WO2009156535A1 - Hidrazidas de sistemas heterociclicos y su uso en el tratamiento de enfermedades neurodegenerativas - Google Patents

Hidrazidas de sistemas heterociclicos y su uso en el tratamiento de enfermedades neurodegenerativas Download PDF

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WO2009156535A1
WO2009156535A1 PCT/ES2009/070229 ES2009070229W WO2009156535A1 WO 2009156535 A1 WO2009156535 A1 WO 2009156535A1 ES 2009070229 W ES2009070229 W ES 2009070229W WO 2009156535 A1 WO2009156535 A1 WO 2009156535A1
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azaantracen
compound
thia
chloro
acetamide
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PCT/ES2009/070229
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Inventor
Santiago Conde Ruzafa
Mª Isabel RODRÍGUEZ FRANCO
Gema Cristina GONZÁLEZ MUÑOZ
Mariana Paula ARCE GARCÍA
Mercedes VILLARROYA SÁNCHEZ
Manuela GARCÍA LÓPEZ
Antonio GARCÍA GARCÍA
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Consejo Superior De Investigaciones Científicas
Universidad Autónoma de Madrid
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    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
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    • C07D279/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one nitrogen atom and one sulfur atom as the only ring hetero atoms
    • C07D279/10—1,4-Thiazines; Hydrogenated 1,4-thiazines
    • C07D279/14—1,4-Thiazines; Hydrogenated 1,4-thiazines condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D279/18—[b, e]-condensed with two six-membered rings
    • C07D279/32—[b, e]-condensed with two six-membered rings with hetero atoms directly attached to the ring nitrogen atom
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    • A61K31/54—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one sulfur as the ring hetero atoms, e.g. sulthiame
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    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia

Definitions

  • the present invention is included in the field of research and pharmaceutical industry. In particular, it focuses on chemical compounds derived from hydrazides and their use as agents for the treatment of diseases of the central nervous system, caused by a series of processes included in what is generically called neurodegeneration.
  • Alzheimer's disease in the following, is the most common neurodegenerative disease, responsible for approximately two thirds of the total dementia cases (varying between 42 and 81% according to different studies), with a prevalence closely related to Ia age, which approaches 50% in the population over 85 years of age, and which affects women more than men ( ⁇ /. Engl. J. Med. 2003, 348, 1356-1364).
  • AD Alzheimer's disease
  • abnormal metabolism and aggregation of the amyloid protein abnormal metabolism and aggregation of the amyloid protein, hyperphosphorylation of the tau protein, neuronal loss, problems in cholinergic neurotransmission, etc.
  • an improvement of any of these pathologies separately would be a correct, if incomplete, approach to the treatment of the disease.
  • the drugs used for the treatment of AD are agents that improve cholinergic neurotransmission, capable of alleviating cognitive and memory deficits associated with AD, although only temporarily (Arch. Gerontol. Geriatr. Suppl. 2004, 9, 297-307).
  • Neurol 2007, 61, 120-129 and that are capable of restoring or, at least, maintaining the physiological processes affected in neurodegenerative diseases at the levels closest to functional normality.
  • the invention is precisely related to the discovery of antioxidant and, in general, preventive properties of certain pathological processes of a family of compounds described in the present invention, whose possible biological activities were, until now, unknown for not having been studied from a pharmacological point of view.
  • the present invention relates to a family of compounds with the structural characteristic of a hydrazide group linked to a heterocyclic system that have pharmacological properties potentially useful for the treatment of neurodegenerative diseases such as, for example, Alzheimer's disease.
  • the present invention is based on the fact that the inventors have observed in interesting compounds of general formula I pharmacological properties that make them useful as therapeutic agents with application in possible treatments of neurodegenerative diseases such as, for example, Alzheimer's disease.
  • a first aspect of the present invention refers to a compound of general formula I, or an isomer, pharmaceutically acceptable salt and / or solvate thereof:
  • Ri represents an alkyl group, straight or branched chain which may include double or triple bonds, haloalkyl, aryl, alkylaryl, aminoalkyl, ammonium alkyl or, in general, any alkyl group with or without substituents, including both enantiomers or their mixtures in any proportion in case there are chiral carbons or, in general, any type of isomerism.
  • R2, R3 are the same or different and are each independently selected from the group comprising (C1-C6) alkyl, alkoxy, halogen, haloalkyl, nitro, amino, aminoalkyl or, in general, any substituent group of the aromatic rings, Located in any position.
  • a second aspect of the present invention refers to the use of the compounds represented with the general formula (I) in the elaboration of a medicament or pharmaceutical composition, and preferably that medicament or pharmaceutical composition is used for the treatment of pathologies or diseases caused by oxidative processes, dysfunctions of the homeostasis of the Ca 2+ ions or in the cholinergic neurotransmission or, in general, of diseases susceptible of benefiting from the biological activities shown by the products described in the present invention, or of a salt, derived, Pharmaceutically acceptable prodrugs or solvate thereof.
  • the compounds of the present invention represented by the formula (I) can include isomers, depending on the presence of multiple bonds (for example, Z, E), including optical isomers or enantiomers, depending on the presence of chiral centers.
  • the individual isomers, enantiomers or diastereoisomers and mixtures thereof fall within the scope of the present invention.
  • the individual enantiomers or diastereoisomers, as well as mixtures thereof, can be separated by conventional techniques.
  • alkyl refers in the present invention to aliphatic, linear or branched chains, having 1 to 10 carbon atoms, for example, methyl, ethyl, n-propyl, i-propyl, n-butyl, tert- butyl, sec-butyl, n- pentyl, etc.
  • the alkyl group has between 1 and 6 carbon atoms.
  • the alkyl radicals may be optionally substituted by one or more substituents such as a cycloalkyl, aryl, heteroaryl, alkoxy, halogen, haloalkyl, nitro, amino, aminoalkyl, aminocycloalkyl, ammoniumalkyl, ammoniumcycloalkyl or, in general, any substituent located at any position.
  • substituents such as a cycloalkyl, aryl, heteroaryl, alkoxy, halogen, haloalkyl, nitro, amino, aminoalkyl, aminocycloalkyl, ammoniumalkyl, ammoniumcycloalkyl or, in general, any substituent located at any position.
  • heterocycle refers to a ring containing at least one N, O or S atom in the cycle, preferably an N atom, such as, but not limited to, piperidine, piperazine, pyrrolidine or pyrazolidine.
  • the heterocycle may be attached to the rest of the molecule of formula (I) through any atom and may be optionally substituted by one or more groups independently selected from halogen, alkyl, cycloalkyl, aryl, heteroaryl, alkoxy, haloalkyl, nitro, amino, aminoalkyl, aminocycloalkyl, ammoniumalkyl, ammoniumcycloalkyl or, in general, any substituent.
  • the substituent (s), when there is more than one, can be in any available position of the heterocycle
  • derivative includes both pharmaceutically acceptable compounds, that is, derivatives of the compound of formula (I) that can be used in the manufacture of a medicament, as pharmaceutically unacceptable derivatives since these can be useful in the preparation of pharmaceutically acceptable derivatives.
  • the nature of the pharmaceutically acceptable derivative is not critical, as long as it is pharmaceutically acceptable.
  • prodrugs of the compounds of formula (I) include any compound derived from a compound of formula (I), for example, esters, including esters of carboxylic acids, amino acid esters, phosphate esters, sulphonate esters of metal salts, etc., carbamates, amides, etc., which, when administered to an individual, is capable of providing, directly or indirectly, said compound of formula ( I) in said individual.
  • said derivative is a compound that increases the bioavailability of the compound of formula (I) when administered to an individual or that enhances the release of the compound of formula (I) in a biological compartment.
  • the nature of said derivative is not critical as long as it can be administered to an individual and provides the compound of formula (I) in a biological compartment of an individual.
  • the preparation of said prodrug can be carried out by conventional methods known to those skilled in the art.
  • the compounds of the invention can be in crystalline form as free compounds or as solvates and it is intended that both forms are within the scope of the present invention. In this sense, the term
  • Solidvate includes both pharmaceutically acceptable solvates, that is, solvates of the compound of formula (I) that can be used in the manufacture of a medicament, such as pharmaceutically acceptable solvates, which may be useful in The preparation of solvates or pharmaceutically acceptable salts.
  • pharmaceutically acceptable solvate is not critical as long as it is pharmaceutically acceptable.
  • the solvate is a hydrate.
  • Solvates can be obtained by conventional solvation methods well known to those skilled in the art.
  • the compounds of formula (I), their isomers, salts, prodrugs or solvates will preferably be found in a pharmaceutically acceptable or substantially pure form, that is, having a pharmaceutically acceptable level of purity excluding normal pharmaceutical additives such as diluents and carriers, and not including material considered toxic at normal dosage levels.
  • the purity levels for the active ingredient are preferably greater than 50%, more preferably greater than 70%, more preferably greater than 90%. In a preferred embodiment, they are greater than 95% of the compound of formula (I), or of its salts, solvates or prodrugs.
  • the compounds of the invention also include compounds that differ only in the presence of one or more isotopically enriched atoms.
  • compounds having said structure except for the replacement of a hydrogen with a deuterium or tritium, or the replacement of a carbon with a carbon enriched in 13C or 14C or a nitrogen enriched in 15N, are within the scope of this invention.
  • the compounds described in the present invention, their pharmaceutically acceptable salts, prodrugs and / or solvates as well as the pharmaceutical compositions containing them can be used together with other additional drugs to provide a combination therapy.
  • Said additional drugs can be part of the same pharmaceutical composition or, alternatively, they can be provided in the form of a separate composition for simultaneous or not simultaneous administration to the pharmaceutical composition comprising a compound of formula (I), or a prodrug, solvate, derivative or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • the compounds of the present invention of formula (I) can be obtained or produced by a chemical synthetic route or obtained from a natural material of different origin.
  • a method of obtaining the compounds of the invention of formula (I) or an isomer, pharmaceutically acceptable salt and / or solvate thereof characterized by the following steps:
  • R2 and R3 represent the aromatic substituents indicated above, when describing the general formula (I), and X represents a methylene group (CH 2 ) or a thioether group (S), under nitrosation conditions, for example with a nitrite alkaline in acidic medium.
  • This reaction would give rise to an N-nitrosoamine, which in general does not need to be isolated and purified for the next reaction, being reduced to the corresponding hydrazine (III) by some general procedure, well known in organic synthesis such as treatment with dichloride of tin or lithium aluminum hydride.
  • acylation of the hydrazine (III) by some acylating agent under the usual conditions, for example an acid chloride or anhydride in the presence of a base such as triethylamine or pyridine, in an aprotic solvent such as methylene chloride, the same pyridine, etc to get
  • this hydrazide (IV) is cycled through a classical reaction in organic synthesis in which hydrazides derived from the azaanthracene system of general formula (I) are obtained by treatment with a strong base in an aprotic polar solvent.
  • composition of the invention useful for the treatment of diseases or diseases of the nervous system that can be caused by oxidative processes, or that at least said processes play a role pathologically significant or, in general, of diseases susceptible of benefiting from the biological activities shown by the products described in the present invention, hereinafter pharmaceutical composition of the invention, comprising a compound, in therapeutically effective amount, of formula (I), or mixtures thereof, a pharmaceutically acceptable salt, prodrug, solvate or stereoisomer thereof together with a pharmaceutically acceptable carrier, adjuvant or vehicle, for administration to a patient.
  • pharmaceutical composition of the invention comprising a compound, in therapeutically effective amount, of formula (I), or mixtures thereof, a pharmaceutically acceptable salt, prodrug, solvate or stereoisomer thereof together with a pharmaceutically acceptable carrier, adjuvant or vehicle, for administration to a patient.
  • Another preferred embodiment of the present invention relates to the pharmaceutical composition of the invention in the group of diseases of the nervous system of neurodegenerative character to which they belong, by way of illustration and without limiting the scope of the invention: Alzheimer's diseases, Creutzfeldt- Jakob, Parkinson or Huntington, dementia with Lewy bodies or, in general, diseases resulting from a deterioration of neurons caused by oxidation or other processes such as imbalances in the concentration of calcium ions, neurotransmission systems, etc. , which the nervous system of the affected patient is not able to control.
  • a neurodegenerative process in the present invention is that such as neuronal loss, failures in neurotransmission processes or processes derived from failures in the control of the oxidizing species created in the brain that give rise to pathological oxidative stress.
  • Another preferred embodiment of the invention comprises the pharmaceutical composition of the invention in which the compound of formula (I) is a compound, or mixture of compounds, belonging, by way of illustration and without limiting the scope of the invention, to the following group : • N- (4-Chloro-10H-9-thia-10-azaantracen-10-yl) -2- (piperidin-1-yl) acetamide,
  • compositions are the adjuvants and vehicles known to those skilled in the art and commonly used in the elaboration of therapeutic compositions.
  • the expression “therapeutically effective amount” refers to the amount of the agent or compound capable of developing the therapeutic action determined by its pharmacological properties, calculated to produce the desired effect and, in general, will be determined, among other causes, due to the characteristics of the compounds, including the age, condition of the patient, the severity of the alteration or disorder, and the route and frequency of administration.
  • said therapeutic composition is prepared in the form of a solid form or aqueous suspension, in a pharmaceutically acceptable diluent.
  • the therapeutic composition provided by this invention can be administered by any appropriate route of administration, for which said composition will be formulated in the pharmaceutical form appropriate to the route of administration chosen.
  • the administration of the therapeutic composition provided by this invention is carried out orally, topically, rectally or parenterally (including subcutaneously, intraperitoneally, intradermally, intramuscularly, intravenously, etc.) - A review of the different pharmaceutical forms of medication administration and of the excipients necessary for obtaining of these can be found, for example, in the "Treaty of Galenic Pharmacy", C. Faul ⁇ i Trillo, 1993, Luzán 5, SA Ediations, Madrid, or in other or similar ones of the Spanish and United States Pharmacopoeias.
  • this patent presents a method for the treatment of patients affected by diseases of the central nervous system in which uncontrolled oxidative processes or other processes take place in which the products of the present invention produce a beneficial effect.
  • This treatment consists in the administration to the individuals affected by these diseases of therapeutically effective amounts of a compound of formula (I), or a pharmaceutical composition that includes it.
  • diseases contemplated in this invention are Alzheimer's, Creutzfeldt-Jakob, Parkinson's or Huntington's diseases, dementia with Lewy bodies or, in general, the diseases resulting from a deterioration of neurons caused by stress-type processes. oxidative, ionic imbalances or failures in some neurotransmission system that the nervous system of the affected patient is not able to control.
  • This hydrazine (III) was acylated by means of some acylating agent under the usual conditions, for example an acid chloride or anhydride in the presence of a base such as triethylamine or pyridine, in an aprotic solvent such as methylene chloride, the same pyridine, etc., to obtain the hydrazide (IV) which, finally, was cyclized by a classical reaction in organic synthesis by treatment with a strong base in an aprotic polar solvent, obtaining the hydrazides derived from the azaanthracene system of general formula (I).
  • some acylating agent under the usual conditions, for example an acid chloride or anhydride in the presence of a base such as triethylamine or pyridine, in an aprotic solvent such as methylene chloride, the same pyridine, etc.
  • the cytoprotective effect of the compounds in human neuroblastoma cells was evaluated, specifically the neuroprotective potential of these compounds against oxidative stress produced in two different study models, on the one hand with hydrogen peroxide as an exogenous free radical generator, and on the other with rotenone and oligomycin A, blockers of the respiratory chain of the mitochondria as described in J. Neurochem. 1992, 59, 1609-1623 and in Toxicological Sciences 2004, 79, 137-146, respectively.
  • the viability parameter that was measured in both models was the activity of the lactate dehydrogenase enzyme (LDH in the following), an enzyme that is released to the extracellular medium when the cell dies (J. Pharmacol. Exp. Ther. 2005, 315, 1346 -1353).
  • Human neuroblastoma SH-SY5Y were seeded and cultured in a DMEM (Dulbecco's modified Eagle's medium) medium containing 15 non-essential amino acids and supplemented with 10% fetal calf serum, 1 millimolar glutamine, 50 units per milliliter of penicillin and 50 micrograms per ml streptomycin, at 37 0 C keeping in humidified air containing 5% carbon dioxide.
  • DMEM Dynamic fetal bovine serum
  • 1 millimolar glutamine 50 units per milliliter of penicillin and 50 micrograms per ml streptomycin
  • the SH-SY5Y cells were subcultured in 48-well plates with a seeding density of 1x10 5 cells per well, or in 96-well plates with a seeding density of 2x10 5 cells per well.
  • the cells thus prepared were treated with the compounds to be measured, in serum-free DMEM.
  • the LDH activity released by the cells at death was defined as the percentage of the extracellular LDH activity versus the total LDH activity.
  • the samples were analyzed spectrophotometrically in a plate reader (Labsystems iEMS Reader MF), using the appropriate filter (490 nm), obtaining absorbance values using the DeltaSOFTIl Version 3.71 EMS program.
  • a positive control was used as a comparison and to assess the goodness of the method used.
  • trolox a well-known free radical scavenger, the active core of the natural antioxidant vitamin E (New. Engl. J. Med.
  • AD like all neurodegenerative diseases, is a very slow process, with an average time of at least 8 years between the appearance of the first symptoms and death.
  • the first symptoms appear as short-term memory loss, which leads to the non-recognition of family members or the forgetting of normal abilities for the individual, language problems, cognitive disorders, loss of learning capacity and orientation difficulties, which increase until the total loss of cognitive abilities as the disease progresses (Ann. Intern. Med. 2004, 140, 501-509).
  • the immediate cause of these cognitive failures at least in the early stages, is the decrease in the levels of cholinergic neurotransmission that constitute the synaptic communication. Therefore, in the early stages of the disease it is advisable to use acetylcholinesterase inhibitors to reduce the acetylcholine deficit.
  • acetylcholinesterase begins to perform another function (favoring the aggregation of amyloid peptide), so that another enzyme, butyrylcholinesterase, performs the degradation function of the neurotransmitter acetylcholine ⁇ Nat. Rev. Neurosci. 2003, 4, 131-138). From here the importance is deduced that, for the treatment of the long-term disease, butyrylcholinesterase inhibitors have, as are the compounds object of the present invention. This evaluation was carried out using the so-called Ellman method (Biochem. Pharmacol. 1961, 7, 88-90).
  • test solution was formed by 0.1 M phosphate buffer at pH 8, 200 ⁇ M 5,5'-dithiobisnitrobenzoic acid (DTNB, Ellman reagent), butyrylcholinesterase (BuChE) 0.02 unit / mL (from the Sigma company , obtained from horse serum) and 400 ⁇ M butyrylthiocholine iodide as a substrate for the enzymatic reaction.
  • the tested compounds were added to the test solution and pre-incubated with the enzyme for 10 minutes at 3O 0 C. After this time, the substrate was added and the absorbance changes were measured at 412 nm every 5 minutes by a UVA spectrometer / IS Perkin Elmer 550 SE. The reaction rates were compared and the percentages of inhibition due to the presence of the compounds being analyzed were calculated.
  • IC50 values were defined as the concentrations of each compound that reduced enzymatic activity by 50% with respect to the absence of inhibitor.
  • the protocol followed consisted of sowing the cells at a density of 2x10 5 cells per well in 96-well black plates, and keeping them for 24 hours in the incubator. Next, the cells were loaded with 10 ⁇ M of DCFH-DA, incubated for about 45 minutes and then the toxic rotenone plus oligomycin A (30:10 ⁇ M) was added, a mixture that induces the formation of radicals, plus the compound at the most neuroprotective concentrations for 2 hours.
  • the results of the antioxidant capacity, expressed as% fluorescence of the combination of rotenone 30 micromolar / micromolar oligomycin 10, generating ROS, for the compounds of the invention, are the following:
  • SH-SY5Y cells were seeded in opaque 96-well plates, and they were kept for 24 hours in the incubator; then they incubated in the dark for 40 min at 37 0 C in a Krebs-HEPES solution (composed of: NaCI (144mm), KCI (5,9mM), MgCl 2 (1, 2 mM), CaCl 2 (2 mM), HEPES ( 1OmM), glucose (H mM)) that It contained the fluorescent probe fluo-4 / AM (10 ⁇ M), pluronic acid F-127 (0.02%) and probenecid (1 mM).
  • Pluronic acid is a detergent of low toxicity that is used to prevent the formation of micelles and thus facilitate the loading of the cells with the fluo-4 / AM, a calcium ion chelator, which emits fluorescence when attached to it.
  • the probenecid is an inhibitor of the anionic transporter of the plasma membrane and its use reduces the loss of the fluorescent probe.
  • the cells were washed with Krebs-HEPES and, subsequently, kept 30 min in the dark at room temperature, to allow hydrolysis of the ester linkage of the probe by intracellular esterases.
  • the compounds were then injected at the desired concentrations, in the different wells of the plate, after introducing it into a fluorescence reader in Optimal Fluostar model plates (BMG Labtechnologies) where the fluorescence emitted by the Fluo-4 / AM was quantified by measuring at the wavelengths of 485 nm (excitation) and 520 nm (emission).
  • the entire central nervous system but in particular the brain, appears as an armored organ, a separate system within the body as a whole, separated by a membrane of special characteristics called the blood brain barrier (BHE in succession) that selects the passage of certain molecules in both directions. That is, it is useless to obtain a product that shows high activity in vitro, with great potential for the treatment of, for example, neurodegenerative diseases if in vivo it is not able to reach its therapeutic target.
  • BHE blood brain barrier
  • the receiving microplate was filled with 180 ⁇ L per well of a mixture composed of phosphate buffered pH 7.4 (PBS) and EtOH in a proportion of 70:30.
  • PBS phosphate buffered pH 7.4
  • EtOH a solution of the lipid extract of pig brain in dodecane (20 mg mL "1 ).
  • the donor plate concentration of the compounds in the plate receiving carefully separated and determined Ia spectroscopically UV
  • the method measures the permeability, expressing as such the speed of passage of a barrier of a given thickness in millionths of a centimeter (cm x 10 ⁇ 6 ) per second
  • the results are expressed as the average value plus / minus the standard deviation of three independent trials each containing four repetitions of each compound to be analyzed Previously, the method was validated with the evaluation of 15 commercial drugs: testosterone, verapamil, imipramine, desipramine, astemizole, progesterone, promazine, chlorpromazine, clonidine, corticosterone, piroxicam, hydrocortisone, caffeine, aldosterone, lomefloxazine, enoxazine and ofloxazine, which offered values between 22.9 ⁇ 0.1 (testosterone) and 0.6 ⁇ 0.01

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Abstract

La presente invención se refiere a una familia de compuestos con la característica estructural de un grupo hidrazida unido a un sistema heterocíclico, composiciones farmacéuticas que los incluyen y su uso como agentes para el tratamiento de enfermedades del sistema nervioso central, provocadas por una serie de procesos incluidos en lo que genéricamente se denomina neurodegeneración.

Description

HIDRAZIDAS DE SISTEMAS HETEROCICLICOS Y SU USO EN EL TRATAMIENTO DE ENFERMEDADES NEURODEGENERATIVAS.
La presente invención se incluye en el campo de Ia investigación e industria farmacéutica. En particular, se centra en compuestos químicos derivados de hidrazidas y su uso como agentes para el tratamiento de enfermedades del sistema nervioso central, provocadas por una serie de procesos incluidos en Io que genéricamente se denomina neurodegeneración.
ESTADO DE LA TÉCNICA
El progresivo envejecimiento de Ia población mundial trae consigo Ia indeseada consecuencia de un aumento de las enfermedades neurodegenerativas y demencias seniles. Entre estas, Ia enfermedad de Alzheimer, EA en Io sucesivo, es Ia enfermedad neurodegenerativa más común, responsable de aproximadamente dos tercios del total de casos de demencia (variando entre 42 y 81 % según distintos estudios), con una prevalencia muy relacionada con Ia edad, que se aproxima al 50% en Ia población mayor de 85 años, y que afecta más a las mujeres que a los hombres (Λ/. Engl. J. Med. 2003, 348, 1356-1364).
Varios son los procesos bioquímicos afectados en los cerebros de pacientes de EA: metabolismo anómalo y agregación de Ia proteína amiloide, hiperfosforilación de Ia proteína tau, pérdida neuronal, problemas en Ia neurotransmisión colinérgica, etc. Sin duda, una mejora de cualquiera de estas patologías por separado sería una aproximación correcta, si bien incompleta, al tratamiento de Ia enfermedad. En Ia actualidad, los fármacos empleados para el tratamiento de Ia EA son agentes que mejoran Ia neurotransmisión colinérgica, capaces de aliviar los déficits cognitivos y de memoria asociados a Ia EA, aunque sólo de manera temporal (Arch. Gerontol. Geriatr. Suppl. 2004, 9, 297-307).
Ante esta situación, resulta obvia Ia conveniencia de disponer de fármacos capaces de actuar en los primeros estadios de Ia enfermedad o, mejor aun, que produzcan una actividad protectora presintomática, en el caso ideal de disponer de un sistema de diagnóstico precoz adecuado (Ann.
Neurol. 2007, 61, 120-129), y que sean capaces de restablecer o, al menos, mantener los procesos fisiológicos afectados en las enfermedades neurodegenerativas en los niveles más próximos posibles a Ia normalidad funcional.
Estudios llevados a cabo tanto en modelos animales como en humanos demuestran que Ia pérdida del equilibrio entre las especies oxidantes generadas por el metabolismo cerebral y los mecanismos protectores antioxidantes produce el llamado estrés oxidativo, cuando dichos sistemas defensivos disminuyen su eficacia y son desbordados. Este estrés oxidativo aumenta con Ia edad y se encuentra entre las primeras causas de Ia patogénesis de Ia EA (Prog. Neurobiol. 1999, 57, 301-323) posiblemente asociado a disfunciones de las mitocondrias neuronales (Antioxid. Redox Signal. 2007, 9, 1647-1658).
DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN
Descripción Breve
La invención está precisamente relacionada con el descubrimiento de las propiedades antioxidantes y, en general, preventivas de ciertos procesos patológicos de una familia de compuestos descritos en Ia presente invención, cuyas posibles actividades biológicas eran, hasta ahora, desconocidas por no haber sido estudiados desde un punto de vista farmacológico.
Más concretamente, Ia presente invención se refiere a una familia de compuestos con Ia característica estructural de un grupo hidrazida unido a un sistema heterocíclico que presentan propiedades farmacológicas potencialmente útiles para el tratamiento de enfermedades neurodegenerativas como, por ejemplo, Ia enfermedad de Alzheimer.
Descripción Detallada
La presente invención se basa en que los inventores han observado en compuestos de fórmula general I interesantes propiedades farmacológicas que los hacen útiles como agentes terapéuticos con aplicación en posibles tratamientos de enfermedades neurodegenerativas como, por ejemplo, Ia enfermedad de Alzheimer.
En los estudios farmacológicos a que han sido sometidos, los compuestos de Ia invención han mostrado una serie de actividades potencialmente muy útiles en tratamientos de enfermedades neurodegenerativas, sin perjuicio de que, en estudios mas profundos, vayan apareciendo nuevas propiedades biológicas de posible interés. Las actividades estudiadas, y que han mostrado resultados positivos, han sido:
• Actividad antioxidante mediante captación de radicales libres. • Modulación de los canales de calcio disminuyendo Ia entrada de dichos iones.
• Inhibidores de butirilcolinesterasa.
• Capacidad de atravesar Ia barrera hematoencefálica y penetrar en el sistema nervioso central. Como se ha descrito anteriormente, y cada vez existe un mayor número de evidencias experimentales, Ia presencia de especies oxidantes por encima de niveles fisiológicamente aceptables, el llamado estrés oxidativo, se encuentra muy en el origen de Ia enfermedad de Alzheimer (Neurobiol. Aging 2007, 28, 1009-1014), y a su vez está fuertemente relacionado con entradas incontroladas de iones Ca2+ {Life Sci. 2000, 66, 1879-1892). Asimismo, Ia inhibición de las enzimas acetil y butirilcolinesterasa favorece Ia neurotransmisión colinérgica {Proc. Nati. Acad. Sci. U. S. A. 2005, 102, 17213-17218) consiguiendo detener, al menos temporalmente, el deterioro de los procesos cognitivos característicos de las primeras fases sintomáticas de esta enfermedad. Finalmente, un fármaco cuya diana terapéutica esté en el interior del cerebro o, en general, del sistema nervioso central, debe de tener Ia propiedad de penetrar en dicho sistema atravesando Ia barrera hematoencefálica.
Por Io tanto, un primer aspecto de Ia presente invención se refiere a un compuesto de fórmula general I, o a un isómero, sal farmacéuticamente aceptable y/o solvato del mismo:
Figure imgf000005_0001
(i) donde:
Het Representa un sistema heterocíclico, preferiblemente tricíclico derivado del sistema azaantraceno, por ejemplo, 10H-9-tia-10- azaantraceno
Ri representa un grupo alquilo, de cadena recta o ramificada que puede incluir dobles o triples enlaces, haloalquilo, arilo, alquilarilo, aminoalquilo, amonioalquilo o, en general, cualquier grupo alquilo con o sin sustituyentes, incluyendo ambos enantiómeros o sus mezclas en cualquier proporción en el caso de que existan carbonos quirales o, en general, cualquier tipo de isomería. R2, R3 son iguales o distintos y se seleccionan cada uno de forma independiente del grupo que comprende alquilo (C1-C6), alcoxilo, halógeno, haloalquilo, nitro, amino, aminoalquilo o, en general, cualquier grupo sustituyente de los anillos aromáticos, situado en cualquier posición.
Un segundo aspecto de Ia presente invención se refiere al uso de los compuestos representados con Ia fórmula general (I) en Ia elaboración de un medicamento o composición farmacéutica, y preferiblemente ese medicamento o composición farmacéutica se utiliza para el tratamiento de patologías o enfermedades provocadas por procesos oxidativos, disfunciones de Ia homeostasis de los iones Ca2+ o en Ia neurotransmisión colinérgica o, en general, de enfermedades susceptibles de beneficiarse de las actividades biológicas mostradas por los productos descritos en Ia presente invención, o bien de una sal, derivado, profármacos o solvato farmacéuticamente aceptables del mismo.
Los compuestos de Ia presente invención representados por Ia fórmula (I) pueden incluir isómeros, dependiendo de Ia presencia de enlaces múltiples (por ejemplo, Z, E), incluyendo isómeros ópticos o enantiómeros, dependiendo de Ia presencia de centros quirales. Los isómeros, enantiómeros o diastereoisómeros individuales y las mezclas de los mismos caen dentro del alcance de Ia presente invención. Los enantiómeros o diastereoisómeros individuales, así como sus mezclas, pueden separarse mediante técnicas convencionales.
El término "alquilo" se refiere en Ia presente invención a cadenas alifáticas, lineales o ramificadas, que tienen de 1 a 10 átomos de carbono, por ejemplo, metilo, etilo, n-propilo, i-propilo, n-butilo, tert-butilo, sec-butilo, n- pentilo, etc. Preferiblemente el grupo alquilo tiene entre 1 y 6 átomos de carbono. Los radicales alquilo pueden estar opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes tales como un cicloalquilo, arilo, heteroarilo, alcoxilo, halógeno, haloalquilo, nitro, amino, aminoalquilo, aminocicloalquilo, amonioalquilo, amoniocicloalquilo o, en general, cualquier sustituyente situado en cualquier posición.
En Ia presente invención, el término "heterociclo" se refiere a un anillo que contiene al menos un átomo de N, O ó S en el ciclo, preferiblemente un átomo de N, como por ejemplo, pero sin limitarse, piperidina, piperazina, pirrolidina o pirazolidina. El heterociclo puede hallarse unido al resto de Ia molécula de fórmula (I) a través de cualquier átomo y puede estar opcionalmente sustituido por uno o más grupos seleccionados independientemente de entre halógeno, alquilo, cicloalquilo, arilo, heteroarilo, alcoxilo, haloalquilo, nitro, amino, aminoalquilo, aminocicloalquilo, amonioalquilo, amoniocicloalquilo o, en general, cualquier sustituyente. El o los sustituyentes, cuando haya más de uno, pueden hallarse en cualquier posición disponible del heterociclo
Tal como aquí se utiliza, el término "derivado" incluye tanto a compuestos farmacéuticamente aceptables, es decir, derivados del compuesto de fórmula (I) que pueden ser utilizados en Ia elaboración de un medicamento, como derivados farmacéuticamente no aceptables ya que éstos pueden ser útiles en Ia preparación de derivados farmacéuticamente aceptables. La naturaleza del derivado farmacéuticamente aceptable no es crítica, siempre y cuando sea farmacéuticamente aceptable.
Asimismo, dentro del alcance de esta invención se encuentran los profármacos de los compuestos de fórmula (I). El término "profármaco" tal como aquí se utiliza incluye a cualquier compuesto derivado de un compuesto de fórmula (I), por ejemplo, esteres, incluyendo esteres de ácidos carboxílicos, esteres de aminoácidos, esteres de fosfato, esteres de sulfonato de sales metálicas, etc., carbamatos, amidas, etc., que, cuando se administra a un individuo es capaz de proporcionar, directa o indirectamente, dicho compuesto de fórmula (I) en dicho individuo. Ventajosamente, dicho derivado es un compuesto que aumenta Ia biodisponibilidad del compuesto de fórmula (I) cuando se administra a un individuo o que potencia Ia liberación del compuesto de fórmula (I) en un compartimento biológico. La naturaleza de dicho derivado no es crítica siempre y cuando pueda ser administrado a un individuo y proporcione el compuesto de fórmula (I) en un compartimento biológico de un individuo. La preparación de dicho profármaco puede llevarse a cabo mediante métodos convencionales conocidos por los expertos en Ia materia.
Los compuestos de Ia invención pueden estar en forma cristalina como compuestos libres o como solvatos y se pretende que ambas formas están dentro del alcance de Ia presente invención. En este sentido, el término
"solvato", tal como aquí se utiliza, incluye tanto solvatos farmacéuticamente aceptables, es decir, solvatos del compuesto de fórmula (I) que pueden ser utilizados en Ia elaboración de un medicamento, como solvatos farmacéuticamente no aceptables, los cuales pueden ser útiles en Ia preparación de solvatos o sales farmacéuticamente aceptables. La naturaleza del solvato farmacéuticamente aceptable no es crítica siempre y cuando sea farmacéuticamente aceptable. En una realización particular, el solvato es un hidrato. Los solvatos pueden obtenerse por métodos convencionales de solvatación bien conocidos por los técnicos en Ia materia.
Para su aplicación en terapia, los compuestos de fórmula (I), sus isómeros, sales, profármacos o solvatos, se encontrarán, preferentemente, en una forma farmacéuticamente aceptable o sustancialmente pura, es decir, que tiene un nivel de pureza farmacéuticamente aceptable excluyendo los aditivos farmacéuticos normales tales como diluyentes y portadores, y no incluyendo material considerado tóxico a niveles de dosificación normales. Los niveles de pureza para el principio activo son preferiblemente superiores al 50%, más preferiblemente superiores al 70%, más preferiblemente superiores al 90%. En una realización preferida, son superiores al 95% del compuesto de fórmula (I), o de sus sales, solvatos o profármacos.
A menos que se indique Io contrario, los compuestos de Ia invención también incluyen compuestos que difieren sólo en Ia presencia de uno o más átomos isotópicamente enriquecidos. Por ejemplo, compuestos que tienen dicha estructura, a excepción de Ia sustitución de un hidrógeno por un deuterio o por tritio, o Ia sustitución de un carbono por un carbono enriquecido en 13C o 14C o un nitrógeno enriquecido en 15N, están dentro del alcance de esta invención.
Los compuestos descritos en Ia presente invención, sus sales farmacéuticamente aceptables, profármacos y/o solvatos así como las composiciones farmacéuticas que los contienen pueden ser utilizados junto con otros fármacos adicionales para proporcionar una terapia de combinación. Dichos fármacos adicionales pueden formar parte de Ia misma composición farmacéutica o, alternativamente, pueden ser proporcionados en forma de una composición separada para su administración simultánea o no a Ia de Ia composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I), o un profármaco, solvato, derivado o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
Los compuestos de Ia presente invención de formula (I) pueden ser obtenidos o producidos mediante una vía sintética química u obtenidos a partir de una materia natural de distinto origen. En otro aspecto de Ia presente invención se describe un procedimiento de obtención de los compuestos de Ia invención de fórmula (I) o un isómero, sal farmacéuticamente aceptable y/o solvato del mismo caracterizado por las siguientes etapas:
a) reacción de un producto diarílico de fórmula (II)
Figure imgf000010_0001
en que R2 y R3 representan los sustituyentes aromático indicados más arriba, al describir Ia fórmula general (I), y X representa un grupo metileno (CH2) o un grupo tioeter (S), en condiciones de nitrosación, por ejemplo con un nitrito alcalino en medio ácido. Esta reacción daría lugar a una N- nitrosoamina, que en general no necesita ser aislada y purificada para Ia siguiente reacción, siendo reducida a Ia correspondiente hidrazina (III) por algún procedimiento general, bien conocido en síntesis orgánica tales como el tratamiento con dicloruro de estaño o hidruro de litio y aluminio.
Figure imgf000010_0002
b) acilación de Ia hidrazina (III) mediante algún agente acilante en las condiciones habituales, por ejemplo un cloruro de ácido o anhídrido en presencia de una base tal como trietilamina o piridina, en un disolvente aprótico como cloruro de metileno, Ia misma piridina, etc, para obtener
Ia hidrazida (IV).
Figure imgf000011_0001
(IV)
donde Ri tiene el significado señalado en Ia descripción de Ia fórmula general (I).
c) finalmente, esta hidrazida (IV) se cicla mediante una reacción clásica en síntesis orgánica en que por tratamiento con una base fuerte en un disolvente polar aprótico se obtienen las hidrazidas derivadas del sistema azaantraceno de fórmula general (I).
Los siguientes compuestos son ejemplos según Ia presente invención:
• Compuesto 1 : N-(4-Cloro-10H-9-tia-10-azaantracen-10-il)-2- (piperidin-i-il)acetamida.
• Compuesto 2: N-(3-Cloro-10H-9-tia-10-azaantracen-10-il)acetamida
• Compuesto 3: N-(3-Cloro-10H-9-tia-10-azaantracen-10-il)-2- (pirrolidin-1 -il)acetamida.
• Compuesto 4: N-(3-Cloro-10H-9-tia-10-azaantracen-10-il)-2- dimetilaminoaacetamida.
• Compuesto 5: N-(3-Cloro-10H-9-tia-10-azaantracen-10-il)-2- (piperidin-1 -il)acetamida.
• Compuesto 6: N-(2-Cloro-10H-9-tia-10-azaantracen-10-il)-2-(4- metilpiperazin-1 -il)acetamida. • Compuesto 7: N-(2-Cloro-10H-9-tia-10-azaantracen-10-il)-2-
(piperidin-1 -il)acetamida.
• Compuesto 8: N-(2-Cloro-10H-9-tia-10-azaantracen-10-il)-2- dimetilaminoaacetamida. • Compuesto 9: N-(2-Cloro-10H-9-tia-10-azaantracen-10-il)-2- (pirrolidin-1 -il)acetamida.
• Compuesto 10: 10-Amino-10/-/-9-tia-10-azaantraceno.
• Compuesto 11 : N-(10H-9-Tia-10-azaantracen-10-il)-2-(piperidin-1- il)acetamida.
• Compuesto 12: N-(10/-/-9-Tia-10-azaantracen-10-il)-2- dimetilaminoaacetamida.
• Compuesto 13: N-(10H-9-Tia-10-azaantracen-10-il)-2-(pirrolidin-1- il)acetamida. • Compuesto 14: N-(10H-9-Tia-10-azaantracen-10-il)acetamida.
• Compuesto 15: N-(3-Cloro-10H-9-tia-10-azaantracen-10-il)-3- dimetilaminopropionamida.
• Compuesto 16: N-(10/-/-9-Tia-10-azaantracen-10-il)-3- dimetilaminopropionamida. • Compuesto 17: N-(2-Cloro-10H-9-tia-10-azaantracen-10-il)-3- dimetilaminopropionamida.
• Compuesto 18: N-(2-Nitro-10H-9-tia-10-azaantracen-10-il)-3- dimetilaminopropionamida.
• Compuesto 19: N-(2-Metoxi-10H-9-tia-10-azaantracen-10-il)-3- dimetilaminopropionamida.
• Compuesto 20: N-(10/-/-9-Tia-10-azaantracen-10-il)-3-(pirrolidin-1- il)propionamida.
• Compuesto 21 : N-(2-Cloro-10/-/-9-tia-10-azaantracen-10-il)-3- (pirrolidin-1 -il)propionamida. • Compuesto 22: N-(2-Metoxi-10/-/-9-tia-10-azaantracen-10-il)-3-
(pirrolidin-1 -il)propionamida.
Otra realización preferida de Ia presente invención se refiere a una composición farmacéutica útil para el tratamiento de patologías o enfermedades del sistema nervioso que puedan ser provocadas por procesos oxidativos, o que al menos dichos procesos jueguen un papel patológicamente significativo o, en general, de enfermedades susceptibles de beneficiarse de las actividades biológicas mostradas por los productos descritos en Ia presente invención, en adelante composición farmacéutica de Ia invención, que comprende un compuesto, en cantidad terapéuticamente efectiva, de fórmula (I), o mezclas de los mismos, una sal, profármaco, solvato o estereoisómero farmacéuticamente aceptable del mismo junto con un portador, adyuvante o vehículo farmacéuticamente aceptable, para Ia administración a un paciente.
Otra realización preferida de Ia presente invención se refiere a Ia composición farmacéutica de Ia invención en el grupo de enfermedades del sistema nervioso de carácter neurodegenerativo a que pertenecen, a título ilustrativo y sin que limite el alcance de Ia invención: enfermedades de Alzheimer, Creutzfeldt-Jakob, Parkinson o Huntington, Ia demencia con cuerpos de Lewy o, en general, las enfermedades resultado de un deterioro de las neuronas causado por procesos de oxidación o de otro tipo tales como desequilibrios en Ia concentración de iones calcio, sistemas de neurotransmisión, etc, que el sistema nervioso del paciente afectado no es capaz de controlar.
El alcance de un proceso neurodegenerativo en Ia presente invención es aquel tal como Ia pérdida neuronal, fallos en los procesos de neurotransmisión o procesos derivados de fallos en el control de las especies oxidantes creadas en el cerebro que dan lugar a estrés oxidativo patológico.
Otra realización preferida de Ia invención comprende Ia composición farmacéutica de Ia invención en Ia que el compuesto de formula (I) es un compuesto, o mezcla de compuestos, perteneciente, a título ilustrativo y sin que limite el alcance de Ia invención, al siguiente grupo: • N-(4-Cloro-10H-9-tia-10-azaantracen-10-il)-2-(piperidin-1 - il)acetamida,
• N-(3-Cloro-10H-9-tia-10-azaantracen-10-il)acetamida,
• N-(3-Cloro-10H-9-tia-10-azaantracen-10-il)-2-(pirrolidin-1 - il)acetamida,
• N-(3-Cloro-10H-9-tia-10-azaantracen-10-il)-2- dimetilaminoaacetamida,
• N-(3-Cloro-10H-9-tia-10-azaantracen-10-il)-2-(piperidin-1 - il)acetamida, • N-(2-Cloro-10H-9-tia-10-azaantracen-10-il)-2-(4-metilpiperazin-1 - il)acetamida,
• N-(2-Cloro-10H-9-tia-10-azaantracen-10-il)-2-(piperidin-1 - il)acetamida,
• N-(2-Cloro-10H-9-tia-10-azaantracen-10-il)-2- dimetilaminoaacetamida,
• N-(2-Cloro-10H-9-tia-10-azaantracen-10-il)-2-(pirrolidin-1 - il)acetamida,
• 10-Amino-10H-9-tia-10-azaantraceno,
• N-(10/-/-9-Tia-10-azaantracen-10-il)-2-(piperidin-1-il)acetamida, • N-(10/-/-9-Tia-10-azaantracen-10-il)-2-dimetilaminoaacetamida,
• N-(10/-/-9-Tia-10-azaantracen-10-il)-2-(pirrolidin-1-il)acetamida,
• N-(10/-/-9-Tia-10-azaantracen-10-il)acetamida,
• N-(3-Cloro-10H-9-tia-10-azaantracen-10-il)-3- dimetilaminopropionamida, • N-(10H-9-Tia-10-azaantracen-10-il)-3-dimetilaminopropionamida,
• N-(2-Cloro-10H-9-tia-10-azaantracen-10-il)-3- dimetilaminopropionamida,
• N-(2-Nitro-10H-9-tia-10-azaantracen-10-il)-3- dimetilaminopropionamida, • N-(2-Metoxi-10H-9-tia-10-azaantracen-10-il)-3- dimetilaminopropionamida,
• N-(10/-/-9-Tia-10-azaantracen-10-il)-3-(pirrolidin-1-il)propionamida,
• N-(2-Cloro-10H-9-tia-10-azaantracen-10-il)-3-(pirrolidin-1 - il)propionamida o
• N-(2-Metoxi-10H-9-tia-10-azaantracen-10-il)-3-(pirrolidin-1 - il)propionamida,
o cualquiera de sus formas enantioméricas R, S y/o mezclas racémicas.
Los adyuvantes y vehículos farmacéuticamente aceptables que pueden ser utilizados en dichas composiciones son los adyuvantes y vehículos conocidos por los técnicos en Ia materia y utilizados habitualmente en Ia elaboración de composiciones terapéuticas.
En el sentido utilizado en esta descripción, Ia expresión "cantidad terapéuticamente efectiva" se refiere a Ia cantidad del agente o compuesto capaz de desarrollar Ia acción terapéutica determinada por sus propiedades farmacológicas, calculada para producir el efecto deseado y, en general, vendrá determinada, entre otras causas, por las características propias de los compuestos, incluyendo Ia edad, estado del paciente, Ia severidad de Ia alteración o trastorno, y de Ia ruta y frecuencia de administración.
En otra realización particular, dicha composición terapéutica se prepara en forma de una forma sólida o suspensión acuosa, en un diluyente farmacéuticamente aceptable. La composición terapéutica proporcionada por esta invención puede ser administrada por cualquier vía de administración apropiada, para Io cual dicha composición se formulará en Ia forma farmacéutica adecuada a Ia vía de administración elegida. En una realización particular, Ia administración de Ia composición terapéutica proporcionada por esta invención se efectúa por vía oral, tópica, rectal o parenteral (incluyendo subcutánea, intraperitoneal, intradérmica, intramuscular, intravenosa, etc.)- Una revisión de las distintas formas farmacéuticas de administración de medicamentos y de los excipientes necesarios para Ia obtención de las mismas puede encontrarse, por ejemplo, en el "Tratado de Farmacia Galénica", C. Faulí i Trillo, 1993, Luzán 5, S.A. Ediciones, Madrid, o en otros habituales o similares de las Farmacopeas Española y de Estados Unidos.
El uso de los compuestos de Ia invención es compatible con su uso en protocolos en que los compuestos de Ia fórmula (I), o sus mezclas se usan por sí mismos o en combinaciones con otros tratamientos o cualquier procedimiento médico.
En otro aspecto, esta patente presenta un método para el tratamiento de pacientes afectados por enfermedades del sistema nervioso central en las que tengan lugar procesos oxidativos incontrolados u otros procesos en las que los productos de Ia presente invención produzcan un efecto benéfico. Este tratamiento consiste en Ia administración a los individuos afectados por estas enfermedades de cantidades terapéuticamente efectivas de un compuesto de fórmula (I), o una composición farmacéutica que Io incluya. A título de ejemplo, enfermedades contempladas en esta invención son las enfermedades de Alzheimer, Creutzfeldt-Jakob, Parkinson o Huntington, Ia demencia con cuerpos de Lewy o, en general, las enfermedades resultado de un deterioro de las neuronas causado por procesos de tipo estrés oxidativo, desequilibrios iónicos o fallos en algún sistema de neurotransmisión que el sistema nervioso del paciente afectado no es capaz de controlar.
A Io largo de Ia descripción y las reivindicaciones Ia palabra "comprende" y sus variantes no pretenden excluir otras características técnicas, aditivos, componentes o pasos. Para los expertos en Ia materia, otros objetos, ventajas y características de Ia invención se desprenderán en parte de Ia descripción y en parte de Ia práctica de Ia invención. Los siguientes ejemplos se proporcionan a modo de ilustración, y no se pretende que sean limitativos de Ia presente invención. EJEMPLOS
A continuación se ilustrará Ia invención mediante unos ensayos realizados por los inventores, que desarrollan el proceso de selección de los compuestos de Ia invención.
1. OBTENCIÓN DE LOS COMPUESTOS DE LA INVENCIÓN
Los compuestos cuya actividad biológica es objeto de Ia presente invención se sintetizaron siguiendo un procedimiento general en síntesis orgánica. Dicho procedimiento está representado en el siguiente esquema 1 :
Figure imgf000018_0001
Compuesto de fórmula general I
Figure imgf000018_0002
Figure imgf000018_0003
I
Esquema 1. Síntesis química de los compuestos de fórmula (I)
Esta síntesis en varios pasos parte del compuesto diarílico (II), obtenido por procedimientos habituales en síntesis orgánica, de fácil ejecución por parte de cualquier experto en este campo. Este compuesto (II) se sometió a condiciones de nitrosación, que puede realizarse por el procedimiento general de hacer reaccionar Ia amina con nitrito sódico en un medio ácido. La nitrosamina resultante se obtuvo con una pureza suficiente como para no ser generalmente necesario su aislamiento y purificación, siendo reducida a Ia correspondiente hidrazina (III) por algún procedimiento general, bien conocido en síntesis orgánica tal como el tratamiento con dicloruro de estaño o hidruro de litio y aluminio. Esta hidrazina (III) se aciló por medio de algún agente acilante en las condiciones habituales, por ejemplo un cloruro de ácido o anhídrido en presencia de una base tal como trietilamina o piridina, en un disolvente aprótico como cloruro de metileno, Ia misma piridina, etc, para obtener Ia hidrazida (IV) que, finalmente, se cicló mediante una reacción clásica en síntesis orgánica por tratamiento con una base fuerte en un disolvente polar aprótico, obteniéndose las hidrazidas derivadas del sistema azaantraceno de fórmula general (I).
En particular, y siguiendo el protocolo de síntesis representado en el esquema 1 , se obtuvieron y caracterizado los siguientes compuestos:
Compuesto 1 : Síntesis de N-(4-Cloro-10H-9-tia-10-azaantracen-10-il)- 2-(piperidin-1-il)acetamida. Descripción de dicho compuesto: Sólido blanco. Punto de fusión = 173-1750C. EM (ES): m/z = 374 [M]+, 376 [M+2H]+, 396 [M+Na]+, 769 [2M+Na]+. 1H-RMN (400 MHz1CDCI3), δ (ppm): 9,23 (s, 1 H); 7,12 (m, 2H); 6,97 (m, 2H); 6,92 (td, 1 H, J= 7,6 Hz, J= 1 ,2 Hz); 6,67 (td, 1 H, J= 8,3 Hz, J=1 ,5 Hz); 6,59 (dd, 1 H, J= 7,6 Hz, J= 2,7 Hz); 3,28 (s, 2H); 2,65 (m, 4H); 1 ,67 (m, 4H); 1 ,51 (m, 2H). 13C-RMN (100 MHz, CDCI3), δ (ppm): 16,4 (C); 143,9 (C); 142,2 (C); 131 ,2 (C); 127,6 (C); 127,3 (C); 127,2 (C); 123,9 (C); 123,8 (C); 120,5 (C); 119,3 (C); 112,9 (C); 111 ,2 (C); 61 ,8 (C); 55,7 (2C); 26,2 (2C); 23,5 (C). HPLC: Pureza (99%).
Compuesto 2: Síntesis de N-(3-Cloro-10H-9-tia-10-azaantracen-10- il)acetamida. Sólido blanco. Punto de fusión = 213-2150C. EM (ES): m/z = 313 [M+Na]+, 603 [2M+Na]+. 1H-RMN (400 MHz,DMSO-d6), δ (ppm): 10,49 (s, 1 H, NH, amida); 7,12 (td, 1 H, J= 7,6 Hz, J= 1 ,1 Hz); 7,09 (d, 1 H, J= 8,2 Hz); 7,08 (dd, 1 H, J= 7,6 Hz, J= 1 ,1 Hz); 6,97 (dd, 1 H, J= 8,2 Hz, J= 2,3 Hz); 6,93 (td, 1 H, J= 7,6 Hz, J= 1 ,1 Hz); 6,82 (dd, 1 H, J= 7,6 Hz, J= 1 ,1 Hz); 6,79 (d, 1 H, J= 2,3 Hz); 2,13 (s, 3H). 13C-RMN (100 MHz, DMSO-d6), δ (ppm): 168,4 (C); 144,3 (C); 142,1 (C); 132,2 (C); 127,8 (2C); 126,6 (C) 123,8 (C); 122,9 (C); 117,7 (C); 117,2 (C); 113,7 (C); 113,1 (C); 20,6 (C). HPLC: Pureza (99%).
Compuesto 3: Síntesis de N-(3-Cloro-10H-9-tia-10-azaantracen-10-il)- 2-(pirrolidin-1-il)acetamida. Sólido blanco. Punto de fusión = 219-221 0C. EM (ES): m/z = 360 [M+H]+, 362 [M+2H]+, 382 [M+Na]+, 741 [2M+Na]+. 1H-RMN (400 MHz, CDCI3), δ (ppm): 9,29 (s, 1 H); 7,02 (td, 1 H, J= 7,6 Hz, J= 1 ,5 Hz); 6,97 (dd, 1 H, J= 7,6, J=1 ,5 Hz); 6,87 (d, 1 H, J= 8,2 Hz); 6,86 (td, 1 H, J= 7,6 Hz, J= 1 ,1 Hz); 6,81 (dd, 1 H, J= 8,2 Hz, J= 2,1 Hz); 6,70 (dd, 1 H, J= 7,6 Hz, J= 1 ,1 Hz); 6,67 (d, 1 H, J= 2,1 Hz); 3,52 (s, 2H); 2,77- 2,82 (m, 4H); 1 ,86-1 ,89 (m, 4H). 13C-RMN (100 MHz, CDCI3), δ (ppm): 169,1 (C); 144,3 (C); 142,1 (C); 132,2 (C); 127,8 (2C); 126,6 (C); 123,8 (C); 122,9 (C); 117,7 (C); 117,2 (C); 113,7 (C); 113,1 (C); 57,84 (C); 54,5 (C); 23,4 (C). HPLC: Pureza(99%).
Compuesto 4: Síntesis de N-(3-Cloro-10H-9-tia-10-azaantracen-10-il)-
2-dimetilaminoaacetamida. Sólido blanco. Punto de fusión= 216-2180C. EM (ES): m/z = 334 [M+H]+, 336 [M+2H]+, 358 [M+Na]+, 689 [2M+Na]+.
1H-RMN (400 MHz, CDCI3), δ (ppm): 9,23 (s, 1 H); 7,05 (td, 1 H, J= 7,6 Hz,
J= 1 ,5 Hz); 6,97 (dd, 1 H, J= 7,6 Hz, J= 1 ,5 Hz); 6,87 (d, 1 H, J= 8,2 Hz Hz);
6,86 (td, 1 H, J= 7,6 Hz, J= 1 ,1 Hz); 6,81 (dd, 1 H, J= 8,2 Hz, J= 2,1 Hz);
6,70 (dd, 1 H, J= 7,6 Hz, J= 1 ,1 Hz); 6,67 (d, 1 H, J= 2,1 Hz); 3,25 (s, 2H); 2,44(s, 6H). 13C-RMN (100 MHz, CDCI3), δ (ppm): 168,3 (C); 143,3 (C);
141 ,4 (C); 132,2 (C); 126,7 (C); 126,5 (C); 126,1 (C); 123,1 (C); 122,4 (C);
119,0 (C); 117,9 (C); 112,53 (C); 112,2 (C); 61 ,5 (C); 45,6 (2C). HPLC:
Pureza (100%).
Compuesto 5: Síntesis de N-(3-Cloro-10H-9-tia-10-azaantracen-10-il)- 2-(piperidin-1-il)acetamida. Sólido blanco. Punto de fusión = 197-199 0C. EM (ES): m/z = 374 [M+H]+ ,376 [M+2H]+ ,396 [M+Na]+, 768 [2M+Na]+. 1H- RMN (400 MHz, CDCI3), δ (ppm): 9,22 (s, 1 H); 7,09 (td, 1 H, J= 7,6 Hz, J= 1 ,5 Hz); 7,06 (dd, 1 H, J= 7,5 Hz, J= 1 ,5); 6,98 (d, 1 H, J= 8,2 Hz); 6,95 (td, 1 H, J= 7,6 Hz, J= 1 ,1 Hz); 6,90 (dd, 1 H, J= 8,2 Hz, J= 2,1 Hz); 6,73 (dd, 1 H, J= 7,6 Hz, J= 1 ,1 Hz); 6,71 (d, 1 H, J= 2,1 Hz); 3,31 (s, 2H); 2,68 (m, 4H); 1 ,65 (m, 4H); 1 ,50 (m, 2H). 13C-RMN (100 MHz, CDCI3), δ (ppm): 169,5 (C); 144,5 (C); 142,7 (C); 133,5 (C); 127,9 (2C); 127,4 (C); 124,7 (C); 123,7 (C); 120,2 (C); 119,2 (C); 113,6 (C); 113,3 (C); 62,2 (C); 55,9 (2C); 26,4 (2C), 23,8 (2C). HPLC: Pureza (99,5%). Compuesto 6: Síntesis de N-(2-Cloro-10H-9-tia-10-azaantracen-10-il)- 2-(4-metilpiperazin-1-il)acetamida. Sólido amarillo. Punto de fusión = 207-209 0C. EM (ES): m/z = 389 [M+H]+, 391 [M+2H]+, 799 [2M+Na]+. 1H- RMN (400 MHz, CDCI3), δ (ppm): 10,80 (s, 1 H); 7,05 (td, 1 H, J= 7,6 Hz, J= 1 ,3 Hz); 7,03 (dd, 1 H, J= 7,6 Hz, J=1 ,3 Hz); 7,00 (dd, 1 H, J= 8,7 Hz, J= 2,3 Hz); 6,97 (d, 1 H, J= 2,3 Hz); 6,90 (td, 1 H, J= 7,6 Hz, J= 1 ,3 Hz); 6,66 (dd, 1 H, J= 7,6 Hz, J= 1 ,3 Hz); 6,57 (d, 1 H, J= 8,7 Hz); 3,32 (s, 2H); 2,55 - 2,73 (m, 8H); 2,31 (s, 3H). 13C-RMN (100 MHz, CDCI3), δ (ppm): 169,0 (C); 142,5 (C); 141 ,6 (C); 128,6 (C); 127,5 (C); 127,1 (C); 126,9 (C); 126,5 (C); 123,9 (C); 122,3 (C); 119,6 (C); 113,7 (C); 112,9 (C); 60,9 (C); 54,7 (2C); 54,5 (2C); 45,6 (C). HPLC: Pureza (99%).
Compuesto 7: Síntesis de N-(2-Cloro-10H-9-tia-10-azaantracen-10-il)-
2-(piperidin-1-il)acetamida. Sólido blanco. Punto de fusión =197-199 0C.
EM (ES): m/z = 374 [M]+, 376 [M+2H]+, 396 [M+Na]+, 769 [2M+Na]+. 1H- RMN (400 MHz, CDCI3), δ (ppm): 9,15 (s, 1 H); 6,85 (td, 1 H, J= 7,7 Hz, J=
1.2 Hz ); 6,81 (dd, 1 H, J= 7,7 Hz, J=1 ,2 Hz); 6,78 (dd, 1 H, J= 7,6 Hz, J=
2.3 Hz); 6,74 (d, 1 H, J= 2,3 Hz); 6,68 (td, 1 H, J= 7,7 Hz, J= 1 ,2 Hz); 6,46 (dd, 1 H, J= 7,7 Hz, J= 1 ,2 Hz); 6,36 (d, 1 H, J= 7,6 Hz); 3,05 (s, 2H); 2,41 (m, 4H); 1 ,43 (m, 4H); 1 ,30 (m, 2H). 13C-RMN (100 MHz, CDCI3), δ (ppm): 169,7 (C); 143,1 (C); 142,4 (C); 1289,1 (C); 128,0 (C); 127,6 (2C); 126,9 (C); 124,9 (C); 122,7 (C); 120,1 (C); 114,3 (C); 113,4 (C); 62,2 (C); 56,1 (2C); 26,5 (2C); 23,8 (C). HPLC: Pureza (100%).
Compuesto 8: Síntesis de N-(2-Cloro-10H-9-tia-10-azaantracen-10-il)- 2-dimetilaminoaacetamida. Sólido blanco. Punto de fusión = 189-191 0C. EM (ES): m/z = 334 [M]+, 336 [M+2H]+, 689 [2M+Na]+. 1H-RMN (400 MHz, CDCI3), δ (ppm): 9,17 (s, 1 H); 7,09 (td, 1 H, J= 7,7 Hz, J= 1 ,2 Hz); 7,07 (dd, 1 H, J= 7,7 Hz, J=1 ,2 Hz); 7,03 (dd, 1 H, J= 7,6 Hz, J= 2,3 Hz); 7,01 (d, 1 H, J= 2,3 Hz); 6,93 (td, 1 H, J7,8= 7,7 Hz, J= 1 ,2 Hz); 6,73 (dd, 1 H, J= 7,7 Hz, J= 1 ,2 Hz); 6,63 (d, 1 H, J= 7,6 Hz); 3,29 (s, 2H); 2,49 (s, 6H). 13C-RMN (100 MHz, CDCI3), δ (ppm): 169,2 (C); 142,6 (C); 141 ,8 (C); 128,6 (C); 127,6 (C); 127,2 (C); 126,9 (C); 126,5 (C); 123,9 (C); 122,4 (C); 119,7 (C); 113,9 (C); 113,1 (C); 62,5 (C); 46,7 (2C). HPLC: Pureza (99%).
Compuesto 9: Síntesis de N-(2-Cloro-10H-9-tia-10-azaantracen-10-il)- 2-(pirrolidin-1-il)acetamida. Sólido blanco. Punto de fusión= 184-186 0C. EM (ES): m/z = 360 [M]+, 362 [M+2H]+, 382 [M+Na]+, 741 [2M+Na]+. 1H- RMN (400 MHz, CDCI3), δ (ppm): 9,23 (s, 1 H); 7,09 (td, 1 H, J= 7,7 Hz, J= 1 ,2 Hz); 7,05 (dd, 1 H, J= 7,7 Hz, J=1 ,2 Hz); 7,03 (dd, 1 H, J= 7,6 Hz, J= 2,3 Hz); 7,00 (d, 1 H, J= 2,3 Hz); 6,93 (td, 1 H, J= J=IJ Hz, J= 1 ,2 Hz); 6,72 (dd, 1 H, J= 1,1 Hz, J= 1 ,2 Hz); 6,62 (d, 1 H, J= 7,6 Hz); 3,51 (s, 2H); 2,80 (m, 4H); 1 ,88 (m, 4H). 13C-RMN (100 MHz, CDCI3), δ (ppm): 169,7 (C); 142,5 (C); 141 ,6 (C); 128,5 (C); 127,6 (C); 127,1 (C); 127,0 (C); 126,4 (C); 123,9 (C); 122,2 (C); 119,5 (C); 114,0 (C); 113,2 (C); 58,5 (C); 55,2 (2C); 24,1 (2C). HPLC: Pureza (100%).
Compuesto 10: Síntesis de 10-Amino-10H-9-tia-10-azaantraceno.
Sólido blanco. Punto de fusión = 123-125 0C. EM (ES): m/z = 214 [M]+. 1H- RMN (300 MHz, CDCI3), δ (ppm): 6,7-7,3 (m, 8H); 3,8 (s, 2H). HPLC: Pureza (100%). Compuesto 11 : Síntesis de N-(10H-9-Tia-10-azaantracen-10-il)-2- (piperidin-i-il)acetamida. Sólido blanco. Punto de fusión = 201-203 0C. EM (ES): m/z = 340 [M+H]+, 362 [M+Na]+. 701 [2M+Na]+. 1H-RMN (400 MHz1CDCI3), δ (ppm): 9,25 (s, 1 H); 6,7-7,3 (m, 8H); 3,28 (s, 2H); 2,65 (m, 4H); 1 ,67 (m, 4H); 1 ,56 (m, 2H). 13C-RMN (100 MHz, CDCI3), δ (ppm): 169,2 (COCH3); 143,0 (2C); 127,27 (2C); 127,12 (2C); 123,71 (2C); 119,6 (2C); 112,94 (2C); 61 ,8 (C); 55,7 (2C); 26,2 (2C); 23,5 (C). HPLC: Pureza (96,7%).
Compuesto 12: Síntesis de N-(10H-9-Tia-10-azaantracen-10-il)-2- dimetilaminoaacetamida. Sólido blanco. Punto de fusión = 195-197 0C. EM (ES): m/z = 300 [M+H]+, 301 [M+2H]+, 322 [M+Na]+, 621 [2M+Na]+. 1H- RMN (400 MHz, CDCI3), δ (ppm): 9,17 (s, 1 H); 6,7-7,3 (m, 8H); 3,29 (s, 2H); 2,52 (s, 6H). 13C-RMN (100 MHz, CDCI3), δ (ppm): 169,2 (C); 143,0 (2C); 127,27 (2C); 127,12 (2C); 123,71 (2C); 119,6 (2C); 112,94 (2C); 62,58 (C); 46,66 (2C). HPLC: Pureza (100%).
Compuesto 13: Síntesis de N-(10H-9-Tia-10-azaantracen-10-il)-2- (pirrolidin-i-il)acetamida. Sólido blanco. Punto de fusión = 182-184 0C. EM (ES): m/z = 326 [M+H]+, 348 [M+Na]+, 673 [2M+Na]+. 1H-RMN (400 MHz, CDCI3), δ (ppm): 9,17 (s, 1 H); 6,7-7,3 (m, 8H); 3,29 (s, 2H); 2,82 (m, 4H); 1.88 (m, 4H). 13C-RMN (100 MHz, CDCI3), δ (ppm): 169,7 (C); 142,9 (2C); 127,3 (2C); 127,1 (2C); 123,7 (C); 120,4 (C); 119,5 (2C); 113,1 (2C); 58,6 (C); 55,2 (2C); 24,2 (2C). HPLC: Pureza (99%).
Compuesto 14: Síntesis de N-(10H-9-Tia-10-azaantracen-10- il)acetamida. Sólido blanco. Punto de fusión = 230-232 0C. EM (ES): m/z = 257 [M+H]+. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6), δ (ppm): 10,5 (s, 1 H); 6,7-7,3 (m, 8H); 2,11 (s, 3H). 13C-RMN (100 MHz, DMSO-d6), δ (ppm): 168,3 (C); 142,3 (C); 141 ,8 (C); 127,8 (C); 127,1 (C); 126,8 (C); 126,6 (C); 125,6 (C); 123,5 (C); 120,3 (C); 117,2 (C); 114,7 (C); 113,5 (C); 20,5 (C). HPLC: Pureza (100%).
Compuesto 15: Síntesis de N-(3-Cloro-10H-9-tia-10-azaantracen-10-il)- 3-dimetilaminopropionamida. Sólido blanco. Punto de fusión = 179-181
0C EM (ES): m/z = 348 [M+H]+, 350 [M+2H]+, 717 [2M+Na]+. 1H-RMN (400
MHz, CDCI3), δ (ppm): 10,85 (s, 1 H); 7,07 (td, 1 H, J= 7,7 Hz, J= 1 ,2 Hz);
7,03 (dd, 1 H, J= 7,7 Hz, J=1 ,2 Hz); 7,00 (dd, 1 H, J= 7,6 Hz, J= 2,3 Hz);
6,98 (d, 1 H, J= 2,3 Hz); 6,91 (td, 1 H, J= 7,7 Hz, J= 1 ,2 Hz); 6,72 (dd, 1 H, J= 7,7 Hz, J= 1 ,2 Hz); 6,63 (d, 1 H, J= 7,6 Hz); 2,82 (t, 2H, J= 5,7 Hz); 2,71
(t, 2H, J= 5,7 Hz); 2,43 (s, 6H). 13C-RMN (100 MHz, CDCI3), δ (ppm): 171 ,4
(C); 142,9 (C); 142,0 (C); 128,5 (C); 127,8 (C); 127,2 (2C); 126,5 (C); 123,9
(C); 121 ,9 (C); 119,2 (C); 114,0 (C); 113,2 (C); 54,8 (C); 44,7 (2C); 32,2
(C). HPLC: Pureza (99%)
Compuesto 16: Síntesis de N-(10H-9-Tia-10-azaantracen-10-il)-3- dimetilaminopropionamida. Sólido blanco. Punto de fusión = 176-178 0C.
EM (ES): m/z = 368 [M+H]+, 390 [M+Na]+, 757 [2M+Na]+. 1H-RMN (400
MHz, CDCI3), δ (ppm): 9,17 (s, 1 H); 6,7-7,3 (m, 8H); 2,89 (t, 2H, J= 5,7 Hz); 2,71 (t, 2H, J= 5,7 Hz); 2,55 - 2,73 (m, 8H); 2,31 (s, 3H). 13C-RMN (100
MHz, CDCI3), δ (ppm): 169,2 (C); 143,0 (2C); 127,27 (2C); 127,12 (2C);
123,71 (2C); 119,6 (2C); 112,94 (2C) 54,8 (C); 54,7 (2C); 54,5 (2C); 45,6
(C), 32,2 (C). HPLC: Pureza (98%).
Compuesto 17: Síntesis de N-(2-Cloro-10H-9-tia-10-azaantracen-10-il)- 3-dimetilaminopropionamida. Sólido blanco. Punto de fusión = 187-189 0C. EM (ES): m/z = 403 [M+H]+, 405 [M+2H]+, 428 [M+Na]+ , 829 [2M+Na]+. 1H-RMN (400 MHz, CDCI3), δ (ppm): 9,22 (s, 1 H); 7,09 (td, 1 H, J= 7,6 Hz, J= 1 ,1 Hz); 7,06 (d, 1 H, J= 8,2 Hz); 6,98 (dd, 1 H, J= 7,6 Hz, J= 1 ,1 Hz); 6,95 (dd, 1 H, J= 8,2 Hz, J= 2,3 Hz); 6,90 (td, 1 H, J= 7,6 Hz, J= 1 ,1 Hz); 6,73 (dd, 1 H, J= 7,6 Hz, J= 1 ,1 Hz); 6,71 (d, 1 H, J= 2,3 Hz); 3,65 (t, 2H, J= 5,7 Hz); 2,50 (t, 2H, J= 5,7 Hz); 2,55 - 2,73 (m, 8H); 2,31 (s, 3H, CH3) . 13C- RMN (100 MHz, CDCI3), δ (ppm): 169,5 (C); 144,5 (C); 142,7 (C); 133,5 (C); 127,9 (2C); 127,4 (C); 124,7 (C); 123,7 (C); 120,2 (C); 119,2 (C); 113,6 (C); 113,3 (C); 54,8 (C); 54,7 (2C); 54,5 (2C); 45,6 (C), 32,2 (C). HPLC: Pureza (99%).
Compuesto 18: Síntesis de N-(2-Nitro-10H-9-tia-10-azaantracen-10-il)- 3-dimetilaminopropionamida. Sólido blanco. Punto de fusión = 191- 1930C. EM (ES): m/z = 414 [M+H]+, 436 [M+Na]+, 849 [2M+Na]+ . 1H-RMN (400 MHz, CDCI3), δ (ppm):10,49 (s, 1 H); 7,68 (td, 1 H, J= 7,6 Hz, J= 1 ,1 Hz); 7,61 (d, 1 H, J= 8,2 Hz); 7,42 (dd, 1 H, J= 7,6 Hz, J= 1 ,1 Hz); 7,21 (dd, 1 H, J= 8,2 Hz, J= 2,3 Hz); 7,20 (td, 1 H, J= 7,6 Hz, J= 1 ,1 Hz); 7,16 (dd, 1 H, J= 7,6 Hz, J= 1 ,1 Hz); 6,97 (d, 1 H, J= 2,3 Hz); 3,65 (t, 2H, J= 5,7 Hz); 2,50 (t, 2H, J= 5,7 Hz); 2,55 - 2,73 (m, 8H); 2,31 (s, 3H). 13C-RMN (100 MHz, CDCI3), δ (ppm): 168,4 (C); 144,3 (C); 142,1 (C); 140,5 (C); 127,8 (2C); 126,6 (C); 123,8 (C); 122,9 (C); 117,7 (C); 117,2 (C); 113,7 (C); 113,1 (C); 54,8 (C); 54,7 (2C); 54,5 (2C); 45,6 (C), 32,2 (C). HPLC: Pureza (100%).
Compuesto 19: Síntesis de N-(2-Metoxi-10H-9-tia-10-azaantracen-10- il)-3-dimetilaminopropionamida. Sólido blanco. Punto de fusión = 201- 2030C. EM (ES): m/z = 399 [M+H]+, 421 [M+Na]+, 817 [2M+Na]+. 1H-RMN (400 MHz, CDCI3), δ (ppm): 9,53 (s, 1 H); 7,01 (td, 1 H, J= 7,6 Hz, J= 1 ,1 Hz); 6,87 (d, 1 H, J= 8,2 Hz); 6,86 (dd, 1 H, J= 7,6 Hz, J= 1 ,1 Hz); 6,83 (dd, 1 H, J= 8,2 Hz, J= 2,3 Hz); 6,71 (td, 1 H, J= 7,6 Hz, J= 1 ,1 Hz); 6,62 (dd, 1 H, J= 7,6 Hz, J= 1 ,1 Hz); 6,60 (d, 1 H, J= 2,3 Hz); 3,83 (s, 3H); 3,65 (t, 2H, J= 5,7 Hz); 2,50 (t, 2H, J= 5,7 Hz); 2,55 - 2,73 (m, 8H); 2,31 (s, 3H) . 13C-RMN (100 MHz, CDCI3), δ (ppm): 169,9 (C); 153,1 (C); 145,4 (C); 143,2 (C); 128,9 (2C); 127,8 (C); 125,5 (C); 124,3 (C); 120,9 (C); 120,2 (C); 114,6 (C); 114,3 (C); 55,8 (C); 54,8 (C); 54,7 (2C); 54,5 (2C); 45,6 (C), 32,2 (C). HPLC: Pureza (99%). Compuesto 20: Síntesis de N-(10H-9-Tia-10-azaantracen-10-il)-3- (pirrolidin-i-il)propionamida. Sólido blanco. Punto de fusión = 194- 1960C. EM (ES): m/z = 340 [M+H]+, 362 [M+Na]+, 701 [2M+Na]+. 1H-RMN (400 MHz, CDCI3), δ (ppm): 9,17 (s, 1 H); 6,7-7,3 (m, 8H); 2,89 (t, 2H, J = 5,7 Hz); 2,71 (t, 2H, J= 5,7 Hz); 2,80 (m, 4H); 1 ,88 (m, 4H). 13C-RMN (100 MHz, CDCI3), δ (ppm): 168,4 (C); 144,3 (C); 142,1 (C); 132,2 (C); 127,8 (2C); 126,6 (C); 123,8 (C); 122,9 (C); 117,7 (C); 117,2 (C); 113,7 (C); 113,1 (C); 55,2 (2C); 54,8 (C); 45,6 (C); 24,1 (2C). HPLC: Pureza (97%).
Compuesto 21 : Síntesis de N-(2-Cloro-10H-9-tia-10-azaantracen-10-il)- 3-(pirrolidin-1-il)propionamida. Sólido blanco. Punto de fusión = 185- 1870C. EM (ES): m/z = 375 [M+H]+, 397 [M+Na]+, 771 [2M+Na]+. 1H-RMN (400 MHz, CDCI3), δ (ppm): 9,22 (s, 1 H); 7,09 (td, 1 H, J= 7,6 Hz, J= 1 ,1 Hz); 7,06 (d, 1 H, J= 8,2 Hz); 6,98 (dd, 1 H, J= 7,6 Hz, J= 1 ,1 Hz); 6,95 (dd, 1 H, J= 8,2 Hz, J= 2,3 Hz); 6,90 (td, 1 H, J= 7,6 Hz, J= 1 ,1 Hz); 6,73 (dd, 1 H, J= 7,6 Hz, J= 1 ,1 Hz); 6,71 (d, 1 H, J= 2,3 Hz); 3,65 (t, 2H, J= 5,7 Hz); 2,50 (t, 2H, J= 5,7 Hz); 2,80 (m, 4H); 1 ,88 (m, 4H) . 13C-RMN (100 MHz, CDCI3), δ (ppm): 169,5 (C); 144,5 (C); 142,7 (C); 133,5 (C); 127,9 (2C); 127,4 (C); 124,7 (C); 123,7 (C); 120,2 (C); 119,2 (C); 113,6 (C); 113,3 (C); 54,8 (C); 55,2 (2C); 32,2 (C); 24,1 (2C). HPLC: Pureza (99%).
Compuesto 22: Síntesis de N-(2-Metoxi-10H-9-tia-10-azaantracen-10- il)-3-(pirrolidin-1-il)propionamida. Sólido blanco. Punto de fusión = 179- 1810C. EM (ES): m/z = 370 [M+H]+, 392 [M+Na]+ ,761 [2M+Na]+. 1H-RMN (400 MHz, CDCI3), δ (ppm): 9,53 (s, 1 H); 7,01 (td, 1 H, J= 7,6 Hz, J= 1 ,1 Hz); 6,87 (d, 1 H, J= 8,2 Hz); 6,86 (dd, 1 H, J= 7,6 Hz, J= 1 ,1 Hz); 6,83 (dd, 1 H, J= 8,2 Hz, J= 2,3 Hz); 6,71 (td, 1 H, J= 7,6 Hz, J= 1 ,1 Hz); 6,62 (dd, 1 H, J= 7,6 Hz, J= 1 ,1 Hz); 6,60 (d, 1 H, J= 2,3 Hz); 3,83 (s, 3H); 3,65 (t, 2H, J= 5,7 Hz); 2,50 (t, 2H, J= 5,7 Hz); 2,80 (m, 4H); 1 ,88 (m, 4H). 13C-RMN (100 MHz, CDCI3), δ (ppm): 169,9 (C); 153,1 (C); 145,4 (C); 143,2 (C); 128,9 (2C); 127,8 (C); 125,5 (C); 124,3 (C); 120,9 (C); 120,2 (C); 114,6 (C); 114,3 (C); 55,8 (C); 54,8 (C); 55,2 (2C); 32,2 (C) 24,1 (2C). HPLC: Pureza (99%).
2. ACTIVIDADES BIOLÓGICAS ESTUDIADAS EN LOS COMPUESTOS DE LA INVENCIÓN
2.1 Propiedades neuroprotectoras de los compuestos objeto de Ia invención
Se evaluó el efecto citoprotector de los compuestos en células de neuroblastoma humano, concretamente el potencial neuroprotector de estos compuestos frente al estrés oxidativo producido en dos modelos de estudio diferentes, por una parte con peróxido de hidrógeno como generador exógeno de radicales libres, y por otra con rotenona y oligomicina A, bloqueantes de Ia cadena respiratoria de Ia mitocondria según se describe en J. Neurochem. 1992, 59, 1609-1623 y en Toxicological Sciences 2004, 79, 137-146, respectivamente. El parámetro de viabilidad que se midió en ambos modelos era Ia actividad de Ia enzima lactatodeshidrogenasa (LDH en Io sucesivo), una enzima que se libera al medio extracelular cuando muere Ia célula (J. Pharmacol. Exp. Ther. 2005, 315, 1346-1353).
El método experimental utilizado, siguiendo un procedimiento previamente descrito (Neuropharmacology 2004, 46, 103-114) es el siguiente: células
SH-SY5Y de neuroblastoma humano fueron sembradas y cultivadas en un medio DMEM (Dulbecco's modified Eagle's médium) conteniendo 15 aminoácidos no esenciales y suplementada con un 10% de suero fetal de ternera, glutamina 1 milimolar, 50 unidades por mililitro de penicilina y 50 microgramos por mililitro de estreptomicina, manteniéndolas a 370C en aire humidificado conteniendo 5% de dióxido de carbono. En los ensayos, las células SH-SY5Y fueron subcultivadas en placas de 48 pocilios con una densidad de sembrado de 1x105 células por pocilio, o bien en placas de 96 pocilios con una densidad de sembrado de 2x105 células por pocilio. En los experimentos de citotoxicidad, las células así preparadas fueron tratadas con los compuestos a medir, en DMEM libre de suero.
Para estudiar Ia acción citoprotectora de los diferentes compuestos contra Ia muerte celular inducida por peróxido de hidrógeno 60 micromolar, o una combinación de rotenona con oligomicina A 30 micromolar y 10 micromolar respectivamente, los compuestos fueron añadidos al medio y mantenidos durante 24 horas. Después, los medios fueron reemplazados por medios frescos que aún contenían el compuesto más el agente citotóxico, y fueron así mantenidos por un período adicional de 24 horas. La viabilidad celular fue comprobada midiendo Ia actividad de Ia enzima LDH, como se ha explicado anteriormente, mediante el kit "Cytotoxicity CeII Death" (Roche- Boehringer Mannheim) siguiendo las instrucciones del fabricante de dicho kit. La actividad LDH total fue definida como Ia suma de las actividades LDH intra y extracelular. La actividad LDH liberada por las células al morir fue definida como el porcentaje de Ia actividad LDH extracelular frente a Ia actividad LDH total. Las muestras se analizaron espectrofotométricamente en un lector de placas (Labsystems iEMS Reader MF), empleando el filtro adecuado (490 nm), obteniendo los valores de absorbancia mediante el programa DeltaSOFTIl Versión 3,71 EMS. En todos los ensayos farmacológicos se utilizó un control positivo como comparación y para evaluar Ia bondad del método empleado. En este caso su utilizó trolox, un bien conocido captador de radicales libres, núcleo activo del antioxidante natural vitamina E (New. Engl. J. Med. 2005, 352, 2379-2388); los resultados obtenidos para los compuestos descritos como compuestos 1.1 a 1.22 que se muestran a continuación, vienen expresados en porcentaje de Ia actividad neuroprotectora. 2.1.1 Neuroprotección frente a un estímulo tóxico de peróxido de hidrógeno 60 micromolar, referido a porcentaje de supervivencia celular inducida por cada compuesto, a Ia concentración que se expresa, y que fue Ia que dio lugar a Ia máxima protección en cada caso: • Compuesto 1 : 39.70% a 30 micromolar.
• Compuesto 2: 37.90% a 10 micromolar.
• Compuesto 3: 56.51% a 10 micromolar.
• Compuesto 4: 40.76% a 10 micromolar.
• Compuesto 5: 76.37% a 3 micromolar. • Compuesto 6: 6.30% a 3 micromolar.
• Compuesto 7: 51.96% a 3 micromolar.
• Compuesto 8: 62.69% a 3 micromolar.
• Compuesto 9: 79.91 % a 10 micromolar.
• Compuesto 10: 6.70% a 3 micromolar. • Compuesto 11 : 28.81% a 1 micromolar.
• Compuesto 12: 39.81% a 10 micromolar.
• Compuesto 13: 37.00% a 3 micromolar.
• Compuesto 14: 52.17% a 3 micromolar.
• Compuesto 15: 44.4% a 30 micromolar. • Compuesto 16: 87.69% a 1 micromolar.
• Compuesto 17: 68.60% a 30 micromolar.
• Compuesto 18: 46.50% a 3 micromolar.
• Compuesto 19: 65.81% a 10 micromolar.
• Compuesto 20: 90.07% a 1 micromolar. • Compuesto 21 : 57.24% a 3 micromolar.
• Compuesto 22: 17.80% a 1 micromolar.
• Trolox: 57.7% a 30 micromolar.
2.1.2 Neuroprotección frente a un estímulo tóxico de una combinación de rotenona 30 micromolar y oligomicina A 10 micromolar, referido a porcentaje de supervivencia celular inducida por cada uno de los compuestos que se seleccionaron para esta prueba, a Ia concentración que se expresa, y que fue Ia que dio lugar a Ia máxima protección en cada caso: • Compuesto 9: 58.95% a 3 micromolar.
• Compuesto 15: 52.3% a 30 micromolar.
• Compuesto 18: 42.02% a 0.3 micromolar.
• Compuesto 19: 50.80% a 1 micromolar.
• Compuesto 20: 58.83% a 0.1 micromolar. • Trolox: 52.9% a 3 micromolar.
Estos resultados indican que los compuestos objeto de Ia presente invención son capaces de reducir Ia presencia de especies radicálicas, tanto exógenas como endógenas, con el consiguiente efecto neuroprotector, Io que las convierte en potenciales fármacos para el tratamiento de patologías generadas o favorecidas por estrés oxidativo o presencia de especies radicálicas en general.
2.2 Propiedades de los compuestos objeto de Ia invención como inhibidores de Ia enzima butirilcoliesterasa
La EA, como todas las enfermedades neurodegenerativas es un proceso muy lento, con un tiempo medio de al menos 8 años entre Ia aparición de los primeros síntomas y Ia muerte. Los primeros síntomas aparecen como pérdida de memoria a corto plazo, que llega hasta el no reconocimiento de familiares o el olvido de habilidades normales para el individuo, problemas de lenguaje, alteraciones cognitivas, pérdida de Ia capacidad de aprendizaje y dificultades de orientación, que se aumentan hasta Ia pérdida total de las capacidades cognitivas según avanza Ia enfermedad (Ann. Intern. Med. 2004, 140, 501-509). La causa inmediata de estos fallos cognitivos, al menos en las primeras etapas, es Ia disminución de los niveles de neurotransmisión colinérgica que constituyen Ia comunicación sináptica. Por esto, en las primeras etapas de Ia enfermedad es recomendable el uso de inhibidores de acetilcolinesterasa para disminuir el déficit de acetilcolina. Pero en etapas más avanzadas de Ia enfermedad Ia acetilcolinesterasa comienza a realizar otra función (favorecer Ia agregación de péptido amiloide), con Io que otra enzima, Ia butirilcolinesterasa, realiza Ia función de degradación del neurotransmisor acetilcolina {Nat. Rev. Neurosci. 2003, 4, 131-138). De aquí se deduce Ia importancia que, para el tratamiento de Ia enfermedad a largo plazo, tienen los inhibidores de butirilcolinesterasa, como son los compuestos objeto de Ia presente invención. Esta evaluación se llevó a cabo mediante el llamado método de Ellman (Biochem. Pharmacol. 1961 , 7, 88-90). La solución de ensayo estaba formada por tampón fosfato 0,1 M a pH 8, ácido 5,5'-ditiobisnitrobenzoico 200 μM (DTNB, reactivo de Ellman), Ia butirilcolinesterasa (BuChE) 0,02 unid/mL (de Ia compañía Sigma, obtenida a partir de suero de caballo) y yoduro de butiriltiocolina 400 μM como sustrato de Ia reacción enzimática. Los compuestos ensayados se añadieron a Ia solución de ensayo y se preincubaron con Ia enzima durante 10 minutos a 3O0C. Transcurrido este tiempo, se añadió el sustrato y se midieron los cambios de absorbancia a 412 nm cada 5 minutos por un espectrómetro UVA/IS Perkin Elmer 550 SE. Se compararon las velocidades de reacción y se calcularon los porcentajes de inhibición debidos a Ia presencia de los compuestos que se analizaban. Los valores de CI50 se definieron como las concentraciones de cada compuesto que reducían en un 50% Ia actividad enzimática con respecto a Ia ausencia de inhibidor.
Los resultados de inhibición de BuChE, expresados como Ia concentración que inhibe el 50% de Ia actividad (CI50) para los compuestos de Ia invención, son Io siguientes: • Compuesto 1 : 2.2 micromolar.
• Compuesto 2: >100 micromolar.
• Compuesto 3: 4.3 micromolar.
• Compuesto 4: 7.0 micromolar. • Compuesto 5: >100 micromolar.
• Compuesto 6: 0.5 micromolar.
• Compuesto 7: 0.7 micromolar.
• Compuesto 8: 5.0 micromolar.
• Compuesto 9: 1.0 micromolar. • Compuesto 10: >100 micromolar.
• Compuesto 11 : 0.4 micromolar.
• Compuesto 12: 1.7 micromolar.
• Compuesto 13: 0.8 micromolar.
• Compuesto 14: >100 micromolar. • Compuesto 15: 0.7 micromolar.
• Compuesto 16: 1.3 micromolar.
• Compuesto 17: 0.9 micromolar.
• Compuesto 18: 1.5 micromolar.
• Compuesto 19: 2 micromolar. • Compuesto 20: 1.4 micromolar.
• Compuesto 21 : 3 micromolar.
• Compuesto 22: 0.8 micromolar.
Estos resultados muestran que Ia familia de compuestos objeto de esta patente pueden también ser fármacos útiles para el tratamiento sintomático a largo plazo de Ia EA.
2.3 Medida de Ia capacidad antioxidante de los compuestos: Captación de peróxido de hidrógeno por los compuestos objeto de Ia invención. Con el fin de determinar si los compuestos objetos de Ia invención presentaban capacidad antioxidante, se seleccionaron los tres compuestos que mejor resultado dieron como neuroprotectores de entre los 22 compuestos que se muestran en esta patente, los compuestos 9, 15 y 20. La evaluación se llevó a cabo utilizando una sonda, Ia DCFH-DA (2,7- diclorofluoresceína diacetato), que atraviesa Ia membrana celular y es hidrolizada por esterasas celulares pasando a su forma no fluorescente DCFH2, Ia cual sufre una reacción de oxidación con los radicales de oxígeno pasando a su forma fluorescente DCF (Brain. Research. 2004, 1009, 9-16). La disminución de fluorescencia en presencia de los compuestos objeto de Ia evaluación, añadidos a Ia vez que el tóxico, indicaría un efecto secuestrador de radicales libres.
El protocolo seguido consistió en sembrar las células a una densidad de 2x105 células por pocilio en placas negras de 96 pocilios, y mantenerlas durante 24 horas en el incubador. A continuación, se cargaron las células con 10μM de DCFH-DA, se incubaron durante unos 45 minutos y, seguidamente, se añadió el tóxico rotenona más oligomicina A (30:10 μM), mezcla que induce Ia formación de radicales, más el compuesto a las concentraciones más neuroprotectoras durante 2 horas. Transcurrido este tiempo, se levantaron las células y se midió Ia fluorescencia en un citómetro de flujo (Cytomics FC 500 MPL de Ia firma Beckman Coulter, 2 láseres: azul (488 nm) y rojo (633 nm), 5 PMT para fluorescencias con un rango de 185 a 900 nm).
Los resultados de Ia capacidad antioxidante, expresados como % fluorescencia de Ia combinación rotenona 30 micromolar/oligomicina 10 micromolar, generadora de ROS, para los compuestos de Ia invención, son los siguientes:
• Compuesto 9: 71.5% • Compuesto 15: 79.3% • Compuesto 20: 72.8%
• Trolox: 70.4%
Igual que en el apartado 2.1 , estos resultados son una nueva prueba de Ia capacidad antioxidante y captadora de radicales libres de los compuestos objeto de Ia invención, reforzando su atractivo como potenciales fármacos útiles para el tratamiento de patologías en las que al menos una de las causas sea el estrés oxidativo.
2.4 Actividad de los compuestos objetos de Ia invención como moduladores de Ia concentración de calcio citosólica.
Finalmente, se estudió si el mecanismo neuroprotector de los compuestos objeto de Ia invención podría tener también alguna relación con una disminución de Ia sobrecarga de calcio citosólico. En efecto, es conocido que Ia alteración de Ia homeostasia del calcio puede estar implicada en el desarrollo de diferentes enfermedades neurodegenerativas (J. Neurochem. 1992, 12, 376-389; Brain Res. 1993, 16, 409-415; Exp. Neurol. 1994, 128, 1-12; J. Neurochem. 1997, 68, 265-271 ). Una sobrecarga de calcio neuronal puede activar distintos procesos patológicos como Ia alteración del potencial de membrana mitocondrial o Ia producción de radicales libres que llevarán finalmente a Ia muerte celular (Acta Clin. BeIg. 1999, 54, 302- 305). Por Io tanto, un bloqueo de Ia entrada excesiva de calcio a las células podría estar relacionado con el efecto neuroprotector observado. Para ello se seleccionaron, en base a su interesante perfil neuroprotector, 4 entre los 22 compuestos que se muestran en esta patente, los compuestos 9, 17, 19 y 20. Las células SH-SY5Y se sembraron en placas opacas de 96 pocilios, y se mantuvieron durante 24h en el incubador; seguidamente se incubaron en oscuridad durante 40 min a 37 0C en una solución Krebs-HEPES (compuesto por: NaCI (144mM), KCI(5,9mM), MgCI2(1 ,2mM), CaCI2 (2mM), HEPES (1OmM), glucosa (H mM)) que contenía la sonda fluorescente fluo-4/AM (10 μM), ácido plurónico F-127 (0,02%) y probenecid (1 mM). El ácido plurónico es un detergente de baja toxicidad que se utiliza para impedir Ia formación de micelas y facilitar así Ia carga de las células con el fluo-4/AM, un quelante de iones calcio, el cual emite fluorescencia al unirse a el. El probenecid es un inhibidor del transportador aniónico de Ia membrana plasmática y su uso reduce Ia pérdida de Ia sonda fluorescente.
Una vez finalizada Ia incubación con Ia solución de carga, las células se lavaron con Krebs-HEPES y, posteriormente, se mantuvieron 30 min en oscuridad a temperatura ambiente, para permitir Ia hidrólisis del enlace éster de Ia sonda por las esterasas intracelulares. A continuación se inyectaron los compuestos a las concentraciones deseadas, en los distintos pocilios de Ia placa, tras introducirla en un lector de fluorescencia en placas modelo Fluostar Óptima (BMG Labtechnologies) donde se cuantificó Ia fluorescencia emitida por el Fluo-4/AM midiendo a las longitudes de onda de 485 nm (excitación) y 520 nm (emisión).
En todos los experimentos con los diferentes tratamientos se comprobó el estado del cultivo celular, aplicando un pulso despolarizante (70 mM de KCI) a un pocilio control y como control positivo se utilizó nifedipino, un bloqueante inespecífico de los canales de calcio voltaje-dependientes.
Los resultados del bloqueo de Ia concentración de calcio, expresados como % de fluorescencia para los compuestos de Ia invención, son los siguientes:
• Compuesto 9: 24.3% a 10 micromolar.
• Compuesto 17: 51.5% a 10 micromolar.
• Compuesto 19: 16.6% a 10 micromolar. • Compuesto 20: 23.9% a 10 micromolar.
• Nifedipino: 35.8% a 10 micromolar. Los resultados descritos indican como muy probable un doble mecanismo para Ia acción neuroprotectora que muestran los compuestos objeto de esta invención:
• Como antioxidante mediante captación de radicales libres • Favoreciendo Ia disminución de iones calcio en el citosol por modulación de los canales de calcio voltaje-dependientes.
La actividad neuroprotectora mediante este doble mecanismo hace que estos compuestos resulten muy atractivos por su potencial utilidad para el tratamiento de enfermedades neurodegenerativas.
2.5 Capacidad de penetración en el sistema nervioso central.
Teniendo en cuenta el papel central que juega el cerebro en el organismo, cabe esperar que Ia propia evolución Io haya protegido de forma especial. En efecto, todo el sistema nervioso central, pero en particular el cerebro, aparece como un órgano blindado, un sistema aparte dentro del conjunto del organismo, separado por una membrana de características especiales llamada barrera hematoencefálica (BHE en Io sucesivo) que selecciona el paso de determinadas moléculas en ambos sentidos. Es decir, de nada sirve obtener un producto que muestre una alta actividad in vitro, con un gran potencial para el tratamiento de, por ejemplo, enfermedades neurodegenerativas si in vivo no es capaz de alcanzar su diana terapéutica. Resulta entonces de gran importancia conocer si Ia molécula o familia de moléculas objeto de una investigación del tipo de Ia que se presenta en esta patente son capaces de atravesar Ia BHE antes de alcanzar fases posteriores del desarrollo del potencial fármaco, en orden a introducir nuevas modificaciones en Ia molécula o, incluso, detener Ia línea de investigación si se confirma Ia incapacidad de los productos para penetrar en el sistema nervioso central a través de Ia BHE, con el consiguiente ahorro de unas inversiones cada vez más elevadas. Existen algunos métodos in vitro para evaluar dicha capacidad de penetración, siendo Ia llamada metodología PAMPA (Parallel Artificial Membrane Permeation Assay, descrita en Eur. J. Med. Chem. 2003, 38, 223-232) Ia más empleada debido a Ia máxima precisión y verosimilitud que ofrecen sus resultados. En el caso de los productos objeto de esta invención, se estudió su capacidad de atravesar Ia BHE utilizando dicha metodología PAMPA en Ia forma que se describe a continuación. Los experimentos se realizaron empleando dos microplacas de 96 pocilios en un montaje tipo sandwich. La microplaca superior (Millipore Ref. MAIPS4510) está provista de 96 filtros hidrófobos de PVDF, donde se deposita una disolución de extracto lipídico de cerebro de cerdo (Avanti Polar Lipids) en dodecano. La microplaca inferior posee 96 pocilios con forma de lágrima (Millipore Ref. MAMCS9610).
La microplaca receptora se rellenó con 180 μL por pocilio de una mezcla compuesta por buffer fosfato salino de pH 7.4 (PBS) y EtOH en proporción 70:30. El filtro de Ia placa donadora se cubrió con 4 μL de una disolución del extracto lipídico de cerebro de cerdo en dodecano (20 mg mL"1). A continuación, se añadieron 180 μL de una disolución PBS:EtOH (70:30) de los compuestos a evaluar sobre Ia microplaca donadora, que se situó de forma cuidadosa sobre Ia placa receptora. Después de 280 minutos de incubación a 25 0C Ia placa donadora se separó cuidadosamente y se determinó Ia concentración de los compuestos en Ia placa receptora mediante espectroscopia UV. El método mide Ia permeabilidad, expresando como tal Ia velocidad de paso de una barrera de un grosor dado en millonésimas de centímetro (cm x 10~6) por segundo. Los resultados se expresan como el valor medio más/menos Ia desviación estándar de tres ensayos independientes conteniendo cada uno de ellos cuatro repeticiones de cada compuesto a analizar. Previamente, el método fue validado con Ia evaluación de 15 fármacos comerciales: testosterona, verapamilo, imipramina, desipramina, astemizol, progesterona, promazina, clorpromazina, clonidina, corticosterona, piroxicam, hidrocortisona, cafeína, aldosterona, lomefloxazina, enoxazina y ofloxazina, que ofrecieron valores comprendidos entre 22,9±0,1 (testosterona) y 0,6±0,01
(ofloxazina), coherentes con los valores de permeabilidad descritos para dichos compuestos.
Los resultados obtenidos fueron:
Permeabilidad8 Clasificación13
Compuesto 1 4,9 ± 0,1 SNC + Compuesto 8 15,5 ± 0,1 SNC +
Compuesto 9 9,1 ± 0,3 SCN +
Compuesto 12 18,3 ± 0,6 SCN +
Compuesto 15 7,8 ± 0,2 SCN +
Compuesto 16 14,6 ± 0,3 SCN + Compuesto 17 6,8 ± 0,2 SCN +
Compuesto 18 7,0 ± 0,2 SCN +
Compuesto 19 13,8 ± 0,3 SCN +
Compuesto 20 8,7 ± 0,3 SCN +
Compuesto 21 7,3 ± 0,2 SCN + Compuesto 22 16,4 ± 0,4 SCN + a Permeabilidad experimental, expresada en paso del producto por una membrana de un grosor dado en millonésimas de centímetro (cm x 10~6) por segundo, siguiendo el método descrito en Eur. J. Med. Chem. 2003, 38, 223-232. b SNC+ significa que penetra en el SNC y SNC- significa que no penetra en el SNC.
La conclusión que se extrae de estos resultados es que los productos objeto de Ia presente invención, al ser capaces de atravesar Ia barrera hematoencefálica, son también capaces de alcanzar sus dianas terapéuticas en el cerebro, una condición casi imprescindible para formar parte de fármacos útiles para el tratamiento de enfermedades del sistema nervioso en general y neurodegenerativas en particular, tales como Ia enfermedad de Alzheimer.

Claims

REIVINDICACIONES
1.- Un compuesto de fórmula general (I):
Figure imgf000040_0001
donde:
Het Representa un sistema tricíclico derivado del sistema azaantraceno. Ri representa un grupo seleccionado de Ia lista que comprende alquilo (Ci-Cβ), haloalquilo, arilo, alquilarilo, aminoalquilo o amonioalquilo.
R2, R3 son iguales o distintos y se seleccionan cada uno de forma independiente del grupo que comprende alquilo (C1-C6), alcoxilo, halógeno, haloalquilo, nitro, amino o aminoalquilo o un átomo de hidrógeno, o un isómero, sal farmacéuticamente aceptable y/o solvato del mismo.
2.- Compuesto según Ia reivindicación 1 donde Het representa el sistema 10H-9-tia-10-azaantraceno.
3.- Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1-2 donde Ri es un grupo alquilo CrC6 lineal o ramificado.
A - Compuesto según Ia reivindicación 3 en el que el alquilo está sustituido por al menos un grupo funcional.
5.- Compuesto según Ia reivindicación 4 en el que el grupo funcional es un grupo arilo o un heterociclo.
6.- Compuesto según Ia reivindicación 4 en el que el grupo funcional se selecciona de Ia lista que comprende halógeno, áster, éter, amino sustituido o insustituido o amonio incluyendo tres grupos alquilo.
7.- Compuesto según Ia reivindicación 1 dónde Ri es un derivado del radical 2-aminoetilo.
8.- Compuesto según Ia reivindicación 7 dónde el grupo amino está sustituido por radicales alquilo (Ci-Ce) de cadena abierta o cíclica.
9.- Compuesto según Ia reivindicación 1 en que R2 y R3 son iguales o diferentes y representan un grupo alquilo (C1-C6) sustituido o no sustituido.
10. Compuesto según Ia reivindicación 9 donde R2 o R3 o ambos, son un grupo alquilo (C1-C6) sustituido por al menos un grupo que se selecciona de Ia lista que comprende trifluorometilo, éter, ester, amida, nitro, amina o nitrilo.
11.- Compuesto según Ia reivindicación 1 seleccionado de Ia lista que comprende: • N-(4-Cloro-10/-/-9-tia-10-azaantracen-10-il)-2-(piperidin-1- il)acetamida,
• N-(3-Cloro-10H-9-tia-10-azaantracen-10-il)acetamida,
• N-(3-Cloro-10H-9-tia-10-azaantracen-10-il)-2-(pirrolidin-1 - il)acetamida, • N-(3-Cloro-10H-9-tia-10-azaantracen-10-il)-2- dimetilaminoaacetamida,
• N-(3-Cloro-10H-9-tia-10-azaantracen-10-il)-2-(piperidin-1 - il)acetamida,
• N-(2-Cloro-10H-9-tia-10-azaantracen-10-il)-2-(4-metilpiperazin-1 - il)acetamida, • N-(2-Cloro-10H-9-tia-10-azaantracen-10-il)-2-(piperidin-1 - il)acetamida,
• N-(2-Cloro-10H-9-tia-10-azaantracen-10-il)-2- dimetilaminoaacetamida, • N-(2-Cloro-10/-/-9-tia-10-azaantracen-10-il)-2-(pirrolidin-1- il)acetamida,
• 10-Amino-10H-9-tia-10-azaantraceno,
• N-(10/-/-9-Tia-10-azaantracen-10-il)-2-(piperidin-1-il)acetamida,
• N-(10/-/-9-Tia-10-azaantracen-10-il)-2-dimetilaminoaacetamida, • N-(10H-9-Tia-10-azaantracen-10-il)-2-(pirrolidin-1 -il)acetamida,
• N-(10/-/-9-Tia-10-azaantracen-10-il)acetamida.
• N-(3-Cloro-10H-9-tia-10-azaantracen-10-il)-3- dimetilaminopropionamida,
• N-(10H-9-Tia-10-azaantracen-10-il)-3-dimetilaminopropionamida, • N-(2-Cloro-10H-9-tia-10-azaantracen-10-il)-3- dimetilaminopropionamida,
• N-(2-Nitro-10H-9-tia-10-azaantracen-10-il)-3- dimetilaminopropionamida,
• N-(2-Metoxi-10H-9-tia-10-azaantracen-10-il)-3- dimetilaminopropionamida,
• N-(10H-9-Tia-10-azaantracen-10-il)-3-(pirrolidin-1-il)propionamida,
• N-(2-Cloro-10H-9-tia-10-azaantracen-10-il)-3-(pirrolidin-1 - il)propionamida, o
• N-(2-Metoxi-10H-9-tia-10-azaantracen-10-il)-3-(pirrolidin-1 - il)propionamida.
12.- Composición farmacéutica caracterizada porque comprende un compuesto de fórmula I según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11 , junto con uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables.
13.- Composición según Ia reivindicación 12 caracterizada porque comprende, además, uno o más agentes terapéuticos activos.
14.- Uso de un compuesto de fórmula general (I) para Ia elaboración de un medicamento.
15.- Uso del compuesto según Ia reivindicación 14 para Ia elaboración de un medicamento para Ia prevención y/o tratamiento de trastornos o enfermedades en los que estén implicados procesos oxidativos como etiología de dichos trastornos o enfermedades.
16.- Uso según Ia reivindicación 15 caracterizado porque los trastornos o enfermedades son aquellos en los que está implicado un déficit o disfunción de Ia neurotransmisión colinérgica.
17.- Uso según cualquiera de las reivindicaciones 15 y 16 caracterizado porque el trastorno o enfermedad pertenece al grupo de las enfermedades neurodegenerativas.
18.- Uso según Ia reivindicación 17 caracterizado porque dicha enfermedad neurodegenerativa es Ia enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson o enfermedad de Huntington.
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