JPH089965A - ＤＨＯ−ＤＨａｓｅ等阻害剤耐性株を用いるバクテリアセルロースの製造方法 - Google Patents
ＤＨＯ−ＤＨａｓｅ等阻害剤耐性株を用いるバクテリアセルロースの製造方法Info
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- JPH089965A JPH089965A JP16757394A JP16757394A JPH089965A JP H089965 A JPH089965 A JP H089965A JP 16757394 A JP16757394 A JP 16757394A JP 16757394 A JP16757394 A JP 16757394A JP H089965 A JPH089965 A JP H089965A
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 セルロース生産性酢酸菌に属するＤＨＯ−Ｄ
Ｈａｓｅ等阻害剤耐性株及び該耐性株を培養し、培地中
にセルロース性物質を生成蓄積させ、該物質を回収する
ことから成る該セルロース性物質の製造方法。 【効果】 セルロース性物質を高収率かつ経済的に生産
することができる。
Ｈａｓｅ等阻害剤耐性株及び該耐性株を培養し、培地中
にセルロース性物質を生成蓄積させ、該物質を回収する
ことから成る該セルロース性物質の製造方法。 【効果】 セルロース性物質を高収率かつ経済的に生産
することができる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、アセトバクター属に属
しセルロース性物質を生産する能力を有する微生物（こ
の微生物を以後「セルロース生産性酢酸菌」と称する）
に属するＤＨＯ−ＤＨａｓｅ（ジヒドロキシオロト酸デ
ヒドロゲナーゼ）等阻害剤耐性株及び該株を用いるセル
ロース性物質（バクテリアセルロース：ＢＣ）の製造方
法に関する。
しセルロース性物質を生産する能力を有する微生物（こ
の微生物を以後「セルロース生産性酢酸菌」と称する）
に属するＤＨＯ−ＤＨａｓｅ（ジヒドロキシオロト酸デ
ヒドロゲナーゼ）等阻害剤耐性株及び該株を用いるセル
ロース性物質（バクテリアセルロース：ＢＣ）の製造方
法に関する。
【０００２】
【従来の技術】セルロース性物質は可食性であり食品分
野で利用されるほか水系分散性に優れているので食品、
化粧品又は塗料等の粘度の保持、食品原料生地の強化、
水分の保持、食品安定性向上、低カロリー添加物又は乳
化安定化助剤としての産業上利用価値がある。また、該
セルロース性物質の離解物はミクロフィブリルの構造的
物理的特徴に基づき高分子、特に水系高分子用補強剤と
して各種の産業用用途がある。このようなセルロース性
離解物を紙状または固型状に固化した物質は高い引張弾
性率を示すので、ミクロフィブリルの構造的特徴に基づ
くすぐれた機械特性が期待され、各種産業用素材として
の応用がある。
野で利用されるほか水系分散性に優れているので食品、
化粧品又は塗料等の粘度の保持、食品原料生地の強化、
水分の保持、食品安定性向上、低カロリー添加物又は乳
化安定化助剤としての産業上利用価値がある。また、該
セルロース性物質の離解物はミクロフィブリルの構造的
物理的特徴に基づき高分子、特に水系高分子用補強剤と
して各種の産業用用途がある。このようなセルロース性
離解物を紙状または固型状に固化した物質は高い引張弾
性率を示すので、ミクロフィブリルの構造的特徴に基づ
くすぐれた機械特性が期待され、各種産業用素材として
の応用がある。
【０００３】従来より、アセトバクター属に属する微生
物を培養して、セルロースを生産する方法は知られてい
る。例えば、特開昭６２−２６５９９０号公報、特開昭
６１−２２１２０１号公報等に、その記載がある。セル
ロース生産性酢酸菌の培養を行なう際に適当とされてい
る栄養培地としては、炭素源、ペプトン、酵母エキス、
燐酸ナトリウム及びクエン酸からなる Schramm／Hestri
n 培地（Schramm ら、J. General Biology, 11, pp.123
〜129, 1954 ）が知られている。しかしながら、上記栄
養培地で振盪もしくは通気攪拌培養を行なった場合、得
られるセルロース生産量は低く、生成速度も必ずしも満
足のいくものではなかった。また、上記栄養培地の他
に、コーンスチープリカー（ＣＳＬ）や麦芽エキス等を
加えた培地が知られているが、これら天然栄養素（ペプ
トン、酵母エキス、ＣＳＬ、麦芽エキスなど）に含まれ
る特定成分がセルロース生成促進に関与していることは
知られていない。培地中の特定栄養素によるセルロース
生成促進因子として、現在知られているものにはイノシ
トール、フィチン酸及びピロロキノリンキノン（ＰＱ
Ｑ）（特公平５−１７１８号公報；高井光男，紙パ技協
誌，第４２巻，第３号，第２３７〜２４４頁）等がある
が、セルロース生成量はまだ不十分であり、またこれら
の振盪もしくは通気攪拌培養における効果も明確ではな
かった。また、本出願人は、カルボン酸又はその塩（特
願平５−１９１４６７号）、インベルターゼ（特願平５
−３３１４９１号）及びメチオニン（特願平５−３３５
７６４号）を培地中に添加することによって、セルロー
ス性物質の生産性が向上することを見い出している。
物を培養して、セルロースを生産する方法は知られてい
る。例えば、特開昭６２−２６５９９０号公報、特開昭
６１−２２１２０１号公報等に、その記載がある。セル
ロース生産性酢酸菌の培養を行なう際に適当とされてい
る栄養培地としては、炭素源、ペプトン、酵母エキス、
燐酸ナトリウム及びクエン酸からなる Schramm／Hestri
n 培地（Schramm ら、J. General Biology, 11, pp.123
〜129, 1954 ）が知られている。しかしながら、上記栄
養培地で振盪もしくは通気攪拌培養を行なった場合、得
られるセルロース生産量は低く、生成速度も必ずしも満
足のいくものではなかった。また、上記栄養培地の他
に、コーンスチープリカー（ＣＳＬ）や麦芽エキス等を
加えた培地が知られているが、これら天然栄養素（ペプ
トン、酵母エキス、ＣＳＬ、麦芽エキスなど）に含まれ
る特定成分がセルロース生成促進に関与していることは
知られていない。培地中の特定栄養素によるセルロース
生成促進因子として、現在知られているものにはイノシ
トール、フィチン酸及びピロロキノリンキノン（ＰＱ
Ｑ）（特公平５−１７１８号公報；高井光男，紙パ技協
誌，第４２巻，第３号，第２３７〜２４４頁）等がある
が、セルロース生成量はまだ不十分であり、またこれら
の振盪もしくは通気攪拌培養における効果も明確ではな
かった。また、本出願人は、カルボン酸又はその塩（特
願平５−１９１４６７号）、インベルターゼ（特願平５
−３３１４９１号）及びメチオニン（特願平５−３３５
７６４号）を培地中に添加することによって、セルロー
ス性物質の生産性が向上することを見い出している。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、セル
ロース生産性酢酸菌を用いて、経済的かつ高収率でセル
ロース性物質を生産させる新たな方法を提供することに
ある。
ロース生産性酢酸菌を用いて、経済的かつ高収率でセル
ロース性物質を生産させる新たな方法を提供することに
ある。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記の目
的を達成するために種々の研究を行なった。特に、ＢＣ
生合成系を強化する為に、ＵＤＰ−Ｇの前駆体であるＵ
ＴＰの生合成系の強化を検討した。ジニトロフェノール
（ＤＮＰ）は図１に示すように、ジヒドロキシオロト酸
からオロト酸への反応を触媒するＤＨＯ−ＤＨａｓｅを
阻害することが知られている（JANE-JANE CHEN, et a
l., Arch. Biochem. Biophys., 1976)。
的を達成するために種々の研究を行なった。特に、ＢＣ
生合成系を強化する為に、ＵＤＰ−Ｇの前駆体であるＵ
ＴＰの生合成系の強化を検討した。ジニトロフェノール
（ＤＮＰ）は図１に示すように、ジヒドロキシオロト酸
からオロト酸への反応を触媒するＤＨＯ−ＤＨａｓｅを
阻害することが知られている（JANE-JANE CHEN, et a
l., Arch. Biochem. Biophys., 1976)。
【０００６】従って、ＤＮＰのような、ＤＨＯ−ＤＨａ
ｓｅ等のオロチジル酸生合成に関与する酵素（以下、単
に「ＤＨＯ−ＤＨａｓｅ等」という。）に対する阻害剤
に耐性を有する変異株ではカルバモイリリン酸からオロ
チジル酸に至る生合成系が強化され、その結果、Ｇｌｎ
＋２ＡＴＰ＋ＨＣＯ3 - からのＵＴＰ生合成系が強化さ
れている可能性がある訳である。驚くべきことに、各種
実験の結果、本発明者は、ＤＮＰ等のＤＨＯ−ＤＨａｓ
ｅ等阻害剤に耐性を有するセルロース生産性酢酸菌の変
異株が大変優れたセルロース性物質の生産性を示すこと
を見出した。即ち、本発明は、セルロース生産性酢酸菌
に属するＤＨＯ−ＤＨａｓｅ等阻害剤耐性株、該耐性株
を培養し、培地中にセルロース、セルロース性物質を生
成蓄積せしめ該物質を採取することから成るセルロース
性物質の製造方法及び該製造方法により得ることのでき
るセルロース性物質を提供する。
ｓｅ等のオロチジル酸生合成に関与する酵素（以下、単
に「ＤＨＯ−ＤＨａｓｅ等」という。）に対する阻害剤
に耐性を有する変異株ではカルバモイリリン酸からオロ
チジル酸に至る生合成系が強化され、その結果、Ｇｌｎ
＋２ＡＴＰ＋ＨＣＯ3 - からのＵＴＰ生合成系が強化さ
れている可能性がある訳である。驚くべきことに、各種
実験の結果、本発明者は、ＤＮＰ等のＤＨＯ−ＤＨａｓ
ｅ等阻害剤に耐性を有するセルロース生産性酢酸菌の変
異株が大変優れたセルロース性物質の生産性を示すこと
を見出した。即ち、本発明は、セルロース生産性酢酸菌
に属するＤＨＯ−ＤＨａｓｅ等阻害剤耐性株、該耐性株
を培養し、培地中にセルロース、セルロース性物質を生
成蓄積せしめ該物質を採取することから成るセルロース
性物質の製造方法及び該製造方法により得ることのでき
るセルロース性物質を提供する。
【０００７】本発明において使用されるＤＨＯ−ＤＨａ
ｓｅ等阻害剤耐性株は、セルロース生産性酢酸菌、例え
ば、ＢＰＲ２００１に代表されるアセトバクター・キシ
リナム・サブスピーシーズ・シュクロファーメンタンス
（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒｘｙｌｉｎｕｍ ｓｕｂｓ
ｐ．ｓｕｃｒｏｆｅｒｍｅｎｔａｎｓ）、アセトバクタ
ー・キシリナム（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｘｙｌｉｎ
ｕｍ）ＡＴＣＣ２３７６８、アセトバクター・キシリナ
ムＡＴＣＣ２３７６９、アセトバクターパスツリアヌス
（Ａ．ｐａｓｔｅｕｒｉａｎｕｓ）ＡＴＣＣ１０２４
５、アセトバクターキシリナムＡＴＣＣ１４８５１、ア
セトバクターキシリナムＡＴＣＣ１１１４２及びアセト
バクター・キシリナムＡＴＣＣ１０８２１等、並びにそ
れらの菌株より各種突然変異処理及び遺伝子組み換え技
術などによって誘導・育種して得られた菌株等にＮＴＧ
（ニトロソグアニジン）を用いて公知の方法によって化
学的変異処理することにより創製することができる。
ｓｅ等阻害剤耐性株は、セルロース生産性酢酸菌、例え
ば、ＢＰＲ２００１に代表されるアセトバクター・キシ
リナム・サブスピーシーズ・シュクロファーメンタンス
（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒｘｙｌｉｎｕｍ ｓｕｂｓ
ｐ．ｓｕｃｒｏｆｅｒｍｅｎｔａｎｓ）、アセトバクタ
ー・キシリナム（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｘｙｌｉｎ
ｕｍ）ＡＴＣＣ２３７６８、アセトバクター・キシリナ
ムＡＴＣＣ２３７６９、アセトバクターパスツリアヌス
（Ａ．ｐａｓｔｅｕｒｉａｎｕｓ）ＡＴＣＣ１０２４
５、アセトバクターキシリナムＡＴＣＣ１４８５１、ア
セトバクターキシリナムＡＴＣＣ１１１４２及びアセト
バクター・キシリナムＡＴＣＣ１０８２１等、並びにそ
れらの菌株より各種突然変異処理及び遺伝子組み換え技
術などによって誘導・育種して得られた菌株等にＮＴＧ
（ニトロソグアニジン）を用いて公知の方法によって化
学的変異処理することにより創製することができる。
【０００８】この中でも、ＢＰＲ２００１株と命名され
た株は、形態は桿菌、グラム染色性は陰性、胞子形成能
は陰性、酸素に対する態度は好気性、カタラーゼ反応陽
性、オキシダーゼ反応陰性、エタノールからの酢酸生成
は陽性、酢酸塩の酸化は陽性、乳酸塩の酸化は陽性とい
う、菌類学的性を有しており、本発明のＤＨＯ−ＤＨａ
ｓｅ等阻害剤耐性株の創製に好適である。尚、ＢＰＲ２
００１株は、平成５年２月２４日に通商産業省工業技術
院生命工学工業技術研究所特許微生物寄託センターに寄
託され（受託番号ＦＥＲＭ Ｐ−１３４６６）、その後
１９９４年２月７日付で特許手続上の寄託の国際的承認
に関するブダペスト条約に基づく寄託（受託番号ＦＥＲ
Ｍ ＢＰ−４５４５）に移管されている。
た株は、形態は桿菌、グラム染色性は陰性、胞子形成能
は陰性、酸素に対する態度は好気性、カタラーゼ反応陽
性、オキシダーゼ反応陰性、エタノールからの酢酸生成
は陽性、酢酸塩の酸化は陽性、乳酸塩の酸化は陽性とい
う、菌類学的性を有しており、本発明のＤＨＯ−ＤＨａ
ｓｅ等阻害剤耐性株の創製に好適である。尚、ＢＰＲ２
００１株は、平成５年２月２４日に通商産業省工業技術
院生命工学工業技術研究所特許微生物寄託センターに寄
託され（受託番号ＦＥＲＭ Ｐ−１３４６６）、その後
１９９４年２月７日付で特許手続上の寄託の国際的承認
に関するブダペスト条約に基づく寄託（受託番号ＦＥＲ
Ｍ ＢＰ−４５４５）に移管されている。
【０００９】ＮＴＧ等の変異剤を用いての化学的変異処
理方法には、例えば、Bio Factors,Vol. 1, p.297−302
(1988), J. Gen. Microbiol, Vol. 135, p.2917−292
9 (1989) 及び FEMS Microbiol Lett., Vol. 71, p.33
7−343 (1990)等に記載されているものがある。従っ
て、当業者であればこれら公知の方法に基づき本発明の
ＤＨＯ−ＤＨａｓｅ等阻害剤耐性株を得ることができ
る。本発明のＤＨＯ−ＤＨａｓｅ等阻害剤耐性株は他の
変異方法、例えば放射線照射等によっても得ることがで
きる。本発明の一例であるＤＮＰ耐性株であるＢＰＲ３
００１Ｎ株は１９９４年６月１０日付で通商産業省工業
技術院生命工学工業技術研究所特許微生物寄託センター
に寄託され、受託番号ＦＥＲＭ Ｐ−１４３６１を付さ
れている。尚、本発明の範囲が寄託されたこの菌株に限
定されないことは言うまでもなく、該株は本発明の一具
体例にすぎないものである。セルロース生産性酢酸菌に
属し、オロチジル酸生合成に関与する酵素に対する阻害
剤に実質的に耐性な株であれば、本発明の「セルロース
生産性酢酸菌に属するＤＨＯ−ＤＨａｓｅ等阻害剤耐性
株」に包合されるものである。その他の例として、例え
ば同様にＢＰＲ２００１株から得られたＢＰＲ３００１
Ｌ株及びＢＰＲ３００１Ｍ株がある。
理方法には、例えば、Bio Factors,Vol. 1, p.297−302
(1988), J. Gen. Microbiol, Vol. 135, p.2917−292
9 (1989) 及び FEMS Microbiol Lett., Vol. 71, p.33
7−343 (1990)等に記載されているものがある。従っ
て、当業者であればこれら公知の方法に基づき本発明の
ＤＨＯ−ＤＨａｓｅ等阻害剤耐性株を得ることができ
る。本発明のＤＨＯ−ＤＨａｓｅ等阻害剤耐性株は他の
変異方法、例えば放射線照射等によっても得ることがで
きる。本発明の一例であるＤＮＰ耐性株であるＢＰＲ３
００１Ｎ株は１９９４年６月１０日付で通商産業省工業
技術院生命工学工業技術研究所特許微生物寄託センター
に寄託され、受託番号ＦＥＲＭ Ｐ−１４３６１を付さ
れている。尚、本発明の範囲が寄託されたこの菌株に限
定されないことは言うまでもなく、該株は本発明の一具
体例にすぎないものである。セルロース生産性酢酸菌に
属し、オロチジル酸生合成に関与する酵素に対する阻害
剤に実質的に耐性な株であれば、本発明の「セルロース
生産性酢酸菌に属するＤＨＯ−ＤＨａｓｅ等阻害剤耐性
株」に包合されるものである。その他の例として、例え
ば同様にＢＰＲ２００１株から得られたＢＰＲ３００１
Ｌ株及びＢＰＲ３００１Ｍ株がある。
【００１０】本発明の製造方法に用いる培地の組成物
中、炭素源としてはシュクロース、グルコース、フラク
トース、マンニトール、ソルビトール、ガラクトース、
マルトース、エリスリット、グリセリン、エチレングリ
コール、エタノール等を単独或いは併用して使用するこ
とができる。更にはこれらのものを含有する澱粉水解
物、シトラスモラセス、ビートモラセス、ビート搾汁、
サトウキビ搾汁、柑橘類を始めとする果汁等をシューク
ロスに加えて使用することもできる。 また、窒素源と
しては硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、リン酸ア
ンモニウム等のアンモニウム塩、硝酸塩、尿素等有機或
いは無機の窒素源を使用することができ、或いはＢａｃ
ｔ−Ｐｅｐｔｏｎｅ、Ｂａｃｔ−Ｓｏｙｔｏｎｅ、Ｙｅ
ａｓｔ−Ｅｘｔｒａｃｔ、豆濃などの含窒素天然栄養源
を使用してもよい。有機微量栄養素としてアミノ酸、ビ
タミン、脂肪酸、核酸、２，７，９−トリカルボキシ−
１Ｈピロロ〔２，３−５〕−キノリン−４，５−ジオン
を添加してもよい。生育にアミノ酸等を要求する栄養要
求性変異株を使用する場合には、要求される栄養素を補
添することが必要である。無機塩類としてはリン酸塩、
マグネシウム塩、カルシウム塩、鉄塩、マンガン塩、コ
バルト塩、モリブデン酸塩、赤血塩、キレート金属類等
が使用される。
中、炭素源としてはシュクロース、グルコース、フラク
トース、マンニトール、ソルビトール、ガラクトース、
マルトース、エリスリット、グリセリン、エチレングリ
コール、エタノール等を単独或いは併用して使用するこ
とができる。更にはこれらのものを含有する澱粉水解
物、シトラスモラセス、ビートモラセス、ビート搾汁、
サトウキビ搾汁、柑橘類を始めとする果汁等をシューク
ロスに加えて使用することもできる。 また、窒素源と
しては硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、リン酸ア
ンモニウム等のアンモニウム塩、硝酸塩、尿素等有機或
いは無機の窒素源を使用することができ、或いはＢａｃ
ｔ−Ｐｅｐｔｏｎｅ、Ｂａｃｔ−Ｓｏｙｔｏｎｅ、Ｙｅ
ａｓｔ−Ｅｘｔｒａｃｔ、豆濃などの含窒素天然栄養源
を使用してもよい。有機微量栄養素としてアミノ酸、ビ
タミン、脂肪酸、核酸、２，７，９−トリカルボキシ−
１Ｈピロロ〔２，３−５〕−キノリン−４，５−ジオン
を添加してもよい。生育にアミノ酸等を要求する栄養要
求性変異株を使用する場合には、要求される栄養素を補
添することが必要である。無機塩類としてはリン酸塩、
マグネシウム塩、カルシウム塩、鉄塩、マンガン塩、コ
バルト塩、モリブデン酸塩、赤血塩、キレート金属類等
が使用される。
【００１１】培養のｐＨは３ないし７に、好ましくは５
付近に制御する。培養温度は１０〜４０℃、好ましくは
２５〜３５℃の範囲で行う。培養槽に供給する酸素濃度
は１〜１００％、望ましくは２１〜８０％であれば良
い。これら培地中の各成分の組成割合及び培地に対する
菌体の接種等は培養方法に応じて当業者が適宜選択し得
るものである。本発明の製造方法に於いてＤＨＯ−ＤＨ
ａｓｅ等阻害剤耐性株を使用することにより、従来の方
法と比較してセルロース性物質の収率が向上することが
判明した。本発明方法では、培養方法に制限を受けず、
静置、振盪もしくは通気攪拌培養のいずれでもよい。振
盪もしくは通気攪拌下での培養であってもセルロース生
産性に影響を及ぼさないことも本発明方法の特徴の１つ
である。また、いわゆる回分発酵法、フィード回分発酵
法、反復回分発酵法及び連続発酵法のいずれも使用する
ことができる。更に攪拌手段としては従来公知の手段、
例えばインペラー、エアーリフト発酵槽、発酵ブロスの
ポンプ駆動循環、及びこれら手段の組合せ等から任意に
選択することができる。
付近に制御する。培養温度は１０〜４０℃、好ましくは
２５〜３５℃の範囲で行う。培養槽に供給する酸素濃度
は１〜１００％、望ましくは２１〜８０％であれば良
い。これら培地中の各成分の組成割合及び培地に対する
菌体の接種等は培養方法に応じて当業者が適宜選択し得
るものである。本発明の製造方法に於いてＤＨＯ−ＤＨ
ａｓｅ等阻害剤耐性株を使用することにより、従来の方
法と比較してセルロース性物質の収率が向上することが
判明した。本発明方法では、培養方法に制限を受けず、
静置、振盪もしくは通気攪拌培養のいずれでもよい。振
盪もしくは通気攪拌下での培養であってもセルロース生
産性に影響を及ぼさないことも本発明方法の特徴の１つ
である。また、いわゆる回分発酵法、フィード回分発酵
法、反復回分発酵法及び連続発酵法のいずれも使用する
ことができる。更に攪拌手段としては従来公知の手段、
例えばインペラー、エアーリフト発酵槽、発酵ブロスの
ポンプ駆動循環、及びこれら手段の組合せ等から任意に
選択することができる。
【００１２】本発明の方法によって生成されるセルロー
ス性物質はそのまま回収してもよく、さらに本物質中に
含まれる菌体を始めとするセルロース性物質以外の物質
を取り除く処理をほどこしてもよい。不純物を取り除く
ためには水洗、加圧脱水、希酸洗浄、アルカリ洗浄トル
エン及び酢酸エチルなどの極性有機溶媒による処理、次
亜塩素酸ソーダ及び過酸化水素などの漂白剤による処
理、リゾチームなどの菌体溶解酵素による処理、ラウリ
ル硫酸ソーダ、デオキシコール酸などの界面活性剤によ
る処理、常温から２００℃の範囲の加熱洗浄などを単独
及び併用してほどこすことによりセルロース性物質から
不純物を除去することができる。このようにして得られ
た本発明でいうセルロース性物質とは、セルロース及
び、セルロースを主鎖としたヘテロ多糖を含むもの及び
β−１，３、β−１，２等のグルカンを含むものであ
る。ヘテロ多糖の場合のセルロース以外の構成成分はマ
ンノース、フラクトース、ガラクトース、キシロース、
アラビノース、ラムノース、グルクロン酸等の六炭糖、
五炭糖及び有機酸等である。なおこれ等の多糖が単一物
質である場合もあるし２種以上の多糖が水素結合等によ
り混在してもよい。
ス性物質はそのまま回収してもよく、さらに本物質中に
含まれる菌体を始めとするセルロース性物質以外の物質
を取り除く処理をほどこしてもよい。不純物を取り除く
ためには水洗、加圧脱水、希酸洗浄、アルカリ洗浄トル
エン及び酢酸エチルなどの極性有機溶媒による処理、次
亜塩素酸ソーダ及び過酸化水素などの漂白剤による処
理、リゾチームなどの菌体溶解酵素による処理、ラウリ
ル硫酸ソーダ、デオキシコール酸などの界面活性剤によ
る処理、常温から２００℃の範囲の加熱洗浄などを単独
及び併用してほどこすことによりセルロース性物質から
不純物を除去することができる。このようにして得られ
た本発明でいうセルロース性物質とは、セルロース及
び、セルロースを主鎖としたヘテロ多糖を含むもの及び
β−１，３、β−１，２等のグルカンを含むものであ
る。ヘテロ多糖の場合のセルロース以外の構成成分はマ
ンノース、フラクトース、ガラクトース、キシロース、
アラビノース、ラムノース、グルクロン酸等の六炭糖、
五炭糖及び有機酸等である。なおこれ等の多糖が単一物
質である場合もあるし２種以上の多糖が水素結合等によ
り混在してもよい。
【００１３】
【実施例】以下の実施例により、本発明をさらに詳細に
説明する。実施例１ 以下に記載する方法で、ＢＰＲ２００１株を用いて本発
明のＤＨＯ−ＤＨａｓｅ等阻害剤耐性株を創製した。ＢＰＲ２００１株の変異処理 菌体をＣＳＬ−Ｆｒｕ培地(1) で２８℃、３時間培養
し、菌体を増した。この前培養液を集菌後、１０mM燐酸
緩衝液（ｐＨ６．０）で洗浄し、１０μｇNTG/ml（１０
mM燐酸緩衝液）中で３０℃、３０分間で変異処理した。
変異処理した菌体を集菌し、前記のように洗浄し、次に
ＣＳＬ−Ｆｒｕ培地で２８℃、一夜培養し変異を固定化
した。この結果、生存率約０．２４％で変異株を得た。ＤＨＯ−ＤＨａｓｅ等阻害剤耐性株の取得 上記で変異処理したＢＰＲ２００１株（約４０，０００
コロニー）を最小培地(2) １リットル当たり０．５mmol
のＤＮＰを含むプレートに塗抹した。（約３，０００コ
ロニー／プレート） ２８℃、７日間培養し出現したコロニー６７株のうち、
明らかに生育の悪いもの（コロニーの小さいもの）、Ｂ
Ｃの生産が低いもの（副生多糖を多量に生産しコロニー
が透明なもの）を除き、３４株を得た。
説明する。実施例１ 以下に記載する方法で、ＢＰＲ２００１株を用いて本発
明のＤＨＯ−ＤＨａｓｅ等阻害剤耐性株を創製した。ＢＰＲ２００１株の変異処理 菌体をＣＳＬ−Ｆｒｕ培地(1) で２８℃、３時間培養
し、菌体を増した。この前培養液を集菌後、１０mM燐酸
緩衝液（ｐＨ６．０）で洗浄し、１０μｇNTG/ml（１０
mM燐酸緩衝液）中で３０℃、３０分間で変異処理した。
変異処理した菌体を集菌し、前記のように洗浄し、次に
ＣＳＬ−Ｆｒｕ培地で２８℃、一夜培養し変異を固定化
した。この結果、生存率約０．２４％で変異株を得た。ＤＨＯ−ＤＨａｓｅ等阻害剤耐性株の取得 上記で変異処理したＢＰＲ２００１株（約４０，０００
コロニー）を最小培地(2) １リットル当たり０．５mmol
のＤＮＰを含むプレートに塗抹した。（約３，０００コ
ロニー／プレート） ２８℃、７日間培養し出現したコロニー６７株のうち、
明らかに生育の悪いもの（コロニーの小さいもの）、Ｂ
Ｃの生産が低いもの（副生多糖を多量に生産しコロニー
が透明なもの）を除き、３４株を得た。
【００１４】実施例２ 実施例１で得られた３４株につき、以下の方法で培養を
行ない、ＢＣ蓄積量及び対消費糖収率を求めた。前培養
として、５０mlＣＳＬ−Ｆｒｕ培地の入った２５０ml容
ルーフラスコに菌株を植菌し、２８℃、３日間静置培養
した。次に、ルーフラスコを良く振り菌膜から菌体を剥
し、この菌液を７５mlＣＳＬ−Ｆｒｕ培地の入った３０
０ml容三角フラスコ（バッフル付き）に７．５ml植菌し
た。２８℃、４日間、１５０rpm で振盪することによっ
て本培養した。この結果、以下に示すように、これらの
ＤＮＰ耐性株がＢＰＲ２００１株に較べて優れたＢＣ生
産性を示すことが判った。
行ない、ＢＣ蓄積量及び対消費糖収率を求めた。前培養
として、５０mlＣＳＬ−Ｆｒｕ培地の入った２５０ml容
ルーフラスコに菌株を植菌し、２８℃、３日間静置培養
した。次に、ルーフラスコを良く振り菌膜から菌体を剥
し、この菌液を７５mlＣＳＬ−Ｆｒｕ培地の入った３０
０ml容三角フラスコ（バッフル付き）に７．５ml植菌し
た。２８℃、４日間、１５０rpm で振盪することによっ
て本培養した。この結果、以下に示すように、これらの
ＤＮＰ耐性株がＢＰＲ２００１株に較べて優れたＢＣ生
産性を示すことが判った。
【００１５】
【表１】
【００１６】
【表２】
【００１７】
【表３】 ビタミン混合物 化合物 ｍｇ／Ｌ イノシトール ２００ ナイアシン ４０ ピリドキシンＨＣｌ ４０ チアミンＨＣｌ ４０ パントテン酸カルシウム ２０ リボフラビン ２０ ｐ−アミノ安息香酸 ２０ 葉 酸 ０．２ ビオチン ０．２
【００１８】
【表４】 上記の無機培地１００mlに当たり２．０ｇの寒天を加え
た物をプレートとする。
た物をプレートとする。
【００１９】尚、上の表２中、ＢＣ蓄積量（ｇ／ｌ）
は、培養終了後、培養液中の固形物を集積し、水洗して
培地成分を除去した後、ＩＮＮａＯＨ水溶液中で８０
℃、２０分間処理して菌体を除去した。さらに、洗浄液
が中性付近になるまで生成セルロースを水洗した後、８
０℃で１２時間真空乾燥して乾燥重量を測定することで
求めた。また収率（％）は以下のようにして求めた。 対消費糖収率（％）の計算 対消費糖収率は、対消費糖収率として以下のように計算
した。
は、培養終了後、培養液中の固形物を集積し、水洗して
培地成分を除去した後、ＩＮＮａＯＨ水溶液中で８０
℃、２０分間処理して菌体を除去した。さらに、洗浄液
が中性付近になるまで生成セルロースを水洗した後、８
０℃で１２時間真空乾燥して乾燥重量を測定することで
求めた。また収率（％）は以下のようにして求めた。 対消費糖収率（％）の計算 対消費糖収率は、対消費糖収率として以下のように計算
した。
【数１】ＹBC＝ＢＣ／（ＲＣMF−ＲＣBF）＊１００ ＹBC ：対消費糖収率（％） ＢＣ ：ＢＣ蓄積量（ｇ／ｌ） ＲＣMF：培地の糖濃度（ｇ／ｌ） ＲＣBF：培養後の培地の糖濃度（ｇ／ｌ）
【００２０】
【発明の効果】本発明方法によるセルロース性物質の生
産において、セルロース生産性酢酸菌のＤＨＯ−ＤＨａ
ｓｅ等阻害剤耐性株を用いることによって、セルロース
性物質の生産性が従来法と比べて著しく向上する。この
ことは、本発明方法がセルロース性物質を効率よくかつ
安価に製造できることを示している。
産において、セルロース生産性酢酸菌のＤＨＯ−ＤＨａ
ｓｅ等阻害剤耐性株を用いることによって、セルロース
性物質の生産性が従来法と比べて著しく向上する。この
ことは、本発明方法がセルロース性物質を効率よくかつ
安価に製造できることを示している。
【図１】核酸（ピリミジン）合成経路を示す。
フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 (Ｃ１２Ｐ 19/04 Ｃ１２Ｒ 1:02）
Claims (4)
- 【請求項１】 セルロース生産性酢酸菌に属するＤＨＯ
−ＤＨａｓｅ等阻害剤耐性株。 - 【請求項２】 セルロース生産性酢酸菌に属するＤＮＰ
耐性株。 - 【請求項３】 請求項１又は２に記載の耐性株を培養
し、培地中にセルロース性物質を生成蓄積させ、該物質
を回収することから成る該セルロース性物質の製造方
法。 - 【請求項４】 請求項３の方法によって得ることのでき
るセルロース性物質。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP16757394A JPH089965A (ja) | 1994-06-28 | 1994-06-28 | ＤＨＯ−ＤＨａｓｅ等阻害剤耐性株を用いるバクテリアセルロースの製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP16757394A JPH089965A (ja) | 1994-06-28 | 1994-06-28 | ＤＨＯ−ＤＨａｓｅ等阻害剤耐性株を用いるバクテリアセルロースの製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH089965A true JPH089965A (ja) | 1996-01-16 |
Family
ID=15852252
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP16757394A Pending JPH089965A (ja) | 1994-06-28 | 1994-06-28 | ＤＨＯ−ＤＨａｓｅ等阻害剤耐性株を用いるバクテリアセルロースの製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH089965A (ja) |
-
1994
- 1994-06-28 JP JP16757394A patent/JPH089965A/ja active Pending
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