JPH09194469A - ヘテロ三環化合物および細胞傷害防御剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 生体内での活性酸素種の消去効果に優れ、活
性酸素種による細胞傷害に基づく疾病の予防および治療
に優れた効果を発揮する細胞傷害防御剤を得る。 【解決手段】 下式で表わされるヘテロ三環化合物を有
効成分とする細胞傷害防御剤。 【化１】 〔式中、Ｒ⁵はＨ、ＣＯＲ⁷またはＮＨＣＯＲ⁸（ここで
Ｒ⁷およびＲ⁸はそれぞれ炭素数１〜２２の飽和もしくは
不飽和アルキル基を示す。）、Ｒ⁶はＨ、炭素数１〜２
２の飽和もしくは不飽和アルキル基、ＣＯＲ⁷またはＮ
ＨＣＯＲ⁸（ここでＲ⁷およびＲ⁸は前記と同じものを示
す）を示す。ＸはＯまたはＳを示す。〕

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は新規かつ有用なヘテ
ロ三環化合物ならびにヘテロ三環化合物を有効成分とす
る薬剤であって、活性酸素種による細胞傷害に基づく疾
病を予防および治療するための細胞傷害防御剤に関する
ものである。

【０００２】

【従来の技術】生体内には多数の活性酸素消去システム
があり、酸化的なストレスから生体を保護している。そ
れらの防御システムの乱れから生じた活性酸素が様々な
疾病の発現に関与していることが明らかにされた。特に
近年、動脈硬化の発症機序に活性酸素による血管内皮細
胞の傷害が深く関与していることが注目されている。

【０００３】活性酸素種による細胞傷害は、炎症や脳・
心臓・循環器・消化器などに発生する各種疾患の一部と
みなされ、現在までにも生体内においてこれらの活性酸
素種を消去する薬剤の検討が行われてきた。例えば、活
性酸素の消去や過酸化脂質の分解などの作用を有する抗
酸化性化合物が活性酸素消去剤として多方面からのアプ
ローチによって開発されてきた（ラジカル消去剤、メビ
オ、第５巻、９０〜９４、１９８８）。

【０００４】しかし、現在までに検討されてきたスーパ
ーオキシドディスムターゼを始めとする酵素類は、分子
量が大きく組織移行性が否定的であることや、安定性に
も問題が残る。また、ビタミンＥやビタミンＣは、生体
を用いた実験で安定性や活性酸素消去作用が充分ではな
い等の難点が残る。

【０００５】ところで、本発明のヘテロ三環化合物に類
似した構造をもつ化合物がWO93/03729およびJ. Heteroc
yclic Chem., 15, 1137(1978)に記載されているが、細
胞傷害防御効果については全く記載されていない。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、細胞
内に容易に取り込まれ、優れた細胞傷害防御効果を発揮
するとともに、安定で低毒性である新規かつ有用なヘテ
ロ三環化合物、およびヘテロ三環化合物を有効成分とす
る細胞傷害防御剤を提供することである。

【０００７】

【課題を解決するための手段】一般的に生体内で細胞、
例えば血管内皮細胞に傷害を与える物質としては過酸化
脂質およびスーパーオキシド、ヒドロキシルラジカル、
一重項酸素、過酸化水素などの活性酸素種が知られてい
る。本発明者らは、⁵¹Ｃｒでラベルした培養血管内皮細
胞を、活性化した白血球により傷害させ、⁵¹Ｃｒの放出
量により細胞傷害を定量化する実験系をつくり、各種化
合物の血管内皮細胞傷害抑制効果を種々検討した結果、
後述の一般式（１）または（２）で表わされるヘテロ三
環化合物に強い抑制効果があることを見出し、本発明を
完成した。

【０００８】すなわち、本発明は下記一般式（１）で表
わされるヘテロ三環化合物、および下記一般式（２）で
表わされるヘテロ三環化合物を有効成分とする細胞傷害
防御剤である。 （１）下記一般式（１）で表わされるヘテロ三環化合
物。

【化３】 〔式中、Ｒ¹はＨ、ＣＯＲ³またはＮＨＣＯＲ⁴（ここで
Ｒ³およびＲ⁴はそれぞれ炭素数２〜２２の飽和もしくは
不飽和アルキル基を示す。）、Ｒ²はＨ、炭素数２〜２
２の飽和もしくは不飽和アルキル基、ＣＯＲ³またはＮ
ＨＣＯＲ⁴（ここでＲ³およびＲ⁴は前記と同じものを示
す。）を示す。ただし、Ｒ¹およびＲ²が同時にＨである
ことはない。ＸはＯまたはＳを示す。〕 （２）下記一般式（２）で表わされるヘテロ三環化合物
を有効成分とすることを特徴とする細胞傷害防御剤。

【化４】 〔式中、Ｒ⁵はＨ、ＣＯＲ⁷またはＮＨＣＯＲ⁸（ここで
Ｒ⁷およびＲ⁸はそれぞれ炭素数１〜２２の飽和もしくは
不飽和アルキル基を示す。、Ｒ⁶はＨ、炭素数１〜２２
の飽和もしくは不飽和アルキル基、ＣＯＲ⁷またはＮＨ
ＣＯＲ⁸（ここでＲ ⁷およびＲ⁸は前記と同じものを示
す）を示す。ＸはＯまたはＳを示す。〕

【０００９】本発明において、Ｒ²、Ｒ³またはＲ⁴で示
される炭素数２〜２２の飽和もしくは不飽和アルキル基
の具体的なものとしては、エチル基、プロピル基、ブチ
ル基、ペンチル基、ヘキシル基、ヘプチル基、オクチル
基、ノニル基、デシル基、ウンデシル基、ドデシル基、
トリデシル基、テトラデシル基、ペンタデシル基、ヘキ
サデシル基、ヘプタデシル基、オクタデシル基、ノナデ
シル基等の直鎖飽和アルキル基；イソプロピル基、イソ
ブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、イ
ソペンチル基、ネオペンチル基、ｔｅｒｔ−ペンチル
基、イソヘキシル基等の分岐鎖飽和アルキル基；９−テ
トラデセニル基、３−ヘキサデセニル基、９−ヘキサデ
セニル基、６−オクタデセニル基、９−オクタデセニル
基、１１−オクタデセニル基、９−エイコセニル基、１
３−ドコセニル基、２，４−ヘキサジエニル基、９，１
２−オクタデカジエニル基、６，９−オクタデカジエニ
ル基、９，１２，１５−オクタデカトリエニル基、６，
９，１２−オクタデカトリエニル基、９，１１，１３−
オクタデカトリエニル基、５，８，１１，１４−エイコ
サテトラエニル基、５，８，１１，１４，１７−エイコ
サペンタエニル基、４，７，１０，１３，１６−ドコサ
ペンタエニル基、４，７，１０，１３，１６，１９−ド
コサヘキサエニル基等の不飽和結合を１〜６個有するア
ルキル基などがあげられる。

【００１０】本発明において、Ｒ⁶、Ｒ⁷またはＲ⁸で示
される炭素数１〜２２の飽和もしくは不飽和アルキル基
の具体的なものとしては、メチル基、エチル基、プロピ
ル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、ヘプチル
基、オクチル基、ノニル基、デシル基、ウンデシル基、
ドデシル基、トリデシル基、テトラデシル基、ペンタデ
シル基、ヘキサデシル基、ヘプタデシル基、オクタデシ
ル基、ノナデシル基等の直鎖飽和アルキル基；イソプロ
ピル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−
ブチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、ｔｅｒｔ
−ペンチル基、イソヘキシル基等の分岐鎖飽和アルキル
基；９−テトラデセニル基、３−ヘキサデセニル基、９
−ヘキサデセニル基、６−オクタデセニル基、９−オク
タデセニル基、１１−オクタデセニル基、９−エイコセ
ニル基、１３−ドコセニル基、２，４−ヘキサジエニル
基、９，１２−オクタデカジエニル基、６，９−オクタ
デカジエニル基、９，１２，１５−オクタデカトリエニ
ル基、６，９，１２−オクタデカトリエニル基、９，１
１，１３−オクタデカトリエニル基、５，８，１１，１
４−エイコサテトラエニル基、５，８，１１，１４，１
７−エイコサペンタエニル基、４，７，１０，１３，１
６−ドコサペンタエニル基、４，７，１０，１３，１
６，１９−ドコサヘキサエニル基等の不飽和結合を１〜
６個有するアルキル基などがあげられる。

【００１１】本発明のヘテロ三環化合物は、例えば以下
のような方法により合成できる。 方法Ａ） Ｎ−アシル化合物は、Ｎ−無置換体に公知のアシル化剤
を常法により反応させてアシル化することにより製造す
ることができる。上記アシル化剤としては、酸ハロゲン
化物、カルボン酸などがあげられる。反応温度、反応時
間、アシル化剤、塩基の種類および使用量などを適宜選
択することにより目的とするヘテロ三環化合物を製造す
ることができる。

【００１２】方法Ｂ） Ｎ−アシルアミノ化合物は、文献既知の方法に準じて合
成できる（J. Heterocyclic Chem., 15, 1137(197
8））。

【００１３】方法Ｃ） 芳香環の置換は、前記方法Ａ）によって合成したＮ−ア
シル化合物を塩化メチレン、四塩化炭素、二硫化炭素な
どの溶媒中で、無水塩化アルミニウムなどのルイス酸存
在下に、酸クロリドなどの反応活性体と反応させる。得
られたジアシル体を塩酸−酢酸により酸加水分解し、芳
香環炭素をアシル化したＮ−無置換体を得る。

【００１４】方法Ｄ） 芳香族炭素アルキル体は、上記Ｃ）の方法によって合成
した芳香環炭素アシル体を、塩化アルミニウム存在下に
テトラヒドロフランなどの溶媒中で、水素化リチウムア
ルミニウムなどの還元剤により還元することにより得ら
れる。また、芳香環炭素アシル体を三フッ化ホウ素エー
テラートなどのルイス酸存在下に、１，２−エタンジチ
オールなどのジチオールと反応させ、得られたジスルフ
ィドをラネーニッケルなどにより還元的に脱硫しても得
られる。

【００１５】このようにして得られる本発明のヘテロ三
環化合物は、抽出、再結晶、クロマトグラフィーなどの
公知の方法により単離、精製することができる。

【００１６】本発明の細胞傷害防御剤は一般式（２）で
表わされるヘテロ三環化合物を有効成分として含有する
ものである。本発明の細胞傷害防御剤は、活性酸素種に
よる細胞傷害を防御するものであり、虚血性心疾患、虚
血性脳疾患、循環器疾患（例えば動脈硬化等）、消化器
疾患（例えば消化管、肝臓、膵臓などの疾患）、皮膚疾
患、癌、腎炎、肺疾患などの疾患および炎症に対して有
効である。

【００１７】本発明の細胞傷害防御剤は、一般式（２）
で表わされるヘテロ三環化合物をそれ自体公知の薬理的
に許容される担体、賦形剤、崩壊剤、矯正剤、増量剤、
希釈剤、溶解補助剤などと混合し、公知の方法に従って
医薬組成物、例えば錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、
粉末剤、丸剤、ドリンク剤、注射剤、点滴剤、坐剤など
の形態に製剤化することができる。このような製剤は経
口的もしくは非経口的に投与することができる。

【００１８】投与量は投与対象、投与経路、症状などに
よっても異なるが、経口的に投与する場合、一般式
（２）で表わされるヘテロ三環化合物として通常１回量
として約０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは
０．０１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重を１日１〜３回程度投与
する。また非経口的に投与する場合、例えば坐剤では一
般式（２）で表わされるヘテロ三環化合物として約０．
０５〜２０ｍｇ／ｋｇ体重を１日１〜２回投与すること
が好ましい。また油性製剤の注射剤においては、一般式
（２）で表わされるヘテロ三環化合物として約０．００
１〜５ｍｇ／ｋｇ体重を１日１〜２回投与することが好
ましい。

【００１９】

【発明の効果】本発明のヘテロ三環化合物は、新規かつ
有用である。本発明の一般式（１）で表されるヘテロ三
環化合物は、細胞内に容易に取り込まれ、優れた細胞傷
害防御効果を発揮するとともに、安定で低毒性である。
本発明の細胞傷害防御剤は一般式（２）で表されるヘテ
ロ三環化合物を有効成分として含有しているので、生体
内での活性酸素種の消去効果に優れており、このため活
性酸素種による細胞傷害に基づく疾病の予防および治療
に優れた効果を発揮する。

【００２０】

【発明の実施の形態】次に本発明の実施例について説明
する。 実施例１−１ 《１０−アセチルフェノキサジンの合成》塩化メチレン
３ｍｌにフェノキサジン２００ｍｇ（１．１ｍｍｏｌ）
を溶解し、氷冷下、トリエチルアミン０．２３ｍｌを加
え、次にアセチルクロリド０．１７ｍｌ（２．４ｍｍｏ
ｌ）を少しずつ滴下した。０℃で３時間攪拌後、反応液
を水中に注ぎ、塩化メチレンにて抽出し、無水硫酸マグ
ネシウムにて乾燥した。

【００２１】溶媒留去後、得られた淡黄褐色固体２８２
ｍｇをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出液：
ヘキサン→５％（ｖ／ｖ）酢酸エチル／ヘキサン）にて
精製し、目的物１７６ｍｇを白色結晶として得た（収率
７１．６％）。この化合物の分析結果は次の通りであ
る。

【００２２】質量分析：Fab(POS) マトリックス；ｍ−ニトロベンジルアルコール m/z ; 226〔Ｍ+1〕⁺, 183¹ H-NMR(δ(ppm), 270MHz, CDCl₃/TMS) :2.33(s, 3H),
7.09-7.23(m, 6H), 7.45-7.51(m, 2H)¹³ C-NMR(δ(ppm), 67.8MHz, CDCl₃/TMS) :22.85, 116.7
7, 123.24, 125.06, 126.76, 129.42, 150.95, 169.17

【００２３】上記結果から、得られた化合物は１０−ア
セチルフェノキサジン（一般式（１）において、Ｒ¹が
ＣＯＣＨ₃、Ｒ²がＨ、ＸがＯの化合物）であることを確
認した。

【００２４】実施例１−２ 《１０−バレリルフェノキサジンの合成》塩化メチレン
１５ｍｌにフェノキサジン１ｇ（５．５ｍｍｏｌ）を溶
解し、氷冷下、６０％水素化ナトリウム２６１ｍｇを少
しずつ加えた。０℃で１０分間攪拌後、バレリルクロリ
ド０．９８７ｇ（８．２ｍｍｏｌ）を少しずつ滴下し
た。その後室温に戻し、１４時間攪拌後、薄層クロマト
グラフィー（ＴＬＣ）でフェノキサジンが消失している
のを確認した。

【００２５】反応液を水中に注ぎ、塩化メチレンにて抽
出し、塩化メチレン層を水洗後、無水硫酸マグネシウム
にて乾燥した。溶媒留去後、得られた淡黄緑固体１．７
ｇを塩化メチレン−ヘキサンより再結晶し、目的物１．
０６ｇを無色結晶として得た（収率７２．３％）。この
化合物の分析結果は次の通りである。

【００２６】質量分析：Fab(POS) マトリックス；ｍ−ニトロベンジルアルコール m/z ; 268〔Ｍ+Ｈ〕^*, 183¹ H-NMR(δ(ppm), 270MHz, CDCl₃/TMS) :0.86(t, J=7.4H
z, 3H), 1.30(m, 2H), 1.65(quintet, J=7.5Hz, 2H),
2.60(t, J=7.4Hz, 2H), 7.09-7.23(m, 6H), 7.45-7.52
(m, 2H)

【００２７】上記結果から、得られた化合物は１０−バ
レリルフェノキサジン（一般式（１）において、Ｒ¹が
ＣＯＣ₄Ｈ₉、Ｒ²がＨ、ＸがＯの化合物）であることを
確認した。

【００２８】実施例１−３ 《１０−デカノイルフェノキサジンの合成》塩化メチレ
ン１０ｍｌに塩化アルミニウム１６０ｍｇを懸濁し、氷
冷下、デカノイルクロリド２２９ｍｇ（１．２ｍｍｏ
ｌ）を塩化メチレン５ｍｌに溶解した溶液を滴下した。
１０分間攪拌後、フェノキサジン１８３ｍｇ（１．０ｍ
ｍｏｌ）を塩化メチレン５ｍｌに溶解した溶液を滴下
し、０℃で３時間攪拌した。その後反応液を１Ｎ塩酸中
に注ぎ、塩化メチレンにて抽出した。塩化メチレン層を
飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、続いて水で洗い、無水
硫酸マグネシウムにて乾燥した。

【００２９】溶媒留去後、得られた黄色固体３１８ｍｇ
をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出液：ヘキ
サン→５％（ｖ／ｖ）酢酸エチル／ヘキサン）にて精製
し、目的物２５９ｍｇを黄色固体として得た（収率７
６．８％）。この化合物の分析結果は次の通りである。

【００３０】質量分析：Fab(POS) マトリックス；ｍ−ニトロベンジルアルコール m/z ; 338〔Ｍ+Ｈ〕⁺, 183¹ H-NMR(δ(ppm), 270MHz, CDCl₃/TMS) :0.86(t, J=6.6H
z, 3H), 1.13-1.35(m, 12H), 1.56-1.73(m, 2H), 2.59
(t, J=7.4Hz, 2H), 7.08-7.23(m, 6H), 7.45-7.51(m, 2
H)¹³ C-NMR(δ(ppm), 67.8MHz, CDCl₃/TMS) :14.10, 22.6
6, 25.39, 29.18, 29.24, 29.38, 31.84, 34.16, 116.9
1, 123.32, 125.32, 126.83, 129.58, 151.32, 172.38

【００３１】上記結果から、得られた化合物は１０−デ
カノイルフェノキサジン（一般式（１）において、Ｒ¹
がＣＯＣ₉Ｈ₁₉、Ｒ²がＨ、ＸがＯの化合物）であること
を確認した。

【００３２】実施例１−４ 《２−デカノイルフェノキサジンの合成》塩化アルミニ
ウム７１０ｍｇの中へ、１０−アセチルフェノキサジン
３００ｍｇ（１．３ｍｍｏｌ）を４ｍｌの二硫化炭素に
溶解した溶液を滴下し、１時間還流後、デカノイルクロ
リド５０８ｍｇ（２．７ｍｍｏｌ）を二硫化炭素１ｍｌ
に溶解した溶液を滴下し、２時間還流した。

【００３３】放冷後、反応液を１０％塩酸水溶液に注
ぎ、クロロホルムで抽出し、有機層を水洗後、無水硫酸
マグネシウムにて乾燥した。溶媒留去後、得られた黄色
固体７３５ｍｇに６ｍｌの氷酢酸と１．５ｍｌの１８％
塩酸を加え、１０分間還流した。

【００３４】放冷後、反応液を水中に注ぎ、クロロホル
ムで抽出し、有機層を水洗後、無水硫酸マグネシウムに
て乾燥した。溶媒留去後、得られた黄色固体５８６ｍｇ
をクロロホルム−メタノール−ヘキサンにて再結晶し、
目的物３０６ｍｇを黄色粉末として得た（収率６８．１
％）。この化合物の分析結果は次の通りである。

【００３５】質量分析：Fab(POS) マトリックス；ｍ−ニトロベンジルアルコール m/z ; 337〔Ｍ〕⁺ IR(KBr, cm^-1) :3345, 2960, 2930, 2850, 2480, 1670,
1500, 740

【００３６】¹H-NMR(δ(ppm), 270MHz, CDCl₃+CD₃OD/TM
S) :0.88(t, J=6.8Hz, 3H), 1.20-1.45(m, 12H), 1.60-
1.76(m, 2H), 2.82(t, J=7.4Hz, 2H), 6.40(d, J=7.8H
z, 1H), 6.58-6.65(m, 3H), 6.68-6.77(m, 1H), 6.96
(d, J=2.0Hz, 1H), 7.23(dd, J=2.0, 8.3Hz, 1H)¹³ C-NMR(δ(ppm), 67.8MHz, CDCl₃+CD₃OD/TMS) :13.65,
22.33, 24.52, 28.96, 29.08, 29.16, 31.56, 37.94,
111.89, 113.16, 114.69, 115.34, 120.78, 122.34, 12
4.03, 131.22, 132.44, 132.62, 142.67, 147.90, 200.
08

【００３７】上記結果から、得られた化合物は２−デカ
ノイルフェノキサジン（一般式（１）において、Ｒ¹が
Ｈ、Ｒ²がＣＯＣ₉Ｈ₁₉、ＸがＯの化合物）であることを
確認した。

【００３８】実施例１−５ 《２−バレリルフェノキサジンの合成》実施例１−４と
同様の操作で、１０−デカノイルフェノキサジン１００
ｍｇ（０．３０ｍｍｏｌ）およびバレリルクロリド６９
ｍｇ（０．５７ｍｍｏｌ）から目的物３５ｍｇを黄色粉
末として得た（収率４５．６％）。この化合物の分析結
果は次の通りである。

【００３９】質量分析：Fab(POS) マトリックス；ｍ−ニトロベンジルアルコール m/z ; 267〔Ｍ〕⁺, 182 IR(neat, cm^-1) :3350, 2955, 2930, 2480, 1670, 150
0, 730

【００４０】¹H-NMR(δ(ppm), 270MHz, CDCl₃+CD₃OD/TM
S) :0.96(t, J=7.3Hz, 3H), 1.40(m, 2H), 1.68(m, 2
H), 2.86(t, J=7.4Hz, 2H), 6.42(d, J=7.6Hz, 1H), 6.
52-6.58(m, 3H), 6.62-6.72(m, 1H), 6.97(d, J=2.0Hz,
1H), 7.25(dd, J=1.7Hz, 8.3Hz, 1H)¹³ C-NMR(δ(ppm), 67.8MHz, CDCl₃+CD₃OD/TMS) :13.58,
22.20, 26.57, 37.66, 111.83, 113.16, 114.71, 115.
37, 120.84,122.43, 124.07, 131.13, 132.35, 132.53,
142.61, 147.88, 200.06

【００４１】上記結果から、得られた化合物は２−バレ
リルフェノキサジン（一般式（１）において、Ｒ¹が
Ｈ、Ｒ²がＣＯＣ₄Ｈ₉、ＸがＯの化合物）であることを
確認した。

【００４２】実施例１−６ 《２−デシルフェノキサジンの合成》２−デカノイルフ
ェノキサジン５０ｍｇ（０．１５ｍｍｏｌ）、１，２−
エタンジチオール０．１２ｍｌ（０．１５ｍｍｏｌ）
に、三フッ化ホウ素エーテラート０．１ｍｌを滴下し、
攪拌した。１時間後、ヘキサン０．２ｍｌで３回洗い、
水中に注いでエーテルで抽出し、無水硫酸マグネシウム
にて乾燥した。

【００４３】溶媒留去後、残渣をエタノール１ｍｌに溶
解し、室温下で１時間ラネーニッケルで処理し、薄層ク
ロマトグラフィー（展開溶媒；１０％酢酸エチル／ヘキ
サン）にて精製後、目的物９．３ｍｇを白色固体として
得た（収率１９．４％）。この化合物の分析結果は次の
通りである。

【００４４】質量分析：Fab(POS) マトリックス；ｍ−ニトロベンジルアルコール m/z ; 324〔Ｍ+1〕⁺, 196, 183 IR(neat, cm^-1) :3365, 2920, 2850, 1510, 740

【００４５】¹H-NMR(δ(ppm), 270MHz, アセトンd₆/TM
S) :0.87(t, J=6.8Hz, 3H), 1.15-1.38(m, 12H), 1.42-
1.60(m, 2H), 2.40(t, J=7.6Hz, 2H), 6.35(d, J=2.0H
z, 1H), 6.41-6.74(m, 6H), 7.12(br s, 1H)

【００４６】上記結果から、得られた化合物は２−デシ
ルフェノキサジン（一般式（１）において、Ｒ¹がＨ、
Ｒ²がＣ₁₀Ｈ₂₁、ＸがＯの化合物）であることを確認し
た。

【００４７】実施例１−７ 《２−デカノイルフェノチアジンの合成》 １）１０−アセチルフェノチアジンの合成 トルエン２０ｍｌにフェノチアジン２ｇ（１０ｍｍｏ
ｌ）を懸濁し、氷冷下、６０％水素化ナトリウム４９７
ｍｇを少しずつ加え、１時間攪拌後、アセチルクロリド
１．１８２ｇ（１５ｍｍｏｌ）を滴下した。氷冷下、
１．５時間攪拌後、室温に戻し、１時間還流した。

【００４８】放冷後、反応液を水中に注ぎ、酢酸エチル
で抽出後、無水硫酸マグネシウムにて乾燥した。溶媒留
去後、得られた残渣をクロロホルム−ヘキサンにより再
結晶し、１０−アセチルフェノキサジン２．１９３ｇを
無色結晶として得た（収率９０．６％）。分析結果は次
の通りである。

【００４９】質量分析：Fab(POS) マトリックス；ｍ−ニトロベンジルアルコール m/z ; 241〔Ｍ〕⁺, 199¹ H-NMR(δ(ppm), 270MHz, CDCl₃/TMS) :2.20(s, 3H),
7.22(dt, J=1.6, 7.6Hz, 2H), 7.32(dt, J=1.6, 7.6Hz,
2H),7.44(dd, J=1.6, 7.6Hz, 2H), 7.50(d, J=7.9Hz,
2H)

【００５０】２）２−デカノイルフェノチアジンの合成 上記１）で得た１０−アセチルフェノチアジン３００ｍ
ｇ（１．２ｍｍｏｌ）、塩化アルミニウム６６３ｍｇ、
デカノイルクロリド４７４ｍｇ（２．５ｍｍｏｌ）を用
い、実施例１−４と同様の操作で目的物１９６ｍｇを黄
色粉末として得た（収率４４．６％）。この化合物の分
析結果は次の通りである。

【００５１】質量分析：Fab(POS) マトリックス；ｍ−ニトロベンジルアルコール m/z ; 354〔Ｍ+1〕^{+ 1} H-NMR(δ(ppm), 270MHz, CDCl₃+CD₃OD/TMS) :0.88(t,
J=6.8Hz, 3H), 1.15-1.45(m, 12H), 1.57-1.77(m, 2H),
2.86(t, J=7.4Hz, 2H), 6.58(dd, J=1.3, 7.9Hz, 1H),
6.79(dt, J=1.3, 7.6Hz, 1H), 6.90(dd, J=1.3, 7.6H
z, 1H), 6.96(d, J=7.9Hz, 1H), 6.98(dt, J=1.3, 7.6H
z, 1H),7.09(d, J=1.7Hz, 1H), 7.32(dd, J=1.7, 7.9H
z, 1H)

【００５２】¹³C-NMR(δ(ppm), 67.8MHz, CDCl₃+CD₃OD/
TMS) :13.79, 22.40, 24.36, 29.01, 29.08, 29.21, 3
1.62, 38.27, 112.37, 114.31, 116.38, 122,15, 122.2
7, 124.99, 125.97, 126.28, 127.54, 135.80, 140.92,
141.98, 200.53

【００５３】上記結果から、得られた化合物は２−デカ
ノイルフェノチアジン（一般式（１）において、Ｒ¹が
Ｈ、Ｒ²がＣＯＣ₉Ｈ₁₉、ＸがＳの化合物）であることを
確認した。

【００５４】実施例１−８ 《１０−デカノイルフェノチアジンの合成》二硫化炭素
４ｍｌ、塩化メチレン６ｍｌに１０−アセチルフェノチ
アジン３００ｍｇ（１．２ｍｍｏｌ）を溶解し、塩化ア
ルミニウム６６３ｍｇに少しずつ滴下した。４０分間還
流後、デカノイルクロリド４７５ｍｇ（２．５ｍｍｏ
ｌ）を少しずつ滴下し、１２時間還流した。

【００５５】放冷後、反応液を１０％塩酸水溶液に注
ぎ、クロロホルムで抽出し、有機層を水洗後、無水硫酸
マグネシウムにて乾燥した。溶媒留去後、得られた淡茶
色油状物６５４ｍｇを薄層クロマトグラフィー（展開溶
媒：３０％酢酸エチル／ヘキサン）にて精製した。次に
得られた淡黄固体２００ｍｇに２ｍｌの氷酢酸と０．５
ｍｌの１８％塩酸とを加え、１０分間還流した。

【００５６】放冷後、反応液を水中に注ぎ、クロロホル
ムで抽出し、有機層を水洗後、無水硫酸マグネシウムに
て乾燥した。溶媒留去後、得られた黄色固体１９６ｍｇ
をクロロホルム−ヘキサンにて再結晶し、目的物４３ｍ
ｇを黄色粉末として得た（収率９．８％）。この化合物
の分析結果は次の通りである。

【００５７】¹H-NMR(δ(ppm), 270MHz, アセトンd₆/TM
S) :0.88(t, J=6.6Hz, 3H), 1.20-1.45(m, 12H), 1.60-
1.75(m, 2H), 2.90(t, J=7.3Hz, 2H), 6.72(dd, J=1.3,
7.9Hz, 1H), 6.80(dt, J=1.3, 7.6Hz, 1H), 6.93(dd,
J=1.3, 7.6Hz, 1H), 7.01(dt, J=1.3, 7.9Hz, 1H), 7.0
3(d, J=7.6, 1H),7.26(d, J=2.0, 1H), 7.41(dd, J=1.
7, 7.9Hz, 1H), 7.93(br s, 1H)

【００５８】上記結果から、得られた化合物は１０−デ
カノイルフェノチアジン（一般式（１）において、Ｒ¹
がＣＯＣ₉Ｈ₁₉、Ｒ²がＨ、ＸがＳの化合物）であること
を確認した。

【００５９】実施例１−９ 《１０−バレリルアミノフェノチアジンの合成》 １）２−ニトロ−２′−ヒドラジノジフェニルスルフィ
ドの合成 文献（J. Org. Chem., 23, 1804(1958））記載の方法に
従い、１−クロロ−２−ニトロベンゼンおよび２−アミ
ノチオフェノールより２−ニトロ−２′−アミノジフェ
ニルスルフィドを定量的に得た。この２−ニトロ−２′
−アミノジフェニルスルフィド２ｇ（８．１ｍｍｏｌ）
を濃塩酸１２ｍｌに攪拌しながら少しずつ加えた。

【００６０】室温にて２時間攪拌後、反応液を０〜５℃
に冷却し、亜硝酸ナトリウム６５４ｍｇ（９．５ｍｍｏ
ｌ）を水３．５ｍｌに溶解した溶液を、反応液の温度が
５℃以上にならないように少しずつ滴下した。０〜５℃
にて１時間攪拌後、−１５℃に冷却し、塩化スズ（II）
二水塩４．７２５ｇを濃塩酸３ｍｌに溶解して−１５℃
にした溶液を反応液に一度に加え、−１５℃にて２時間
攪拌した。

【００６１】静置後、上澄を除き、残渣を２０％水酸化
ナトリウム水溶液１００ｍｌ中に、氷冷下、少しずつ加
えて攪拌し、室温に徐々に戻し、３時間攪拌した。反応
液を濾過し、水洗後、得られた澄色結晶１．９５４ｇを
クロロホルム−エーテル−ヘキサンより再結晶し、２−
ニトロ−２′−ヒドラジノジフェニルスルフィド１．１
９２ｇを黄色結晶として得た（収率５６．２％）。分析
結果は次の通りである。

【００６２】質量分析：Fab(POS) マトリックス；ｍ−ニトロベンジルアルコール m/z ; 261〔Ｍ〕⁺ IR(KBr, cm^-1) :3330, 1590, 1510, 1340

【００６３】¹H-NMR(δ(ppm), 270MHz, CDCl₃/TMS) :3.
53(br s, 2H), 6.19(br s, 1H), 6.79(dd, J=1.3, 7.9H
z, 1H), 6.86(dt,J=1.3, 7.4Hz, 1H), 7.18-7.54(m, 5
H), 8.27(dd, J=1.3, 8.3Hz, 1H)

【００６４】２）１０−バレリルアミノフェノチアジン
の合成 上記１）で得た２−ニトロ−２′−ヒドラジノジフェニ
ルスルフィド２００ｍｇ（０．７７ｍｍｏｌ）を塩化メ
チレン３ｍｌに溶解し、氷冷下、トリエチルアミン０．
１３ｍｌを加え、塩化メチレン１ｍｌに溶解したバレリ
ルクロリド９２ｍｇ（０．７９ｍｍｏｌ）を滴下した。
０℃で１時間攪拌後、反応液を水中に注ぎ、塩化メチレ
ンで抽出し、無水硫酸マグネシウムにて乾燥した。溶媒
留去後、２−ニトロ−２′−（β−バレリル）ヒドラジ
ノジフェニルスルフィド２４０ｍｇを黄褐色固体として
得た（収率９７．８％）。

【００６５】上記２−ニトロ−２′−（β−バレリル）
ヒドラジノジフェニルスルフィド２００ｍｇ（０．５８
ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド２ｍｌに溶解し、炭
酸カリウム８０ｍｇを加え、１５分間還流した。放冷
後、水中に注ぎ、エーテルで抽出し、有機層を水洗後、
無水硫酸マグネシウムにて乾燥した。溶媒留去後、得ら
れた１３１ｍｇの黄褐色固体をシリカゲルカラムクロマ
トグラフィー（溶出液、ヘキサン→クロロホルム）にて
精製し、目的物８５ｍｇを無色結晶として得た（収率４
９．２％）。この化合物の分析結果は次の通りである。

【００６６】質量分析：Fab(POS) マトリックス；ｍ−ニトロベンジルアルコール m/z ; 298〔Ｍ〕^{+ 1} H-NMR(δ(ppm), 270MHz, アセトンd₆/TMS) :0.97(t, J
=7.4Hz, 3H), 1.35-1.55(m, 2H), 1.65-1.85(m, 2H),
2.54(t, J=7.4Hz, 2H), 6.82-7.28(m, 8H), 9.50(br s,
1H)

【００６７】上記結果から、得られた化合物は１０−バ
レリルアミノフェノチアジン（一般式（１）において、
Ｒ¹がＮＨＣＯＣ₄Ｈ₉、Ｒ²がＨ、ＸがＳの化合物）であ
ることを確認した。

【００６８】実施例１−１０ 《１０−デカノイルアミノフェノチアジンの合成》実施
例１−９の２）と同様にして、２−ニトロ−２′−ヒド
ラジノジフェニルスルフィド１００ｍｇ（０．３８ｍｍ
ｏｌ）およびデカノイルクロリド７３ｍｇ（０．３８ｍ
ｍｏｌ）より、２−ニトロ−２′−（β−デカノイル）
ヒドラジノジフェニルスルフィド１４７ｍｇ（黄色固
体、収率９２．４％）を得、この２−ニトロ−２′−
（β−デカノイル）ヒドラジノジフェニルスルフィド１
２０ｍｇ（０．２９ｍｍｏｌ）より、目的物６８ｍｇを
無色結晶として得た（収率６３．９％）。この化合物の
分析結果は次の通りである。

【００６９】質量分析：Fab(POS) マトリックス；ｍ−ニトロベンジルアルコール m/z ; 368〔Ｍ〕⁺, 198 IR(KBr, cm^-1) :3210, 2930, 1660, 1460

【００７０】¹H-NMR(δ(ppm), 270MHz, アセトンd₆/TM
S) :0.86(t, J=7.3Hz, 3H), 1.08-1.58(m, 12H), 1.68-
1.85(m, 2H), 2.55(t, J=7.4Hz, 2H), 6.83-7.28(m, 8
H), 9.48(br s, 1H)

【００７１】上記結果から、得られた化合物は１０−デ
カノイルアミノフェノチアジン（一般式（１）におい
て、Ｒ¹がＮＨＣＯ−Ｃ₉Ｈ₁₉、Ｒ²がＨ、ＸがＳの化合
物）であることを確認した。

【００７２】実施例１−１１ 《１０−オレオイルアミノフェノチアジンの合成》実施
例１−９の２）と同様にして、２−ニトロ−２′−ヒド
ラジノジフェニルスルフィド１００ｍｇ（０．３８ｍｍ
ｏｌ）およびオレオイルクロリド１１５ｍｇ（０．３８
ｍｍｏｌ）より、２−ニトロ−２′−（β−オレオイ
ル）ヒドラジノジフェニルスルフィド２０９ｍｇ（黄色
固体）を定量的に得、この２−ニトロ−２′−（β−オ
レオイル）ヒドラジノジフェニルスルフィド１８０ｍｇ
（０．３４ｍｍｏｌ）より、目的物８２ｍｇを黄橙固体
として得た（収率５０．０％）。この化合物の分析結果
は次の通りである。

【００７３】質量分析：Fab(POS) マトリックス；ｍ−ニトロベンジルアルコール m/z ; 478〔Ｍ〕⁺, 198¹ H-NMR(δ(ppm), 270MHz, アセトンd₆/TMS) :0.88(t, J
=6.9Hz, 3H), 1.10-1.58(m, 22H), 1.72-1.85(m, 2H),
2.0(m, 4H), 2.54(t, J=7.4Hz, 2H), 5.32-5.40(m, 2
H), 6.86-7.28(m, 8H), 9.50(br s,1H)

【００７４】上記結果から、得られた化合物は１０−オ
レオイルアミノフェノチアジン（一般式（１）におい
て、Ｒ¹がＮＨＣＯ（ＣＨ₂）₇ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ₂）₇Ｃ
Ｈ₃、Ｒ ²がＨ、ＸがＳの化合物）であることを確認し
た。

【００７５】実施例２ 表１または表２に示すヘテロ三環化合物の薬理試験を次
のようにして行った。 １）ウシ血管内皮細胞の培養 ウシ頸動脈血管５〜１０ｃｍを摘出した後、抗生物質
（ペニシリン、ストレプトマイシンなど）を添加したＰ
ＢＳ（リン酸緩衝溶液）で軽く洗い、同様の抗生物質含
有ＭＥＭ（最小必須培地：minimum essential medium）
培地に浸し、氷冷して培養室に持ち帰った。

【００７６】血管はさらに抗生物質含有ＭＥＭ培地で数
回洗浄した。その後、血管に付着している脂肪をきれい
に取り去り、ハサミで分岐部を切り、その分岐部を通る
形で血管を縦に切り開いた。平らな固定面の上に血管を
内膜面を上にし、引っ張った形でピン固定した。＃１１
のメスを用い、内膜面に軽く触れるようにして内皮細胞
を剥離した。その際、メスを予め２０％ＦＢＳ（ウシ胎
児血清）含有ＭＥＭ培地（抗生物質を含有している）に
湿らせて、メスの動きをスムーズにすると共に平滑筋細
胞の混入を防いだ。

【００７７】メスに付着した内皮細胞を上記ＭＥＭ培地
１０ｍｌに分散させ、８００ｒｐｍで５分間遠心分離し
た。その後、沈渣に上記ＭＥＭ培地を加え、ピペットで
内皮細胞が数十個集まった稲穂状になるまで分散し、プ
ラスチックシャーレに播き培養した。

【００７８】２）血管内皮細胞を用いた活性酸素傷害防
御試験 ９６穴マイクロプレートに上記の方法で単離して培養し
たウシ頸動脈内皮細胞を、１穴あたり２×１０⁴個の細
胞を播き、２日間培養し、コンフルエントにした。その
中に、表１に示した各種被検薬を最終目的濃度になるよ
うに添加し、２４時間培養して被検薬を内皮細胞に取り
込ませた。その後⁵¹Ｃｒ−クロム酸ナトリウムを１穴あ
たり０．５μＣｉ加えて、さらに１８時間培養し、細胞
内に⁵¹Ｃｒ−クロム酸ナトリウムを取り込ませた。

【００７９】その後、ハンクス平衡塩溶液（ＧＩＢＣＯ
ＢＲＬ社製）で３回洗浄し、４×１０⁵ｃｅｌｌ／ｗ
ｅｌｌの白血球（ヒト末梢血よりフィコール（商品名、
ファルマシア社製）で分離した好中球）を加え、１２−
Ｏ−テトラデカノイル−ホルボール−１３−アセテート
を１０ｎｇ／ｍｌ加えて刺激した。この化合物は白血球
膜に作用してＮＡＤＰＨ依存性の五単糖リン酸回路を刺
激して活性酸素の産生を促進し、内皮細胞を傷害するも
のである。この時、活性酸素により傷害を受けた細胞か
ら⁵¹Ｃｒが放出される。

【００８０】５時間後に培養液中に放出されてきた⁵¹Ｃ
ｒの放射活性をγ−シンチレーション・カウンターで測
定し、被検薬取り込み状態での放出量とした。内皮細胞
内に取り込まれた⁵¹Ｃｒの総量は、０．１％のトリトン
Ｘ−１００を加えて細胞膜を溶かすことによって、培養
液に放出された放射活性を測定し、細胞内総⁵¹Ｃｒ量と
した。また、被検薬、白血球および１２−Ｏ−テトラデ
カノイル−ホルボール−１３−アセテートを添加しない
時の放射活性量を無刺激時放出量とした。

【００８１】内皮細胞の傷害率は、下記数式〔１〕で導
かれる⁵¹Ｃｒの放出率（specific release of ⁵¹Ｃｒ；
ＳＲ）により定量化した。

【数１】

【００８２】次に、内皮細胞傷害抑制率を下記数式
〔２〕より求めた。結果を表１または表２に示す。

【数２】

【００８３】

【表１】

【００８４】

【表２】 ＊＊：ｐ＜０．０１ ＊ ：ｐ＜０．０５対コントロール

【００８５】表１および表２の結果から明らかなよう
に、表１および表２のヘテロ三環化合物は細胞内に容易
に取り込まれ、活性酸素種による内皮細胞傷害を抑制し
た。

【００８６】参考例１ 表３に示すヘテロ三環化合物を被検薬として、細胞毒性
を被検薬処理時の細胞内総⁵¹Ｃｒ量を測定することより
調べた。まず実施例２−１の２）と同様にして血管内皮
細胞内に被検薬および⁵¹Ｃｒ−クロム酸ナトリウムを取
り込ませた。次に、前記ハンクス平衡塩溶液で洗浄後、
活性化好中球で内皮細胞傷害を惹起させた。この時、被
検薬に細胞毒性があればハンクス平衡塩溶液で洗浄する
ことにより、死んだ細胞は洗い流され、被検薬処理時の
細胞内総⁵¹Ｃｒ量は減少する。そこで、被検薬無処理時
の細胞内総⁵¹Ｃｒ量に対する被検薬処理時の細胞内総⁵¹
Ｃｒ量を百分率で表した。結果を表３に示す。表３の結
果から毒性のないことがわかる。

【００８７】

【表３】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ０７Ｄ 279/30 Ｃ０７Ｄ 279/30 279/32 279/32

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 下記一般式（１）で表わされるヘテロ三
   環化合物。 【化１】 〔式中、Ｒ¹はＨ、ＣＯＲ³またはＮＨＣＯＲ⁴（ここで
   Ｒ³およびＲ⁴はそれぞれ炭素数２〜２２の飽和もしくは
   不飽和アルキル基を示す。）、Ｒ²はＨ、炭素数２〜２
   ２の飽和もしくは不飽和アルキル基、ＣＯＲ³またはＮ
   ＨＣＯＲ⁴（ここでＲ³およびＲ⁴は前記と同じものを示
   す。）を示す。ただし、Ｒ¹およびＲ²が同時にＨである
   ことはない。ＸはＯまたはＳを示す。〕
2. 【請求項２】 下記一般式（２）で表わされるヘテロ三
   環化合物を有効成分とすることを特徴とする細胞傷害防
   御剤。 【化２】 〔式中、Ｒ⁵はＨ、ＣＯＲ⁷またはＮＨＣＯＲ⁸（ここで
   Ｒ⁷およびＲ⁸はそれぞれ炭素数１〜２２の飽和もしくは
   不飽和アルキル基を示す。）、Ｒ⁶はＨ、炭素数１〜２
   ２の飽和もしくは不飽和アルキル基、ＣＯＲ⁷またはＮ
   ＨＣＯＲ⁸（ここでＲ⁷およびＲ⁸は前記と同じものを示
   す）を示す。ＸはＯまたはＳを示す。〕