JPH0881438A - 新規物質ｔｍｃ−１及びその製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 一般式〔Ｉ〕 【化１】 （式中、Ｒは 【化２】 を表す。）で示される新規物質ＴＭＣ−１。 【効果】 この化合物はヒト腫瘍細胞の増殖を抑制し、
抗腫瘍剤として有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、抗腫瘍活性を有する新
規物質ＴＭＣ−１及びその製造法に関する。

【０００２】

【従来の技術】従来から、各種抗腫瘍活性物質が発見、
開発され、臨床において使用されている。しかしなが
ら、さまざまな種類の腫瘍に対してその効果は必ずしも
十分でなく、より優れた新規な抗腫瘍活性物質が望まれ
ている。

【０００３】微生物代謝産物から単離され、抗腫瘍活性
を有する物質のうち、ストレプトマイセス属微生物の代
謝産物から単離された物質としては、マニュマイシン類
〔ジャーナル・オブ・オーガニックケミストリー (Ｊ．
Ｏｒｇ． Ｃｈｅｍ．）、第５８巻、６５８３頁 (１
９９３年）〕やＵＣＦ−１ (特開平４−１８０８７号公
報）が知られている。これら化合物は主としてシクロヘ
キセノン骨格の５，６位でオキシラン骨格を形成してい
ることを特徴とする化合物である。また、シクロヘキセ
ノン骨格の５，６位にオキシラン骨格をもたないマニュ
マイシン類としては、マニュマイシンＤがあげられる
が、この化合物は２位に炭素数１３のアルケノイルアミ
ノ基側鎖を有する化合物である。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】本発明者らは広く微生
物代謝産物をスクリーニングすることにより、すぐれた
新規抗腫瘍活性物質を見出し、本発明を完成した。即
ち、本発明は優れた抗腫瘍活性を有する新規物質ＴＭＣ
−１を提供するものである。また、本発明はこのような
新規物質ＴＭＣ−１の製法をも提供するものである。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、ヒト腫瘍
細胞に対する増殖阻害作用を指標に、広く微生物代謝産
物をスクリーニングしたところ、高知県高知市で採取し
た土壌試料中から発見した微生物（この菌株をＡ−２３
０と称する）を培地で培養した際の培養物中に抗腫瘍活
性を有する物質が生産されることを見出した。この物質
を単離、精製し、その理化学的性質を調べた結果、新規
物質であることが判明し、ＴＭＣ−１と命名した。

【０００６】ＴＭＣ−１は、一般式〔Ｉ〕

【０００７】

【化１５】

【０００８】（式中、Ｒは

【０００９】

【化１６】

【００１０】で示される基であるか、

【００１１】

【化１７】

【００１２】で示される基であるか、

【００１３】

【化１８】

【００１４】で示される基であるか、或いは

【００１５】

【化１９】

【００１６】で示される基を表す。）で示される化合物
である。

【００１７】また、式

【００１８】

【化２０】

【００１９】で示される化合物をＴＭＣ−１Ａ、式

【００２０】

【化２１】

【００２１】で示される化合物をＴＭＣ−１Ｂ、式

【００２２】

【化２２】

【００２３】で示される化合物をＴＭＣ−１Ｃ、式

【００２４】

【化２３】

【００２５】で示される化合物をＴＭＣ−１Ｄと称す
る。

【００２６】本発明の目的物〔Ｉ〕にはシクロヘキセノ
ン骨格上における不斉炭素原子、または、２位アミノ基
の置換基Ｒに存在する不斉炭素原子により様々な立体異
性体、光学異性体が存在しうるが、本発明はこれら立体
異性体、光学異性体及びこれら混合物のいずれをも含む
ものである。

【００２７】本発明の目的化合物〔Ｉ〕は遊離の形で
も、また、薬理的に許容しうる塩の形でも医薬用途に使
用することができる。

【００２８】本発明の目的物〔Ｉ〕は、経口的にも非経
口的にも投与可能であり、経口もしくは非経口投与に適
した賦形剤、滑沢剤等と混合し、医薬製剤として用いる
ことができる。また、医薬製剤は、経口投与する場合
は、軟・硬カプセル剤、錠剤、顆粒剤、細粒剤、散剤の
如き固形製剤であってもよく、溶液、乳液、懸濁液の如
き液体製剤であってもよい。更に、非経口投与する場合
は、注射剤、点滴剤、座剤の形で用いることも、また軟
膏剤、クリーム剤、液剤、パップ剤、テープ剤として粘
膜吸収又は経皮吸収が維持できるような製剤を用いるこ
ともできる。

【００２９】本発明の目的物〔Ｉ〕の投与量は、投与方
法、患者の年齢、体重、状態によっても異なるが、経口
投与の場合は、通常、一日当たり１〜２００ｍｇ／ｋ
ｇ、とりわけ１０〜１００ｍｇ／ｋｇであるのが好まし
く、非経口投与の場合は、通常、一日当たり０．５〜１
００ｍｇ／ｋｇ、とりわけ５〜５０ｍｇ／ｋｇであるの
が好ましい。

【００３０】本発明のＴＭＣ−１を生産する菌株Ａ−２
３０は、前述のとおり高知県高知市で採取した土壌試料
中から発見した微生物であり、次のような菌学的性質を
有している。

【００３１】１．形態学的特徴 Ａ−２３０株はよく伸長し分岐する基生菌糸と気菌糸を
形成し、菌糸の分断及び気菌糸の輪生分岐は認められな
い。気菌糸上には胞子の長い連鎖（１０個から３０個も
しくはさらに多数）を作り、その形態はらせん状であ
る。胞子に運動性は認められない。菌核や胞子嚢等の特
殊な器官は観察されない。

【００３２】２．各種培地上の生育状態 各種寒天平板培地において２７℃、１４日間培養した結
果を第１表に示す。なお、気菌糸及びコロニー裏面の色
の判定には「色の標準」（日本色彩研究所１９５４年発
行）を使用した。

【００３３】なお、表中、ＩＳＰとは国際ストレプトマ
イセス プロジェクト（International Streptomyces P
roject）を表すものである。

【００３４】

【表１】

【００３５】３．生理学的性質 Ａ−２３０株の生理学的性質を第２表に、また炭素源の
資化性を第３表に示す。

【００３６】

【表２】

【００３７】

【表３】

【００３８】４．細胞壁組成 ＬＬ−ジアミノピメリン酸が検出された。

【００３９】以上の菌学的諸性質より、Ａ−２３０株は
放線菌ストレプトマイセス属に属すると考えられる。し
たがって、Ａ−２３０株をストレプトマイセス エスピ
ーＡ−２３０（Streptomyces sp. A-230）と称すること
にした。該菌株は工業技術院生命工学工業技術研究所に
受託番号ＦＥＲＭ Ｐ−１４４６０として寄託されてい
る。

【００４０】一般的に放線菌はその性質が変異しやす
く、自然変異以外に、紫外線、コバルト６０等の照射な
ど人工的な処理で容易に変異するが、本発明において
は、このストレプトマイセス エスピー Ａ−２３０株
から取得される自然的変異株および遺伝子工学的方法を
含む人工的変異株であっても新規物質ＴＭＣ−１を生産
できる菌株であれば、すべて生産菌として使用すること
ができる。本発明では、これら菌株をもＴＭＣ−１生産
菌のなかに包含する。

【００４１】本発明のＴＭＣ−１は以下のようにして製
造される。

【００４２】ＴＭＣ−１生産菌の培養は、一般の放線菌
における培養方法に準じて行うことができるが、ＴＭＣ
−１生産菌を好気的条件下に利用しうる炭素源および窒
素源を含有する栄養培地中において生育させることが好
ましい。

【００４３】その具体的手段としては、液体培地中での
振盪培養、深部培養あるいは通気攪拌培養等によるのが
好ましい。また、工業的には、ＴＭＣ−１生産菌の胞子
懸濁液又は培養液を培地に接種し、通気攪拌培養を行う
ことが好ましい。

【００４４】培地の栄養源は、特に限定されることはな
く、微生物の培養に通常用いられる炭素源、窒素源、そ
の他を培地中に含有させ、これらを栄養源とすることが
できる。

【００４５】培地成分としては、炭素源として、たとえ
ばグルコース、ガラクトース、マルトース、ラクトー
ス、イノシトール、マンニトール、糖蜜、グリセリン、
デキストリン、でんぷん、大豆油、綿実油等が用いら
れ、特にグリセリン、グルコース、でんぷんが好まし
い。

【００４６】また、窒素源としては、たとえば大豆粉、
落花生粉、綿実カス、魚粉、コーンスティープリカー、
ペプトン、肉エキス、酵母、酵母エキス、麦芽、米ぬ
か、ふすま、アスパラギン、硝酸ソーダ、硝酸アンモニ
ウム、硫酸アンモニウム、ＮＺアミンＴｙｐｅＡ（商品
名、和光純薬工業製）等が用いられ、特に大豆粉と綿実
カスが好ましい。

【００４７】また、無機塩としては、食塩、リン酸塩、
炭酸カルシウム、塩化カルシウム、微量金属塩（たとえ
ば、マンガン、亜鉛、銅、モリブデン、鉄、ホウ酸、コ
バルト、セレン、バナジウム、ヨウ素等の硫酸塩、リン
酸塩、塩酸塩、硝酸塩等）等が必要に応じて適宜添加さ
れる。液体培養に際しては、シリコン油、植物油、動物
油、鉱油、液体パラフィン、界面活性薬等が消泡薬とし
て適宜使用される。

【００４８】培地のｐＨは、中性ないし微アルカリ性、
特にｐＨ７付近が好ましく、培養温度は２５〜３０℃、
特に２８℃前後が好ましい。

【００４９】培養の経過に伴って生産されるＴＭＣ−１
の生産量の経時的変化は、ヒト結腸腫瘍細胞株ＨＣＴ−
１１６の増殖阻害活性によって測定することができる。
通常、７２〜１２０時間の培養でＴＭＣ−１の生産量は
最高に達する。

【００５０】ＴＭＣ−１は、培養終了後、微生物代謝産
物をその培養物から単離精製するために常用される方法
によって単離精製することができる。例えば、培養物を
ブタノール、アセトン又は酢酸エチル等によって抽出
し、次いで、シリカゲルクロマトグラフィー、さらに逆
相系樹脂やゲル濾過用樹脂を使用したカラムクロマトグ
ラフィー、高速液体クロマトグラフィー等を用いて精製
することにより、ＴＭＣ−１を得ることができる。

【００５１】このようにして得られるＴＭＣ−１の物理
化学的性質は以下のとおりである。

【００５２】１）ＴＭＣ−１Ａ (1) 物質の性状 ： 淡黄色粉末 (2) 分子量 ： ｍ／ｚ ５１３（Ｍ＋Ｈ、ＦＡＢマス
のスペクトルによる） (3) 分子式 ： Ｃ₂₈Ｈ₃₆Ｎ₂ Ｏ₇ (4) 融点 ： 95℃付近で分解 (5) 比旋光度 ： ［α］²⁴ _D ＝−５５°±３°（ｃ＝
0.1 、クロロホルム） (6) 紫外部吸収スペクトル（メタノール溶液） λmax
、nm (ε）：304(43,400) 、262(38,800) （図１参
照） (7) 赤外部吸収スペクトル（ＫＢｒ打錠）ｃｍ^-1：339
5、2955、2925、1670、1620、1515、1370、1005（図２
参照） (8)¹Ｈ核磁気共鳴スペクトル（400 ＭＨｚ、ＣＤＣ
ｌ₃ 、内部標準；テトラメチルシラン）δppm ：0.88(3
H,t)、1.02(3H,d)、1.2-1.4(6H,m) 、1.91(3H,bs) 、2.
50(1H,m)、2.56(4H,m)、2.75(1H,dd) 、2.88(1H,bs) 、
2.90(1H,dd) 、3.34(1H,bs) 、4.11(1H,m)、6.05(1H,
d)、6.05(1H,d)、6.23(1H,dd) 、6.38(1H,dd) 、6.52-
6.61(2H,m) 、7.32(1H,dd) 、7.56(1H,dd) 、7.58(1H,b
s) 、8.27(1H,s)、13.52(1H,bs)（図３参照） (9) ¹³Ｃ核磁気共鳴スペクトル（100 ＭＨｚ、ＣＤＣｌ
₃ 、内部標準；テトラメチルシラン）δppm ：12.6(q)
、14.0(q) 、20.2(q) 、22.8(t) 、25.7(t) 、29.7(t)
、32.2(t) 、33.3(d) 、36.6(t) 、40.6(t) 、71.9(d)
、73.6(s) 、115.0(s)、121.4(d)、126.0(d)、129.3
(s)、131.4(d)、131.5(d)、132.2(s)、138.6(d)、139.7
(d)、143.6(d)、144.7(d)、165.4(s)、168.1(s)、191.8
(s)、197.3(s)（図４参照） (10)溶解度：メタノール、エタノール、ブタノール等の
アルコール類、アセトン、酢酸エチル、クロロホルム、
ジクロロメタン、ジメチルスルホキシドに可溶。

【００５３】ｎ−ヘキサン、水に不溶。

【００５４】(11)呈色反応：ヨウ素、硫酸に陽性。ニン
ヒドリンに陰性。

【００５５】(12)薄層クロマトグラフィー： 吸着剤；シリカゲル( メルク社製、キーゼルゲル60使
用) 展開溶媒；クロロホルム：メタノール( ９：１) Ｒｆ＝ ０．２９。

【００５６】２）ＴＭＣ−１Ｂ (1) 物質の性状 ： 淡黄色粉末 (2) 分子量：ｍ／ｚ ５１３（Ｍ＋Ｈ、ＦＡＢマスのス
ペクトルによる） (3) 分子式 ： Ｃ₂₈Ｈ₃₆Ｎ₂ Ｏ₇ (4) 融点：75℃付近で分解 (5) 比旋光度：［α］²⁴ _D ＝ 0°（ｃ＝0.03、クロロホ
ルム） (6) 紫外部吸収スペクトル（メタノール溶液）λmax 、
nm( ε) ：304(38,500)、280(34,400) 、262(35,600)
（図５参照） (7) 赤外部吸収スペクトル（ＫＢｒ打錠）ｃｍ^-1：338
5、2960、2925、1670、1620、1515、1380、1005（図６
参照） (8)¹Ｈ核磁気共鳴スペクトル（400 ＭＨｚ、ＣＤＣ
ｌ₃ 、内部標準；テトラメチルシラン）δppm ：0.88(3
H,t)、0.89(3H,d)、1.1-1.5(5H,m) 、1.90(3H,bs) 、2.
19(2H,m)、2.57(4H,m)、2.75(1H,dd) 、2.82(1H,bs) 、
2.89(1H,dd) 、3.20(1H,bs) 、4.11(1H,m)、6.04(1H,
d)、6.05(1H,d)、6.39(1H,dd) 、6.44(1H,dt) 、6.53-
6.61(2H,m) 、7.32(1H,dd) 、7.54(1H,bs) 、7.55(1H,
d)、8.26(1H,s)、13.51(1H,bs)（図７参照） (9) ¹³Ｃ核磁気共鳴スペクトル（100 ＭＨｚ、ＣＤＣｌ
₃ 、内部標準；テトラメチルシラン）δppm ：11.3(q)
、12.4(q) 、19.0(q) 、25.6(t) 、26.3(t) 、29.3(t)
、32.1(t) 、34.2(d) 、35.4(t) 、40.6(t) 、71.8(d)
、73.6(s) 、114.9(s)、121.4(d)、125.9(d)、130.7
(s)、131.4(d)、131.5(d)、132.3(s)、138.6(d)、139.0
(d)、139.7(d)、143.6(d)、165.4(s)、168.0(s)、173.8
(s)、191.8(s)（図８参照） (10)溶解度：メタノール、エタノール、ブタノール等の
アルコール類、アセトン、酢酸エチル、クロロホルム、
ジクロロメタン、ジメチルスルホキシドに可溶。

【００５７】ｎ−ヘキサン、水に不溶。

【００５８】(11)呈色反応 ： ヨウ素、硫酸に陽性。
ニンヒドリンに陰性。

【００５９】(12)薄層クロマトグラフィー： 吸着剤；シリカゲル( メルク社製、キーゼルゲル60使
用) 展開溶媒；クロロホルム：メタノール( ９：１) Ｒｆ＝ ０．２９。

【００６０】３）ＴＭＣ−１Ｃ (1) 物質の性状：淡黄色粉末 (2) 分子量：ｍ／ｚ ５３９（Ｍ＋Ｈ、ＦＡＢマスのス
ペクトルによる） (3) 分子式：Ｃ₃₀Ｈ₃₈Ｎ₂ Ｏ₇ (4) 融点：106 ℃付近で分解 (5) 比旋光度：［α］²⁴ _D ＝ +116 °±１°（ｃ＝0.1
、クロロホルム） (6) 紫外部吸収スペクトル（メタノール溶液） λmax
、nm( ε) ：306(肩47,800) 、285(52,700) 、265(肩4
9,500) （図９参照） (7) 赤外部吸収スペクトル（ＫＢｒ打錠）ｃｍ^-1：3420
〜3380、2950、2920、1660、1615、1515、1350、1005
（図１０参照） (8)¹Ｈ核磁気共鳴スペクトル（400 ＭＨｚ、ＣＤＣ
ｌ₃ 、内部標準；テトラメチルシラン）δppm ：0.87(3
H,t)、0.98(3H,d)、1.2-1.4(6H,m) 、1.78(3H,s)、2.52
(1H,m)、2.55(4H,m)、2.74(1H,bd) 、2.89(1H,bd) 、2.
84(1H,bs) 、4.10(1H,m)、4.54(1H,bs) 、5.70(1H,d)、
5.86(1H,d)、6.04(1H,d)、6.14(1H,d)、6.34(1H,m)、6.
50-6.60(2H,m) 、7.24(1H,d)、7.27(1H,m)、7.57(1H,b
s) 、7.98(1H,s)、8.11(1H,bs) 、13.78(1H,bs)（図１
１参照） (9) ¹³Ｃ核磁気共鳴スペクトル（100 ＭＨｚ、ＣＤＣｌ
₃ 、内部標準；テトラメチルシラン）δppm ：12.5(q)
、14.1(q) 、20.5(q) 、22.8(t) 、25.7(t) 、29.7(t)
、32.2(t) 、33.3(d) 、36.9(t) 、40.7(t) 、71.9(d)
、73.6(s) 、115.3(s)、117.5(d)、121.5(d)、127.2
(d)、131.0(s)、131.3(d)x2、132.0(s)、138.8(d)、13
9.8(d)、143.4(d)、148.5(d)、149.4(d)、165.7(s)x2、
192.0(s)、197.7(s)（図１２参照） (10)溶解度：メタノール、エタノール、ブタノール等の
アルコール類、アセトン、酢酸エチル、クロロホルム、
ジクロロメタン、ジメチルスルホキシドに可溶。

【００６１】ｎ−ヘキサン、水に不溶。

【００６２】(11)呈色反応：ヨウ素、硫酸に陽性。ニン
ヒドリンに陰性。

【００６３】(12)薄層クロマトグラフィー： 吸着剤；シリカゲル( メルク社製、キーゼルゲル60使
用) 展開溶媒；クロロホルム：メタノール( ９：１) Ｒｆ＝ ０．２９。

【００６４】４）ＴＭＣ−１Ｄ (1) 物質の性状：淡黄色粉末 (2) 分子量：ｍ／ｚ ５４１（Ｍ＋Ｈ、ＦＡＢマスのス
ペクトルによる） (3) 分子式：Ｃ₃₀Ｈ₄₀Ｎ₂ Ｏ₇ (4) 融点：89℃付近で分解 (5) 比旋光度：［α］²⁴ _D ＝＋１６°±２°（ｃ＝0.1
、クロロホルム） (6) 紫外部吸収スペクトル（メタノール溶液）λmax 、
nm( ε) ： 304(42,700)、278(40,200) 、263(40,700)
（図１３参照） (7) 赤外部吸収スペクトル（ＫＢｒ打錠）ｃｍ^-1：337
5、2955、2920、1670、1620、1515、1370、1005（図１
４参照） (8)¹Ｈ核磁気共鳴スペクトル（400 ＭＨｚ、ＣＤＣ
ｌ₃ 、内部標準；テトラメチルシラン）δppm ：0.85(3
H,d)、0.88(3H,t)、1.04(3H,d)、1.13(2H,m)、1.2-1.3
(6H,m) 、1.38(1H,m)、2.44(1H,m)、2.56(4H,m)、2.74
(1H,dd) 、2.89(1H,dd)、3.24(1H,bs) 、3.92(1H,bs)
、4.10(1H,m)、5.86(1H,d)、6.04(1H,d)、6.08(1H,
d)、6.37(1H,dd) 、6.50-6.62(2H,m) 、6.77(1H,dd) 、
7.31(1H,dd) 、7.58(1H,bs) 、7.78(1H,bs) 、7.89(1H,
s)、13.63(1H,bs)（図１５参照） (9) ¹³Ｃ核磁気共鳴スペクトル（100 ＭＨｚ、ＣＤＣｌ
₃ 、内部標準；テトラメチルシラン）δppm ：14.2(q)
、19.4(q) 、20.4(q) 、23.0(t) 、25.7(t) 、29.1(t)
、30.4(d) 、32.2(t) 、34.2(d) 、37.1(t) 、40.6(t)
、43.9(t) 、71.8(d) 、73.5(s) 、115.0(s)、121.5
(d)、121.7(d)、126.8(d)、131.3(d)、131.4(d)、132.0
(s)、138.6(d)、139.7(d)、143.5(d)、153.2(d)、165.0
(s)、165.5(s)、174.3(s)、191.7(s)、197.6(s)（図１
６参照） (10)溶解度：メタノール、エタノール、ブタノール等の
アルコール類、アセトン、酢酸エチル、クロロホルム、
ジクロロメタン、ジメチルスルホキシドに可溶。

【００６５】ｎ−ヘキサン、水に不溶。

【００６６】(11)呈色反応：ヨウ素、硫酸に陽性。ニン
ヒドリンに陰性。

【００６７】(12)薄層クロマトグラフィー： 吸着剤；シリカゲル( メルク社製、キーゼルゲル60使
用) 展開溶媒；クロロホルム：メタノール( ９：１) Ｒｆ＝ ０．２９。

【００６８】

【作用】つぎに、ＴＭＣ−１の生物学的性状は以下のと
おりである。

【００６９】（Ａ）ヒト及びマウス腫瘍細胞株に対する
増殖抑制効果の評価 １）ヒト結腸腫瘍細胞株ＨＣＴ−１１６（ＡＴＣＣ Ｃ
ＣＬ−２４７）に対する効果 ９６穴マルチプレート（住友ベークライト社製）にＭｃ
Ｃｏｙ’ｓ５Ａ培地（Ｇｉｂｃｏ社製）、１０％牛胎児
血清、５０国際単位／ｍｌペニシリン及び５０μｇ／ｍ
ｌストレプトマイシンからなる培地で１×１０⁵ 個／ｍ
ｌに調製したＨＣＴ−１１６細胞を１３５μｌづつ該プ
レートの各穴に分注した。これに水により適宜希釈した
試験化合物１５μｌずつを加え、５％炭酸ガス培養器内
で３７℃、７２時間培養した。培養後、０．１５％ニュ
ートラルレッド４０μｌを加え、３７℃で１時間５％炭
酸ガス培養器内で培養し、細胞を染色した。培養上清を
除去後、細胞を０．０２％塩化カリウムと０．８％塩化
ナトリウム含有１８ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ５．６）１
５０μｌを用いて１回洗浄した。ついで５０％エタノー
ルを含有する０．１Ｍリン酸１ナトリウム液１００μｌ
によって色素を抽出後、マイクロプレートリーダーによ
り５４０ｎｍの吸光度を測定した。無処理細胞と既知濃
度の試験化合物で処理した細胞の吸光度を比較すること
により、細胞増殖を５０％阻害する試験化合物濃度（Ｉ
Ｃ₅₀）を算出した。その結果を第４表に示す。

【００７０】２）ヒト結腸腺腫瘍細胞株ＳＷ４８０（Ａ
ＴＣＣ ＣＣＬ−２２８）に対する効果 培地にライボビッツＬ−１５培地（Ｇｉｂｃｏ社製）、
１０％牛胎児血清、５０国際単位／ｍｌペニシリン及び
５０μｇ／ｍｌストレプトマイシンからなる培地を使用
した以外は１）と同様の操作を行った。その結果を第４
表に示す。

【００７１】３）ヒト骨肉腫細胞株Ｓａｏｓ−２（ＡＴ
ＣＣ ＨＴＢ ８５）に対する効果１）と全く同様の操
作を行った。その結果を第４表に示す。

【００７２】４）ヒト結腸腺腫瘍細胞株ＷｉＤｒ（ＡＴ
ＣＣ ＣＣＬ−２１８）に対する効果 培地にＭＥＭ−Ｅ培地（大日本製薬製）、１％非必須ア
ミノ酸混液（大日本製薬製）、１０％牛胎児血清、５０
国際単位／ｍｌペニシリン及び５０μｇ／ｍｌストレプ
トマイシンからなる培地を使用した以外は１）と同様の
操作を行った。

【００７３】その結果を第４表に示す。

【００７４】５）ヒト卵巣腫瘍細胞株ＯＶＣＡＲ−３
（ＡＴＣＣ ＨＴＢ １６１）に対する効果 培地にＲＰＭＩ １６４０培地（Ｇｉｂｃｏ社製）、１
００μｇ／ｍｌインシュリン、１０％牛胎児血清、５０
国際単位／ｍｌペニシリン及び５０μｇ／ｍｌストレプ
トマイシンからなる培地を使用した以外は１）と同様の
操作を行った。

【００７５】その結果を第４表に示す。

【００７６】６）ヒト前骨髄性白血病細胞株ＨＬ−６０
（ＡＴＣＣ ＣＣＬ−２４０）に対する効果 培地にＲＰＭＩ １６４０培地（Ｇｉｂｃｏ社製）、２
０％牛胎児血清、５０国際単位／ｍｌペニシリン及び５
０μｇ／ｍｌストレプトマイシンからなる培地で１×１
０⁵ 個／ｍｌに調製したＨＬ−６０細胞を１３５μｌづ
つ該プレートの各穴に分注した。これに水により適宜希
釈した試験化合物１５μｌずつを加え、５％炭酸ガス培
養器内で３７℃、７２時間培養した。培養後、１ｍｇ／
ｍｌの水酸化２，３−ビス−（２−メトキシ−４−ニト
ロ−５−スルホフェニル）−５−［（フェニルアミノ）
カルボニル］−２Ｈ−テトラゾリウム塩酸塩と７．５μ
ｇ／ｍｌのフェナジンメトサルフェートとを含む水溶液
４０μｌを加え、３７℃で４時間５％炭酸ガス培養器内
で培養した。生じたフォルマザンをマイクロプレートリ
ーダーを用いて４５０ｎｍの吸光度で測定した。無処理
細胞と既知濃度の試験化合物で処理した細胞の吸光度を
比較することにより、細胞増殖を５０％阻害する試験化
合物濃度（ＩＣ₅₀）を算出した。その結果を第４表に示
す。

【００７７】７）ヒト子宮頚部腫瘍細胞株ＨｅＬａ Ｓ
３（ＡＴＣＣ ＣＣＬ ２．２）に対する効果 培地にＭＥＭ−Ｅ培地（大日本製薬製）、１０％牛胎児
血清、５０国際単位／ｍｌペニシリン及び５０μｇ／ｍ
ｌストレプトマイシンからなる培地を使用した以外は
１）と同様の操作を行った。その結果を第４表に示す。

【００７８】８）マウス白血病細胞株Ｐ３８８Ｄ₁ （Ａ
ＴＣＣ ＣＣＬ ４６）に対する効果 培地にＲＰＭＩ １６４０培地（Ｇｉｂｃｏ社製）、５
％牛胎児血清、５０国際単位／ｍｌペニシリン及び５０
μｇ／ｍｌストレプトマイシンからなる培地を使用した
以外は６）と同様の操作を行った。その結果を第４表に
示す。

【００７９】

【表４】

【００８０】

【実施例】つぎに、ＴＭＣ−１の製造方法を実施例とし
て示す。なお、実施例は、単に本発明の例示目的に提供
されるものであって、本発明の範囲を限定するものでは
ない。

【００８１】実施例 １）発酵 グルコース１％、デキストリン２％、バクトソイトン
（Ｄｉｆｃｏ社製）１．５％、酵母エキス（オリエンタ
ル酵母工業製）０．１％、炭酸カルシウム０．３％を含
有する培地７５ｍｌを５００ｍｌ容三角フラスコ１０本
にそれぞれ分注し、１２０℃で２０分間滅菌する。スト
レプトマイセス エスピー Ａ−２３０株を各培地に接
種し、ロータリー・シェーカー（毎分２２０回転）上２
７℃で５日間振盪培養する。

【００８２】別に、グルコース１％、デキストリン２
％、バクトソイトン１．５％、酵母エキス０．１％、炭
酸カルシウム０．３％、ディスホームＣＣ４３８（日本
油脂製）０．１％を含有する培地１８ｌを３０ｌ容ステ
ンレス・スチール製発酵槽４基にそれぞれ分注し、１２
０℃で２０分間滅菌する。これに上記培養物を発酵槽１
基あたり１８０ｍｌを接種し、２７℃で５日間、通気
（０．３ＶＶＭ）と攪拌（１００〜５００ｒｐｍ）を行
いながら培養する。

【００８３】２）精製 得られた培養物６８ｌにｎ−ブタノール３０ｌを加え３
０分間攪拌した後、遠心分離して（３００ｒｐｍ）、菌
体と水層とｎ−ブタノール層に分離した。得られたｎ−
ブタノール層２０ｌを減圧濃縮し、油状物質７３．４ｇ
を得た。これに水２．５ｌを加え等量の酢酸エチルで３
回抽出した。得られた抽出液を減圧濃縮後、ｎ−ヘキサ
ン１ｌで２回洗浄し、減圧乾固して赤褐色の固体１４．
４ｇを得た。

【００８４】得られた赤褐色の固体を少量のジクロロメ
タンに溶解し、シリカゲル（和光純薬工業製Ｗａｋｏｇ
ｅｌ Ｃ−２００）４００ｇをジクロロメタンに懸濁し
て詰めたカラム塔に負荷した。塔を１ｌのジクロロメタ
ンで洗浄後、ジクロロメタンとメタノールの混液（９
５：５）３ｌで展開溶出した。溶出液は分析用逆相系高
速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）でモニターし
て、ＴＭＣ−１Ａ、ＴＭＣ−１Ｂ、ＴＭＣ−１Ｃ及びＴ
ＭＣ−１Ｄを含むフラクションを集め減圧下濃縮乾固す
ると褐色の固体２．０３ｇが得られる。

【００８５】得られた赤褐色の固体を少量のジメチルス
ルホキシドに溶解し、この溶液を逆相系シリカゲル（ワ
イエムシー社製ＹＭＣ−ＧＥＬ ＯＤＳ（Ａ６０））４
００ｇを５０％アセトニトリルを含有する０．０１Ｍリ
ン酸緩衝液（ｐＨ３．５）に懸濁して詰めたカラム塔に
負荷した。塔を同一溶剤２．８ｌ、次に６０％アセトニ
トリルを含有する０．０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ３．
５）４．３ｌで展開溶出した。溶出液はＨＰＬＣでモニ
ターしてＴＭＣ−１Ａ及びＴＭＣ−１Ｂを含むフラクシ
ョン、ＴＭＣ−１Ｃ含むフラクション、又はＴＭＣ−１
Ｄを含むフラクションに分取し、それぞれ減圧下アセト
ニトリルを除去後、酢酸エチル１００ｍｌで抽出し、５
０ｍｌの水で２回水洗して減圧下濃縮乾固すると淡黄色
粉末状の粗画分がそれぞれ７９．４ｍｇ、１４０．８ｍ
ｇ及び３８．９ｍｇが得られた。

【００８６】ＴＭＣ−１ＡとＴＭＣ−１Ｂを含む粗画分
は、少量のジメチルスルホキシドに溶解後、分取用高速
液体クロマトグラフィー( カラム：ワイエムシ社製ＹＭ
ＣＰａｃｋ Ｄ−ＯＤＳ−５、溶媒：６７．５％メタノ
ールを含有する０．０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ３．
５）、流速：１２ｍｌ／分) を使用して精製した。ＴＭ
Ｃ−１Ａ又はＴＭＣ−１Ｂを含む活性画分を集め、減圧
濃縮によりメタノールを除去し、酢酸エチルで抽出し
た。酢酸エチル層を水洗後、濃縮乾固した。ＴＭＣ−１
Ａの粗精製粉末を少量のジクロロメタンとメタノールの
混液（１：１）に溶解後、あらかじめジクロロメタンと
メタノールの混液（１：１）で平衡化したセファデック
スＬＨ−２０（ファルマシア社製、２２ｍｍ×４４０ｍ
ｍ）の塔にかけ、同一溶剤でゲル濾過し、活性画分を減
圧濃縮してＴＭＣ−１Ａ８．７ｍｇを淡黄色粉末として
得た。また、ＴＭＣ−１Ｂの粗精製粉末を同様に処理す
ることによりＴＭＣ−１Ｂ３．１ｍｇを淡黄色粉末とし
て得た。

【００８７】ＴＭＣ−１Ｃ又はＴＭＣ−１Ｄを含む粗画
分は、少量のジメチルスルホキシドに溶解後、分取用高
速液体クロマトグラフィー（カラム：ワイエムシ社製Ｙ
ＭＣＰａｃｋ Ｄ−ＯＤＳ−５、溶媒：６０％アセトニ
トリルを含有する０．０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ３．
５）、流速：１２ｍｌ／分）を使用して精製した。活性
画分を分取し、減圧濃縮によりアセトニトリルを除去
し、残渣を酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル層を水洗
後、濃縮乾固し、ＴＭＣ−１Ｃ又はＴＭＣ−１Ｄの粗精
製粉末をそれぞれ９７．８ｍｇ又は１９．２ｍｇ得た。
得られたＴＭＣ−１Ｃの粗精製粉末は、少量のジクロロ
メタンとメタノールの混液（１：１）に溶解後、あらか
じめジクロロメタンとメタノールの混液（１：１）で平
衡化したセファデックスＬＨ−２０（ファルマシア社
製、２２ｍｍ×４４０ｍｍ）の塔にかけ、同一溶剤でゲ
ル濾過し、活性画分を減圧濃縮し、ＴＭＣ−１Ｃ８８．
７ｍｇを淡黄色粉末として得た。同様の処理により、Ｔ
ＭＣ−１Ｄの淡黄色粉末１０．９ｍｇを得た。

【００８８】

【発明の効果】本発明のＴＭＣ−１またはその薬理的に
許容しうる塩は、ヒト腫瘍細胞の増殖を強く抑制し、乳
癌、卵巣癌、小細胞肺癌、悪性リンパ腫等の治療に有用
である。また、本発明の目的物〔Ｉ〕は毒性が低く、医
薬として安全性が高い。

【図面の簡単な説明】

【図１】 ＴＭＣ−１Ａの紫外部吸収スペクトルを示
す。

【図２】 ＴＭＣ−１Ａの赤外部吸収スペクトルを示
す。

【図３】 ＴＭＣ−１Ａの ¹Ｈ核磁気共鳴スペクトル
（400 ＭＨz 、ＣＤＣｌ₃ 中で測定）を示す。

【図４】 ＴＭＣ−１Ａの¹³Ｃ核磁気共鳴スペクトル
（100 ＭＨz 、ＣＤＣｌ₃ 中で測定）を示す。

【図５】 ＴＭＣ−１Ｂの紫外部吸収スペクトルを示
す。

【図６】 ＴＭＣ−１Ｂの赤外部吸収スペクトルを示
す。

【図７】 ＴＭＣ−１Ｂの ¹Ｈ核磁気共鳴スペクトル
（400 ＭＨz 、ＣＤＣｌ₃ 中で測定）を示す。

【図８】 ＴＭＣ−１Ｂの¹³Ｃ核磁気共鳴スペクトル
（100 ＭＨz 、ＣＤＣｌ₃ 中で測定）を示す。

【図９】 ＴＭＣ−１Ｃの紫外部吸収スペクトルを示
す。

【図１０】ＴＭＣ−１Ｃの赤外部吸収スペクトルを示
す。

【図１１】ＴＭＣ−１Ｃの ¹Ｈ核磁気共鳴スペクトル
（400 ＭＨz 、ＣＤＣｌ₃ 中で測定）を示す。

【図１２】ＴＭＣ−１Ｃの¹³Ｃ核磁気共鳴スペクトル
（100 ＭＨz 、ＣＤＣｌ₃ 中で測定）を示す。

【図１３】ＴＭＣ−１Ｄの紫外部吸収スペクトルを示
す。

【図１４】ＴＭＣ−１Ｄの赤外部吸収スペクトルを示
す。

【図１５】ＴＭＣ−１Ｄの ¹Ｈ核磁気共鳴スペクトル
（400 ＭＨz 、ＣＤＣｌ₃ 中で測定）を示す。

【図１６】ＴＭＣ−１Ｄの¹³Ｃ核磁気共鳴スペクトル
（100 ＭＨz 、ＣＤＣｌ₃ 中で測定）を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 河野 順 神奈川県横浜市鶴見区豊岡町４丁目21番 シティハイツ鶴見505

Claims (7)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 一般式 【化１】 （式中、Ｒは 【化２】 で示される基であるか、 【化３】 で示される基であるか、 【化４】 で示される基であるか、或いは 【化５】 で示される基を表す。）で示されるＴＭＣ−１。
2. 【請求項２】 式 【化６】 で示される化合物。
3. 【請求項３】 式 【化７】 で示される化合物。
4. 【請求項４】 式 【化８】 で示される化合物。
5. 【請求項５】 式 【化９】 で示される化合物。
6. 【請求項６】 ストレプトマイセス属に属し、一般式 【化１０】 （式中、Ｒは 【化１１】 で示される基であるか、 【化１２】 で示される基であるか、 【化１３】 で示される基であるか、或いは 【化１４】 で示される基を表す。）で示されるＴＭＣ−１を生産す
   る能力を有する微生物を培養し、その培養物から上記化
   合物を採取することを特徴とするＴＭＣ−１の製造方
   法。
7. 【請求項７】 ＴＭＣ−１を生産する能力を有する微生
   物がストレプトマイセス エスピー Ａ−２３０ (ＦＥ
   ＲＭ Ｐ−１４４６０）である請求項６記載の製法。