JPH0871B2 - 新規耐熱性レバンシュークラーゼおよびその製造方法 - Google Patents
新規耐熱性レバンシュークラーゼおよびその製造方法Info
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- JPH0871B2 JPH0871B2 JP1344676A JP34467689A JPH0871B2 JP H0871 B2 JPH0871 B2 JP H0871B2 JP 1344676 A JP1344676 A JP 1344676A JP 34467689 A JP34467689 A JP 34467689A JP H0871 B2 JPH0871 B2 JP H0871B2
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- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
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- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、シュークロースからレバンを生成する新規
耐熱性レバンシュークラーゼおよびその製造法に関す
る。
耐熱性レバンシュークラーゼおよびその製造法に関す
る。
［従来の技術］ レバンはコレステロール吸収抑制、血圧抑制、整腸作
用、免疫増強などの効果が期待される。
用、免疫増強などの効果が期待される。
また、加工食品分野においてはデンプンの老化抑制、
増粘剤、安定剤等として有用である。
増粘剤、安定剤等として有用である。
レバンシュークラーゼはシュークロースやラフィノー
スのβ−フラクトシル基をシュークロースやラフィノー
スに転移させ、β−2,6結合のレバンを生成する酵素で
ある。
スのβ−フラクトシル基をシュークロースやラフィノー
スに転移させ、β−2,6結合のレバンを生成する酵素で
ある。
これまでBacillus subtilis（Meth.Enzymol.8.500−
505）,Aerobacter levanicum（Biochim.Biophys.Acta.
113,79−83）,Bacillus licheniformis（特公昭56−42
35号）や、Leucnostoc属,Zymomonas属,Xanthomonas属が
生成することが知られている。
505）,Aerobacter levanicum（Biochim.Biophys.Acta.
113,79−83）,Bacillus licheniformis（特公昭56−42
35号）や、Leucnostoc属,Zymomonas属,Xanthomonas属が
生成することが知られている。
しかしながら、上記の微生物はレバンシュークラーゼ
を培養液中に生成するため、同時に生成されるレバンと
の分離が困難となりレバンシュークラーゼのみを経済的
に得ることができないことや、酵素の耐熱性不足などの
問題点があった。
を培養液中に生成するため、同時に生成されるレバンと
の分離が困難となりレバンシュークラーゼのみを経済的
に得ることができないことや、酵素の耐熱性不足などの
問題点があった。
レバンシュークラーゼの別の用途としては、そのフラ
クトシル基転移作用を利用することにより、キシロース
やラクトロースにフラクトシル基が転移したキシロシュ
ークロースやラクトシュークロースなどの有用オリゴ糖
の製造に使用することが挙げられ、キシロシュークロー
スやラクトシュークロースはビフィズス菌増殖物質や抗
う蝕性甘味料などとしての利用が期待されている。
クトシル基転移作用を利用することにより、キシロース
やラクトロースにフラクトシル基が転移したキシロシュ
ークロースやラクトシュークロースなどの有用オリゴ糖
の製造に使用することが挙げられ、キシロシュークロー
スやラクトシュークロースはビフィズス菌増殖物質や抗
う蝕性甘味料などとしての利用が期待されている。
現在、これら有用オリゴ糖の製造方法として、バチル
ス（Bacillus）属菌起源のレバンシュークラーゼ（特開
昭59−39287号）や、アエロバクター（Aerobacter）属
菌起源のレバンシュークラーゼ（特開昭55−118369号）
を用いてラクトシュークロースを合成する方法、あるい
はバチルス・サブチリス（Bacillus subtilis）のレバ
ンシュークラーゼ（J.Biochem.,90,521−526（198
1））、（特開昭55−118369号）を用いてシュークロー
スとキシロースからキシロシュクロースを合成する方法
等が報告されているが、酵素の耐熱性、反応効率の点か
ら実用化されていない。
ス（Bacillus）属菌起源のレバンシュークラーゼ（特開
昭59−39287号）や、アエロバクター（Aerobacter）属
菌起源のレバンシュークラーゼ（特開昭55−118369号）
を用いてラクトシュークロースを合成する方法、あるい
はバチルス・サブチリス（Bacillus subtilis）のレバ
ンシュークラーゼ（J.Biochem.,90,521−526（198
1））、（特開昭55−118369号）を用いてシュークロー
スとキシロースからキシロシュクロースを合成する方法
等が報告されているが、酵素の耐熱性、反応効率の点か
ら実用化されていない。
本発明は上記事実を考慮し、レバンの製造およびキシ
ロシュークロースやラクトシュークロースなどのオリゴ
糖製造に適した耐熱性のレバンシュークラーゼを収率よ
く生成する方法を提供することを目的とする。
ロシュークロースやラクトシュークロースなどのオリゴ
糖製造に適した耐熱性のレバンシュークラーゼを収率よ
く生成する方法を提供することを目的とする。
［問題を解決するための手段］ 本発明者らは、多くの微生物についてレバンシューク
ラーゼ生産能の観点から微生物の検索を行ったところ、
ローネラ属の微生物が耐熱性のレバンシュークラーゼを
菌体内に多く蓄積することを見いだし、本発明を完成す
るに至った。
ラーゼ生産能の観点から微生物の検索を行ったところ、
ローネラ属の微生物が耐熱性のレバンシュークラーゼを
菌体内に多く蓄積することを見いだし、本発明を完成す
るに至った。
本発明のレバンシュークラーゼは後述する理化学的性
質を有する新規なレバンシュークラーゼであった。
質を有する新規なレバンシュークラーゼであった。
特に受容体としてキシロースやラクトロースの糖を用
いた場合、高温下で短時間にシュークロースのフラクト
シル基がこれらの糖に転移し、キシロシュークロースや
ラクトシュークロースを生成する。
いた場合、高温下で短時間にシュークロースのフラクト
シル基がこれらの糖に転移し、キシロシュークロースや
ラクトシュークロースを生成する。
この新規耐熱性レバンシュークラーゼは、ローネラ属
に属する微生物を好気的に培養した菌体内より酵素を分
離、採取することにより生産される。
に属する微生物を好気的に培養した菌体内より酵素を分
離、採取することにより生産される。
菌体からの酵素の分離手段としては公知の酵素精製方
法を用いることができる。
法を用いることができる。
また、培養によって得られたローネラ・アクアティリ
スの菌体および菌体処理物を粗酵素として用いることも
可能である。
スの菌体および菌体処理物を粗酵素として用いることも
可能である。
本発明において使用されるローネラ属としてはローネ
ラ・アクアティリス（Rahnella aquatilis）（JCM−16
83）が挙げられる。
ラ・アクアティリス（Rahnella aquatilis）（JCM−16
83）が挙げられる。
なお、ローネラ属の微生物のレバンシュークラーゼ生
産能については未だ知られていなかった。
産能については未だ知られていなかった。
以下に本発明について詳述する。
（Ｉ）本発明に用いる微生物 本発明に用いる微生物は、レバンシュークラーゼ生産
能を有するものであり、ローネラ属に属する菌種であ
る。その一例として理化学研究所微生物系統保存施設保
存のローネラ・アクアティリス（Rahnella aquatili
s）（JCM−1683）が挙げられる。
能を有するものであり、ローネラ属に属する菌種であ
る。その一例として理化学研究所微生物系統保存施設保
存のローネラ・アクアティリス（Rahnella aquatili
s）（JCM−1683）が挙げられる。
ここで、本発明における使用微生物としてのローネラ
・アクアティリス（Rahnella aquatilis）（JCM−168
3）はその一例であり、その変異株およびローネラ属に
属する菌種でレバンシュークラーゼ生成能を有する微生
物はすべて本発明方法において使用することができる。
・アクアティリス（Rahnella aquatilis）（JCM−168
3）はその一例であり、その変異株およびローネラ属に
属する菌種でレバンシュークラーゼ生成能を有する微生
物はすべて本発明方法において使用することができる。
上記微生物の培養は、通常用いられる固体培地、液体
培地のどちらをもちいてもよいが液体培地の方が好まし
い。
培地のどちらをもちいてもよいが液体培地の方が好まし
い。
微生物の培養に利用できる培地は、炭素源としては微
生物が利用できる炭素源を用いることが可能であるが、
好ましくはシュークロースまたはグルコースであり、ま
た窒素源としては、酵母エキス、カゼイン、コーンスチ
ープリカー、ペプトン、肉エキスなどの天然窒素源や硫
安、塩安、尿素などの無機窒素化合物を用いることがで
きる。
生物が利用できる炭素源を用いることが可能であるが、
好ましくはシュークロースまたはグルコースであり、ま
た窒素源としては、酵母エキス、カゼイン、コーンスチ
ープリカー、ペプトン、肉エキスなどの天然窒素源や硫
安、塩安、尿素などの無機窒素化合物を用いることがで
きる。
なお、炭素源の濃度は１〜20％の範囲で、培養時間は
８〜16時間程度が好適であり、培養は静置培養または通
気撹はん、振とう培養のいずれの方法でも行うことがで
きる。
８〜16時間程度が好適であり、培養は静置培養または通
気撹はん、振とう培養のいずれの方法でも行うことがで
きる。
（II）レバンシュークラーゼ レバンシュークラーゼは上記微生物の菌体内で生産さ
れ、菌体破砕物から分離、採取し、菌体からの分離手段
としては公知の酵素精製方法を用いることができる。微
生物の培養物を粗酵素として用いてもよく、また、塩析
法、担体吸着法、ゲル濾過法、電気泳動法などの精製手
段を用いて精製酵素として使用することもできる。
れ、菌体破砕物から分離、採取し、菌体からの分離手段
としては公知の酵素精製方法を用いることができる。微
生物の培養物を粗酵素として用いてもよく、また、塩析
法、担体吸着法、ゲル濾過法、電気泳動法などの精製手
段を用いて精製酵素として使用することもできる。
ローネラ・アクアティリスのレバンシュークラーゼは
以下の理化学性質を有する新規な酵素である。
以下の理化学性質を有する新規な酵素である。
作用および基質特異性 シュークロースやラフィノースからβ−フラクトシル
基をシュークロースやラフィノースなど受容体に転移さ
せ、β−2,6結合のレバンを生成する。
基をシュークロースやラフィノースなど受容体に転移さ
せ、β−2,6結合のレバンを生成する。
受容体としてキシロース、Ｄ−アラビノース、Ｌ−ア
ラビノース、ラクトース、マルトース、セロビオース、
メリビオース、マルテトラオースなど用いた場合、シュ
ークロースのβ−フラクトシル基が受容体に転移し、そ
れぞれに相当するフラクトシル基を有するオリゴ糖を生
成する。
ラビノース、ラクトース、マルトース、セロビオース、
メリビオース、マルテトラオースなど用いた場合、シュ
ークロースのβ−フラクトシル基が受容体に転移し、そ
れぞれに相当するフラクトシル基を有するオリゴ糖を生
成する。
力価の測定法 10％シュークロース（pH6.0、マックルバイン（McIlv
aine）緩衝液）0.9mlと酵素溶液0.1mlを混合し、30℃で
30分間反応させた後、沸騰浴中で５分間加熱し、反応を
停止させた。生成したグルコース量をグルコースオキシ
ダーゼ法により測定し、基質シュークロースから１分間
に１μモルのグルコースを生成する能力を１ユニット
（Ｕ）とした。
aine）緩衝液）0.9mlと酵素溶液0.1mlを混合し、30℃で
30分間反応させた後、沸騰浴中で５分間加熱し、反応を
停止させた。生成したグルコース量をグルコースオキシ
ダーゼ法により測定し、基質シュークロースから１分間
に１μモルのグルコースを生成する能力を１ユニット
（Ｕ）とした。
至適pHおよび安定hpH範囲 シュークロースを基質として各pHにおいて30℃で30分
間反応させた結果、第１図に示すように至適pHはpH5.5
〜6.0であった。
間反応させた結果、第１図に示すように至適pHはpH5.5
〜6.0であった。
また、各pHにおいて30℃で120分間インキュベートし
た後の残存活性を調べたところ、第２図に示すようにpH
5.0〜9.0の範囲で90％以上の残存活性を示した。
た後の残存活性を調べたところ、第２図に示すようにpH
5.0〜9.0の範囲で90％以上の残存活性を示した。
作用適温および熱安定性 シュークロースを基質として各温度においてpH5.5で3
0分間反応させた結果、第３図に示すように最適作用温
度は50〜60℃であった。
0分間反応させた結果、第３図に示すように最適作用温
度は50〜60℃であった。
また、各温度においてpH5.5で10分間インキュベート
した後の残存活性を調べたところ、第４図に示すように
50℃まで安定であった。
した後の残存活性を調べたところ、第４図に示すように
50℃まで安定であった。
阻害 1mMの水銀イオン、銀イオンにより阻害を受け、ま
た、50mMのフラクトースによっても阻害された。
た、50mMのフラクトースによっても阻害された。
精製方法 前記微生物を超音波破砕機あるいはフレンチプレスを
用いて破砕し、粗酵素を得ることができる。この菌体破
砕物の上澄み液を除核酸、塩析を行った後、DEAE−Toyo
pearl pak 650M（商品名）、TSKgel G3000SW（商品
名）などを用いたカラムクロマトグラフィーによって精
製酵素を分離、採取することができる。
用いて破砕し、粗酵素を得ることができる。この菌体破
砕物の上澄み液を除核酸、塩析を行った後、DEAE−Toyo
pearl pak 650M（商品名）、TSKgel G3000SW（商品
名）などを用いたカラムクロマトグラフィーによって精
製酵素を分離、採取することができる。
分子量 TKSgel G3000SWを用いたゲル濾過法による測定で測
定した結果、分子量は約12万であった。
定した結果、分子量は約12万であった。
実施例１ 菌体の製造 シュークロース 10g 硫酸アンモニウム 2g 酵母エキス 1g KH2PO4 2g Na2HPO4・12H2O 8g 水 1000ml pH 7.0 500ml容三角フラスコ50本に上記組成の培地をそれぞ
れ100mlをとり、あらかじめ同培地で前培養しておいた
ローネラアクアティリス（Rahnella aquatilis JCM−
1683）の培養液1mlを接種し、30℃で16時間ロータリシ
ェーカーで振とう培養（160rpm）を行った。培養終了
後、51の培養液から遠心分離（8000rpm、10分間）して
菌体を回収した。回収した菌体を蒸留水で４回洗浄後、
30mMリン酸緩衝液（pH6.0）300mlに懸濁し、OD660が20
の菌体懸濁液を得た。
れ100mlをとり、あらかじめ同培地で前培養しておいた
ローネラアクアティリス（Rahnella aquatilis JCM−
1683）の培養液1mlを接種し、30℃で16時間ロータリシ
ェーカーで振とう培養（160rpm）を行った。培養終了
後、51の培養液から遠心分離（8000rpm、10分間）して
菌体を回収した。回収した菌体を蒸留水で４回洗浄後、
30mMリン酸緩衝液（pH6.0）300mlに懸濁し、OD660が20
の菌体懸濁液を得た。
実施例２ 酵素の精製 実施例１の方法で得た菌体懸濁液300mlを低温下でフ
レンチプレス菌体破砕機により破砕（1500kgf/cm2）し
た後、遠心分離（12000rpm10分間）して上澄み液290ml
を得た。この上澄み液の総活性は2406ユニットであっ
た。上澄み液290mlに５％硫酸ストレプトマイシン30ml
を加え除核酸を行った後、遠心分離（12000rpm、10分
間）して上澄み液310mlを得た。これに97gの硫安を加え
酵素を沈澱させ、沈澱した酵素を遠心分離（12000rpm、
10分間）後、適当量の30mMリン酸緩衝液（pH6.0）に溶
解し、同緩衝液で一夜透析した。透析後25mlの粗酵素液
を得た。この粗酵素の総活性は、2274ユニットであっ
た。
レンチプレス菌体破砕機により破砕（1500kgf/cm2）し
た後、遠心分離（12000rpm10分間）して上澄み液290ml
を得た。この上澄み液の総活性は2406ユニットであっ
た。上澄み液290mlに５％硫酸ストレプトマイシン30ml
を加え除核酸を行った後、遠心分離（12000rpm、10分
間）して上澄み液310mlを得た。これに97gの硫安を加え
酵素を沈澱させ、沈澱した酵素を遠心分離（12000rpm、
10分間）後、適当量の30mMリン酸緩衝液（pH6.0）に溶
解し、同緩衝液で一夜透析した。透析後25mlの粗酵素液
を得た。この粗酵素の総活性は、2274ユニットであっ
た。
この粗酵素液をあらかじめ30mMリン酸緩衝液（pH6.
0）で平衡化したDEAE−Toyopearl pak 650M（22mm
φ×200mm）カラムに吸着させ、次いで同緩衝液（０〜
1.0M NaClのグラジエント）にて溶出し、350mlの活性
画分を得た。透析、凍結乾燥、限外濾過を行い10mlまで
濃縮した。つぎに、あらかじめ30mMリン酸緩衝液（pH6.
0）で平衡化したTKSgel G3000SW（7.8mmφ×300mm）カ
ラムでゲル濾過を行い、64mlの活性画分を得た。さらに
TSKgel DEAE−5PWで分画を行い、透析、凍結乾燥後373
ユニットの精製酵素を得た。この酵素は、SDS電気泳動
法で単一のバンドを示した。精製酵素の比活性は1207ユ
ニット/mg・タンパクで844倍まで精製された。精製酵素
のシュークロースに対するKm値、Vmaxはそれぞれ50mM、
714pmol/min・mgであった。
0）で平衡化したDEAE−Toyopearl pak 650M（22mm
φ×200mm）カラムに吸着させ、次いで同緩衝液（０〜
1.0M NaClのグラジエント）にて溶出し、350mlの活性
画分を得た。透析、凍結乾燥、限外濾過を行い10mlまで
濃縮した。つぎに、あらかじめ30mMリン酸緩衝液（pH6.
0）で平衡化したTKSgel G3000SW（7.8mmφ×300mm）カ
ラムでゲル濾過を行い、64mlの活性画分を得た。さらに
TSKgel DEAE−5PWで分画を行い、透析、凍結乾燥後373
ユニットの精製酵素を得た。この酵素は、SDS電気泳動
法で単一のバンドを示した。精製酵素の比活性は1207ユ
ニット/mg・タンパクで844倍まで精製された。精製酵素
のシュークロースに対するKm値、Vmaxはそれぞれ50mM、
714pmol/min・mgであった。
実施例３ レバンの生成 シュークロース10gを30mMリン酸緩衝液（pH6.0）に溶
解して100mlとした。これに実施例２で得られたローネ
ラ・アクアティリスの精製レバンシュークラーゼ10ユニ
ットを加えて30℃で24時間反応させた。反応液に300ml
のエタノールを加え白色の粘質沈澱物を得た。これを80
℃の温水に溶解した後、再度３倍のエタノールを加え沈
澱物を得た。この沈澱物を40℃で６時間乾燥し1.9gの固
形物を得た。この固形物はフラクトースの重合体である
レバンであった。
解して100mlとした。これに実施例２で得られたローネ
ラ・アクアティリスの精製レバンシュークラーゼ10ユニ
ットを加えて30℃で24時間反応させた。反応液に300ml
のエタノールを加え白色の粘質沈澱物を得た。これを80
℃の温水に溶解した後、再度３倍のエタノールを加え沈
澱物を得た。この沈澱物を40℃で６時間乾燥し1.9gの固
形物を得た。この固形物はフラクトースの重合体である
レバンであった。
実施例４ ラクトシュークロースの生成 シュークロース10gとラクトース10gを30mMリン酸緩衝
液（pH6.0）に溶解して100とした。これに実施例２で得
られたローネラ・アクアティリスの精製レバンシューク
ラーゼ10ユニットを加えて50℃で５時間反応させた。
液（pH6.0）に溶解して100とした。これに実施例２で得
られたローネラ・アクアティリスの精製レバンシューク
ラーゼ10ユニットを加えて50℃で５時間反応させた。
高速液体クロマトグラフィーにより生成したラクトシ
ュークロースを測定したところ、6.8gのラクトシューク
ロースが生成した。
ュークロースを測定したところ、6.8gのラクトシューク
ロースが生成した。
得られた反応液100mlを減圧濃縮した。この濃縮液を
カーボン・セライトカラム（1:1）へ通液し、水41を750
ml/hrの流速で流し単糖を溶出、次ぎに２％エタノール4
1でシュークロースとラクトースを溶出させた後、10％
エタノール61を流し活性炭に吸着されているラクトシュ
ークロースを溶出させた。
カーボン・セライトカラム（1:1）へ通液し、水41を750
ml/hrの流速で流し単糖を溶出、次ぎに２％エタノール4
1でシュークロースとラクトースを溶出させた後、10％
エタノール61を流し活性炭に吸着されているラクトシュ
ークロースを溶出させた。
ラクトシュークロースを含む溶出液を減圧濃縮した
後、凍結乾燥を行い白色の粉末ラクトシュークロース5.
9gを得た。
後、凍結乾燥を行い白色の粉末ラクトシュークロース5.
9gを得た。
実施例５ キシロシュークロースの生成 シュークロース10gとキシロース10gを30mMリン酸緩衝
液（pH6.0）に溶解して100mMとした。これに実施例２で
得られたローネラ・アクアティリスの精製レバンシュー
クラーゼ10ユニットを加えて50℃で５時間反応させた。
液（pH6.0）に溶解して100mMとした。これに実施例２で
得られたローネラ・アクアティリスの精製レバンシュー
クラーゼ10ユニットを加えて50℃で５時間反応させた。
高速液体クロマトグラフィーにより生成したラクトシ
ュークロースを測定したところ、8.6gのラクトシューク
ロースが生成した。
ュークロースを測定したところ、8.6gのラクトシューク
ロースが生成した。
得られた反応液100mlを減圧濃縮した。この濃縮液を
カーボン・セライトカラム（1:1）へ通液し、水41を750
ml/hrの流速で流し単糖を溶出、次ぎに５％エタノール4
1でシュークロースを溶出させた後、10％エタノール61
を流し活性炭に吸着されているキシロシュークロースを
溶出させた。
カーボン・セライトカラム（1:1）へ通液し、水41を750
ml/hrの流速で流し単糖を溶出、次ぎに５％エタノール4
1でシュークロースを溶出させた後、10％エタノール61
を流し活性炭に吸着されているキシロシュークロースを
溶出させた。
キシロシュークロースを含む溶出液を減圧濃縮した
後、凍結乾燥を行い白色の粉末キシロシュークロース7.
2gを得た。
後、凍結乾燥を行い白色の粉末キシロシュークロース7.
2gを得た。
実施例６ オリゴ糖の生成 シュークロース10gとＤ−アラビノース、Ｌ−アラビ
ノース、マルトース、セロビオース、メリビオース、マ
ルトテトラオースなど各種糖質それぞれ10gを実施例
４、５と同様に30mMリン酸緩衝液（pH6.0）に溶解して1
00mlとした。これらに実施例２で得られたローネラ・ア
クアティリスの精製レバンシュークラーゼ10ユニットを
加えて50℃で５時間反応させた。
ノース、マルトース、セロビオース、メリビオース、マ
ルトテトラオースなど各種糖質それぞれ10gを実施例
４、５と同様に30mMリン酸緩衝液（pH6.0）に溶解して1
00mlとした。これらに実施例２で得られたローネラ・ア
クアティリスの精製レバンシュークラーゼ10ユニットを
加えて50℃で５時間反応させた。
高速液体クロマトグラフィーにより生成した各種オリ
ゴ糖を確認した。オリゴ糖の生成量はセロビオース、マ
ルトースを受容体にしたばあいに多く、次いでマルトテ
トラオース＞Ｌ−アラビノース＞Ｄ−アラビノース＞メ
リビオースの順であった。
ゴ糖を確認した。オリゴ糖の生成量はセロビオース、マ
ルトースを受容体にしたばあいに多く、次いでマルトテ
トラオース＞Ｌ−アラビノース＞Ｄ−アラビノース＞メ
リビオースの順であった。
［発明の効果］ 以上説明したように、本発明のレバンシュークラーゼ
は新規な酵素であり、この酵素を用いれば、レバンやキ
シロシュークロース、ラクトシュークロースなどを収率
よく短時間に得ることができ、しかも、本酵素はpH安定
性が高く、耐熱性であるため工業的利用にも適する。
は新規な酵素であり、この酵素を用いれば、レバンやキ
シロシュークロース、ラクトシュークロースなどを収率
よく短時間に得ることができ、しかも、本酵素はpH安定
性が高く、耐熱性であるため工業的利用にも適する。
第１図乃至第４図はそれぞれレバンシュークラーゼの至
適pH、pH安定性、至適温度、温度安定性を示したグラフ
である。
適pH、pH安定性、至適温度、温度安定性を示したグラフ
である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 日野 志朗 東京都江東区豊洲４―９―11 日新製糖株 式会社研究部内 (72)発明者 澤入 淑人 東京都江東区豊洲４―９―11 日新製糖株 式会社研究部内 (72)発明者 福嶋 孝之 東京都江東区豊洲４―９―11 日新製糖株 式会社研究部内
Claims (3)
- 【請求項１】以下の（ａ）乃至（ｇ）の理化学的性質を
有する耐熱性レバンシュークラーゼ。 （ａ）シュークロースまたはラフィノースからβ−フラ
クトシル基がシュークロースやラフィノースなどの受容
体に転移してβ−2,6結合のレバンを生成し、受容体が
キシロース、Ｄ−アラビノース、Ｌ−アラビノース、ラ
クトース、マルトース、セロビオース、メリビオース、
マルトテトラオースの時に、これら受容体にフラクトシ
ル基が転移したオリゴ糖を生成する。 （ｂ）至適pH 5.5〜6.0 （ｃ）安定pH 30℃、120分間処理の条件下で5.0〜9.
0 （ｄ）作用適温 50℃〜60℃、 （ｅ）熱安定性 pH5.5で10分間処理の場合、50℃まで
安定 （ｆ）阻害性 水銀イオン、銀イオン、フラクトース
により阻害される （ｇ）分子量 ゲル濾過法による測定で約12万 - 【請求項２】請求項１に記載の耐熱性レバンシュークラ
ーゼを生成するローネラ（Rahnella）属に属する生産菌
を好気条件下で培養し、培養物から耐熱性レバンシュー
クラーゼを分離、採取することを特徴とする微生物によ
る耐熱性レバンシュークラーゼの製造方法。 - 【請求項３】耐熱性レバンシュークラーゼを生成するロ
ーネラ（Rahnella）属に属する生産菌がローネラ・アク
アティリス（Rahnella aquatilis）である請求項２に
記載の耐熱性レバンシュークラーゼの製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1344676A JPH0871B2 (ja) | 1989-12-27 | 1989-12-27 | 新規耐熱性レバンシュークラーゼおよびその製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1344676A JPH0871B2 (ja) | 1989-12-27 | 1989-12-27 | 新規耐熱性レバンシュークラーゼおよびその製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH03198773A JPH03198773A (ja) | 1991-08-29 |
| JPH0871B2 true JPH0871B2 (ja) | 1996-01-10 |
Family
ID=18371118
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1344676A Expired - Fee Related JPH0871B2 (ja) | 1989-12-27 | 1989-12-27 | 新規耐熱性レバンシュークラーゼおよびその製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0871B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5334524A (en) * | 1992-05-18 | 1994-08-02 | Solvay Enzymes, Inc. | Process for producing levan sucrase using Bacillus licheniformis |
-
1989
- 1989-12-27 JP JP1344676A patent/JPH0871B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH03198773A (ja) | 1991-08-29 |
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