,5
Режим ионизации:	Турбоспрей, отрицательный режим ионизации
Режим сканирования:	Мониторинг множественных реакций (МРМ)
Колонка	\Л/а1егз, Х1егга, М8-С18 (2) 5 мкМ 50 х 3,0 мм; О\|5соуегу Сгасе Втаг! ΡΡ183μ, 150 х 2,1, 3 мкМ; \Л/а1егз Вутте1гу δήβΐί С18 75 х 4,6, 3,5 мкМ; Ад\|Iеп1 гогЬах ΧϋΒ, 150 х 4,6, 5 мкМ
Температура колонки (°С):	40
Фаза А:	Ацетонитрил
Фаза В:	0,1% муравьиная кислота
Скорость потока (мл/мин):	0,8-1,2

Фармакокинетические параметры для исследуемых соединений были рассчитаны с помощью РНоеηΐχ ^ιηΝοηΙιη νεΓδΐοη 6.3 (ΡΗΑΓδϊ§Ηΐ Согр, СА) с использованием стандартных модельно-независимых методов. Пик концентрации в плазме (С_мах) и время пиковой концентрации плазмы (Т_мах) являлись наблюдаемыми значениями. Площадь под кривой концентрация в плазме-время (АИС) определяли с использованием линейной формулы трапеций до последней измеряемой концентрации (АИС^), а затем путем экстраполяции терминальной фазы элиминации до бесконечности (АиС_1Пр). Константу скорости терминальной элиминации (к_е0 определяли путем регрессионного анализа линейной концевой части логарифмической кривой концентрация в плазме-время. Время полувыведения фазы элиминации (Т_1/2) рассчитывали как 0,693/ке!. Предварительную биодоступность при пероральном приеме (Р) рассчитывали путем деления АИС (0-24 ч) после перорального введения на скорректированную АИС (0-8 ч) после внутривенного введения (например, Р = АИС (п.о.) х доза (в.в.)/АИС ( в.в.) х доза (п.о.)) и записывали в виде процента (%).

Фармакокинетические данные обобщены в следующей таблице._

Таблица 7 Фармакокинетические данные
Соединение	Биодост, Р (%)	в.в. А11С (нг/мл/мин)	п.о. лис (нг/мл/мин)	Т1/2 (ч)
ΑΒϋ735	83	1081	8965 ф	3,8
ΑΒϋ836	55	2142	5927	5,3
ΑΒϋ899	50	2133	10740ф	10,8
РЕР001	50	963	4766 ф	7,2
НМС-С-01-А	89	900	4002	6,2
НМС-С-02-А	39	546	1069	3,2
НМС-С-ОЗ-А	55	1427	3910	2,4
НМС-Ν-ΟΙ-Α	64	740	1408	13,4
НМС-1\1-02-А	43	3053 ΐ	3303	6,3
НМС-1Ч-03-А	8	5102 ф	962	3,1
НМС-Ы-04-А	66	1279	4203	2,9
НМС-С-01-В	67	1539	5121	5,7
НМС-С-ОЗ-В	116	816*	9432	8,3
НМ1Ч-С-04-В	59	1589*	9360	5,5
НМС-Ν-ΟΙ-Β	60	2824	8454	9,1
НМС-1\1-02-В	66	1931	6412	6,0
нмс-ы-оз-в	84	1380*	11609	7,4

Ф дозировали по 2 мг/кг внутривенно.

* дозировали по 0,5 мг/кг внутривенно. ί дозировали по 10 мг/кг перорально.

Указанные данные демонстрируют, что НМС соединения, описанные в настоящем документе, имеют превосходные фармакокинетические свойства при пероральном введении, эквивалентные таковым у эталонных соединений. Это делает их подходящими для применения в качестве пероральных лекарст- 43 028077 венных средств.

Биологическое исследование 6. Артрит у мышей, вызванный коллагеном.

Для всех процедур были использованы 7-, 8-недельные самцы мышей 1)В.А/1у Животных размещали в группах по 10 и содержали при 21±2°С при 12-часовом цикле свет/темнота с пищей и водой без ограничений. Полный адъювант Фрейнда (СРА) получали эмульгированием коллагена бычьего типа II при 4 мг/мл с 4 мг/мл суспензии микобактерий туберкулеза Н37Ка в неполном адъюванте Фрейнда (ΙΡΑ) (0,85 мл парафинового масла и 0,15 мл моноолеата маннита) в 1:1 (об./об.). Всех мышей иммунизировали подкожно 200 мкг бычьего коллагена II типа в СРА. Через 21 день все мыши были иммунизированы подкожно 100 мкг коллагена бычьего типа II в РА. У мышей начали развиваться признаки и симптомы артрита, следующие после бустерной иммунизации.

Для макроскопической оценки артрита следующие признаки в каждой лапе каждой мыши были измерены три раза в неделю и суммированы для получения артритного показателя (А^ (максимальный ΑI для одного животного составлял 16):

= нет видимых проявлений артрита.

= отек и/или эритема 1 пальца.

= отек и/или эритема 2 пальцев.

= отек и/или эритема более 2 пальцев.

= тяжелый артрит целой лапы и всех пальцев.

Животные были распределены на экспериментальные группы со средним артритным показателем 2,5 и затем получали соединение один раз в день в течение 14 дней через желудочный зонд либо в виде подкожных инъекций в дозе 10 мг/кг для положительного контроля, этанерцепта. После завершения эксперимента мышей умерщвляли.

Данные анализировали путем получения среднего артритного показателя по каждой экспериментальной группе. Средний артритный показатель сравнивали с артритным показателем контрольных (необработанных) животных с использованием следующей формулы для получения процентного ингибирования заболевания.

Средний артритный показатель :

- обработанные животные о/₀ Ингибирования = 100 ~ - * 100 заболевания

Средний артритный показатель :

_ необработанные животные _

Данные сведены в следующей таблице.

Таблица 8 Ингибирование артрита
Соединение	Доза (мг/кг / сутки)	% ингибирования заболевания
ΑΒϋ735	10	44
ΑΒϋ899	10	77
НМС-С-01-А	10	40
НМС-С-01-А	3	60
НМС-С-01-А	1	50
НМС-С-01-А	0,3	60
ΗΜΟ-Ν-01-Α	10	45
НМС-С-02-А	10	61
ΗΜΟ-Ν-02-Α	10	36
НМС-С-01-В	10	26
ΗΜΟ-Ν-01-Β	10->1 (*)	38

(*) Снижали с 10 до 1 мг/кг/сутки из-за смертности.

Данные для некоторых соединений также показаны на фиг. 1 и 2.

На фиг. 1 показаны шесть графиков, демонстрирующих средний артритный показатель как функцию по времени (день дозирования) для исследуемого соединения, дозированного при 10 мг/кг/сутки путем принудительного питания через рот (незакрашенные круги) и контроля (закрашенные круги), для каждого из (А) НМС-С-02-А (сверху слева), (В) НМС-С-01-А (сверху посередине), (С) НМС-№02-А (сверху справа), (Ώ) НМС-№01-А (снизу слева), (Е) НМС-С-01-В (снизу посередине), (Р) НМС-Ν-ΟΙ-Β (снизу справа).

На фиг. 2 показаны два графика, демонстрирующих средний артритный показатель как функцию по времени (день дозирования) для исследуемого соединения (незакрашенные круги, незакрашенные квадраты), контроля (закрашенные круги) и положительного контроля, присутствующего на рынке лекарственного средства этанерцепт (треугольники), для каждого из (А) АВО899 при 10 мг/кг/сутки (слева), (В) НМС-С-01-А при 0,3 и 3 мг/кг/сутки (справа).

- 44 028077

Указанные данные показывают, что НМС соединения, описанные в настоящем документе, показывают превосходную пероральную активность ΐη νΐνο в предотвращении прогрессирования установленного тяжелого артрита.

Кроме того, данные показывают, исключительную активность соединения НМС-С-01-А, которое показало большую эффективность, чем средства, доступного на рынке, этанерцепта, в низких дозах. Эта активность особенно удивительна, поскольку НМС-С-01-А не является наиболее активным соединением как в биологическом исследовании 1, так и в биологическом исследовании 4. Кроме того, активность НМС-С-01-А А больше, чем у близко родственного соединения, НМС-С-01-В, который является более активным, чем НМС-С-01-А в биологических исследованиях 1 и 4, что свидетельствует о том, что идентификация соединений с высокой эффективностью ни тривиальна, ни предсказуема.

Биологическое исследование 7. Максимально переносимая доза.

Острую токсичность соединений оценивали на крысах, с тем чтобы определить максимально переносимую дозу (МПД), показатель безопасности соединения для животных. Чем выше МПД, тем больше потенциальная безопасность исследуемого соединения.

Двум самцам и двум самкам крыс 8ргадие-Па^1еу в возрасте 8-12 недель вводили дозы в режиме исследования возрастания дозы на каждом уровне дозирования. Исследуемые соединения вводили перорально в виде суспензии, полученной в 0,5% карбоксиметилцеллюлозы (СМС)/0,1% Твин 80 в дозе 10 мл/кг. Животные имели свободный доступ к еде на протяжении исследования.

Животных осматривали по меньшей мере два раза в течение первого часа после введения дозы, приблизительно через 30 мин, а затем с часовыми интервалами в течение оставшейся части дня дозирования, по меньшей мере 4 ч. В последующие дни, животных наблюдали по меньшей мере один раз утром и один раз в конце дня. В соответствующих случаях характер и тяжесть клинических признаков и время записывали при каждом наблюдении. Наблюдения включали изменения в коже, мехе, глазах и слизистых оболочках, а также дыхательной, кровеносной, вегетативной и центральной нервной системы, а также соматической двигательной активности и модели поведения. Особое внимание было направлено на наблюдение тремора, судорог, слюнотечения, поноса, вялости, сна и комы.

По завершении исследования результаты выражали в виде максимально переносимой дозы для каждого соединения, которая является самой высокой без неприемлемой токсичности.

Максимальная доза без неприемлемых побочных эффектов была определена в МПД (выраженная в мг/кг).

Данные обобщены в следующей таблице.

Таблица 9 Максимально переносимая доза
Соединение	Максимально переносимая доза (мг/кг)
Самки	Самцы
ΑΒϋ735	20	10
ΑΒϋ899	30	30
ВЕР001	7,5	10
НМС-С-ОЗ-А	30	30
ΗΜΟ-Ν-03-Α	50	50
НМС-С-01-А <¹>	70	70
НМС-С-01-А (2)	>500	>500
НМС-Ν-ΟΙ-Α	80	80
НМС-С-02-А	> 200	> 200
ΗΜΟ-Ν-02-Α	> 200	> 200

⁽¹⁾ Дозировали крысам 8рга§ие Эаъ1с. как описано.

⁽²⁾ Дозировали крысам Нап Млаг.

Указанные данные показывают, что НМС соединения, описанные в настоящем документе, показывают значительно улучшенную безопасность по сравнению с эталонными соединениями ΑΒΏ735, ΑΒΏ899 и КЕР001.

Указанные данные также демонстрируют, что улучшение острой токсичности ни тривиально, ни предсказуемо и, что схожие схемы замещения, например в КЕР001, могут снижать острую токсичность. Кроме того, указанные данные показывают исключительную безопасность соединений НМС-С-01А, НМС-С-02-А, НМС-Ν-ΟΙ-Α, и НМС-У-02-Л, и особенно НМС-С-01-А.

Увеличение максимальной переносимой дозы, наблюдаемое в случае НМС соединений, описанных в настоящем документе, обеспечивает большую широту терапевтического действия по сравнению с эталонными соединениями и подчеркивает потенциал НМС соединений в качестве пероральных лекарственных средств.

- 45 028077

Биологическое исследование 8. Анализы на генотоксичность и цитотоксичность Сгееп8сгееп НС.

Сгееп8сгееп НС представляет собой анализ клеток млекопитающих для измерения генотоксичности и цитотоксичности химических соединений и смесей.

Термин генотоксичный используется для описания веществ, которые способны вызывать повреждения генетического материала (ДНК) в клетке, которые в конечном итоге могут проявлять мутагенные, канцерогенные или тератогенные эффекты у человека.

Анализ Сгееп8сгееп описывает генотоксический стресс как увеличение флуоресценции из генетически модифицированного производного р53-компетентной ТК6 лимфобластоидной клеточной линии человека. В модифицированных клетках регуляторные последовательности ДНК, которые способствуют транскрипции гена СΑ^^45а, регулируют экспрессию зеленого флуоресцентного белка (СРР). СΑ^^45а играет центральную роль в геномной целостности и генотоксический стресс вызывает его транскрипцию. Воздействие генотоксичных соединений, следовательно, увеличивает экспрессию СРР, которая наблюдается как увеличение флуоресценции и контролируется с помощью детекции флуоресценции с использованием планшетов или проточного цитометра. В анализе Сгееп8сгееп НС флуоресценция нормирована по измерению оптического поглощения для коррекции варьирования выхода клеток, вызванного потерей жизнеспособности клеток или цитотоксичностью. Статистически заданный предел для положительного результата в анализе Сгееп8сгееп НС составляет 1,5, т.е. 50% индукцию сверх базового уровня для контроля, обработанного носителем.

Цитотоксичность измеряют в анализе Сгееп8сгееп вместе с генотоксичностью и результаты оценки цитотоксичности используются для нормирования измерений генотоксичности, как описано выше.

В анализе Сгееп8сгееп НС, жизнеспособность клеток оценивали с использованием анализа поглощения пропидия йодида. Пропидия йод ид представляет собой интеркалирующий агент и флуоресцентную молекулу, которая может быть использована для окрашивания клеток. Его обычно используют для количественной оценки содержания ДНК, чтобы оценить жизнеспособность клеток или содержание ДНК в анализе клеточного цикла, и он может быть использован для дифференцировки некротических, апоптических и нормальных клеток (см., например, Оеп§1ег е! а1., 1995, Αηΐ^саηсег Огц§8, Уо1. 6, Νο. 4, р. 522532). Воздействие цитотоксическим соединением увеличивает поглощение пропидия йодида, которое контролируется с помощью оптического поглощения и пропорционально клеточной пролиферации. Цитотоксические соединения представляют собой соединения, которые показывают наблюдаемое уменьшение относительного выживания популяции ниже значимого порогового значения, установленного на 90% по сравнению с обработанным носителем контролем в одной или более тестовых концентрациях.

Серийные разбавления каждого исследуемого соединения получали параллельно в 96-луночном микропланшете черного цвета с оптически прозрачной основой. Стандарт генотоксического соединения (метилметансульфонат, ММ8) добавляли в качестве внутрипланшетного контроля качества. Планшеты анализировали в моменты времени 24 и 48 ч при помощи планшет-ридера, который обеспечивает измерения поглощения света и флуоресценции для клеток и растворов в лунках микропланшетов.

В дополнение к измерениям жизнеспособности клеток и генотоксичности, описанным выше, анализ Сгееп8сгееп включает оценку воздействия метаболической активации в указанном анализе, анализ Сгееп8сгееп НС 89. Чтобы его выполнить, клетки инкубировали как в присутствии, так и в отсутствие экстракта пост-митохондриального супернатанта печени (известного как 89). 89 обычно используется в генетической токсикологии, чтобы добавить в исследуемые клетки метаболизм I фазы млекопитающих. Для оценки метаболической активации, соединения инкубируют со штаммом ТК6 в присутствии 1% об./об. смеси фракции 89 в течение 3 ч с последующим 45-часовой временем восстановления. После восстановительного периода, сигнал флуоресценции СРР и жизнеспособность клеток (оценивается посредством поглощения пропидиума иодида) измеряют с использованием проточного цитометра. Циклофосфамид, обычно используемый контроль в исследованиях генотоксичности с использованием метаболической активации, используется в качестве положительного контроля в анализе. В анализе Сгееп8сгееп НС 89, генотоксичность оценивается по индукции экспрессии СРР, количественно определенной с использованием средней флуоресценции и цитотоксичности образца с использованием анализа поглощения пропидия йодида, описанного выше. Статистически заданный предел для положительного результата генотоксичности составляет 1,3, т.е. 30% индукцию сверх базового уровня для контроля, обработанного носителем, и результат сообщается как положительный или отрицательный. Цитотоксические соединения представляют собой соединения, которые показывают наблюдаемое уменьшение относительного выживания популяции ниже порогового значения, установленного ниже значимого предела, установленного на 90%, по сравнению с обработанным носителем контролем, при одной или более тестовых концентрациях.

Стабильно трансфицированные репортерные клеточные линии были получены из р53компетентной лимфобластоидной клеточной линии человека ТК6. Репортерная клеточная линия содержит эписомально реплицирующийся плазмид, содержащий участок вышележащего промотора и другие регуляторные последовательности гена человека СΑ^^45а, связанного с оптимизированным геном зеленого флуоресцентного белка (СРР) человека. Контроль клеточной линии содержит идентичную плазмиду для удаления 4 пар оснований в начале гена ЕСРР, таким образом, что СРР не производится. Обе

- 46 028077 плазмиды также содержат ген, придающий клеточной линии устойчивость к гигромицину В, обеспечивая продолжительную селекцию на присутствие плазмиды (200 мкг/мл гигромицина В; 1пуйго§еп Согрогайои, СагЕЪай, СА). Обе клеточные линии поддерживали в полной культуральной среде (ΚΡΜΙ 1640 с ОЫатах™ и 25 мМ Ν-2 гидроксиэтилпиперазин-№-2-этансульфоновой кислотой (1пуйго§еп Согрогайои) с добавлением 10% (об./об.) инактивированной нагреванием донорской лошадиной сыворотки (Ьои/а ШокащНат Ый., ШокпщНат. иК), 10 мМ пирувата натрия (1иуйго§еп Согрогайои) и 5000 ед/мл пенициллина О натрия с 5000 мкг/мл стрептомицина сульфата (1иуйго§еи Согрогайои)) при 37°С с 5% СО₂ в увлажненной атмосфере.

Каждый аналитический планшет готовили для оценки каждого исследуемого соединения в девяти последовательных 2-кратных разведениях, как с репортерным штаммом, так и с контрольной клеточной линией, которая содержит те же генетические изменения, что и тестовый штамм, но не вырабатывает ОРР из-за небольших изменений в последовательности в начале введенного гена ОРР. 48-часовые экспозиции проводили в стерильных оптически прозрачных 96-луночных микропланшетах с черными стенками и плоским дном из полистирола. Дублирующие лунки как высокой (50 мкг/мл), так и низкой (10 мкг/мл) концентрации метилметансульфоната были включены в качестве внутрипланшетного положительного контроля, чтобы обеспечить достоверность данных. Другие контрольные лунки включали обработанные носителем (1% об./об. ДМСО) клетки в качестве отрицательного контроля, только среду для анализа для проверки загрязнения, и исследуемое соединение со средой для анализа, чтобы определить какую-либо свойственную флуоресценцию и/или оптическое поглощение за счет цвета или осадков.

Дышащие мембраны (ВгеаТНЕазу, В1уег81Йей Вю1есй, ИЗА) наносили на микропланшеты до их энергичного встряхивания (20 с). За этим последовала статическая инкубация в течение 48 ч при 37°С и 5% СО₂ в увлажненной атмосфере. Через 48 ч микропланшеты интенсивно встряхивали в течение 10 с для ресуспендирования клеток перед спектрофотометрическим сбором данных. Данные флуоресценции были нормированы по данным оптической плотности, чтобы получить значение яркости по отношению к среднему у обработанных носителем контролей и наносили на график относительно концентрации соединения. Увеличение яркости > 50% было классифицировано как положительный результат для генотоксичности: это отражает увеличение больше чем в три раза стандартного отклонения по данным флуоресценции для обработанных носителем и обработанных негенотоксином клеток. Данные оптической плотности были нормированы по обработанному носителем контролю и нанесены на график цитотоксичности. Цитотоксичность в 90% отражает статистически значимое снижение выхода клеток и записывается как ингибирующий рост клеток токсический эффект.

Исходные данные, полученные с микропланшетов для анализа ОгеепЗсгееп НС, были автоматически проанализированы с использованием микропланшета с помощью программного обеспечения ОгеепЗсгееп НС для создания сводной таблицы результатов для следующих параметров: минимальные эффективные концентрации (ЬЕС), которые вызывают положительные результаты в анализе исключения пропидия йодида (т.е. потерю жизнеспособности клеток) в течение 24 и 48 ч в присутствии и в отсутствие фракции 39; отрицательные или положительные последствия в отношении генотоксичности.

Результаты обобщены в следующей таблице._

Таблица 10 Цитотоксичность и Генотоксичность
Соединение	Цитотоксичность, !_ЕС (мкМ)	Генотоксичность
24 ч	48 ч, -89	48 ч, +89
ΑΒϋ735	0,31	0,31	5	Отрицательно
ΑΒϋ836	0,04	0,01	40	Положительно
ΑΒϋ899 <¹>	< 0,001	< 0,001	0,32	Положительно
ΑΒϋ899 <²>	0,64	0,08	81,9	Отрицательно
ΑΒϋ900	0,29	0,07	74,1	Отрицательно
ВЕРСИИ	0,039	0,039	0,63	Положительно
НМС-С-01-А	0,47	0,12	60	Отрицательно
НМС-С-02-А	> 1000	60	120	Отрицательно
НМС-С-ОЗ-А	0,24	0,06	15	Отрицательно
ΗΜΟ-Ν-01-Α	0,94	0,12	60	Отрицательно
ΗΜΟ-Ν-02-Α	0,94	0,47	120	Отрицательно
ΗΜΟ-Ν-03-Α	0,94	0,24	30	Отрицательно
ΗΜΟ-Ν-04-Α	0,47	0,12	30	Отрицательно
НМС-С-01-В	0,08	0,005	4,82	Отрицательно
НМС-С-ОЗ-В	0,17	0,08	10,8	Положительно
ΗΜΟ-Ν-01-Β	0,01	0,05	5,85	Отрицательно
ΗΜΟ-Ν-02-Β	0,04	0,01	10,2	Отрицательно

⁽¹⁾ Партию лабораторного масштаба исследовали в диапазоне от 1,3 мМ до 0,3 пМ.

⁽²⁾ Партию среднего масштаба исследовали в диапазоне от 164 до 0,003 мкМ.

- 47 028077

Указанные данные показывают, что НМС соединения, описанные в настоящем документе, обладают улучшенной или, по меньшей мере, аналогичной цитотоксичностью и генотоксичностью по сравнению с эталонными соединениями и заметно лучше, чем, в частности, ΑΒΌ836 и КЕР001.

Данные также показывают, что изменения, необходимые для повышения профиля цитотоксичности и генотоксичности являются ни тривиальными, ни предсказуемыми. Это особенно подчеркивается профилями близко родственных соединений ΑΒΌ836 и НМС-№02-А.

Кроме того, данные показывают исключительную безопасность по отношению к общей цитотоксичности соединений НМС-С-02-А, НМС-С-01-А, НМС^-02-Α и НМС-Ν-ΟΙ-Α.

Биологическое исследование 9. Анализ ионного канала НЕКС.

Ингибирование ионного канала НЕКС (ген специфических калиевых каналов человека) опосредует поляризационный ток 1Кг в потенциале действия сердечной мышцы, указывая тем самым, что он вносит свой вклад в электрическую активность, которая координирует биение сердца. Когда способность НЕКС проводить электрический ток через клеточную мембрану подавляется или нарушена, это может привести к потенциально смертельному нарушению, называемому синдром удлинения от интервала ОТ. Эта связь между НЕКС и синдромом удлинения от интервала ОТ сделала ингибирование НЕКС важной антицелью, которую следует избегать во время разработки лекарственного средства.

Была исследована активность соединений против ионного канала НЕКС. Анализ проводили с использованием автоматизированного метода с локальной фиксацией потенциала с применением О-ра1сН, используя стабильно трансфицированные клетки яичника китайского хомячка (НЕКС-СНО). Клетки НЕКС-СНО культивировали в питательной смеси Р12 среды Ка1§Нп (Ιηνίίτο§εη) + 10% ΡΒδ при 37°С в течение 1-3 дней. Клетки выдерживали при 30°С в течение от 24 до 48 ч до фиксации потенциала для того, чтобы увеличить амплитуду тока НЕКС. Затем клетки собирали путем обработки трипсином и хранили в бессывороточной среде (8РМ) в препарате клеток 0-ра1сН на срок до 6 ч при комнатной температуре перед промыванием, и повторно суспендировали во внеклеточном растворе и наносили на сайты локальной фиксации для записи данных.

Протокол напряжения фиксации потенциала.

После получения конфигурации \\1ю1с се11, клетку выдерживали при - 80 мВ. Производили 50 мс импульс до -40 мВ для измерения утекающего тока, из которого вычитали следовой ток в режиме реального времени. Затем клетки деполяризовали до 20 мВ в течение 2 с, с последующим односекундным импульсом до -40 мВ, чтобы выявить следовой ток НЕКС. Этот режим осуществляли каждые 5 секунд, чтобы контролировать амплитуду тока.

Внеклеточный раствор: 137 мМ №С1, 4 мМ КС1, 1,8 мМ СаС1, 1 мМ М§С1, 10 мМ И(+)-глюкоза, 10 мМ буфер НеРЕ§ (рН доведен до 7,4 с помощью №ЮН).

После получения конфигурации \\Но1с се11 внеклеточный раствор (контроль) наносили первым и клетки стабилизировали в течение 2 мин во внеклеточном растворе. Исследуемое соединение затем наносили в совокупности концентраций от низких до высоких. Клетку инкубировали с каждой исследуемой концентрацией в течение 5 мин. Во время каждой инкубации клетки повторно стимулировали с использованием протокола напряжения, описанного выше, и амплитуду следового тока непрерывно контролировали.

Критерии приемлемости.

(1) Пиковый следовой ток >100 пА в контроле.

(2) Начальное снижение <30% и снижение останавливается до первого нанесения исследуемого соединения.

(3) Токи утечки <50% от контрольного пикового следового тока в любое время.

(4) Γδ < 20 МО в ходе всего эксперимента.

Степень ингибирования (%) получали путем измерения амплитуды следового тока, индуцированного односекундным тестовым импульсом до -40 мВ после двухсекундного импульса до +20 мВ, до и после инкубации с исследуемым соединением. Разницу в токе нормировали по контролю и умножали на 100 с получением процента ингибирования.

Кривые концентрация-ответ (1о§) были подогнаны по логистическому уравнению (три параметра при условии полного блокирования тока при очень высоких концентрациях исследуемого соединения) с получением расчета 50% ингибирующей концентрации (1С₅₀). Отношение концентрация-ответ для каждого соединения было получено из процентного снижения амплитуды тока последующими концентрациями.

- 48 028077

Результаты обобщены в следующей таблице.

Таблица 11 Ингибирование ионного канала МЕКС
Соединение	1С₅о (мкМ) <^{1 2}>	% ингибирования @ 30 мкМ
ΑΒϋ599	4,9	85
ΑΒϋ735	-	62,5
ΑΒϋ836	-	50
ΑΒϋ899	2,9	100
ΑΒϋ899		53 <³>
ΑΒϋ900		51
ΒΕΕ001	-	60
НМС-С-01-А	19,3	79
НМС-С-02-А	25	57
НМС-С-ОЗ-А	> 30	45
НМС-С-04-А		69
ΗΜΟ-Ν-01-Α	183	2
ΗΜΟ-Ν-02-Α	231	31
ΗΜΟ-Ν-03-Α	> 30	13
ΗΜΟ-Ν-04-Α	> 30	26
НМС-С-01-В		74
НМС-С-02-В		94
НМС-С-ОЗ-В		36
ΗΜΟ-Ν-01-Β		27
ΗΜΟ-Ν-02-Β		23
ΗΜΟ-Ν-03-Β		47
ΗΜΟ-Ν-04-Β		60

⁽¹⁾ 1С50 были рассчитаны с использованием четырехпараметрического логистического уравнения, рассчитанного автоматически в СтаГй ует8юп 6,0.12 (ЕтИЬаси8 8оП\уагс Ы4., Ьу Ότ КоЫп ЬсаШсгЬатгслу).

⁽²⁾ Исследовали партию лабораторного масштаба.

⁽³⁾ Исследовали партию среднего масштаба.

Полученные данные показывают, что НМС соединения, описанные в настоящем документе, обладают кардиологической безопасностью, необходимой для перорального активного лекарственного средства, и имеют преимущества безопасности по сравнению с эталонными соединениями, такими как АВЭ599 и АВЭ899, где НМС-^01-А, НМС-№02-А и НМС-^03-А показали особенно положительной профиль.

Биологическое исследование 10. Исследования первичных лейкоцитов человека.

Иммунная система человека включает целый комплекс клеток и органов, на которые могут оказать негативное воздействие на лекарственное средство или химические вещества. Это приводит к повышенной восприимчивости к инфекциям, опухолям, аллергическим реакциям, аутоиммунным реакциям или другим формам заболеваний иммунной системы. Следовательно, оценка иммунотоксичности является важным компонентом оценки безопасности новых лекарственных средств и идеальным профилем для потенциального противовоспалительного лекарственного средства, которое действует посредством модуляции иммунной системы, является профиль, который селективно демонстрирует эффект по отношению к определенным подмножествам клеток иммунной системы и не действует на другие, тем самым, не избегая общую иммунную активацию или подавление. Например, лекарственное средство, которое снижает жизнеспособность или активность моноцитов без каких-либо последствий на нейтрофилы, как ожидается, будет обладать противовоспалительными свойствами с возможностью применения в ряде заболеваний, не ставя под угрозу способность пациента реагировать на лечение и очищаться от инфекции.

Способность эталонного соединения (АВЭ735) влиять на жизнеспособность человеческих лейкоцитов исследовали с использованием клеток, полученных из цельной крови человека. Эффекты эталонного соединения (АВЭ 735) были протестированы на следующих типах белых кровяных телец: нейтрофилах, моноцитах, В-лимфоцитах и Т-лимфоцитах, включая как СП4-положительные (Т-хелперы) и СЭ8положительные (Т-цитотоксические) популяции. Каждый из указанных типов клеток имеет различную функцию в иммунной системе человека.

- 49 028077

Нейтрофилы также известны как гранулоциты. Они являются наиболее распространенными белыми кровяными клетками человека и составляют часть иммунной системы. Нейтрофилы действуют в качестве первичного ответа на острую фазу воспаления, вызванного бактериальной инфекцией.

Моноциты являются частью иммунной системы, обнаруживаемой в кровообращении. Моноциты периферической крови дифференцируются с образованием макрофагов, которые являются предшественниками ряда клеток, участвующих в модуляции иммунного ответа, в том числе дендритных клеток. Основной функцией моноцитов-макрофагов является действие в качестве клетки иммунного эффектора. Они активно участвуют в патогенезе некоторых хронических воспалительных состояний, включая ревматоидный артрит и рассеянный склероз.

Т-лимфоциты являются частью адаптивной иммунной системы и играют центральную роль в иммунитете. Есть несколько подвидов Т-лимфоцитов, каждый из которых обладают различными функциями в иммунной системе. Т-цитотоксические лимфоциты также известны как СЭ8+ Т-клетки из-за наличия молекулы, называемой ί'.Ό8. на их поверхности. Их роль состоит в уничтожении инфицированных клеток и опухолевых клеток, но при воспалительных условиях, они могут также усугубить заболевание. Т-хелперные лимфоциты также известны как СЭ4+ Т-клетки из-за наличия молекулы, называемой СЭ4, на их поверхности. Функцией клеток Т-хелперов является содействие в созревании В-лимфоцитов и активировании цитотоксических Т-клеток.

В-лимфоциты являются частью адаптивной иммунной системы. Их основные функции состоят в получении антител и действии в качестве антиген-презентирующих клеток, которые позволяют Тлимфоцитам распознавать чужеродные антигены.

Эффекты эталонного соединения (ΆΒΌ735) на жизнеспособность нейтрофилов, моноцитов, клеток СЭ4+ и СЭ8+ Т-клеток и В-лимфоцитов оценивали в условиях как покоя, так и стимуляции. Условия покоя были использованы для оценки возможных последствий на нормальные клетки, обнаруживаемые в крови человека, и стимулирующие условия были использованы для оценки эффектов соединения в условиях заболевания.

Воздействие на жизнеспособность клеток оценивали с помощью проточной цитометрии. Проточная цитометрия представляет собой лазерную биофизическую технологию, используемую для подсчета клеток, сортировки клеток и обнаружения биомаркеров путем суспендирования клеток в потоке жидкости и пропускания их перед электронным устройством обнаружения. Это позволяет провести одновременный многопараметрический анализ физических и химических характеристик до тысяч частиц в секунду. Сортировка клеток с использованием проточной цитометрии требует использования специфичных клеточных маркеров. Для количественной оценки количества клеток, используются подсчитывающих гранул в качестве внутреннего стандарта. Подсчитывающие гранулы представляют собой откалиброванную суспензию микрогранул, которые добавляют к известному объему пробы, так что объем пробы на гранулы известен. Это позволяет провести абсолютное определение числа клеток в образце. Кроме того, для В- и Т-лимфоцитов пролиферацию клеток измеряли с использованием красителя, известного как краситель клеточной пролиферации (еР1иог® 450). еР1иог® 450 представляет собой органический краситель, который может быть конъюгирован с маркерами, специфичными к клетке. Он флуоресцирует при возбуждении лазером пропорционально количеству клеток, связанных конъюгатом. Следовательно, его сигнал обеспечивает индикацию пролиферации специфических типов клеток.

Выделение нептрофилов и оценка влияния на выживаемость.

Нейтрофилы были выделены из цельной крови (собранной от здоровых доноров) с помощью двухстадийного градиента по плотности ΜίδΙορΑΓμιο® 1077 и ΜίδΙορηςυο® 1119. Полиморфноядерные клетки промывали в среде КРМ1 с антибиотиками (пенициллин 100 ед/мл, стрептомицин 100 мкг/мл) и повторно суспендировали в 2 х 10⁶ клеток/мл в среде КРМ1, дополненной 10% фетальной телячьей сыворотки (ΡСδ) и антибиотиками (пенициллин 100 ед/мл, стрептомицин 100 мкг/мл). Затем 50 мкл клеточной суспензии добавляли в 96-луночный планшет, с или без эталонного соединения (ΆΒΌ 735) (при 30, 10, 3, 1, или 0,3 мкМ) или контроля (0,3% ДМСО), с или без дексаметазона (1 мкМ) и инкубировали при 37°С/5% СО₂ в течение 24 ч. После инкубации клетки фиксировали и точный объем подсчитывающих гранул добавили в каждую пробирку для расчета количества живых клеток.

Выделение моноцитов и оценка влияния на выживаемость.

МНПК (мононуклеарные клетки периферической крови) были получены от здоровых доноров (все мужчины) и выделены путем центрифугирования на слое Рюо11 Рас|ис (ОЕ НеаКЪсаге, ИК). Затем клетки повторно суспендировали (3 х 10⁶ клеток/мл) в среде КРМ1, дополненной 10% ΡСδ и антибиотиками (пенициллин 100 ед/мл, стрептомицин 100 мкг/мл) и 1 мл клеточной суспензии добавляли в 48-луночный планшет, который затем инкубировали в течение 1 ч при 37°С/5% СО₂. Далее, супернатант отсасывали с удалением неадгезированных клеток, после чего промывали в два этапа, чтобы гарантировать удаление неадгезированных клеток. Слипшиеся клетки (моноциты) затем стимулировали либо ΕΡδ (10 нг/мл), ФНОа (10 нг/мл), либо макрофагальным колониестимулирующим фактором ^^δΡ) (10 нг/мл) в отсутствие (контроль) или в присутствии эталонного соединения (ΛΒΌ735) (при 30, 10, 3, 1 или 0,3 мкМ) в течение 48 ч при 37°С/5% СО₂. Далее, планшеты центрифугировали и моноциты промывали в ΡΒδ перед

- 50 028077 добавлением РВ8 плюс ΕΌΤΑ (10 мМ) и инкубировали при 4°С в течение 20 мин для облегчения отделения клеток, которое ускоряли пипетированием. Моноциты добавляли в пробирки Ра1соп и промывали центрифугированием с РВ8 перед добавлением точного объема подсчитывающих гранул в каждую пробирку для расчета количества живых клеток.

Выделение В-лимфоцитов и оценка влияния на выживаемость.

МНПК (мононуклеарные клетки периферической крови) были получены от здоровых доноров (все женщины) и выделены путем центрифугирования на слое Рюо11 Рас|ис (СЕ НеаРРсаге, ИК). Затем клетки повторно суспендировали в среде ИРМЕ дополненной 10% РС8 и антибиотиками (пенициллин 100 ед/мл, стрептомицин 100 мкг/мл). Клеточную суспензию добавляли в 96-луночный планшет, с или без эталонного соединения (АВЭ 735) (при 30, 10, 3, 1, или 0,3 мкМ) или контроля (0,3% ДМСО), с или без комбинации 8ЕарРу1ососси8 аигеик Сотап I (8АС) и интерлейкина-2 (8АС/1Ь-2) (1:10,000 и 2 нг/мл) и инкубировали при 37°С/5% СО₂ в течение 48 ч. После инкубации клетки окрашивали анти-человеческим ί'Ό19, перед добавлением точного объема подсчитывающих гранул в каждую пробирку для расчета количества живых клеток.

Выделение В-клеток и оценка влияния на пролиферацию.

МНПК (мононуклеарные клетки периферической крови) были получены от здоровых доноров (все женщины) и выделены путем центрифугирования на слое Рюо11 Рас|ис (СЕ НеаРРсаге, ИК). Затем клетки окрашивали красителем клеточной пролиферации, который измеряет пролиферацию клеток (еР1иог® 450) и повторно суспендировали в среде КРМ1, дополненной 10% РС8 и антибиотиками (пенициллин 100 ед/мл, стрептомицин 100 мкг/мл). Клеточную суспензию добавляли в 96-луночный планшет, с или без эталонного соединения (АВЭ 735) (при 30, 10, 3, 1, или 0,3 мкМ) или контроля (0,3% ДМСО), с или без комбинации 8ЕарРу1ососси8 аигеик Со\уап I (8АС) и интерлейкина-2 (8АС/1Ь-2) (1:10,000 и 2 нг/мл) и инкубировали при 37°С/5% СО₂ в течение 5 дней. После инкубации клетки окрашивали античеловеческим ί'Ό19, маркером В-лимфоцитов, перед анализом на поточном цитометре. Клетки с низким е450 считались пролиферирующими.

Выделение Т-клеток и оценка влияния на выживаемость.

МНПК (мононуклеарные клетки периферической крови) были получены от здоровых доноров (все женщины) и выделены путем центрифугирования на слое Рюо11 Рас|ис (СЕ НеаРРсаге, ИК). Затем клетки повторно суспендировали до 2 х 10⁶ клеток/мл в среде ИРМЕ дополненной 10% РС8 и антибиотиками (пенициллин 100 ед/мл, стрептомицин 100 мкг/мл). Клеточную суспензию добавляли в 96-луночный планшет, с или без эталонного соединения (АВЭ 735) (при 30, 10, 3, 1, или 0,3 мкМ) или контроля (0,3% ДМСО), с или без фитогемагглютинина (РНА, 5 мкг/мл) и инкубировали при 37°С/5% СО₂ в течение 48 ч. После инкубации клетки окрашивали анти-человеческими СЭ8 или СЭ4 перед добавлением точного объема подсчитывающих гранул в каждую пробирку для расчета количества живых клеток.

Выделение Т-клеток и оценка влияния на пролиферацию.

МНПК (мононуклеарные клетки периферической крови) были получены от здоровых доноров (все женщины) и выделены путем центрифугирования на слое Рюо11 Рас|ис (СЕ НеаРРсаге, ИК). Затем клетки окрашивали красителем клеточной пролиферации (еР1иог® 450) и повторно суспендировали в среде ИРМЕ дополненной 10% РС8 и антибиотиками (пенициллин 100 ед/мл, стрептомицин 100 мкг/мл). Клеточную суспензию добавляли в 96-луночный планшет, с или без эталонного соединения (АВЭ 735) (при 30, 10, 3, 1, или 0,3 мкМ) или контроля (0,3% ДМСО), с или без фитогемагглютинина (РНА, 5 мкг/мл) и инкубировали при 37°С/5% СО₂ в течение 5 дней. После инкубации клетки окрашивали античеловеческими ί'Ό8 или СЭ4 перед анализом на поточном цитометре. Клетки с низким е450 считались пролиферирующими.

Средние результаты (п = 3) для эталонного соединения (АВЭ735) выражали в виде кратного изменения в сравнении со средним контрольным значением. Затем данные были нанесены график с помощью программного обеспечения от СгаГР (ЕгРРасик 8оП\уагсЕ Каждый эксперимент повторяли три раза и данные представлены как среднее из всех экспериментов.

- 51 028077

Результаты обобщены в следующих таблицах._

Таблица 12

Жизнеспособность клеток в присутствии АВО735 (3 мкМ)

Тип клетки	Стимуляция	Кратное изменение жизнеспособности
Нейтрофилы	-	1,0
дексаметазон	0,8

В-лимфоциты	-	0,9
5АС/1Ь-2	1,1
СЮ4+ Т-лимфоциты	-	0,9
фитогемагглютинин	0,6
СО8+ Т-лимфоциты	-	0,8
фитогемагглютинин	0,7
	-	0,7
Моноциты	М-С5Р 1_Р5	1,1
1,0
	ФНОа	0,5

Таблица 13

Жизнеспособность клеток в присутствии ΑΒϋ735 (3 мкМ)

Тип клетки	Стимуляция	Кратное изменение пролиферации
В-лимфоциты	-	0,9
5АС/И-2	0,6
Οϋ4+ Т-лимфоциты	-	1
фитогемагглютинин	0,6
СО8+ Т-лимфоциты	-	0,7
фитогемагглютинин	0,3

Результаты для одной высокой концентрации (3 мкМ) эталонного соединения (ΑΒΏ735) в отношении типов лейкоцитов приведены выше. В данном анализе кратное изменение в 0,5 или ниже является существенным для потери жизнеспособности, а также изменения кратное изменение 0,6 или ниже является существенным для снижения пролиферации.

Из указанных данных можно увидеть, что эталонное соединение (ΑΒΏ735) селективно снижает жизнеспособность моноцитов в присутствии только ФНОа, но не в присутствии либо М-С8Р, либо ЬР8. Кроме того, эталонное соединение (ΑΒΏ735) проявляет очень незначительный эффект на жизнеспособность других популяций лейкоцитов, что указывает на то, что соединения из этой серии не являются в целом иммуносупрессивными. Также было показано, что эталонное соединение (ΑΒΏ735) уменьшает пролиферацию лимфоцитов с наиболее сильным действием на стимулированные СЭ8+ Т-лимфоциты. Профиль, такой как этот, с селективным снижением пролиферации субпопуляций лимфоцитов является привлекательным механистическим профилем для лечения воспалительных заболеваний, таких как ревматоидный артрит, системная красная волчанка, болезнь Крона и рассеянный склероз, а также для лечения лейкозов, включая: Т-клеточную лимфому, такую как экстранодальную Т-клеточную лимфому, кожную Т-клеточную лимфому, анапластическую крупноклеточную лимфому и ангиоиммунобластную Тклеточную лимфому; В-клеточную лимфому, такую как болезнь Ходжкина и неходжкинскую лимфому, в том числе диффузную крупноклеточную В-клеточную лимфому, фолликулярную лимфому, лимфому лимфатической ткани, связанной со слизистой, мелкоклеточную лимфоцитарную лимфому, лимфому клеток мантийной зоны и лимфому Беркитта; и другие лейкозы, такие как хронический лимфолейкоз и множественная миелома.

Биологическое исследование 11. Исследование артрита крыс, вызванного пристаном.

Для всех процедур были использованы самки крыс Льюиса. Животных размещали в группах по 5 и и содержали при 21±2°С при 12-часовом цикле свет/темнота с пищей и водой без ограничений. Артрит вызывали путем введения 0,3 мл пристана внутрикожно в основание хвоста. У крыс начали развиваться признаки и симптомы артрита примерно через семь дней после инъекции пристана.

Для макроскопической оценки артрита следующие признаки контролировали в каждой лапе каждой мыши три раза в неделю и суммировали для получения артритного показателя (ΑΙ) (максимальный ΑΙ для одного животного составлял 16):

= нет видимых проявлений артрита.

= отек и/или эритема 1 пальца.

= отек и/или эритема 2 пальцев.

= отек и/или эритема более 2 пальцев.

= тяжелый артрит целой лапы и всех пальцев.

- 52 028077

До введения пристана животные были распределены на экспериментальные группы и один раз в день в течение 28 дней получали исследуемое соединение в дозах 3 и 10 мг/кг/день через желудочный зонд или посредством внутрибрюшинной инъекции в дозе 0,05 мг/кг для положительного контроля, метотрексата. После завершения эксперимента мышей умерщвляли.

Данные анализировали путем получения среднего артритного показателя по каждой группе обработки. Средний артритный показатель сравнивали с артритным показателем контрольных (необработанных) животных с использованием следующей формулы для получения процентного ингибирования заболевания.

Средний артритный показатель :

~ обработанные животные

Ингибирования % заболевания = 100 - - * 100

Средний артритный показатель :

_ необработанные животные _

Данные сведены в следующей таблице.

Таблица 14 Ингибирование артрита
Соединение	Доза (мг / кг / сутки)	% ингибирования заболевания
ΑΒϋ899	3	21
ΑΒϋ899	10	Νϋ⁽¹⁾
НМС-С-01-А	3	40
НМС-С-01-А	10	67
НМС-Ν-ΟΙ-Α	3	39
НМС-Ν-ΟΙ-Α	10	60

⁽¹⁾Дозирование прекращали на 10 сутки вследствие побочных эффектов.

Данные для некоторых соединений также показаны на фиг. 3.

На фиг. 3 показаны шесть графиков, демонстрирующих средний артритный показатель как функцию от времени (день дозирования) для исследуемого соединения (незакрашенные круги), контроля (закрашенные круги), и положительного контроля, метотрексата (треугольники) для каждого из: (А) ΑΒΌ899, дозированного по 3 мг/кг/сутки (сверху слева), (В) НМС-С-01-А, дозированного по 3 мг/кг/сутки (сверху посередине), (С) ΗΜΟΝ-01-А, дозированного по 3 мг/кг/сутки (сверху справа), (Ό) АВО899, дозированного по 10 мг/кг/сутки (снизу слева), (Е) НМС-С-01-А, дозированного по 10 мг/кг/сутки (снизу посередине), и (Е) ΗΜΟΝ-01-А дозированного по 10 мг/кг/сутки (снизу справа).

Указанные данные показывают, что НМС соединения, описанные в настоящем документе, показывают превосходную пероральную активность ΐη νΐνο в предотвращении прогрессирования вызванного пристаном артрита, в то время как соединение АВО899 имело ограниченное действие на заболевание в этой модели, несмотря на хорошую активность в Биологическом исследовании 6. Кроме того, соединения НМС-С-01-А и ΗΜΟΝ-01-А хорошо переносились животными при длительном дозировании, в то время как АВО899 плохо переносился, таким образом, что было необходимо прекращение дозирования и удаление животных, получавших его в соответствии с исследованием (показано на фиг. 3, панель Ό). Кроме того, соединение НМС-С-01-А показало особенно хорошую эффективность в указанной модели, которая была эквивалентна продаваемой терапии первой линии для ревматоидного артрита, метотрексата.

Указанные данные дополнительно показывают, что идентификация соединений с высокой эффективностью является ни тривиальной, ни предсказуемой задачей.

Выше были описаны принципы, предпочтительные варианты реализации и характер функционирования настоящего изобретения. Однако следует понимать, что изобретение не ограничивается конкретными рассмотренными вариантами реализации. Наоборот, вышеописанные варианты реализации следует считать иллюстративными, а не ограничивающими, и следует понимать, что в этих вариантах реализации специалистами в данной области техники могут быть сделаны изменения без выхода за рамки настоящего изобретения.

Ссылки.

В настоящем документе приведен ряд публикаций с целью более полного описания и раскрытия изобретения и существующего уровня техники, к которому относится изобретение. Ниже представлен полный список ссылок на эти публикации. Полное содержание каждой из этих публикаций включено в настоящее описание посредством ссылки в той же степени, как если бы для каждой отдельной публикации конкретно и индивидуально было указано ее включение посредством ссылки.

- 53 028077

АкаИозп! θί а/., 2008, “РготсИег ро1утогрп15тз ίη Лпе ΙΒΕ3 депе согФег рго(есЛоп ада1П5( зуз(ет1С 1ириз егу(пета(О5из”, Ьириз, νοΙ. 17 рр. 568-574.

Азкуе/а/., 2011, “А су!ок1пе-сеп1пс νίβνν οί (Ие ра(Иодепез15 и (геатмеп( οί аикнттипе аг(ИпЛз», ΰ ΙηΐθΐίθΓοη Су1окте Рез., νοΙ. 31, рр.927-940.

ВаИтапуаг θί ак, 2010, “Амино(паго1орупс1|пе5 и Лпек изе аз Ипазе ίηήίόίΐοΓδ», 1п1егпайопа1 ра1еп1 риЬНсаЛоп питЬег \Л/О 2010/027500 А1 риЬПзпес! 11 МагсН 2010.

Ваис! еТ а/., 1999, “В|дпаШпд Ьу рго1пЛатта(огу су(ок1пез: оПдотепгаЛоп οί ТВАЕ2 и ТВАР6 ιέ δΐιίίίοίθηΐ Тог ΰΝΚ и ΙΚΚ асЛуаЛоп и (агде( депе ίηάιιοΐίοη νίθ ап агтнпо1егт1па1 екес1ог йотат”, Сепез Реу., νοΙ. 13, рр. 1297-1308.

Ваис! θί а/., 2009, Ίδ ΝΡκΒ а доос! (агде( Тог сапсег (пегару? Норез и рНТаИз”, Ыа1. Реу. Ргид Р|зс., νοΙ. 8, рр. 33-40.

ВННаи, 2010, “Е(апегсер( 1тргоуез Ппеаг дго\л/1И и Ьопе тазз θοηιιίδίΐίοη ίη МТХ-гез1з1ап1 ро1уагЛси1аг-соигзе ίιινβηϋβ ίόίορθΐήίο агТИпЛз», Впеита(о1оду (ΟχίΟΓό), νοΙ. 49, рр. 1550-1558.

В1ас1п θί ак, 2006, “ΝονβΙ зи1рпопат1с1е с1епуаЛуез аз д1исосог1|со1с1 гесеркэг тос1и1а(ог5 Тог (пе (геа(теп( οί тЛатта(огу сПзеазез”, 1П(егпаЛопа1 ра(еп( риЬНсаЛоп питЬег \Л/О 2006/046916 А1 риЬНзЬес! 04 Мау 2006.

Вгеппап еТ а/., 1992, “ЕпЬапсес! ехргеззюп οί (итог песгоз15 ίθοΐοΓ гесеркэг тВЫА и ρΓοΐβίη ίη топопис!еаг сеПз 1зо1а(ес1 кот гЬеитакнс! агТЬпЛз зупоу|а! ίοίηΐδ”, Еиг. ΰ. 1ттипо1., νοΙ. 22, рр. 1907-1912.

Вгеппап е/а/., 1996, “СукЖтез ίη аикнттипКу», Сигг. Ορίη. 1ттипо1., νοΙ. 8, рр. 872-877.

СЬеп θί а/., 2012, “РЛдп-ак1П1(у и зе!есЛуе ЬоратЛпе Рз гесерТог ίυΙΙ адоп15(з”, Вюогд. & Мес!. Спет. Ьек., νοΙ. 22, рр. 5612-5617.

ΟήίΙάδ, Ι_.Μ., еТ а/., 2001, “ЕГЛсасу οί е(апегсер( ίοΓ \л/еаг с1еЬп5чпс1исес1 оз(ео1уз15», Цоита! οί Вопе и Мтега1 ВезеагсЬ, νοΙ. 16, Νο. 2, рр. 338-347.

РаПазе/а/., 2011, “Оз(ео1ттипо1оду а( (Ье пехиз οί агТЬпЛз, оз(еорогоз15, сапсег, и ίηίβοΐίοη”, ΰ. СНп. Ιηνθδΐ., Уок 121, рр. 2534-2542.

ΡίπΊίΐπδ θί а/., 1998, “ТЬе РаЛюрЬузю1одю Ро1ез οί 1пТег1еик1П-6 ίη Нитап Р|зеазе”, Апп 1пТегп Мес!., Уок 128, Νο. 2, рр. 127-137.

- 54 028077

Ονο га к θί а!., 1996, “СотрагаЯуе и11газ1гис1ига1 тогрЬо1оду οί питал ЬазорЬНз зБти1а1ес1 ίο ге1еазе ίιΐβίθίτιΐηβ Ьу апй-1дЕ, гесотЫпагй 1дЕ-с1ерепс1еп1 Ь|з1ат1пе-ге1еаз1пд Таскэг, ог топосу1е сЬето!асЯс ρτοίθίη-Ι ”, Цоита! οί АНегду и СНп1са1 1ттипо1оду, νοΙ. 98, рр. 355-370.

РеМтапп е/а/., 1994, “ΤΝΡ а!рЬа аз а йпегареиЯс 1агде1 ίη гЬеитак)1с1 агНэгШз,” С|гс. ЗЬоск, νοΙ. 43, рр. 179-184.

РеМтапп е1а1., 1996, “РЬеитакяс! агИппУз”, СеН, νοΙ. 85, рр. 307-310.

РеМтапп е/а/., 2001, “ТЬе го1е οί ΤΝΡ а!рЬа и ΙΙ_-1 ίη гЬеитакяс! агИэпБз,” Сигг. ΡίΓ. Аи1о1ттип., νοΙ. 3, рр. 188-199.

ΡϊΓθ3ΐθίη, 2005 “1ттипо1од1С тесЬагпзтз ίη 1Ье ра!Ьодепез13 οί гЬеитакяс! агИэпБз», Ц. СНп. РЬеита1о1., \/о1. 11. рр. 839-844.

Рие/а/., 2011, “Аззос1аНоп οί а ШпсИопа! ΙΡΡ7 уапап1 ννίΐή зуз!ет1С 1ириз егуНпетакэзиз”, АДЬгШз РЬеит., Уо1. 63, рр. 749-754.

СаЬау, 2006, “1п1ег1еик1П-6 и сЬгогпс тЛаттайоп”, АДЬгШз РезеагсЬ & ТЬегару, νοΙ. 8 (Зирр1 2), 33.

Са1Н θί а/., 1989, “1дЕ, Маз! Се11з и ΐήθ АИегдю Резропзе», СЛэа РоипЬаЛоп Зутроз1ит, νοΙ. 147, рр. 53-73.

СойПеЬ, 2005, “Рзопаз1з: Етегдтд ТЬегареийс Зйа1ед1ез”, Ыа1. Реу. Ргид Р|зс., νοΙ. 4, рр. 19-34.

Сге1де/а/., 2006, “Реуе1ортегП: и сЬагас1епга1юп οί Ь|рЬепНзиИопат1с1ез аз ηονβί ίηήίόίΐθΓ3 οί Ьопе гезогрНоп”, ΰ. Мес1. Спет., νοΙ 49: рр 7487-7492.

Сге1де/а/., 2008, “В|рЬепП-4-у1-5иИопю ас1с111_- и ΐήβίτ изе аз йпегареийс адегйз», 1п1егпаБопа1 ра!еп1 риЫюайоп питЬег \Л/О 2008/114022 А1 риЬПзЬес! 25 Зер1етЬег 2008.

Сге1де/а/., 2010а, “Агу1-рЬепНИ-зиИопат1с1о-сус1оа1ку1 соединения и ΐήβίτ изе”, 1п1егпаБопа1 ра!еп1 риЫюайоп питЬег \Л/О 2010/032009 А1 риЬПзЬес! 25 МагсЬ 2010.

Сге1де/а/., 201ОЬ, “Агу1-рЬепу1-зиИопат1с1о-рЬепу1епе сотроипс!з и ΐήβίΓ изе”, 1п1егпаБопа1 ра!еп1 риЫюайоп питЬег \Л/О 2010/032010 А1 риЬПзЬес! 25 МагсЬ 2010.

Сге1де/а/., 2013, “Оеуе1ортеп1 οί 1пагу1зи1рЬопат1с1ез аз ηονβί ап1нпЯатта1огу адегйз”, Вюогд. & Мес1. СЬет. 1_еК., νοΙ. 23, рр. 816-820.

НасПс!а е/а/., 2007, “Не1егосусПс тос1и1а1огз οί АТР-ЫпсНпд саззейе ДапзроДез”, 1гйегпайопа1 ра!еп1 риЫюайоп питЬег \Л/О 2007/056341 А1 риЬПзЬес! 18 Мау2007.

Ни е/а/., 2011, “А те!а-апа1уз13 οί 1Ье аззоаайоп οί ΙΡΡ5 ро!утогрЬ|зт ννίΐή зуз!ет1С 1ириз егуйпетакэзиз 1гйегпаНопа1», Цоигпа! οί 1ттиподепеЛсз, νοΙ. 38, рр. 411-417.

ΰίηηί е/а/., 2004, “5е1есйуе ίηήί6ίΐίοη οί ΝΡ-карра В Ыоскз оз1еос!аз1одепез13 и ргеуегйз тЛаттакэгу Ьопе ЬезйисЯоп ίη νίνο», Ыа1. Мес!., νοΙ. 10, рр. 617-624.

- 55 028077 ΰοοδΐθη θί а1., 1996, “Ап1ФуФкФе 1геа1теп1 οί ез!аЫ15к1еб 1уре II соПадеп-Фбисеб агФпйз ίη РВА/1 тюе. А сотрагаЛуе з1ис1у изФд апИ-ΤΝΡ а1рИа, апИ-И-1 а1рИа/Ье!а, и 11_-1Ва,» ΑιΤήπΐίδ ВИеит., νοΙ. 39, рр. 797-809.

Кагзеп1у е! а/., 2002, “ВеасИФд а депейс и то1еси1аг ипбегзФпбФд οί зке1е1а1 беуеФртеп!”, Реу. Се1к, νοΙ. 2, рр. 389-406.

К1агезкод е/а/., 2006, “Меспап1зт5 οί сИзеазе: СепеЛс зизсерЛЬНИу и епу1гоптеп!а1 Фддегз ίη Фе беуеФртеп! οί гИеитаФ1б агФпЛз,” ЫаЛ СНп. РгасЛ ВИеитаФк, νοΙ. 2, рр. 425-433.

Коггеп1к е/а/., 2006, “ЕуоМпд кпо\л/1ес!де и Фегару οί ФЛаттаФгу Ьоу/е1 сИзеазе,” Ыак Веу. Ргид Р1зс., νοΙ. 5, рр. 197-209.

КгаиздгиЬег е/а/., 2011, ΊΒΡ5 рготоФз ФЛаттаФгу тасгорпаде ро1апгаЛоп и ТН1ТН17 гезропзез», Ыа!. 1ттипо1., νοΙ. 12, рр. 231-238.

Не/а/., 2008, “А Фтог песгоз1з !асФг-а-теб1а!еб рафу/ау рготоЛпд аиФзота! ботФап! ро1усузЛс Ибпеу сИзеазе», ЫаФге МебюФе, νοΙ. 14, Νο. 8, рр. 863868.

Ни, 2005, “Мо1еси1аг теспап1зт οί ΤΝΡ з1дпа1Нпд и Ьеуопс!» СеН Вез., νοΙ. 15, рр. 2427.

1_опд, 2012, “Оз!ео1ттипо1оду: Фе ехрапсНпд го1е οί 1ттипогесерФгз Ф оз!еос1аз!5 и Ьопе гетобеНпд», Вопе Кеу Вер., νοΙ. 1, р. 59.

МаФтиб е/а/., 2010, “Муе1о1с1-ге1а1ес1 ргоФФ асЛуИу Ф ВпеитаФ1б АгФпЛз”, 1п!егпаЛопа1 боита! οί Ф/ебегоп, СуФкФе и МесИаФг ВезеагсИ, νοΙ. 2, рр. 97-111.

Мап1оуап1, 2009, “ФЯатФд те!аз!а5|5”, ЫаФге, νοΙ. 457, рр. 36-37.

МаггиссИеШ θί а/., 1996, “ОНТегепЛа! Ф 5ίΦ ехргеззюп οί Фе депез епсосИпд Фе сИетокФез МСР-1 и ΒΑΝΤΕδ Ф питай ФЛаттаФгу Ьоу/е1 сИзеазе», б. РаФок, νοΙ. 178, Νο. 2, рр. 201-206.

МсФпез е/а/., 2007, “СуФкФез Ф Фе раФодепез1з οί гИеитаФ1б агФпЛз», Ыа!. Веу. 1ттипок, νοΙ. 7, рр. 429-442.

МФамино θί а/., 2012, ΊΒΡ-2 геди1а!ез В-се11 ргоПФгаЯоп и апЛЬобу ргосФсИоп ФгоидИ όίδΐίηοΐ теспап15ГП5”, Ιηί 1ттипок, νοΙ. 24, рр. 573-581.

Моип! е/а/., 2005, “ВпеитаФ1б агФпйз тагке!», Ыак Веу. Ргид Р1зс., νοΙ. 2, рр. 11-12. О’бИеа θί а/., 2013, “бапиз кФазе ФНЫФгз Ф аиФ1ттипе сИзеазез», Аппа!з οί

ВИеитаЛс Р1зеазе, νοΙ. 72, бирр1етеп!2, рр. 111-115.

Ода!ае/а/., 2012, “баФ!у и ЕФсасу οί ТосШгитаЬ Фг Фе ТгеаЛпеп! οί ВЬеитаФ1б АгФпЛз”, СНп Мес! Фз1дЬ!з АгФпЛз Мизси1озке1е! Р1зогб., νοΙ. 5, рр. 27-42.

Рагатезу/агап θί а/., 2010, “Титог песгоз1з !асФг-а з1дпаПпд Ф тасгорЬадез”, СгИ. Веу. ЕикагуоЛ Сепе Ехрг., νοΙ. 20, рр. 87-103.

РЬНсЬепкоу θί а/., 2004, “Сазразез и сапсег: тесЬап1зтз οί ФасЯуаЛоп и пеу/ 1геа1теп1 тобаНЛез”, Ехр. Опсок, νοΙ 26, рр 82-97.

Р1зе15ку, 2012, “Абуапсез Ф Фе !геа!теп1 οί ФЛаттаФгу агФпЛз», Вез! РгасЛ Вез. СНп. ВЬеитаФк, \/ок 26. рр.251-261.

- 56 028077

ΡθΙδΐοη θίβΙ., 2005, “Агу1 а1ку1 5иИопат1с1е5 аз Фегареийс адеп1з Тог 1Ье 1геа1теп1 οί Ьопе сопсНйопз”, 1пТегпаТюпа1 ра1еп! риЫюайоп питЬег \Л/О 2005/118528 А2 риЬПзЬес! 15 РесетЬег 2005.

Ρίηοοη, 2012 “1п1ег1еик1П-6: 1гот ап тЯаттакэгу тагкег ίο а 1агде1 Тог тЯаттакэгу сНзеазез”, Тгепс15 ίη 1ттипо1оду, νοΙ. 33, Νο. 11, рр. 571-577.

РооЬтап, 2006, “Реди!аЯоп οί оз1еос1аз1 сПТТегепиаТюп”, Αηη. Ν. Υ. Асаск Зек, νοΙ. 1068, рр. 100-109.

δοοΐΐ еТ а/., 2010, “РЬеитакяс! АгТЬпЯз”, Бапсек νοΙ. 376, рр. 1094-1108.

5Ьапке/а/., 2012, ΊΡΡ5 ро!утогрЬ|зт ргесПс1з ргодпоз15 ίη райеп1з ууКЬ 5уз1етю зс1его515”, Аппа1з оНЬе РЬеитаЯс Р|5еазе5, νοΙ. 71, рр. 1197-1202.

5то!епе/а/., 2003, “ТЬегареиЯс 51га1ед1ез Тог РЬеитак)1с1 ΑιΙΤιπΐίδ», 1ЧаТ Реу. Ргид ΡΪ5Ο. , νοΙ. 2, рр. 473-488.

51едег е1а1., 2011, “РепозитаЬ Тог 1Ье 1геа1теп1 οί Ьопе те1аз1азе5 ίη Ьгеаз! сапсег: βνίόβηοβ и ορίηίοη», ТЬег. Αάν. Мес1. Опсо!., νοΙ. 3, рр. 233-243.

5ид|уата е/ а/., 1995, “СЬетоктез ίη ЬгопсЬоа1уео!аг 1ауаде ίΐυίό ίη зиттеМуре ЬурегзепзШуКу рпеитопШз”, Еиг. ΒθδρίΓ. ΰ., νοΙ. 8, рр. 1084-1090.

5ип, 2010, “МесЬап1са11оасПпд, сагЯ1аде 0едгас1айоп и агТИгШз”, Аппа!з οί 1Ье Νθνν Уогк АсаЬету οί Заепсез, νοΙ. 1211, рр. 37-50.

Такаока е1а1., 2005, “1пТедга1 го1е οί IРР-5 ίη 1Ье депе ίηόιιοΐίοη ргодгатте асйуа!ес1 Ьу ΤοΙΙ-Пке гесерЮгз», 1Ча1иге, νοΙ. 434, рр. 243-249.

Такауападц 2009, “Оз1ео1ттипо1оду и 1Ье ейес1з οί Фе 1ттипе зуз1ет оп Ьопе”, 1Ча1иге Βθνίθννδ ВЬеита1о!оду, νοΙ. 5, рр. 667-676.

Тапакае/а/., 2003, “5|дпа1 ЕапзЬисПоп раИтл/ауз геди1айпд оз1еос1аз1 ЬИТегепйайоп и ίιιηοΐίοη», ΰ. Вопе ΜίηθΓ. Ме1аЬ., νοΙ. 21, рр. 123-133.

ΤειιΐδΐίΓηί еТ а/., 2005, “Р|рерйс!у1 рерЯЬазе IV ίηήΦίΐοΓ», 1п1егпаЯопа1 ра!еп! риЫюаЯоп питЬег \Л/О 2005/025554 А2 риЬПзЬес! 24 МагсЬ 2005.

уап с1еп Вегд е1а1., 1999, “Ра1Ьодепез15 οί ίοίηΐ Ьатаде ίη гЬеитакяс! θΓίήηΐίδ: βνίόβηοβ οί а Ьоттап! го1е ίοτ 1пТег1еик1П-1», ВаННегез Вез! Ргаск Рез. СНп. ВЬеита1ок, νοΙ. 13, рр. 577-597.

уап с1еп Вегд, 2002, Ίδ Ипеге а гаЯопа1е ίοτ сотЫпес! ΤΝΡ и 11_-1 Ыосктд ίη агТЬпйз?», СНп. Ехр. РЬеита1о1. , νοΙ. 20, рр. 821-825.

Уо1е]п1коуа е/а/., 1997, “Мопосу1е гесгиИтеп! и ехргеззюп οί топосу!е сЬетоайгас!ап1 ргоТе1п-1 аге с1еуе1ортеп1а11у геди1аТес! ίη гетоЬеПпд Ьопе ίη 1Ье тоизе», Ат. ΰ. Ра1Ьо1., νοΙ. 150, Νο. 5, рр. 1711-1721.

\Л/апд е/ а/., 2010, “5е1есЯуе Пдапс15 ίοτ 1Ье Ьоратте 3 (Рз) гесерЮг и теИпобз οί из1пд зате”, 1п1егпаЯопа1 ра!еп! риЬПсаЯоп питЬег \Л/О 2010/025235 А1 риЬПзЬес! 04 МагсЬ 2010.

гЬапде/а/., 2012 “Реди1аЯоп οί Т Ье1рег сеП сПккегепЯаНоп Ьу ίηΐβΓίβΓοη геди1акэгу кас1ог катНу тетЬегз», 1ттипо1. Рез., νοΙ. 54 рр. 169-176.

гЬепд е1а1., 1998, “Сепе ехргеззюп οί топосуке сЬетоаНгас1ап1 ргоТе1п-1 ίη д1апТ сеП 1итогз οί Ьопе оз1еос1аз1ота: Розз|Ые ίηνοΙνβΓηβηΐ ίη СР68⁺ тасгорЬаде-Пке сеП ггНдгаЯоп”, Цоита! οί Се11и1аг ВюсЬетПзкгу, νοΙ. 70, Νο. 1, рр. 121-129.

Claims

1. Соединение, выбранное из соединений следующих формул или их фармацевтически приемлемых соли, гидрата или сольвата:

2. Соединение по п.1, которое представляет собой соединение следующей формулы или его фармацевтически приемлемую соль, гидрат или сольват:

ΟΝ

3. Соединение по п.1, которое представляет собой соединение следующей формулы или его фармацевтически приемлемую соль, гидрат или сольват:

- 58 028077

4. Соединение по п.1, которое представляет собой соединение следующей формулы или его фармацевтически приемлемую соль, гидрат или сольват:

5. Соединение по п.1, которое представляет собой соединение следующей формулы или его фармацевтически приемлемую соль, гидрат или сольват:

6. Соединение по п.1, которое представляет собой соединение следующей формулы или его фармацевтически приемлемую соль, гидрат или сольват:

7. Соединение по п.1, которое представляет собой соединение следующей формулы или его фармацевтически приемлемую соль, гидрат или сольват:

8. Соединение по п.1, которое представляет собой соединение следующей формулы или его фармацевтически приемлемую соль, гидрат или сольват:

9. Соединение по п.1, которое представляет собой соединение следующей формулы или его фармацевтически приемлемую соль, гидрат или сольват:

10. Соединение по п.1, которое представляет собой соединение следующей формулы или его фармацевтически приемлемую соль, гидрат или сольват:

11. Соединение по п.1, которое представляет собой соединение следующей формулы или его фармацевтически приемлемую соль, гидрат или сольват:

12. Соединение по п.1, которое представляет собой соединение, выбранное из соединений следующих формул или их фармацевтически приемлемых соли, гидрата или сольвата:

- 59 028077

13. Соединение по п.12, которое представляет собой соединение следующей формулы или его фармацевтически приемлемую соль, гидрат или сольват:

14. Соединение по п.12, которое представляет собой соединение следующей формулы или его фармацевтически приемлемую соль, гидрат или сольват:

с 1=з (НМС-С-02-А).

й ^н хЛн

15. Соединение по п.12, которое представляет собой соединение следующей формулы или его фармацевтически приемлемую соль, гидрат или сольват:

16. Соединение по п.12, которое представляет собой соединение следующей формулы или его фармацевтически приемлемую соль, гидрат или сольват:

17. Соединение по п.12, которое представляет собой соединение следующей формулы или его фармацевтически приемлемую соль, гидрат или сольват:

- 60 028077

18. Соединение по п.12, которое представляет собой соединение следующей формулы или его фармацевтически приемлемую соль, гидрат или сольват:

19. Соединение по п.12, которое представляет собой соединение следующей формулы или его фармацевтически приемлемую соль, гидрат или сольват:

20. Соединение по п.12, которое представляет собой соединение следующей формулы или его фармацевтически приемлемую соль, гидрат или сольват:

(НМ С-N-02-А).

21. Соединение по п.12, которое представляет собой соединение следующей формулы или его фармацевтически приемлемую соль, гидрат или сольват:

22. Соединение по п.12, которое представляет собой соединение следующей формулы или его фармацевтически приемлемую соль, гидрат или сольват:

23. Соединение по п.1, которое представляет собой соединение, выбранное из соединений следующих формул или их фармацевтически приемлемых соли, гидрата или сольвата:

- 61 028077

24. Соединение по п.23, которое представляет собой соединение следующей формулы мацевтически приемлемую соль, гидрат или сольват:

25. Соединение по п.23, которое представляет собой соединение следующей формулы мацевтически приемлемую соль, гидрат или сольват:

26. Соединение по п.23, которое представляет собой соединение следующей формулы мацевтически приемлемую соль, гидрат или сольват:

27. Соединение по п.23, которое представляет собой соединение следующей формулы мацевтически приемлемую соль, гидрат или сольват:

28. Соединение по п.23, которое представляет собой соединение следующей формулы мацевтически приемлемую соль, гидрат или сольват:

29. Соединение по п.23, которое представляет собой соединение следующей формулы мацевтически приемлемую соль, гидрат или сольват:

(НМС-С-06-В).

30. Соединение по п.23, которое представляет собой соединение следующей формулы мацевтически приемлемую соль, гидрат или сольват:

или его фарили его фарили его фарили его фарили его фарили его фарили его фар-

- 62 028077

31. Соединение по п.23, которое представляет собой соединение следующей формулы или его фармацевтически приемлемую соль, гидрат или сольват:

32. Соединение по п.23, которое представляет собой соединение следующей формулы или его фармацевтически приемлемую соль, гидрат или сольват:

33. Соединение по п.23, которое представляет собой соединение следующей формулы или его фармацевтически приемлемую соль, гидрат или сольват:

34. Композиция для лечения расстройства или заболевания, опосредованного активностью фактора некроза опухоли α (ФНО-α) и/или 1Ь-6, содержащая соединение по любому из пп.1-33 и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.

35. Способ получения композиции, включающий стадию смешивания соединения по любому из пп.1-33 и фармацевтически приемлемого носителя или разбавителя.

36. Применение соединения по любому из пп.1-33 в способе лечения ревматоидного артрита; псориаза; псориатического артрита; хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ); астмы; атеросклероза; воспалительного заболевания кишечника; анкилозирующего спондилоартрита;

рассеянного склероза; системной красной волчанки; синдрома Шегрена;

расстройства, связанного с потерей костной ткани, такого как потеря костной массы, связанная с чрезмерной активностью остеокластов при ревматоидном артрите, остеопороз, заболевание костей, связанное с раком, или болезнь Педжета;

ракового заболевания, такого как гематологическая злокачественная опухоль, такая как множественная миелома, лейкоз или лимфома, или опухоль солидного рака, такого как рак мочевого пузыря, рак молочной железы (женской и/или мужской), рак толстой кишки, почечно-клеточная карцинома, рак почки, рак легкого, рак поджелудочной железы, рак желудка, рак предстательной железы, рак мозга, рак кожи, рак щитовидной железы, базально-клеточная адамантинома или меланома;

расстройства, связанного с фиброзом, такого как системный склероз или склеродермия; или редкого васкулита, такого как болезнь Бехчета.

37. Применение соединения по любому из пп.1-33 для получения лекарственного средства для лечения ревматоидного артрита; псориаза; псориатического артрита; хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ); астмы; атеросклероза; воспалительного заболевания кишечника; анкилозирующего спондилоартрита;

38. Способ лечения ревматоидного артрита; псориаза; псориатического артрита; хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ); астмы; атеросклероза; воспалительного заболевания кишечника; анкилозирующего спондилоартрита;

ракового заболевания, такого как гематологическая злокачественная опухоль, такая как множест- 63 028077 венная миелома, лейкоз или лимфома, или опухоль солидного рака, такого как рак мочевого пузыря, рак молочной железы (женской и/или мужской), рак толстой кишки, почечно-клеточная карцинома, рак почки, рак легкого, рак поджелудочной железы, рак желудка, рак предстательной железы, рак мозга, рак кожи, рак щитовидной железы, базально-клеточная адамантинома или меланома;

расстройства, связанного с фиброзом, такого как системный склероз или склеродермия; или редкого васкулита, такого как болезнь Бехчета;

включающий введение пациенту, нуждающемуся в лечении, терапевтически эффективного количества соединения по любому из пп.1-33.